Бактериологично изследване при дизентерия. Лабораторна диагностика на дизентерия, амебиаза и балантидиаза

дизентерия.

дизентерия - инфекция, характеризиращ се с обща интоксикация на тялото, разхлабени изпражнения и особена лезия на лигавицата на дебелото черво. Това е едно от най-честите остри чревни заболявания в света. Заболяването е известно от древността под името "кървава диария", но природата му се оказва друга. През 1875г Руският учен Леш изолира амеба от пациент с кървава диария Entamoeba histolytica,през следващите 15 години се установи независимостта на това заболяване, което запази името амебиаза. Причинителите на същинската дизентерия са голяма група биологично сходни бактерии, обединени в рода Шигелта.Патогенът е открит за първи път през 1888 г. А. Шантемес и Видал; през 1891г той е описан от А. В. Григориев, а през 1898г. K. Shiga, използвайки серума, получен от пациента, идентифицира патогена при 34 пациенти с дизентерия, доказвайки етиологичната роля на тази бактерия. Въпреки това, през следващите години са открити други патогени на дизентерия: през 1900г. - С. Флекснер, през 1915 г. - К. Соне, през 1917 г. - К. Щуцер и К. Шмиц, през 1932 г. - Дж. Бойд, през 1934 г - Д. Голям, през 1943 г - А. Сакс.

В момента род Шигелавключва повече от 40 серотипа. Всички те са къси неподвижни грам-отрицателни пръчки, които не образуват спори и капсули, които (растат добре на обикновени хранителни среди, не растат в среда с цитрат като единствен източник на въглерод; не образуват H2S, нямат уреаза; реакцията на Voges-Proskauer е отрицателна; глюкозата и някои други въглехидрати се ферментират, за да образуват киселина без газ (с изключение на някои биотипове Shigella flexneri: S.manchesterИ ewcastle);като правило не ферментират лактоза (с изключение на Shigella Sonne), адонит, инозитол, не втечняват желатин, обикновено образуват каталаза, нямат лизин декарбоксилаза и фенилаланин деаминаза. Съдържанието на G+C в ДНК е 49-53 mol%. Shigella са факултативни анаероби, оптималната температура за растеж е 37 ° C, те не растат над 45 ° C, оптималното рН на средата е 6,7-7,2. Колониите върху плътна среда са кръгли, изпъкнали, полупрозрачни; в случай на асоциация се образуват груби колонии с форма на R. Растежът върху BCH под формата на равномерна мътност, грапавите форми образуват утайка. Прясно изолирани култури от Shigella Sonne J4HO образуват колонии от два вида: малки кръгли изпъкнали (I фаза), големи плоски (Фаза 2). Естеството на колонията зависи от наличието (I фаза) или отсъствието (II фаза) на плазмид с mm 120 MD, което също определя вирулентността на Shigella Sonne.

В Shigella са открити О-антигени с различна специфичност: общи за семейството ентеробактерии,генерични, видови, групови и типоспецифични, както и К-антигени; Те нямат H антигени.

Класификацията взема предвид само групови и типоспецифични О-антигени. Според тези характеристики, Шигеласе подразделя на 4 подгрупи или 4 вида и включва 44 серотипа. В подгрупа А (вид Shigella dysenteriae) Shigella не ферментира манитол са включени. Видът включва 12 серотипа (1-12). Всеки стереотип има свой специфичен тип антиген; антигенните връзки между серотипове, както и с други видове шигели, са слабо изразени. Към подгрупа Б (вид Shigella flexneri)включват shigella, обикновено ферментиращ манитол. Shigella от този вид са серологично свързани помежду си: те съдържат типоспецифични антигени (I-VI), според които се разделят на серотипове (1-6), и групови антигени, които се намират в различни състави във всеки серотип и според които серотиповете се разделят на подсеротипове. В допълнение, този вид включва два антигенни варианта - X и Y, които нямат типични антигени, те се различават по набори от групови антигени. Серотип S.flexneri 6няма субсеротипове, но се разделя на 3 биохимични типа според характеристиките на ферментацията на глюкоза, манитол и дулцит.

Към подгрупа С (вид Shlgella boydll)включват shigella, обикновено ферментиращ манитол. Членовете на групата са серологично различни един от друг. Антигенните връзки в рамките на вида са слабо изразени. Видът включва 18 серотипа (1-18), всеки от които има свой собствен основен тип антиген.

В подгрупа D (вид Shlgella sonnelвключва Shigella, обикновено ферментиращ манитол и способен бавно (след 24 часа инкубация и по-късно) да ферментира лактоза и захароза. Преглед S. sonneiвключва един серотип, но колониите във фази I и II имат свои собствени специфични за типа антигени. Предложени са два метода за вътрешноспецифична класификация на Shigella на Sonne:

1) разделянето им на 14 биохимични типа и подтипа според способността им да ферментират малтоза, рамноза и ксилоза;

2) разделяне на типове фаги според чувствителността към набор от съответни фаги.

Тези методи за типизиране имат главно епидемиологично значение. В допълнение, шигелите на Sonne и шигелите на Flexner се подлагат на типизиране за същата цел чрез способността да синтезират специфични колицини (колициногенотипиране) и чрез чувствителност към известни колицини (колицинотипиране). За да се определи вида на колицините, произведени от Shigella, J. Abbott и R. Shannon предложиха набори от типични и индикаторни щамове на Shigella и да се определи чувствителността на Shigella към известни видове colicins използват набор от референтни колициногенни щамове P. Frederick.

съпротива. Shigella имат доста висока устойчивост на фактори на околната среда. Издържат върху памучен плат и върху хартия до 30-36 дни, в изсъхнали изпражнения - до 4-5 месеца, в почва - до 3-4 месеца, във вода - от 0,5 до 3 месеца, върху плодове и зеленчуци - до 2 единици, в мляко и млечни продукти - до няколко седмици; при 60 °C загиват за 15-20 минути.

Чувствителен към разтвори на хлорамин, активен хлор и други дезинфектанти.

фактори на патогенност. Най-важните биологично свойство Shigella, което обуславя тяхната патогенност – способността да нахлуват в епителните клетки, да се размножават в тях и да причиняват смъртта им. Този ефект може да бъде открит с помощта на кератоконюнктивен тест (въвеждането на една бримка от култура Shigella (2-3 милиарда бактерии) под долния клепач на морско свинче причинява развитие на серозно-гноен кератоконюнктивит), както и чрез заразяване на клетъчни култури (цитотоксичен ефект), или пилешки ембриони (тяхната смърт), или интраназално бели мишки (развитие на пневмония). ония). Основните фактори за патогенност на шигела могат да бъдат разделени на три групи:

1) фактори, които определят взаимодействието с епитела на лигавицата;

2) фактори, които осигуряват устойчивост на хуморалните и клетъчните защитни механизми на макроорганизма и способността на Shigella да се размножава в неговите клетки;

3) способността да произвежда токсини и токсични продукти, които определят развитието на действителния патологичен процес.

Първата група включва фактори на адхезия и колонизация: тяхната роля се играе от пили, протеини на външната мембрана и LPS. Адхезията и колонизацията се улесняват от ензими, които разрушават слузта - невраминидаза, хиалуронидаза, муциназа. Втората група включва фактори на инвазия, които насърчават проникването на Shigella в ентероцитите и тяхното възпроизвеждане в тях и в макрофагите с едновременното проявление на цитотоксичен и (или) ентеротоксичен ефект. Тези свойства се контролират от гените на плазмида с m.m. 140 MD (той кодира синтеза на протеини на външната мембрана, които причиняват инвазия) и хромозомни гени на Shigella: ksr A (причинява кератоконюнктивит), cyt (отговорен за разрушаването на клетките), както и други гени, които все още не са идентифицирани. Защитата на Shigella от фагоцитоза се осигурява от повърхностен К-антиген, антигени 3, 4 и липополизахарид. Освен това Shigella endotoxin lipid A има имуносупресивен ефект – потиска активността на клетките на имунната памет.

Третата група фактори на патогенност включва ендотоксин и два вида екзотоксини, открити в Shigella - Shiga екзотоксини и Shiga-подобни екзотоксини (SLT-I и SLT-II), чиито цитотоксични свойства са най-силно изразени в S.dysenteriae 1. Shiga- и Shiga-подобни токсини, открити и в други серотипове S.dysenteriae,те също се образуват S.flexneri, S.sonnei, S.boydii, ETEC и малко салмонела. Синтезът на тези токсини се контролира от токсичните гени на конвертиращите фаги. Тип LT ентеротоксини са открити във Flexner, Sonne и Boyd Shigella. Синтезът на LT в тях се контролира от плазмидни гени. Ентеротоксинът стимулира активността на аденилат циклазата и е отговорен за развитието на диария. Шига токсинът или невротоксинът не реагира с аденилатциклазната система, но има директен цитотоксичен ефект. Шига и шига-подобните токсини (SLT-I и SLT-II) имат м.м. -70 kD и се състоят от субединици A и B (последната от 5 идентични малки субединици). Рецепторът за токсините е гликолипидът на клетъчната мембрана.

Вирулентността на Shigella Sonne също зависи от плазмида с m.m. 120 MD. Той контролира синтеза на около 40 полипептида на външната мембрана, седем от които са свързани с вирулентност. Shigella Sonne с този плазмид образува фаза I колонии и е вирулентна. Култури, които са загубили плазмида, образуват колонии фаза II и нямат вирулентност. Плазмиди с m.m. 120-140 MD са намерени във Flexner и Boyd Shigella. Липополизахаридът на Shigella е мощен ендотоксин.

Характеристики на епидемиологията.Единственият източник на инфекция е човекът. Нито едно животно в природата не боледува от дизентерия. При експериментални условия дизентерия може да се възпроизведе само при маймуни. Методът на заразяване е фекално-орален. Начини на предаване - вода (предимно за Shigella Flexner), храна, особено важна роля имат млякото и млечните продукти (преобладаващ път на заразяване за Shigella Sonne), и контактно-битови, особено за вида S. dysenteriae.

Характеристика на епидемиологията на дизентерия е промяната във видовия състав на патогените, както и биотипове Sonne и серотипове Flexner в определени региони. Така например до края на 30-те години на ХХ век делът S.dysenteriae 1представляват до 30-40% от всички случаи на дизентерия, а след това този серотип започва да се среща все по-рядко и почти изчезва. Въпреки това през 60-те и 80-те години на ХХ в S.dysenteriaeсе появи отново на историческата арена и предизвика поредица от епидемии, довели до образуването на три хиперендемични огнища от него - в Централна Америка, Централна Африка и Южна Азия (Индия, Пакистан, Бангладеш и други страни). Причините за промяната във видовия състав на патогените на дизентерия вероятно са свързани с промяна колективен имунитети с промяна в свойствата на дизентерийните бактерии. По-специално връщането S.dysenteriae 1и широкото му разпространение, което причинява образуването на хиперендемични огнища на дизентерия, се свързва с придобиването на плазмиди от него, което причинява резистентност към множество лекарства и повишена вирулентност.

