Ekzaminimi mikroskopik i jashtëqitjes. Diagnoza intravitale e helminthiasis

Metodat e drejtpërdrejta: zbulimi i vetë helminthëve, fragmentet e tyre, vezët, larvat në feces, urinë, sekrecionet duodenale, pështymë, mukozën e hundës dhe vaginale, përmbajtjen e hapësirave subunguale, pjesët e indeve të biopsuara.

Gjatë diagnostikimit, është e pamundur të identifikohen vezët ose larvat e të gjitha llojeve të helminthëve që jetojnë në sistemi i tretjes person. Kështu, kur përdoret metoda e flotacionit, vezët trematodë dhe, në disa raste, vezët e krimbave të pafertilizuara nuk notojnë në filmin sipërfaqësor (për shkak të gravitetit të tyre specifik të lartë). Është shumë e rrallë të gjesh vezë të krimbave dhe onkosfera taeniide në feces, të cilat zbulohen duke përdorur metoda të veçanta kërkimore: gërvishtje nga palosjet perianale për krimbat dhe taeniidet, metodat e sedimentimit për trematodat (vezë opisthorkide, etj.). Prandaj, për një ekzaminim të synuar të një pacienti për infeksione helmintike, mjeku në referim duhet të tregojë se në cilat helminthë duhet të përqendrohet (diagnoza), gjë që do t'i lejojë asistentit të laboratorit të zgjedhë teknikën e duhur për identifikimin e këtij lloji helminth. Feçet e marra nga vende te ndryshme jashtëqitja në një sasi prej të paktën 50 gram (lugë çaji) në një enë qelqi të pastër duhet të dërgohet në laborator jo më vonë se 24 orë pas defekimit dhe të ekzaminohet në ditën e marrjes.

Nëse është e nevojshme të ruhet jashtëqitja deri në diten tjeter vendoset në vend të ftohtë (0-4°C) ose mbushet me një nga konservantët.

Para ekzaminimit, feçet përzihen me një shkop në mënyrë që vezët e helminthit të shpërndahen në mënyrë të barabartë në masën totale.

Nëse në përgatitje gjenden vezë të ndonjë helminti, shikimi nuk ndalet, sepse mund të ketë pushtim të dyfishtë ose të trefishtë.

Monitorimi i efektivitetit të trajtimit të infeksioneve të helminthit kryhet duke ekzaminuar feçet për vezët e helminthit 2-3 javë ose 2-3 muaj pas trajtimit, në varësi të helminthit të zbuluar.

Metodat makroskopike përdoren për të zbuluar helminthë të tëra të pjekur ose fragmente të tyre në feces me sy të lirë ose duke përdorur një xham zmadhues dore.

Shpesh, krimbat që zvarriten në mënyrë aktive mund të shihen në sipërfaqen e feces pas defekimit; krimbat e rrumbullakët ekskretohen me feces; Ndonjëherë vetë njerëzit vërejnë kalimin e helminthëve. Në pacientët me diphyllobothriasis, fragmente të strobilit të shiritit mund të lëshohen (në formën e "petëve"), dhe tek ata të infektuar me taeniide (krimb derri ose gjedhi), segmentet e helminthëve shpesh dalin me feces (në formën e "të bardhës". copa të prera”) ose ato zvarriten në mënyrë aktive nga anusit.

Metoda makroskopike është ajo kryesore për diagnozën diferenciale të taeniazës dhe taeniarinkozës (në kombinim me një studim).

Nga metodat e veçanta makroskopike, përdoret metoda e larjes sekuenciale të feçeve.

Feçet përzihen në ujë për të marrë një pezullim uniform, pas së cilës ndriçim i mirë ato ekzaminohen me kujdes në pjesë të vogla të veçanta në kuveta të zeza fotografike ose në sfond i errët në enët Petri. Duke përdorur piskatore ose një gjilpërë disektuese, hiqni të gjitha grimcat e dyshimta të bardha, formacionet e mëdha të dyshimta për fragmente helmintesh dhe ekzaminoni ato nën një xham zmadhues midis dy rrëshqitjeve. Helmintet e vogla ose kokat e cestodës ekzaminohen nën një xham zmadhues në një pikë glicerinë ose nën një mikroskop.

Kur përdoret kjo metodë për diagnostikimin e segmenteve të shiritit të derrit, shiritit të gjedhit dhe krimbit të gjerë të shiritit, segmentet e lara vendosen midis dy gotave dhe, duke parë dritën nën një xham zmadhues ose mikroskop me zmadhim të ulët, specia përcaktohet nga struktura. të mitrës (në një segment të pjekur të shiritit të derrit, 8-12 degë anësore, dhe shirit demi 18-32, më shpesh 28-32, në shiritin e gjerë segmentet janë më të gjera dhe mitra në qendër është në formën e një "rozete"). Nëse mitra është e vështirë për t'u parë, atëherë fillimisht mund të mbahet për ca kohë në një tretësirë ​​glicerine 50%, pas së cilës mund të shihen qartë edhe trungjet e zbrazëta të mitrës.

Kur identifikohen këto cestoda nga struktura e kokave të shkëputura, ato vendosen me kujdes me qafën në një pikë glicerinë midis rrëshqitjeve (ose të mbuluara me një mbulesë) dhe, pa shtrydhje, ekzaminohen nën një mikroskop me zmadhim të ulët.

Metodat mikroskopike ndahen në të thjeshta, komplekse dhe të veçanta.

Më të thjeshtat përfshijnë metodat e njollosjes amtare, njollosjen amtare me tretësirën e Lugolit, metodat e njollosjes së trashë nën celofan sipas Katos, përdredhjen (sipas Shulmanit) dhe skrapimin perianal.

Metodat Komplekse janë më efektive dhe bazohen në përqendrimin e vezëve në preparate. Ato përfshijnë para-trajtimin e feçeve me reagentë të lëngshëm, si rezultat i të cilave vezët e helminthit ose precipitojnë ose notojnë në sipërfaqen e lëngut.

Metodat komplekse përfshijnë metodat e pasurimit:

a) flotacion (kur gravitet specifik vezët kanë më pak peshë specifike tretësirë ​​fiziologjike dhe vezët notojnë në filmin sipërfaqësor);

b) sedimentimi (kur pesha specifike e vezëve është më e madhe se pesha specifike e tretësirave të kripës dhe vezët vendosen në sediment).

Metoda të veçanta për zbulimin e vezëve dhe larvave të helminthëve, kisteve dhe formave vegjetative të protozoarëve janë metodat e skrapimit, flotimit, sedimentimit, larvoskopisë, protozooskopisë, studimi i tëmthit dhe metodat e ngjyrosjes së njollave të feçeve, pështymës etj.

Metodat e thjeshta ekzaminimet fekale

Smear amtare. Një grimcë e vogël jashtëqitje merret me një shkop druri nga pjesë të ndryshme të pjesës së dorëzuar, fërkohet mirë në një rrëshqitës xhami në një pikë solucion gliceroli 50% dhe bëhet një njollë e hollë në 2-3 rrëshqitës xhami. Të paktën 3 preparate ekzaminohen nën një mikroskop. Disavantazhi i metodës: shihet një sasi e vogël materiali, prandaj nuk përdoret si metodë e pavarur.

Metoda e përdredhjes(Shulman). 2,0-3,0 g feçe vendosen në një gotë, përzihen tërësisht me një shufër qelqi me një volum 5-fish të tretësirës së kripur ose ujë të distiluar, duke bërë lëvizje të shpejta për 2-3 minuta dhe shpejt hiqeni shufrën nga përzierja. Një pikë e përzierjes në fund të shkopit transferohet në një rrëshqitje xhami dhe ekzaminohet nën një mikroskop. Parimi i forcës centrifugale bën që vezët dhe larvat të grumbullohen në shkop.

Metoda e njollosjes së trashë Kato me celofan. Reagentët kimikë: glicerinë 100%, tretësirë ​​fenoli 6% (100 ml ujë + 6 g fenol), 3% tretësirë ​​e malakit jeshil (2,5 ml ujë të distiluar + 75 ml malakit jeshil).

Përgatitja e tretësirës së punës: 100 ml tretësirë ​​fenoli 6% + 100 ml glicerinë e pastër + 1,2 ml tretësirë ​​e gjelbër malakit 3%.

Përgatitja e shiritave të celofanit: Pritini shirita celofani, madhësia e të cilëve korrespondon me rrëshqitjen e xhamit. Celofani duhet të jetë hidrofil (celofani që digjet është i përshtatshëm, nëse shkrihet është i papërshtatshëm). Në tretësirën e punës mund të përpunohen deri në 5 mijë shirita. Periudha e ekspozimit për shiritat e celofanit derisa ato të jenë gati për përdorim në tretësirën e punës është të paktën 24 orë.

Ecuria e studimit. 50 mg feçe (madhësia e një bizele të madhe) aplikohet në një rrëshqitje xhami, fërkohet me një shkop individual (xhami, druri), mbulohet me një rrip celofani dhe fërkohet sipër me një tapë gome derisa të merret një njollë uniforme e trashë. . Ilaçi thahet në temperaturën e dhomës për një orë ose në një termostat në 40°C për 20-30 minuta dhe mikroskopikisht (koha e ekspozimit mund të rritet në temperaturën e dhomës në 5-6 orë ose më shumë).

Për sa i përket efikasitetit, kjo metodë i afrohet metodës së flotacionit, por zbulon pushtim intensiv dhe me intensitet mesatar.

Përdoret si metodë e pavarur diagnostikuese dhe rekomandohet për ekzaminim masiv të popullatës.

Në laboratorët diagnostikues klinikë, përdoret si një metodë e unifikuar për diagnostikimin e helminthëve në mungesë të diagnozave specifike sipas udhëzimeve të mjekëve.

Metodat për skrapimin perianal dhe njollosjen amtare me tretësirën e Lugol përshkruhen në seksionin mbi metodat speciale.

Metoda të sofistikuara të pasurimit të fekaleve

Metodat e pasurimit bazohen në ndryshimin në peshën specifike të vezëve të helminthit dhe zgjidhjes së kripës së përdorur.

Kur aplikoni metodën e flotacionit, mund të përdoren zgjidhjet e mëposhtme të kripës:

1. Tretësirë ​​e nitratit të plumbit PbNO3 (nitrat plumbi) me dendësi 1,5. Përgatitet në masën 650 g lëndë për 1 litër ujë. Kripa tretet në pjesë në ujë të nxehtë në një tas smalt, nxehet në sobë dhe përzihet vazhdimisht derisa të tretet plotësisht. Nuk është e nevojshme të filtrohet tretësira. Tretësira përgatitet ditën e studimit pasi me kalimin e kohës jep precipitat dhe dendësia e tij fillon të bjerë pas 24 orësh.Nëse tretësira përgatitet në sasi të mëdha atëherë në ditët në vijim para studimit ngrohet. duke trazuar sedimentin. Zgjidhja përgatitet në një kapuç tymi, pasi nitrat plumbi është një kripë e një metali të rëndë.

2. Një tretësirë ​​e nitratit të amonit NH4NO3 (nitrat amoni i grimcuar ose i zakonshëm) me densitet 1,3 përgatitet në të njëjtën mënyrë si ai i mëparshmi, por në masën 1500 g lëndë për 1 litër. ujë i nxehtë.

3. Një tretësirë ​​e nitratit të natriumit NaNO3 ose nitratit të natriumit me densitet 1,38-1,4 përgatitet në masën 1000 g lëndë për 1 litër ujë të nxehtë.

4. Përgatitet tretësirë ​​e tiosulfatit të natriumit Na2S2O3×5H2O (hiposulfit natriumi) me densitet 1,4 në masën 1750 g lëndë për 1 litër ujë të nxehtë.

5. Një tretësirë ​​e sulfatit të natriumit Na2SO4 (kripë Epsom) me densitet 1,26-1,28 përgatitet në masën 920 g të substancës për 1 litër ujë të nxehtë.

6. Një tretësirë ​​e klorurit të zinkut ZnCl2 (klorur zinku) me densitet 1,82 përgatitet në masën 2000 g të substancës për 1 litër ujë të nxehtë. Tretësira e ftohur nuk kristalizohet.

