Analiza për sifilizin ELISA - interpretimi i analizës. Norma dhe devijimet

Në lidhje me zhvillimin e teknologjive qelizore, biologjisë molekulare, gjenetikës, fizikës, kimisë dhe një sërë disiplinash të tjera të teknologjisë së lartë, metoda të reja me precizion të lartë dhe të teknologjisë së lartë po futen në praktikën e përditshme. Këto prirje ndërdisiplinore prekin si fushën e njohurive mjekësore ashtu edhe fushat e lidhura me problemet biologjike dhe biokimike. Gjatë dhjetë viteve të fundit, një metodë diagnostike laboratorike klinike e quajtur immunoassay enzimë është bërë e përhapur dhe është futur në praktikën masive.

Në përgjithësi, teknologjitë e reaksioneve imunologjike enzimatike dhe radiologjike janë përdorur gjerësisht në tipizimin e qelizave, kulturave qelizore dhe indeve të ndryshme që nga fillimi i viteve 80 të shekullit të 20-të. Megjithatë, këto metoda ishin shumë intensive të punës, jo të unifikuara, të pa standardizuara, gjë që përjashtonte përdorimin e tyre për qëllime diagnostikuese dhe trajtimi në një shkallë masive. Metoda të tilla përdoreshin vetëm nga laboratorë të ngushtë, me njohuri intensive dhe shumë të specializuara.

Megjithatë, me zhvillimin e teknologjisë, mikroteknologjisë dhe prodhimin e materialeve të ndryshme biopolimere, është bërë e mundur të prodhohen komplete të gatshme diagnostikuese imunosorbente të lidhura me enzimat, të cilat mund të përdoren nga laboratorët e institucioneve të përgjithshme mjekësore. ELISA përdoret gjerësisht për diagnostikimin e të gjitha llojeve të infeksioneve (klamidia, sifilis, citomegalovirus, toksoplazmozë, herpes etj.), si akute dhe kronike, si dhe format latente që ndodhin pa simptoma klinike.Kjo metodë përdoret edhe për të kontrolluar sëmundjet kronike. . Le të përpiqemi të kuptojmë se çfarë lloj metode është kjo dhe cilat parime e mbështesin atë?

Komponentët e imunotestit enzimë - reaksioni imunitar dhe reaksioni enzimatik

Analiza e imunitetit enzimë, siç sugjeron emri, përbëhet nga dy komponentë të ndryshëm - një reaksion imunitar dhe një reaksion enzimatik. Reaksioni imunitar prodhon lidhjen e molekulave biologjike, elementeve të një qelize ose mikroorganizmi, të cilat ata në të vërtetë po përpiqen t'i zbulojnë, dhe reaksioni i enzimës ju lejon të shihni dhe matni rezultatin e reaksionit imunologjik. Kjo do të thotë, reaksioni imunitar është pjesë e një teknike komplekse që në të vërtetë zbulon mikrobin e dëshiruar. Dhe reaksioni i enzimës është ajo pjesë e një teknike komplekse që ju lejon të shndërroni rezultatin e reaksionit imunitar në një formë të dukshme për syrin dhe të arritshme për matje duke përdorur teknika kimike rutinë. Bazuar në këtë strukturë të metodës së imuno-analizimit enzimë, ne do të analizojmë veçmas të dyja pjesët e saj.

Reagimi imunitar, çfarë është? Çfarë është një antitrup apo antigjen?

Çfarë është një përgjigje imune? Çfarë është një antigjen?
Para së gjithash, le të shohim se cilat janë reagimet imune. Reagimet imune- këto janë reagime specifike të lidhjes së një antigjeni me një antitrup me formimin e një kompleksi imunitar. Çfarë do të thotë? Në sipërfaqen e çdo qelize të çdo organizmi ka struktura të veçanta të quajtura antigjenet. Antigjenet në përgjithësi janë molekula që mbajnë informacion për një qelizë (të ngjashme me informacionin në simbolin e një personi, i cili tregon të dhënat bazë të atij personi).

Antigjenet individuale dhe të specieve - cilat janë ato? Pse nevojiten këto antigjene?

Në dispozicion antigjenet individuale, domethënë e natyrshme vetëm për këtë organizëm të veçantë. Këto antigjene individuale janë të ndryshme për të gjithë njerëzit; ka disa që janë të ngjashëm me njëri-tjetrin, por ende të ndryshëm. Nuk ka dy kopje identike të antigjeneve individuale në natyrë!

Lloji i dytë kryesor i antigjenit është antigjenet e specieve, domethënë e natyrshme në çdo lloj specifik të qenieve të gjalla. Për shembull, njerëzit kanë antigjenin e llojit të tyre, të përbashkët për të gjithë njerëzit, minjtë kanë antigjenin e tyre të specieve të miut, etj. Në sipërfaqen e çdo qelize, një antigjen specifik dhe individual është domosdoshmërisht i pranishëm.

Antigjeni i llojit përdoret nga qelizat e sistemit imunitar për të njohur "mikun ose armikun".

Si ndodh njohja e antigjenit?

