Фалшиво отрицателен тест - индиректен тест на Кумбс. Тест на Кумбс: директен и индиректен

– антиглобулинов тест, насочен към идентифициране в Rh-отрицателна кръв на непълни антиеритроцитни антитела към Rh фактора - специфичен протеин, който се намира на повърхността на еритроцитите на Rh-положителна кръв. Има два вида този тест: директно – откриване на антитела на повърхността на червените кръвни клетки, индиректно – откриване на антитела в кръвния серум. Директно изследване се извършва при диагностика и проследяване на лечението на заболявания на кръвта: хемолитична анемия, хемолитична болестновородени и други. Провежда се индиректен тест за оценка на съвместимостта на кръвта на донора и реципиента по време на трансфузия, както и за определяне на наличието и риска от Rh конфликт при планиране и водене на бременност. Материалът за теста на Кумбс е деоксигенирана кръв, изследването се провежда с помощта на методи, базирани на реакцията на аглутинация. Обикновено и двата теста дават отрицателен резултат. Анализът се извършва в рамките на един ден. Общо в Москва са намерени 87 адреса, където може да се направи този анализ.

– антиглобулинов тест, насочен към идентифициране в Rh-отрицателна кръв на непълни антиеритроцитни антитела към Rh фактора - специфичен протеин, който се намира на повърхността на еритроцитите на Rh-положителна кръв. Има два вида този тест: директно - откриване на антитела на повърхността на червените кръвни клетки, индиректно - откриване на антитела в кръвния серум. Директно изследване се провежда при диагностика и проследяване на лечението на заболявания на кръвта: хемолитична анемия, хемолитична болест на новородени и др. Провежда се индиректен тест за оценка на съвместимостта на кръвта на донора и реципиента по време на трансфузия, както и за определяне на наличието и риска от Rh конфликт при планиране и водене на бременност. Материалът за теста на Coombs е венозна кръв, изследването се извършва с помощта на методи, базирани на реакцията на аглутинация. Обикновено и двата теста дават отрицателен резултат. Анализът се извършва в рамките на един ден.

Тест на Кумбс – клинично изпитване Rh-отрицателна кръв, насочена към откриване на антитела срещу Rh фактора. Тестът се използва за идентифициране на риска от развитие на Rh конфликт и хемолитични реакции. Във всеки човек повърхността на червените кръвни клетки съдържа определен набор от антигени или аглутиногени - съединения от различен характер, по наличието или отсъствието на коя кръвна група и Rh фактор се съди. Има много видове антигени, включително медицинска практиканай велик практическо значениеимат аглутиногени А и В, които определят кръвната група и аглутиноген D, който определя Rh фактора. При положителен Rh фактор D антигените се откриват по външната мембрана на еритроцитите, но не и ако са отрицателни.

Тестът на Coombs, наричан още антиглобулинов тест, е насочен към откриване на непълни антиеритроцитни антитела към Rh факторната система в кръвта. Антитела срещу Rh фактора - специфични имуноглобулини, които се произвеждат в Rh-отрицателна кръв, когато в нея попаднат еритроцити с аглутиногени D. Това може да се случи при смесване на кръвта на плода и бременната жена, по време на кръвопреливания, извършени без предварително определяне на кръвната група. Тестът на Кумбс съществува в два варианта - директен и индиректен. При извършване на директен тест на Coombs се откриват антитела, прикрепени към повърхността на червените кръвни клетки. Изследването се използва за определяне на причината за хемолитичната реакция. Индиректният тест на Coombs е насочен към откриване на антиеритроцитни антитела в кръвната плазма. Необходимо е да се определи съвместимостта на кръвта между донора и реципиента или майката и плода и помага да се предотврати развитието на Rh конфликт и последващата хемолиза на червените кръвни клетки.

Кръвта и за двете версии на теста на Кумбс се взема от вената. Анализът се извършва чрез аглутинация с антиглобулинов серум. Резултатите от изследването се използват в хематологията за идентифициране на причините за хемолитичните реакции, в хирургията и реанимацията при извършване на кръвопреливания, в акушерството и гинекологията при проследяване на бременност при жени с Rh-отрицателна кръв.

Показания

Директният тест на Coombs, който открива антитела, прикрепени към повърхността на червените кръвни клетки, се предписва за хемолитични реакции (разрушаване на червени кръвни клетки) от различен произход. Изследването е показано при първична автоимунна хемолитична анемия, посттрансфузионна хемолитична анемия, хемолитична болест на новороденото, хемолиза на еритроцитите, причинена от автоимунни, туморни или инфекциозни заболявания, както и прием на лекарства, например хинидин, метилдопа, прокаинамид. Индиректният тест на Coombs, който определя антителата в кръвната плазма, се използва за предотвратяване на развитието на Rh конфликт. Показан е за пациенти в подготовка за кръвопреливане, както и за бременни жени с отрицателен Rh факторпри условие че бъдещ бащадетето има положителен Rh фактор.

