Mekanizmi i reagimit të precipitimit është i ndryshëm nga reaksioni. Reagimi i precipitimit (metodë imunologjike)

Konsiston në ndërveprimin e një antigjeni të tretshëm me një antitrup, i ndjekur nga formimi i një sedimenti të imët (precipitati).

Reaksioni i precipitimit bën të mundur përcaktimin e pranisë së një antigjeni të panjohur në materialin e provës duke shtuar një antitrup të njohur ose duke përdorur një antigjen të njohur për të përcaktuar një antitrup të panjohur. Reshjet po keqësohet në mungesë të kripërave. Reshjet optimale janë në intervalin pH=7.0-7.4.

Mekanizmi i reshjeve është i afërt me mekanizmin e aglutinimit. Nën ndikimin e sistemit imunitar, i cili ka reaguar me antigjenin, shkalla e dispersionit të tij ulet. Është e nevojshme që serumi dhe antigjeni të jenë plotësisht transparent. Kur kryeni precipitim, mund të shtoni hollime të ndryshme të antigjenit në një hollim të serumit, ose anasjelltas.

Reshjet regjistrohen më mirë nëse antigjeni vendoset në majë të antitrupit në një epruvetë. Në këtë rast, vërehet shfaqja e një precipitati në formën e një unaze - reshje unazore. Reshjet e unazës kryhen në tuba të veçantë me diametër 2,5-3,5 mm. Për të përcaktuar numrin e antigjeneve në materialin e provës ose të antitrupave të ndryshëm në serum, përdoret reaksioni i precipitimit të agarit: 1% agar i kulluar derdhet në ose mbi rrëshqitës xhami. Tretësirat e antigjenit dhe antitrupave derdhen në puse të ndryshme të bëra në agar, të cilët shpërndahen drejt njëri-tjetrit, duke formuar linja reshjeje. Reagimi i precipitimit përdoret gjerësisht në diagnostikim (shih Reaksioni Ascoli).

Reshjet në agar bëjnë të mundur përcaktimin e toksigjenitetit të kulturave të difterisë.

NË kërkime mjekoligjore reshjet shërbejnë për të vendosur llojet e gjakut, organeve dhe indeve duke përdorur serume specifike precipituese.

Precipitimi është reagimi i precipitimit të një kompleksi antigjeni (precipitinogjen) dhe antitrupi (precipitin). Reshjet janë një nga fenomenet imunologjike që bën të mundur përcaktimin e përmbajtjes së antitrupave (shih) në serumin e gjakut të njerëzve të sëmurë ose të vaksinuar, si dhe në gjakun e kafshëve të imunizuara. Kur përdorni serum standard, reaksioni i precipitimit mund të përdoret për të titruar antigjenet e tretshëm me origjinë të ndryshme (shih).

Në formën më të thjeshtë të vendosjes së reaksionit të precipitimit, serumi i provës shtohet duke u shtresuar në një seri epruvetash me një sasi konstante antigjeni në një seri hollimesh të shumta. Pas 30-60 min. inkubimi në temperaturën e dhomës, një unazë turbullimi formohet në ndërfaqen e dy lëngjeve - reshjet e unazës. Sasia minimale e serumit që jep një reaksion precipitimi merret si titër i antiserumit. Duke kryer reaksionin e kundërt me një antiserum standard, është e mundur të vlerësohet përqendrimi relativ i antigjenit në lëngje të ndryshme biologjike.

Rezultatet e titrimit të antitrupave dhe antigjeneve bazuar në metodën e mësipërme nuk kanë një shprehje sasiore absolute. Për të përcaktuar sasinë e përmbajtjes së antitrupave, u zhvilluan Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) dhe të tjerë. metodë sasiore reaksioni i reshjeve, i cili bazohet në zbulimin e të ashtuquajturës zonë ekuivalente. Kur përzihen sasi specifike të antigjenit për moshën me vëllime konstante të antiserumit, sasia e precipitatit të formuar fillimisht rritet dhe më pas zvogëlohet përsëri për shkak të rritjes së tretshmërisë së kompleksit antigjen-antitrup në antigjen të tepërt. Nëse përcaktojmë përmbajtjen e antitrupave në supernatant në të gjitha epruvetat, do të rezultojë se në epruvetën e mesme të rreshtit apo edhe në epruvetën e vetme nuk ka antitrupa në supernatant; në të njëjtën kohë, këtu formohet precipitati më i madh. Meqenëse në zonën ekuivalente i gjithë antigjeni i futur në përzierjen e substancave reaguese është gjithashtu i përfshirë në precipitat, pas zbritjes së proteinës së antigjenit nga sasia e proteinës së precipitatit, merret vlera e saktë e përmbajtjes së antitrupave në një vëllim të caktuar të serumit të provës. . Përmbajtja e proteinave të precipitatit pas larjes së plotë me tretësirë ​​të kripur të ftohur përcaktohet me azot ose me ndonjë metodë kolorimetrike.

Kur vlerësohet vlera e reaksionit të reshjeve si metodë diagnostikeështë e nevojshme të merret parasysh që serumet imune mund të përmbajnë antitrupa që nuk kanë vetitë e precipitinave dhe, për rrjedhojë, nuk formojnë një precipitat kur ndërveprojnë me antigjenin. Këto përfshijnë kryesisht antitrupa jo të plota, si dhe disa antitrupa të tjerë që i përkasin grupit të gama A-globulinave.

Aftësia e antiserumit për të precipituar antigjenin mund të dëmtohet nga ngrohja në 65-70°, trajtimi me tretës organikë, reduktimi në një mjedis acidik [Izliker (N. Isliker), A.Ya. Kullberg]. Fenomeni i precipitimit me antiserum që dihet se përmban precipitina është i mundur vetëm në një temperaturë të caktuar, përqendrim të kripërave dhe joneve të hidrogjenit. Reagimi i reshjeve ndodh më shpejt në 25-37°. Një kusht i domosdoshëm për formimin e një precipitati është prania e klorurit të natriumit (0,85% zgjidhje NaCl) në përqendrime izotonike. Kur përqendrimi i NaCl rritet në 15%, precipitatet e formuara nga antigjeni polisaharid treten pjesërisht, të cilat mund të përdoren për të nxjerrë antitrupa të pastër. Reagimi i precipitimit me antigjenet e proteinave ndodh me të njëjtën shpejtësi dhe plotësi si në 0.85% ashtu edhe në 15%. tretësirat NaCl. Përqendrimi optimal i joneve të hidrogjenit për formimin e precipitatit korrespondon me vlerat e pH nga 5.0 në 9.0.

Në praktikën laboratorike përdoren modifikime të ndryshme të reaksionit të precipitimit. Në veçanti, reaksioni i termoprecipitimit përdoret për të zbuluar antigjenet bakteriale antraksit, botulizmi etj., që nuk i nënshtrohen denatyrimit termik (koktoantigjene). Ky reaksion ndryshon nga reaksioni i precipitimit unazor vetëm në atë që filtrati i materialit testues të zier përdoret si antigjen (shiko Cili është reagimi).