Характеристики на патогенезата и клиниката.Инкубационният период на дизентерия е 2-5 дни, понякога по-малко от един ден. Формиране инфекциозен фокусв лигавицата на низходящата част на дебелото черво (сигмоида и ректума), където причинителят на дизентерия прониква, е цикличен: адхезия, колонизация, въвеждане на шигела в цитоплазмата на ентероцитите, тяхното вътреклетъчно възпроизвеждане, разрушаване и отхвърляне на епителни клетки, освобождаване на патогени в чревния лумен; след това започва следващият цикъл - адхезия, колонизация и др. Интензитетът на циклите зависи от концентрацията на патогени в париеталния слой на лигавицата. В резултат на повтарящи се цикли възпалителният фокус нараства, получените язви, свързващи се, увеличават експозицията чревна стена, в резултат на което в изпражненията се появяват кръв, мукопурулентни бучки, полиморфонуклеарни левкоцити. Цитотоксините (SLT-I и SLT-II) причиняват разрушаване на клетките, ентеротоксинът - диария, ендотоксините - обща интоксикация. Клиниката на дизентерия до голяма степен се определя от това какъв тип екзотоксини се произвежда в по-голяма степен от патогена, степента на неговия алергизиращ ефект и имунен статусорганизъм. Въпреки това, много въпроси на патогенезата на дизентерия остават неизяснени, по-специално: характеристиките на хода на дизентерия при деца от първите две години от живота, причините за прехода на остра дизентерия към хронична, значението на сенсибилизацията, механизма на местния имунитет на чревната лигавица и др. Най-типичните клинични проявлениядизентерия служи като диария, чести позиви- в тежки случаи, до 50 или повече пъти на ден, тенезми (болезнени спазми на ректума) и обща интоксикация. Естеството на изпражненията се определя от степента на увреждане на дебелото черво. Най-тежката дизентерия се причинява от S.dysenteriae 1, най-лесно - дизентерия на Зоне.

Постинфекциозен имунитет. Както показват наблюдения върху маймуни, след прекарана дизентерия остава силен и доста дълготраен имунитет. Причинява се от антимикробни антитела, антитоксини, повишена активност на макрофаги и Т-лимфоцити. Играе значителна роля локален имунитетчревна лигавица, медиирана от IgAs. Имунитетът обаче е типоспецифичен по природа, силен кръстосан имунитет не възниква.

Лабораторна диагностика . Основният метод е бактериологичен. Материалът за изследването са изпражненията. Схема за изолиране на патогени: инокулация върху среди за диференциална диагностика на Endo и Ploskirev (успоредно върху средата за обогатяване, последвано от инокулация върху среди на Endo и Ploskirev) за изолиране на изолирани колонии, получаване чиста култура, изследване на неговите биохимични свойства и, като се вземат предвид последните, идентификация с помощта на поливалентни и моновалентни диагностични аглутиниращи серуми. Произвеждат се следните търговски серуми:

1. За Shigella, които не ферментират манитол: за S.dysenteriae 1 до 2 S.dysenteriae 3-7(многовалентни и едновалентни), до S.dysenteriae 8-12(многовалентни и едновалентни).

2. Към манитол, ферментиращ от шигела:

към типичните антигени S. flexneri I, II, III, IV, V, VI,

за групиране на антигени S.flexneri 3, 4, 6,7,8- поливалентен,

към антигени S.boydii 1-18(многовалентни и едновалентни),

към антигени S. sonnei I фаза, II фаза,

към антигени S.flexneri I-VI+ S.sonnei- поливалентен.

За откриване на антигени в кръвта (включително като част от CEC) могат да се използват урина и изпражнения следните методи: RPHA, RSK, реакция на коаглутинация (в урина и изпражнения), IFM, RPHA (в кръвен серум). Тези методи са високоефективни, специфични и подходящи за ранна диагностика.

За серологична диагностика може да се използва: RPHA с подходящи еритроцитни диагностикуми, имунофлуоресцентен метод (в индиректна модификация), метод на Кумбс (определяне на титъра на непълните антитела). Диагностична стойностсъщо има алергичен тест с дизентерия (разтвор на протеинови фракции на Shigella Flexner и Sonne). Реакцията се отчита след 24 ч. Счита се за положителна при наличие на хиперемия и инфилтрация с диаметър 10-20 mm.

Лечение.Фокусът е върху възстановяването на нормалното водно-солевия метаболизъм, рационално хранене, детоксикация, рационална антибиотична терапия (като се вземе предвид чувствителността на патогена към антибиотици). добър ефектдава ранна употреба на поливалентен дизентериен бактериофаг, особено таблетки с пектиново покритие, което предпазва фага от действието на стомашната HCl; V тънко червопектинът се разтваря, фагите се освобождават и проявяват своето действие. За профилактични цели фагът трябва да се прилага поне веднъж на всеки три дни (периода на неговото оцеляване в червата).

Проблемът със специфичната превенция.За създаване изкуствен имунитетсрещу дизентерия се използваха различни ваксини: от убити бактерии, химични, алкохолни, но всички те се оказаха неефективни и бяха прекратени. Ваксини срещу дизентерия на Flexner са създадени от жива (мутантна, стрептомицин-зависима) Shigella Flexner; рибозомни ваксини, но те също не намериха широко приложение. Следователно проблемът със специфичната профилактика на дизентерия остава нерешен. Основният начин за борба с дизентерията е подобряването на водоснабдителната и канализационната система, осигуряването на строги санитарно-хигиенни режими в хранителните предприятия, особено в млечната промишленост, в детските заведения, обществените места и личната хигиена.

Микробиология на холерата

СЗО определя холерата като заболяване, характеризиращо се с остра, тежка, дехидратираща диария с оризова вода в резултат на инфекция с Vibrio cholerae. Поради факта, че се характеризира с изразена способност за широко епидемично разпространение, тежко протичанеи висока смъртност, холерата е една от най-опасните инфекции.

Историческата родина на холерата е Индия, по-точно делтата на реките Ганг и Брахмапутра (сега Източна Индия и Бангладеш), където тя съществува от незапомнени времена (епидемии от холера в тази област се наблюдават от 500 години пр.н.е.). Продължителното съществуване на ендемичното огнище на холера тук се обяснява с много причини. Vibrio cholerae може не само да остане във водата дълго време, но и да се размножава в нея при благоприятни условия - температури над +12 ° C, наличие на органични вещества. Всички тези условия са налице в Индия - тропически климат (средна годишна температура от +25 до +29 ° С), изобилие от валежи и блатиста, висока плътностнаселение, особено в делтата на Ганг, голям бройорганични вещества във водата, непрекъснато целогодишно замърсяване на водата канализацияи фекалии, нисък материален стандарт на живот и особени религиозни и религиозни обреди на населението.

Причинителят на холерата Холерен вибрионе открит през 1883 г. по време на петата пандемия от Р. Кох, но за първи път вибрион в изпражненията на пациенти с диария е открит през 1854 г. Ф. Пацини.

V. choleraeпринадлежи на семейството vibrionaceae,която включва няколко рода (Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas, Photobacterium).Род Вибрионот 1985г повече от 25 вида, от които най-висока стойностза човек имат V.cholerae, V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, dnificusИ V.fluvialis.

Основни характеристики на рода Вибрион : къси, не образуващи спори и капсули, извити или прави грам-отрицателни пръчици, 0,5 µm в диаметър, 1,5-3,0 µm дълги, подвижни ( V. cholerae- монотрични, при някои видове две или повече полярни флагели); те растат добре и бързо на обикновена среда, хемоорганотрофи, ферментират въглехидрати с образуването на киселина без газ (глюкозата ферментира по пътя на Embden-Meyerhof). Оксидаза-положителен, образува индол, редуцира нитратите до нитрити (V.choleraeдава положителна нитрозо-индолна реакция), разграждат желатина, често дават положителна реакция на Voges-Proskauer (т.е. образуват ацетилметилкарбинол), нямат уреази, не образуват H S. имат лизин и орнитин декарбоксилази, но нямат аргинин дихидролази.

Vibrio cholerae е много непретенциозен към хранителните среди. Размножава се добре и бързо върху 1% алкална (pH 8,6-9,0) пептонна вода (PV), съдържаща 0,5-1,0% NaCl, изпреварвайки растежа на други бактерии. За потискане на растежа на Proteus се препоръчва добавяне на калиев телурит 4 до 1% (PV) (крайно разреждане 1:100 000). 1% PV е най-добрата среда за обогатяване на V. cholerae. По време на растежа, след 6-8 часа, образува деликатен хлабав сивкав филм върху повърхността на HP, който при разклащане лесно се разрушава и пада на дъното под формата на люспи, HP става умерено мътен. За изолиране на Vibrio cholerae са предложени различни селективни среди: алкален агар, жълтъчно-солев агар, алкален албуминат, алкален агар с кръв, лактоза-захароза и други среди. Най-добрата среда е TCBS (тиосулфат цитрат-бромотимол захароза агар) и неговите модификации. Въпреки това, най-често се използва алкална MPA, върху която Vibrio cholerae образува гладки, стъкловидно-прозрачни със синкав оттенък дисковидни колонии с вискозна консистенция.

При сеитба с инжекция в колона от желатин, след 2 дни при 22-23 ° C, вибрионът причинява втечняване от повърхността под формата на мехурче, след това във формата на фуния и накрая, слой по слой.

В млякото вибрионът се размножава бързо, причинявайки съсирване след 24-48 часа, след което настъпва пептонизация на млякото и след 3-4 дни вибрионът умира поради изместването на рН на млякото към киселинната страна.

B. Heiberg, според способността да ферментира маноза, захароза и арабиноза, разпределя всички вибриони (холера и холероподобни) в няколко групи, чийто брой сега е 8. Vibrio cholerae принадлежи към първата група на Heiberg.

Вибрионите, подобни по морфологични, културни и биохимични характеристики на холерата, са били наричани и се наричат по различен начин: парахолерни, холероподобни, NAG вибриони (неаглутиниращи вибриони); вибриони, които не принадлежат към група 01. Последното име най-точно подчертава връзката им с холерния вибрион. Както беше установено от A. Gardner и K. Venkatraman, холерата и холероподобните вибриони имат общ H-антиген, но се различават по O-антигени. Според О-антигена холерата и холероподобните вибриони в момента са разделени на 139 О-серогрупи, но броят им непрекъснато се попълва. Vibrio cholerae принадлежи към група 01. Има общ А-антиген и два типоспецифични антигена - В и С, според които се разграничават три серотипа V. cholerae- серотип Ogawa (AB), серотип Inaba (AC) и серотип Gikoshima (ABC). Vibrio cholerae в стадия на дисоциация има OR антиген. Поради тази причина, за да се идентифицират V. choleraeИзползват се O-серум, OR-серум и типоспецифични серуми Inaba и Ogawa.

фактори на патогенност V. cholerae :

1. Подвижност.

2. Хемотаксис. С помощта на тези свойства вибрионът преодолява лигавичния слой и взаимодейства с епителните клетки. При Che" мутанти (загубили способността за хемотаксис) вирулентността рязко намалява. Вирулентността при Mot" мутанти (загубили мобилност) или напълно изчезва, или намалява 100-1000 пъти.

3. Фактори на адхезия и колонизация, с помощта на които вибрионът се прилепва към микровилите и колонизира лигавицата на тънките черва.

4. Ензими: муциназа, протеази, невраминидаза, лецитиназа и др.

Те насърчават адхезията и колонизацията, тъй като разрушават веществата, които изграждат слузта. Невраминидазата, отделяйки сиаловата киселина от епителните гликопротеини, създава платформа за "кацане" за вибриони. В допълнение, той увеличава броя на холерогенните рецептори чрез модифициране на три- и дисиалоганглиозидите до моносиалоганглиозид Gm b, който служи като холерогенен рецептор.

