Metodat helmintologjike. Testimi për enterobiasis dhe taeniasis

Për të zbuluar fragmente të helminthëve, feçet ekzaminohen me sy të lirë, më pas përzihen me ujë dhe ekzaminohen në pjesë të vogla në një pjatë Petri në një sfond të errët. Të gjitha grimcat e dyshimta vendosen në një rrëshqitje xhami në një pikë uji dhe ekzaminohen nën një xham zmadhues. Ju mund të vendosni një pjesë të përditshme në një cilindër me shtimin e 5-10 herë sasinë e ujit. Pas trazimit, ena lihet derisa grimcat e pezulluara të vendosen plotësisht. Shtresa sipërfaqësore Lëngjet kullohen dhe derdhet ujë i pastër. Sedimenti i larë ekzaminohet në pjesë të vogla me sy të lirë ose nën një xham zmadhues. Për zbulimin e vezëve përdoren metoda të ekzaminimit mikroskopik.

Metoda e njollosjes amtare. Jo nje numer i madh i feçe nga vende te ndryshme Pjesa e provës bluhet në një rrëshqitje qelqi në një pikë solucion gliceroli 50%, tretësirë ​​izotonike klorur natriumi ose ujë. Përzierja mbulohet me një mbulesë dhe shihet nën një mikroskop.

Metoda lundruese Fulleborn. Një pjesë e feçeve përzihet me 20 pjesë të një solucioni të ngopur të klorurit të natriumit ( gravitet specifik 1.18), shtuar në pjesë të vogla. Grimcat e mëdha që notojnë në sipërfaqe hiqen menjëherë dhe përzierja lihet për 45 minuta. Gjatë kësaj kohe, vezët e helminthit, që kanë një peshë specifike më të ulët se solucioni i klorurit të natriumit, notojnë në sipërfaqe. Filmi sipërfaqësor hiqet me një lak me diametër rreth 1 cm dhe transferohet në një rrëshqitës xhami për ekzaminim nën një mikroskop.

Metoda Kalantaryan. Efektiviteti i metodës lundruese rritet kur zëvendësohet kloruri i natriumit me një zgjidhje të ngopur të nitratit të natriumit. Në këtë rast, përzierja mbahet për 10-15 minuta.

Filmi sipërfaqësor i formuar pas vendosjes së një përzierjeje feçesh me një zgjidhje të klorurit të natriumit ose nitratit të natriumit mund të hiqet gjithashtu me një rrëshqitje xhami. Për këtë qëllim, një kavanoz i mbushur deri në buzë me një përzierje feçesh dhe një tretësirë ​​kripe mbulohet me një rrëshqitje xhami në mënyrë që sipërfaqja e poshtme e saj të jetë në kontakt me lëngun. Pas vendosjes, xhami hiqet dhe, duke u kthyer shpejt lart me sipërfaqen në të cilën ndodhet filmi, ekzaminohet nën një mikroskop.

Gërvishtja e palosjeve sperianale (për të identifikuar vezët e krimbave dhe onkosferat shirit gjedhi) bëni në mëngjes para se të shkoni në tualet. Duke përdorur një shpatull druri të njomur në ujë ose një zgjidhje 50% glicerinë, kruani anusin. Materiali që rezulton transferohet në një rrëshqitje qelqi në një pikë uji ose një zgjidhje gliceroli 50% dhe shihet nën një mikroskop. Spatula mund të zëvendësohet me një shtupë pambuku të lagur, e cila përdoret për të fshirë zonën perianale, më pas shpëlajeni mirë me ujë. Uji centrifugohet dhe sedimenti ekzaminohet me mikroskop.

Metoda Behrmann (për identifikimin e larvave). Një rrjetë metalike me 5-6 g feces të aplikuar në të fiksohet në një gyp qelqi të futur në një trekëmbësh. Një tub gome me një kapëse vendoset në skajin e poshtëm të hinkës. Hinka mbushet me ujë të ngrohur deri në 50°, në mënyrë që Pjesa e poshtme rrjeta që përmban feces ra në kontakt me ujin. Larvat lëvizin në mënyrë aktive në ujë dhe grumbullohen në pjesën e poshtme të tubit të gomës. Pas 4 orësh, lëngu kullohet në tuba centrifuge, centrifugohet dhe sedimenti ekzaminohet me mikroskop.

Analiza e pështymës, mukusit të hundës dhe rrjedhje vaginale për të identifikuar vezët e trematodës pulmonare paragonimus, larvat e krimbit të rrumbullakët dhe krimbit të gjilpërës, vezëve të krimbave dhe fragmenteve të fshikëzës së ekinokokut. Pjesa e mukusit (shkarkimi) që ekzaminohet lyhet në xhami dhe shikohet në mënyrë makroskopike në një sfond bardh e zi dhe më pas nën një mikroskop. Mund të shtoni një tretësirë ​​antiformine 25% në materialin e provës, shkundni plotësisht dhe lëreni për 1-1,5 orë për të tretur mukozën. Përzierja centrifugohet dhe precipitati ekzaminohet në mikroskop.

Analiza e lëngut duodenal dhe stomakut për të zbuluar vezët e kërpudhave të mëlçisë, krimbat e gremisit dhe larvat Strongyloides. Të tre pjesët e përmbajtjes duodenale të marra me centrifugohen dhe sedimenti ekzaminohet nën një mikroskop. Ata po hulumtojnë gjithashtu.

Hulumtimi i indeve. Për të identifikuar larvat e Trichinella-s, pjesët e muskujve të biopsifikuar ndahen me kujdes në fibra, shtrydhen midis gotave të kompresorit (xhama të trasha me vida) dhe ekzaminohen nën një mikroskop me një dritë të errësuar. Për të identifikuar cisticerkët, muskujt shpërndahen me gjilpëra disekuese, vezikula e izoluar pastrohet nga indet përreth, shtrydhet midis dy rrëshqitjeve të qelqit dhe ekzaminohet nën një xham zmadhues.

Testi i gjakut (për të zbuluar larvat e filarisë). Ekzaminoni pikën e varur në një gotë mbuluese të skajuar me vazelinë. Mund të përzieni 0,3 ml gjak me 10 herë më shumë se sasia e tretësirës 3%. Përzierja centrifugohet dhe precipitati ekzaminohet në mikroskop. Për pasurimin e barnave në 1 ml gjaku venoz shtoni 3 ml tretësirë ​​formaline 2% ose 5 herë sasinë e lëngut që përbëhet nga 95 ml tretësirë ​​formaline 5%, 5 ml acid acetik dhe 2 ml tretësirë ​​alkoolike të koncentruar të hematoksilinës. Përzierja centrifugohet, precipitati lahet me ujë të distiluar dhe ekzaminohet në mikroskop. Për diferencim tipe te ndryshme filariet ekzaminohen me anë të njollave të ngjyrosura duke përdorur metodën Giemsa-Romanovsky.

Metodat diagnostifikimi imunologjik. Përdoren gjithashtu teste diagnostikuese alergjike (shih) me llojin përkatës të helminthit (aglutinimi, fiksimi i komplementit).

Metodat helmintologjike kërkimore. Oriz. Vezët e helminthit. 1-10 - vezë krimbat e rrumbullakët(nematoda): 1 - 3 - krimba të rrumbullakët (1 - vezë e fekonduar, 2 - vezë e fekonduar pa albuminë, 3 - vezë e pafertilizuar); 4 - krimbat e rrumbullakët të maceve; 5 - krimbat e rrumbullakët mishngrënës; 5 - pinworms; 7 - krimb kamxhiku; 8 - tominx; 9 - krimbi i gjirit; 10 - trikostrongylid. 11-15 - vezë shiritat(cestodes): 11 - shirit gjedhi; 12 - shirit xhuxh; 13 - shirit miu; 14 - shirit kungull; 15 shirit i gjerë. 16 - 24 - vezë flukes (trematoda): 16 - trematoda (shistozome) japoneze; 17 - trematoda (shistozome) urinë - seksuale; 18 - trematode (shistozome) Munson; 19 - trematodat (parogonymus) pulmonare; 20 - trematoda (opisthorchis) siberian (mace); 21 - trematodes (clonorchis) chinensis; 22 - trematodat e zorrëve (metagonimus); 23 - trematodat (fasciolas) të mëlçisë; 24 - trematoda (dikrocelium) heshtak.