За да се определи Rh съвместимостта, тестът на Coombs не се предписва на пациенти с Rh-положителна кръв. В тези случаи на повърхността на червените кръвни клетки вече има антигени, производството на антитела не може да бъде провокирано от кръвопреливане или навлизане на фетална кръв в кръвния поток на бременната жена. Също така, изследването не е показано за бременни жени, ако и двамата родители имат отрицателен Rh фактор - наследствена рецесивна черта. Дете в такива двойки винаги има Rh отрицателна кръв, имунологичен конфликт с майката е невъзможен. При хемолитични патологииАнтиглобулиновият тест не се използва за проследяване на успеха на терапията, тъй като резултатите не отразяват активността на процеса на разрушаване на червените кръвни клетки.

Ограничение на теста на Кумбс е сложността на изследователската процедура – ​​да се получи надеждни резултатинеобходимо е да се спазват температурните и времеви условия, правилата за приготвяне на реактиви и биоматериали. Предимствата на теста на Coombs включват неговата висока чувствителност. При хемолитична анемия резултатите от този тест остават положителни, дори ако нивата на хемоглобина, билирубина и ретикулоцитите са нормализирани.

Подготовка за анализ и събиране на материал

Материалът, използван за извършване на теста на Coombs, е венозна кръв. Специални изискванияНяма време за процедурата по вземане на кръв и за подготовка на пациента. Както при всяко изследване, препоръчително е да правите почивка след хранене поне 4 часа и да спрете да пушите през последните 30 минути. физическа дейност, да се избегне емоционален стрес. Също така си струва предварително да обсъдите с Вашия лекар необходимостта от спиране на приема на лекарства - някои лекарства могат да изкривят резултатите от теста на Coombs. Кръвта се взема със спринцовка от улнарна вена, по-рядко от вена на задна страначетки В рамките на няколко часа материалът се доставя в лабораторията.

При извършване на директен тест на Coombs към кръвния серум на пациента се добавя антиглобулинов серум. След известно време сместа се изследва за наличие на аглутинати - те се образуват, ако има антитела върху червените кръвни клетки. При положителен резултат се определя аглутиниращият титър. Индиректният тест на Кумбс се състои от Повече ▼етапи. Първо, антителата, присъстващи в серума, се фиксират върху инжектираните червени кръвни клетки по време на инкубацията. След това към пробата се добавя антиглобулинов серум, след известно време се определя наличието и титъра на аглутинатите. Срокът за анализ е 1 ден.

Нормални резултати

Обикновено резултатът от директния тест на Coombs е отрицателен (-). Това означава, че в кръвта няма антитела, свързани с червените кръвни клетки, и те не могат да причинят хемолиза. Нормален резултатИндиректният тест на Coombs също е отрицателен (-), т.е. в кръвната плазма няма антитела срещу Rh фактора. При подготовката за кръвопреливане за реципиента това означава съвместимост с кръвта на донора; при наблюдение на бременността това означава липса на Rh сенсибилизация на майката, нисък риск от развитие на имунологичен конфликт. Физиологични фактори, като диетични навици или физическа дейност, не може да повлияе на резултата от теста. Ето защо, ако резултатът е положителен, е необходима консултация с лекар.

Диагностична стойност на анализа

Положителният резултат от теста на Coombs се изразява качествено от (+) до (++++) или количествено чрез титри от 1:16 до 1:256. Определянето на концентрацията на антитела върху червените кръвни клетки и в кръвния серум се извършва и в двата вида проби. Ако директният тест на Coombs е положителен, се откриват антитела върху външната мембрана на червените кръвни клетки, което води до разрушаването на тези кръвни клетки. Причината може да бъде кръвопреливане без предварително типизиране - посттрансфузионна хемолитична реакция, както и еритробластоза на новородено, хемолитична реакция поради употреба на лекарства, първична или вторична автоимунна хемолитична анемия. Вторичното разрушаване на червените кръвни клетки може да бъде причинено от системен лупус еритематозус, синдром на Evans, макроглобулинемия на Waldenström, пароксизмална студена хемоглобинурия, хронична лимфоцитна левкемия, лимфом, инфекциозна мононуклеоза, сифилис, микоплазмена пневмония.

Положителният резултат от индиректния тест на Coombs показва наличието на антитела срещу Rh фактора в плазмата. На практика това означава, че е настъпила Rh сенсибилизация и има възможност за развитие на Rh конфликт след вливане на донорска кръв по време на бременност. За да се предотвратят усложнения при бременност, жените с положителен резултат от теста на Coombs се поставят в специален регистър.

Лечение на аномалии

Тестът на Coombs се отнася до изосерологични изследвания. Резултатите от него позволяват да се идентифицира хемолитична реакция, както и да се определи съвместимостта на кръвта на донора и реципиента, майката и плода, за да се предотврати развитието на Rh конфликт. Ако резултатът от теста е положителен, трябва да потърсите съвет от вашия лекуващ лекар - акушер-гинеколог, хематолог, хирург.

Антитела, разположени на повърхността на еритроцитите, могат да бъдат както в статично, така и в свободно състояние кръвна плазма. В зависимост от състоянието на антителата се извършва директна или индиректна реакция на Кумбс. Ако има причина да се смята, че антителата са фиксирани на повърхността на червените кръвни клетки, се извършва директен тест на Coombs. В този случай тестът протича на един етап - добавяне антиглобулинов серум. Ако на повърхността на червените кръвни клетки има непълни антитела, аглутинациячервени кръвни телца

Непряка реакция

Индиректната реакция на Кумбс протича на 2 етапа. Първо трябва да внедрите изкуствено сенсибилизациячервени кръвни телца За да направите това, червените кръвни клетки и кръвният серум, които се тестват, се инкубират, което кара антителата да се фиксират върху повърхността на червените кръвни клетки. След това се извършва вторият етап от теста на Coombs - добавяне на антиглобулинов серум.