5. Основният фактор на патогенността V. choleraeе екзотоксин-холероген, който определя патогенезата на холерата. Молекулата на холерогена има м.м. 84 kD и се състои от два фрагмента – А и В. Фрагмент А се състои от два пептида – А1 и А2 – и притежава специфичното свойство на холерен токсин. Фрагмент В се състои от 5 идентични субединици и изпълнява две функции: 1) разпознава рецептора (монозиалоганглиозид) на ентероцита и се свързва с него;

2) образува вътремембранен хидрофобен канал за преминаването на субединица А. Пептид A 2 Sl служи за свързване на фрагменти А и В. Пептидът A t изпълнява своята собствена токсична функция. Той взаимодейства с NAD, предизвиква неговата хидролиза, получената ADP-рибоза се свързва с регулаторната субединица на аденилатциклазата. Това води до инхибиране на хидролизата на GTP. Полученият комплекс GTP + аденилат циклаза предизвиква хидролиза на АТФ с образуването на сАМР. (Друг начин за натрупване на cAMP е потискането от холероген на ензима, който хидролизира cAMP до 5-AMP).

6. Освен холероген Vibrio cholerae синтезира и отделя фактор, който повишава капилярната пропускливост.

7. Други екзотоксини също са открити във V. cholerae, по-специално типове LT, ST и SLT.

8. Ендотоксин. Липополизахарид V. choleraeима силно ендотоксично свойство. Той е отговорен за общата интоксикация на тялото и повръщането. Антителата, образувани срещу ендотоксин, имат изразен вибриоциден ефект (разтварят вибрионите в присъствието на комплемент) и са важен компонент на имунитета след инфекция и след ваксинация.

Способността на вибриони, които не принадлежат към група 01, да причиняват спорадични или групови диарийни заболявания при хора се свързва с наличието на ентеротоксини от LT или ST тип, които стимулират съответно аденилат- или гуанилат циклазни системи.

Синтез на холероген - най-важното свойство V. cholerae.Гените, които контролират синтеза на А- и В-фрагменти на холерогена, се комбинират в оперона vctAB или ctxB; те се намират на вибрионната хромозома. Някои щамове на Vibrio cholerae имат два такива нетандемни оперона. Функцията на оперона се контролира от два регулаторни гена. Генът toxR осигурява положителен контрол; мутациите в този ген водят до 1000-кратно намаляване на производството на токсини. Генът htx е отрицателна контрола; мутациите в този ген увеличават производството на токсини с 3-7 пъти.

Следните методи могат да се използват за откриване на холероген:

1. Биологични тестове върху зайци. При вътречревно приложение на холерни вибриони на кърмачета (на възраст не повече от 2 седмици), те развиват типичен холерогенен синдром: диария, дехидратация и смърт на зайците. При аутопсия - рязко инжектиране на съдовете на стомаха и тънък
червата, понякога в него се натрупва бистра течност. Но особено характерни са измененията в дебелото черво - то е разширено и пълно с напълно прозрачна, сламенокафява течност с люспи и газови мехурчета. Когато V. cholerae се инжектира в лигираната област на тънките черва при възрастни зайци, се отбелязват същите промени в дебелото черво, както в случай на инфекция на кърмещи зайци.

2. Директно откриване на холероген чрез имунофлуоресцентен или ензимен имуноанализ или реакция на пасивна имунна хемолиза (холерогенът се свързва с Gm1 на еритроцитите и те се лизират, когато се добавят антитоксични антитела и комплемент).

3. Стимулиране на клетъчната аденилат циклаза в клетъчни култури.

4. Използване на хромозомен фрагмент като ДНК сонда V. cholerae,носител оперонхолероген.

По време на седмата пандемия бяха изолирани щамове V. choleraeс различни степенивирулентност: холерогенен (вирулентен), слабо холерогенен (ниска вирулентност) и нехолерогенен (невирулентен). Не холерогенен V. cholerae,като правило те имат хемолитична активност, не се лизират от холерен диагностичен фаг 5 (HDF-5) и не причиняват заболяване при хора.

За фаг типизиране V. cholerae(включително V.eltor) S. Mukherjee предложи съответни набори от фаги, които след това бяха допълнени в Русия с други фаги. Наборът от такива фаги (1-7) прави възможно разграничаването между V. cholerae 16 вида фаги. HDF-3 избирателно лизира Vibrio cholerae класически тип, HDF-4 - El Tor вибриони и HDF-5 лизира само холерогенни (вирулентни) вибриони от двата типа и не лизира нехолерогенни вибриони.

Vibrio cholerogens, като правило, нямат хемолитична активност, лизират се от HDF-5 и причиняват холера при хората.

устойчивост на холерни патогени. Vibrio cholerae оцеляват добре при ниски температури: те остават жизнеспособни в лед до 1 месец; в морска вода - до 47 дни, в речна вода - от 3-5 дни до няколко седмици, във варена минерална водазапазват се повече от 1 година, в почвата - от 8 дни до 3 месеца, в пресни изпражнения - до 3 дни, върху варени храни (ориз, юфка, месо, зърнени храни и др.) преживяват 2-5 дни, върху сурови зеленчуци - 2-4 дни, върху плодове - 1-2 дни, в мляко и млечни продукти - 5 дни; когато се съхраняват на студено, периодът на оцеляване се увеличава с 1-3 дни: върху бельо, замърсено с изпражнения, те продължават до 2 дни, а върху мокър материал - седмица. Vibrio cholerae при 80 ° C умират след 5 минути, при 100 ° C - незабавно; силно чувствителни към киселини; под въздействието на хлорамин и други дезинфектанти умират за 5-15 минути. Чувствителни са към изсушаване и директно действие. слънчеви лъчи, но се запазват добре и дълго и дори се размножават в открити водоеми и отпадни води, богати на органични вещества, имащи алкално pH и температура над 10-12°C. Силно чувствителен към хлор: доза активен хлор 0,3-0,4 mg / l вода за 30 минути причинява надеждна дезинфекция от холерен вибрион.

Характеристики на епидемиологията. Основен източник на инфекция е само човек - болен от холера или носител на вибриони, както и замърсена от тях вода. Нито едно животно в природата не боледува от холера. Методът на заразяване е фекално-орален. Пътища на заразяване: а) основен - чрез водата, използвана за пиене, къпане и битови нужди; б) контактно-битови и в) чрез храни. Всички големи епидемии и пандемии от холера са били от воден характер. Vibrio cholerae имат такива адаптивни механизми, които осигуряват съществуването на техните популации както в човешкото тяло, така и в определени екосистеми на открити водни тела. Профузната диария, причинена от Vibrio cholerae, води до прочистване на червата от конкурентни бактерии и допринася за широкото разпространение на патогена в околната среда, предимно в канализацията и в открити води, където се изхвърлят. Човек с холера отделя патогена в огромен брой- от 100 милиона до 1 милиард на 1 ml изпражнения, носителят на вибриони освобождава 100-100 000 вибриони на 1 ml, инфектиращата доза е около 1 милион вибриони. Продължителността на изолиране на холерния вибрион при здрави носители е от 7 до 42 дни и 7-10 дни при тези, които са били болни. По-дълго освобождаване е изключително рядко.

Характеристика на холерата е, че след нея, като правило, няма дългосрочно носителство и не се образуват устойчиви ендемични огнища. Въпреки това, както вече беше споменато по-горе, поради замърсяването на открити водни тела с отпадъчни води, съдържащи големи количества органична материя, перилни препарати и трапезна сол, през лятото холерният вибрион в тях не само оцелява дълго време, но дори се размножава.

От голямо епидемиологично значение е фактът, че холерните вибриони от група 01, както нетоксигенни, така и токсигенни, могат да персистират дълго време в различни водни екосистемипод формата на некултивирани форми. С помощта на полимеразна верижна реакция с отрицателни бактериологични изследвания в редица ендемични територии на ОНД в различни водоеми бяха открити ветеринарни гени на некултивирани форми. V. cholerae.

При холерни заболявания се провежда комплекс от противоепидемични мерки, сред които водеща и определяща е активната своевременно откриванеи изолация (хоспитализация, лечение) на пациенти в остра и атипична формаи здрави вибрионосители; предприемат се мерки за предотвратяване на възможни пътища за разпространение на инфекцията; специално внимание се обръща на водоснабдяването (хлориране пия вода), спазване на санитарно-хигиенния режим в хранителни предприятия, в детски заведения, обществени места; осъществява се строг контрол, включително бактериологичен, върху откритите водоеми, извършва се имунизация на населението и др.

Характеристики на патогенезата и клиниката. Инкубационният период на холерата варира от безпроблемни часове до 6 дни, най-често 2-3 дни. Веднъж в лумена на тънките черва, Vibrio cholerae поради мобилност и хемотаксис към лигавицата се изпращат до слузта. За да проникнат в него, вибрионите произвеждат редица ензими: невраминидаза, муциназа, протеази, лецитиназа, някои разрушават веществата, съдържащи се в слузта, и улесняват движението на вибрионите към епителните клетки. Чрез адхезия вибрионите се прикрепват към гликокаликса на епитела и, губейки подвижност, започват да се размножават интензивно, колонизирайки микровилите на тънките черва и в същото време произвеждат голямо количество екзотоксин-холероген. Молекулите на холерогена се свързват с моносиалоганглиозид Gm1 и проникват в клетъчната мембрана, активират аденилатциклазната система, а натрупващият се сАМР причинява хиперсекреция на течност, катиони и аниони Na +, HCO 3 ~, K +, SG от ентероцитите, което води до холерна диария, дехидратация и обезсоляване на тялото. Има три вида ход на заболяването:

1. тежка, тежка дехидратираща диария, водеща до смърт на пациента за няколко часа;

2. по-малко тежка или диария без дехидратация;

3. безсимптомно протичане на заболяването (вибрионосителство).

При тежка холера пациентите развиват диария, изпражненията стават по-чести, изпражненията стават все по-обилни, придобиват воднист характер, губят фекална миризма и приличат на оризова вода (мътна течност с остатъци от слуз, плаващи в нея и епителни клетки). След това се присъединява изтощително повръщане, първо със съдържанието на червата, а след това повръщането е под формата на оризова вода. Температурата на болния пада под нормалната, кожата става цианотична, набръчкана и студена - холерен алгид. В резултат на дехидратация кръвта се сгъстява, развива се цианоза, кислородно гладуване, бъбречната функция страда рязко, появяват се конвулсии, пациентът губи съзнание и настъпва смърт. Смъртността от холера по време на седмата пандемия варира от 1,5% в развитите страни до 50% в развиващите се страни.

Постинфекциозен имунитеттрайни, дългосрочни, повтарящи се заболявания са редки. Имунитетът е антитоксичен и антимикробен, дължащ се на антитела (антитоксините се задържат по-дълго от антимикробните антитела), клетки на имунната памет и фагоцити.

Лабораторна диагностика.Основни и решителен методДиагнозата холера е бактериологична. Материалът за изследване от пациента е изпражнения и повръщане; изпражненията се изследват за вибрионосителство; при лица, починали от холера, се взема лигиран сегмент от тънките черва и жлъчния мехур за изследване; От обектите на външната среда най-често се изследват води от открити водоеми и отпадъчни води.

При провеждане на бактериологично изследване трябва да се спазват следните три условия:

1) възможно най-скоро да се инокулира материалът от пациента (холерният вибрион продължава да съществува в изпражненията краткосрочен);

2) съдовете, в които се взема материалът, не трябва да се дезинфекцират с химикали и да не съдържат следи от тях, тъй като Vibrio cholerae е много чувствителен към тях;

3) премахване на възможността за заразяване и заразяване на другите.

