Colore e trasparenza del mezzo finito. Reazione a catena dell'uranio e reazione a catena delle sensazioni

119. Reazioni di Pandi e Nonne - Apelt

Come reagente per l'effettuazione della reazione Pandi viene utilizzato un liquido trasparente surnatante, che si ottiene agitando vigorosamente 100 g di acido fenico liquido con 1000 ml di acqua distillata. Per ottenere sedimenti e liquido chiaro(reagente), questa miscela viene prima posta in termostato per 3-4 ore, quindi mantenuta a temperatura ambiente per 2-3 giorni.

Un vetro da orologio o un vetrino da vetrino viene posto su carta scura e vi vengono applicate 2-3 gocce del reagente, quindi 1 goccia liquido cerebrospinale. Se la goccia diventa torbida o appare una torbidità filiforme lungo la sua periferia, la reazione è considerata positiva.

Per eseguire la reazione Nonne-Apelt sono necessarie provette pulite, una soluzione satura di solfato di ammonio, acqua distillata e carta scura. Viene preparata una soluzione satura di solfato di ammonio nel seguente modo: in un pallone da 1000 ml si mettono 0,5 g di solfato ammonico neutro chimicamente puro, si versano quindi 100 ml di acqua distillata riscaldata a 95°C, si agita fino a completa dissoluzione del sale e si lascia per alcuni giorni a temperatura ambiente. Dopo 2-3 giorni si filtra la soluzione e si determina il pH. La reazione dovrebbe essere neutra.

0,5-1 ml della soluzione risultante vengono versati in una provetta e la stessa quantità di liquido cerebrospinale viene aggiunta con cura lungo la parete della provetta. Dopo 3 minuti, valutare il risultato. La comparsa di un anello biancastro indica una reazione positiva. Quindi il contenuto della provetta viene agitato, il grado di torbidità viene determinato confrontandolo con una provetta contenente acqua distillata. I risultati della reazione vengono valutati sullo sfondo di carta nera.

120. Bordet - Reazione Zhangou

Un prezioso test diagnostico quando rilevato gonorrea cronica tra le persone affette da malattie croniche malattie infiammatorie sistema genito-urinario. Secondo la letteratura, quando uso corretto Questo metodo rileva fino all'80% dei casi di gonorrea che non sono stati rilevati con metodi batterioscopici o batteriologici.

La reazione di Bordet-Zhang può essere una traccia come risultato di una malattia precedente o dell'uso di un gonovaccino a scopo diagnostico (metodo di provocazione immunobiologica) e terapeutico (trattamento dei processi infiammatori cronici del sistema genito-urinario nelle donne secondo Baksheev) scopo. Pertanto, prima di eseguirlo, è necessario raccogliere attentamente l'anamnesi,

La reazione può anche essere falsa positiva quando viene somministrato il latte, utilizzato in scopi medicinali pirogeno.

Di conseguenza, una reazione Bordet-Giangu positiva non costituisce una prova indiscutibile della presenza infezione gonococcica, proprio come uno negativo, non può essere prova dell'assenza di gonorrea. Tuttavia risultati positivi per un lungo periodo di tempo il medico dovrebbe concentrarsi sulla ricerca della fonte dell’infezione gonococcica nel corpo.

Come antigene viene utilizzata una coltura gonococcica uccisa contenente 3-4 miliardi di corpi microbici in 1 ml. L'antigene gonococcico viene conservato con una soluzione di formaldeide e versato in fiale da 1-5 ml. Le fiale non aperte sono adatte per 6 mesi, quelle aperte possono essere conservate per 2-3 giorni in una provetta sterile in frigorifero a una temperatura di 3-5 ° C,

La reazione di fissazione del complemento di Bordet-Giangu viene eseguita in modo simile alla reazione di Wasserman (vedi n. 121). L'antigene gonococcico viene diluito con una soluzione isotonica di cloruro di sodio secondo il titolo indicato sull'etichetta della fiala. La reazione viene spesso eseguita in un volume di 2,5 ml, pertanto a 0,5 ml di siero test diluito 1:5 vengono aggiunti 0,5 ml di antigene diluito in ciascuna provetta. I restanti 1,5 ml sono 1 ml di sistema emolitico e 0,5 ml di complemento.

La reazione è considerata positiva se espressa in vari gradi ritardo dell'emolisi nel siero in esame. Nel controllo (siero sanguigno persone sane) si osserva un'emolisi completa.

121. Reazione di Wasserman

Il siero del sangue dei pazienti affetti da sifilide contiene reagine e anticorpi. Le reagine hanno la proprietà di combinarsi con l'antigene della cardiolipina. Anticorpi specifici contro Treponema pallidum si combinano con antigeni specifici. I complessi antigene-anticorpo risultanti vengono assorbiti dal complemento aggiunto alla reazione. L'indicazione viene fornita introducendo un sistema emolitico (globuli rossi di pecora + siero emolitico).