Një metodë efektive dhe e përshtatshme e hulumtimit helmintologjik është studimi i njollosjes së trashë sipas Katos, thelbi i së cilës është zbulimi i vezëve të helminthit në një njollë të trashë feçesh, të pastruara me glicerinë dhe të lyer me të gjelbër malakit. Përbërja e përzierjes Kato - 6 ml 3% tretësirë ​​ujore malakit jeshil, 500 ml glicerinë, 500 ml tretësirë ​​fenoli 6%. Tretësira është e qëndrueshme dhe mund të ruhet në temperaturën e dhomës. Për përgatitjen e preparateve, copa feçesh në madhësinë e një bizele vendosen në një rrëshqitje xhami, të mbuluara me një film celofani hidrofil të mbajtur në përzierjen Kato për 24 orë dhe shtypen në gotë për të. shpërndarje uniforme material. Njohurat e pastruara për 40-60 minuta ekzaminohen me mikroskop. Vezët e zbuluara të helminthit numërohen dhe karakteristikat morfologjike përcaktojnë speciet e tyre. Metoda ju lejon të identifikoni vezët e krimbave të rrumbullakët, krimbave të kamxhikut, cestodave, trematodave dhe, në një masë më të vogël, krimbave të grepeve dhe shiritave xhuxh.

Gjithashtu përdoret gjerësisht metodat e pasurimit. Parimi i metodave të flotacionit është pezullimi i feçeve në një zgjidhje të kripur, e cila ka një dendësi relative më të lartë në krahasim me vezët e helminthit, si rezultat i së cilës ato notojnë në sipërfaqe. Përmbajtja e filmit sipërfaqësor ekzaminohet nën një mikroskop. Si përzierje pasuruese përdoren tretësirat e mëposhtme: kripë e tryezës - 400 g në 1 litër ujë (dendësia relative sipas Fulleborn -1,18); nitrat natriumi - 1 kg në 1 litër ujë (dendësia relative sipas "Kalantaryan-1.38); nitrat natriumi - 900 g dhe nitrat kaliumi - 400 g në 1 litër ujë (dendësia relative sipas Brudastov dhe Krasnonos-1.48). Përgatitur tretësirat zihen dhe ftohen.
Për hulumtime, shtoni 5-10 g feçe në një gotë ose enë balte, shtoni 100-200 ml në të. tretësirë ​​fiziologjike dhe përziejeni mirë. Pastaj grimcat e mëdha lundruese hiqen me një shpatull druri ose një lugë të bërë prej letre ose kartoni dhe menjëherë aplikohet një rrëshqitje e gjerë në filmin sipërfaqësor në mënyrë që tretësira e kripur dhe rrëshqitja të jenë në kontakt të plotë. Pasi e lini përzierjen të qëndrojë për 30-40 minuta, rrëshqitja hiqet, vendoset nën mikroskop me filmin nga lart dhe e gjithë sipërfaqja ekzaminohet me kujdes. Për të shmangur tharjen, mund të shtoni 2-3 pika zgjidhje glicerinë 50%. Filmi i sipërfaqes gjithashtu mund të hiqet me një lak teli. Efikasiteti i metodave të flotacionit rritet me rritjen e densitetit relativ të tretësirave të shëllirës. Duke përdorur këto metoda, është e mundur të zbulohen vezët e nematodave, cestodave dhe trematodave.

Për të zbuluar vezët në feces, përdoret metoda e sedimentimit Krasilnikov. Feçet përzihen me një solucion detergjent 1% ( pluhur larës"Lotus", etj.) në një raport 1:10 derisa të formohet një pezullim. Nën ndikimin e detergjentit, përbërës të ndryshëm të feçeve (proteinat, yndyrat, elementët e indeve) treten. Pas 30 minutash, përmbajtja e tubit tundet për 1-2 minuta, pas së cilës ato centrifugohen për 5 minuta. Preparatet përgatiten nga sedimenti dhe ekzaminohen në mikroskop.
NË kushtet e terrenit, si dhe gjatë ekzaminimeve masive të popullatës për infektim me helminth, është e përshtatshme të përdoret metoda e njollosjes së trashë Kato. NË kushtet e shtrimit Gjatë ekzaminimit të pacientëve, preferohet të përdoren metodat më efektive të flotacionit. Kur përdorni këto metoda gjatë mikroskopisë, këshillohet që të numërohen vezët që gjenden në preparat. Nëse kampioni ose vëllimi i marrë për studimin e fecesit është i standardizuar (për shembull, 1 lugë çaji ose lugë gjelle), dhe një vëllim konstant uniform i solucioneve të kripura, mund të gjykohet përafërsisht intensiteti i pushtimeve. Ky kontabilitet sasior mund të jetë i dobishëm në justifikimin e trajtimit të përshkruar dhe vlerësimin e efektivitetit të heqjes së krimbave. Përveç kësaj, metoda të tjera sasiore më të sakta, veçanërisht metoda Stoll, mund të përdoren për të përcaktuar intensitetin e infeksionit.

Për diagnostikimin e teniarinkozës dhe enterobiazës Përdoret metoda e studimit të skrapimeve perianale-rektale. Duke përdorur një shpatull druri të njomur në një tretësirë ​​glicerine 50%, kruani palosjet perianale në mëngjes para defekimit në perimetër. anusit Dhe seksionet e poshtme rektum. Materiali që rezulton, i pastruar nga një shpatull me buzën e një gote mbuluese, vendoset në një rrëshqitje xhami në një pikë solucion gliceroli 50%, mbulohet me një gotë mbuluese dhe ekzaminohet në mikroskop. Ju gjithashtu mund të ekzaminoni një rrip shiriti celuloze, i cili fillimisht shtypet me anën ngjitëse në palosjet perinale, më pas vendoset në një rrëshqitje xhami dhe ekzaminohet mikroskopikisht.

Zbulimi i larvave nematode në feces duke përdorur metodën Berman. Metoda bazohet në vetinë termotropike të larvave. Për kërkime, merrni 1 lugë feçe dhe vendoseni në një rrjetë metalike ose një rrjetë prej disa shtresash garzë në një kornizë teli. Rrjeta është instaluar në një gyp të montuar në një trekëmbësh. Një tub gome me një kapëse është ngjitur në hinkë. Me ngritjen e rrjetës, hinka mbushet me ujë (temperatura +40°...+50°C) në mënyrë që pjesa e poshtme e rrjetës të zhytet në ujë. Larvat nga feces migrojnë në mënyrë aktive në ujë të ngrohtë dhe, duke u vendosur, grumbullohen në pjesën e poshtme të hinkës. Pas 2-4 orësh hapet kapësja, uji derdhet në një tub centrifuge dhe centrifugohet për 2-3 minuta. Më pas lëngu supernatant kullohet, sedimenti transferohet në një rrëshqitje qelqi dhe ekzaminohet në mikroskop, ku gjenden larvat e lëvizshme të agjentit shkaktar të strongyloidiasis.

Metoda Harada dhe Mori bën të mundur dallimin midis larvave të krimbit të gresorit dhe nekatorit. Larvat e krimbit të gjirit kultivohen në letër filtri. Për këtë qëllim, 0,5 g feçe të freskët, të marra nga pacienti jo më vonë se 1 orë pas defekimit, aplikohet në shirita letre filtri me përmasa 12X1,5 cm, duke i lënë të pastra të dy skajet e shiritit. Njëra skaj i shiritit është zhytur në një epruvetë, një e katërta e së cilës është e mbushur me ujë dhe tjetra është e fiksuar me një tapë. Provëzat vendosen në një termostat në temperaturën +26... + 28°C. Larvat që zhvillohen nga vezët zbresin përmes letrës filtri dhe vendosen në fund të epruvetës. Pas 5-6 ditësh, rripi i letrës hiqet dhe lëngu i mbetur në epruvetë ekzaminohet nën një xham zmadhues ose centrifugohet. Precipitati i formuar gjatë centrifugimit ekzaminohet nën një mikroskop me dritë. Kur përdoren kavanoza qelqi katërkëndësh (15xxx7 cm në madhësi) në vend të epruvetave, me 4 shirita letre të ngjitura në mure, efikasiteti i analizave rritet (G.M. Maruashvili et al., 1966).