Qeliza imune kontakton qelizën e dyshimtë dhe bën një identifikim bazuar në antigjenin individual. Në kujtesën e qelizës imune, "shënohet" se si duket "antigjeni i saj". Kështu, nëse antigjeni i një qelize të dyshimtë përputhet me përshkrimin "antigjen i vetvetes", atëherë kjo qelizë e trupit nuk përbën rrezik. Pastaj qeliza imune "zgjidh" dhe largohet. Dhe nëse antigjeni nuk përputhet me përshkrimin e "vetes", atëherë qeliza imune e identifikon këtë qelizë si "të huaj", dhe për këtë arsye potencialisht të rrezikshme për të gjithë organizmin. Në këtë rast, qeliza imune nuk "lirohet", por fillon të shkatërrojë objektin e rrezikshëm. Saktësia e një njohjeje të tillë imunologjike është e mahnitshme - 99.97%. Praktikisht nuk ka gabime!

Çfarë është një antitrup, kompleks imunitar?
Çfarë është një antitrup?

Një antitrup është një molekulë e veçantë e vendosur në sipërfaqen e një qelize imune. Është antitrupi që lidhet me antigjenet e qelizës së dyshimtë. Më pas, antitrupi transmeton informacion brenda qelizës, ku ndodh njohja, dhe merr një sinjal kthimi të dy llojeve, "vetë" ose "i huaj". Kur merr një sinjal "vetë", antitrupi thyen lidhjen me antigjenin dhe liron qelizën.

Çfarë është një kompleks imunitar?
Kur sinjali është "i huaj", situata shpaloset ndryshe. Antitrupi nuk e prish lidhjen me antigjenin, por, përkundrazi, duke dërguar sinjale specifike, shkakton "përforcim". Biologjikisht, kjo do të thotë që antitrupat e tjerë të vendosur në një pjesë tjetër të qelizës fillojnë të lëvizin në vendin nga vjen sinjali i rrezikut dhe gjithashtu formojnë një lidhje midis tyre dhe antigjenit të kapur. Në fund, antigjeni rezulton i rrethuar nga të gjitha anët dhe i lidhur fort.Ky kompleks antigjen + antitrup quhet kompleksi imunitar. Nga ky moment fillon përdorimi i antigjenit. Por tani ne nuk jemi të interesuar për detajet e procesit të neutralizimit të antigjenit.

Llojet e antitrupave (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Antitrupat janë struktura proteinike që, në përputhje me rrethanat, kanë një emër kimik, i cili përdoret si sinonim për fjalën antitrup. Kështu që, antitrupa = imunoglobulina.

Ekzistojnë 5 lloje imunoglobulinash (Ig), të cilat lidhen me lloje të ndryshme antigjenesh në vende të ndryshme të trupit të njeriut (për shembull, në lëkurë, në mukozën, në gjak, etj.). Kjo do të thotë, antitrupat kanë një ndarje të punës. Këto imunoglobulina quhen me shkronjat e alfabetit latin - A, M, G, D, E dhe përcaktohen si më poshtë - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Në diagnozë, përdoret vetëm një lloj antitrupi, i cili është më specifik për mikrobin që zbulohet. Kjo do të thotë, lidhja e këtij lloji të antitrupave me antigjenin e zbuluar ndodh gjithmonë. Më të përdorurat janë IgG dhe IgM.

Është ky parim i reaksionit imunitar (saktësia unike dhe specifika e njohjes së objektit biologjik që përcaktohet) që qëndron në themel të analizës së enzimës. me e larta.

Reaksioni enzimatik

Cili reaksion është enzimatik? Cilat janë afiniteti, substrati dhe produkti i një reaksioni?
Le të kalojmë në shqyrtimin e reaksionit enzimatik në punën e metodës së imunitetit të enzimës.

Çfarë është një reaksion enzimatik?

Një reaksion enzimatik është një reaksion kimik në të cilin një substancë shndërrohet në një tjetër nga veprimi i një enzime. Substanca mbi të cilën vepron enzima quhet substrate. Dhe substanca që përftohet si rezultat i veprimit të një enzime quhet produkt i reagimit. Për më tepër, veçantia e reaksionit enzimatik është e tillë që një enzimë e caktuar vepron vetëm në një substrat të caktuar. Kjo veti e një enzime për të njohur substratin "e saj" quhet afiniteti.

Kështu, çdo enzimë kryen vetëm një reagim specifik për të. Ka shumë enzima të njohura në botën biologjike, si dhe reaksione enzimatike. Në diagnostikimin imunosorbentë të lidhur me enzimat, përdoren vetëm disa reaksione enzimatike - jo më shumë se 10. Në të njëjtën kohë, u zgjodhën reaksione të tilla enzimatike, produkt i të cilave janë substanca me ngjyrë. Pse duhet të ngjyrosen produktet e një reaksioni enzimatik? Sepse për të llogaritur përqendrimin e një substance nga një zgjidhje me ngjyrë, ekziston një metodë e thjeshtë kimike - kolorimetria.

Metoda e kolorimetrisë - thelbi dhe parimi

Kolorimetria përdor matjen e densitetit të ngjyrës së një solucioni, dhe përqendrimi i substancës llogaritet nga dendësia e ngjyrës.Në këtë rast, një pajisje speciale - një kolorimetër mat densitetin e ngjyrës së tretësirës. Në kolorimetri, ekzistojnë dy opsione të mundshme për varësinë e densitetit të ngjyrës nga përqendrimi i një substance - një varësi proporcionale drejtpërdrejt ose një varësi proporcionale e kundërt. Me një marrëdhënie proporcionale, sa më i lartë të jetë përqendrimi i substancës, aq më intensiv është densiteti i ngjyrës së tretësirës. Me një marrëdhënie të kundërt proporcionale, sa më i lartë të jetë përqendrimi i substancës, aq më i ulët është densiteti i ngjyrës së tretësirës. Teknikisht, kjo ndodh kështu: merren disa tretësira me një përqendrim të njohur të një substance, matet dendësia e këtyre tretësirave dhe ndërtohet një grafik i varësisë së përqendrimit nga dendësia e ngjyrës ( grafiku i kalibrimit).