Kur analizohet një përzierje komplekse e antigjeneve duke përdorur reaksionin e precipitimit, është e pamundur të karakterizohen vetitë e përbërësve individualë të përzierjes. Për të zgjidhur këtë problem, ata përdorin metodat e reshjeve në agar dhe imunoelektroforezë. Metoda e precipitimit të agarit në modifikimin më të zakonshëm të O. Ouchterlony bazohet në faktin se antigjeni dhe antiserumi, duke u shpërndarë drejt njëri-tjetrit në një shtresë të hollë agari, formojnë linja reshjeje kur takohen. Nga numri i linjave të tilla mund të gjykohet numri i përbërësve që përmbahen në një përzierje të caktuar antigjenesh. Metoda Ouhgerlonu ju lejon të krahasoni përzierje të ndryshme antigjenike dhe të përcaktoni shkallën e lidhjes së përbërësve të pranishëm në to. Kur analizohet një përzierje komplekse antigjenike që përmban substanca me të njëjtat shkallë difuzioni në agar, ndihmë e madhe mund të sjellë metodën imunoelektroforezë. Përzierja e antigjenit ndahet paraprakisht në një fushë elektrike në një pjatë agar, pas së cilës zhvillohet komponente individuale antiserum. Antiserumi shtohet në një kanal të bërë në agar paralel me vijën përgjatë së cilës antigjenet lëviznin gjatë elektroforezës. Çdo antigjen prodhon një hark individual precipitimi me antiserum. Imunoelektroforeza përdoret gjerësisht për analiza anomalitë patologjike në proteinat e serumit, si dhe në analizën imunologjike të antigjeneve indore dhe bakteriale.

Reshjet mjeko-ligjore. Reshjet përdoren në mjekësinë ligjore për të përcaktuar llojin e gjakut, pjesët e organeve dhe indeve. Në një sërë rastesh hetimore është e nevojshme të përcaktohet lloji i gjakut i gjetur në instrumentet e një krimi, në rrobat e kriminelit apo viktimës etj. Për reaksionin e precipitimit përdoren serumet precipituese, të marra nga imunizimi i lepujve. gjela, dhi me proteina nga kafshë të ndryshme. Në mënyrë tipike, përgatiten serume që precipitojnë njerëzit, kalin, macen, pulën, derrin, qenin, bagëti. Ata duhet të kenë një titër të paktën 1:10,000 dhe të jenë mjaft specifik. Ekstraktet përgatiten nga njolla ose korja e gjakut që ekzaminohet. tretësirë ​​fiziologjike, të cilat më pas testohen me serum precipitues. Lloji i proteinës konsiderohet i vendosur nëse një nga serumet precipituese formon një precipitat me një ekstrakt nga gjaku i testuar me reagimin përkatës të kontrollit. Reagimi i precipitimit mund të përcaktojë gjithashtu llojin e proteinës në indet dhe organet e njeriut ose të kafshëve. Në mënyrë tipike, reaksioni i precipitimit kryhet në epruveta me një fund në formë koni. Kur përftohen ekstrakte të turbullta, reaksioni i precipitimit kryhet në agar Ouchterlohn.

Reaksioni i precipitimit (RP) është precipitimi i një antigjeni të tretshëm nën veprimin e antitrupave në prani të një elektroliti. Efekti i dukshëm i reagimit (fenomeni i reshjeve) - turbullira (formimi i një unaze me re ose sedimenti - precipitojnë).

RP përdoret për të zbuluar një antigjen të panjohur në një numër sëmundjesh infektive: për antraksin, tulareminë, meningjitin, linë. Në mjekësinë ligjore përdoret për të përcaktuar llojin e gjakut dhe spermës; në studimet sanitare dhe higjienike - për të vendosur falsifikimin produkte ushqimore. RP është shumë e ndryshme ndjeshmëri e lartë dhe ju lejon të zbuloni antigjenin në hollimet 1:1,000,000 dhe 1:10,000,000.

Përbërësit e reaksionit të precipitimit.

1. Antigjeni (precipitinogjen) - ky është një antigjen natyra molekulare, i cili është në një gjendje të shpërndarë imët (të tretshëm). Precipitinogjenët janë lizate ose ekstrakte të ndryshme të indeve, etj. Precipitinogjeni ndryshon nga aglutinogeni në madhësinë e grimcave të antigjenit. Aglutinogen Ajo ka madhësive të qelizave(këto nuk janë qeliza të tëra të shkatërruara), por dimensionet precipitinogjen në përpjesëtim me madhësive molekulare(këto janë proteina dhe komplekset e tyre me karbohidrate ose lipide). Tretësirë ​​precipitinogjene transparente.

2. Antitrupat (precipitina) gjenden në serumin e gjakut të njeriut ose në serumet precipituese diagnostikuese imune që përmbajnë antitrupa të njohur.

3. Elektrolit– tretësirë ​​izotonike e klorurit të natriumit.

Marrja e precipitinogjenit.

Përftohet duke bluar materialin dhe duke nxjerrë prej tij antigjene proteinike me zierje ose me metoda të tjera.

Shembuj të precipitinogjenëve: lizate ose ekstrakte organe të ndryshme dhe indet, serumi i gjakut të huaj (serumi është zgjidhje, para së gjithash, të ndryshme proteinat), filtrate të kulturave të mishit të mikrobeve, ekstrakte kripërash të mikrobeve, autolizate etj.

Përgatitja e serumeve precipituese.

Marrë nga hiperimunizimi i lepujve me precipitinogjene të përshtatshme. Serumet e tilla përmbajnë antitrupa ndaj atyre precipitinogjenëve me të cilët janë imunizuar lepujt.

Shembuj të serumeve precipituese: precipituese serum i antraksit (përmban antitrupa ndaj antigjeneve të antraksit), precipitues i serumit antimeningokokal(përmban antitrupa kundër antigjeneve të shkaktarit të meningjitit), etj.

Titri serumi precipitues - ky është hollimi më i lartë i precipitinogjenit në të cilin serumi ende jep një reaksion precipitimi.

Metodat për vendosjen e RP.

1. Reaksioni i reshjeve të unazës - kryhet në tuba të veçantë reshjesh (diametri - 0,4-0,5 cm, lartësia - 7-8 cm). 0,2 - 0,3 ml serum precipitues i shtohet epruvetës dhe e njëjta sasi precipitinogjeni shtrohet me kujdes përgjatë murit me grykën e gjatë të një pipete Pasteur. Më pas vendosni me kujdes epruvetat vertikalisht nga një pozicion horizontal.

Llogaritja e rezultateve të reagimit kryhet nga shfaqja e një unaze të bardhë në ndërfaqen antigjen-antitrup. Nëse reagimi është pozitiv vërehet formimi i një unaze të tillë. Në këtë rast, antigjeni përputhet me antitrupin dhe ata lidhen.

Nëse ekstraktet ujore të ziera dhe të filtruara të organeve dhe indeve përdoren si precipitinogjen, reaksioni quhet reaksion reshjet termore (për shembull, kur diagnostikohet antraksi).