Metodat e testimit për shistozomiazën . Ekzaminimi i feçeve - një pjesë e feçeve përzihet me 250 ml ujë, filtrohet përmes 3 shtresave të garzës në një enë konike, e cila mbushet deri në majë me ujë. Pas 30 minutash, shtresa e lëngshme kullohet dhe një pjesë e freskët e ujit i shtohet sedimentit. Precipitati lahet derisa të merret një supernatant i pastër dhe të ekzaminohet nën një mikroskop.

Metoda e larvoskopisë - 20-25 g feçe vendosen në një balonë Erlenmeyer me një tub qelqi të ngjitur anash, me drejtim lart dhe lahen. ujë rubineti. Pastaj balona mbulohet me letër të errët, duke lënë një tub xhami të salduar në dritë në një temperaturë prej +25...+30°C. Miracidet e çelura janë të përqendruara në meniskun në tubin anësor, ku mund të shihen me xham zmadhues ose me sy të lirë. Ekzaminimi i urinës - 100 ml urinë e mbledhur nga ora 10:00 deri në orën 14:00, ose një pjesë e përditshme, vendoset dhe më pas centrifugohet në 1500 rpm. Sedimenti që rezulton aplikohet* në një rrëshqitje xhami dhe ekzaminohet nën një mikroskop. OBSH rekomandon një metodë për të filtruar të gjithë kampionin e urinës. Pas filtrimit, filtrat trajtohen me formaldehid ose nxehen (për të vrarë vezët) dhe më pas njomet me një tretësirë ​​ujore të ninhidrinës. Në përgatitjet e thara, embrionet e vezëve marrin një ngjyrë vjollcë.

Aplikimi i imunologjik metodat e kërkimit për diagnostikimin e shistozomiazës shoqërohen me vështirësi, pasi skistozomet e rritur dhe vezët e tyre përmbajnë një numër të madh antigjenesh që shkaktojnë reaksionet imune, të cilat nuk janë specifike për speciet (D. Bradley, 1979).

Në vendin tonë prodhohet për stadifikimin e reaksioneve imunologjike për helminthiazën linjë e tërë diagnostifikimi standard. Përdorimi praktik kanë alergji testi i lëkurës për ekinokokozën dhe alveokokozën, RLA me antigjen ekinokoksik, RSC në të ftohtë, reaksion precipitimi në të ftohtë në modifikime të ndryshme (reshje unazore, precipitim në epruveta ose kapilarët, të cilët vendosen me antigjenet e trikinozës, cisticerkozës dhe migroaskariazës). Kompletet standarde diagnostikuese për kryerjen e reaksioneve serologjike të lartpërmendura prodhohen nga ndërmarrjet që prodhojnë preparate bakteriale. Prodhuesi përfshin me kompletet diagnostike të prodhuara udhëzime të hollësishme mbi rregullat e ruajtjes, jetëgjatësinë e barit dhe udhëzimet për përdorimin e antigjeneve përkatës me teknikën e stadifikimit të reaksionit.

NË vitet e fundit Lista e reaksioneve serologjike të përdorura për diagnostikimin e helminthiazës është zgjeruar ndjeshëm. Për këto qëllime përdoren reaksionet e mëposhtme: RIGA, imunofluoreshencë indirekte (RIF), imunodifuzion në xhel (RID), kundër imunoelektroforezë (CIEF), CEMA. Këto reaksione mund të përdoren për askariazën, toksokariozën, trikinozën, sëmundjen e krimbit të gjilpërave, filariazën, ekinokokozën dhe alveokokozën, opistorkiazën, shistozomiazën, paragonimiazën. Por, për këto reaksione në vendin tonë nuk jepen teste diagnostike standarde dhe teknika e diagnostikimit të tyre nuk është e rregulluar. Laboratorë individualë, kryesisht shkencorë, përgatisin në mënyrë të pavarur antigjene specifike dhe i përdorin ato në modifikime të ndryshme. Përshkrimi i këtyre metodave është paraqitur gjerësisht në literaturë dhe nuk është rreptësisht i unifikuar. Interpretimi i të dhënave të analizës imunologjike duhet të bazohet në studimin e dinamikës së përgjigjes imune, duke marrë parasysh nivelin e specifikës dhe ndjeshmërisë së secilës metodë të përdorur. reaksioni serologjik. Prandaj, gjatë vendosjes së një diagnoze, si dhe gjatë anketave seroepidemiologjike të popullatës, këshillohet të përdoren disa nga reagimet më të ndjeshme. Në këtë këndvështrim, janë dëshmuar mirë reagimet e VIEF dhe REMA, të cilat ndryshojnë ndjeshmëri e lartë dhe specifikë mjaft e lartë (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negreanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978, etj.). Efektiviteti i REMA është testuar për amebiazën, leishmaniozën, tripanosomiazën dhe toksoplazmozën (G. A. Ermolin, 1980).

Kapitulli III. Diagnoza e helminthiasis dhe metodat e hulumtimit helminthologjik

Është e nevojshme të ekzaminohen për helminthiasis të gjithë pacientët që aplikojnë kujdes mjekësor, dhe sidomos pacientët që i drejtohen pediatrit, terapistit dhe neurologut me ankesa për efekte anësore traktit gastrointestinal, sistemi nervor dhe me anemi. Nëse mjeku nuk është gjithmonë në gjendje të përdorë metodat e hulumtimit laboratorik, atëherë çdo punonjës mjekësor që ofron kujdes në një klinikë ambulatore ose spital kërkohet të intervistojë pacientin në lidhje me izolimin e helminthëve.

Nëse ka indikacione klinike të dhëna në kapitujt përkatës, diagnoza duhet të sqarohet duke përdorur metodat laboratorike Studimet për helminthiasis.

Për shkak të mbizotërimit helminthiazat e zorrëve më i madhi rëndësi praktike ka një ekzaminim të jashtëqitjes.

Metodat për testimin e jashtëqitjes për helminthiasis

Jashtëqitja dorëzohet në laborator në një enë qelqi të pastër (rreth një çerek filxhani jashtëqitje të marra nga vende të ndryshme në një pjesë); Gjatë një ekzaminimi rutinë, lejohet dërgimi i jashtëqitjes në laborator në kuti shkrepësesh ose kuti me splinte.

Për të kontrolluar heqjen e krimbave, e gjithë pjesa e fecesit të mbledhur pas administrimit shpërndahet (siç përshkruhet nga mjeku). antihelmintik dhe laksativ (në kavanoza të mëdha qelqi të mbyllura, kova).

Ekzaminimi mikroskopik i jashtëqitjes është themelor në diagnostikimin e helmintiazave intestinale; gjithmonë duhet të paraprihet nga një ekzaminim i përgjithshëm makroskopik i feçeve për të zbuluar segmente të cestodave të mëdha, krimbave, krimbave të rrumbullakët, etj.

Jashtëqitja duhet të jetë e freskët ose e konservuar (në një zgjidhje formaldehidi 5%), pasi tharja ndryshon në mënyrë dramatike strukturën e vezëve. Përveç kësaj, kur feçet qëndrojnë, zhvillim të shpejtë vezët e disa helminthëve (për shembull, krimbat e gjilpërave), gjë që e bën të vështirë diagnozën.

Sipas udhëzimeve të Ministrisë së Shëndetësisë të BRSS, është e nevojshme të ekzaminohet jashtëqitja njëkohësisht duke përdorur metodën Fulleborn dhe njollosjen vendase.