Më pas matet dendësia e ngjyrës së tretësirës, ​​përqendrimi i së cilës përcaktohet dhe nga grafiku i kalibrimit gjendet vlera e përqendrimit që i përgjigjet nivelit të densitetit të matur të ngjyrës së tretësirës.Në kolorimetrat automatikë modernë, kalibrimi është kryhet vetëm një herë, atëherë pajisja vetë ndërton një kurbë kalibrimi, e cila mbetet në kujtesën e pajisjes dhe matja bëhet automatikisht.

Enzimat e mëposhtme përdoren më shpesh në analizën enzimatike: peroksidaza, fosfataza alkaline, avidina.

Si kombinohen reaksionet imunologjike dhe enzimatike në një analizë enzimatike imunologjike? Tani do të vazhdojmë të shqyrtojmë vetë analizën e imunitetit të enzimës. Cilat faza përfshin dhe çfarë ndodh gjatë këtyre reagimeve? Analiza e imunitetit enzimë mund të jetë direkte dhe indirekte.

Analiza direkte e imunitetit të enzimës - fazat e zbatimit

Në një analizë të drejtpërdrejtë enzimë imunologjike, përdoren antitrupa ndaj antigjenit të zbuluar, të kombinuara me një etiketë specifike. Ky emërtim specifik është substrati i reaksionit enzimatik.

Ngjitja e antigjeneve në sipërfaqen e pusit dhe kombinimi i antigjenit me antitrupat

Si kryhet imunoterapia direkte me enzimë? Merret materiali biologjik (gjaku, gërvishtjet nga mukozat, njollat) dhe vendoset në vrima të veçanta. Materiali biologjik lihet në puse për 15-30 minuta në mënyrë që antigjenet të ngjiten në sipërfaqen e puseve. Më pas, antitrupat ndaj antigjenit të zbuluar shtohen në këto puse. Kjo do të thotë që kur zbulohen antigjenet, për shembull, sifilizi, shtohen antitrupa kundër antigjeneve të sifilizit. Këto antitrupa merren në mënyrë industriale dhe laboratorët blejnë komplete të gatshme.Kjo përzierje e materialit testues dhe antitrupave lihet për një kohë (nga 30 minuta deri në 4-5 orë) në mënyrë që antitrupat të gjejnë dhe të kontaktojnë antigjenin “e tyre”. Sa më shumë në kampionin biologjik të antigjeneve, aq më shumë antitrupa do të lidhen me to.

Heqja e antitrupave "shtesë".

Siç tregohet, antitrupat shoqërohen gjithashtu me një etiketë specifike. Meqenëse antitrupat shtohen me tepricë, jo të gjithë ata do të lidhen me antigjenet, dhe nëse nuk ka antigjen në mostër, atëherë, në përputhje me rrethanat, asnjë antitrup i vetëm nuk do të lidhet me antigjenin e dëshiruar. Për të hequr antitrupat "shtesë", përmbajtja nga puset thjesht derdhet. Si rezultat i kësaj, të gjitha antitrupat "shtesë" hiqen, dhe ato që janë lidhur me antigjenet mbeten, pasi antigjenet "ngjiten" në sipërfaqen e puseve. Puset shpëlahen disa herë me një zgjidhje të veçantë, e cila ju lejon të lani të gjithë antitrupat "shtesë".

Më tej, fillon faza e dytë - reaksioni enzimatik. Një tretësirë ​​me enzimë shtohet në pusetat e lara dhe lihet për 30-60 minuta. Kjo enzimë ka një afinitet për substancën (etiketën specifike) me të cilën lidhen antitrupat. Enzima kryen një reaksion që e shndërron këtë etiketë specifike (substrat) në një substancë (produkt) me ngjyrë. Më pas, duke përdorur kolorimetrinë, gjendet përqendrimi i kësaj substance me ngjyrë. Meqenëse kjo etiketë specifike shoqërohet me antitrupa, do të thotë që përqendrimi i produktit të reagimit me ngjyrë është i barabartë me përqendrimin e antitrupave. Dhe përqendrimi i antitrupave është i barabartë me përqendrimin e antigjeneve. Kështu, si rezultat i analizës, marrim një përgjigje për përqendrimin e mikrobit ose hormonit të zbuluar.

Kjo është pikërisht mënyra se si funksionon analiza e drejtpërdrejtë e imunitetit të enzimës. Megjithatë, sot përdoret më shpesh analiza e imunitetit indirekt me enzimë, pasi ndjeshmëria dhe saktësia e indirektit është më e lartë se e drejtpërdrejtë. Pra, le të kalojmë në analizën e imunitetit indirekt të enzimës.