В случаите, когато има V. choleraeне 01-групи, те трябва да бъдат типизирани с помощта на подходящи аглутиниращи серуми от други серогрупи. Освобождаване от пациент с диария (включително холероподобна) V. choleraeне-01-група изисква същите противоепидемични мерки, както при изолация V. cholerae 01-групи. Ако е необходимо, способността за синтезиране на холероген или наличието на холерогенни гени в изолирани холерни вибриони с помощта на ДНК сонда се определя по един от методите.

Серологичната диагностика на холерата е от спомагателен характер. За тази цел може да се използва реакция на аглутинация, но е по-добре да се определи титърът на вибриоцидни антитела или антитоксини (антителата срещу холероген се определят чрез ензимен имуноанализ или имунофлуоресцентни методи).

Лечениепациентите с холера трябва да се състоят предимно в рехидратация и възстановяване на нормалния водно-солев метаболизъм. За тази цел се препоръчва използването на физиологични разтвори, например със следния състав: NaCl - 3,5; NaHC03 - 2.5; КС1 - 1,5 и глюкоза - 20,0 г на 1 литър вода. Такова патогенетично обосновано лечение в комбинация с рационална антибиотична терапия може да намали смъртността при холера до 1% или по-малко.

специфична профилактика.За създаване на изкуствен имунитет са предложени различни ваксини, включително такива от убити щамове на Inaba и Ogawa; холероген-токсоид за подкожно приложение и ентерална химична двувалентна ваксина, sos

ЛАБОРАТОРНА ДИАГНОСТИКА НА ДИЗЕНТЕРИЯ, АМЕБИАЗА И БАЛАНТИДИАЗА

В съвременните условия, в някои случаи или при малки фокални огнища на чревни заболявания, които често протичат с неясни симптоми, лабораторните методи на изследване са от голямо практическо значение.

Изследванията, проведени за диагностични цели, трябва да се извършват при стриктно спазване на установените препоръки и възможно най-рано.

колекция изпражненияза изследване се поставят в чисти съдове (нощни вази, нощни съдове), които не съдържат остатъци от дезинфектанти; материал за изследване се взема от ректалната лигавица с тампони по време на сигмоидоскопия.

За бактериологично потвърждение на диагнозата е по-добре да се вземат изпражнения от пациенти с дизентерия преди лечение с антибиотици и сулфонамиди и да се определи бактерионосителят - след лечение с тези лекарства.

Засяването върху петриеви панички трябва да се извърши веднага след вземане на материала.

На първо място, се извършва макроскопско изследване на изпражненията, докато те могат да открият: остатъци от храна - парчета месо, остатъци от мазнини, растителна хранаи патологични примеси - слуз с вискозна консистенция под формата на бучки (непрозрачни при дизентерия и прозрачни при амебиаза); непроменена кръв при дизентерия и улцеративна лезиядолната част на дебелото черво с различна етиология и променен цвят ("малиново желе") с амебиаза, балантидиаза; гной се открива при тежки продължителни форми на дизентерия.

Микроскопското изследване на изпражненията се използва за откриване на клетъчни елементи на кръвта, амеби, балантидии и техните кисти. Нативният препарат се приготвя по следния начин: върху предметно стъкло се нанася бучка изпражнения, а до нея - капка изотоничен разтвор на натриев хлорид, разбърква се и се покрива с покривно стъкло. За оцветяване на протозои се използва разтвор на Лугол.

За диференциране на клетъчните елементи на кръвта, препаратите се третират с оцветяване по Романовски-Гимза или азур-еозин. При дизентерия препаратът, приготвен от слуз, съдържа много неутрофилни гранулоцити (над 90% от всички клетъчни елементи), единични еозинофилни гранулоцити (еозинофили) и различно количествоеритроцити; с амебиаза има малко клетъчни елементи, основната маса от тях са променени клетки с пикнотично ядро и тесен ръб на протоплазмата. Намерете еозинофилни гранулоцити и кристали на Charcot-Leiden.

Тъканните форми на амебата (Entamoeba histolytica) в неоцветен препарат са безцветни, подвижни (с помощта на псевдоподии), достигат 50-60 микрона в удължено състояние, често се намират в ендоплазмата с еритроцити и към периферията - ядро. Наличието на еритроцити в клетката прави възможно разграничаването на Entamoeba histolutica от непатогенните форми (E. hartmani, E. coli.).

Полупрозрачната форма на амебата е по-малка (до 20 микрона), неактивна и не съдържа еритроцити. Дори по-малки кисти (10-12 микрона), кръгла форма, неподвижен; в ранните стадии на развитие съдържат 2 ядра, а зрелите - 4. В препарати, оцветени с разтвор на Лугол, ядрата на амебата и техните цисти са светлокафяви (фиг. 6).

Балантидия(Balantidium coli) - големи реснички, понякога достигащи дължина от 200 микрона и 50-70 микрона в диаметър, подвижни, поради наличието на реснички, имат отвори за уста (перистом) и анус (цитопигус). В ендоплазмата се виждат големи (макронуклеи) и малки (микронуклеи) ядра, вакуоли, уловени еритроцити. Балантидните кисти са неподвижни, закръглени, с диаметър 50–60 μm, имат двуконтурна мембрана, вътре съдържат макронуклеи и вакуоли (фиг. 7).

Бактериологичното изследване на изпражненията при бациларна дизентерия се извършва най-добре малко след дефекацията, докато трябва да вземете материал (слуз и гной) от последните части на изпражненията. Тестовият материал се инокулира с бримка върху петриеви панички с елективна среда (Ploskirev, Ploskirev + levomycetin, Levin) и се поставя в термостат за 18-24 часа при температура +37 ° C. На следващия ден подозрителни (безцветни) колониите се субкултивират върху средата на Ressel и се поставят епруветки в термостат за един ден при температура от +370 С. На третия ден, след получаване на чиста култура, се приготвят намазки за микроскопия и изследване на мобилността (шигелите са неподвижни) . Те поставят реакцията на аглутинация върху стъклото със специфични за типа серуми, първо със серуми срещу видовете, преобладаващи в района, и след това се разгръщат и посяват на "пъстър" ред, за да определят биохимични свойстваизбрана култура.

Причинителите на дизентерия не ферментират лактоза и захароза (с изключение на Sonne), разлагат глюкозата (до киселина), не образуват сероводород.

Окончателният отговор при бактериологично изследване се дава на 5-ия ден. Понякога се изолират атипични щамове на патогена, култури, които са загубили аглутинация и с други характеристики. В такива случаи проучванията продължават за по-дълги периоди.

Съществуват и ускорени бактериологични методи - повторно засяване на подозрителни колонии от петриеви панички след 18-20 часа от началото на изследването в 2 епруветки със среда Ressel (наклонен агар с 1% лактоза и 0,1% глюкоза - в една и 1% захароза и 0,1 % манитол - в друга). След 4 часа вече може да се появи растеж на колонии, от които се приготвят петна, оцветяват се по Грам, изследва се подвижността и се определя приблизителна реакция на аглутинация със серуми срещу най-често срещаните патогени в района. Така още на втория ден можете да дадете предварителен отговор. Окончателният отговор се дава на третия ден след отчитане на резултатите от сеитбата на "пъстрия" ред и подробна реакция на аглутинация.

Инокулацията на патогени на дизентерия не винаги е еднаква, зависи от много фактори - метода на вземане на материал за изследване, качеството на средата и други причини, една от които е броят на патогените в единица обем фекалии. Доказано е, че причинителите на дизентерия се засяват в случаите, когато в един грам изпражнения има най-малко стотици милиони микробни тела. IN редки случаивъзможно е да се изолира причинителя на дизентерия от кръвта.

При наличие на луминисцентен микроскоп, специфични серуми с флуорохроми, на студентите се показва методът на директна флуоресценция на антитела.

Възможно е също така да се предизвика реакция на аглутинация с кръвния серум и диагностикуми на пациента, но титрите на антителата при пациенти с дизентерия са ниски и в допълнение често се срещат явления на парааглутинация, което затруднява получаването надеждни резултати. По-чувствителна е реакцията на индиректна хемаглутинация (IHA) със стандартни еритроцитни диагностикуми. помощен методизследването е интрадермален алергичен тест с дизентерия според D. A. Tsuverkalov, който се взема предвид след 24 часа според размера на образуваната папула.

Методически указания за студенти за практическо занятие № 28.

Тема на урока:

Мишена: Изучаване на методите за микробиологична диагностика, етиотропна терапия и профилактика на шигелоза.

Модул 2 . Специална, клинична и екологична микробиология.

Тема 5: Методи за микробиологична диагностика на дизентерия.

Уместност на темата:Шигелозата е повсеместно разпространена и представлява сериозен проблем в страни с ниско санитарно културно ниво и висока честота на недохранване и лошо хранене. В развиващите се страни разпространението на инфекцията се благоприятства от лошите санитарни условия, лошата лична хигиена, пренаселеността и големия дял на децата в населението. В Украйна огнищата на шигелоза са по-чести в затворени групи на фона на ниско нивосанитария и хигиена, например в детски ясли и градини, на туристически кораби, в психиатрични клиники или приюти за хора с увреждания. Shigella е причината за диарията на пътниците и туристите.

Причината за групови заболявания може да се счита за употребата на хранителни продукти, замърсени от небрежност на търговски работници, които са носители на шигела. Има огнища, свързани с употребата на питейна вода, а плуването в замърсени водоеми също доведе до инфекция. Въпреки това, хранителният и водният път на предаване изглежда играят по-малка роля в разпространението на шигелозата в сравнение с холерата и коремния тиф, които обикновено изискват големи дозипатогени. В развиващите се страни, където разпространението на болестта е предимно от човек на човек, носителите могат да бъдат важен резервоар на инфекциозния агент. При пациенти, които не са приемали антибактериални лекарства, отделянето на шигела с изпражненията обикновено продължава 14 седмици, но в малка част от случаите продължава много по-дълго.

Шигелозата е остра бактериална инфекция на червата, причинена от един от четирите вида Shigella. Спектърът от клинични форми на инфекция варира от лека водниста диария до тежка дизентерия, характеризираща се с коремни спазми, тенезми, треска и признаци на обща интоксикация.

Етиология.

Родът Shigella (наречен на К. Шига, който през 1898 г. подробно изучава и описва изолирания причинител на бактериална дизентерия от А. В. Григориев) от семейство Enterobacteriaceae се състои от група от тясно свързани бактериални видове, които имат следните свойства:

аз Морфологичен: шигела - малки клечкисъс заоблени краища. Те се различават от другите представители на семейство Enterobacteriaceae по липсата на флагели (неподвижни), нямат спори и капсули и са грам-отрицателни.

II. Културен: шигелите са аероби или факултативни анаероби; оптимални условия за култивиране температура 37°C, pH 7,2-7,4. Развиват се върху прости хранителни среди (MPA, MPB) под формата на малки, лъскави, полупрозрачни, сивкави, кръгли колонии с размер 1,52 mm.С форма. Изключение правят Shigella на Sonne, които често се дисоциират, образувайки големи, плоски, мътни колонии с назъбени ръбове.Р форми (колониите приличат на „гроздов лист“). В течни хранителни среди Shigella дават равномерна мътност,Р форми образуват утайка. Течната среда за обогатяване е селенитен бульон.