Реакция на утаяване - RP (от лат. praecipilo утаявам) е образуването и утаяването на комплекс от разтворим молекулярен антиген с антитела под формата на облаци, т.нар. утайка. Образува се чрез смесване на антигени и антитела в еквивалентни количества; излишъкът на едно от тях намалява нивото на образуване на имунния комплекс. Реакцията на утаяване се провежда в епруветки (реакция на пръстеновидно утаяване), в гелове, хранителни среди и др. Разновидности на реакцията на утаяване в полутечен агар или агарозен гел, двойна имунодифузия чрез Ouchterlony, лъчева имунодифузия, имуноепектрофорезаи т.н.

Реакция на пръстеновидно утаяване. Реакцията се провежда в тесни епруветки за утаяване: върху имунния серум се наслоява разтворим антиген. При оптимално съотношение на антиген и антитела, на границата на тези два разтвора се образува непрозрачен слой. утайка пръстен. Ако като антигени в реакцията се използват сварени и филтрирани тъканни екстракти, тогава тази реакция се нарича първа реакция на термопреципитация (реакцията, при която се открива антраксният хаптен).
Реакция на двойна имунодифузия на Ouchterlony. За да настроите реакцията, разтопете агар гел тънък слойизлива се върху стъклена чиния и след втвърдяване се изрязват дупки в нея. Антигените и имунните серуми се поставят отделно в ямките на гела, които дифундират една към друга. На мястото на срещата, в еквивалентни пропорции, те образуват утайка под формата на бяла ивица. В многокомпонентни системи се появяват няколко линии от утайка между ямките с антигени и антитела; в идентични AG линиите на утайката се сливат; в неидентични АГ те се пресичат.
Реакция на радиална имунодифузия.Имунен серум с разтопен агар гел се излива равномерно върху стъклото. След втвърдяване в гела се правят ямки, в които се поставя антигенът в различни разреждания. Антигенът, дифундиращ в гела, образува пръстеновидни зони на утаяване около ямките с антитела. Диаметърът на преципитационния пръстен е пропорционален на концентрацията на антигена. Реакцията се използва за определяне на имуноглобулини от различни класове, компоненти на системата на комплемента и др. В кръвния серум.
Имуноелектрофореза- комбинация от метода на електрофореза и имунопреципитация: смес от антигени се въвежда в ямките на гела и се разделя в гела с помощта на електрофореза, след което се добавя имуносерум в жлеба, успореден на зоните на електрофореза, антителата от които дифундират в гела и образуват преципитационни линии на мястото на "среща" с антигена.
Реакция на флокулация(според Рамон) (от латински f1oecus - вълнени люспи) - появата на опалесценция или флокулентна маса (имунопреципитация) в епруветка по време на реакцията токсин - антитоксин или токсоид - антитоксин. Използва се за определяне на активността на антитоксичен серум или токсоид.

HLA типизиране- изследване на човешкия основен комплекс за хистосъвместимост - HLA комплекс. Тази формация включва област от гени на хромозома 6, които кодират HLA антигени, участващи в различни имунни отговори.

Задачи за HLA типизиранемогат да бъдат много различни - биологична идентификация (HLA типът се наследява заедно с родителските гени), определяне на предразположението към различни заболявания, избор на донори за трансплантация на органи - това включва сравняване на резултатите от HLA типизирането на тъканите на донора и реципиента. С помощта на HLA типизиране се определя колко сходни или различни са съпрузите по отношение на антигени на хистосъвместимост, за да се диагностицират случаи на безплодие.

HLA типизиране предполага Анализ на HLA полиморфизъми се осъществява по два метода - серологичен и молекулярно-генетичен. Класическият серологичен метод за HLA типизиране се основава на микролимфоцитотоксичен тест, а молекулярният метод използва PCR (полимеразна верижна реакция).

Серологични HLA типизиранепроведено върху изолирани клетъчни популации. Антигените на основния комплекс на хистосъвместимост се пренасят главно от лимфоцити. Следователно суспензия от Т-лимфоцити се използва като основни носители на антигени от клас I и суспензия от В-лимфоцити за определяне на HLA антигени от клас II. За изолиране на необходимите клетъчни популации от цяла кръв се използва центрофугиране или имуномагнитно разделяне. Смята се, че първият метод може да доведе до фалшиво положителни данни, тъй като това води до смъртта на някои клетки. Вторият метод е признат за по-специфичен - повече от 95% от клетките остават жизнеспособни.

Но основата за извършване на лимфоцитотоксичен тест HLA типизиранее специфичен серум, съдържащ антитела срещу различни алелни варианти на HLA клас I и II антигени. Серологичният тест може да определи типа HLA чрез изследване кои серуми реагират с лимфоцитите и кои не.