Per eseguire la reazione è necessario:

a) soluzione isotonica di cloruro di sodio;

b) antigeni treponemici ad ultrasuoni (conservati in frigorifero a +4 °C) e cardiolipina (conservati a temperatura ambiente);

c) complemento, che è siero sanguigno ottenuto dalla puntura cardiaca di 5-10 porcellini d'India sani. Può essere conservato in frigorifero per 2 mesi, fornito
inscatolamento con soluzione al 4%. acido borico e soluzione di solfato di sodio al 5%;

d) emolisina - siero emolitico di coniglio immunizzato con eritrociti di pecora a diverso titolo (conservato in frigorifero a 4 °C);

e) globuli rossi di pecora ottenuti mediante puntura vena giugulare. Il sangue viene raccolto in un barattolo sterile con palline di vetro (per la miscelazione), agitato per 15 minuti. I coaguli di fibrina vengono separati mediante filtrazione attraverso garza sterile. Il sangue defibrato può essere conservato in frigorifero per un massimo di 5 giorni.

A volte è necessaria una conservazione più lunga del sangue di pecora, e quindi viene conservato con un conservante speciale (6 g di glucosio, 4,5 g di acido borico, 100 ml di soluzione isotonica di cloruro di sodio), che viene fatto bollire a bagnomaria per 20 minuti al giorno per 3 giorni Per 100 ml di sangue di pecora defibrinato sono necessari 15 ml di conservante. Il sangue defibrato così conservato viene conservato in frigorifero.

L'esperimento principale è preceduto da diverse fasi.

Un paziente da vena ulnare prelevare 5-10 ml di sangue e processare il siero. Nei bambini, il sangue può essere prelevato dalla vena temporale o da un'incisione nel tallone. La puntura viene effettuata con strumenti sterili, una siringa e un ago.
prelavato con soluzione isotonica di cloruro di sodio.

Il sangue per la ricerca viene prelevato a stomaco vuoto; 3-4 giorni prima dello studio, al paziente è vietato consumare stupefacenti, preparati digitalici, assumere alcolici.

Lo studio non deve essere eseguito in pazienti con temperatura elevata corpo, dopo lesioni, interventi chirurgici, anestesia, recenti malattie infettive, nelle donne durante le mestruazioni, nelle donne incinte (negli ultimi 10 giorni di gravidanza), nelle donne in travaglio (nei primi 10 giorni dopo la nascita), nonché nei neonati ( nei primi 10 giorni di vita).

Il sangue risultante in una provetta sterile viene posto in un termostato ad una temperatura di 37 °C per 15-30 minuti. Il coagulo risultante viene separato dalle pareti della provetta con una bacchetta di vetro sterile e posto in frigorifero per un giorno. Il siero trasparente separato (sopra il coagulo) viene aspirato con una pipetta Pasteur utilizzando un bulbo di gomma o versato con cautela in un'altra provetta sterile e inattivato a bagnomaria per 30 minuti ad una temperatura di 56 °C. Il siero così preparato per l'esperimento può essere conservato in frigorifero fino a 5-6 giorni.

Gli antigeni vengono diluiti secondo il metodo e il titolo indicati in etichetta.

Preparare un sistema emolitico. Per fare ciò, si centrifuga sangue di pecora defibrinato o globuli rossi nella quantità necessaria per la reazione, si separa accuratamente il plasma e si lava il sedimento con 5-6 volumi di soluzione isotonica di cloruro di sodio fino a quando il liquido surnatante diventa completamente incolore. Dal sedimento si prepara una sospensione di globuli rossi al 3% in una soluzione isotonica di cloruro di sodio a triplo titolo.

Una soluzione di siero emolitico e una sospensione di eritrociti di pecora vengono miscelate rapidamente e poste in termostato per 30 minuti.

Il complemento secco viene diluito con una soluzione isotonica di cloruro di sodio in un rapporto di 1:10, siero umano normale inattivato - 1:5.

Il complemento viene titolato in 30 provette posizionate in un rack da 10 provette su 3 file. In due file viene titolato in presenza di due antigeni, nella terza con soluzione isotonica di cloruro di sodio. Cinque provette sono provette di controllo: due per i due antigeni corrispondenti e una ciascuna per il monitoraggio del complemento, del siero emolitico e della soluzione isotonica di cloruro di sodio per l'emotossicità; compilarli come segue:

Le provette vengono poste in un termostato per 45 minuti, dopodiché vengono controllate. Non dovrebbe esserci emolisi in nessuna provetta.