2. Reagimi i precipitimit në xhel - kryhet në enë Petri ose në rrëshqitës xhami, ku vendoset një shtresë xheli agar. Ndërsa xheli ngurtësohet, priten puse në të cilat vendosen antigjenet ose antitrupat, ose të dyja. Të dallojë 2 metoda RP në xhel:

a) metodë imunodifuzion i thjeshtë (radial).: një nga përbërësit e reaksionit imunitar (antigjen ose antitrup) vendoset në pus, dhe përbërësi tjetër përzihet me agar; në rezultat pozitiv (antigjeni korrespondon me antitrupat) a unazë precipitimi ;

b) metodë imunodifuzion i dyfishtë: si antitrupi ashtu edhe antigjeni vendosen në puse të veçanta, ato shpërndahen drejt njëri-tjetrit në xhelin e agarit; nëse rezultati është pozitiv ku formohen antitrupat dhe antigjeni linjat e reshjeve .

Shembull i RP në xhelështë reaksioni i imunodifuzionit të dyfishtë Ouchterlony kur diagnostikohet difteria

imunoelektroforeza - Kjo është një metodë që kombinon metodën e elektroforezës dhe reaksionin e precipitimit. Një përzierje e antigjeneve (për shembull, proteinat e serumit) ndahet në një xhel duke përdorur elektroforezë. Më pas, për të gjetur dhe identifikuar proteinën e interesit (antigjen i panjohur), përdoret një serum precipitues diagnostikues që përmban antitrupa ndaj asaj proteine ​​(antitrup i njohur). Për ta bërë këtë, serumi diagnostikues futet në brazdë paralelisht me proteinat. Nëse midis proteinave ka një që korrespondon me antitrupin që gjendet në serum, atëherë linjat e reshjeve.

Reagimi i reshjeve- RP (nga lat. praecipito- precipitate) - ky është formimi dhe precipitimi i një kompleksi të antigjenit molekular të tretshëm me antitrupa në formën e turbullirës, ​​i quajtur precipitojnë. Formohet nga përzierja e antigjeneve dhe antitrupave në sasi ekuivalente; tejkalimi i njërit prej tyre ul nivelin e arsimimit kompleksi imunitar. Në ndryshim nga reaksioni i aglutinimit, antigjeni për reaksionin e precipitimit janë komponime të tretshme, madhësia e grimcave të të cilave i afrohet madhësisë së molekulave. Këto mund të jenë proteina, komplekse proteinash me karbohidrate dhe lipide, ekstrakte bakteriale, disate ose filtrate të ndryshme të kulturave të mikrobeve. Antitrupat e përfshirë në reaksionin e precipitimit quhen precipitina. Kompleksi antigjen-antitrup i shpërndarë imët që rezulton zbulohet duke përdorur metoda të caktuara të organizimit të reaksionit të precipitimit.
Reagimi i reshjeve të unazës u propozua për herë të parë nga Ascoli. Përdoret në diagnostikimin e antraksit, murtajës, tularemisë dhe meningjitit. Metoda është e thjeshtë dhe e arritshme.
Serumi specifik precipitues imunitar derdhet në tuba të ngushtë precipitimi dhe antigjeni vendoset me shumë kujdes mbi të. Për shembull, me rastin e diagnostikimit të antraksit, si antigjen merren copa lëkure, leshi, lëkura e kafshës së ngordhur etj., zihen, lëngu filtrohet dhe përdoret si antigjen. Shfaqja e një unaze - precipitati - në kufirin e dy lëngjeve tregon praninë e antigjenit përkatës.
Reaksioni i precipitimit të xhelit të agarit, ose metoda e precipitimit me difuzion, bën të mundur studimin në detaje të përbërjes së përzierjeve komplekse antigjenike të tretshme në ujë. Për të vendosur reagimin, përdorni një xhel (agar gjysmë i lëngshëm ose më i trashë). Çdo komponent që përbën antigjenin shpërndahet drejt antitrupit përkatës me shpejtësi të ndryshme. Prandaj, komplekset e antigjeneve të ndryshëm dhe antitrupat përkatës janë të vendosura në zona të ndryshme xhel, ku formohen linjat e reshjeve. Çdo linjë korrespondon me vetëm një kompleks antigjen-antitrup. Reagimi i precipitimit zakonisht kryhet në temperaturën e dhomës.
Është marrë metoda e imunoelektroforezës përdorim të gjerë V vitet e fundit kur studiohet struktura antigjenike e mikrobeve. Kompleksi i antigjenit vendoset në një pus, i cili ndodhet në qendër të një xhel agar të derdhur në pjatë. Një rrymë elektrike më pas kalon nëpër xhelin e agarit, duke bërë që antigjenet e ndryshme të përfshira në kompleks të lëvizin në fushë. rryme elektrike varësisht nga lëvizshmëria e tyre elektroforetike. Pas përfundimit të elektroforezës, serumi imunitar specifik shtohet në një kanal të vendosur përgjatë skajit të pllakës dhe vendoset në një dhomë të lagësht. Linjat e reshjeve shfaqen në vendet ku formohet kompleksi antigjen-antitrup.

Reaksionet e reshjeve vënë në provëza (reaksioni i reshjeve të unazës), në xhel, lëndë ushqyese, etj. Të gjera shpërndarja e marrë Llojet e reaksionit të precipitimit në agar gjysmë të lëngshëm ose xhel agarozë: imunodiffuzion i dyfishtë sipas Ouchterlony. imunodiffuzion radial, imunoelektroforezë dhe etj

Reagimi i imunodifuzionit radial. Serumi imunitar me xhel agar të shkrirë derdhet në mënyrë të barabartë në gotë. Pas ngurtësimit në xhel, bëhen puse në të cilat vendoset antigjeni në hollime të ndryshme. Antigjeni, duke u shpërndarë në xhel, formon zona të precipitimit në formë unaze rreth puseve me antitrupa (Fig. 13.7). Diametri i unazës së precipitimit është proporcional me përqendrimin e antigjenit. Reaksioni përdoret për të përcaktuar përmbajtjen në gjak të imunoglobulinave të klasave të ndryshme, përbërësve të sistemit të komplementit etj.

Imunoelektroforeza- një kombinim i elektroforezës dhe imunoprecipitimit: një përzierje e antigjeneve futet në puset e xhelit dhe ndahet në xhel duke përdorur elektroforezë. Më pas, serumi imunitar futet në brazdë paralelisht me zonat e elektroforezës, antitrupat e të cilit, duke u shpërndarë në xhel, formojnë një vijë precipitimi në pikën e kontaktit me antigjenin.

Mikroskopi elektronik imunitar- mikroskop elektronik i mikrobeve, më së shpeshti viruse, të trajtuara me antitrupa përkatës. Viruset e trajtuara me serum imunitar formojnë agregate imune (mikroprecipitate). Rreth virioneve formohet një "korolla" e antitrupave, në kontrast me acidin fosfotungstik ose preparate të tjera të dendura elektron-optikisht.