Analiza indirekte e enzimës - fazat e zbatimit

Ekzistojnë dy faza në analizën e imunitetit të enzimës indirekte. Gjatë fazës së parë, përdoren antitrupa të paetiketuar ndaj antigjeneve të zbuluara, dhe në fazën e dytë, përdoren antitrupa të etiketuar ndaj antitrupave të parë të paetiketuar. Kjo do të thotë, nuk është lidhje e drejtpërdrejtë e një antitrupi me një antigjen, por një kontroll i dyfishtë: lidhja e antitrupave me një antigjen, e ndjekur nga lidhja e antitrupave të dytë me kompleksin antitrup + antigjen. Si rregull, antitrupat për fazën e parë janë të miut, dhe për të dytën - dhisë.

Fiksimi i antigjeneve në sipërfaqen e pusit dhe lidhja e antigjenit me një antitrup të paetiketuar
Ashtu si për imuno-analizimin e drejtpërdrejtë të enzimës, mblidhet materiali biologjik - gjak, gërvishtje, njolla. Materiali biologjik në studim futet në puse dhe lihet 15-30 minuta që antigjenet të ngjiten në sipërfaqen e puseve. Pastaj antitrupat e paetiketuar ndaj antigjeneve shtohen në puset dhe lihen për një periudhë kohe (1-5 orë) në mënyrë që antitrupat të lidhen me antigjenet "e tyre" dhe të formojnë një kompleks imunitar ( Hapi i parë). Pas kësaj, antitrupat "shtesë" të palidhur hiqen duke derdhur përmbajtjen e puseve. Lani me një zgjidhje të veçantë për të hequr plotësisht të gjithë antitrupat e palidhur.

Lidhja e antitrupave të etiketuar me antigjenin + kompleksin e antitrupave të paetiketuar
Pas së cilës ata marrin antitrupat e dytë të etiketuar, i shtojnë ato në puse dhe përsëri i lënë për një kohë - 15-30 minuta ( faza e dytë). Gjatë kësaj kohe, antitrupat e etiketuar lidhen me të parët - ato të paetiketuara - dhe formojnë një kompleks - antitrup + antitrup + antigjen. Megjithatë, të dy antitrupat e etiketuar dhe të paetiketuar shtohen në puset me tepricë. Prandaj, është e nevojshme që përsëri të hiqen antitrupat "ekstra" tashmë të etiketuar që nuk janë lidhur me antitrupat e paetiketuar. Për ta bërë këtë, përsëritni procedurën e derdhjes së përmbajtjes së puseve dhe larjes me një zgjidhje të veçantë.

Reaksioni enzimatik - formimi i një përbërjeje me ngjyrë
Pas kësaj, shtohet një enzimë që kryen reagimin e shndërrimit të "etiketës" në një substancë me ngjyrë. Ngjyra zhvillohet brenda 5-30 minutave. Më pas kryhet kolorimetria dhe llogaritet përqendrimi i substancës së ngjyrosur. Meqenëse përqendrimi i substancës së ngjyrosur është i barabartë me përqendrimin e antitrupave të etiketuar, dhe përqendrimi i antitrupave të etiketuar është i barabartë me përqendrimin e antitrupave të paetiketuar, i cili, nga ana tjetër, është i barabartë me përqendrimin e antigjenit. Kështu, marrim përqendrimin e antigjenit të zbuluar.
Ky kontroll i dyfishtë në formën e përdorimit të dy llojeve të antitrupave bëri të mundur rritjen e ndjeshmërisë dhe specifikës së metodës së imunotestit enzimë. Pavarësisht zgjatjes së kohës së analizës dhe përfshirjes së fazave shtesë, këto humbje kompensohen nga saktësia e rezultatit. Kjo është arsyeja pse aktualisht shumica dërrmuese e metodave të imuno-analizimit enzimë janë analiza indirekte enzimatike.

Cilat sëmundje zbulohen me anë të analizës enzimatike?

Le të vazhdojmë të shqyrtojmë se cilat sëmundje dhe cilat substanca biologjikisht aktive zbulohen nga analiza e imunitetit të enzimës. Substancat e zbuluara nga analiza enzimatike janë paraqitur në tabelë.

Hormonet dhe shënuesit e sëmundjes së tiroides	Peroksidaza e tiroides (TPO)
	Tiroglobulina (TG)
	Hormoni stimulues i tiroides (TSH)
	Tiroksina (T4)
	Triiodothyronine (T3)
	Tiroksinë e lirë (T4)
	Triiodothyronine falas (T3)
Diagnoza e funksionit riprodhues	Hormoni luteinizues (LH)
	Hormoni stimulues i folikulit (FSH)
	Prolaktina
	Progesteroni
	Estradiol
	Testosteroni
	Kortizoli
	Globulina lidhëse steroide (SBG)
	Alfafetoproteina (AFP)
Markuesit e tumorit	Gonadotropina korionike (CG)
	Antigjeni specifik për prostatën (PSA)
	SA – 125
	SA – 19.9
	CYFRA-21-1
	M – 12 (SA – 15.3)
	MUC – 1 (M – 22)
	MUC1 (M – 20)
	Alveomucina
	K – zinxhir
	L - zinxhir
	Faktori i nekrozës së tumorit (TNFα)
	γ – interferon
	Antigjeni karcinoembrional (CEA)
Diagnoza e sëmundjeve infektive

ELISA është një test laboratorik modern që kërkon antitrupa specifikë në gjak (ose antigjene) ndaj sëmundjeve specifike për të identifikuar jo vetëm etiologjinë, por edhe fazën e sëmundjes.