Smear amtare

Ngjyrosje amtare: një copë e vogël feçesh (afërsisht sa një bizele), e marrë me shkrepse, xhami ose shkop druri nga vende të ndryshme në pjesën e dorëzuar, bluhet tërësisht në një rrëshqitje xhami në një pikë solucion gliceroli 50% ose në tretësirë ​​të kripur ose në ujë. Mbulojeni me një mbulesë duke e shtypur lehtë këtë të fundit (me një gjilpërë disekuese). Smear duhet të jetë i hollë, transparent dhe uniform. Përdoret vetëm si një shtesë e metodave të tjera që sigurojnë pasurimin e ilaçit. Të paktën dy barna duhet të rishikohen.

Për të zbuluar larvat e helminthit (si dhe vezët e tyre), bëhet një njollë amtare si më poshtë (sipas Shulman): 2-3 g feces përzihen plotësisht duke "përdredhur" një shufër qelqi në një emulsion me një pesë- palos sasinë e ujit të pastër ose të kripur. Gjatë trazimit, larvat grumbullohen pranë shufrës së qelqit, kështu që menjëherë pas përfundimit të trazimit, një pikë emulsioni transferohet shpejt me një shufër qelqi në një rrëshqitës xhami, mbulohet me një mbulesë dhe ekzaminohet. S. D. Lyubchenko (1936) vërtetoi se metoda e përdredhjes është më efektive se metoda e njollosjes, veçanërisht në lidhje me vezët e krimbave të rrumbullakët. Bazuar në punën e S. D. Lyubchenko, ne e konsiderojmë të këshillueshme zëvendësimin e metodës së njollosjes me metodën e përdredhjes.

Metoda Fulleborn

Metoda Fulleborn: 5-10 g feçe të marra nga vende të ndryshme vendosen në një kavanoz me kapacitet 50-100 ml dhe fërkohen tërësisht me një gotë ose shkop druri në një tretësirë ​​të ngopur. kripë tryezë(400 g të kësaj kripe tretet në 1 litër ujë, nxehet deri në valë dhe filtrohet përmes një shtrese leshi pambuku ose garzë; tretësira përdoret e ftohtë: pesha specifike 1.2). Tretësira shtohet gradualisht derisa të merret një suspension uniform dhe sasia totale e tretësirës së shtuar duhet të jetë afërsisht 20 herë. më shumë sasi feçet. Për përzierjen e feçeve, Fulleborn rekomandoi përdorimin e gotave të çajit, por është më i përshtatshëm të përgatisni një pezullim në kavanoza vaji me një kapacitet 50-100 ml, duke përdorur dy kavanoza për secilën analizë (ose në gota me një kapacitet 100 ml).

Menjëherë pas përgatitjes së suspensionit, grimcat e mëdha që kanë dalë në sipërfaqe hiqen nga sipërfaqja me një shpatull, një lugë metalike ose një copë letre të pastër ( formacionet bimore, mbetet ushqim i patretur etj.), pas së cilës përzierja lihet të qëndrojë 1-1,5 orë. Pas kësaj kohe, i gjithë filmi hiqet nga sipërfaqja e përzierjes duke prekur një lak teli ose platini (të sheshtë) me një diametër jo më shumë se 1 cm, të përkulur në një kënd të drejtë; Filmi tundet në një rrëshqitje xhami dhe mbulohet me një mbulesë. Vendosni 3-4 pika nën çdo rrëshqitje mbulese (18x18 mm). Në total duhet të përgatiten të paktën 4 preparate (një gotë mbuluese për çdo preparat). Laku nxehet mbi zjarr dhe lahet me ujë pas çdo analize.

Duke përdorur metodën Fulleborn, vezët e të gjitha nematodave (me përjashtim të vezëve të krimbave të pafertilizuara) dhe vezëve të krimbave xhuxh të shiritit zbulohen shpejt dhe lehtë.

Metoda Berman përdoret për të ekzaminuar feces për larvat e helminthit (për strongyloidiasis). Kjo metodë është si më poshtë: 5 g feçe në një rrjetë metalike (një kullesë qumështi është e përshtatshme për këtë qëllim) vendoset në një gyp qelqi të ngjitur në një trekëmbësh. Një tub gome me një kapëse vendoset në skajin e poshtëm të hinkës.

Rrjeta me feçe ngrihet dhe uji i ngrohur afërsisht në 50° derdhet në hinkë në mënyrë që pjesa e poshtme e rrjetës me jashtëqitje të zhytet në ujë. Larvat lëvizin në mënyrë aktive në ujë dhe grumbullohen në pjesën e poshtme të tubit të gomës. Pas 2-4 orësh hapet kapësja dhe lëngu kullohet në një ose dy tuba centrifugash.

Pas centrifugimit për 1-2 minuta pjesa e sipërme lëngu kullohet shpejt dhe sedimenti vendoset në pika në rrëshqitëse qelqi dhe ekzaminohet nën mbulesa ose përhapet shtrese e holle në 2-3 gota të mëdha dhe më pas kontrolloni pa gota mbuluese.

Metoda Berman përdoret gjithashtu për të testuar tokën për praninë e larvave të krimbit të gremisit.

Metoda Stoll

Metoda Stoll përdoret për të përcaktuar intensitetin e pushtimit. Një solucion decinormal i sodës kaustike derdhet në një enë qelqi të veçantë deri në shenjën 56 cm 3 dhe më pas shtohen feçet derisa niveli i lëngut të arrijë 60 cm 3, pra 4 cm 3. Pas tundjes me rruaza qelqi, merret për ekzaminim 0,075 ml nga përzierja dhe ekzaminohet nën një ose dy mbulesa të zakonshme. Sasia që rezulton shumëzohet me 200 për të marrë numrin e vezëve që përmbahen në 1 cm 3 feces.

Studimi i përmbajtjes duodenale

Lëngu duodenal dhe biliare e fshikëzës, të marra në mënyrën e zakonshme duke përdorur sondë (dhe biliare e fshikëzës dhe pas një refleksi nga fshikëza e tëmthit), përzihen plotësisht me një vëllim të barabartë eter etilik; përzierja centrifugohet, pas së cilës sedimenti ekzaminohet në mikroskop. Përveç sedimentit, ekzaminim mikroskopik thekonet që notojnë në lëng, të cilat mund të përmbajnë vezë helminte, janë domosdoshmërisht të ekspozuara. Kur testoni lëngun e stomakut dhe të vjellat për vezët e helminthit, mund të përdorni të njëjtën teknikë.

Ekzaminimi i lëngut duodenal dhe përmbajtjes së stomakut duhet të bëhet nëse ekziston dyshimi për sëmundjet helmintike mëlçisë, fshikëzës së tëmthit (opisthorchiasis, fascioliasis, dicroceliosis) dhe duodenum(strongyloidiasis).

Ekzaminimi i pështymës

Pështyma bluhet në një pjatë qelqi, mbulohet fort me një pjatë tjetër qelqi dhe ekzaminohet me sy të lirë në një sfond të lehtë dhe të zi, si dhe nën një xham zmadhues në dritën e transmetuar. Pjesët individuale të pështymës (akumulimet "të ndryshkura", mbetjet e indeve, etj.) aplikohen në një shtresë të hollë në një rrëshqitje xhami, të mbuluar fort me një mbulesë dhe ekzaminohen në nivel të ulët dhe zmadhimi i lartë mikroskop

a) Për të diagnostikuar cisticerkozën e lëkurës, indi nënlëkuror ose muskul, një pjesë e indit përkatës e prerë në mënyrë aseptike ekzaminohet fillimisht me sy të lirë. Zonat e indeve shpërndahen duke përdorur gjilpëra disektuese për të zbuluar të dukshmen me sy të lirë vezikula - cysticercus (foto A); gjatësia e saj është 6-20 mm, gjerësia 5-10 mm. Kur zbulohet një vezikulë e dyshimtë për cisticercus, ajo shtypet midis dy rrëshqitjeve të qelqit dhe ekzaminohet nën një mikroskop. Cysticercus (Cistycercus cellulosae) përcaktohet nga prania e një skoleksi me katër thithëse dhe një korola grepash (foto B).