7. Tretësirë ​​e ngopur e klorurit natriumi NaCl(kripë e tryezës) me dendësi 1,18-1,2. Në! l ujë, shtoni 400-420 g kripë në pjesë në një kovë të emaluar me ujë të valë, duke e përzier vazhdimisht derisa të treten plotësisht. Ndërsa tretësira ftohet, kristalet e klorurit të natriumit precipitojnë.

Pesha specifike e solucioneve të flotacionit matet me një aerometër vetëm pasi tretësira të jetë ftohur plotësisht në temperaturën e dhomës.

Metodat e flotacionit janë më efektive për zbulimin e vezëve të shiritit pigme, krimbit të kamxhikut, krimbit të gjilpërave, ascarisit dhe krimbit të gjerë.

Filmi sipërfaqësor mund të hiqet me një lak teli ose rrëshqitës xhami.

Në një zgjidhje të ngopur kripë tryezë filmi mund të ekzaminohet pas 30-40 minutash, në tretësirën e nitratit të amonit - pas 10-20-30 minutash pas vendosjes.

Kur hiqni filmin me një lak teli, ekzaminohen të paktën 8 pika.

Rrëshqitjet heqin më shumë vezë nga filmi sesa sythe teli. Xhami duhet të jetë në kontakt me lëngun e solucionit të notimit, i cili shtohet në gotë me një pipetë. Pasi të vendoset, xhami hiqet, sipërfaqja e lagur vendoset lart në gotë madhësi më të madhe dhe ekzaminohet nën mikroskop. Slides duhet të degreased para përdorimit.

Për të kryer kërkime duhet të keni: rrëshqitës xhami, gota, sythe teli, kuveta, enë Petri, pipeta, llamba, shufra qelqi ose druri.

Ecuria e studimit. 5 g feces derdhen me një sasi 10-fishi të tretësirës së flotacionit (preferohet graviteti specifik 1.38-1.40), përzihet tërësisht, hiqen grimcat e mëdha të patretshme nga lart dhe lëreni pezullimin për 10-15 minuta. Më pas filmi hiqet ose me një lak mbi një rrëshqitje xhami ose me një rrëshqitje xhami. Për të holluar feçet, është më mirë të merrni gota me një kapacitet 30-50 ml, të derdhni tretësirën në të njëjtin nivel me skajet (ose nënmbushni 2-3 mm) dhe të mbuloni përzierjen me një rrëshqitje xhami dhe më pas shtoni tretësirën e flotacionit me një pipetë derisa të bjerë në kontakt me rrëshqitjen e xhamit. Pas 10-20 minutash, hiqni shpejt xhamin dhe mikroskoponi filmin e mbetur mbi të pa një gotë mbuluese.

Metodat e sedimentimit

Metodat e sedimentimit përdoren për të zbuluar vezët e gjeohelminthëve, biohelminths në feces dhe si metoda speciale për testimin e opisthorkiazës.

Metoda Goryachev-Zolotukhin(metoda e thjeshtuar Goryachev). Rreth 1,5 g feçe përzihet në një gotë në 3-4 ml ujë. Pezullimi që rezulton filtrohet përmes dy shtresave të garzës në një tub centrifuge, duke e shtruar me kujdes mbi 4-5 ml tretësirë ​​të ngopur të klorurit të natriumit të pranishëm në të. Epruvetat vendosen në stendë për 15-20 orë.Gjatë kësaj kohe vendosen vezët e rënda trematode. Përftohen dy shtresa të përcaktuara qartë. Sedimenti ekzaminohet mikroskopikisht.

Metoda eter-formalinë. Përdoret për diagnostikimin e të gjitha invazioneve intestinale dhe si metodë e veçantë për vezët e protozoarëve dhe opisthorkideve.

Pajisjet: centrifugë në 3000 rpm; tuba gradual centrifugues, hinka; sitë metalike (kullues çaji) ose fashë me dy shtresa; rrëshqitje dhe mbulesa; shkopinj druri (ose qelqi); leshi pambuku, fashë.

Reagentët kimikë: 10% tretësirë ​​formaline (1 pjesë tretësirë ​​farmaceutike formaline dhe 4 pjesë ujë të distiluar); etilik eter (mjekësor).

7 ml tretësirë ​​formaline 10% hidhen në tuba centrifuge dhe vendoset 1 g feçe (sasi e tillë feçesh që tretësira në epruvetë të rritet në 8 ml). Feçet përzihen me formaldehid derisa të krijohet një përzierje homogjene dhe më pas derdhen përmes një sitë metalike (ose garzë me dy shtresa, fashë) në një tub tjetër centrifuge (nëse feçet mbeten në sitë, kutia duhet të shpëlahet me formaldehid). Shtoni 2 ml eter në këtë tub centrifuge, kapak dhe tundeni fuqishëm për 30 sekonda.

Përzierja centrifugohet në 3000 rpm për një minutë (ose për dy minuta në 1500 rpm). Për shkak të reaksionit eter-formalinë, proteinat koagulohen në formën e një tape në krye të epruvetës dhe vezët e helminthit precipitojnë. Shtresa e mpiksjes hiqet, lëngu supernatant kullohet, sedimenti aplikohet në një rrëshqitje qelqi direkt nga një provëz ose me një pipetë Pasteur, të mbuluar me një mbulesë dhe të parë nën një mikroskop.

Metoda e precipitimit eter-acetik. Parimi i sedimentimit eter-acetik të vezëve të helminthit konsiston në trajtimin sekuencial të mostrave fekale me një zgjidhje ujore 10%. acid acetik dhe eter. Acidi acetik është më i mirë se të tjerët komponimet kimike emulsifikon mostrat fekale. Ai depërton në grimcat e patretura, të përbëra kryesisht nga fibra, të cilat, kur përmbajtje e madhe ndërhyjnë në hulumtim duke precipituar pas centrifugimit. Shtimi i mëvonshëm i eterit në epruvetën dhe përzierja çon në nxjerrjen e acidit acetik nga përmbajtja e epruvetës së bashku me grimcat fekale të njomura në të. Meqenëse graviteti specifik i përzierjes së esterit dhe acidit acetik është më i vogël se pesha specifike e ujit, mostrat e jashtëqitjes të trajtuara me këto substanca notojnë dhe vezët e helminthit, të cilat kanë një peshë specifike të lartë, vendosen.

Sasia e sedimentit të marrë pas precipitimit eter-acetik është 3-4 herë më pak se pas reshjeve eter-formalinë. Kjo lehtëson shumë zbulimin e vezëve të helminthit në të dhe ju lejon të ekzaminoni të gjithë sedimentin me një sasi të peshuar prej 0,5-1 g. Toksiciteti i metodës eter-acetike është 5 herë më i ulët.

Ecuria e studimit. 7 ml tretësirë ​​të acidit acetik 10% derdhen në një tub centrifuge të graduar dhe shtohet një kampion 1 g feçesh (d.m.th., sasia e feçeve në të cilën tretësira e acidit acetik rritet në 8 ml). Përziejini mirë me një gotë ose shkop druri. Kullojeni përmes një hinke me dy shtresa garzë në një tub tjetër centrifugues. Në emulsat shtohen 2 ml eter etilik(d.m.th. deri në 10 ml). Provëzat mbyllen me një tapë gome (nga një shishe peniciline) dhe tunden për 15 sekonda. Pas heqjes së tapës, tubat centrifugohen për një minutë në 3000 rpm për 2 minuta. Supernatanti hidhet nga tubi. Në disa raste, tapa fekale që rezulton ndërhyn në kullimin e supernatantit. Në këtë rast, tapa ndahet nga muret e epruvetës me një shufër xhami ose druri. I gjithë precipitati hidhet me pipetë në një rrëshqitës xhami dhe mikroskopi nën një mbulesë me zmadhim të ulët. Precipitati është zakonisht i vogël dhe i pangjyrë. Vezët e helminthit, veçanërisht vezët e vogla fluke, janë zbuluar mirë.

Metoda e sedimentimit kimik. Parimi i studimit bazohet në precipitimin e vezëve nga një mostër fekale në një tretësirë ​​të kripur me një peshë specifike prej 1.15. Thelbi i metodës është centrifugimi i drejtpërdrejtë i një epruveti në të cilin një prizë feçesh emulsionuar në një zgjidhje 1% të acidit acetik është shtresuar mbi një zgjidhje të nitratit të natriumit (pesha specifike 1.16). Graviteti i lartë specifik i tretësirës së kripur dhe flluskat e lëshuara për shkak të reaksionit kimik që depërtojnë në shtresën e fecesit të homogjenizuar pengojnë sedimentimin e tij. Vezët e helminthit precipitojnë me një sasi të vogël fibrash. Sedimenti mund të pastrohet nga mbetjet e mbetura duke e trajtuar atë me një zgjidhje 10% të acidit acetik dhe eterit. Në këtë rast, mbetet vetëm një vezë helminth, gjë që lehtëson shumë identifikimin e tyre.

Ecuria e studimit. 6 ml tretësirë ​​nitrat natriumi me peshë specifike 1,15 derdhen në një tub centrifuge të shkallëzuar. 7 ml tretësirë ​​të acidit acetik 1% derdhen në një provëz tjetër. Shtoni një mostër fekale (deri në shenjën 7,5 ml për një mostër 0,5 g dhe deri në 8 ml për një mostër 1,0 g). Përziejeni mostrën tërësisht me një shufër qelqi. Kullojeni përmes një hinke me një shtresë garzë, duke e shtruar në një tretësirë ​​nitrat natriumi. Tubi me filtratin e shtresuar centrifugohet në 1500-2000 rpm për 5 minuta. Lëngu supernatant kullohet duke e përmbysur shpejt tubin. Shtoni 3-4 ml tretësirë ​​10% të acidit acetik dhe 0,5 ml eter në epruvetën me sedimentin, mbylleni me një tapë gome dhe tundeni. Centrifugimi i përsëritur kryhet për 1 minutë. Hidhni lëngun supernatant. Sedimenti transferohet në një rrëshqitje xhami, mbulohet me një mbulesë dhe ekzaminohet nën një mikroskop.

STUDIME HELMINTOLOGJIKE TË BILIKE, PËRMBAJTJES DUODENAL, sputumit, GJAKUT, URINËS DHE MUSKUJVE

Zbulimi i vezëve dhe larvave të helminthit në përmbajtjen duodenale dhe biliare. Një studim i përmbajtjes biliare dhe duodenale kryhet nëse dyshohet për helminthiazë të mëlçisë dhe fshikëzës së tëmthit (opisthorkiaza, klonorkiaza, dikrocelioza) dhe duodenum(strongyloidiasis).

Ecuria e studimit. Përmbajtja duodenale dhe biliare (porcionet A, B, C) merren në mënyrën e zakonshme duke përdorur intubacion. Për pjesën B, rekomandohet të merret një refleks i fshikëzës së tëmthit duke administruar një zgjidhje 33% përmes një sondë. sulfat magnezi. Nga lëngu i provës, thekonet që lundrojnë në të zgjidhen dhe ekzaminohen nën një mikroskop, dhe më pas përzihen me një sasi të barabartë eter sulfurik. Përzierja tundet mirë dhe centrifugohet. Supernatanti hidhet dhe i gjithë sedimenti ekzaminohet nën një mikroskop.

Në mungesë të qelbit dhe mukusit, përmbajtja biliare dhe duodenale centrifugohet pa u përzier me eterin.

Ekzaminimi i pështymës. Në praktikën helmintologjike, ekzaminimi i pështymës kryhet me qëllim të diagnostikimit laboratorik të paragonimiazës. Ndonjëherë zbulohen vezë shistosome, larva të krimbave të rrumbullakët dhe elementë të fshikëzës së ekinokokut.

Një njollë amtare përgatitet nga pështyma në një rrëshqitje xhami, e cila ekzaminohet nën një mikroskop.

Nëse ka një sasi të madhe qelbi në pështymë, ajo përzihet me një tretësirë ​​0,5% të hidroksidit të natriumit ose hidroksidit të kaliumit, tundet për 5 minuta dhe centrifugohet. Sedimenti ekzaminohet mikroskopikisht.

Testi i gjakut. Gjaku ekzaminohet nëse një pacient dyshohet se ka filariazë.