1. kërkimi i antitrupave specifikë ndaj ndonjë sëmundjeje infektive;
2. kërkimi i antigjeneve të ndonjë sëmundjeje infektive;
3. studimi i statusit hormonal të pacientit;
4. depistimi për praninë e sëmundjeve autoimune.

Si çdo metodë e diagnostikimit laboratorik, ELISA ka avantazhet dhe disavantazhet e saj. Përparësitë e metodës përfshijnë:

1. specifikiteti dhe ndjeshmëria e lartë e metodës (më shumë se 90%);
2. aftësia për të përcaktuar sëmundjen dhe për të gjurmuar dinamikën e procesit, domethënë krahasimin e numrit të antitrupave në periudha të ndryshme kohore;
3. aksesueshmëria dhe shpejtësia e këtij hulumtimi;
4. metodë jo-invazive e mbledhjes së materialit, jo kërkimore;

Disavantazhi i metodës është fakti se gjatë analizës është e mundur të identifikohet jo agjenti shkaktar i vetë sëmundjes, por vetëm përgjigja imune ndaj saj (antitrupat).

Thelbi i metodës ELISA

Ekzistojnë disa lloje të ELISA: direkte, indirekte, metoda bllokuese, konkurruese. Megjithatë, në praktikë, analiza heterogjene imunosorbente e lidhur me enzimën, ose ELISA, përdoret më shpesh.

Baza e imuno-analizimit enzimë është reaksioni imunitar i një antigjeni dhe një antitrupi me formimin e një kompleksi imunitar, duke rezultuar në një ndryshim në aktivitetin enzimatik të shenjave specifike në sipërfaqen e antitrupave.

Në thelb, ky proces mund të ndahet në disa faza:

1. në sipërfaqen e puseve të tabletës së sistemit të testimit ekziston një antigjen i pastruar i një patogjeni specifik. Kur shtohet serumi i gjakut të kafshëve, ndodh një reaksion specifik midis këtij antigjeni dhe antitrupit të dëshiruar;
2. Më pas, një kromogen i veçantë (konjugat i etiketuar me peroksidazë) shtohet në pus. Ndodh një reaksion enzimatik, i cili rezulton në formimin e një substance me ngjyrë në pusin e pllakës. Intensiteti i ngjyrës së tij varet nga sasia e imunoglobulinave (antitrupave) që përmbahen në serumin e kafshës;
3. Pastaj rezultati vlerësohet. Duke përdorur një spektrofotometër shumëkanalësh, densiteti optik i materialit testues krahasohet me densitetin optik të mostrave të kontrollit dhe rezultatet përpunohen matematikisht. Sasia e antitrupave në një pacient varet drejtpërdrejt nga lartësia e densitetit optik të një pusi të caktuar.

Duhet mbajtur mend: për çdo sistem testimi, zhvillohen tregues individualë për të regjistruar rezultatet, treguesit e normalitetit dhe patologjisë ("vlerat e referencës"). Kjo duhet të merret parasysh kur vlerësohen rezultatet e secilit studim specifik.

Është e gabuar të interpretohen rezultatet e një laboratori bazuar në "vlerat referuese" të një laboratori tjetër. Është gjithashtu e gabuar të krahasohen rezultatet e laboratorëve të ndryshëm me njëri-tjetrin.

Kur vlerësohen rezultatet për infeksione specifike, klasa e antitrupave të zbuluar dhe sasia e tyre janë të rëndësishme. Nga kjo varet jo vetëm çështja e etiologjisë së infeksionit, por edhe faza e pritshme e sëmundjes (akute, kronike), si dhe prania e një infeksioni aktiv (akut ose përkeqësimi i një kronike) në kohën e ekzaminimit.

Cili është afati kohor i përafërt për shfaqjen e antitrupave?

Antitrupat më të hershëm janë IgM. Ato mund të zbulohen 1-3 javë pas infeksionit të mundshëm, i cili karakterizon fazën akute të procesit infektiv. Situata e dytë për shfaqjen e antitrupave IgM është një përkeqësim i një procesi kronik. IgM qarkullon mesatarisht për rreth 3 muaj, pastaj sasia e tyre zhduket gradualisht. Megjithatë, në disa pacientë, sasitë e gjurmëve të IgM mund të zbulohen brenda 1-2 viteve pas infektimit.

Nga java e 4-të pas infektimit fillojnë të shfaqen antitrupat IgG. Me shumicën e infeksioneve, titri i tyre rritet gradualisht me një maksimum në kohë të ndryshme (mesatarisht pas 1.5-2 muajsh), atëherë titri mbetet në një nivel të ulët dhe tregon imunitet. Në disa sëmundje, nivelet e IgG nuk janë të larta.

Opsionet e zbulimit të antitrupave

• Zbulimi i izoluar i antitrupave IgM sugjeron praninë e një infeksioni primar.
• Zbulimi i njëkohshëm i IgM dhe IgG në gjak është tipik për infeksionin parësor në 2-3 muajt e mëparshëm, si dhe gjatë përkeqësimit të një sëmundjeje kronike.
• Zbulimi i IgG-së së izoluar mund të tregojë si imunitetin ndaj sëmundjes ashtu edhe infeksionin kronik. Në situatën e dytë janë të rëndësishme si sasia e antitrupave (titri) ashtu edhe ndryshimi i këtij titri me kalimin e kohës. Në mënyrë tipike, studimet kryhen në intervale prej 2-4-6 javësh.