III. Ензимна: основните биохимични характеристики, необходими за идентифициране на шигела при изолиране на чиста култура, са следните:

липса на образуване на газ по време на ферментация на глюкоза;
няма производство на сероводород;
липса на ферментация на лактоза в рамките на 48 часа.

Общо четирите вида са допълнително подразделени на приблизително 40 серотипа. Според характеристиките на основните соматични (О) антигени и биохимичните свойства се разграничават следните четири вида или групи: S. dysenteriae (група A, включва: Grigoriev-Shigi, Stutzer-Schmitz, Large-Sachs), S. flexneri (група B), S. boydii (група C) и S. sonnei (група D).

По отношение на манитола, всички шигели се разделят на разцепващи (Flexner, Boyd, Sonne shigella) и неразделящи се (Grigoriev-Shiga, Stutzer-Schmitz, Large-Sachs shigella) манитол.

IV. Патогенни фактори:

Плазмидна инвазияосигурява способността на шигелите да предизвикват инвазия с последващо междуклетъчно разпространение и размножаване в епитела на лигавицата на дебелото черво;
образуване на токсини: Shigella имат липополизахарид ендотоксин, който е химически и биохимично подобен на ендотоксините на други членове на семейство Enterobacteriaceae. В допълнение, S. dysenteriae тип I (бацилът на Shiga) произвежда екзотоксин. След откриването на последния е установено, че той има ентеротоксинова активност и може да предизвика чревна секреция, както и да има цитотоксичен ефект срещу чревните епителни клетки; рендери невротоксичен ефектнаблюдавани при деца с шигелоза. Шига токсинът, попадайки в кръвта, заедно с увреждането на субмукозния ендотел, засяга и гломерулите на бъбреците, в резултат на което в допълнение към кървавата диария се развива хемолитично-уремичен синдром с развитието на бъбречна недостатъчност.

V. Антигенна структура:Всички Shigella имат соматичен О-антиген, в зависимост от структурата на който се разделят на серовари.

VI. Съпротивление:Температура 100 0 C убива незабавно шигела. Shigella са устойчиви на ниски температури в речна водате се съхраняват до 3 месеца, върху зеленчуци и плодове - до 15 месеца.При благоприятни условия шигелите са способни да се размножават в хранителни продукти (салати, винегрети, варено месо, мляно месо, варена риба, мляко и млечни продукти, компоти и желе), особено сонна шигела.

Епидемиология.

1. Източник на инфекция:Лице, страдащо от остри и хронични форми на шигелоза; бактерионосител.

2. Начини на предаване:

Храна (главно за S. sonnei)
Водни (главно за S. flexneri)
Контактно домакинство (главно за S. dysenteriae)

3. Входна вратаинфекция служи стомашно-чревния тракт.

Патогенеза и патологични промени.

Веднъж погълнати, Shigella се колонизират горни дивизиитънките черва и се размножават там, като вероятно причиняват повишена секреция ранна фазаинфекции. След това шигелите проникват през М клетките в субмукозата, където се поглъщат от макрофаги. Това води до смърт на част от шигелите, което води до освобождаване на възпалителни медиатори, които инициират възпаление в субмукозата. Апоптозата на фагоцитите позволява на друга част от Shigella да оцелее и да проникне в епителните клетки на лигавицата чрез базална мембрана. Вътре в ентероцитите шигелите се възпроизвеждат и междуклетъчно се разпространяват, което води до развитие на ерозии. При смъртта на шигела се отделят шига и шигаподобни токсини, чието действие води до интоксикация. Поражението на лигавицата е придружено от подуване, некроза и кръвоизлив, което причинява появата на кръв в изпражненията. В допълнение, токсинът засяга централната нервна система, което води до трофични нарушения.

Клинични проявления.

Спектърът на клиничните прояви на шигелозата е много широк от лека диария до тежка дизентерия със спазми в корема, тенезъм, треска и обща интоксикация.

Инкубационен периодварира от няколко часа до 7 дни, най-често 2-3 дни.Първоначално пациентите имат воднисти изпражнения, треска (до 41 ° C), дифузна болка в корема, гадене и повръщане. Заедно с това пациентите се оплакват от миалгия, втрисане, болки в гърба и главоболие. В следващите дни от началото на заболяването се появяват признаци на дизентерия - тенезми, чести, оскъдни, кърваво-лигавични изпражнения. Телесната температура постепенно намалява, болката може да се локализира в долните квадранти на корема. Интензивността на диарията достига максимум в края на първата седмица на заболяването. Дизентерия с кървави изпражнения е по-честа и се проявява по-рано в заболяването, причинено от S. dysenteriae тип I, отколкото при други форми на шигелоза.

За Shigellosis Sonne характерен е по-лек ход на заболяването (гастроентеричен или гастроентероколитичен вариант). Фебрилният период е по-кратък, ефектите от интоксикацията са краткотрайни, деструктивните промени в чревната лигавица не са характерни.

Шигелоза ФлекснерОсновно са характерни два варианта на клиничното протичане - гастроентероколитичен и колитен.

Екстраинтестинални усложнения при шигелозаредки:

Усложнение на шигелозата може да бъде развитието на чревна дисбактериоза.
Наред с главоболието може да има признаци на менингит и конвулсивни припадъци.
Описани са случаи на периферна невропатия при инфекция с S. dysenteriae тип I и случаи на синдром на Guillain-Barré (полиневрит) са докладвани по време на огнище на гастроентерит с S. boydii.
С изключение на децата, страдащи от дистрофия, хематогенното разпространение на патогена е сравнително рядко, а също така са описани случаи на шигелозни абсцеси и менингит.
При шигелоза е възможно развитието на синдром на Reiter с артрит, стерилен конюнктивит и уретрит, това обикновено се случва след 1-4 седмици от началото на диарията при пациентите.
При деца шигелозата е придружена от хемолитичен уремичен синдром, често свързан с реакции, подобни на левкемия, тежък колит и циркулиращ ендотоксин, но бактериемия обикновено не се открива.
Много рядко гноен кератоконюнктивит се причинява от шигела, попаднала в очите в резултат на самоинфекция със замърсени пръсти.
Хиповолемичен шок и DIC.
Перитонит, чревна гангрена, чревно кървене.

Имунитет: Хората имат естествена резистентност към шигелозата. След минало заболяванеимунитетът не е стабилен и след шигелоза Sonne практически отсъства. При заболяване, причинено от Shigella Grigoriev Shigi, се развива по-стабилен антитоксичен имунитет. Основната роля в защитата срещу инфекция принадлежи на секреторите IgA , предотвратяване на адхезията и зависимата от цитотоксичните антитела активност на интраепителните лимфоцити, които заедно със секреторните IgA убийте шигела.

Диагностика и лабораторни изследвания.

Цел на изследването: откриване и идентифициране на шигели за диагностика; откриване на бактериални носители; откриване на шигела в храни.

Изследователски материал: екскременти, секционен материал, хранителни продукти.

Диагностични методи:микробиологични (бактериологични, микроскопски (луминисцентни); серологични; биологични; тест за алергия.

Напредък на изследванията:

1 учебен ден:Културите трябва да се правят от прясно отделени изпражнения или с помощта на ректални тампони (ректална сонда); при липса на подходящи условия материалът трябва да се постави в транспортна среда. За това трябва да се използва ентеричен агар (среда MacConkey или Shigella-Salmonella), умерено селективен ксилоза-лизин-дезоксихолатен агар, KLD) и хранителен бульон (селенитен бульон). Ако времето между събирането и инокулацията надвишава 2 часа, трябва да се използват консервиращи разтвори: 20% жлъчен бульон, комбинирана среда на Кауфман.

Екскрементите в глицериновата смес се емулгират, капка от емулсията се нанася върху средата и се разтрива с шпатула. Диференциални среди за Shigella са среди Ploskirev, Endo и EMS (еозинметиленово синьо агар). Среда на Плоскирев (съставът на средата включва: MPA, лактоза, соли жлъчни киселинии индикатор брилянтно зелено) също е избираема среда за Shigella, т.к инхибира растежа на Escherichia coli.
Успоредно с директна сеитба събран материалзасети върху обогатяващата среда - селенитен бульон.
Всички култури се поставят в термостат.

Ден 2 от изследването:

Чашите се изваждат от термостата, подозрителните колонии се изследват върху среда на Ressel (хранителна среда, която включва: агар-агар, индикатор Andrede, 1% лактоза, 0,1% глюкоза) и манитол. Засяването се извършва чрез щрихи върху наклонена повърхност и инжектиране в колона с агар. Инокулираната Ressel среда се поставя в термостат за 18-24 часа (успоредно с това се извършва повторно засяване от селенитна среда към диференциално диагностична среда).
Направете петна (оцветяване по Грам), микроскоп.
Подгответе препарати "висящи" или "натрошени" капка.
Изявление за показателен RA с поливалентни диагностични серуми за шигелоза.
Посяване на подозрителни колонии върху наклонен агар.

Ден 3 от изследването:

Микроскопия на материал от агар.
Култури, които не са ферментирали лактоза върху среда на Ressel, се подлагат на по-нататъшно изследване: правят се петна (оцветяване по Грам), проверява се чистотата на културата. При наличие на грам-отрицателни пръчици, инокулацията се извършва върху среда на Hiss, бульон с индикаторни хартии (за откриване на индол и сероводород) и лакмусово мляко.
Инокулираните среди се поставят в термостат за 18-24 часа.

Ден 4 от изследването:

Отчитане на кратка "пъстра серия".
Култури, подозрителни за техните ензимни и културни свойства срещу Shigella, се подлагат на серологична идентификация. Отчет за RA върху стъкло (типични и групови диагностични серуми). Настройка на разгърнатия RA.

Като ускорени методиизползвани за шигелозафлуоресцентна микроскопияИ биологична проба(въвеждане на вирулентни щамове на Shigella в конюнктивалния сак (под долния клепач) на морските свинчета, конюнктивитът се развива до края на 1-ия ден).

Алергичен тест Zuverkalovинтрадермален алергичен тест с дизентерия (въвеждане на 0,1 ml дизентерия в предмишницата положителна реакция в случай на инфилтрация и хиперемия). Алергологичната диагностика в момента практически не се използва. Тестът на Цървекалов не се отличава със специфичност, положителни реакции се регистрират не само при шигелоза, но и при салмонелоза, ешерихиоза, йерсиниоза и други остри чревни инфекции, а понякога и при здрави индивиди.

Лечение и профилактика.Бактериофагът се използва за лечение и профилактика по епидемиологични показания. перорално приложение, антибиотици след определяне на антибиограмата; при дисбактериоза препарати от пробиотици за корекция на микрофлората. За попълване на загубата на течности и електролити - въвеждането на глюкозо-електролитен разтвор вътре.

Конкретни цели:

Интерпретирайте биологичните свойства на патогените на шигелозата.

Запознайте се с класификацията на Shigella.

Научете се да интерпретирате патогенетичните модели на инфекциозния процес, причинен от шигела.

Да се определят методите за микробиологична диагностика, етиотропна терапия и профилактика на шигелоза.

Умейте да:

Инокулирайте тестовия материал върху хранителни среди.
- Подгответе петна и оцветете по Грам.
- Извършете микроскопия на препаратите с помощта на имерсионен микроскоп.
- Анализирайте морфологичните, културните и ензимните характеристики на Shigella.

Теоретични въпроси:

1. Характеристики на патогени на шигелоза. биологични свойства.