Për shkak të faktit se në disa lloje të filariazës (loiasis, wuchereriosis e shkaktuar nga një tendosje subperiodike), larvat (microfilariae) janë të pranishme në gjakun periferik vetëm gjatë ditës, dhe në disa (brugiosis, wuchereriosis e shkaktuar nga një tendosje periodike) - vetëm natën, përkatësisht në këtë kohë merret gjak për analizë.

Teknika e grumbullimit të gjakut, përgatitjes së preparateve (njollosje e hollë dhe pikë e trashë), njollosja e tyre (sipas Romanovsky) dhe analiza janë të ngjashme me ato të diagnostikimit laboratorik të malaries.

Mikrofilariet e llojeve të ndryshme dallohen nga gjatësia, gjerësia, lakimi i trupit, prania ose mungesa e një kapaku, forma e skajit të bishtit, vendndodhja e substancës bërthamore në trup dhe rajoni bishtor i larvave.

Ecuria e studimit. Më pas, urina lihet të qëndrojë për të paktën 30 minuta shtresa e sipërme kullohet duke lënë 10-15 ml sediment, i cili derdhet në tubat e centrifugës dhe centrifugohet për 1-2 minuta. Pas kullimit të supernatantit, sedimenti transferohet në një rrëshqitës xhami dhe ekzaminohet nën një mikroskop.

STUDIMI I BIOPTS MUSKULLORE

Metoda e trikinoskopisë. Nevoja për të ekzaminuar biopsi të muskujve të pacientit lind kur dyshohet për trikinozë.

Biopsia kryhet sipas rregullave të përgjithshme. Zakonisht bëhet një biopsi e muskulit deltoid. Gjatë një ekzaminimi patologjik, mund të bëhet një biopsi e muskujve të diafragmës, ezofagut, gjuhës, muskujve përtypës dhe ndërbrinjëve, fleksorëve të gjymtyrëve, muskujve. kokërr syri, pasi preken më intensivisht nga larvat e Trichinella-s.

Në laborator, një pjesë muskulore e biopsizuar pritet në copa shumë të vogla (me mikrotomë), të cilat vendosen midis dy gotave, duke shtypur fijet muskulore dhe ekzaminohen në mikroskop. Aktualisht, mikroskopët specialë - trichinelloscopes - përdoren gjerësisht për këtë qëllim.

Në rastin e trikinozës, trikinoskopia zbulon shenja të theksuara të theksuara përgjatë fibrave të muskujve. formë ovale kapsula të trikinozës (si limon). vlera mesatare kapsula te njerëzit është 0,4 x 0,26 mm. Kapsula, si rregull, përmban një Trichinella të mbështjellë spirale në 2.5 kthesa. Me një intensitet të lartë pushtimi, mund të ketë 2 ose 3 larva në një kapsulë. Fijet muskulore ngjitur me kapsulën humbasin strijat e tyre të kryqëzuara dhe marrin një pamje homogjene.

Mishi ose produktet e mishit që shkaktuan infeksionin ekzaminohen në të njëjtën mënyrë.

Metoda e tretjes së muskujve. Metoda është më efektive.

Ecuria e studimit. Muskujt që studiohen janë të bluar imët dhe të mbushur me artificiale lëngu gastrik në raport 1:15-20. Përzierja që rezulton vendoset në një termostat në temperaturën 37°C për 12-16 orë.Pas kësaj periudhe ekzaminohet mikroskopikisht sedimenti, në të cilin larvat e Trichinella gjenden në gjendje të lirë midis masës së mbetjeve të fibrave muskulore të tretura.

Lëngu artificial i stomakut mund të blihet në një farmaci ose të përgatitet në një laborator. Për ta bërë këtë, shtoni 10 ml acid klorhidrik të koncentruar në 1 litër ujë të distiluar; Para përdorimit, shtoni 30 g pepsinë në 1 litër acid të holluar.

METODAT E HULUMTIMIT SASIOR

Metodat sasiore hulumtimi përdoret për të përcaktuar intensitetin e pushtimit, për të vlerësuar efektivitetin e barnave të ndryshme antihelmintike, për të përcaktuar cilësinë e heqjes së krimbave, për të monitoruar trajtimin masiv të vazhdueshëm dhe masat parandaluese, etj.

Përcaktimi sasior i vezëve të helminthit kryhet me dy metoda: metoda Stoll dhe metoda e Krasilnikov dhe Volkova (1974).

Metoda Stoll. Për të kryer studimin duhet të keni një mikroskop, një balonë qelqi me shenjë 56 dhe 60 ml, një cilindër të shkallëzuar, rruaza qelqi, një tapë gome për balonën, pipeta të shkallëzuara, rrëshqitës xhami dhe tretësirë ​​0,4% hidroksid natriumi.

Ecuria e studimit. Tretësira dekinormale e hidroksidit të natriumit (përafërsisht përqendrimi 0,4%) derdhet në balonë duke përdorur një cilindër të graduar deri në pikën 56 ml dhe feçet shtohen derisa niveli i lëngut të arrijë në 60 ml (d.m.th. 4 ml feces). Përzierja tundet mirë me rruaza qelqi për 1 minutë, duke e mbyllur enën me një tapë gome (mund ta trazoni edhe me shkop). Menjëherë pas shkundjes, merrni 0,075 ml të përzierjes me një pipetë të graduar (ajo përmban 0,005 ml feces), transferojeni në një rrëshqitës xhami dhe numëroni në mikroskop numrin e vezëve në preparat. Për të përcaktuar numrin e vezëve në 1 g feces, numri i zbuluar shumëzohet me 200.

Krahasimi i numrit të vezëve në preparat, të gjetura tek pacienti para dhe pas trajtimit, na lejon të gjykojmë efektivitetin e heqjes së krimbave.

Metoda e Stoll-it është e thjeshtë, jep rezultate të krahasueshme me të gjitha helminthiazat, patogjenët e të cilave në mënyrë sistematike sekretojnë vezë në zorrët e pacientit. Megjithatë, disavantazhi i metodës është se është relativisht ndjeshmëri e ulët, veçanërisht me intensitet të ulët të pushtimit.

Metoda Krasilnikov-Volkova. Gjatë ekzaminimit të kësaj metode, të paktën 1 g feçe përzihet në një balonë qelqi ose në një epruvetë të madhe me tretësirë ​​1% Lotus (ose 1,5% tretësirë ​​Extra) në një raport 1:10. Suspensioni tundet tërësisht derisa të formohet një suspension homogjen, më pas 0,1 ml suspension (ekuivalente me 0,01 g feces) mblidhet shpejt me një pipetë të shkallëzuar dhe transferohet në një rrëshqitës xhami. Preparati mbulohet me mbulesë xhami ose pjatë celofani (20 x 30 mm), e vjetëruar për të paktën një ditë në 50%. tretësirë ​​ujore glicerinë.

Numëroni numrin e vezëve në të gjithë përgatitjen. Për të llogaritur numrin e vezëve në 1 g feces, numri që rezulton duhet të shumëzohet me 100.

Kjo metodë ka një sërë përparësish mbi metodën Stoll. Së pari, është më i ndjeshëm dhe ju lejon të zbuloni helmintet kur shkallë e dobët infektimet. Së dyti, është shumë i përshtatshëm për ekzaminime masive, pasi solucionet e detergjentit, duke qenë konservues për vezët e helminthit, bëjnë të mundur kryerjen e studimeve të materialit jo mjaft të freskët. Megjithatë parakusht Kjo përfshin mbledhjen e feçeve direkt në një zgjidhje detergjente.

Për kërkimi sasior mund të përdoret ndonjë nga metodat cilësore të unifikuara të përshkruara bazuar në parimin e vezëve lundruese. Por në këtë rast, duhet të merret për analizë e njëjta sasi feçesh, i njëjti vëllim i tretësirës së flotacionit. Llogaritja e shkallës së pushtimit mund të bëhet duke ditur numrin e vezëve në 1 g feçe, sipas tabelës së mëposhtme.

Intensiteti i pushtimit varet nga numri i vezëve të helminthit

në 1 g feces

METODAT E DIAGNOZISË SEROLOGJIKE

Këto metoda, të bazuara në zbulimin e antitrupave specifikë në serumin e gjakut, përdoren për qëllime diagnostike dhe depistuese.

Metodat serologjike përfshijnë:

Reaksioni i precipitimit unazor (RCR) (trikinoza, cisticerkoza);

Reagimi i precipitimit unazor në epruveta në të ftohtë (trikinoza, cisticerkoza);

Reagimi i mikroprecipitimit në larvat e gjalla (trikinoza, ascariasis);

Reaksioni indirekt i hemaglutinimit (IRHA) (trikinoza, ekinokokoza, alveokokoza, cisticerkoza, etj.);

Reaksioni i aglutinimit të lateksit (RAL) (ekinokokoza, alveokokoza, trikinoza, teniarinhoz, etj.);

Reaksioni i fiksimit të komplementit (FFR) (trikinoza, ekinokokoza, cisticerkoza);

Reagimi i antitrupave të etiketuar me enzimë (REMA) (ekinokokoza, onkocerciaza, shistozomiaza, trikinoza, toksokariaza);

Analiza imunosorbente e lidhur(ELISA) (trikinoza, opisthorkiaza, toksokariaza, toksoplazmoza, etj.).

Për të vendosur reaksione serologjike, prodhohen antigjene standarde ose përgatiten në mënyrë të pavarur (për shembull, nga fshikëzat ekinokokale të deleve), prodhohen sisteme speciale testimi për ELISA.

Metoda të veçanta studime për enterobiasis, teniarinhoz, taeniasis

Scraping nga palosjet perianale. Për të marrë gërvishtje nga palosjet perianale, mund të përdorni një shpatull druri, një shirit celofani, letër ose shirit celuloze, shkopinj sysh me një shtresë ngjitëse të veçantë:

a) kruarje me një shpatull druri (një shpatull është një shkrepës ose shkop i rrafshuar), i lagur me një tretësirë ​​glicerinë 1% (ose një tretësirë ​​0,5% duke pirë sode), kryhet me kruarje të lehtë nga sipërfaqja e palosjeve perianale përgjatë gjithë perimetrit të anusit. Gërvishtja që rezulton transferohet me buzën e një gote mbuluese nga fundi i një shpatulle në një rrëshqitje qelqi në një pikë solucion gliceroli 50%, e mbuluar me të njëjtin gotë mbuluese dhe mikroskopohet. Disavantazhi i kësaj metode është zbulimi i pamjaftueshëm i vezëve dhe efekt irritues;

b) sipas metodës Torgushin, bëhet një shpëlarje me një shtupë pambuku në një shpatull druri ose tjetër të lagur me një tretësirë ​​glicerine 50% dhe një njollë përgatitet në një rrëshqitje xhami në një pikë glicerinë;

c) sipas metodës së Kevorkovës, rreth 5 ml hidhet në një tub centrifuge. ujë të valuar, vendosni një shpatull (shop) me një shtupë pambuku në të. Para marrjes së materialit, tamponi shtypet lehtë në murin e brendshëm të epruvetës, me të fshihen palosjet perianale dhe futet në epruvetë spatula me tampon. Tampona tundet tërësisht në një provëz, larja centrifugohet për 3 minuta dhe sedimenti që rezulton ekzaminohet nën një mikroskop;

d) kruarje me shirit ngjitës sipas Graham. Një copë shirit ngjitës (shirit polietileni transparent me një shtresë ngjitëse për krijimtarinë e fëmijëve, por është më mirë të përdorni film kirurgjik LPO-1, LPO-2) 8-10 cm të gjatë, ngjiteni me një shtresë ngjitëse në palosjet perianale të lëkurës, duke e mbajtur nga skajet dhe më pas transferojeni në një gotë. rrëshqisni me shtresën ngjitëse poshtë (skajet e shiritit që shtrihen përtej skajeve të xhamit janë prerë), syzet numërohen dhe të dhënat e pacientit dhe numri i xhamit regjistrohen në ditar. Në laborator, shiriti qërohet në njërin skaj në një distancë të gjatë dhe nën të hidhen 1-2 pika. Vaj vazelinë ose glicerinë (për të eliminuar defektet optike) dhe mikroskop;

e) kruarje duke përdorur shufra syri qelqi, sipërfaqja e të cilave është e veshur me një përbërje të veçantë ngjitëse. Shkopinjtë e syrit janë instaluar në një trekëmbësh të veçantë. Materiali mblidhet duke prekur pjesën e sheshtë të shpatullës në lëkurën e hapjes perianale. Më pas, shkopi rilidhet në trekëmbësh për transport. Mikroskopi kryhet drejtpërdrejt në shpatullën në të dy anët (pa rrëshqitje dhe gota mbuluese) me montim paraprak në kaseta me zmadhim të ulët (okular x 10, objektivi x 8). Në fund të punës, shkopinjtë dezinfektohen duke zier në një tretësirë ​​sapuni dhe trekëmbëshi dhe kasetat trajtohen me alkool dhe lahen me tretësirë ​​sapun-sode. Përbërja e ngjitësit: cleol - 10 g, Vaji i ricinit- 2,5 g, eter etilik - 5 g, etanol 96% - 2,5 g.