Il complemento con una diluizione di 1:10 viene versato in 10 provette della 1a fila del rack in dosi: 0,1, 0,16, 0,2,0,24, 0,3, 0,36,0,4,0,44, 0,5 e 0,55 ml. Aggiungere una soluzione isotonica di cloruro di sodio fino a 1 ml al contenuto di ciascuna provetta e mescolare accuratamente. 0,25 ml della miscela da ciascuna provetta vengono trasferiti nelle corrispondenti provette della 2a e 3a fila. Si agita il portaprovette con le provette, si aggiungono 0,5 ml di sistema emolitico alla 3a fila di provette, si agita nuovamente e si pone in termostato a 37°C per 45 minuti. Siero di sangue umano normale, diluito con soluzione isotonica di cloruro di sodio in un rapporto di 1:5, viene versato in tutte le 30 provette, da 0,25 ml ciascuna.

Antigene I (ultrasuoni treponemici), diluito per titolo con soluzione isotonica di cloruro di sodio, 0,25 ml vengono aggiunti a 10 provette della 1a fila; antigene II (cardiolipina nella stessa diluizione e nella stessa quantità) - in 10 provette della 2a fila. 0,25 ml di soluzione isotonica di cloruro di sodio vengono versati in 10 provette della 3a fila, i restanti 0,25 ml vengono versati. Dopo l'incubazione in un termostato, 0,5 ml di sistema emolitico vengono aggiunti a 20 provette (1a e 2a fila), agitate e riposte nel termostato per 45 minuti.

Dopo 45 minuti viene determinata la dose di lavoro del complemento, ovvero il suo titolo con un aumento del 15-20%.

È considerato il titolo del complemento importo minimo, causando l'emolisi completa dei globuli rossi di pecora in presenza dell'antigene e del normale siero di sangue umano.

L'esperimento principale prevede che ciascun siero inattivato di prova, diluito in un rapporto di 1: 5 con una soluzione isotonica di cloruro di sodio, venga versato in 0,25 ml in tre provette. Aggiungere 0,25 ml di antigene I nella prima provetta, 0,25 ml di antigene II nella seconda e 0,25 ml di soluzione isotonica di cloruro di sodio nella terza (controllo). A tutte le provette vengono inoltre aggiunti 0,25 ml di complemento diluito alla dose di lavoro. Tutte le provette vengono poste in termostato per 45 minuti, quindi si aggiungono 0,5 ml di sistema emolitico, si agita e si pone in termostato per 45-50 minuti. Il risultato dell'esperimento viene registrato dopo l'inizio dell'emolisi completa nelle provette di controllo.

I risultati della reazione sono valutati come vantaggi: ritardo completo dell'emolisi (reazione fortemente positiva) ++++, significativo (reazione positiva) +++, parziale (reazione debolmente positiva) ++, insignificante (reazione dubbia) - ±, nessun ritardo dell'emolisi (reazione negativa) - .

A metodo quantitativo Per effettuare la reazione Wasserman, l'esperimento viene effettuato con volumi decrescenti di siero diluito con soluzione isotonica di cloruro di sodio.

Schema dell'esperimento principale della reazione Wasserman

Il significato clinico della reazione di Wasserman è difficile da sopravvalutare. Viene eseguito su tutti i pazienti prima del trattamento, ma significato speciale ha a sifilide latente, sconfitta organi interni e sistema nervoso.

I risultati della reazione Wasserman caratterizzano la qualità del trattamento fornito, il che dà motivo di cancellare i pazienti trattati dal registro entro un certo periodo di tempo.

Nella sifilide primaria la reazione di Wasserman è solitamente positiva alla fine della sesta settimana dal momento dell'infezione; con sifilide fresca secondaria è positivo in quasi il 100% dei casi, con sifilide ricorrente secondaria - nel 98-100%; terziario attivo - nell'85%; terziario nascosto - nel 60% dei casi.

La reazione Wasserman viene eseguita due volte per tutte le donne incinte, i pazienti con disturbi somatici, nervosi, mentali e malattie della pelle, così come le popolazioni decretate. Allo stesso tempo, i risultati delle reazioni positive e debolmente positive dovrebbero essere trattati in modo critico, poiché possono verificarsi alla fine della gravidanza e dopo il parto, con ipertiroidismo, malaria, lebbra, carie tumore maligno, malattie infettive, collagenosi, ecc. Pertanto, se c'è manifestazioni cliniche Le loro malattie dovrebbero essere prese in considerazione prima di tutto, insieme ai dati della batterioscopia.

Allo stesso tempo, ci sono fattori che possono distorcere la vera natura dei risultati ottenuti dalla reazione Wasserman: vetreria da laboratorio scarsamente lavata (tracce di acidi e alcali nelle provette), conservazione a lungo termine del sangue prelevato per la ricerca, consumo di grassi e alcol dai pazienti prima dell'esame, del periodo mestruale, ecc.

In tutti i casi, è consigliabile condurre un esame completo del paziente, includendo, oltre alla reazione di Wasserman, anche la RIBT (vedi 122, 123, 124), ecc.

122. Reazione di Sachs-Vitebsky (citocolica)

Utilizzato per rilevare la sifilide. Si basa sulla formazione di un precipitato quando si mescola il siero del sangue del paziente con un antigene.