Analiza ELISA është një teknikë moderne diagnostike laboratorike për një numër të konsiderueshëm sëmundjesh të ndryshme. Shkurtesa qëndron për immunoassay enzimë. Thelbi i teknikës është përcaktimi i titrit (aktivitetit) të antitrupave.

Teknika ELISA aktualisht po fiton popullaritet të konsiderueshëm. Përdoret në mjekësinë klinike për diagnostikimin e patologjive të ndryshme, si dhe në studimet eksperimentale që kërkojnë përcaktimin e saktë të përqendrimit të përbërësve të ndryshëm në mjediset e studiuara.

Parimi i metodës ELISA

Analiza e imunitetit enzimë është një reaksion imunologjik. Ai bazohet në shtimin e antitrupave specifikë
ose antigjene në mjedisin e testimit (më shpesh gjaku që testohet), i ndjekur nga përcaktimi enzimatik i përqendrimit të komplekseve antigjen-antitrupa që rezultojnë. Bazuar në përqendrimin e kompleksit, mund të gjykohet niveli ose aktiviteti i përbërjes që përcaktohet në mjedisin e provës.

Përcaktimi i përqendrimit të komplekseve antigjen-antitrup zakonisht kryhet duke përdorur pajisje speciale duke përdorur metodën kromatografike.

Indikacionet për përdorim

Analiza ELISA kryhet për indikacione të ndryshme, kryesoret në mjekësinë klinike janë:

• Diagnoza e patologjisë infektive me transmetim kryesisht seksual (IST), e cila përfshin klamidia, mykoplazmoza, ureaplazmoza, trikomoniaza, duke identifikuar antitrupa specifikë ndaj agjentit infektiv.
• Diagnoza e sëmundjeve infektive të lokalizimit të ndryshëm për të përcaktuar fazën e procesit patologjik, kryesisht në procesin e diagnostikimit të hepatitit viral parenteral dhe HIV.
• Përcaktimi i përqendrimeve të hormoneve për diagnostikimin e patologjive të ndryshme të organeve të sistemit endokrin (gjëndra endokrine).
• Përcaktimi i komponimeve të ndryshme për të diagnostikuar shkakun e dehjes së trupit në rast helmimi, pickimi nga insektet ose gjarpërinjtë.

Për këto indikacione mjekësore, kryhet një test gjaku ELISA. Kjo teknikë përdoret gjithashtu në mënyrë aktive në mjekësinë eksperimentale gjatë studimeve të ndryshme klinike gjatë zhvillimit të ilaçeve dhe vaksinave të reja për imunoprofilaksinë.

Si kryhet hulumtimi

Një test gjaku duke përdorur ELISA kryhet në një laborator të specializuar. Për ta realizuar fillimisht merret gjak venoz, zakonisht nga vena kubitale në një vëllim 5-10 ml, i cili më pas dërgohet në laborator. Mesatarisht, rezultati i testit mund të merret të nesërmen, gjë që është një pikë e rëndësishme për përshkrimin e menjëhershëm të trajtimit pas diagnostikimit të sëmundjes.

Si të përgatiteni për ELISA

Për të marrë rezultate të besueshme kërkimore duke përdorur imuno-analizimin enzimë, duhet të ndiqni disa rekomandime të thjeshta përgatitore, të cilat përfshijnë:

• Një ditë para testit, duhet të ndaloni së ngrëni ushqime yndyrore (mish, mish të tymosur) dhe alkool.
• Materiali për studim duhet të dorëzohet në mëngjes me stomak bosh.
• Në ditën e studimit këshillohet shmangia e stresit fizik dhe psiko-emocional.
• Para studimit, duhet të përpiqeni të mos pini duhan.

Shumica e rezultateve false-pozitive të një testi imunosorbent të lidhur me enzimën janë për shkak të zbatimit jo të duhur të rekomandimeve përgatitore. Kjo në shumicën e rasteve shoqërohet me ngrënien e ushqimeve yndyrore, të cilat çojnë në një rritje të përqendrimit të triglicerideve (yndyrave) në plazmën e gjakut, të cilat reduktojnë specifikën e ELISA-s.

Dekodimi i rezultateve

Një test gjaku për antitrupat duke përdorur ELISA ka 2 modifikime - përcaktimin cilësor dhe sasior. Në
Në një përcaktim cilësor të antitrupave, rezultati mund të jetë pozitiv (zbulohen antitrupa, duke treguar praninë e mundshme të një procesi patologjik të shkaktuar nga një agjent infektiv) ose negativ (nuk ka antitrupa, që tregon mungesën e një procesi infektiv).

Mungesa e antitrupave nuk është gjithmonë një tregues 100% i mungesës së një procesi infektiv. Kjo për faktin se pas infeksionit, antitrupat nuk formohen menjëherë, por në një periudhë të caktuar kohore (të paktën rreth 2 javë). Prandaj, për të konfirmuar mungesën e infeksionit, ELISA mund të përsëritet pas njëfarë kohe.