Foto. A - cisticerci me skoleks të kthyer nga jashtë; B - Koka e një shirit derri.

b) Për të diagnostikuar trikinozën, një pjesë muskulore e prerë në mënyrë aseptike (biceps ose gastrocnemius) shtypet me kujdes në një tretësirë ​​glicerine 50% në fijet më të imëta duke përdorur gjilpëra disekuese. Muskujt e shtypur janë të ngjeshur midis dy rrëshqitjeve të qelqit dhe ekzaminohen nën një mikroskop me fuqi të ulët në një fushë shikimi të errësuar. Rekomandohet të testoni muskujt për trikinozë jo më herët se në ditën e 8-të të sëmundjes. Larvat e trikinelës gjenden në muskuj në një pozicion të mbështjellë: ato janë të mbyllura në kapsula në formë limoni.

Foto. A - Larvat e trikinelës në muskuj; B — Kapsula të kalcifikuara të Trichinella.

rreze X

Më shpesh, fluoroskopia përdoret për të diagnostikuar ekinokokozën dhe, më rrallë, cisticerkozën. Cisticerkët zbulohen me fluoroskopi vetëm pas kalcifikimit (në raste sëmundje afatgjatë). Vitet e fundit, fluoroskopia është përdorur gjithashtu për të diagnostikuar askariazën si në fazën e hershme të larvës ashtu edhe pjesërisht në atë intestinale.

Gjatë periudhës së migrimit të larvave të krimbit të rrumbullakët (dhe të krimbit të gremisit), në mushkëri zbulohen vatra inflamatore të paqëndrueshme, ndonjëherë të shumta; në të njëjtën kohë, në gjak shfaqet eozinofilia e rëndësishme.

Krimbat e rrumbullakët të pjekur seksualisht janë qartë të dukshëm në fluoroskopinë e zorrëve të individëve të prekur. Kjo metodë, pavarësisht kompleksitetit dhe rëndimit të saj, duhet të përdoret si metodë shtesë për diagnostikimin e askariazës në rastet me analizë skatologjike negative. Sipas E. S. Geselevich, nga 180 pacientë me ascariasis të identifikuar me fluoroskopi, 54 nuk kishin asnjë vezë ascaris të gjetur në jashtëqitjen e tyre (shih).

Metodat e hulumtimit helmintologjik. Metodat për diagnostikimin e infeksioneve të helminthit ndahen në ato të drejtpërdrejta, bazuar në zbulimin e drejtpërdrejtë të vetë helminthëve ose fragmenteve të tyre, si dhe larvat dhe vezët e helminthëve (metodat për ekzaminimin e feces, urinës, përmbajtjes së tëmthit dhe duodenale, pështymës, gjakut dhe indeve, materiali të marra me gërvishtje nga zona perianale dhe hapësira subunguale), dhe indirekte, me ndihmën e të cilave ato zbulojnë ndryshimet dytësore, që lindin në trupin e njeriut si rezultat i aktivitetit jetësor të helminthëve (studime të përbërjes morfologjike të gjakut, metodat imunologjike diagnostikimi i helminthiazës, ekzaminimet me rreze X, etj.). Nga metodat direkte, më të zakonshmet janë ato skatologjike, të cilat ndahen në makro- dhe mikrohelmintoskopike. Në disa raste, përdoren metoda të veçanta.

Metodat e kërkimit makrohelmitoskopik që synojnë kërkimin e helmintheve ose fragmenteve të tyre (scolex, segmente, pjesë të strobilës së cestodeve). Ato përdoren për të diagnostikuar ato helminthiasis në të cilat vezët nuk ekskretohen në jashtëqitjet e pacientit ose ekskretohen në sasi të vogla dhe jo gjithmonë (për shembull, me enterobiasis, krimbat e pincave gjenden në feces, me taeniasis - segmente).

Për të zbuluar krimbat ose segmentet e cestodës në feces, feçet ekzaminohen me sy të lirë. Për diagnoza diferenciale Taeniasis, rekomandohet të shikoni feçet e holluara me ujë në pjesë të vogla të veçanta në kuveta fotografike të zeza ose në enët Petri në një sfond të errët. Formacione të mëdha të dyshimta për fragmente helminthësh ekzaminohen nën një xham zmadhues midis dy rrëshqitjeve. Nëse sipas indikacionet klinike sugjerojnë zbulimin e helminthëve të vegjël ose kokave të cestodës pas trajtimit, pastaj grimcat e dyshimta ekzaminohen nën një xham zmadhues në një pikë glicerinë dhe, nëse është e nevojshme, nën një mikroskop.

Metodat e hulumtimit mikrohelmintoskopik(cilësore) kanë për qëllim identifikimin e vezëve dhe larvave të helminthit. Përdoret metoda e njollosjes së trashë me pllakë mbulese celofani sipas Katos. Përzierja Kato përbëhet nga 6 ml Tretësirë ​​ujore 3% e malakitit jeshil, 500 ml glicerinë dhe 500 ml tretësirë ​​fenoli 6%. Pllakat kato (celofani hidrofil priten ne copa me permasa 20' 40 mm) zhytur për 24 h në përzierjen Kato në mënyrë që të jenë ngjitur me njëra-tjetrën (3-5 ml Tretësirë ​​kato për 100 pjata). 100 mg feçet vendosen në një rrëshqitës xhami, mbulohen me një pllakë celofani sipas Katos dhe shtypen në mënyrë që jashtëqitja të lyhet në rrëshqitjen e xhamit brenda kufijve të pllakës celofani. Ngjyrosja lihet në temperaturën e dhomës për t'u lehtësuar me 40-50 min, dhe më pas ekzaminohet nën mikroskop. Në stinën e nxehtë, për të parandaluar tharjen e preparatit, vendosni një sfungjer të lagur në pjatën e preparatit të përgatitur.

Për zbulimin e plotë të helminthëve të të gjitha llojeve, duhet të përdoret metoda e njollosjes së trashë Kato me një pllakë mbulese celofani në kombinim me një nga metodat e pasurimit. Më të zakonshmet prej tyre janë metoda Kalantaryan dhe metoda Fulleborn.

Metoda Kalantaryan: në shishe me grykë të gjerë me një vëllim prej 100 ml përziejeni mirë me një shufër qelqi 5 G feces, duke shtuar gradualisht zgjidhjen e ngopur të nitratit të natriumit (1 kg nitrat natriumi për 1 l ujë kur zien) deri në buzë të gotës. Grimcat e mëdha që notojnë në sipërfaqe hiqen me një lugë letre. Një rrëshqitës xhami aplikohet në sipërfaqen e tretësirës së kripur (tretësira e kripur shtohet derisa përzierja të vijë në kontakt të plotë me rrëshqitjen e qelqit). Në 20-30 min rrëshqitja hiqet dhe filmi ekzaminohet me mikroskop. Në mungesë të kësaj kripe, mund të përdorni një zgjidhje të ngopur të kripës së tryezës sipas Fholleborn (400 G kripë në 1 l ujë të vluar).

Për shkak të faktit se vezët me një peshë specifike të madhe (vezë të pafertilizuara të krimbave të rrumbullakët, vezë trematodash dhe cestode të mëdha) nuk notojnë, përveç ekzaminimit të shtresës sipërfaqësore të lëngut, kur përdoret metoda Fulleborn, është e nevojshme të ekzaminohet 2-4 preparate nga sedimenti nën mikroskop.

Metoda të veçanta laboratorike për testimin e helminthiazave të ndryshme.

7.7. Metodat për përcaktimin e qëndrueshmërisë së vezëve dhe larvave të helminthit

Qëndrueshmëria e vezëve të helminthit përcaktohet nga pamjen, duke lyer me bojëra vitale, kultivimi në kushte optimale dhe vendosja e një kampioni biologjik.