2. Класификация на шигелите. Основните принципи.

3. Епидемиология, патогенеза и клинични характеристикишигелоза.

4. Лабораторна диагностика.

5. Принципи на лечение и профилактика на шигелоза.

Практически задачи, които се изпълняват в класната стая:

1. Микроскопия на демонстрационни препарати от чисти култури на патогени на шигелоза.

2. Работа по бактериологична диагностика на шигелоза: изследване на фекални култури върху средата на Ploskirev.

3. Субкултивиране на подозрителни колонии върху среда на Ressel и върху BCH за определяне на образуването на индол и H 2 S .

4. Скициране на демонстрационни препарати и схема за микробиологична диагностика на шигелоза в протокола на урока.

5. Регистрация на протокола.

Литература:

1. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинска микробиология, имунология и вирусология / Учебник за медицинските университети, Санкт Петербург "Специална литература", 1998. - 592с.

2. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология / Учебник.-2-ро изд., прер. И допълнително - М .: Медицина, 1983, -512s.

3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусология и имунология.- Киев: In and shcha school, 1992. - 431s.

4. Медицинска микробиология / Под редакцията на V.I. Покровски.-M .: GEOTAR-MED, 2001.-768s.

5. Ръководство за практическо обучениепо микробиология, имунология и вирусология. Изд. М.П. Зиков. М. "Медицина". 1977. 288 стр.

6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Белскан Н.А. микробиология. / Ед. Ф.К. черкезки. М.: Медицина, 1986. 512 с.

7. Записки от лекции.

Допълнителна литература:

1. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и имунология. Алма-Ата, "Казахстан", 1974. 372 с.

2. Титов М.В. Инфекциозни заболявания. – К., 1995. 321с.

3. Шувалова Е.П. инфекциозни заболявания. - М .: Медицина, 1990. - 559 с.

4. BME, том 1, 2, 7.

5. Павлович С.А. Медицинска микробиология в графики: Proc. надбавка за медицински по-другар. Мн.: Виш. училище, 1986. 255 с.

Накратко насокиза работа в практическото занятие.

В началото на урока се проверява нивото на подготовка на учениците за урока.

Самостоятелната работа се състои в изучаване на класификацията на шигела, анализ на схемата на патогенетичните и клинични признацишигелоза. Проучване на методите за лабораторна диагностика на шигелоза. Студентите извършват засяване на биоматериал върху хранителни среди. След това се изготвят микропрепарати, оцветяват се по Грам, извършва се микроскопия, скицират се микропрепарати и се дават необходимите пояснения. Съставът на самостоятелната работа включва и микроскопиране на демонстрационни препарати и тяхното скициране в протокола на урока.

В края на урока се провежда тестов контрол и анализ на крайните резултати от самостоятелната работа на всеки студент.

Технологична карта на практическото занятие.

п/н	Етапи	Време в минути	Начини на обучение	Оборудване	Местоположение
	Проверка и коригиране на началното ниво на подготовка за урока		Тестови задачибазова линия	Таблици, атлас	стая за учене
	Самостоятелна работа		Графика на логическата структура	Имерсионен микроскоп, багрила, предметни стъкла, бактериологични бримки, хранителни среди, среда на Плоскирев, среда на Ресел, "пъстра серия на Хис"
	Самопроверкаи корекция на усвояването на материала		Целеви учебни задачи
	Тестови контрол		Тестове
	Анализ на резултатите от работата

Целеви учебни задачи:

Изпражненията са получени от дете с остри чревни инфекции (събирането на изпражненията е извършено с ректална сонда), съдържащи слуз и гной. Какъв метод за експресна диагностика трябва да се използва?

А. ELISA.

b. РИФ.

° С. RA.

Д. RSK.

д. АПИ.

Причинителят на дизентерия е изолиран от болно дете с остра чревна инфекция. Който морфологични особеностихарактеристика на патогена?

А . Грам-отрицателна неподвижна пръчка.

б . Грам-положителна подвижна пръчка.

° С . Образува капсула върху хранителна среда.

д . Образува спори във външната среда.

д . Грам-положителни стрептобацили.

3. Пациент, който се разболя преди три дни и се оплаква от температура 38 ° C, болки в корема, чести течни изпражнения, наличие на кръв в изпражненията, лекарят клинично диагностициран бациларна дизентерия. Какъв метод за микробиологична диагностика трябва да се използва в този случай и какъв материал трябва да се вземе от пациента за потвърждаване на диагнозата?

А. Бактериоскопски кал.

Б. Бактериологична кал.

В. Бактериоскопска кръв.

D. Бактериологична урина.

E. Серологична кръв.

4. Shigella Sonne е изолирана от изпражненията на пациента. Какво трябва да се направи допълнителни изследванияза определяне на източника на инфекцията?

А . Извършете фаготипизиране на изолираната чиста култура.

б . Определете антибиограма.

° С . Настройте реакцията на утаяване.

д . Настройте реакцията на фиксиране на комплемента.

д . Настройте реакция на неутрализация.

5. Сред групата туристи (27 души), които са пили вода от езерото, след два дни 7 души развиват симптоми остра диария. Какъв материал за установяване на етиологията тази болесттрябва да се изпрати в лабораторията?

А. Вода, изпражнения на пациенти.

Б. Вода, кръвта на болните.

В. Хранителни продукти.

Д. Урина.

E. Храчки.

6. Съществен недостатък на микроскопския метод за диагностика на остри чревни инфекции е недостатъчното му информативно съдържание поради морфологичната идентичност на бактериите от семейството Enterobacteriaceae . Какво прави този метод по-информативен?

А . Радиоимуноанализ.

б . Реакция на Кумбс.

° С . Свързан имуносорбентен анализ.

д . реакция на опсонизация.

д . Реакция на имунофлуоресценция.

7. 29-годишен пациент е хоспитализиран с пристъпи на повръщане, диария и тенезми. Изпражнения с парчета слуз и примес на кръв. Бактериологичното изследване на бактерии от колонии върху средата на Ploskirev разкрива неподвижни, грам-отрицателни пръчки, които не ферментират лактоза. Посочете причинителя на инфекциозния процес.

А. Shigella flexneri.

b. Вибрио елтор.

C. E. Coli.

D. Proteus mirabilis.

д. Salmonella enteritidis.

8. В микробиологичната лаборатория е доставена маруля, за която се предполага, че е причинител на остро чревна инфекция. Какви хранителни среди се използват за първична инокулация?

А . Жълтъчно-солев агар, MPB.

b. MPA, MPB.

° С . Селенит бульон, Ендо, Плоскирева.

д . Бульон от черен дроб, средно ру.

д . Кръвен агар, алкален агар.

9. При микробиологично изследване на кайма са изолирани бактерии от род Shigella. Изследването на какви свойства на микробите доведе до такова заключение?

А . Културен, тинкториален.

б . Антигенен, културен.

° С . Захаролитичен, протеолитичен.

д . Антигенен, имуногенен.

д . Морфологични, антигенни.

10. Кога микроскопско изследваневзет повърнат материал от пациент със симптоми на остра чревна инфекция, открити са неподвижни пръчици. В каква цитонамазка или препарат може да се изследва бактериалната подвижност?

А . В цитонамазка, оцветена по Грам.

б . В намазка, оцветена по Tsil - Nelsen.

° С . В подготовката "дебела капка".

д . В цитонамазка, оцветена по Neisser.

д . В подготовката "натрошена капка".

Алгоритъм лабораторна работа:

1. Изследване на биологичните свойства на Shigella.

2. Запознаване с класификацията на шигелите.

3. Анализ на схемата на патогенетичните и клинични прояви на шигелоза.

4. Проучване на методите за лабораторна диагностика на шигелоза.

5. Изучаване на основните принципи на терапия и профилактика на шигелоза.

Приготвяне на фиксирани препарати от бактериална култура.
Оцветяване микропрепаратиот Грам.
Микроскопия на микропрепаратис с помощта на имерсионен микроскоп, техния анализ и скициране в протокола от урока.
Ми хромоскопия и анализ на демонстрационни препарати от чисти култури на Shigella.
Скициране на демонстрационни препарати и схема на лабораторна диагностика на шигелоза в протокола.
Формулиране на протокола.

дизентерия - това е болезнена инфекция, придружена от диария с отделяне на кръв, гной и слуз, коремна болка и симптоми на обща интоксикация, протичаща с преобладаваща лезия на дебелото черво, причинена от различни видовемил Шигела(дизентерийни бактерии).

причинители на дизентерия принадлежат на отдела Gracilicutes, семейство Enterobacteriaceae, мил Шигела.
дизентерия , Наречен Shigella dysenteriae, е по-тежка от болестите, причинени от други Shigella, тъй като в допълнение към ендотоксина, който причинява чревно възпаление, този вид бактерии произвеждат силен екзотоксин, който действа като невротоксин

Бактериална дизентерия , или шигелоза, е инфекциозно заболяване, причинено от бактерии от рода Шигела,

дизентерия.Морфология и тинкториални свойства.
Shigella - грам-отрицателни пръчици със заоблени краища, дълги 2-3 микрона, дебелина 0,5-7 микрона, не образуват спори, нямат флагели, неподвижни са. При много щамове се откриват власинки от общ тип и генитални пили. Някои Shigella имат микрокапсула.

дизентерия. Култивиране.
Дизентерийните пръчки са факултативни анаероби. Те не са взискателни към хранителните среди, растат добре при температура 37 ° C и рН 7,2-7,4. В плътни среди образуват малки прозрачни колонии, в течни среди - дифузна мътност. Селенитният бульон най-често се използва като обогатителна среда за култивиране на Shigella.

дизентерия.ензимна активност.
Shigella имат по-слаба ензимна активност от другите ентеробактерии. Те ферментират въглехидратите с образуването на киселина. Важна характеристика, която прави възможно разграничаването на Shigella, е връзката им с манитола: S. dysenteriae не ферментира манитол, представителите на групи B, C, D са манитол-положителни. Най-биохимично активни са S. sonnei, които бавно (в рамките на 2 дни) могат да ферментират лактозата. Въз основа на връзката на S. sonnei с рамнозата, ксилозата и малтозата се разграничават 7 нейни биохимични разновидности.

дизентерия.Антигенна структура.
Shigella имат О-антиген, неговата хетерогенност позволява разграничаване на серовари и субсеровари в групи; в някои членове на рода се открива К-антигенът.

дизентерия.фактори на патогенност.
Всички дизентерийни бацили образуват ендотоксин, който има ентеротропен, невротропен, пирогенен ефект. В допълнение, S. dysenteriae - Shigella Grigoriev-Shiga - отделят екзотоксин, който има ентеротоксичен, невротоксичен, цитотоксичен и нефротоксичен ефект върху тялото, което съответно нарушава водно-солевия метаболизъм и активността на централната нервна система, води до смърт на епителните клетки на дебелото черво, увреждане на бъбречните тубули.

С образуването на екзотоксин се свързва по-тежко протичане на дизентерия, причинена от този патоген. Екзотоксин може да се секретира и от други видове Shigella. Открит е факторът RF пропускливост, в резултат на който се засягат кръвоносните съдове. Патогенните фактори също включват инвазивен протеин, улесняващи проникването им в епителните клетки, както и протеини на пили и външна мембрана, отговорни за адхезията, и микрокапсула.

дизентерия.съпротива.
Shigella имат ниска устойчивост на действие различни фактори. S. sonnei имат по-голяма устойчивост, която в вода от чешматапродължават до 2,5 месеца, във водата на открити резервоари оцеляват до 1,5 месеца. S. sonnei може не само да оцелее дълго време, но и да се размножава в продуктите, особено в млечните продукти.