Per preparare l'antigene, i muscoli di diversi cuori bovini vengono liberati dai tendini, dalla fascia e dal grasso, macinati in un tritacarne ed estratti con un volume di 5 volte di alcol etilico al 96% per 15 giorni con agitazione quotidiana di 20 minuti. L'estratto risultante viene evaporato a bagnomaria in una tazza di porcellana sotto vuoto. Al residuo (una massa di lipidi giallo brillante) viene aggiunto alcol etilico caldo al 96% in una quantità pari a 1/3 del volume prelevato per l'estrazione muscolare.

L'estratto si conserva per 3 giorni a temperatura ambiente, filtrato (in acqua fredda) e aggiungere una soluzione allo 0,3-0,6% di colesterolo cristallino, a seconda dei risultati della titolazione con sieri positivi e negativi. Conservare l'antigene citocolico a temperatura ambiente in fiale sigillate o provette con tappo.

Metodologia. 1 ml di antigene citocolico viene aggiunto rapidamente a 2 ml di soluzione isotonica di cloruro di sodio e lasciato a temperatura ambiente per 15 minuti fino alla comparsa delle scaglie. Aggiungere 0,1 ml di emulsione antigenica a 0,2 ml di siero inattivato in una provetta, agitare per 3 minuti e lasciare agire per 30 minuti, dopodiché viene aggiunto 1 ml di soluzione isotonica di cloruro di sodio.

Aggiungere 1,2 ml di soluzione isotonica di cloruro di sodio e 0,1 ml di emulsione antigenica alla provetta di controllo con antigene. Non dovrebbero esserci scaglie nel controllo. I risultati della reazione vengono presi in considerazione visivamente o utilizzando una lente d'ingrandimento e contrassegnati con vantaggi (++++, +++, ++) a seconda del numero di scaglie che cadono. Se la reazione è negativa non si formano scaglie, ma il contenuto della provetta può diventare leggermente opalescente.

Nel 1931 P. Sachs ed E. Witebsky proposero una modifica di questa tecnica, che consiste nel diluire l'antigene in due fasi: aggiungere 2 parti di soluzione isotonica di cloruro di sodio a 1 parte di antigene, conservare a temperatura ambiente per 5 minuti e aggiungere altre 9 parti di soluzione isotonica di cloruro di sodio. Si consiglia inoltre di diluire l'antigene con una soluzione di cloruro di sodio al 2% che, secondo gli autori, aumenta la sensibilità della reazione. È anche possibile una modifica quantitativa della reazione con diluizione del siero (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, ecc.).

La reazione è abbastanza sensibile, richiede poco tempo (circa 1 ora) e i risultati vengono letti immediatamente.

123. Reazione di immobilizzazione del Treponema pallidum (RIBT)

Usando una reazione, gli anticorpi e il complemento che immobilizzano il Treponema pallidum vengono rilevati nel siero del sangue di pazienti affetti da sifilide.

Nella sifilide primaria, il RIBT è prevalentemente negativo, nel secondario - positivo nel 92-96% dei casi, nel terziario - nel 92-100%, nel sistema nervoso e nella sifilide congenita - nell'86-89% dei casi.

Risultati positivi del RIBT sono stati notati nella sarcoide, nell'eritematosi, nel diabete, nei tumori maligni, Epatite virale, cirrosi epatica, malaria, lebbra, mononucleosi infettiva, alcune malattie dei paesi caldi (pinta, framboesia, ecc.).

L'antigene è una sospensione di treponema pallido prelevata dai testicoli di un coniglio infetto da sifilide introducendo nel testicolo 0,75-1 ml di una sospensione di treponema pallido in una soluzione isotonica di cloruro di sodio (50 animali per campo visivo).

Il materiale del testicolo deve essere prelevato 6-8 giorni dopo l'infezione dell'animale. Prima di assumere l'antigene, il coniglio viene ucciso mediante sanguinamento (puntura cardiaca o arteria carotidea). Il tessuto testicolare viene frantumato e riempito con siero sanguigno di un coniglio sano, diluito con soluzione isotonica di cloruro di sodio, agitato per -30 minuti e quindi centrifugato per 10 minuti (1000 giri al minuto). Il liquido surnatante viene esaminato al microscopio. Dovrebbero essere presenti almeno 10-15 Treponema pallidum in ciascun campo visivo.

Il complemento è preparato nel solito modo dal sangue dei porcellini d'India.

Per effettuare il RIBT occorrono: 1,2 ml di soluzione di gelatina allo 0,2%, 2,8 ml di soluzione di albumina al 5%, 1,6 ml di sospensione di Treponema pallidum; Il pH dell'ambiente è 7,2. A questa miscela vengono aggiunti 0,15 ml di complemento (cocktail). In parallelo, vengono eseguiti due test: con complementi attivi (esperimento) e reattivi (controllo).

I melangeur vengono riempiti con il siero in esame fino alla tacca “1”, quindi con un cocktail fino alla tacca “2” e chiusi con un anello di gomma sterile.