7.7.1. Përcaktimi i qëndrueshmërisë së vezëve ose larvave të helminthit nga pamja

Vezët e helminthit mikroskopohen fillimisht me zmadhim të ulët, pastaj me zmadhim të lartë. Në vezët e helminthit të deformuara dhe të vdekura, guaska është e grisur ose e përkulur nga brenda, plazma është e turbullt dhe lirohet. Vezët e segmentuara kanë topa dërrmues (blastomere) me madhësi të pabarabartë, formë të çrregullt, shpesh i zhvendosur në një pol. Ndonjëherë ka vezë jonormale që, pavarësisht deformimeve të jashtme, zhvillohen normalisht. Në larvat e gjalla të krimbave të rrumbullakët, grimca e imët është e pranishme vetëm në pjesën e mesme të trupit; ndërsa ato vdesin, ajo përhapet në të gjithë trupin, shfaqen vakuola të mëdha hialine me shkëlqim, të ashtuquajturat "vargjet e perlave".

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të pjekura të krimbave të rrumbullakët, kamxhikut dhe krimbave, duhet të telefononi lëvizjet aktive larvat duke e ngrohur lehtë preparatin (në një temperaturë jo më të madhe se 37 °C). Është më i përshtatshëm për të vëzhguar qëndrueshmërinë e larvave të krimbit të rrumbullakët dhe krimbit të kamxhikut pasi ato janë izoluar nga lëvozhga e vezës duke shtypur xhamin e kapakut të preparatit me një gjilpërë disekuese ose piskatore.

Në larvat invazive të krimbit të rrumbullakët, një këllëf shpesh shihet duke u hequr në fund të kokës, dhe në larvat e krimbit të kamxhikut që kanë përfunduar zhvillimin në vezë, një stilet gjendet në këtë vend me zmadhim të lartë. Në larvat e ngordhura të helminthit, pavarësisht nga vendndodhja e tyre (në vezë ose jashtë saj), vërehet prishja e trupit. Në këtë rast, struktura e brendshme e larvës bëhet e bllokuar ose e grimcuar, dhe trupi bëhet i turbullt dhe i errët. Vakuolat gjenden në trup, dhe thyerjet gjenden në kutikula.

Qëndrueshmëria e onkosferave taeniide (gjedhi, shirit i derrit, etj.) përcaktohet nga lëvizja e embrioneve kur ekspozohen ndaj tyre enzimat e tretjes. Vezët vendosen në një gotë ore me lëng gastrik të qenit ose lëng artificial duodenal. Përbërja e kësaj të fundit: pankreatinë - 0,5 g, bikarbonat natriumi - 0,09 g, ujë i distiluar - 5 ml. Syzet e orës me vezë vendosen në një termostat në 36 - 38 ° C për 4 orë. Në këtë rast, embrionet e gjalla çlirohen nga membranat e tyre. Predhat e onkosferave të gjalla gjithashtu treten në pepsinën e acidifikuar dhe brenda tretësirë ​​alkaline tripsina pas 6 - 8 orësh në një termostat në 38 ° C.

Nëse vendosni vezë teniid në një tretësirë ​​1% të sulfurit të natriumit ose në një tretësirë ​​20% të hipoklorurit të natriumit, ose në një tretësirë ​​1% të ujit me klor në 36 - 38 ° C, embrionet e pjekura dhe të gjalla lirohen nga membranat dhe nuk ndryshim gjatë 1 dite. Onkosferat e papjekura dhe të ngordhura tkurren ose bymehen dhe zmadhohen ndjeshëm, dhe më pas “shpërndahen” brenda 10 minutave deri në 2 orë. Embrionet e gjalla taeniide lëvizin gjithashtu në mënyrë aktive në një përzierje prej 1% zgjidhje klorur natriumi, 0,5% tretësirë ​​bikarbonat natriumi dhe biliare në 36 - 38 °C.

Qëndrueshmëria e Adolescaria fascioli të mbledhura në bimë dhe objekte të tjera të trupave ujorë kontrollohet duke i ekzaminuar ato në një rrëshqitje xhami në një zgjidhje fiziologjike nën një mikroskop me një fazë ngrohjeje. Kur larvat e trematodës nxehen, ato fillojnë të lëvizin.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të krimbave xhuxh shirit, metoda më e thjeshtë është nga N.S. Ionina: në vezët e gjalla, çifti mesatar i grepave embrionalë është ose paralel me ato anësore, ose këto të fundit formojnë një kënd me mesataren në bazë më pak se 45°. Në vezët e ngordhura, çiftet anësore formojnë një kënd me çiftin mesatar në bazën më shumë se 45°, ose grepa shpërndahen rastësisht (rregullimi i tyre i çiftëzuar humbet); Ndonjëherë embrioni tkurret dhe formohen granula. Një metodë më e saktë bazohet në shfaqjen e lëvizjeve të onkosferës gjatë një ndryshimi të mprehtë të temperaturës: nga 5 - 10 ° në 38 - 40 ° C.

Përcaktimi i qëndrueshmërisë së vezëve të nematodës së papjekur duhet të studiohet në një dhomë të lagësht (enë Petri), duke i vendosur vezët e krimbave të rrumbullakët në një tretësirë ​​formaldehidi 3% të përgatitur në një solucion izotonik të klorurit të natriumit në një temperaturë prej 24 - 30 ° C, vezët e krimbave në një tretësirë ​​3%. të acidit klorhidrik në një temperaturë prej 30 - 35 ° C; vezët e krimbit në një solucion izotonik të klorurit të natriumit në një temperaturë prej 37 °C. Enët Petri duhet të hapen 1-2 herë në javë për ajrim më të mirë dhe letra filtri duhet të laget sërish. uje i paster.

Vëzhgimet e zhvillimit të vezëve të helminthit kryhen të paktën 2 herë në javë. Mungesa e shenjave të zhvillimit brenda 2 - 3 muajsh tregon jo qëndrueshmërinë e tyre. Shenjat e zhvillimit të vezëve të helminthit janë fillimisht fazat e shtypjes, duke e ndarë përmbajtjen e vezës në blastomere të veçanta. Gjatë ditëve të para zhvillohen deri në 16 blastomere, të cilat kalojnë në fazën e dytë - morula etj.

Vezët e krimbit të ngjizjes kultivohen në një cilindër xhami (50 cm i lartë dhe 7 cm në diametër) i mbyllur me tapë. Një përzierje e vëllime të barabarta rërë sterile, qymyr druri dhe feçet me vezët e krimbit të gremisit, të holluara me ujë në një konsistencë gjysmë të lëngshme, derdhen me kujdes në fund të cilindrit duke përdorur një tub qelqi. Gjatë 1 - 2 ditëve të vendosjes në errësirë ​​në një temperaturë prej 25 - 30 ° C, larvat rabditforme dalin nga vezët dhe pas 5 - 7 ditësh ato bëhen filariforme: larvat zvarriten në muret e cilindrit, ku ndodhen. të dukshme edhe me sy të lirë.

Vezët e trematodave që zhvillohen natyrshëm në ujë, për shembull opisthorchis, diphyllobothriidae, fasciolae dhe të tjera, vendosen në një gotë ore, enë Petri ose një enë tjetër dhe derdhet një shtresë e vogël me ujë të zakonshëm. Gjatë kultivimit të vezëve Fasciola, duhet pasur parasysh se ato zhvillohen më shpejt në errësirë, ndërsa në vezët e gjalla në temperaturën 22 - 24 ° C, miracidiumi formohet në 9 - 12 ditë. Kur mikroskoponi vezët trematode në zhvillim, lëvizjet e miracidiumit janë qartë të dukshme. Miracidium fasciola del nga lëvozhga e vezës vetëm në dritë.

Metoda Fulleborn. Larvat e krimbit të gjirit dhe të fortylideve kultivohen në agar në një enë Petri me qymyr të kafshëve. Pasi mbahen në një termostat në një temperaturë prej 25 - 30 ° C për 5 - 6 orë, larvat zvarriten nëpër agar, duke lënë pas një shteg bakteresh.