Ако възникне реакция между клетките и серума, резултатът е образуването на комплекс антиген-антитяло на повърхността на клетката. След добавяне на разтвор, съдържащ комплемент, настъпва клетъчен лизис и смърт. Серологичният HLA типизиращ тест се оценява с помощта на флуоресцентна микроскопия за оценка на положителните (червена флуоресценция) и отрицателните (зелена флуоресценция) реакции или фазово-контрастна микроскопия за оценка на ядреното оцветяване мъртви клетки. Резултатът от HLA типизирането се извлича, като се вземат предвид спецификата на реагиралите серуми и кръстосано реагиращите групи от антигени, както и интензивността на реакцията на цитотоксичност.

Недостатъци на серологичните HLA типизиранеса наличие на кръстосани реакции, слаб афинитет на антитела или ниска експресия на HLA антигени, липса на протеинови продукти в редица HLA гени.

По-модерни, молекулярни методи HLA типизиранете използват вече стандартизирани синтетични проби, които реагират не с антигени на повърхността на левкоцитите, а с ДНК и директно показват кои антигени присъстват в пробата. Молекулярните методи не изискват живи бели кръвни клетки, всяка човешка клетка може да бъде изследвана и няколко микролитра кръв са достатъчни, за да работят, или можете да се ограничите до изстъргване от устната лигавица.

Молекулярна генетика HLA типизиранеизползва PCR метода, чиято първа стъпка е получаването на чиста геномна ДНК (от цяла кръв, левкоцитна суспензия, тъкани).

След това ДНК пробата се копира - амплифицира in vitro с помощта на праймери (къса едноверижна ДНК), специфични за специфичен HLA локус. Краищата на всяка двойка праймери трябва да са стриктно комплементарни на уникалната последователност, съответстваща на специфичен алел, в противен случай няма да настъпи амплификация.

След PCR, при многократно копиране, се оказва голям бройДНК фрагменти, които могат да бъдат оценени визуално. За целта реакционните смеси се подлагат на електролиза или хибридизация и дали е настъпило специфично усилване се определя с помощта на програма или таблица. Резултатът от HLA типизирането се представя под формата на изчерпателен доклад на генно и алелно ниво. Поради стандартизацията на използваните проби, молекулярни HLA типизиранепо-точно серологично. Освен това предоставя повече информация (повече нови ДНК алели) и др високо нивонеговото детайлизиране, тъй като дава възможност да се идентифицират не само антигени, но и самите алели, които определят кой антиген присъства в клетката.

Реакция на имунен лизис.Реакцията се основава на способността на специфични антитела да образуват имунни комплекси с клетки, включително еритроцити и бактерии, което води до активиране на системата на комплемента по класическия път и клетъчен лизис. От реакциите на имунния лизис най-често се използва реакцията на хемолиза и рядко се използва реакцията на бактериолиза (главно при диференциацията на холера и холероподобни вибриони).

Реакция на хемолиза.Под въздействието на реакция с антитела в присъствието на комплемент, мътна суспензия от червени кръвни клетки се превръща в яркочервена бистра течност- "лакова кръв" поради освобождаването на хемоглобин. При установяване на диагностична реакция на фиксиране на комплемента (FFR), реакцията на хемолиза се използва като индикатор: за тестване на наличието или отсъствието (фиксация) на свободен комплемент.

Локална реакция на хемолиза в гела(реакция на Erne) е един от вариантите на реакцията на хемолиза. Тя ви позволява да определите броя на клетките, образуващи антитела. Броят на клетките, секретиращи антитела - хемолизини - се определя от броя на хемолизните плаки, които се появяват в агар гел, съдържащ еритроцити, суспензия от клетки на изследваната лимфоидна тъкан и комплемент.

Имунофлуоресцентен метод

(RIF, имунофлуоресцентна реакция) е метод за откриване на специфични антитела (Ags), използващи антитела (Ags), конюгирани с флуорохром. Има висока чувствителност и специфичност. Използва се за експресна диагностика на инфекции. заболявания (идентифициране на патогена в изследователския материал), както и за определяне на Ab и повърхностни рецептори и маркери на левкоцити (иммунофенотипиране) и други клетки. Директен I. m.се състои от обработка на участък от тъкан или цитонамазка от патологичен материал или микробна кора, съдържаща специфични Abs, конюгирани с флуорохром; препаратът се промива, за да се освободи от несвързани Abs и се изследва под флуоресцентен микроскоп. В положителни случаи светеща светлина се появява около периферията на обекта. имунен комплекс. Необходим е контрол, за да се изключи неспецифичната луминесценция. При непряк. тях.на първия етап тъканна секция или намазка се третира с нефлуоресцентно специфично средство, на втория - с луминесцентно средство срещу -глобулини на животното, което е използвано на първия етап. В положителния случай се образува светещ комплекс, състоящ се от Ar, At към него и At срещу At (сандвич метод). В допълнение към флуоресцентния микроскоп, RIF се взема предвид при фенотипизиране на клетки. лазерен сортировач на клетки .

Поточна цитометрия- метод за оптично измерване на параметрите на клетката, нейните органели и процесите, протичащи в нея.

Техниката включва откриване на разсейването на светлината от лазерен лъч, когато клетката преминава през него в поток от течност, а степента на дисперсия на светлината позволява да се получи представа за размера и структурата на клетката. В допълнение, анализът взема предвид нивото на флуоресценция на химически съединения, които са част от клетката (автофлуоресценция) или са добавени към пробата преди поточна цитометрия.