123. Reaksioni i precipitimit në një xhel për të përcaktuar toksigjenitetin e mikroorganizmave, mekanizmin, metodat e formulimit.

Reagimi i reshjeve (RP)- ky është formimi dhe precipitimi i një kompleksi antigjeni molekular të tretshëm me antitrupa në formën e turbullt, të quajtur precipitat. Formohet nga përzierja e antigjeneve dhe antitrupave në sasi ekuivalente; një tepricë e njërit prej tyre ul nivelin e formimit të kompleksit imunitar.

Në vitin 1946, J. Oudin propozoi metodën e thjeshtë të difuzionit, në të cilën një nga përbërësit e reaksionit të precipitimit, zakonisht serumi, është në një xhel, dhe tjetri - antigjeni - është shtresuar mbi të parën në formën e një tretësire. .

Antigjeni, duke u shpërndarë në xhel, formon linja të bardha reshjeje në të me antitrupa, të dukshme qartë nën ndriçimin anësor. Në vitin 1948, J. Ouchterlonyu zhvilloi një metodë edhe më të thjeshtë dhe më të përshtatshme të kundërpërhapjes dy-dimensionale, e cila lejon krahasimin e drejtpërdrejtë të antigjeneve dhe serumeve të ndryshëm. Kjo metodë është gjithashtu shumë e vlefshme në studimin e reaksioneve të kryqëzuara.

Për vendosjen e reaksionit Ouchterlon, përdoret agar 1% i përgatitur në tretësirë ​​fiziologjike, i cili hidhet në enët Petri me një shtresë 0,5 cm. Pas ngurtësimit, në pllakën e agarit priten vrima me diametër 5-6 mm - një. në qendër të enës, 4-5 - përgjatë perimetrit në një distancë prej 1-2 cm nga ajo qendrore. Serumi precipitues diagnostik derdhet në pusin qendror dhe një zgjidhje e antigjeneve homologe dhe të krahasueshme derdhet në puset periferike. Rezultatet regjistrohen pas 24, 48 dhe 72 orësh inkubimi në temperaturën e dhomës.

Antitrupat dhe antigjenet shpërndahen drejt njëri-tjetrit dhe në zonat ku krijohen përqendrimet ekuivalente të tyre, formohen breza reshjesh harkore. Nëse shiritat e reshjeve që vijnë nga dy puse ngjitur bashkohen, kjo tregon praninë e disa komponentëve antigjenikë në lëngun e provës. Reaksioni kundër difuzionit Ouchterlohn përdoret shpesh për të përcaktuar toksigjenitetin e baktereve, të tilla si difteria.

Një zhvillim i mëtejshëm i metodës së precipitimit me xhel është imunoelektroforeza. Ky term i referohet një metode që kombinon ndarjen elektroforetike të një përzierjeje antigjenesh dhe difuzionin kundër Ouchterlon në të njëjtën pllakë xhel agar. Serumi precipitues derdhet në një brazdë të prerë në xhel paralel me drejtimin e ndarjes elektroforetike.

Linjat e reshjeve të formuara si rezultat i reaksionit kanë formën e harqeve të zgjatura në drejtim të lëvizjes elektroforetike të fraksioneve të antigjenit. Imunoelektroforeza bën të mundur përcaktimin e përbërjes së përzierjeve komplekse të antigjeneve të tretshëm që përmbajnë deri në 30 përbërës, dhe për këtë arsye është një metodë e vlefshme diagnostike.

Reagimi i reshjeve(RP) quhet precipitim nga një tretësirë ​​e Ag (precipitinogjen) kur ekspozohet ndaj serumit imunitar (precipitinës) dhe elektrolitit.

Duke përdorur RP, është e mundur të zbulohet antigjeni në hollime 1:100,000 dhe madje 1:1,000,000, pra në sasi kaq të vogla që nuk zbulohen kimikisht.

Precipitinogjenët janë grimca ultramikroskopike të natyrës proteinike-PS: ekstrakte nga mikroorganizmat, organet dhe indet, materiali pat; produktet e prishjes së qelizave bakteriale, lizatet e tyre, filtratet. Precipitinogjenët janë rezistent ndaj nxehtësisë, kështu që për t'i marrë ato materiali zihet.

RP përdor lëng transparent Ag.

Serumet precipituese zakonisht përftohen nga hiperimunizimi i lepujve në cikle për disa muaj, duke i injektuar atyre suspensione bakteriale, filtrate të kulturave të supës, autolizate, ekstrakte kripërash të mikroorganizmave dhe proteina të hirrës.

Prodhim nga RP Ascoli. Në një epruvetë të ngushtë me një sasi të vogël serumi precipitues të paholluar, duke e mbajtur atë në një pozicion të pjerrët, i njëjti vëllim Ag vendoset ngadalë përgjatë murit me një pipetë.

Për të shmangur përzierjen e dy lëngjeve, epruveta vendoset me kujdes vertikalisht. Nëse reagimi është pozitiv në një epruvetë, një unazë gri-të bardhë shfaqet në kufirin midis serumit dhe ekstraktit në studim pas 5-10 minutash. Reagimi shoqërohet domosdoshmërisht nga kontrollet e serumit dhe antigjenit.

Reaksioni Ascoli përdoret për të identifikuar antraksin, tulareminë dhe murtajën Ag.

Gjithashtu ka gjetur aplikim në mjekësinë ligjore për të përcaktuar llojin e proteinës, veçanërisht njollat ​​e gjakut, në praktikën sanitare në identifikimin e falsifikimit të mishit, peshkut, produktet e miellit, papastërtitë në qumësht. Disavantazhi i kësaj RP është paqëndrueshmëria e precipitatit (unazës), i cili zhduket edhe me dridhje të butë. Për më tepër, nuk mund të përdoret për të përcaktuar përbërjen sasiore Ags të përfshirë në formimin e precipitatit.

Reagimi i reshjeve Ouchterlony. Reagimi kryhet në enët Petri në puset e një xhel agar.

Agar transparent i larë mirë përdoret si xhel. Ag dhe serumi i shtohen xhelit të agarit në mënyrë që puset që i përmbajnë ato të jenë në një distancë të caktuar. Duke u shpërndarë drejt njëri-tjetrit dhe duke u kombinuar me njëri-tjetrin, antitrupi dhe antigjeni formojnë një kompleks imunitar në formën e një shiriti të bardhë pas 24-48 orësh.

Në prani të një precipitinogjeni kompleks, shfaqen disa breza. Në këtë rast, brezat e antigjeneve të lidhura serologjikisht bashkohen së bashku, dhe brezat e atyre të ndryshëm kryqëzohen, gjë që bën të mundur përcaktimin e detajeve të strukturës antigjenike të substancave në studim.

Përdoret gjerësisht për të diagnostikuar sëmundjet e shkaktuara nga viruset dhe bakteret që prodhojnë ekzotoksina.