Allo stesso tempo, una reazione simile viene eseguita con sieri ovviamente positivi e ovviamente negativi.

I melangeur vengono numerati e posti in un termostato alla temperatura di 35 °C per 18-20 ore, dopodiché si tolgono dal termostato a coppie (esperimento - controllo) e il contenuto viene versato nelle apposite provette. Si applicano 2 gocce su un vetrino: a sinistra l'esperimento, a destra il controllo, coprire con un vetrino coprioggetto e microscopio in un campo visivo buio.

Innanzitutto vengono studiati i risultati del controllo: viene determinata la percentuale di Treponema pallidum mobile e immobile. Formula di calcolo: X = (A - B)/A * 100, dove A è il numero di treponema pallido mobile nel controllo; B - il numero di treponemi pallidi mobili nell'esperimento.

Esempio: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.

Valutazioni dei risultati RIBT: inferiore al 20% - negativo. 21-30% - dubbio, 31-50% - debolmente positivo, oltre il 50% - positivo.

Antigene, complemento e ausiliario, indicatore o sistema emolitico - siero emolitico ed eritrociti di pecora.

Se nel primo sistema si forma un complesso antigene + anticorpo specifico, il complemento viene adsorbito (si combina con questo complesso) e nel secondo sistema non si verifica l'emolisi.

La reazione richiede:

1. Testare il siero ottenuto dal sangue prelevato mediante puntura della vena ulnare del paziente. Dopo la coagulazione del sangue, il siero viene aspirato in una provetta separata e inattivato per 30 minuti a 56 °C a bagnomaria.

2. Antigene: sospensione di gonococchi uccisi.

3. I globuli rossi di pecora sono ottenuti da sangue defibrinato raccolto sterilmente. Si lavano centrifugando 3 volte con nuove porzioni di soluzione salina. Nella reazione viene utilizzata una sospensione al 3% di globuli rossi.

4. Il siero emolitico viene preparato in anticipo immunizzando i conigli con globuli rossi di pecora. Prima dell'uso, il siero viene titolato.

5. Complemento: siero fresco di cavia. Il sangue viene aspirato dal cuore della cavia con una siringa e, dopo la coagulazione, il siero viene separato. Prima dell'esperimento, la dose di lavoro del complemento viene titolata. Per fare ciò, prendere la diluizione base del complemento 1:10 e versarla in provette da 0,1 a 0,5, dopodiché il volume in ciascuna provetta viene regolato a 1,5 ml con soluzione salina.

Allo stesso tempo, viene preparato un sistema emolitico - diluito in siero emolitico a triplo titolo + sospensione al 3% di eritrociti di pecora. Entrambi gli ingredienti vengono conservati in volumi diversi in un termostato per 30 minuti (sensibilizzazione della miscela), dopodiché viene aggiunto 1 ml della miscela in provette e posti in un termostato per 30 minuti. 2 provette servono come controllo:

1. 1 ml di sistema emolitico + 1,5 ml di soluzione fisiologica;

2. 0,5 ml di complemento 1:10 + 0,5 ml di sospensione di globuli rossi + 1,5 ml di soluzione fisiologica.

Il titolo del complemento è la quantità minima alla quale si verifica ancora l'emolisi. Per innescare la reazione si assume una dose di complemento di lavoro, aumentata rispetto al titolo del 20-25%, cioè solitamente la quantità di complemento presente nella penultima provetta con emolisi. È necessario aumentare la dose del complemento perché nella reazione l'attività del complemento può essere in qualche modo soppressa da altri componenti della reazione (antigene, siero).
43) RSK Wassermann

Inserito per la diagnosi di sifilide al fine di rilevare gli anticorpi e determinarne l'efficacia terapia specifica. Si basa sul principio della reazione di fissazione del complemento di Bordet-Gengou. Una differenza significativa tra la reazione Wasserman è la non specificità dell'antigene: estratti lipidici da organi normali animali

Per eseguire la reazione Wasserman, è necessario disporre del siero del paziente, della diagnostica, degli antigeni cross-reattivi n. 1, n. 2, del complemento, del siero emolitico, dei globuli rossi di pecora, salino.

Diagnosticum n. 1 - specifico, treponemico.

Diagnosticum n. 2 - non specifico, antigene della cardiolipina, che sono estratti di cuore bovino altamente purificati con una composizione chimica costante di lipidi. Lipidi, di Composizione chimica sono vicini ai lipidi del Treponema pallidum, quindi, pur non essendo specifici, fissano anticorpi contro la spirocheta.

Questi antigeni sono prodotti centralmente e vengono utilizzati diluiti nella reazione secondo il titolo indicato in etichetta.

Contemporaneamente all'esperimento principale vengono posizionati 2 controlli: con sieri ovviamente negativi e con sieri ovviamente positivi.