ELISA sasiore përdoret për të përcaktuar titrin (aktivitetin) e antitrupave, si dhe klasat e tyre. Në shumicën e rasteve, për të diagnostikuar sëmundjet infektive, përcaktohen antitrupat e klasave IgG (imunoglobulina G) dhe IgM (imunoglobulina M), të cilat formohen në trup në intervale të ndryshme pas infeksionit, kështu që deshifrimi i rezultatit të testit mund të ketë disa kuptime:

• Një rritje në aktivitetin e IgM dhe mungesa e IgG është dëshmi e infeksionit të fundit dhe një rrjedhë akute e procesit infektiv.
• Një rritje në aktivitetin e IgM dhe IgG është një përkeqësim i procesit infektiv gjatë rrjedhës së tij kronike dhe infeksionit afatgjatë.
• Aktiviteti i lartë i IgG dhe mungesa e IgM është një rrjedhë kronike e procesit infektiv në sfondin e një infeksioni të gjatë, pas së cilës kanë kaluar më shumë se gjashtë muaj (koha e nevojshme për formimin e antitrupave të klasës IgG).

Në përgjithësi, deshifrimi i rezultateve të ELISA për çdo proces infektiv ka veçori të caktuara. Një përcaktim më i saktë i pranisë së një sëmundjeje infektive, si dhe fazës së rrjedhës së saj, kryhet nga një mjek.

ELISA është aktualisht metoda e zgjedhur për diagnostikimin e shumicës së sëmundjeve infektive. Bazuar në rezultatet e një studimi të tillë, mjeku ka mundësinë të vendosë një diagnozë të saktë dhe të përcaktojë fazën e procesit patologjik në mënyrë që të përshkruajë trajtimin e mëvonshëm adekuat dhe efektiv.

Teknikat moderne të diagnostikimit bëjnë të mundur identifikimin e një sëmundjeje të veçantë në një laborator duke përdorur teste speciale. Një nga këto është një test gjaku imunosorbent i lidhur me enzimën, i cili mund të konfirmojë një diagnozë të bërë më parë.

Analiza e imunitetit enzimë ELISA është një nga metodat më efektive dhe moderne për identifikimin e çrregullimeve që lidhen me çekuilibrat imunitar dhe hormonal, si dhe me proceset onkologjike. Gjatë testit, antitrupat e prodhuar kur ka një infeksion në trup mund të zbulohen në gjak. Duke marrë parasysh këtë nuancë, sëmundja mund të zbulohet edhe në fazën më të hershme të zhvillimit të saj.

Cila është baza e teknikës?

Rezultatet e analizës ELISA bazohen në marrjen e reaksioneve kimike ndaj enzimave, të cilat shërbejnë si shenja të veçanta identifikimi për njohjen e antitrupave. Rrjedhimisht, gjatë reaksioneve imunokimike, antitrupat fillojnë të ndërveprojnë me disa antigjene. E gjithë kjo jep bazën për të pohuar se rezultatet e rreme gjatë dhurimit të gjakut në ELISA janë minimale.

Studimi ju lejon të përcaktoni numrin e qelizave imune, vetitë e tyre, si dhe praninë e antitrupave të nevojshëm

Rezultati konsiderohet pozitiv kur zbulohet ngjyrosja e tretësirës. Ngjyra tregon se antigjenet po ndërveprojnë me antitrupat. Nëse asgjë e tillë nuk ndodh, rezultati është negativ.

Një test imunosorbent i lidhur me enzimën (ELISA) kryhet për një vlerësim gjithëpërfshirës të funksioneve mbrojtëse të trupit. Gjatë studimit, përcaktohen numri dhe vetitë e qelizave imune dhe prania e antitrupave të nevojshëm. Një test gjaku ELISA kryhet për të diagnostikuar sëmundjet infektive, hematologjike, autoimune, imunodefiçencat primare dhe dytësore. Le të shqyrtojmë se çfarë është një test gjaku ELISA dhe cilat indikacione ekzistojnë për kryerjen e këtij studimi.

Cfare eshte

Një test gjaku duke përdorur metodën ELISA është një metodë laboratorike me të cilën përcaktohen antitrupat ose antigjenet në një mostër gjaku. Ky studim përdoret për të përcaktuar nivelin e imunoglobulinave, komplekseve imunologjike dhe hormoneve.

Indikacionet për analiza

Ekzistojnë indikacionet e mëposhtme për të përshkruar një test gjaku ELISA:

• diagnoza e infeksioneve seksualisht të transmetueshme - ureaplazma, mikoplazma, klamidia, trichomonas, sifilizi;
• diagnoza e sëmundjeve virale - citomegalovirus, herpes, hepatiti, virusi Epstein-Barr;
• përcaktimi i niveleve të hormoneve;
• diagnostikimi i sëmundjeve onkologjike;
• përcaktimi i mungesës së imunitetit;
• diagnostikimi i alergjive;
• ekzaminim gjithëpërfshirës para operacionit para transplantimit të organeve;
• vlerësimi i efektivitetit të terapisë.

Parimi i metodës

Parimi i funksionimit të metodës së imuno-analizimit enzimë bazohet në përcaktimin e proteinave specifike të antitrupave në gjak - imunoglobulinave. Imunoglobulinat prodhohen nga sistemi imunitar i njeriut kur antigjenet (mikroorganizmat e huaj) hyjnë në trup. Molekula të tilla imune lidhen me një sërë patogjene infektive në trup dhe i neutralizojnë ato.