3.Reaksioni indirekt i hemaglutinimit (IRHA). Përdoret për të zbuluar polisaharidet, proteinat, ekstraktet e baktereve, mikoplazmave, rikecisë dhe viruseve, komplekset imune të të cilave me aglutininat nuk mund të shihen në RA klasike konvencionale, ose për të zbuluar antitrupat në serumet e pacientëve ndaj këtyre substancave shumë të shpërndara dhe mikroorganizmave të vegjël.

RNGA për serodiagnozën e sëmundjeve infektive. Duke përdorur RNGA për të zbuluar antitrupat në serumet e pacientëve, përgatitet DIAGNOSTIKA E ANTIGENIT ERITROCITE.

Reagimi i reshjeve.

Për ta bërë këtë, qelizat e kuqe të gjakut trajtohen për 15 minuta me një zgjidhje tanine në një hollim 1:20,000-1:200,000, gjë që u jep atyre stabilitet dhe rrit kapacitetin e absorbimit. Më pas përzihen me një antigjen të njohur dhe inkubohen për 2 orë në temperaturën 37°C. Qelizat e kuqe të gjakut të sensibilizuara ndaj antigjenit lahen 2-3 herë me tretësirë ​​izotonik të klorurit të natriumit dhe shtohen në serum, hollohen dhe derdhen në puse. të paneleve.

Kontrolli është një pezullim i eritrociteve të paprekura dhe të ngarkuara me antigjen, të cilat i shtohen serumeve që padyshim japin reaksione pozitive dhe negative.

Rezultatet e reagimit merren parasysh 2 orë pas inkubimit në një termostat dhe vlerësohen me pluse: "++++" - qelizat e kuqe të gjakut mbulojnë pusin në formën e një ombrellë me skajet e dhëmbëzuara; "-" - akumulimi i qelizave të kuqe të gjakut në formën e një "butoni"

Informacione të ngjashme:

Kërkoni në sit:

Reaksioni i reshjeve të unazës

Reagimi i bashkimit të unazës është një nga më të thjeshtët metodat serologjike. Ajo kryhet në tuba të ngushtë reshjeje. Së pari, një zgjidhje e qartë e antigjenit e marrë në disa hollime (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) derdhet në mënyrë të barabartë në të gjitha epruvetat.

Kombinimi i antigjeneve dhe antitrupave ndodh në kufirin e kontaktit të reagentëve. Si rezultat i këtij ndërveprimi, në raste pozitive (kur antigjeni përputhet me antitrupin), pas njëfarë kohe formohet një precipitat në formën e një unaze opaleshente.

Reagimi u gjet aplikim të gjerë V praktikë mjekësore për të zbuluar antigjenin e antraksit në leshin, lëkurën dhe mishin e kafshëve (reaksioni Ascoli); për zbulimin e patogjenëve të tjerë të sëmundjeve infektive në materialin patologjik të marrë nga pacientët ose në objekte mjedisi i jashtëm, si dhe në ekzaminim mjekoligjor për të përcaktuar llojin e proteinës, në veçanti proteinën e gjakut ose lëngjet e tjera biologjike.

Ouchterlony imunodiffuzion

Reagimi i precipitimit mund të kryhet në një xhel agar.

Metoda bazohet në faktin se grimcat e antigjeneve dhe antitrupave, për shkak të madhësive të tyre të ndryshme, shpërndahen në xhel me shpejtësi të ndryshme dhe, si rezultat, lëvizin në distanca të ndryshme. Kjo bën të mundur ndarjen e sistemeve individuale të antigjenit në rastet kur ato janë në një përzierje, dhe, për rrjedhojë, bën të mundur studimin e strukturës antigjenike të baktereve dhe substancave komplekse proteinike, serumeve dhe indeve shtazore.

Vizuale dhe metodë efektive reshjet në xhel u propozuan nga Ouchterlony.

Në enët Petri me agar bëhen vrima të vogla, të prera në një distancë nga njëra-tjetra. Antigjeni derdhet në njërën prej tyre, serumi në të tjerët. Komponentët e reaksionit shpërndahen në xhel drejt njëri-tjetrit dhe formojnë një linjë të dukshme precipitimi ku antigjenet plotësojnë përqendrime optimale të antitrupave specifike për të. Për shkak se reagentët shpërndahen në mënyrë koncentrike nga puset, mund të kryhen analiza të shumta duke vendosur puse të shumta që përmbajnë antigjene të ndryshëm (ose hollime të ndryshme të të njëjtit antigjen) rreth një pusi antitrupash.

Reagimi Ouchterlony bën të mundur nxjerrjen e një përfundimi në lidhje me natyrën e antigjenit nga një serum i njohur dhe, anasjelltas, nga një antigjen i njohur përcaktohet natyra e antitrupave.

Avantazhi i metodës është se ju lejon të krahasoni përbërësit antigjenikë të përzierjeve komplekse dhe të gjykoni ngjashmëritë ose dallimet e tyre. Për të krahasuar të përbashkëtat e antigjeneve, përgatitni agar me puse: në njërën derdhet antiserumi dhe në tjetrin hidhen antigjenet që krahasohen. Nëse antigjenet janë të ndryshëm, atëherë brezat e precipitimit janë të vendosura ndryshe.

Imunoelektroforeza

Vitet e fundit, metoda e imunoelektroforezës është përdorur për studime delikate imunologjike. Metoda u përshkrua për herë të parë nga P.

Grabar dhe K. A. Williams në 1953. Është një kombinim i elektroforezës së xhelit të agarit në pllaka qelqi me imunodifuzion. Së pari, kryhet ndarja elektroforetike e antigjenit, e cila shpesh është një përzierje e proteinave ose molekulave të tjera. Për ta bërë këtë, antigjeni futet në një pus të prerë paraprakisht në agar, dhe pllaka e agarit vendoset për ca kohë në një zonë me rrymë elektrike konstante.

Për arsye të shpejtësi të ndryshme Lëvizja e molekulave bën që antigjeni të ndahet në pjesët përbërëse të tij. Pas kësaj, serumi imunitar precipitues futet në një brazdë të prerë në një drejtim paralel me rrjedhën aktuale.

Antigjeni dhe antiserumi shpërndahen drejt njëri-tjetrit në xhel.

Reshjet

Çdo antigjen krijon një zonë precipitimi në formë harku me antitrupat e tij përkatës. Numri, pozicioni dhe forma e këtyre linjave japin një ide për përbërjen e përzierjes origjinale të antigjenit.

Reaksioni i flokulimit

Metoda u propozua nga Ramon në 1924.

Ajo bazohet në faktin se një përzierje e toksinës me serumin antitoksik në kushte të caktuara jep turbullirë dhe reshje. Në këtë rast, reaksioni ndodh më herët në ato epruveta ku sasia e antitoksinës korrespondon me dozën që neutralizon plotësisht këtë sasi toksine.

Prandaj, nëse dihet fuqia e toksinës, atëherë mund të përcaktohet sasia e antitoksinës në serumin e panjohur të testit. Për ta bërë këtë, përgatitni disa hollime të serumit të provës, shtoni sasi të barabarta të një toksine të njohur në secilin hollim dhe më pas vëzhgoni se në cilën nga epruvetat ndodh fillimisht flokulimi (turbullira e tretësirës). Përcaktohet flokulimi fillestar. Pastaj bëhet llogaritja.