Impostazione dell'esperimento principale

Innanzitutto, il siero test inattivato e diluito 1:5 viene versato in 4 provette. Quindi gli antigeni vengono versati in 2 provette (n. 1, n. 2) e la soluzione fisiologica viene versata nella 3a provetta. Successivamente, a tutte le provette viene aggiunta una dose di lavoro di complemento. Dopo aver mescolato gli ingredienti, il portaprovette con le provette viene posto in un termostato a 37 °C per 30 minuti. Dopo aver conservato in termostato, in tutte le provette viene aggiunto il sistema emolitico. Le provette vengono nuovamente poste in un termostato per 2 ore e poi lasciate a temperatura ambiente. Il giorno successivo si annota il risultato e si valuta il grado di intensità della reazione, quattro più (++++), tre (+++), due (++) e uno (+) - a seconda dell'intensità del colore del liquido e della dimensione del sedimento di globuli rossi sul fondo. L'emolisi completa è indicata da un (-) meno. Se c'è una netta discrepanza tra i risultati con antigeni diversi, l'esperimento viene ripetuto con una nuova porzione di sangue.
44) RIT-r. Immobilizzazione del Treponema pallidum.

Questa reazione è usata come in scopi diagnostici e per il riconoscimento risultati falsi positivi reazioni sierologiche standard, in particolare per la sifilide latente.

RIBT è che in presenza di immobilisine nel siero di pazienti con sifilide e complemento attivo, il treponema pallidum perde la motilità.

RIBT è posto in scatole sterili. La reazione coinvolge il siero del test, il complemento e l'antigene.

Nel RIBT, l'antigene è una sospensione di treponema pallido proveniente da un testicolo di coniglio prime date(7-8 giorni dopo l'infezione) orchite sifilitica. Uno speciale mezzo di sospensione preserva la vitalità del Treponema pallidum per almeno un giorno. Il complemento è utilizzato in RIBT porcellini d'India. Il RIBT si verifica in condizioni anaerobiche. Le provette con gli ingredienti vengono poste in un microanaerostato, da cui il aria atmosferica e viene iniettata una miscela di gas (95 parti di azoto e 5 parti diossido di carbonio). Il microanaerostato con provette viene posto in un termostato (35°C) per 18-20 ore.

Parallelamente alla formulazione della reazione, studi di controllo con siero sanguigno positivo e negativo prelevato da precedenti esperienze.

I risultati del RIBT vengono valutati dopo aver rimosso le provette dal termostato (cioè dopo 18-20 ore di esperimento). Utilizzando una pipetta Pasteur, una goccia del contenuto della provetta viene applicata su un vetrino, che viene coperto con un vetrino coprioggetto ed esaminato al microscopio a campo oscuro (obiettivo 40, oculare 10). Quando viene immobilizzato fino al 20% dei Treponema pallidum, la reazione è considerata negativa, dal 21 al 30% - dubbia, dal 31 al 50% debolmente positiva, dal 51 al 100% - positiva. La percentuale di immobilizzazione del Treponema pallidum viene determinata utilizzando una tabella speciale.

45) Reazione opson-fagocitica

Meccanismo: aumento della fagocitosi delle cellule microbiche sotto l'influenza degli effetti amichevoli degli anticorpi, del siero immunitario e del complemento.

Componenti della reazione:

1) antigene - coltura microbica quotidiana;

3) complemento: siero fresco di cavia;

4) fagociti - sospensione di leucociti.

Le opsonine sono anticorpi che si trovano nei sieri normali e immuni e preparano i microbi per la fagocitosi.

La reazione viene condotta in apposite provette a t = 37° minuti. Successivamente vengono preparati degli strisci da ciascuna provetta, vengono contati 100 fagociti e viene determinato il numero di microcontrolli fagocitati.

Indice opsonico = indice fagocitico. indice sierico/fagocitico del siero normale

Quanto più alto è l'indice opsonico (deve essere >1) del siero in esame, e quindi tanto più alto è! brucellosi).

Viene utilizzato per la determinazione delle opsonine, anticorpi che stimolano l'attività fagocitaria dei leucociti, ad es. sierodiagnosi di infezioni, come la brucellosi.

Il rafforzamento della fagocitosi avviene a causa dell'attacco delle opsonine con centri attivi (frammento Rav) ai determinanti batterici, e quindi con l'aiuto di frammenti Pc ai recettori Pc dei fagociti. Il siero normale contiene piccole quantità di opsonine, che esercitano i loro effetti in presenza del complemento. Ci sono più opsonine nel siero immunitario e la loro attività dipende meno dal complemento.

Componenti:

Prova il siero

Siero normale

Coltura microbica quotidiana (p. es., stafilococco)

Fagociti: una sospensione di neutrofili

Incubare a 37°C per 30 minuti. Da ciascuna provetta vengono preparati degli strisci, colorati secondo Romanovsky-Giemsa, e al microscopio viene contato il numero di microbi in 100 o più neutrofili, cioè. determinare l'indicatore fagocitico.