Spatulat zhyten në tretësirën e ngjitësit, pastaj thahen në ajër në temperaturën e dhomës. Filmi ngjitës i formuar në sipërfaqe zgjat disa ditë.

Metoda është e përshtatshme për shqyrtimin masiv të fëmijëve për enterobiasis dhe të rriturve për taeniasis.

Përveç metodës së skrapimit për teniarinkozën dhe teniazën, përdoret edhe metoda e anketimit dhe metoda makroskopike e përshkruar më sipër (kur zbulohen segmente).

Metodat speciale të kërkimit për strongyloidiasis

Metoda eter-acetike përdoret për zbulimin e vezëve (shih më lart) dhe metoda Berman për zbulimin e larvave në jashtëqitje.

Metoda Berman. Ekzaminoni jashtëqitjen e freskët, mundësisht pasi të keni marrë një laksativ. Një mostër prej 5 g fekale vendoset në një sitë metalike (rrjeta është e veshur me dy shtresa garzë brenda) në një gyp qelqi të fiksuar në një trekëmbësh. Një tub gome me një kapëse (aparati Berman) vendoset në skajin e poshtëm të hinkës.

Rrjeta me feces ngrihet dhe uji i ngrohur në 40-50 ° C derdhet në hinkë në atë mënyrë që Pjesa e poshtme rrjeta u zhyt në ujë dhe jashtëqitjet u mbuluan plotësisht me ujë. Pas 2-4 orësh, kapësja në tubin e gomës hapet shpejt dhe lëngu zbret në tubin e centrifugës. Pas centrifugimit (1-2 min), pjesa e sipërme e lëngut kullohet shpejt dhe precipitati në sasi prej 1 ml aplikohet në një shtresë të hollë në një rrëshqitës xhami dhe mikroskopikisht nën një zmadhim të ulët të mikroskopit.

Metoda IMP dhe TM. Një pjesë e feçeve në madhësinë e një arre vendoset në një gotë kimike, derdhet me kripë të ngrohtë 40 ° C në mënyrë që feçet të mbulohen me një tretësirë, të lënë për 20 minuta. Pas 20 minutash, lëngu derdhet në një enë Petri dhe shikohet nën mikroskopin binocular MBS.

Për diagnozën e strongyloidiasis, veçanërisht për monitorimin e efektivitetit të trajtimit, rekomandohet kombinimi i metodës Berman me studimin e përmbajtjes duodenale.

Metoda të veçanta kërkimore për nematodat

Nematozat

Askariaza

Historia tërheq vëmendjen ndaj qëndrimit ndaj kopshtarisë dhe hortikulturës. Ngrënia e perimeve të papërpunuara dhe sallatave të bëra nga këto perime.

Manifestimet klinike faza e hershme Ascariasis shkaktohet nga ndryshimet alergjike në trup. Faza e hershme ose migratore e larvës së ascariasis shpesh ndodh në prani të etheve me temperaturë trupore deri në 38 ° e lart, me një kompleks simptomash të dëmtimit të mushkërive dhe praninë e eozinofilisë së rëndë të gjakut. Në shumicën e rasteve, tek fëmijët, shenjat e para të sëmundjes janë keqtrajtimi, dobësia, dhimbje koke të përsëritura, djersitje dhe ndonjëherë dhimbje muskujsh dhe kyçesh. Shpesh ka një skuqje të bollshme të tipit urtikarie me kruajtje të rëndë ose të moderuar. Diagnoza e fazës së hershme konfirmohet nga studimet me rreze x për praninë e grimcave të paqëndrueshme në mushkëri. infiltrate eozinofile Leffler. Ngjyrosjet e pështymës së sapo sekretuar shpesh përmbajnë qeliza eozinofile, qeliza të kuqe të gjakut, kristale Charcot-Leyden dhe larva të krimbave të rrumbullakët.

Në fazën imagjinare intestinale të ascariasis, një kombinim i gastrointestinal dhe sindromat astenike, enterokolitike simptomat e dhimbjes. Fëmijët shpesh përjetojnë humbje peshe, ndonjëherë mjaft të konsiderueshme. Nauze, rritje e pështymës, nervozizëm, zhvillim psikomotor i vonuar, ulje e inteligjencës.

Për diagnostikimin laboratorik të rr.

Protozoarët ndahen në 4 klasa:

Kur encistohet, mikroorganizmi fiton formë e rrumbullakosur dhe i mbuluar me një guaskë mbrojtëse. Në formën e një kisti, protozoarët bëhen më pak të ndjeshëm ndaj faktorë të pafavorshëm mjedisi.

Më poshtë mund të jetë subjekt i kërkimit:

Shënim:Ekzistojnë shumë lloje të diagnostikimit; ne do të shqyrtojmë ato lloje që janë më të zakonshmet në praktikën laboratorike klinike.

Llojet private të diagnostifikimit

Në çdo rast specifik, asistenti i laboratorit ka për detyrë të gjejë një patogjen specifik; ndonjëherë zbulohen të tjerët së bashku me atë kryesor.

Ekzistojnë 6 lloje të këtij mikroorganizmi të aftë për të jetuar në zorrën e njeriut. Rëndësi klinike ka vetëm ameba dizenterike, e cila shfaqet në formë vegjetative dhe në formën e cisteve.

Për më tepër, përdoren metoda imunologjike:

• imunofluoreshencë indirekte;
• aglutinimi indirekt (INA);
• imunodifuzion radial.

Shënim: metodat serologjike janë joinformative dhe përdoren vetëm si shtesë e atyre kryesore në raste të dyshimta.

Diagnostifikimi i ciliateve (ciliateve)

Forma patogjene e mikroorganizmave të kësaj gjinie është balantidium. Ky është një mikrob që shkakton balantidiasis, një sëmundje e shoqëruar nga një proces ulceroz i zorrës së trashë. Patogjeni zbulohet në njollën amtare në formën e një forme vegjetative dhe një kisti. Materiali për njollosjen (feçet dhe mukozën) merret gjatë ekzaminimit të sigmoidoskopisë dhe mbillet në media speciale.

Diagnoza e flagelateve (Leishmania, Giardia, Trypanosome, Trichomonas)

Leishmania, trypanosomet, lamblia dhe trichomonas janë të rrezikshme për njerëzit.

Leishmania- mikrobet, duke shkaktuar leishmaniozë, ekzaminohen në strishat e gjakut, materialet palca e eshtrave, gërvishtjet nga infiltratet e lëkurës. Në disa raste, kur diagnostikohet leishmania, përdoret kultura në mjedise ushqyese.

Tripanosomet– patogjenët sëmundja e gjumit(Trypanosomiasis Amerikane/Afrikane, ose sëmundja Chagas).

Varianti afrikan është përcaktuar në periudha fillestare në studimin e gjakut periferik. Ndërsa sëmundja përparon, mikrobet patologjike gjenden në materialin e shpimeve të nyjeve limfatike, dhe në faza të avancuara - në lëngun cerebrospinal.

Për të diagnostikuar tripanozomet nëse dyshohet për sëmundjen Chagas, materiali që ekzaminohet ekzaminohet nën një mikroskop me zmadhim të ulët. Në këtë rast, njollat ​​dhe pikat e trasha janë të para-njollosura.

Trichomonas(intestinale, orale) zbulohen me mikroskop të materialeve të marra nga mukozat e prekura.

Identifikimi i sporozoanëve (plazmodiumi i malaries, agjenti shkaktar i kokcidozës, etj.)

Lloji më i zakonshëm dhe më i rrezikshëm për njerëzit është plazmodiumi i malaries, i cili ka 4 lloje kryesore të patogjenit: patogjen malaria tre ditore, malaria katër ditore, malaria tropikale dhe malaria ovale.

Zhvillimi seksual i Plasmodiumit (sporogoni) zhvillohet te mushkonjat Anopheles. Aseksuale (skizogonia e indeve dhe eritrociteve) - në indet dhe eritrocitet e mëlçisë njerëzore. Këto karakteristika të ciklit jetësor duhet të merren parasysh gjatë diagnostikimit të plazmodiumit të malaries.

Kështu, në gjakun e një pacienti të sëmurë rishtas, mund të zbulohen qelizat germinale të ciklit sporogoni. Por në kulmin e sulmeve të malaries, skizontet shfaqen në numër të madh në gjak.

Për më tepër, në faza të ndryshme ethet malariale shfaqen forma të ndryshme Plazmodiumi:

• gjatë periudhës së ftohjes, gjaku mbushet me merozoite, një lloj skizonti;
• në temperatura të larta, trofozoitët në formë unaze grumbullohen në eritrocite;
• një ulje e temperaturës karakterizohet nga një mbizotërim i trofozoitëve të ngjashëm me ameba;
• gjatë periudhave të gjendjes normale, gjaku përmban forma të rritura të skizonteve.

Studimi i agjentit shkaktar të malaries (plazmodiumi i malaries) kryhet në një njollë dhe në një pikë të trashë.

Shënim:Diagnoza e malaries nga ekzaminimi i njollave dhe pikave të trasha të gjakut ndonjëherë është i gabuar. Trombocitet e gjakut në disa raste mund t'i atribuohen gabimisht patogjenit të malaries. Gjithashtu ndonjëherë fragmente të leukociteve dhe qelizave të tjera simulojnë plazmodiumin.

Metodat themelore për studimin e protozoarëve

Le të shohim shkurtimisht metodat më të zakonshme të kërkimit për praninë e protozoarëve.

Diagnoza e protozoarëve duke përdorur një njollë amtare dhe një njollë të lyer me tretësirën Lugol (në jashtëqitje)

Ilaçi përgatitet nga një emulsion i feces në një zgjidhje izotonike. Dy pika klori natriumi dhe solucioni i Lugolit aplikohen në një rrëshqitje qelqi. Materiali i provës u shtohet të dyja kompozimeve me një shkop druri dhe, pasi mbulohet me xham, shikohet me rezolucione të ndryshme të mikroskopit.

Protozoarët e gjetur regjistrohen në bazë të disa karakteristikave. Për saktësi, përgatitni 2-3 preparate nga i njëjti material. Në raste të dyshimta, analiza përsëritet disa herë gjatë 2-3 javëve.

Metoda mund të zbulojë format vegjetative dhe cistike:

• lamblia;
• balantidium;
• ameba dizenterie.

Së bashku me format patogjene, identifikohen edhe protozoarët jopatogjenë. Gjithashtu në transportuesit e shëndetshëm ka forma luminale dhe cistike.

E rëndësishme:hulumtimi duhet të kryhet në mënyrë të përsëritur për të shmangur pasaktësitë dhe gabimet.

Rezultati i diagnostikimit të protozoarëve duke përdorur metodën e njollosjes amtare dhe me njolla duhet të përmbajë një përshkrim të formës së patogjenit (luminal, kist, ind).

Kërkesat e kërkimit:

• materiali i marrë për analizë (feçet e lëngshme) ekzaminohet jo më vonë se 30 minuta pas defekimit;
• jashtëqitja e formalizuar duhet të diagnostikohet brenda 2 orëve pas defekimit;
• materiali nuk duhet të përmbajë papastërti ( dezinfektuesit, ujë, urinë);
• për të punuar me materialin, përdorni vetëm shkopinj druri; ato prej qelqi nuk janë të përshtatshme për shkak të rrëshqitjes së mukusit;
• Shkopinjtë duhet të digjen menjëherë pas përdorimit.