Клетъчната суспензия, предварително белязана с флуоресцентни моноклонални антитела или флуоресцентни багрила, навлиза в потока течност, преминаващ през поточната клетка. Условията са подбрани така, че клетките да се нареждат една след друга поради т.нар. хидродинамично фокусиране на струята в струята. В момента, в който клетка пресече лазерния лъч, детекторите записват:

разсейване на светлината под малки ъгли (от 1° до 10°) ( тази характеристикаизползвани за определяне на размера на клетката).

разсейване на светлината под ъгъл от 90° (позволява ни да преценим съотношението ядро/цитоплазма, както и хетерогенността и грануларността на клетките).

интензитет на флуоресценция през няколко флуоресцентни канала (от 2 до 18-20) - ви позволява да определите субпопулационния състав на клетъчната суспензия и др.

Нанесете 1 голяма капка серум O(I), A(II), B(III) върху плака или предметно стъкло с помощта на пипети (различни!). След като отбележите времето, използвайте чиста стъклена пръчка или чист ъгъл на предметно стъкло, за да комбинирате капки серум с капки кръв. Определянето продължава 5 минути, разклаща се плаката, след което се добавя 1 капка физиологичен разтвор към всяка смес от капки и се оценяват резултатите. По-добре е серумът да се предлага в 2 различни серии. Резултатите от кръвната група трябва да съвпадат и в двете серумни партиди.

Оценка на резултатите от изохемаглутинацията:

изохемаглутинация. Ако реакцията е положителна, в сместа се появяват малки червени зърна от адхезивни червени кръвни клетки. Зърната се сливат в по-едри зърна, а последните в люспи. Серумът е почти обезцветен;

ако реакцията е отрицателна, сместа остава равномерно оцветена за 5 минути розов цвяти не се намират зърна;

При работа с 3 серума от групи O(I), A(II), B(III) са възможни 4 комбинации от реакции:

1. ако всичките 3 серума са дали отрицателна реакция, т.е. сместа е равномерно оцветена в розово - това е O (I) кръвна група;

   ако само серумът от група A (II) даде отрицателна реакция, а серумите O (I) и B (III) дадоха положителна реакция, т.е. се появиха зърна - това е кръвна група A (II);

   серумът от група B(II) даде отрицателна реакция, а серумите от група O(I) и A(II) дадоха положителна реакция - това е B(III) кръвна група.

всичките 3 серума дадоха положителни реакции - изследваната кръв беше AB(IV) група. В този случай се провежда изследване със серум от група AB(IV).

Забележка!Капките от изследваната кръв трябва да са 5-10 пъти по-малки от капките серум.

Изохемаглутинационни грешки.

Неизвършване на аглутинация там, където трябва и наличие на аглутинация там, където не трябва. Това може да се дължи на слаб серумен титър плюс лоша аглутинация на червените кръвни клетки.

Наличие на аглутинация там, където не трябва да има- Това е псевдоаглутинация, когато купчини червени кръвни клетки образуват "монетни колони". Разклащането на чинията или добавянето на физиологичен разтвор ги унищожава.

Панаглутинация, когато серумът слепва всички червени кръвни клетки, включително тези от собствената си кръвна група. До 5-та минута признаците на аглутинация изчезват.

Съществува и така наречената студена панаглутинация, когато червените кръвни клетки се слепват поради ниска температура на въздуха (под 15 ° C) в помещението.

Във всички тези случаи се провежда или повторна реакция, или се използват стандартни червени кръвни клетки.

Определяне на Rh кръв

За определяне на Rh статуса, т.е. за откриване на наличието или отсъствието на антигени на Rh система в кръвта на хората, се използват стандартни анти-Rh серуми (реагенти), различни по специфичност, т.е. съдържащи антитела към различни антигени на тази система. За определяне на Rh 0 (D) антиген най-често се използва анти-резус серум с добавяне на 10% разтвор на желатин или се използва стандартен анти-резус реагент, приготвен предварително с 33% разтвор на полиглюкин. За получаване на по-точни резултати от изследването, както и за идентифициране на антигени на други серологични системи, се използва тестът на Coombs (той също е много чувствителен при определяне на съвместимостта на прелятата кръв). За изследване се използва нативна кръв или кръв, приготвена с някакъв консервант. В този случай кръвта трябва да се измие от консерванта с десетократен обем изотоничен разтвор на натриев хлорид. При определяне на Rh статус- Rh 0 (D) трябва да се използват две проби от серум или анти-резус реагент от две различни серии и в същото време стандартни червени кръвни клетки, получени от кръв от Rh-положителен (Rh +) и Rh-отрицателен (Rh -) лицата трябва да се използват за контрол. Когато се определят други изоантигени, трябва да се използват съответно контролни червени кръвни клетки, които съдържат или липсват антигена, срещу който са насочени антителата в стандартния серум.

Частичните топлинни аглутинини са най-често срещаният тип антитела, които могат да причинят развитието на автоимунна хемолитична анемия. Тези антитела принадлежат към IgG, рядко към IgM, IgA.