Indicatore fagocitico: il numero di microbi assorbiti da un neutrofilo.

Indice opsonico - indicatore fagocitico del siero immunitario (test) / indicatore fagocitico del siero normale.

Più alto è l'indice opsonico (deve essere > 1), maggiore è l'immunità.

L'indice opson-fagocitico è un indicatore digitale = numero di fagociti x valutazione della fagocitosi (a seconda del numero di microbi assorbiti). Il valore massimo è -75.

46) RN su topi per stabilire l'esotossina

Questa reazione si basa sulla capacità di uno specifico siero antitossico di neutralizzare l'esotossina.

Gli anticorpi sierici immunitari sono in grado di neutralizzare gli effetti dannosi dei microbi o delle loro tossine su cellule e tessuti sensibili, che è associato al blocco degli antigeni microbici da parte degli anticorpi, cioè alla loro neutralizzazione.

La reazione di neutralizzazione (RN) viene effettuata introducendo una miscela antigene-anticorpo negli animali o in oggetti di test sensibili (colture cellulari, embrioni). In assenza degli effetti dannosi dei microrganismi o dei loro antigeni o tossine negli animali e negli oggetti da testare, si parla dell'effetto neutralizzante del siero immunitario e, quindi, della specificità dell'interazione del complesso antigene-anticorpo.

Per effettuare la reazione, viene miscelato il materiale di prova, che dovrebbe contenere un'esotossina siero antitossico, tenuto in termostato e somministrato ad animali (cavie, topi). Agli animali di controllo viene iniettato il filtrato del materiale in esame, non trattato con siero. Se l'esotossina viene neutralizzata con siero antitossico, gli animali del gruppo sperimentale rimarranno vivi. Gli animali di controllo moriranno a causa dell'esotossina.

La reazione di neutralizzazione dell'esotossina avviene quando interagisce con il siero antitossico (anticorpi antitossina). Come risultato della formazione del complesso antigene-anticorpo, la tossina perde le sue proprietà tossiche.

La reazione di neutralizzazione viene eseguita per rilevare e titolare tossine, tossoidi o antitossine.

Le tossine si ottengono filtrando il liquido mezzo nutritivo o materiale di prova in cui sono cresciuti batteri tossigeni. Trattata con formaldeide per 30-45 giorni ad una temperatura di 37°C, la tossina viene convertita in tossoide, che viene utilizzato per immunizzare gli animali per ottenere siero antitossico.

Reazione di neutralizzazione in vivo. Per determinare il tipo di tossina, viene miscelato con siero diagnostico antitossico e questa miscela viene iniettata nei topi bianchi. Quando si neutralizza la tossina con siero antitossico, i topi non muoiono.

La reazione di neutralizzazione viene utilizzata per determinare l'immunità antitossica nei bambini affetti da difterite (test di Schick) e scarlattina (test di Dick). A tale scopo, una certa quantità della tossina corrispondente (1/40 DLM) viene iniettata per via intradermica nella zona dell'avambraccio. Se nel corpo sono presenti antitossine, la tossina verrà neutralizzata e la reazione sarà negativa. In assenza di antitossine nel corpo, reazione infiammatoria nel sito di iniezione della tossina.
47) RN (Reazione di Neutralizzazione) nei topi per identificare il virus encefalite trasmessa da zecche

Il virus della TBE è patogeno per numerosi animali da laboratorio e selvatici. I topi bianchi neonati e giovani sono i più sensibili. Dopo l'infezione nel cervello, per via intraperitoneale e intramuscolare, questi animali sviluppano l'encefalite, che termina con la morte degli animali. Tra gli animali da allevamento, le capre sono le più sensibili al virus della TBE, le pecore e le mucche sono meno sensibili e i cavalli sono leggermente sensibili. Il virus TBE ha un effetto citopatogeno (CPE), causando cambiamenti citopatici nelle colture primarie e continue di cellule renali embrionali suine (PEB e PES) e si moltiplica senza un CPE pronunciato in molti altri colture cellulari. Nel cervello dei topi infetti e nel fluido di coltura delle colture infette si verifica l'accumulo del virus TBE e di antigeni virali specifici: fissazione del complemento, emoagglutinazione, precipitazione, ecc.

Virus della TBE a lungo conserva a basse temperature ( modalità ottimale-60 gradi C e inferiori), tollera bene la liofilizzazione, può essere conservato allo stato essiccato per molti anni, ma viene rapidamente inattivato a temperatura ambiente. La bollitura lo uccide in 2 minuti, e nel latte caldo a 60 gradi. C muore in 20 minuti.

Anche la formalina, il fenolo, l'alcool e altri disinfettanti e le radiazioni ultraviolette hanno un effetto inattivante.

La reazione di neutralizzazione si basa sulla capacità di specifici sieri immunitari di estinguere l'effetto infettivo dei virus. Applicabile in due direzioni:

1) per tipizzare i virus isolati;

2) per la titolazione degli anticorpi nei sieri dei guariti.