Metoda e ruajtjes (ekzaminimi i jashtëqitjes) për diagnostikimin e protozoarëve

Studimi kryhet duke fiksuar protozoarët me një konservues. Dallimi midis kësaj metode dhe asaj të mëparshme është se ruajtësit ju lejojnë të ruani ilaçin për një periudhë të gjatë.

Konservues të përdorur:

• Barrow. Përmban përbërës konservues: 0,7 ml klorur natriumi, 5 ml formalinë, 12,5 ml alkool 96%, 2 g fenol dhe 100 ml ujë të distiluar. Përbërja e ngjyrosjes: 0.01% tretësirë ​​e tioninit (azura).
• Zgjidhja e Safarliev. Përbërësit: 1,65 g sulfat zinku, 10 ml formalinë, 2,5 g fenol kristalor, 5 ml acid acetik, 0,2 g blu metilen, 100 ml ujë. Ky konservues përdoret në rastet kur materiali duhet të ruhet për më shumë se një muaj.

Shishet e zbrazëta mbushen me një ruajtës, materiali transferohet në to në një raport 3:1, pastaj shtohet bojë nëse është e nevojshme. Rezultatet vlerësohen duke studiuar 2-3 barna.

Metoda e pasurimit të formalinës me eter (analizë për praninë e protozoarëve në feces)

Kjo metodë diagnostike ju lejon të veçoni dhe përqendroni kistet protozoare. Për analizën nevojiten përbërësit e mëposhtëm: formalinë (10 ml), 0,85 g tretësirë ​​izotonike, ujë të distiluar, eter sulfurik, tretësirë ​​Lugol.

Përzierja e biomaterialit me lëngjet e listuara përzihet dhe centrifugohet. Sedimenti i përftuar në fund të epruvetës lyhet me tretësirën e Lugolit dhe ekzaminohet për praninë e cisteve dhe formave vegjetative.

Metoda për zbulimin e Leishmanisë (njollosje e palcës së eshtrave)

Për të diagnostikuar leishmaniozën, përdoren reagentët e mëposhtëm: Përzierja e Nikiforov (eter sulfurik dhe alkool etilik), tampon fosfati, Azur-eozin sipas Romanovsky.

Substanca e palcës së eshtrave vendoset me shumë kujdes në një rrëshqitës xhami pas përgatitjes speciale. Përdoret një mikroskop me një sistem zhytjeje.

NË periudhë akute sëmundje, një numër i madh i leishmanisë gjenden në pikën.

Shënim:Ndonjehere qelizat e gjakut mund të ngjajë me Leishmaninë e përpunuar, ndaj është shumë e rëndësishme që tekniku i laboratorit të jetë i kujdesshëm dhe të ketë përvojë të mjaftueshme për të kryer kërkime të pavarura.

Metoda për zbulimin e leishmanisë në një njollë nga infiltrati i lëkurës

Reagentët e kërkuar janë të ngjashëm me analizën e mëparshme.

Materiali i provës është marrë nga përmbajtja ekzistuese e tuberkulozit ose ulçerozës. Nëse dyshohet për leishmaniozë, kruarja bëhet me shumë kujdes me bisturi, pa gjak. Më pas preparati përgatitet në gotë. Për të siguruar saktësinë e rezultateve të marra, disa përgatitje janë ekzaminuar njëkohësisht.

Në prani të sëmundjes, leishmania zbulohet gjithashtu midis makrofagëve, fibroblasteve dhe qelizave limfoide të pranishme në materialin e testimit.

Metoda për izolimin e një kulture të pastër të Leishmania të marrë nga gërvishtja e indeve patologjike

Me këtë metodë të diagnostikimit të protozoarëve, gërvishtjet e indeve vendosen në një mjedis të veçantë ushqyes, në të cilin Leishmania shumohet në mënyrë aktive.

Para marrjes së skrapimit, lëkura trajtohet tërësisht me alkool, pastaj bëhet një prerje në tuberkuloz, nga fundi i së cilës hiqet përmbajtja dhe vendoset në një epruvetë me medium. Materiali merret disa herë, pas së cilës vendoset në epruveta të ndryshme. Pastaj kultivimi ndodh në një termostat në një temperaturë prej 22-24 gradë. Rezultatet vlerësohen nën një mikroskop. Kjo metodë përdoret kur metodat e tjera, më të lira dhe më të shpejta të diagnostikimit të protozoarëve janë joefektive.

Ju mund të shihni se si deshifrohen në praktikë testet për praninë e protozoarit duke përdorur një pikë gjaku duke shikuar rishikimin e videos:

Lotin Alexander, kolumnist mjekësor

Jashtëqitja ekzaminohet duke përdorur dy metoda:

1. Makroskopike – zbuloni helmintet, kokat e tyre, segmentet, fragmentet e strobilës. Pjesë të vogla të feçeve përzihen me ujë në një tabaka të sheshtë ose enë Petri dhe shikohen në dritë të mirë kundër një sfondi të errët, duke përdorur një xham zmadhues nëse është e nevojshme. Të gjitha formacionet e dyshimta transferohen me piskatore në një filxhan tjetër me ujë ose në një rrëshqitje xhami në një pikë glicerine të holluar.

Me metodën duke mbrojtur Pjesa e jashtëqitjes që testohet përzihet me ujë në një cilindër qelqi dhe pasi vendoset, shtresa e sipërme e ujit kullohet. Kjo përsëritet disa herë. Kur lëngu bëhet transparent, kullohet dhe sedimenti ekzaminohet në një enë Petri.

2. Mikroskopik – për të zbuluar vezët dhe larvat e helminthëve. Ka shumë metoda kërkimore.

1). Smear amtare – metoda më e zakonshme dhe teknikisht e arritshme e kërkimit. Vezët dhe larvat e të gjitha helminthëve mund të zbulohen. Megjithatë, me një numër të vogël vezësh nuk është gjithmonë e mundur t'i gjesh ato. Prandaj, përdoret metoda e pasurimit.

1). Metoda Fülleborg - kjo është një metodë pasurimi, e bazuar në shfaqjen e vezëve të helminthiazës në një zgjidhje të ngopur të NaCl (1,2 - dendësia; 400 g NaCl për 1 litër ujë; 40% zgjidhje NaCl). Metoda është më efektive se njollosja amtare. 2-5 g feçe vendosen në kavanoza qelqi dhe mbushen me tretësirë ​​NaCl, përzihen dhe pas 45 minutash filmi i formuar hiqet me një lak metalik, një pikë glicerinë vendoset në një rrëshqitës xhami. Ekzaminoni nën një mikroskop. Disavantazhi i metodës është shfaqja e vonuar e vezëve të helminthëve të ndryshëm, shiriti xhuxh - pas 15-20 minutash, krimbi i rrumbullakët - 1,5 orë, krimbi i kamxhikut - 2-3 orë.

2) Metoda Kalantaryan – gjithashtu një metodë pasurimi, por përdoret një tretësirë ​​e ngopur e NaNO 3 (dendësia 1,38). Shumica e vezëve notojnë; testimi i sedimentit nuk kërkohet. Disavantazhi është se mbajtja e vezëve në tretësirë ​​për një kohë të gjatë çon në faktin se disa vezë fillojnë të fryhen dhe vendosen në fund, duke u zhdukur nga filmi sipërfaqësor.

3. Metoda Goryachev – bazuar në parimin e depozitimit të vezëve, zbulimin e vezëve të vogla trematode. Si tretësirë ​​përdoret një tretësirë ​​e ngopur NaCl dhe sipër vendoset me kujdes 3-4 ml tretësirë ​​feçesh. Pas 15-20 orësh, vezët trematodë vendosen në fund. Lëngu kullohet dhe sedimenti vendoset në një rrëshqitës xhami dhe nën mikroskop.

4. Metoda e përdredhjes së Shulmanit – për të zbuluar larvat e helminthit në feces. Ekzaminohen vetëm feçet e sapoekskretuara. 2-3 g vendosen në një kavanoz qelqi dhe shtohet një sasi 5-fishuar uji, përzihet shpejt me një shkop pa prekur muret e kavanozit - 20-30 minuta, pastaj shkopi hiqet shpejt dhe një pikë. lëngu në fund transferohet në një rrëshqitës xhami dhe mikroskopi.

5. Metoda Berman – bazohet në aftësinë e larvave të helminthit për të migruar drejt nxehtësisë dhe shërben për identifikimin e tyre në feçe.

6. Metoda e Haradës dhe Morit (metodë e rritjes së larvave) dhe rekomandohet për testim për infeksionet e krimbave të gresit. Metoda bazohet në faktin se në nxehtësi dhe në letër të lagur të filtruar, vezët e krimbave të gremisit zhvillohen në larva filariforme, të cilat mund të zbulohen lehtësisht. 15 g feçe vendosen në mes të një rripi letre të filtruar; letra me jashtëqitje vendoset në një kavanoz në mënyrë që fundi i poshtëm të zhytet në ujë dhe fundi i sipërm të fiksohet me një tapë. Kavanozi mbahet në termostat në 28 0 C për 5-6 ditë. Larvat filariforme zhvillohen gjatë kësaj kohe dhe zbresin në ujë. Lëngu ekzaminohet nën një xham zmadhues. Nëse është e vështirë të zbulohet, lëngu centrifugohet, pasi fillimisht ka vrarë larvat duke ngrohur në 60 0. Laboratori duhet të mbajë doreza.

7. Metodat për enterobiasis – identifikimi i vezëve të krimbit të gjirit dhe të shiritit të gjedhit.

a) kruarje nga palosjet perianale – me një shtupë pambuku të mbështjellë fort në një shkop druri dhe të lagur me një tretësirë ​​glicerinë 50%. Në laborator, shtupa lahet me 1-2 pika të një zgjidhje ujore 50% të glicerinës.

b) metoda e marimangave ngjitëse (metoda Graham)

Shiriti ngjitës aplikohet në palosjet perianale, më pas shtresa ngjitëse aplikohet në një rrëshqitje xhami dhe ekzaminohet nën një mikroskop.

C) kruarje duke përdorur shufrat e syrit (metoda Rabinovich). Për gërvishtjen perianale përdoren shufra syri prej qelqi, pjesa e gjerë e të cilave është e mbuluar me një ngjitës të veçantë, i cili lejon mbajtjen e vezëve të krimbave.

Ekzaminimi i gjakut, biliare, pështymës dhe muskujve

Mikroskopi i gjakut zbulon larvat filarie.

Ekzaminimi i pështymës - vezët paraganim, larvat e krimbit të rrumbullakët, nekatori, strongjiloidi, elementët e fshikëzës së ekinokokut.

Ekzaminimi i muskujve - nëse dyshohet për trikinozë, ekzaminohen muskujt e pacientit ose të kufomës, si dhe mishi që supozohet se ka shkaktuar infektimin e personit. Për qëllimin e trikinoskopisë, muskuli pritet në copa të vogla dhe vendoset në një kompresorium, këto janë dy gota të gjera dhe të trasha që shtypin muskujt dhe larvat e Trichinella gjenden në formën e kapsulave - metodë e kompresimit.

Metoda e tretjes - muskujt mbushen me lëng gastrik artificial (tretësirë ​​e acidit klorhidrik dhe pepsinë). Muskujt treten dhe larvat identifikohen lehtësisht. Përcaktimi i intensitetit të pushtimit: numri i larvave deri në 200 për 1 g ind muskulor– intensiteti i moderuar i pushtimit; deri në 500 - intensive; mbi 500 – pushtim super intensiv.

Metodat serologjike

Kapitulli III. Diagnoza e helminthiasis dhe metodat e hulumtimit helminthologjik

Është e nevojshme të ekzaminohen për helminthiasis të gjithë pacientët që kërkojnë ndihmë mjekësore dhe veçanërisht pacientët që drejtohen te pediatri, terapisti dhe neurologu me ankesa për fenomene nga trakti gastrointestinal. sistemi nervor dhe me anemi. Nëse mjeku nuk është gjithmonë në gjendje të përdorë metodat e hulumtimit laboratorik, atëherë çdo punonjës mjekësor që ofron kujdes në një klinikë ambulatore ose spital kërkohet të intervistojë pacientin në lidhje me izolimin e helminthëve.