Metoda Harada dhe Mori. Shtoni 7 ml ujë të distiluar në provëzat e vendosura në një raft. Duke përdorur një shkop druri, merrni 0,5 g feçe dhe bëni një njollë në letër filtri (15 x 150 mm) 5 cm nga buza e majtë (ky operacion kryhet në një fletë letre për të mbrojtur sipërfaqen e stolit të laboratorit). Pastaj shiriti me njollë futet në epruvetën në mënyrë që skaji i majtë i lirë nga njolla të arrijë në fund të epruvetës. Mbulojeni pjesën e sipërme me një copë celofan dhe mbështilleni fort me një brez elastik. Në provëz shënohet numri dhe mbiemri i personit që do të ekzaminohet. Në këtë gjendje, tubat ruhen për 8 - 10 ditë në një temperaturë prej 28 °C. Për të studiuar larvat, hiqni kapakun e celofanit dhe hiqni një rrip letre filtri me piskatore. Duhet pasur kujdes kur e bëni këtë pasi një numër i vogël larvash infektive mund të lëvizin në fundin e sipërm të letrës filtruese ose në anën e tubit dhe të depërtojnë nën sipërfaqen e celofanit.

Tubat e provës vendosen në të nxehtë banjë me ujë në një temperaturë prej 50 ° C për 15 minuta, pas së cilës përmbajtja e tyre tundet dhe derdhet shpejt në një provëz 15 ml për të sedimentuar larvat. Pas centrifugimit, supernatanti hiqet dhe sedimenti transferohet në një rrëshqitës xhami, mbulohet me një mbulesë dhe ekzaminohet mikroskopikisht me zmadhim të ulët.

Për diagnoza diferenciale larvat filariforme, duhet të përdorni të dhënat në Tabelën 3.

Tabela 3

DIAGNOSTIKA DIFERENCIALE E LARVAVE FILARIOID TË A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, TRICHOStrONGYLUS SP.

Larvat	Dimensionet	Shenjat karakteristike
A. duodenale	Gjatësia e trupit rreth 660 µm, gjatësia e këllëfit - 720 nm	Shtrirja e kapakut është më pak e theksuar, zgjatja orale është më pak e dukshme, skaji i përparmë i trupit (por jo kapaku) është i hapur, diametri i tubit të zorrëve është më i vogël se llamba e ezofagut, skaji bishtor është i hapur.
N. americanus	Gjatësia e trupit rreth 590 mikron, gjatësia e këllëfit - 660 nm	Kapaku është dukshëm i strijuar, veçanërisht në pjesën kaudale të trupit, protuberanca orale duket e errët, skaji i përparmë i trupit (por jo kapaku) është i rrumbullakosur si një skaj i ngushtë. vezë pule, pjesa e përparme e tubit të zorrëve ka të njëjtin diametër me llambën e ezofagut, fundi kaudal është i mprehtë
S. stercoralis	Gjatësia e trupit rreth 500 mikron	Larva është pa këllëf, ezofagu është rreth gjysma e gjatësisë së trupit, bishti është i hapur ose i degëzuar
Trichostrongylus sp.	Gjatësia e trupit rreth 750 μm	Lumeni i zorrëve nuk është i drejtë, por zigzag, fundi i bishtit është i rrumbullakosur dhe i formuar si një buton

7.7.2. Metodat për ngjyrosjen e vezëve dhe larvave të helminthit

Indet e vdekura në shumicën e rasteve i perceptojnë bojërat më shpejt se ato të gjalla. Këto karakteristika përdoren në helmintologji për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve dhe larvave të helminthit. Megjithatë, në disa raste, disa bojëra perceptohen më mirë nga indet e gjalla sesa nga ato të vdekura.

Për të dalluar vezët dhe larvat e gjalla dhe të ngordhura, përdoren bojërat dhe metodat e mëposhtme.

Leukobaza metilen blu përdoret shpesh për të njollosur indet e gjalla dhe të vdekura. Qelizë e gjallë ose indi redukton blunë e metilenit në leukobazë të pangjyrë, indi i vdekur nuk e ka këtë aftësi, kështu që merr ngjyrë.

Kriteri për gjendjen e një veze është ngjyrosja e embrionit, por jo lëvozhga. Kjo aftësi lidhet me kushtet në të cilat veza vdes. Në rastet kur membrana fibroze në një vezë të ngordhur nuk i humbet vetitë e saj gjysmë të përshkueshme, ajo nuk do të lejojë kalimin e ngjyrave dhe për këtë arsye embrioni i vdekur nuk do të njolloset. Një embrion me ngjyrë tregon gjithmonë vdekjen e vezës.

Për të ngjyrosur vezët e krimbave të rrumbullakët, mund të përdorni blu metilen në një tretësirë ​​të acidit laktik me alkali kaustike (0,05 g blu metilen, 0,5 g hidroksid natriumi, 15 ml acid laktik). Vezët e gjalla nuk e perceptojnë ngjyrën; janë pikturuar në Ngjyra blu embrionet e vezëve të ngordhura. Ngjyrosja e larvave të krimbit të rrumbullakët me një zgjidhje bazë të bojës blu brilliantcresyl në një përqendrim 1:10000 kryhet si më poshtë: një pikë lëngu me vezë të krimbit të rrumbullakët dhe një pikë e tretësirës bazë të bojës aplikohen në një rrëshqitje xhami. Preparati mbulohet me një mbulesë, e cila shtypet fort në rrëshqitës, ndërsa preket lehtë me një gjilpërë disekuese. Numri i larvave që dalin dhe shkalla e ngjyrosjes së tyre vërehen nën një mikroskop; pas së cilës i njëjti medikament ekzaminohet sërish pas 2 - 3 orësh. Vetëm larvat e padeformuara që nuk janë ngjyrosur për 2 orë konsiderohen të gjalla. Larvat e ngordhura ose nuk dalin nga vezët, ose bëhen me ngjyrë kur lëvozhga thyhet (pjesërisht ose plotësisht).

Gjatë përcaktimit të qëndrueshmërisë së vezëve të krimbave të shpendëve, është e mundur që preparatet të njollosen me 5% tretësirë ​​alkooli Yoda. Kur aplikohet në preparat, mikrobet e vezëve të vdekura të Ascaridia ndodhin brenda 1 - 3 sekondave. janë lyer me ngjyrë portokalli.

Vezët e ngordhura të opisthorchis dhe onkosferat e shiritit të gjedhit ngjyrosen me një tretësirë ​​të blusë toluidine (1:1000) dhe onkosferat e krimbit të ngordhur të gjedhit me një zgjidhje të blusë brilante kresil (1:10000). Në të njëjtën kohë, embrionet dhe lëvozhgat e vezëve të vdekura dhe të gjalla marrin ngjyrë. Prandaj, pas ngjyrosjes, vezët dhe onkosferat lahen uje i paster dhe gjithashtu i lyejmë me safranin (të holluar 1:10000 në alkool 10 °C). Alkooli heq bojën nga predha dhe safranin e kthen atë në të kuqe. Si rezultat, vezët e gjalla bëhen të kuqe; vezët me embrione të vdekur bëhen blu, por lëvozhga mbetet e kuqe. Embrionet e ngordhura të krimbit të gjedhit në onkosferë shpejt, brenda pak minutash, kthehen në të kuqe të ndezur ose ngjyrë rozë safranin ose blu cresyl brilliant blu në një hollim prej 1:4000, ose indigo carmine në një hollim prej 1:1000 - 1:2000. Embrionet e gjalla nuk ndryshojnë nën ndikimin e këtyre bojrave edhe pas 2 - 7 orësh.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të krimbave xhuxh, rekomandohet të përdorni bojërat e mëposhtme:

1. Blu brilliantkreasyl (1:8000) - pas 1 ore, onkosfera e vezëve të ngordhura merr ngjyrë veçanërisht të ndezur, e cila bie në sy në sfondin e zbehtë ose të pangjyrë të pjesës tjetër të vezës.

2. Safranin (1:8000 kur ekspozohet për 2 orë dhe 1:5000 për 3 - 5 orë).

3. Tretësirë ​​50% e acidit pirogalik në një hollim 1:2 - kur ekspozohet për 1 orë në një temperaturë prej 29 - 30 ° C (sa më e ulët të jetë temperatura, aq më i gjatë është procesi i ngjyrosjes).