Imunoglobulinat kanë një karakteristikë të rëndësishme - specifikën. Falë kësaj, ata mund të lidhen me një antigjen specifik, duke formuar një kompleks antigjen-antitrup. Gjatë një testi gjaku ELISA, është ky kompleks që përcaktohet në mënyrë cilësore dhe sasiore.

Ekzistojnë pesë klasa të imunoglobulinave. Por zakonisht përcaktohen tre klasa - imunoglobulinat A, M, G. Këto antitrupa grumbullohen në trup në kohë të ndryshme nga momenti i infektimit.

• Imunoglobulinat klasa M (IgM) shfaqen në gjak për herë të parë në ditën e pestë nga momenti i infektimit. Ato qëndrojnë në trup për 5-6 javë, pastaj zhduken nga qarkullimi i gjakut. Antitrupat IgM tregojnë një periudhë akute të sëmundjes ose një përkeqësim të sëmundjes gjatë rrjedhës së saj kronike.
• Përafërsisht 3-4 javë pas infektimit, imunoglobulinat shfaqen në gjak klasa G (IgG). Ato mund të ekzistojnë në gjakun e njeriut për disa muaj apo edhe vite. Sipas interpretimit të testit të gjakut ELISA, nëse në dy mostra gjaku të marra në mënyrë sekuenciale pas dy javësh, rritet sasia e imunoglobulinave IgG, ato flasin për një infeksion aktual ose riinfeksion - riinfeksion me të njëjtin infeksion.
• Imunoglobulinat klasa A (IgA) mund të zbulohet me këtë metodë kërkimore 2-4 javë pas infektimit ose përkeqësimit të një sëmundjeje infektive. Nga këto, vetëm 20% qarkullon në gjak, pjesa tjetër janë në sekretimin e mukozave. Antitrupat IgA zhduken nga qarkullimi i gjakut 2-8 javë pas shkatërrimit të agjentëve infektivë. Zhdukja e këtyre imunoglobulinave do të thotë një kurë për infeksionin. Nëse pas përfundimit të sëmundjes konstatohet prania e antitrupave IgA në gjak, do të thotë se sëmundja ka hyrë në fazën kronike.

Përgatitja për analizë

Për të kryer një test gjaku duke përdorur metodën ELISA, gjaku i njeriut përdoret më shpesh. Por ju gjithashtu mund të ekzaminoni përmbajtjen e trupit qelqor, lëngut cerebrospinal dhe lëngut amniotik.

Një mostër gjaku për analizë merret nga vena antekubitale e pacientit. Rekomandohet të dhuroni gjak në stomak bosh (duhet të kenë kaluar të paktën 12 orë nga vakti juaj i fundit). Është e nevojshme të informohet mjeku nëse pacienti merr medikamente, pasi disa prej tyre mund të ndryshojnë rezultatin e analizës. Besueshmëria e rezultateve të studimit ndikohet nga përdorimi i alkoolit dhe drogës.

Dekodimi

Forma e rezultatit të këtij testi tregon rezultatin pozitiv (+) ose negativ (-) të përcaktimit të secilës klasë të imunoglobulinave.

Le të shqyrtojmë interpretimin e një interpretimi të mundshëm të testit të gjakut ELISA.

• Një rezultat negativ për IgM, IgG, IgA do të thotë mungesë imuniteti ndaj infeksionit.
• Një rezultat negativ për IgM, IgA dhe një rezultat pozitiv për IgG është imuniteti pas infektimit ose pas vaksinimit.
• Një rezultat negativ ose pozitiv për IgG, IgA dhe një rezultat pozitiv për IgM tregon një infeksion akut.
• Një rezultat pozitiv për IgM, IgG, IgA është një përkeqësim i një sëmundjeje kronike infektive.
• Rezultati IgM negativ dhe rezultat IgG negativ ose pozitiv, IgA – infeksion kronik.
• Rezultati negativ IgM dhe IgG, IgA nuk zbulohen - shërim.

Përparësitë e metodës

Testi i gjakut ELISA ka shumë përparësi. Ato kryesore mund të identifikohen:

• saktësi relativisht e lartë (ndjeshmëri);
• mundësia e diagnozës së hershme;
• aftësia për të monitoruar dinamikën e procesit infektiv;
• niveli i lartë i unifikimit, i cili lejon ekzaminime masive;
• një periudhë e shkurtër kohe e nevojshme për të marrë rezultatin e analizës;
• lehtësinë e përdorimit;
• automatizimi i të gjitha fazave të analizës;
• kosto relativisht e ulët.

Të metat

Disavantazhi i metodës ELISA është se ndonjëherë jep rezultate false negative ose false pozitive. Përveç gabimeve teknike gjatë studimit, shkaku i rezultateve të rreme mund të jetë faktori reumatoid i pacientit, prania e sëmundjeve kronike (në të cilat prodhohen antitrupa), çrregullimet metabolike ose përdorimi i disa medikamenteve.

• ascariasis;
• trikinoza - analiza kryhet disa herë, niveli maksimal i antitrupave përcaktohet 4-12 javë pas infektimit;
• cisticerkoza;
• taeniaza;
• fascioliasis - antitrupat zbulohen në fazën akute të sëmundjes;
• opisthorchiasis - diagnoza diferenciale kryhet midis formave kronike dhe akute të sëmundjes;
• giardiasis;
• leishmanioza viscerale dhe e lëkurës;
• amebiaza;
• toksoplazmoza.

4.2 4.20 nga 5 (5 Vota)