Nëse disponohet, jepet në kapitujt përkatës indikacionet klinike Diagnoza duhet të sqarohet duke përdorur metoda laboratorike për testimin e helminthiasis.

Për shkak të mbizotërimit helminthiazat e zorrëve më i madhi rëndësi praktike ka një ekzaminim të jashtëqitjes.

Metodat për testimin e jashtëqitjes për helminthiasis

Jashtëqitja dorëzohet në laborator në një enë qelqi të pastër (rreth një çerek filxhani jashtëqitje të marra nga vende të ndryshme në një pjesë); Gjatë një ekzaminimi rutinë, lejohet dërgimi i jashtëqitjes në laborator në kuti shkrepësesh ose kuti me splinte.

Për të kontrolluar heqjen e krimbave, e gjithë pjesa e fecesit të mbledhur pas administrimit shpërndahet (siç përshkruhet nga mjeku). antihelmintik dhe laksativ (në kavanoza të mëdha qelqi të mbyllura, kova).

Ekzaminimi mikroskopik i jashtëqitjes është themelor në diagnostikimin e helmintiazave intestinale; gjithmonë duhet të paraprihet nga një ekzaminim i përgjithshëm makroskopik i feçeve për të zbuluar segmente të cestodave të mëdha, krimbave, krimbave të rrumbullakët, etj.

Jashtëqitja duhet të jetë e freskët ose e konservuar (në një zgjidhje formaldehidi 5%), pasi tharja ndryshon në mënyrë dramatike strukturën e vezëve. Përveç kësaj, kur feçet qëndrojnë, zhvillim të shpejtë vezët e disa helminthëve (për shembull, krimbat e gjilpërave), gjë që e bën të vështirë diagnozën.

Sipas udhëzimeve të Ministrisë së Shëndetësisë të BRSS, është e nevojshme të ekzaminohet jashtëqitja njëkohësisht duke përdorur metodën Fulleborn dhe njollosjen vendase.

Smear amtare

Ngjyrosje amtare: një copë e vogël feçesh (afërsisht sa një bizele), e marrë me shkrepse, xhami ose shkop druri nga vende të ndryshme në pjesën e dorëzuar, bluhet tërësisht në një rrëshqitje xhami në një pikë solucion gliceroli 50% ose në tretësirë ​​të kripur ose në ujë. Mbulojeni me një mbulesë duke e shtypur lehtë këtë të fundit (me një gjilpërë disekuese). Smear duhet të jetë i hollë, transparent dhe uniform. Përdoret vetëm si një shtesë e metodave të tjera që sigurojnë pasurimin e ilaçit. Të paktën dy barna duhet të rishikohen.

Për të zbuluar larvat e helminthit (si dhe vezët e tyre), bëhet një njollosje vendase. në mënyrën e mëposhtme(sipas Shulman): 2-3 g feçe përzihen plotësisht duke "përdredhur" një shufër qelqi në një emulsion me pesë herë më shumë ujë të pastër ose kripë. Gjatë trazimit, larvat grumbullohen pranë shufrës së qelqit, kështu që menjëherë pas përfundimit të trazimit, një pikë emulsioni transferohet shpejt me një shufër qelqi në një rrëshqitës xhami, mbulohet me një mbulesë dhe ekzaminohet. S. D. Lyubchenko (1936) vërtetoi se metoda e përdredhjes është më efektive se metoda e njollosjes, veçanërisht në lidhje me vezët e krimbave të rrumbullakët. Bazuar në punën e S. D. Lyubchenko, ne e konsiderojmë të këshillueshme zëvendësimin e metodës së njollosjes me metodën e përdredhjes.

Metoda Fülleborn

Metoda Fulleborn: 5-10 g feçe të marra nga vende të ndryshme vendosen në një kavanoz me kapacitet 50-100 ml dhe fërkohen tërësisht me një gotë ose shufër druri në një tretësirë ​​të ngopur të kripës së tryezës (400 g të kësaj kripe tretet në 1 litër ujë, ngrohet deri në valë dhe filtrohet përmes një shtrese leshi pambuku ose garzë; tretësira përdoret e ftohtë: graviteti specifik 1.2). Tretësira shtohet gradualisht derisa të merret një suspension uniform dhe sasia totale e tretësirës së shtuar duhet të jetë afërsisht 20 herë më e madhe se sasia e feces. Për përzierjen e feçeve, Fulleborn rekomandoi përdorimin e gotave të çajit, por është më i përshtatshëm të përgatisni një pezullim në kavanoza vaji me një kapacitet 50-100 ml, duke përdorur dy kavanoza për secilën analizë (ose në gota me një kapacitet 100 ml).

Menjëherë pas përgatitjes së suspensionit, grimcat e mëdha që kanë dalë në sipërfaqe hiqen nga sipërfaqja me një shpatull, një lugë metalike ose një copë letre të pastër ( formacionet bimore, mbetet ushqim i patretur etj.), pas së cilës përzierja lihet të qëndrojë 1-1,5 orë. Pas kësaj kohe, i gjithë filmi hiqet nga sipërfaqja e përzierjes duke prekur një lak teli ose platini (të sheshtë) me një diametër jo më shumë se 1 cm, të përkulur në një kënd të drejtë; Filmi tundet në një rrëshqitje xhami dhe mbulohet me një mbulesë. Vendosni 3-4 pika nën çdo rrëshqitje mbulese (18x18 mm). Në total duhet të përgatiten të paktën 4 preparate (një gotë mbuluese për çdo preparat). Laku nxehet mbi zjarr dhe lahet me ujë pas çdo analize.

Duke përdorur metodën Fulleborn, vezët e të gjitha nematodave (me përjashtim të vezëve të krimbave të pafertilizuara) dhe vezëve të krimbave xhuxh të shiritit zbulohen shpejt dhe lehtë.

Metoda Berman përdoret për të ekzaminuar feces për larvat e helminthit (për strongyloidiasis). Kjo metodë është si më poshtë: 5 g feçe në një rrjetë metalike (një kullesë qumështi është e përshtatshme për këtë qëllim) vendoset në një gyp qelqi të ngjitur në një trekëmbësh. Një tub gome me një kapëse vendoset në skajin e poshtëm të hinkës.

Rrjeta me feçe ngrihet dhe uji i ngrohur afërsisht në 50° derdhet në hinkë në mënyrë që pjesa e poshtme e rrjetës me jashtëqitje të zhytet në ujë. Larvat lëvizin në mënyrë aktive në ujë dhe grumbullohen në pjesën e poshtme të tubit të gomës. Pas 2-4 orësh hapet kapësja dhe lëngu kullohet në një ose dy tuba centrifugash.

Pas centrifugimit për 1-2 minuta, pjesa e sipërme e lëngut kullohet shpejt dhe sedimenti aplikohet me pika në rrëshqitëse qelqi dhe ekzaminohet nën kapak ose shpërndahet në një shtresë të hollë në 2-3 gota të mëdha dhe më pas ekzaminohet pa mbulesë. rrëshqet.

Metoda Berman përdoret gjithashtu për të testuar tokën për praninë e larvave të krimbit të gremisit.

Metoda Stoll

Metoda Stoll përdoret për të përcaktuar intensitetin e pushtimit. Një solucion decinormal i sodës kaustike derdhet në një enë qelqi të veçantë deri në shenjën 56 cm 3 dhe më pas shtohen feçet derisa niveli i lëngut të arrijë 60 cm 3, pra 4 cm 3. Pas tundjes me rruaza qelqi, merret për ekzaminim 0,075 ml nga përzierja dhe ekzaminohet nën një ose dy mbulesa të zakonshme. Sasia që rezulton shumëzohet me 200 për të marrë numrin e vezëve që përmbahen në 1 cm 3 feces.

Studimi i përmbajtjes duodenale

Lëngu duodenal dhe biliare cistike, të marra në mënyrën e zakonshme me sondë (dhe biliare cistike dhe pas një refleksi nga fshikëza e tëmthit), përzihen plotësisht me një vëllim të barabartë eter etilik; përzierja centrifugohet, pas së cilës sedimenti ekzaminohet në mikroskop. Përveç sedimentit, ekzaminim mikroskopik thekonet që notojnë në lëng, të cilat mund të përmbajnë vezë helminte, janë domosdoshmërisht të ekspozuara. Kur ekzaminoni vezët e helminthëve të lëngut gastrik dhe të vjellave, mund të përdorni të njëjtën teknikë.

Ekzaminimi i lëngut duodenal dhe përmbajtjes së stomakut duhet të bëhet nëse dyshoni sëmundjet helmintike mëlçia, fshikëza e tëmthit (opisthorchiasis, fascioliasis, dicroceliosis) dhe duodenum (strongyloidiasis).

Ekzaminimi i pështymës

Pështyma fërkohet në një pjatë qelqi, mbulohet fort me një pjatë tjetër qelqi dhe ekzaminohet me sy të lirë në një sfond të lehtë dhe të zi, si dhe nën një xham zmadhues në dritën e transmetuar. Pjesë të ndara të pështymës (akumulime "të ndryshkura", copëza indi, etj.) aplikohen në një shtresë të hollë në një rrëshqitës xhami, të mbuluara fort me një mbulesë dhe ekzaminohen me zmadhim të ulët dhe të lartë të mikroskopit.

a) Për diagnozën e cisticerkozës së lëkurës, indit nënlëkuror ose muskujve, një pjesë e prerë në mënyrë aseptike e indit përkatës ekzaminohet fillimisht me sy të lirë. Seksionet e indeve shpërndahen me ndihmën e gjilpërave disekuese në mënyrë që të zbulohet një vezikulë e dukshme me sy të lirë - një cysticercus (foto A); gjatësia e saj është 6-20 mm, gjerësia 5-10 mm. Kur zbulohet një vezikulë e dyshimtë për cisticercus, ajo shtypet midis dy rrëshqitjeve të qelqit dhe ekzaminohet nën një mikroskop. Cysticercus (Cistycercus cellulosae) përcaktohet nga prania e një skoleksi me katër thithëse dhe një korola grepash (foto B).

Foto. A - cisticerci me skoleks të kthyer nga jashtë; B - Koka e një shirit derri.

b) Për të diagnostikuar trikinozën, një pjesë muskulore e prerë në mënyrë aseptike (biceps ose gastrocnemius) shtypet me kujdes në një tretësirë ​​glicerine 50% në fijet më të imëta duke përdorur gjilpëra disekuese. Muskujt e shtypur janë të ngjeshur midis dy rrëshqitjeve të qelqit dhe ekzaminohen nën një mikroskop me fuqi të ulët në një fushë shikimi të errësuar. Rekomandohet të testoni muskujt për trikinozë jo më herët se në ditën e 8-të të sëmundjes. Larvat e trikinelës gjenden në muskuj në një pozicion të mbështjellë: ato janë të mbyllura në kapsula në formë limoni.

Foto. A - Larvat e trikinelës në muskuj; B — Kapsula të kalcifikuara të Trichinella.

rreze X

Më shpesh, fluoroskopia përdoret për të diagnostikuar ekinokokozën dhe, më rrallë, cisticerkozën. Cisticerkët zbulohen me fluoroskopi vetëm pas kalcifikimit (në raste sëmundje e zgjatur). Vitet e fundit, fluoroskopia është përdorur gjithashtu për të diagnostikuar askariazën si në fazën e hershme të larvës ashtu edhe pjesërisht në atë intestinale.

Gjatë periudhës së migrimit të larvave të krimbit të rrumbullakët (dhe të krimbit të gremisit), në mushkëri zbulohen vatra inflamatore të paqëndrueshme, ndonjëherë të shumta; në të njëjtën kohë, në gjak shfaqet eozinofilia e rëndësishme.

Krimbat e rrumbullakët të pjekur seksualisht janë qartë të dukshëm në fluoroskopinë e zorrëve të individëve të prekur. Kjo metodë, pavarësisht kompleksitetit dhe rëndimit të saj, duhet të përdoret si metodë shtesë për diagnostikimin e askariazës në rastet me analizë skatologjike negative. Sipas E. S. Geselevich, nga 180 pacientë me ascariasis të identifikuar me fluoroskopi, 54 nuk kishin asnjë vezë ascaris të gjetur në jashtëqitjen e tyre (shih).