Për shembull, është e nevojshme të përcaktohet përqendrimi i antitrupave kundër difterisë në serumin e testit. Reaksioni përdor toksinën e difterisë që përmban 50 Lf në 1 ml (Lf është sasia minimale e toksinës që neutralizohet nga 1 njësi antitoksike (AU) antiserum.

Le të supozojmë se flokulimi fillestar u vu re në një epruvetë që përmban 0,2 ml të këtij serumi dhe 2 ml një toksinë të njohur me një aktivitet prej 100 Lf (50 Lf x 2).

Kjo do të thotë se 0.2 ml serum e neutralizoi këtë toksinë. Prandaj, 0,2 ml serum përmban 100 AE, dhe në 1 ml të këtij serumi përqendrimi i antitrupave korrespondon me 500 AE (100 AE x 5).

Me një metodë të ngjashme, reagimi i flokulimit mund të përdoret për qëllimin e kundërt - për të përcaktuar vetitë imunizuese të toksoideve.

Kjo kërkon një serum standard antitoksik.

Reagimi i neutralizimit

Reagimi përdoret në diagnostikimin e helmimit bakterial nga ushqimi për të përcaktuar toksinat bakteriale në materialin e provës. Përveç kësaj, mund të përdoret kur ekzaminohen objekte të caktuara të mjedisit të jashtëm për mirëmbajtje. bakteret patogjene duke prodhuar toksina, për shembull, gjatë testimit të tokës për praninë e patogjenëve të tetanozit ose gangrenës së gazit.

Dihet se toksina, kur përzihet me serumin homolog antitoksik, nuk e shfaq atë efekt toksik, pasi toksina neutralizohet. Reagimi i ndërveprimit të një toksine me një antitoksinë është, si rregull, rreptësisht specifik, prandaj, për të kryer një reaksion neutralizimi për të përcaktuar llojin e toksinës, është e nevojshme të keni serume diagnostikuese specifike për çdo lloj dhe lloj toksina. Një përzierje e 2-3 serumeve antitoksike ose më shumë mund të përdoret njëkohësisht nëse pritet prania e disa toksinave në materialin e provës.

Reagimi i neutralizimit ju lejon të përcaktoni llojin dhe llojin e toksinës së patogjenit.

Materiali që testohet mund të jetë filtrati i produkteve ushqimore që dyshohet se kanë shkaktuar helmim, larje nga enët ku ndodheshin këto produkte etj.

Toksina e dyshuar fillimisht neutralizohet. Për ta bërë këtë, një serum diagnostikues antitoksik i shtohet epruvetës me materialin e provës (epruveta eksperimentale) (përmban antitrupa ndaj toksinës së dëshiruar); një vëllim i barabartë i tretësirës fiziologjike i shtohet një epruvetë tjetër (kontrolli).

Pas një inkubimi afatshkurtër, përmbajtja e tubave u jepet dy grupeve të minjve të bardhë (eksperimental dhe i kontrollit).

Rezultatet e reagimit të neutralizimit merren parasysh menjëherë pas vdekjes së kafshëve të kontrollit. Në këtë rast, fakti i mbijetesës së kafshëve që morën serum antitoksik së bashku me materialin e provës, tregon praninë në të të një toksine që korrespondon me serumin e administruar.

Avantazhi i reaksionit të neutralizimit është besueshmëria e lartë e rezultateve të marra.

Megjithatë, për sa i përket ndjeshmërisë dhe shpejtësisë së marrjes së një përgjigjeje, është inferior ndaj disa metodave të tjera kërkimore.

Reaksionet e lizës

Reaksionet e lizës quhen zakonisht shpërbërja e antigjeneve korpuskulare nën ndikimin e antitrupave specifikë për një antigjen të caktuar në prani të komplementit.

Nga reaksionet imune, bazuar në dukurinë e lizës së baktereve dhe antigjeneve të tjera korpuskulare, përdoren kryesisht reaksionet e bakterolizës dhe hemolizës.

Reaksioni i bakterolizës

Reagimi ndodh si in vitro ashtu edhe in vivo. Ky i fundit njihet si reagimi V.I. Isaev-Pfeiffer.

Këta shkencëtarë kanë treguar se nëse derra nga Guinea imunizoni paraprakisht me antigjenet e kolerës, pastaj injektimi i mëvonshëm në zgavrën e barkut të një kulture shumë virulente të Vibrio cholerae nuk shkakton infeksion te kafshët, pasi zgavrën e barkut Patogjeni shpërndahet nën ndikimin e antitrupave specifikë.

Më pas unë.

I. Mechnikov vërtetoi se një shpërbërje e ngjashme e Vibrio cholerae nën ndikimin e serumit imunitar ndodh në një epruvetë nëse përbërësve kryesorë i shtohet serumi i freskët, një burim komplementi. Shpërbërja e baktereve nën veprimin e antitrupave specifikë në prani të komplementit quhet reaksion i bakterolizës.

Kur vendoset një reaksion bakterolize, fillimisht përgatitet një seri hollimesh 10-fish të serumit të testimit. Më pas e njëjta sasi (1-2 pika) suspensioni mikrobik shtohet në çdo epruvetë. Komplementi i shtohet përzierjes. Pas inkubimit në 37 °C, përzierja inokulohet nga çdo tub në një mjedis ushqyes për të përcaktuar praninë ose mungesën e baktereve të qëndrueshme.

Reagimi mund të përdoret për të përcaktuar antitrupat duke përdorur një mikroorganizëm të njohur ose për të përcaktuar llojin e mikrobit duke përdorur një serum imun diagnostikues.

NË punë praktike Ky reaksion përdoret rrallë nga bakteriologët, kryesisht për të diferencuar kolerën dhe vibrione të ngjashme me kolerën.

Reagimi i hemolizës

Mekanizmi i hemolizës është i ngjashëm me mekanizmin e bakterolizës.

Qelizat e kuqe të gjakut të përdorura në reagim janë antigjeni. Burimi i antitrupave është serumi kundër eritrociteve (për shembull, nëse në reaksion përdoren eritrocitet e deleve, atëherë serumi i nevojshëm me antitrupa specifikë kundër eritrociteve merret nga lepujt e imunizuar me eritrocite dele).

Serumi i gjakut të derrit të Guinesë përdoret më shpesh si plotësues në reaksionet e lizës, pasi përmban dukshëm më shumë komplement sesa serumet e kafshëve të tjera.

Në rastet kur antitrupat në prani të komplementit shkatërrojnë qelizat e kuqe të gjakut, hemoglobina del prej tyre dhe përzierja reaguese e një pezullimi të turbullt të rruazave të kuqe të gjakut kthehet në një lëng transparent të kuq (gjak i lakuar).

Ky reagim quhet hemolizë. Në praktikën laboratorike, përdoret si tregues i adsorbimit të komplementit në reaksionin e fiksimit të komplementit.