ТЕСТ НА КУМБС

Тест на Кумбс: въведение.Тестът на Coombs е лабораторен диагностичен метод, базиран на реакцията на хемаглутинация.

Основният метод за диагностициране на автоимунна хемолитична анемия е тестът на Coombs. Основава се на способността на антитела, специфични за имуноглобулини (особено IgG) или компоненти на комплемента (особено S3) да аглутинират еритроцити, покрити с IgG или S3.

Свързването на IgG и C3b с еритроцитите се наблюдава при автоимунна хемолитична анемия и лекарствено индуцирана имунна хемолитична анемия. Директен тест на Кумбс.Директният тест на Coombs се използва за откриване на антитела или компоненти на комплемента, фиксирани върху повърхността на червените кръвни клетки. Извършва се както следва:

За да се получат антитела срещу човешки имуноглобулини (антиглобулинов серум) или комплемент (антикомплементарен серум), животното се имунизира с човешки серум, имуноглобулини или човешки комплемент. Полученият от животното серум се пречиства от антитела към други протеини.

Червените кръвни клетки на пациента се промиват с физиологичен разтвор, за да се отстрани напълно серумът, който неутрализира антителата срещу имуноглобулините и комплемента и може да причини фалшиво отрицателен резултат.

Ако антитела или компоненти на комплемента са фиксирани върху повърхността на червените кръвни клетки, добавянето на антиглобулин или антикомплементен серум причинява аглутинация на червените кръвни клетки.

Директният тест на Coombs се използва в следните случаи:

Автоимунна хемолиза.

Хемолитична болест на новородени.

Лекарствено индуцирана имунна хемолитична анемия.

Реакции на хемолитична трансфузия. Индиректен тест на Кумбс.Индиректният тест на Coombs открива антитела срещу червени кръвни клетки в серума. За да направите това, серумът на пациента се инкубира с червени кръвни клетки от донор от група 0 и след това се извършва директен тест на Coombs.

Индиректният тест на Coombs се използва в следните случаи:

Определяне на индивидуалната съвместимост на кръвта на донора и реципиента.

Откриване на алоантитела, включително антитела, които причиняват хемолитични трансфузионни реакции.

Определяне на повърхностни еритроцитни антигени в медицинска генетикаи съдебна медицина.

Потвърждаване на еднояйчни близнаци по време на трансплантация на костен мозък.

За провеждане на биологичен тест кръвта започва да се прелива възможно най-бързо (за предпочитане в поток). След преливане на 25 ml кръв, системната тръба се затяга със скоба. След това се прави пауза от 3 минути, през която се следи състоянието на реципиента. За извършване на биологичен тест се инжектират 25 ml кръв три пъти.В края на теста (след преливане на първите 75 ml кръв в частични дози от 25 ml на интервали от 3 минути) системата се настройва на необходимата скоросткръвопреливане. При преливане на повече от една бутилка кръв на пациент е необходимо иглата да се извади от вената. В този случай иглата се изважда от епруветката на флакона, в който е изтекла кръвта, и се поставя в следващия флакон. В този момент системната тръба (гумена или пластмасова) се затяга със скоба. Ако по време на кръвопреливане се наложи интравенозно приложение на друго лекарство на реципиента, това става чрез пробиване на гумената тръба на системата. Пробивите на пластмасовата тръба са неприемливи, тъй като те не падат. След всяко кръвопреливане пациентът трябва да бъде наблюдаван за идентифициране и своевременно елиминиране възможни усложнения, включително алергични реакции. 2 часа след края на кръвопреливането трябва да се измери телесната температура. Ако се увеличи, измерването трябва да се повтаря на всеки час през следващите 4 часа. Също толкова важно е наблюдението на уринирането и състава на урината, което позволява да се установи наличието на токсична реакция след трансфузия. Появата на олигурия и анурия след кръвопреливане, наличието на кръвни клетки и протеин в урината са пряка индикация за развитието на посттрансфузионна хемолиза.

Тест на Кумбс– анализ за откриване на антитела, прикрепени към повърхност или разтворени в плазма. Използва се за откриване на имунизация и антитела към червените кръвни клетки. Второ заглавие антиглобулинов тест. Тя може да бъде пряка или косвена.

При директен антиглобулинов тестоткрива антитела, фиксирани на повърхността на червените кръвни клетки. Провежда се при съмнение, други автоимунни заболявания, след прием на лекарства (метилдопа, пеницилин, хинин) и др.

Червените кръвни клетки са сенсибилизирани in vivo - антителата вече са здраво прикрепени към тях и добавянето на антиглобулинов серум (anti-IgG) кара сенсибилизираните клетки да се слепват, което се вижда с просто око.

Индиректен тест на Кумбсоткрива антиеритроцитни антитела в кръвната плазма, извършва се преди и по време на кръвопреливане.

Антиеритроцитните антитела са вид автоантитела, т.е. антитела срещу вашите собствени тъкани. Автоантитела възникват по време на патологична реактивност имунна системаза някои лекарства, например високи дозипеницилин.

Червените кръвни клетки на повърхността си съдържат различни химични структури(гликолипиди, захариди, гликопротеини и протеини), в медицината наричани антигени. Човек наследява от родителите си специфична карта на антигените на всяка червена кръвна клетка.