7.7. Metodat për përcaktimin e qëndrueshmërisë së vezëve dhe larvave të helminthit

Qëndrueshmëria e vezëve të helminthit përcaktohet nga pamja e tyre, nga ngjyrosja me bojëra vitale, nga kultivimi në kushte optimale dhe vendosja e një kampioni biologjik.

7.7.1. Përcaktimi i qëndrueshmërisë së vezëve ose larvave të helminthit nga pamja

Vezët e helminthit mikroskopohen fillimisht me zmadhim të ulët, pastaj me zmadhim të lartë. Në vezët e helminthit të deformuara dhe të vdekura, guaska është e grisur ose e përkulur nga brenda, plazma është e turbullt dhe lirohet. Në vezët e segmentuara, topat dërrmues (blastomeret) janë të pabarabarta në madhësi, në formë të çrregullt dhe shpesh zhvendosen në një pol. Ndonjëherë ka vezë jonormale që, pavarësisht deformimeve të jashtme, zhvillohen normalisht. Në larvat e gjalla të krimbave të rrumbullakët, grimca e imët është e pranishme vetëm në pjesën e mesme të trupit; ndërsa ato vdesin, ajo përhapet në të gjithë trupin, shfaqen vakuola të mëdha hialine me shkëlqim, të ashtuquajturat "vargjet e perlave".

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të pjekura të krimbave të rrumbullakët, kamxhikut dhe krimbave, duhet të telefononi lëvizjet aktive larvat duke e ngrohur lehtë preparatin (në një temperaturë jo më të madhe se 37 °C). Është më i përshtatshëm për të vëzhguar qëndrueshmërinë e larvave të krimbit të rrumbullakët dhe krimbit të kamxhikut pasi ato janë izoluar nga lëvozhga e vezës duke shtypur xhamin e kapakut të preparatit me një gjilpërë disekuese ose piskatore.

Në larvat invazive të krimbit të rrumbullakët, një këllëf shpesh shihet duke u hequr në fund të kokës, dhe në larvat e krimbit të kamxhikut që kanë përfunduar zhvillimin në vezë, një stilet gjendet në këtë vend me zmadhim të lartë. Në larvat e ngordhura të helminthit, pavarësisht nga vendndodhja e tyre (në vezë ose jashtë saj), vërehet prishja e trupit. ku strukturën e brendshme Larva bëhet e grumbulluar ose e grimcuar, dhe trupi bëhet i turbullt dhe i errët. Vakuolat gjenden në trup, dhe thyerjet gjenden në kutikula.

Qëndrueshmëria e onkosferave taeniid (gjedhi, shirit derri, etj.) përcaktohet nga lëvizja e embrioneve kur ekspozohen ndaj enzimave tretëse. Vezët vendosen mbi xhami orë me lëng gastrik të qenit ose lëng artificial duodenal. Përbërja e kësaj të fundit: pankreatinë - 0,5 g, bikarbonat natriumi - 0,09 g, ujë i distiluar - 5 ml. Syzet e orës me vezë vendosen në një termostat në 36 - 38 ° C për 4 orë. Në këtë rast, embrionet e gjalla çlirohen nga membranat e tyre. Predhat e onkosferave të gjalla gjithashtu treten në pepsinën e acidifikuar dhe brenda tretësirë ​​alkaline tripsina pas 6 - 8 orësh në një termostat në 38 ° C.

Nëse vendosni vezë teniid në një tretësirë ​​1% të sulfurit të natriumit ose në një tretësirë ​​20% të hipoklorurit të natriumit, ose në një tretësirë ​​1% të ujit me klor në 36 - 38 ° C, embrionet e pjekura dhe të gjalla lirohen nga membranat dhe nuk ndryshim gjatë 1 dite. Onkosferat e papjekura dhe të ngordhura tkurren ose bymehen dhe zmadhohen ndjeshëm, dhe më pas “shpërndahen” brenda 10 minutave deri në 2 orë. Embrionet e gjalla taeniide lëvizin gjithashtu në mënyrë aktive në një përzierje prej 1% zgjidhje klorur natriumi, 0,5% tretësirë ​​bikarbonat natriumi dhe biliare në 36 - 38 °C.

Qëndrueshmëria e Adolescaria fascioli të mbledhura në bimë dhe objekte të tjera të trupave ujorë kontrollohet duke i ekzaminuar ato në një rrëshqitje xhami në një zgjidhje fiziologjike nën një mikroskop me një fazë ngrohjeje. Kur larvat e trematodës nxehen, ato fillojnë të lëvizin.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të krimbave xhuxh shirit, metoda më e thjeshtë është nga N.S. Ionina: në vezët e gjalla, çifti mesatar i grepave embrionalë është ose paralel me ato anësore, ose këto të fundit formojnë një kënd me mesataren në bazë më pak se 45°. Në vezët e ngordhura, çiftet anësore formojnë një kënd me çiftin mesatar në bazën më shumë se 45°, ose grepa shpërndahen rastësisht (rregullimi i tyre i çiftëzuar humbet); Ndonjëherë embrioni tkurret dhe formohen granula. Një metodë më e saktë bazohet në shfaqjen e lëvizjeve të onkosferës gjatë një ndryshimi të mprehtë të temperaturës: nga 5 - 10 ° në 38 - 40 ° C.

Përcaktimi i qëndrueshmërisë së vezëve të nematodës së papjekur duhet të studiohet në një dhomë të lagësht (enë Petri), duke i vendosur vezët ascaris në një solucion formaline 3% të përgatitur në një zgjidhje izotonike të klorurit të natriumit në një temperaturë prej 24 - 30 ° C, vezët e krimbit në 3 % tretësirë ​​e acidit klorhidrik në një temperaturë prej 30 - 35 ° C; vezët e krimbit në një solucion izotonik të klorurit të natriumit në një temperaturë prej 37 °C. Enët Petri duhet të hapen 1 - 2 herë në javë për ajrim më të mirë dhe të lagni përsëri letrën e filtrit. uje i paster.

Vëzhgimet e zhvillimit të vezëve të helminthit kryhen të paktën 2 herë në javë. Mungesa e shenjave të zhvillimit brenda 2-3 muajve tregon jo qëndrueshmërinë e tyre. Shenjat e zhvillimit të vezëve të helminthit janë së pari fazat e shtypjes, ndarja e përmbajtjes së vezës në blastomere të veçanta. Gjatë ditëve të para zhvillohen deri në 16 blastomere, të cilat kalojnë në fazën e dytë - morula etj.

Vezët e krimbit të ngjizjes kultivohen në një cilindër xhami (50 cm i lartë dhe 7 cm në diametër) i mbyllur me tapë. Një përzierje e vëllime të barabarta Rëra sterile, qymyri dhe feçet me vezë krimbash të holluar me ujë deri në një konsistencë gjysmë të lëngshme, derdhen me kujdes në fund të cilindrit duke përdorur një tub qelqi. Gjatë 1 - 2 ditëve të vendosjes në errësirë ​​në një temperaturë prej 25 - 30 ° C, larvat rabditoid çelin nga vezët dhe pas 5 - 7 ditësh ato bëhen tashmë filariforme: larvat zvarriten lart në muret e cilindrit, ku ato janë të dukshme edhe me sy të lirë.

Vezët trematode që zhvillohen natyrshëm në ujë, të tilla si opisthorchis, diphyllobothriids, fasciols dhe të tjera, vendosen në një gotë ore, një enë Petri ose në një enë tjetër dhe derdhet një shtresë e vogël me ujë të zakonshëm. Gjatë kultivimit të vezëve fasciola, duhet pasur parasysh se ato zhvillohen më shpejt në errësirë, ndërsa miracidiumi formohet në vezë të gjalla në një temperaturë prej 22-24 ° C pas 9-12 ditësh. Kur mikroskopi i zhvillimit të vezëve trematodë, lëvizjet e miracidiumit janë qartë të dukshme. Miracidium fasciola del nga lëvozhga e vezës vetëm në dritë.

Metoda Fulleborn. Larvat e krimbit të gjirit dhe të fortylideve kultivohen në agar në një enë Petri me qymyr të kafshëve. Pas mbajtjes në një termostat në një temperaturë prej 25 - 30 ° C për 5 - 6 orë, larvat përhapen mbi agar, duke lënë pas një shteg bakteresh.

Metoda Harada dhe Mori. Shtoni 7 ml ujë të distiluar në provëzat e vendosura në një raft. Duke përdorur një shkop druri, merrni 0,5 g feçe dhe bëni një njollë në letër filtri (15 x 150 mm) 5 cm nga buza e majtë (ky operacion kryhet në një fletë letre për të mbrojtur sipërfaqen e stolit të laboratorit). Pastaj shiriti me njollë futet në epruvetën në mënyrë që skaji i majtë i lirë nga njolla të arrijë në fund të epruvetës. Mbulojeni pjesën e sipërme me një copë celofan dhe mbështilleni fort me një brez elastik. Në provëz shënohet numri dhe mbiemri i personit që do të ekzaminohet. Në këtë gjendje, tubat ruhen për 8 - 10 ditë në një temperaturë prej 28 °C. Për të studiuar larvat, hiqni kapakun e celofanit dhe hiqni një rrip letre filtri me piskatore. Duhet pasur kujdes kur e bëni këtë pasi një numër i vogël larvash infektive mund të lëvizin në fundin e sipërm të letrës filtruese ose në anën e tubit dhe të depërtojnë nën sipërfaqen e celofanit.

Tubat vendosen në një banjë me ujë të nxehtë në 50 °C për 15 minuta, pas së cilës përmbajtja tundet dhe derdhet shpejt në një tub 15 ml për të sedimentuar larvat. Pas centrifugimit, supernatanti hiqet dhe sedimenti transferohet në një rrëshqitës xhami, mbulohet me një mbulesë dhe ekzaminohet mikroskopikisht me zmadhim të ulët.

Për diagnozën diferenciale të larvave filariforme, është e nevojshme të përdoren të dhënat në Tabelën 3.

Tabela 3

DIAGNOSTIKA DIFERENCIALE E LARVAVE FILARIOID TË A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, TRICHOStrONGYLUS SP.

Larvat	Dimensionet	Shenjat karakteristike
A. duodenale	Gjatësia e trupit rreth 660 µm, gjatësia e këllëfit - 720 nm	Shtrirja e kapakut është më pak e theksuar, zgjatja orale është më pak e dukshme, skaji i përparmë i trupit (por jo kapaku) është i hapur, diametri i tubit të zorrëve është më i vogël se llamba e ezofagut, skaji bishtor është i hapur.
N. americanus	Gjatësia e trupit rreth 590 mikron, gjatësia e këllëfit - 660 nm	Kapaku është dukshëm i strijuar, veçanërisht në pjesën kaudale të trupit, protuberanca orale duket e errët, skaji i përparmë i trupit (por jo kapaku) është i rrumbullakosur si një skaj i ngushtë. vezë pule, pjesa e përparme e tubit të zorrëve ka të njëjtin diametër me llambën e ezofagut, fundi kaudal është i mprehtë
S. stercoralis	Gjatësia e trupit rreth 500 mikron	Larva është pa këllëf, ezofagu është rreth gjysma e gjatësisë së trupit, bishti është i hapur ose i degëzuar
Trichostrongylus sp.	Gjatësia e trupit rreth 750 μm	Lumeni i zorrëve nuk është i drejtë, por zigzag, fundi i bishtit është i rrumbullakosur dhe i formuar si një buton

7.7.2. Metodat për ngjyrosjen e vezëve dhe larvave të helminthit

Indet e vdekura në shumicën e rasteve i perceptojnë bojërat më shpejt se ato të gjalla. Këto karakteristika përdoren në helmintologji për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve dhe larvave të helminthit. Megjithatë, në disa raste, disa bojëra perceptohen më mirë nga indet e gjalla sesa nga ato të vdekura.

Për të dalluar vezët dhe larvat e gjalla dhe të ngordhura, përdoren bojërat dhe metodat e mëposhtme.

Leukobaza metilen blu përdoret shpesh për të njollosur indet e gjalla dhe të vdekura. Qelizë e gjallë ose indi redukton blunë e metilenit në leukobazë të pangjyrë, indi i vdekur nuk e ka këtë aftësi, kështu që merr ngjyrë.