Informacione të ngjashme:

Kërkoni në sit:

Përmbledhja e leksionit: Lënda dhe historia e shkurtër e zhvillimit të mikrobiologjisë. Karakteristikat e përgjithshme të mikroorganizmave dhe pozicioni i tyre në natyrë.

reaksioni i reshjeve

Mikrobiologjia veterinare dhe detyrat e saj

mir.zavantag.com > Biologji > Leksion

1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15

^ RA u zhvillua për herë të parë nga M. Gruber në 1896. Thelbi i reaksionit është ndërveprimi i një antitrupi me një antigjen, duke rezultuar në ngjitjen (aglutinimin) e mikrobeve me formimin e thekoneve dhe gungave të dukshme me sy të lirë. RA përdoret gjerësisht për diagnostifikimi serologjik shumë infeksionet bakteriale(bruceloza, gjendrat, salmoneloza, kolibaciloza etj.) dhe për identifikimin serologjik të specieve dhe llojeve të mikroorganizmave të izoluar. Ekzistojnë disa metoda për stadifikimin e RA: epruveta (vëllimi), pikimi (pllaka), rënia e gjakut, reaksioni i unazës me qumështin, reaksioni i hemaglutinimit dhe variantet e tij (RZGA, RNGA), testi i antiglobulinës Coombs, etj. ^ – në vend të serumit merret gjak. Bëhet një reagim i pllakës. Diagnostifikohet puloroza e pulave dhe gjelave, mikoplazmoza e pulave. Reagimi i Coombs ju lejon të identifikoni antitrupat jo të plotë. Këto të fundit janë njëvalente dhe për këtë arsye pengojnë formimin e aglutinatit. Metoda bazohet në përdorimin e serumit antiglobulin, i cili shërben si ndërmjetës për lidhjen e antitrupave jo të plotë të fiksuar në antigjenet korpuskulare (eritrocite, baktere). ^ – nuk vlen për reaksionet serologjike dhe të sakta diagnostikuese, por ju lejon të zbuloni antigjenin - hemagglutinin dhe të vendosni vetitë hemagglutinuese (aftësia për të aglutinuar qelizat e kuqe të gjakut) në disa baktere dhe mikoplazma. RNGA– vitet e fundit ka zënë një nga vendet kryesore në serodinamikë. Thelbi i tij qëndron në faktin se molekulat e proteinave të antigjenit të patogjenit ose antitrupit përkatës janë të para-përthithura në eritrocitet e një dele ose kafshë të tjera të trajtuara me taninë. Më pas kryhet një reaksion duke përzier eritrocitet e sensibilizuara me serumet e gjakut të kafshëve të sëmura ose në rastin e dytë me antigjenin në studim. Nëse ka një të veçantë në serum. Antitrupat ndaj këtij antigjeni (ose anasjelltas) shkaktojnë aglutinimin e qelizave të kuqe të gjakut - një reagim pozitiv. Propozuar nga R. Kraus në 1897. Precipitimi është një fenomen që vërehet gjatë ndërveprimit të antitrupave të precipitinës dhe antigjenit precipitinogjen. Thelbi i reaksionit është një ndryshim në shpërndarjen e koloideve të antigjenit dhe precipitimi i tyre nën ndikimin e antitrupave specifikë që gjenden në serumin imunitar. RP mund të shpërndahet në epruveta në një mjedis të lëngshëm (reaksion unazor) ose në një xhel agar (pllakë RP). Reaksioni i reshjeve të unazës u propozua për herë të parë nga Ascoli (1910); ai përdoret më gjerësisht për diagnozën e antraksit. Gjatë kryerjes ekzaminim veterinar RP është një metodë për përcaktimin e falsifikimit të mishit, miellit dhe produkteve të tjera. Kuptimi i veçantë Ky reagim shfaqet në ekzaminimin mjekoligjor gjatë përcaktimit të llojit të gjakut. Sidoqoftë, përdorimi i një reaksioni precipitimi në një mjedis të lëngshëm nuk lejon që dikush të karakterizojë heterogjenitetin e antigjeneve, d.m.th. sasia dhe përqendrimi i antigjeneve në preparat. Ky informacion mund të merret duke vendosur RP në një xhel (zakonisht agar). Duke pasur shpejtësinë e lëvizjes, antigjenet e ndryshëm të barit shpërndahen në mënyrë të pabarabartë, duke formuar precipitate në trashësinë e xhelit transparent në pikën e takimit me antitrupin homolog. Lokalizimi dhe përqendrimi i linjave të precipitinës do të jetë karakteristik për çdo përbërës të preparatit antigjenik, i cili shërben si kriter për cilësinë e tij. Duke holluar ilaçin, mund të karakterizohet përmbajtja relative e antigjeneve në të. Janë zhvilluar disa metoda për stadifikimin e RDP: metoda e difuzionit të drejtpërdrejtë njëdimensional sipas Houdin (1946), metoda e imunodifuzionit të thjeshtë radial sipas Mancini (1963), metoda e difuzionit të dyfishtë në xhel agar sipas Ouchterlony (1948). ), etj. ^ (RN) Reagimi u demonstrua për herë të parë nga Behring dhe Kitazato në 1890. në model toksinat e tetanozit dhe antitoksina. Thelbi i RN qëndron në aftësinë e antitrupave homologë të serumit imunitar për të shtypur (neutralizuar) vetitë infektive të patogjenit ose produkteve të tij metabolike. Për të përcaktuar rezultatin e reaksionit, kafshët laboratorike, CC dhe EC infektohen me një përzierje antigjen-antitrup. Treguesi është RN pozitiv - mungesa e vdekjes së sistemeve të testimit biologjik. NË praktikë bakteriale RN përdoret në diagnostikimin e enterotoksemisë anaerobe, botulizmit, etj. RN kryhet për zbulimin dhe titrimin e toksinave, toksoideve ose antitoksinave. ^ (RSK) Zhvilluar nga Bordet dhe Zhangou (1901) bazuar në dy fenomene: bakteroliza dhe hemoliza. Përdoret për të zbuluar antitrupat në serumin e gjakut dhe për të zbuluar antigjenin në materialin e testimit (për brucelozë, gjëndra, rikeciozë, tuberkuloz, etj.). Ky reagim është një reaksion indirekt me dy sisteme. Ai përfshin 5 komponentë: Antigjeni. Serum testimi. Komplement. Serum hemolitik. Qelizat e kuqe të gjakut të deleve. Komponentët 3,4,5 përbëjnë sistemin e treguesve. Nëse antigjeni dhe antitrupi i serumit të testit korrespondojnë me njëri-tjetrin mik, lind një kompleks imunitar antigjen-antitrup, i cili lidh dhe ekstrakton komplementin nga mjedisi ku ndodh reaksioni. Nëse nuk ka antitrupa që korrespondojnë me antigjenin në serumin e provës, kompleksi i specifikuar nuk formohet - komplementi mbetet i lirë. Meqenëse këto janë procese të padukshme, për të zgjidhur pyetjen se çfarë ndodhi me komplementin, përbërësit e sistemit hemolitik - serumi hemolitik + qelizat e kuqe të gjakut - futen në epruvetë si tregues. Nëse komplementi është i lidhur në sistemin bakteriologjik, hemoliza e qelizave të kuqe të gjakut nuk do të ndodhë, rezultati është pozitiv - serumi përmban antitrupa. Prania e hemolizës shërben si një tregues i pranisë së komplementit të lirë në sistemin bakteriologjik, i cili është i mundur vetëm nëse nuk ka antitrupa në serumin e testit - rezultati është negativ. RSC ndodh në mënyrë strikte marrëdhëniet sasiore komponentët. Kjo arrihet me titrimin e tyre paraprak (komplementi dhe serumi hemolitik titrohet në ditën e reaksionit; antigjeni mikrobik - një herë në 2-3 muaj). Titrimi është përcaktimi i sasisë më të vogël të një komponenti të caktuar në një reaksion për të kryer reaksionin; teprica ose mungesa nënkupton shtrembërim të rezultateve. RDSC është një variant i RSK, por ndryshon në atë që faza e parë e reagimit vazhdon për 16-18 orë në të ftohtë (40C), gjë që rrit ndjeshmërinë për shkak të adsorbimit më të gjatë të komplementit nga kompleksi antigjen-antitrup.