дизентерия.Епидемиология.
Дизентерията е антропонозна инфекция: източник са болни хора и носители. Механизмът на предаване на инфекциите е фекално-орален. Пътищата на предаване могат да бъдат различни - при дизентерия на Зоне преобладава хранителният път, при дизентерия на Флекснер - вода, за дизентерия на Григориев-Шига е характерен контактно-битовият път.

дизентерия открити в много страни по света. IN последните годиниима рязко покачване на случаите на тази инфекция. Боледуват хора от всички възрасти, но най-податливи на дизентерия са децата от 1 до 3 години. Броят на заболелите нараства през юли-септември. Различните видове Shigella са неравномерно разпространени в определени региони.

дизентерия.Патогенеза.
Шигелите навлизат в стомашно-чревния тракт през устата и достигат до дебелото черво. Притежавайки тропизъм към своя епител, патогените се прикрепят към клетките с помощта на пили и протеини на външната мембрана. Благодарение на инвазивния фактор те проникват вътре в клетките, размножават се там, в резултат на което клетките умират.

В чревната стена се образуват язви, на мястото на които след това се образуват белези. Ендотоксинът, отделен по време на унищожаването на бактериите, причинява обща интоксикация, повишена чревна подвижност и диария. Кръвта от образуваните язви навлиза в изпражненията. В резултат на действието на екзотоксина се наблюдава по-изразено нарушение на водно-солевия метаболизъм, дейността на централната нервна система и увреждане на бъбреците.

дизентерия.клинична картина.
Инкубационният период продължава от 1 до 5 дни. Заболяването започва остро с повишаване на телесната температура до 38-39 ° C, появяват се болки в корема, диария. В изпражненията се открива примес на кръв, слуз. Дизентерията на Григориев-Шига е най-тежката.

дизентерия.Имунитет.
След заболяване имунитетът е видово-специфичен и вариантно-специфичен. Той е краткотраен и нестабилен. Често заболяването става хронично. Повтарящи се заболявания са отбелязани дори в рамките на един сезон.

дизентерия.лаборатория диагностика.
Като материал за изследване се вземат изпражненията на пациента. Основата на диагностиката е бактериологичният метод, който позволява да се идентифицира патогенът, да се определи неговата чувствителност към антибиотици, да се извърши вътрешноспецифична идентификация (определяне на биохимичния вариант, серовар или колициногеновар). При продължителен курс на дизентерия може да се използва като спомагателно средство серологичен метод, състоящ се във формулирането на RA, RNHA (чрез увеличаване на титъра на антителата с многократно формулиране на реакцията, диагнозата може да бъде потвърдена).

дизентерия.Лечение.
Пациентите с тежки форми на дизентерия на Григориева-Шиш и Флекснер се лекуват с антибиотици широк обхватдействия със задължително отчитане на антибиограмата, тъй като сред шигелите често има не само резистентни към антибиотици, но и зависими от антибиотици форми. При леки форми на дизентерия антибиотиците не се използват, тъй като употребата им води до дисбактериоза, която влошава патологичен процес, и нарушаване на възстановителните процеси в лигавицата на дебелото черво.

дизентерия.Предотвратяване.
Единственото лекарство, което може да се използва в огнищата на инфекцията за профилактични цели, е дизентеричният бактериофаг. Основна роля играе неспецифичната профилактика.

Неспецифичната профилактика осигурява правилното санитарно-хигиенно организиране на живота на хората, осигуряването им на висококачествена вода и храна.

В околната среда на пациента трябва да се вземат мерки за предотвратяване на разпространението на патогена.

Микробиология на дизентерия

Дизентерията е инфекциозно заболяване, характеризиращо се с обща интоксикация на тялото, диария и специфично увреждане на лигавицата на дебелото черво. Това е едно от най-честите остри чревни заболявания в света. Заболяването е известно от древността под името "кървава диария", но природата му се оказва друга. През 1875 г. руският учен Ф. А. Леш изолира амеба от пациент с кървава диария Entamoeba histolytica, през следващите 15 години се установява самостоятелността на това заболяване, за което се запазва името амебиаза.

Причинителите на същинската дизентерия са голяма група биологично сходни бактерии, обединени в рода Шигела. Патогенът е открит за първи път през 1888 г. от A. Chantemes и F. Vidal; през 1891 г. той е описан от А. В. Григориев, а през 1898 г. К. Шига, използвайки серума, получен от пациент, идентифицира патогена при 34 пациенти с дизентерия, като най-накрая доказва етиологичната роля на тази бактерия. Но през следващите години са открити и други причинители на дизентерия: през 1900 г. от S. Flexner, през 1915 г. от K. Sonne, през 1917 г. от K. Stutzer и K. Schmitz, през 1932 г. от J. Boyd, през 1934 г. от D. Large, през 1943 г. от A. Sachs. В момента род Шигелавключва повече от 40 серотипа. Всички те са къси неподвижни грам-отрицателни пръчици, които не образуват спори и капсули, които растат добре на обикновени хранителни среди, не растат на хранителна среда с цитрат или малонат като единствен източник на въглерод; не образуват H 2 S, нямат уреаза; реакцията на Voges-Proskauer е отрицателна; глюкозата и някои други въглехидрати се ферментират, за да образуват киселина без газ (с изключение на някои биотипове Shigella flexneri: С. МанчестърИ С. Нюкасъл); като правило не ферментират лактоза (с изключение на Shigella Sonne), адонит, салицин и инозитол, не втечняват желатин, обикновено образуват каталаза, нямат лизин декарбоксилаза и фенилаланин деаминаза. Съдържанието на G + C в ДНК е 49 - 53 mol%. Шигелите са факултативни анаероби, температурният оптимум за растеж е 37 °C, не се развиват при температури над 45 °C, оптималното pH на средата е 6,7 - 7,2. Колониите върху плътна среда са кръгли, изпъкнали, полупрозрачни, в случай на дисоциация се образуват груби колонии с форма на R. Растежът върху BCH под формата на равномерна мътност, грапавите форми образуват утайка. Прясно изолирани култури от Sonne Shigella обикновено образуват колонии от два вида: малки кръгли изпъкнали (I фаза), големи плоски (II фаза). Естеството на колонията зависи от наличието (I фаза) или отсъствието (II фаза) на плазмид с m.m.120 MD, което също определя вирулентността на Shigella Sonne.

Международната класификация на Shigella е изградена, като се вземат предвид техните биохимични характеристики (манитол-неферментиращи, манитол-ферментиращи, бавно ферментиращи лактоза Shigella) и характеристиките на антигенната структура (Таблица 37).

В Shigella са открити О-антигени с различна специфичност: общи за семейството Enterobacteriaceae, генерични, видови, групови и типоспецифични, както и К-антигени; Те нямат H антигени.

Таблица 37

Класификация на бактериите от рода Шигела

Класификацията взема предвид само групови и типоспецифични О-антигени. Според тези характеристики, Шигеласе подразделя на 4 подгрупи или 4 вида и включва 44 серотипа. В подгрупа А (вид Shigella dysenteriae) включва шигели, които не ферментират манитол. Видът включва 12 серотипа (1 - 12). Всеки серотип има свой специфичен тип антиген; антигенните връзки между серотипове, както и с други видове шигели, са слабо изразени. Към подгрупа Б (вид Shigella flexneri) включват Shigella, обикновено ферментиращи манитол. Шигелите от този вид са серологично свързани помежду си: те съдържат типоспецифични антигени (I - VI), според които се разделят на серотипове (1 - 6), и групови антигени, които се намират в различни състави във всеки серотип и според които серотиповете се разделят на подсеротипове. В допълнение, този вид включва два антигенни варианта, X и Y, които нямат типични антигени; те се различават по набори от групови антигени. Серотип S. flexneri 6няма субсеротипове, но се разделя на 3 биохимични типа според характеристиките на ферментацията на глюкоза, манитол и дулцит (Таблица 38).

Таблица 38

Биотипове S. flexneri 6

Забележка. К - ферментация с образуване само на киселина; KG - ферментация с образуване на киселина и газ; (-) - без ферментация.

Липополизахаридният антиген О във всички Shigella Flexner съдържа групов антиген 3, 4 като основна първична структура, неговият синтез се контролира от хромозомен ген, локализиран близо до his-локуса. Типоспецифичните антигени I, II, IV, V и груповите антигени 6, 7, 8 са резултат от модификация на антигени 3, 4 (гликозилиране или ацетилиране) и се определят от гените на съответните конвертиращи профаги, мястото на интегриране на които се намира в lac-pro региона на хромозомата Shigella.

Появява се на територията на страната през 80-те години. 20-ти век и широко използван нов субсеротип S. flexneri 4(IV:7, 8) се различава от субсеротип 4a (IV:3, 4) и 4b (IV:3, 4, 6), възникнал от варианта S. flexneri Y(IV: 3, 4) поради лизогенизация от неговите конвертиращи профаги IV и 7, 8.

Към подгрупа С (вид Shigella boydii) включват Shigella, обикновено ферментиращи манитол. Членовете на групата са серологично различни един от друг. Антигенните връзки в рамките на вида са слабо изразени. Видът включва 18 серотипа (1 - 18), всеки от които има свой собствен основен тип антиген.

В подгрупа D (вид Shigella sonnei) включва Shigella, които обикновено ферментират манитол и са в състояние бавно (след 24 часа инкубация и по-късно) да ферментират лактоза и захароза. Преглед S. sonneiвключва един серотип, но колониите във фази I и II имат свои собствени специфични за типа антигени. Предложени са два метода за вътрешноспецифична класификация на Shigella на Sonne:

1) разделянето им на 14 биохимични типа и подтипа според способността им да ферментират малтоза, рамноза и ксилоза; 2) разделяне на типове фаги според чувствителността към набор от съответни фаги.

Тези методи за типизиране имат главно епидемиологично значение. В допълнение, шигелите на Sonne и шигелите на Flexner се подлагат на типизиране за същата цел чрез способността да синтезират специфични колицини (колициногенотипиране) и чрез чувствителност към известни колицини (колицинотипиране). За определяне на типа колицини, продуцирани от шигела, J. Abbott и R. Shannon предлагат набори от типични и индикаторни щамове на шигела и за определяне на чувствителността на шигела към известни видове колицини се използва набор от референтни колициногенни щамове от P. Frederick.

съпротива. Shigella имат доста висока устойчивост на фактори на околната среда. Издържат върху памучен плат и върху хартия до 30-36 дни, в изсъхнали изпражнения - до 4-5 месеца, в почва - до 3-4 месеца, във вода - от 0,5 до 3 месеца, върху плодове и зеленчуци - до 2 седмици, в мляко и млечни продукти - до няколко седмици; при температура 60 ° C те умират за 15 - 20 минути. Чувствителен към разтвори на хлорамин, активен хлор и други дезинфектанти.