Антигените се обединяват в групи и след това кръвта се разделя на няколко групи - по системата AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Най-известните и значими в работата на лекаря са AB0 и Rh факторът (Rh).

система АВ0

Rh статусът на дадено лице се определя от наличието на тези антигени. Особено важен антиген на еритроцитите е антиген D. Ако той присъства, тогава те говорят за Rh положителна кръв RhD, а ако го няма – о Rh отрицателен Rhd.

Ако съответното антитяло се прикрепи към еритроцитните антигени, еритроцитите се разрушават - хемолиза.

Показания

Основната индикация за директенантиглобулинов тест- подозрение за хемолитична анемия. Най-често се извършва при първична автоимунна хемолитична анемия, хемолиза при ревматични, туморни, инфекциозни заболявания, лекарствено индуцирана хемолиза.

Ако анемията се появи няколко дни или месеци след кръвопреливане или по време на дългосрочна жълтеницаНа новороденото се прави и директен тест на Кумбс.

Непрякпровежда се антиглобулинов тестпреди кръвопреливане и по време на бременност на Rh-отрицателна жена.

Автоимунна хемолитична анемия

Автоимунна хемолитична анемия (първична)– класическо автоимунно заболяване с неизвестни причини. Взаимодействието в рамките на имунната система е нарушено, което води до възприемане на собствените червени кръвни клетки като чужди. В лимфните възли се синтезират антитела от клас IgG (реагират при t 37°C) и/или IgM (при t 40°C), които, прикрепени към повърхността на еритроцита, задействат редица ензими (т.е. система на комплемента) и „перфорират“ стената на еритроцита, което води до неговото разрушаване – хемолиза.

Първите симптоми са причинени както от разрушаването на червените кръвни клетки, така и от намаляването на хемоглобина. Между тях:

• умора, обща слабост, раздразнителност
• диспнея
• болка в корема и гърдите, гадене
• тъмен цвят на урината
• болка в гърба
• иктерично обезцветяване на кожата и лигавиците
• намаляване на броя на червените кръвни клетки и

Директен положителен резултат Тестове на Кумбс 100% потвърждава диагнозата автоимунна хемолитична анемия, доказвайки нейния автоимунен произход. В същото време отрицателният резултат не прави възможно премахването на диагнозата.

Вторична хемолитична анемия

Вторична автоимунна хемолитична анемия и положителен тест на Coombs могат да възникнат при следните заболявания:

• Синдром на Евънс
• инфекция на пневмония

Положителният антиглобулинов тест за тези заболявания е един от симптомите, а не критерий за диагноза.

Хемолитична болест на новороденото

причина хемолитична болест на новородени -несъвместимост на кръвната група на майката и плода, в повечето случаи според системата Rh, в единични случаи - според системата AB0, казуистично - според други антигени.

Rh конфликтът се развива, ако плодът на Rh-отрицателна жена наследи Rh-положителна кръв от бащата.

Заболяването се развива при новородено само ако майката вече е развила антитела към съответните антигени, което се случва след предишни бременности, аборти, кръвопреливане несъвместима кръв. Най-честата причина за задействане на синтеза на антитела срещу антигени на еритроцитната мембрана е раждането (фето-майчино кървене). Първото раждане обикновено протича без усложнения, но следващите са изпълнени с хемолитична болест на новороденото в първите дни след раждането.

Симптоми на хемолитична болест на новороденото:

• пожълтяване на кожата
• , и лигавиците
• увеличен черен дроб и далак
• проблеми с дишането
• подуване на цялото тяло
• възбуждане и постепенно потискане на централната нервна система

Анемия след кръвопреливане

Индиректен тест на Кумбсизвършва се преди кръвопреливане за оценка на съвместимостта и директен тест на Coombs - след него, ако се подозира посттрансфузионна хемолиза, т.е. при наличие на симптоми като треска, поливане (прочетете по-долу). Целта на анализа е да се идентифицират антитела към трансфузирани червени кръвни клетки, които са се свързали с червените кръвни клетки на реципиента и са причина за посттрансфузионна хемолиза, както и преждевременно отстраняване на донорни червени кръвни клетки от кръвообращението на реципиента (този, който е получил кръвта).

Симптоми:

• повишаване на телесната температура
• кожен обрив
• болка в гърба
• червен
• гадене
• световъртеж

Декодиране

Струва си да припомним, че основните правила за дешифриране на директни и индиректни антиглобулинови тестове са еднакви. Единствената разлика е местоположението на антителата – в кръвта или върху червените кръвни клетки.

• Ако директният тест на Coombs е отрицателен– това означава, че антитялото не „седи“ върху червените кръвни клетки и трябва да се търси допълнително причината за симптомите и да се направи индиректен тест на Кумбс
• Ако положителен резултатТест на Coombs, открит след кръвопреливане, инфекции, лекарства - положителността продължава до 3 месеца (живот на червените кръвни клетки 120 дни - 3 месеца)
• положителен резултат от антиглобулинов тест с автоимунно заболяванепродължава месеци и дори години

норма

• директен тест на Coombs - отрицателен
• индиректен тест на Кумбс - отрицателен

Качествено положителният резултат се измерва в броя на плюсовете от едно до четири (+, ++, +++, ++++), а количествено в цифров вид - 1:16, 1:256 и т.н.