Impostazione della reazione:

1. Sugli animali da laboratorio. Criteri per la presenza di un virus

serve alla morte degli animali da laboratorio. Viene calcolato LD50

La diluizione massima della sospensione virale, che

ha causato la morte del 50% degli animali infetti. Per

Viene effettuata l'identificazione del virus dell'encefalite da zecche

infezione intracerebrale dei topi bianchi.

2. Nelle colture di tessuti. I risultati vengono presi in considerazione

Secondo l'effetto citopatico (CPE)

Secondo il metodo di prova del colore basato sul cambiamento di colore

Per emoassorbimento.

3. Nell'embrione di pollo. I risultati vengono registrati secondo

la comparsa di butterature lungo la membrana corioallantoidea.

48) RTGA

Questa reazione è utilizzata nella pratica virologica:

Determinare il tipo di virus (sul vetro);

Per il rilevamento nel siero dei pazienti (ampliato).

Quando si imposta una reazione indicativa di inibizione dell'emoagglutinazione, sul vetro viene applicata 1 goccia di sieri immunitari tipo-specifici, quindi vengono aggiunte 1 goccia del materiale di prova e 1 goccia di sospensione di globuli rossi al 5%.

Contabilità dei risultati: il tipo di virus è determinato dal siero con cui non si è verificata la reazione, poiché il siero immunitario specifico per il virus isolato sopprime la sua attività emoagglutinante e i globuli rossi non si agglutinano.
49)RIF

Come etichette vengono utilizzati coloranti fluorocromici luminosi (isotiocianato di fluorisceina, ecc.).

Esistono varie modifiche del RIF. Per la diagnostica rapida delle malattie infettive, Koons RIF viene utilizzato per identificare i microbi o i loro antigeni nel materiale del test.

Secondo Koons esistono due metodi di RIF: diretto e indiretto.

Componenti RIF diretti:

1) il materiale in esame (feci emesse dal rinofaringe, ecc.);

2) siero immunitario specifico marcato contenente AT-la per l'antigene desiderato;

3) soluzione isotonica di cloruro di sodio.

Uno striscio del materiale da testare viene trattato con antisiero marcato.

Si verifica la reazione AG-AT. Durante un esame microscopico luminescente, si rileva fluorescenza nell'area in cui sono localizzati i complessi AG-AT.

Componenti del RIF indiretto:

1) il materiale oggetto di studio;

2) antisiero specifico;

3) siero antiglobulina (AT-la contro immunoglobuline), marcato con fluorocromo;

4) Soluzione isotonica di cloruro di sodio.

Uno striscio del materiale da testare viene prima trattato con siero immune all'antigene desiderato e poi con siero antiglobulina marcato.

I complessi luminescenti AG-AT - etichettati AT vengono rilevati utilizzando un microscopio a fluorescenza.

Il vantaggio del metodo indiretto è che non è necessario preparare un'ampia gamma di sieri fluorescenti specifici, ma viene utilizzato solo un siero antiglobulina fluorescente.

Esiste anche un tipo di RIF indiretto a 4 componenti, quando viene introdotto in aggiunta il complemento (siero di cavia). In una reazione positiva si forma un complesso di complemento AT marcato con AG-AT.

La reazione si riferisce a reazioni sierologiche che coinvolgono antigeni o anticorpi marcati.

Viene effettuato con metodi diretti e indiretti.

A metodo diretto rilevare l'antigene nel materiale di un paziente. Viene utilizzato un siero diagnostico fluorescente che contiene immunoglobuline isolate da sieri immuni e marcate con fluorocromi.

L'antigene specifico viene rilevato sotto forma di conglomerati luminescenti di colore verde brillante e lo sfondo del preparato è di colore rosso-arancione.

Componenti della reazione di immunofluorescenza diretta:

1) il materiale oggetto di studio;

2) siero luminescente specifico;

3) microscopio a fluorescenza.

Quando si diagnostica l'influenza, viene fatta la differenziazione dai patogeni della parainfluenza e infezione da adenovirus. Il tampone nasofaringeo viene trattato con siero influenzale fluorescente o immunoglobulina influenzale.

Il risultato “+” sotto forma di bagliore verde si ottiene dopo 3 ore.

Con il metodo indiretto vengono rilevati e titolati anticorpi specifici. Il titolo del siero è la sua diluizione massima alla quale si nota la fluorescenza di “+ +”.

Componenti della reazione di immunofluorescenza indiretta

Per cercare un antigene durante la diagnostica rapida:

1) materiale da testare (antigene);

2) siero specifico;

3) siero luminescente antiglobulina

4) microscopio a fluorescenza.

/fase specifica

Gli anticorpi sierici vengono adsorbiti all'antigene.

// fase non specifica

Viene utilizzato il siero antiglobulina con anticorpi marcati con fluorocromi. Si forma un complesso antigene + anticorpo (I) + siero antiglobulina (II), che si illumina.