фактори на патогенност.Най-важното биологично свойство на Shigella, което определя тяхната патогенност, е способността да проникват в епителните клетки, да се размножават в тях и да причиняват смъртта им. Този ефект може да бъде открит с помощта на кератоконюнктивен тест (въвеждането на една бримка от култура Shigella (2-3 милиарда бактерии) под долния клепач на морско свинче причинява развитие на серозен гноен кератоконюнктивит), както и чрез заразяване на клетъчни култури (цитотоксичен ефект) или пилешки ембриони (тяхната смърт) или интраназално бели мишки (развитие на пневмония). ). Основните фактори за патогенност на шигела могат да бъдат разделени на три групи:

1) фактори, които определят взаимодействието с епитела на лигавицата;

Първата група включва фактори на адхезия и колонизация: тяхната роля се играе от пили, протеини на външната мембрана и LPS. Ензими, разрушаващи слуз, като невраминидаза, хиалуронидаза и муциназа, насърчават адхезията и колонизацията. Втората група включва фактори на инвазия, които насърчават проникването на Shigella в ентероцитите и тяхното възпроизвеждане в тях и в макрофагите с едновременното проявление на цитотоксичен и (или) ентеротоксичен ефект. Тези свойства се контролират от гените на плазмида 140 MD (той кодира синтеза на протеини от външната мембрана, които причиняват инвазия) и хромозомните гени на Shigella: kcp A (причинява кератоконюнктивит), cyt (отговорен за разрушаването на клетките), както и други гени, които все още не са идентифицирани. Защитата на Shigella от фагоцитоза се осигурява от повърхностен К-антиген, антигени 3, 4 и липополизахарид. В допълнение, Shigella endotoxin lipid A има имуносупресивен ефект: той потиска активността на клетките на имунната памет.

Третата група фактори на патогенност включва ендотоксин и два вида екзотоксини, открити в Shigella - Shiga екзотоксини и Shiga-подобни екзотоксини (SLT-I и SLT-II), чиито цитотоксични свойства са най-силно изразени в S. dysenteriae 1. Shiga- и Shiga-подобни токсини, открити и в други серотипове S. dysenteriae, те също се образуват S. flexneri, S. sonnei, S. boydii, EHEC и малко салмонела. Синтезът на тези токсини се контролира от токсичните гени на конвертиращите фаги. Тип LT ентеротоксини са открити във Flexner, Sonne и Boyd Shigella. Синтезът на LT в тях се контролира от плазмидни гени. Ентеротоксинът стимулира активността на аденилат циклазата и е отговорен за развитието на диария. Шига токсинът или невротоксинът не реагира с аденилатциклазната система, но има директен цитотоксичен ефект. Shiga и Shiga-подобните токсини (SLT-I и SLT-II) имат MW от 70 kD и се състоят от A и B субединици (последната от 5 идентични малки субединици). Рецепторът за токсините е гликолипидът на клетъчната мембрана.

Вирулентността на Shigella Sonne също зависи от плазмида с m.m.120 MD. Той контролира синтеза на около 40 полипептида на външната мембрана, седем от които са свързани с вирулентност. Shigella Sonne с този плазмид образува фаза I колонии и е вирулентна. Култури, които са загубили плазмида, образуват колонии фаза II и нямат вирулентност. Плазмиди с m.m.120 - 140 MD са открити в Shigella Flexner и Boyd. Липополизахаридът на Shigella е мощен ендотоксин.

Характеристика на епидемиологията на дизентерия е промяната във видовия състав на патогените, както и биотипове Sonne и серотипове Flexner в определени региони. Така например до края на 30-те години на ХХ в 20-ти век споделям S. dysenteriae 1представляват до 30 - 40% от всички случаи на дизентерия, а след това този серотип започва да се среща все по-рядко и почти изчезва. Въпреки това през 60-те - 80-те години на ХХ век. S. dysenteriaeсе появи отново на историческата арена и предизвика поредица от епидемии, довели до образуването на три хиперендемични огнища от него - в Централна Америка, Централна Африка и Южна Азия (Индия, Пакистан, Бангладеш и други страни). Причините за промяната във видовия състав на патогените на дизентерия вероятно са свързани с промяна в колективния имунитет и с промяна в свойствата на дизентерийните бактерии. По-специално връщането S. dysenteriae 1и широкото му разпространение, което причинява образуването на хиперендемични огнища на дизентерия, се свързва с придобиването на плазмиди от него, което причинява резистентност към множество лекарства и повишена вирулентност.

Характеристики на патогенезата и клиниката.Инкубационният период на дизентерия е 2-5 дни, понякога по-малко от един ден. The formation of an infectious focus in the mucous membrane of the descending part of the large intestine (sigmoid and rectum), where the causative agent of dysentery penetrates, is cyclical: adhesion, colonization, the introduction of Shigella into the cytoplasm of enterocytes, their intracellular reproduction, destruction and rejection of epithelial cells, the release of pathogens into the intestinal lumen; след това започва следващият цикъл - адхезия, колонизация и др. Интензитетът на циклите зависи от концентрацията на патогени в париеталния слой на лигавицата. В резултат на повтарящи се цикли възпалителният фокус нараства, получените язви, свързвайки се, увеличават експозицията на чревната стена, в резултат на което в изпражненията се появяват кръв, мукопурулентни бучки и полиморфонуклеарни левкоцити. Цитотоксините (SLT-I и SLT-II) причиняват разрушаване на клетките, ентеротоксинът - диария, ендотоксините - обща интоксикация. Клиниката на дизентерия до голяма степен се определя от това какъв тип екзотоксини се произвежда в по-голяма степен от патогена, степента на неговия алергизиращ ефект и имунния статус на организма. Въпреки това, много въпроси на патогенезата на дизентерията остават неизяснени, по-специално: хода на дизентерия при деца от първите две години от живота, причините за прехода на остра дизентерия към хронична, значението на сенсибилизацията, механизма на локалния имунитет на чревната лигавица и др. Най-типичните клинични прояви на дизентерия са диария, чести позиви: в тежки случаи до 5 0 или повече пъти на ден, тенезми (болезнени спазми на ректума) и обща интоксикация. Естеството на изпражненията се определя от степента на увреждане на дебелото черво. Най-тежката дизентерия се причинява от S. dysenteriae 1, най-лесно - дизентерия на Зоне.

Постинфекциозен имунитет.Както показват наблюдения върху маймуни, след прекарана дизентерия остава силен и доста дълготраен имунитет. Причинява се от антимикробни антитела, антитоксини, повишена активност на макрофаги и Т-лимфоцити. Значителна роля играе локалният имунитет на чревната лигавица, медииран от IgAs. Имунитетът обаче е типоспецифичен по природа, силен кръстосан имунитет не възниква.

Лабораторна диагностика.Основният метод е бактериологичен. Материалът за изследването са изпражненията. Схема за изолиране на патогени: инокулация върху среди за диференциална диагностика Endo и Ploskirev (успоредно върху средата за обогатяване, последвано от инокулация върху среди Endo и Ploskirev) за изолиране на изолирани колонии, получаване на чиста култура, изследване на нейните биохимични свойства и, като се вземат предвид последните, идентификация с помощта на поливалентни и моновалентни диагностични аглутиниращи серуми. Произвеждат се следните търговски серуми.

1. Шигели, които не ферментират манитол:

Да се S. dysenteriae 1И 2

Да се S. dysenteriae 3–7(многовалентни и едновалентни),

Да се S. dysenteriae 8 – 12(многовалентни и едновалентни).

2. Към манитол, ферментиращ от шигела:

към типичните антигени S. flexneri I, II, III, IV, V, VI,

за групиране на антигени S. flexneri 3, 4, 6, 7, 8- поливалентен,

към антигени S.boydii 1–18(многовалентни и едновалентни), към антигени S. sonnei I фаза, II фаза,

към антигени S. flexneri I–VI+ S. sonnei- поливалентен.

За бързо идентифициране на Shigella се препоръчва следният метод: подозрителна колония (лактозонегативна върху среда Endo) се субкултивира върху среда TSI (англ. тройна захар желязо) - тризахарен агар (глюкоза, лактоза, захароза) с желязо за определяне на производството на H 2 S; или върху среда, съдържаща глюкоза, лактоза, захароза, желязо и урея. Всеки организъм, който разгражда уреята след 4 до 6 часа инкубация, най-вероятно принадлежи към рода Протейи могат да бъдат изключени. Може да се изключи микроорганизъм, произвеждащ H 2 S или имащ уреаза или произвеждащ киселина в ставата (ферментира лактоза или захароза), въпреки че щамовете, произвеждащи H 2 S, трябва да бъдат изследвани като възможни членове на рода Салмонела. Във всички останали случаи културата, отглеждана върху тези среди, трябва да се изследва и, ако ферментира глюкоза (промяна на цвета на колоната), да се изолира в чиста форма. В същото време може да се изследва в теста за аглутинация върху стъкло с подходящи антисеруми към рода Шигела. При необходимост се извършват и други биохимични изследвания за проверка на принадлежността към рода Шигелаи учебна мобилност.

Следните методи могат да се използват за откриване на антигени в кръвта (включително като част от CEC), урината и изпражненията: RPHA, RSK, реакция на коаглутинация (в урина и изпражнения), IFM, RAGA (в кръвен серум). Тези методи са високоефективни, специфични и подходящи за ранна диагностика.

За серологична диагностика могат да се използват: RPGA със съответните еритроцитни диагностикуми, имунофлуоресцентен метод (в индиректна модификация), метод на Coombs (определяне на титъра на непълните антитела). Алергичен тест с дизентерия (разтвор на протеинови фракции на Shigella Flexner и Sonne) също има диагностична стойност. Реакцията се отчита след 24 ч. Счита се за положителна при наличие на хиперемия и инфилтрация с диаметър 10-20 mm.

Лечение.Основното внимание се обръща на възстановяването на нормалния водно-солев метаболизъм, рационално хранене, детоксикация, рационална антибиотична терапия (като се вземе предвид чувствителността на патогена към антибиотици). Добър ефект се постига чрез ранното използване на поливалентен дизентериен бактериофаг, особено таблетки с пектиново покритие, което предпазва фага от действието на HCl на стомашния сок; в тънките черва пектинът се разтваря, фагите се освобождават и проявяват своето действие. За профилактични цели фагът трябва да се прилага поне веднъж на всеки три дни (периода на неговото оцеляване в червата).

Проблемът със специфичната превенция.За създаване на изкуствен имунитет срещу дизентерия бяха използвани различни ваксини: от убити бактерии, химикали, алкохол, но всички те се оказаха неефективни и бяха преустановени. Ваксини срещу дизентерия на Flexner са създадени от жива (мутантна, стрептомицин-зависима) Shigella Flexner; рибозомни ваксини, но те също не са широко използвани. Следователно проблемът със специфичната профилактика на дизентерия остава нерешен. Основният начин за борба с дизентерията е подобряването на водоснабдителната и канализационната система, осигуряването на строги санитарно-хигиенни режими в хранителните предприятия, особено в млечната промишленост, в детските заведения, обществените места и личната хигиена.

КАТЕГОРИИ

Прожекция

Ултразвук на крайници

Видове ултразвук

ултразвук на корема

ултразвук на гръдния кош

ПОПУЛЯРНИ СТАТИИ

	Отрицанието не с глаголи (в лична форма, в инфинитив, под формата на герундий) се пише отделно: не вземай, не беше, без да знае, бавно
	Презентация, доклад основните характеристики на философията на Ренесанса
	Художествен стил
	Децата на земята Презентация ние сме децата на земята за градината
	Презентация по темата за бариерите в комуникацията, работата беше извършена от ученици. Без комуникация ние се затваряме в себе си.

2023 "kingad.ru" - ултразвуково изследване на човешки органи

Бактериологично изследване при дизентерия. Лабораторна диагностика на дизентерия, амебиаза и балантидиаза

Етапи

Оборудване