7.7.3. Metoda lumineshente për studimin e vezëve dhe larvave të helminthit

Mikroskopi fluoreshent bën të mundur dallimin midis objekteve të gjalla dhe të vdekura pa dëmtuar vezën. Nuk përdoret për fluoreshencë rrezet ultraviolet, dhe pjesa blu-vjollcë e dritës së dukshme, me një mikroskop konvencional dhe rrëshqitës xhami; shtuar në ndriçuesin OI-18 set special filtra me ngjyra.

Vezët e gjalla dhe të ngordhura të krimbave të rrumbullakët, gjilpërave, shiritave xhuxh, shiritave të gjedhit, shiritave të gjera dhe helminthëve të tjerë fluoreshenojnë ndryshe. Kjo dukuri vërehet si gjatë lumineshencës parësore pa përdorimin e ngjyrave, ashtu edhe kur ngjyroset me fluorokrom (akridine portokalli, korifosfinë, primulinë, auroline, sulfat berlerin, tripaflavinë, rivanol, akrinë etj.).

Vezët e krimbave të rrumbullakët pa ngjyrë, të gjalla, të pa segmentuara shkëlqejnë jeshile e ndezur me një nuancë të verdhë; në vezët e ngordhura lëvozhga rrezaton dritë e gjelbër shumë më e ndritshme se pjesa embrionale e gjelbër e errët; Në vezët e krimbave të rrumbullakët me një larvë, shfaqet vetëm lëvozhga, dhe në vezët e ngordhura, si lëvozhga ashtu edhe larva janë të verdhë të ndezur.

Vezët e gjalla të papigmentuara dhe të pasegmentuara të krimbave pink dhe të shiritave xhuxh lëshojnë një dritë jeshile-verdhë; lëvozhga e vezëve të ngordhura ndriçon intensivisht në sfondin e një mase embrionale të gjelbër të errët.

Me luminescencë dytësore (kur ngjyroset me portokall akridine në një hollim 1:10,000 dhe 1:50,000 nga 30 minuta në 2 orë), guaska e nematodeve të gjalla dhe të vdekura, trematodeve dhe cestodave ndriçon ndryshe.

Lëvozhgat e vezëve të gjalla dhe të ngordhura të krimbave të rrumbullakët, toksokarës, krimbave të gjilpërave, shiritave xhuxh, shiritave të minjve, krimbave të shiritit të demit dhe krimbave shirit janë me ngjyrë portokalli-kuqe. Embrionet e vezëve të gjalla të krimbave të rrumbullakët, toxascaris, shiritave të minjve, krimbave të gjerë shirit dhe onkosferave të shiritave të gjedhit fluoreshenojnë jeshile e errët ose ngjyrë gri-jeshile. Vezët embrionale të vdekura të këtyre helminthëve lëshojnë një ngjyrë "të djegur" portokalli-të kuqe. Larvat e krimbit të gjallë dhe toxocara (lëvozhgat e vezëve të liruara) lëshojnë një dritë të shurdhër gri-jeshile; kur ato vdesin, ngjyra ndryshon nga fundi i kokës në një jeshile të lehtë "djegëse", pastaj në të verdhë, portokalli dhe në fund portokalli të ndezur.

Kur ngjyroset me fluorokrom - korifosfili, primulina, vezët e ngordhura të krimbave të rrumbullakët dhe krimbave të kamxhikut shfaqin një shkëlqim nga e verdha jargavan në të kuqe bakri. Vezët e qëndrueshme nuk ndriçojnë, por janë të ngjyrosura ngjyrë jeshile e errët.

Vezët e gjalla të trematodave (paragonimus dhe clonorchis) nuk shkëlqejnë kur njollosen me akridine portokalli, por vezët e ngordhura prodhojnë një ngjyrë të verdhë-jeshile.

Metoda e lumineshencës mund të përdoret gjithashtu për të përcaktuar qëndrueshmërinë e larvave të helminthit. Kështu, larvat e fortë dhe rhabditatus të fluorokromuara me një zgjidhje të portokallit akridine (1:2000) shkëlqejnë: të gjalla - jeshile (me një nuancë), ato të vdekura - me një dritë të ndritshme portokalli.

Miracidet e gjalla që dalin nga guaska lëshojnë një dritë të zbehtë kaltërosh me një kurorë mezi të dukshme të verdhë të qerpikëve, por 10 - 15 minuta pas vdekjes ato shfaqen me një dritë jeshile të ndritshme "djegie", dhe më pas dritë portokalli-kuqe.

7.7.4. Metoda e mostrës biologjike

Për shembull, për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve ascarid (krimbi i derrit, krimbi i njeriut, Toxocara, Toxascaris, etj.) për kafshë (derra gini, minj) ju nevojiten të paktën 100 - 300 vezë me larva të zhvilluara. Vezët e Ascaris në një solucion izotonik të klorurit të natriumit futen me pipetë përmes gojës së një miu ose derri gini. Pas 6-7 ditësh, kafsha theret, mëlçia dhe mushkëritë e saj hapen dhe ekzaminohen veçmas për praninë e larvave askaridate. Për ta bërë këtë, mëlçia dhe mushkëritë priten në copa të vogla me gërshërë dhe ekzaminohen duke përdorur metodën Berman ose Supryaga (seksioni 6.1.2).

Nëse kafshët janë infektuar me vezë të gjalla pushtuese, atëherë pas autopsisë, larvat e ascarideve migruese gjenden në mëlçi dhe mushkëri.

Në rast infeksioni, vezët Fasciola në feçet e kafshëve laboratorike mund të zbulohen te lepujt pas 2 muajsh, në derra nga Guinea- pas 50 ditësh, në minj - pas 35 - 40 ditësh.

Për të marrë më shpejt një përgjigje, kafshët laboratorike hapen pas 20 - 30 ditësh dhe mëlçia ekzaminohet për praninë e fascioli të rinj.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të krimbave xhuxh, rekomandohet gjithashtu t'i ushqeni ato te minjtë e bardhë të pa infektuar më parë, pasuar nga hapja e kafshëve pas 92-96 orësh dhe identifikimi i cisticerkoideve në vilet e zorrëve ose cestodave në lumenin e zorrëve.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të opisthorchis, rekomandohet një metodë (German S.M., Baer S.A., 1984), bazuar në aktivizimin fiziko-kimik të gjëndrës së çeljes së miracidiumit dhe stimulimin. aktiviteti motorik larva, e cila çon në hapjen e kapakut të vezës dhe lirimin aktiv të miracidiumit në kushte eksperimentale.

Pezullimi i vezëve të opisthorchis në ujë ftohet paraprakisht në 10 - 12 °C (të gjitha operacionet e mëvonshme kryhen në temperaturën e dhomës 19 - 20 °C). 1 pikë suspensioni që përmban 100 - 150 vezë shtohet në një tub centrifuge. Provëza vendoset në një stendë për 5 - 10 minuta. Gjatë kësaj kohe, të gjitha vezët arrijnë të zhyten në fund. Më pas uji i tepërt thithet me kujdes me një rrip letre filtri dhe në provëz hidhen 2 pika të një mediumi special. Mjeti përgatitet në tampon Tris-HCl 0,005 M; një solucion 12 - 13% etanol dhe një ngjyrues (fuksin, safranin, eozinë, blu metilen, etj.) i shtohen buferit. Provëza tundet, përmbajtja e saj hidhet me pipetë në një rrëshqitës xhami dhe lihet për 10 minuta, duke u tundur pak. Pastaj shtoni 2 pika të mediumit të specifikuar. Preparati është gati për mikroskopi nën një mikroskop konvencional me dritë me zmadhim 20x.

Gjatë kësaj kohe, kapaku i larvave të qëndrueshme hapet dhe miracidiumi del në mënyrë aktive në mjedisin e specifikuar. Falë pranisë së etanolit në të, ato imobilizohen pas 2 - 5 minutash dhe më pas lyhen me bojë. Ato mund të zbulohen dhe numërohen lehtësisht me mikroskop.