Kriteri për gjendjen e një veze është ngjyrosja e embrionit, por jo lëvozhga. Kjo aftësi lidhet me kushtet në të cilat veza vdes. Në rastet kur membrana fibroze në një vezë të ngordhur nuk i humbet vetitë e saj gjysmë të përshkueshme, ajo nuk do të lejojë kalimin e ngjyrave dhe për këtë arsye embrioni i vdekur nuk do të njolloset. Një embrion me ngjyrë tregon gjithmonë vdekjen e vezës.

Për të ngjyrosur vezët e krimbave të rrumbullakët, mund të përdorni blu metilen në një tretësirë ​​të acidit laktik me alkali kaustike (0,05 g blu metilen, 0,5 g hidroksid natriumi, 15 ml acid laktik). Vezët e gjalla nuk e perceptojnë ngjyrën; janë pikturuar në Ngjyra blu embrionet e vezëve të ngordhura. Ngjyrosja e larvave të krimbit të rrumbullakët me një zgjidhje bazë të bojës blu brilliantcresyl në një përqendrim 1:10000 kryhet si më poshtë: një pikë lëngu me vezë të krimbit të rrumbullakët dhe një pikë e tretësirës bazë të bojës aplikohen në një rrëshqitje xhami. Preparati mbulohet me një mbulesë, e cila shtypet fort në rrëshqitës, ndërsa preket lehtë me një gjilpërë disekuese. Numri i larvave që dalin dhe shkalla e ngjyrosjes së tyre vërehen nën një mikroskop; pas së cilës i njëjti medikament ekzaminohet sërish pas 2 - 3 orësh. Vetëm larvat e padeformuara që nuk janë ngjyrosur për 2 orë konsiderohen të gjalla. Larvat e ngordhura ose nuk dalin nga vezët, ose bëhen me ngjyrë kur lëvozhga thyhet (pjesërisht ose plotësisht).

Gjatë përcaktimit të qëndrueshmërisë së vezëve të krimbave të shpendëve, është e mundur që preparatet të njollosen me 5% tretësirë ​​alkooli Yoda. Kur aplikohet në preparat, mikrobet e vezëve të vdekura të Ascaridia ndodhin brenda 1 - 3 sekondave. janë lyer me ngjyrë portokalli.

Vezët e ngordhura të opisthorchis dhe onkosferat e shiritit të gjedhit ngjyrosen me një tretësirë ​​të blusë toluidine (1:1000) dhe onkosferat e krimbit të ngordhur të gjedhit me një zgjidhje të blusë brilante kresil (1:10000). Në të njëjtën kohë, embrionet dhe lëvozhgat e vezëve të vdekura dhe të gjalla marrin ngjyrë. Prandaj, pas ngjyrosjes, vezët dhe onkosferat lahen uje i paster dhe gjithashtu i lyejmë me safranin (të holluar 1:10000 në alkool 10 °C). Alkooli heq bojën nga predha dhe safranin e kthen atë në të kuqe. Si rezultat, vezët e gjalla bëhen të kuqe; vezët me embrione të vdekur bëhen blu, por lëvozhga mbetet e kuqe. Embrionet e ngordhura të onkosferave të shiritit të gjedhit shpejt, brenda pak minutash, ngjyrosen me ngjyrë të kuqe të ndezur ose rozë me safranin ose blu me blu të shkëlqyeshme kresil në një hollim 1:4000, ose me karmine indigo në një hollim 1:1000 - 1:2000 . Embrionet e gjalla nuk ndryshojnë nën ndikimin e këtyre bojrave edhe pas 2 - 7 orësh.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të krimbave xhuxh, rekomandohet të përdorni bojërat e mëposhtme:

1. Blu brilliantkreasyl (1:8000) - pas 1 ore, onkosfera e vezëve të ngordhura merr ngjyrë veçanërisht të ndezur, e cila bie në sy në sfondin e zbehtë ose të pangjyrë të pjesës tjetër të vezës.

2. Safranin (1:8000 kur ekspozohet për 2 orë dhe 1:5000 për 3 - 5 orë).

3. Tretësirë ​​50% e acidit pirogalik në një hollim 1:2 - kur ekspozohet për 1 orë në një temperaturë prej 29 - 30 ° C (sa më e ulët të jetë temperatura, aq më i gjatë është procesi i ngjyrosjes).

7.7.3. Metoda lumineshente për studimin e vezëve dhe larvave të helminthit

Mikroskopia fluoreshente bën të mundur dallimin midis objekteve të gjalla dhe të vdekura pa dëmtuar vezën. Nuk përdoret për fluoreshencë rrezet ultraviolet, dhe pjesa blu-vjollcë e dritës së dukshme, me një mikroskop konvencional dhe rrëshqitës xhami; Një grup i veçantë filtrash me ngjyra i shtohet ndriçuesit OI-18.

Vezët e gjalla dhe të ngordhura të krimbave të rrumbullakët, gjilpërave, shiritave xhuxh, shiritave të gjedhit, shiritave të gjera dhe helminthëve të tjerë fluoreshenojnë ndryshe. Kjo dukuri vërehet si gjatë lumineshencës parësore pa përdorimin e ngjyrave, ashtu edhe kur ngjyroset me fluorokrom (akridine portokalli, korifosfinë, primulinë, auroline, sulfat berlerin, tripaflavinë, rivanol, akrinë etj.).

Vezët e krimbave të rrumbullakët pa ngjyrë, të gjalla, të pa segmentuara shkëlqejnë jeshile e ndezur me një nuancë të verdhë; në vezët e ngordhura lëvozhga rrezaton dritë e gjelbër shumë më e ndritshme se pjesa embrionale e gjelbër e errët; Në vezët e krimbave të rrumbullakët me një larvë, shfaqet vetëm lëvozhga, dhe në vezët e ngordhura, si lëvozhga ashtu edhe larva janë të verdhë të ndezur.

Vezët e gjalla të papigmentuara dhe të pasegmentuara të krimbave pink dhe të shiritave xhuxh lëshojnë një dritë jeshile-verdhë; lëvozhga e vezëve të ngordhura ndriçon intensivisht në sfondin e një mase embrionale të gjelbër të errët.

Me luminescencë dytësore (kur ngjyroset me portokall akridine në një hollim 1:10,000 dhe 1:50,000 nga 30 minuta në 2 orë), guaska e nematodeve të gjalla dhe të vdekura, trematodeve dhe cestodave ndriçon ndryshe.

Lëvozhgat e vezëve të gjalla dhe të ngordhura të krimbave të rrumbullakët, toksokarës, krimbave të gjilpërave, shiritave xhuxh, shiritave të minjve, krimbave të shiritit të demit dhe krimbave shirit janë me ngjyrë portokalli-kuqe. Embrionet e vezëve të gjalla të krimbave të rrumbullakët, toxascaris, shiritave të minjve, krimbave të gjerë shirit dhe onkosferave të shiritave të gjedhit fluoreshenojnë jeshile e errët ose ngjyrë gri-jeshile. Vezët embrionale të vdekura të këtyre helminthëve lëshojnë një ngjyrë "të djegur" portokalli-të kuqe. Larvat e krimbit të gjallë dhe toxocara (lëvozhgat e vezëve të liruara) lëshojnë një dritë të shurdhër gri-jeshile; kur ato vdesin, ngjyra ndryshon nga fundi i kokës në një jeshile të lehtë "djegëse", pastaj në të verdhë, portokalli dhe në fund portokalli të ndezur.

Kur ngjyroset me fluorokrom - korifosfili, primulina, vezët e ngordhura të krimbave të rrumbullakët dhe krimbave të kamxhikut shfaqin një shkëlqim nga e verdha jargavan në të kuqe bakri. Vezët e qëndrueshme nuk ndriçojnë, por janë lyer me jeshile të errët.

Vezët e gjalla të trematodave (paragonimus dhe clonorchis) nuk shkëlqejnë kur njollosen me akridine portokalli, por vezët e ngordhura prodhojnë një ngjyrë të verdhë-jeshile.

Metoda e lumineshencës mund të përdoret gjithashtu për të përcaktuar qëndrueshmërinë e larvave të helminthit. Kështu, larvat e fortë dhe rhabditatus të fluorokromuara me një zgjidhje të portokallit akridine (1:2000) shkëlqejnë: të gjalla - jeshile (me një nuancë), ato të vdekura - me një dritë të ndritshme portokalli.

Miracidet e gjalla që dalin nga guaska lëshojnë një dritë të zbehtë kaltërosh me një kurorë mezi të dukshme të verdhë të qerpikëve, por 10 - 15 minuta pas vdekjes ato shfaqen me një dritë jeshile të ndritshme "djegie", dhe më pas dritë portokalli-kuqe.

7.7.4. Metoda e mostrës biologjike

Për shembull, për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve ascarid (krimbi i derrit, krimbi i njeriut, Toxocara, Toxascaris, etj.) për kafshë (derra gini, minj) ju nevojiten të paktën 100 - 300 vezë me larva të zhvilluara. Vezët e Ascaris në një solucion izotonik të klorurit të natriumit futen me pipetë përmes gojës së një miu ose derri gini. Pas 6-7 ditësh, kafsha theret, mëlçia dhe mushkëritë e saj hapen dhe ekzaminohen veçmas për praninë e larvave askaridate. Për ta bërë këtë, mëlçia dhe mushkëritë priten në copa të vogla me gërshërë dhe ekzaminohen duke përdorur metodën Berman ose Supryaga (seksioni 6.1.2).

Nëse kafshët janë infektuar me vezë të gjalla pushtuese, atëherë pas autopsisë, larvat e ascarideve migruese gjenden në mëlçi dhe mushkëri.

Në rast infeksioni, vezët Fasciola në feçet e kafshëve laboratorike mund të zbulohen te lepujt pas 2 muajsh, në derra nga Guinea- pas 50 ditësh, në minj - pas 35 - 40 ditësh.

Për të marrë më shpejt një përgjigje, kafshët laboratorike hapen pas 20 - 30 ditësh dhe mëlçia ekzaminohet për praninë e fascioli të rinj.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të krimbave xhuxh, rekomandohet gjithashtu t'i ushqeni ato te minjtë e bardhë të pa infektuar më parë, pasuar nga hapja e kafshëve pas 92-96 orësh dhe identifikimi i cisticerkoideve në vilet e zorrëve ose cestodave në lumenin e zorrëve.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të opisthorchis, rekomandohet një metodë (German S.M., Baer S.A., 1984), bazuar në aktivizimin fiziko-kimik të gjëndrës së çeljes së miracidiumit dhe stimulimin. aktiviteti motorik larva, e cila çon në hapjen e kapakut të vezës dhe lirimin aktiv të miracidiumit në kushte eksperimentale.

Pezullimi i vezëve të opisthorchis në ujë ftohet paraprakisht në 10 - 12 °C (të gjitha operacionet e mëvonshme kryhen në temperaturën e dhomës 19 - 20 °C). 1 pikë suspensioni që përmban 100 - 150 vezë shtohet në një tub centrifuge. Provëza vendoset në një stendë për 5 - 10 minuta. Gjatë kësaj kohe, të gjitha vezët arrijnë të zhyten në fund. Më pas uji i tepërt thithet me kujdes me një rrip letre filtri dhe në provëz hidhen 2 pika të një mediumi special. Mjeti përgatitet në tampon Tris-HCl 0,005 M; një solucion 12 - 13% etanol dhe një ngjyrues (fuksin, safranin, eozinë, blu metilen, etj.) i shtohen buferit. Provëza tundet, përmbajtja e saj hidhet me pipetë në një rrëshqitës xhami dhe lihet për 10 minuta, duke u tundur pak. Pastaj shtoni 2 pika të mediumit të specifikuar. Preparati është gati për mikroskopi nën një mikroskop konvencional me dritë me zmadhim 20x.

Gjatë kësaj kohe, kapaku i larvave të qëndrueshme hapet dhe miracidiumi del në mënyrë aktive në mjedisin e specifikuar. Falë pranisë së etanolit në të, ato imobilizohen pas 2 - 5 minutash dhe më pas lyhen me bojë. Ato mund të zbulohen dhe numërohen lehtësisht me mikroskop.