да Вашият лекар определено трябва да знае, че сте получили кръвопреливане, тъй като това влияе върху правилното тълкуване на резултатите от теста сега. При получаване на чужда (макар и многократно изследвана) кръв винаги има възможност тялото ви да развие антитела срещу прелятата кръв. Именно тези антитела ще осигурят лошо влияниевърху здравословното състояние. При последващи кръвопреливания лекарят трябва да знае, че вече сте получили кръвопреливания, което означава, че е имало време за синтез на антитела. За бременните жени тази информация е още по-актуална.

3. Ако има несъответствие в Rh фактора между майката и детето, всички деца ще бъдат ли болни?

Зависи от това дали детето е Rh положителен или отрицателен (RhD). Носителите на кръвни групи I, II, III и IV могат да бъдат Rh положителни или отрицателни. В ситуация, когато майката е Rh отрицателна, а детето е Rh положително, антителата ще бъдат произведени още с първата бременност, но едва след първото раждане (или прекъсване на бременността) ще има пряк контакт между кръвта на майката и детето. Хемолитичният ефект на антителата ще се реализира само по време на второто и следващо раждане, което ще доведе до хемолитична болест на новороденото.

Всяка жена с отрицателен Rh фактор трябва да бъде внимателно изследвана по време на бременност и след раждане превантивно лечениеза предотвратяване на появата на антитела и допълнителни усложнения.

4. По време на бременност, необходимо ли е да знам кръвната група на съпруга ми, преди да направя тест на Кумбс?

Трябва не само да знаете, но и да проверите кръвната група на биологичния баща на детето по време на бременност.

Данни

• предложен за първи път в Кеймбридж през 1945 г
• праг на чувствителност - най-малко 300 фиксирани молекули антитела върху една червена кръвна клетка
• броят на антителата, предизвикващи хемолиза - индивидуално за всеки човек (от 16-30 до 300)
• динамиката на други лабораторни показатели на хемолитична анемия (хемоглобин, билирубин, ретикулоцити) може да се нормализира и тестът на Coombs ще остане на същото ниво

Тестът на Coombs беше последно модифициран: 16 март 2018 г. от Мария Бодян

Обикновено в кръвта няма антитела срещу червените кръвни клетки.

Директният тест на Coombs е антиглобулинов тест (аглутинация в гел, който позволява откриването на пълни двувалентни антитела), който открива антитела от клас IgG и C3 компонента на комплемента на повърхността на червените кръвни клетки. Обикновено антителата, открити чрез директния тест на Coombs, имат широка специфичност, която не е свързана с добре установен антиген. Положителният директен тест на Coombs ясно показва, че пациентът има хемолитична анемия, въпреки че не всички пациенти с положителен директен антиглобулинов тест страдат от това заболяване. При приблизително 10% от пациентите антителата или компонентите на комплемента върху мембраната на червените кръвни клетки не могат да бъдат определени чрез директен тест на Coombs (тестът е отрицателен), но въпреки това те страдат от автоимунна хемолитична анемия. За изясняване на специфичността на антителата в такива случаи се използват тестове с тяхното елуиране. Директен тест на Coombs, положителен само за комплемент, обикновено се отнася до студови антитела от типа IgM. В този случай IgM антителата не присъстват върху червените кръвни клетки, когато базална температуратела. Въпреки това, поради факта, че IgM антителата активно фиксират комплемента и комплементът остава върху червените кръвни клетки, с тази форма на автоимунна хемолитична анемия (болест на студен аггутинин), тестът на Coombs ще бъде положителен само за комплемента.

Директният тест на Coombs е положителен за автоимунна хемолитична анемия, причинена от топли антитела, автоимунна лекарствена анемия (при приемане на метилдопа, до 20% от пациентите имат положителна реакция), лекарствено-адсорбционен тип хемолитична анемия, имунокомплексен тип хемолитична анемия (тестът е положителен само за С3), с автоимунна хемолитична анемия, причинена от студови антитела - студова аглутининова болест (тестът е положителен само за С3). При пароксизмална студова хемоглобинурия директният тест на Coombs е отрицателен.

Индиректен тест на Coombs - индиректен антиглобулинов тест (открива непълни антитела) ви позволява да идентифицирате атипични антитела в кръвта, включително алоантитела към чужди еритроцитни антигени. Получава името си (непряко) поради факта, че протича на 2 етапа. Първоначално кръвният серум на пациента, съдържащ непълни антитела, взаимодейства с добавения корпускуларен Ag диагностикум без видими прояви. На втория етап добавеният антиглобулинов серум взаимодейства с непълни антитела, адсорбирани върху антигени, с появата на видима утайка. Трансфузия на хомоложни (алогенни) червени кръвни клетки или бременност са най-много често срещани причиниобразуването на тези антиеритроцитни антитела. Комбинацията от положителен индиректен тест на Coombs с отрицателен директен тест не осигурява нищо за диагностицирането на автоимунна хемолитична анемия. Положителният индиректен тест на Coombs създава определени трудности при избора на кръв за трансфузия и провеждането на кръстосано изследване за съвместимост с консервирана кръв, но няма друга диагностична стойност.