7 8 9 10 11 12 13 14 15

I ngjashëm:

	Përkufizimi i konceptit "mikrobiologji ekologjike" Mikrobiologjia e përgjithshme, studimi i marrëdhënieve të mikroorganizmave me njëri-tjetrin, me objektet mjedisore dhe makroorganizmat		Konceptet më të përgjithshme dhe themelore që pasqyrojnë çështjen thelbësore... Filozofia është një shkencë që studion më shumë dispozitat e përgjithshme për njeriun, natyrën dhe dijen
	Plani Lënda dhe metoda e disiplinës “Marrëdhëniet Ekonomike Ndërkombëtare”... Lënda dhe metoda e disiplinës "Marrëdhëniet Ekonomike Ndërkombëtare" dhe historia e zhvillimit të marrëdhënieve ekonomike ndërkombëtare		Pyetje për provimin në lëndën “Psikologji Juridike” Për studentët… Koncepti i psikologjisë juridike. Lënda, objektivat dhe historia e zhvillimit të psikologjisë juridike
	1. Lënda dhe metoda e historisë së doktrinave politike dhe juridike > Tema… Kjo për faktin se në kuadër të kësaj disipline juridike studiohet dhe trajtohet një lëndë specifike - historia e origjinës...		1. Historia e filozofisë si shkencë. Lënda dhe metoda e tij Tema e saj janë ligjet, parimet, mënyrat dhe format e qenies më të përgjithshme, marrëdhënia e njeriut me botën që e rrethon dhe me veten….
	Ministria e Arsimit dhe Shkencës e Aleancës Studentore të Republikës së Kazakistanit... Kjo rregullore për konkursin republikan “Studenti i vitit 2011” (në tekstin e mëtejmë konkursi) përcakton qëllimet dhe objektivat e tij, pjesëmarrësit...		Përkufizimi i termave "mikrobiologji" dhe "mikroorganizëm" …
	Pyetje për t'u përgatitur për testin në disiplinën "konfliktologji" Konfliktologjia si shkencë: lënda, qëllimet, objektivat, problemet aktuale, rëndësia në skenë moderne zhvillimin e shoqërisë		Rreth konkursit rajonal të videoklipit "K-role-k!" Dispozitat e përgjithshme Me këtë Rregullore përcaktohen qëllimet, objektivat, parimet e Konkursit, procedurën e organizimit dhe zhvillimit të tij, procedurën e pjesëmarrjes dhe përcaktimit...

Shtoni një buton në faqen tuaj të internetit:
Materialet shkollore
mir.zavantag.com

Reagimi i reshjeve

Reshjet dhe aglutinimi janë reagime mjaft të ngjashme që ndryshojnë kryesisht bazuar në vetitë fizike AG.

Në rastin e parë, paraqitet në formë të tretshme, në të dytën - në forma korpuskulare. Baza e RP është formimi i precipitatit gjatë reaksionit AG-AT. RP është shumë specifike dhe e ndjeshme.

Përbërësit e reagimit:

1. AG i tretshëm ose hapten (precipitogen);

2. AT - precipitina (serum precipitues imunitar; i marrë nga imunizimi i lepujve me tretësira të përshtatshme të antigjeneve);

Reagimi i reshjeve

tretësirë ​​izotonike e klorurit të natriumit ose xhel agar.

Metodat për vendosjen e RP:

1) RP në zgjidhje - f.

reshjet e unazës;

2) RP në xhel.

Reaksioni i precipitimit unazor kryhet në tuba të ngushtë precipitimi në të cilët derdhen serumet precipituese.

Pastaj derdhet një zgjidhje precipitinogjene. Nëse reagimi është pozitiv, një unazë reshjesh me re shfaqet në ndërfaqen midis përbërësve.Një shembull i kësaj metode të stadifikimit të RP është reaksioni i termoprecipitimit Ascoli, i përdorur për të zbuluar haptenin termostabil të patogjenit të antraksit, i nxjerrë nga organet e kafshëve, lëkura, dhe leshi me nxjerrje me zierje Një nga varietetet e RP në xhel (reaksioni Ouchterlony) ju lejon të përcaktoni toksikogjenitetin bacil i difterisë duke përdorur serum antitoksik.

Në një pjatë Petri me medium ushqyes Vendosni një rrip letre filtri të njomur në serumin antitoksik të difterisë dhe inokuloni atë me kulturat e testimit në formën e vijave pingul me shiritin e letrës. Inkuboni në 37 PS për 24 orë. Në prani të një kulture toksigjenike, në vendin e ndërveprimit të toksinës me antitoksinën formohen linja precipitimi.Reaksioni i precipitimit në xhel quhet imunodifuzion.

Shpesh forezë në një xhel - imunoelektroforezë. Parimi i metodës: antigjeni në studim fraksionohet në mënyrë elektroforetike. fraksionet që rezultojnë analizohen me difuzion të dyfishtë duke përdorur antiserum.

Testi Ascoli kryhet për të diagnostikuar antraksin në mënyrë që të zbulohet antigjeni i bacileve të antraksit. Për të kryer reaksionin e precipitimit duhet të keni: precipitinogjen - hapten B.

Antrachis (ekstrakt indi), precipitin (serum precipitues i antraksit) dhe kripë.

Përgatitja e termoprecipitinogjenit.

1. Mbushni një balonë 8 që përmban 1 g lëkurë të grimcuar ose 1 ml kulturë B. antilgas me 10 ml tretësirë ​​fiziologjike.

2. Vendoseni balonën në një banjë të vluar për 30-45 minuta.

3. Filtroni përmes materialit asbest. Filtrati duhet të jetë plotësisht transparent. Për reaksionin e precipitimit, filtrati hollohet 100 herë ose më shumë.

Vendosja e reaksionit të reshjeve unazore.

1) 0,3 ml serum precipitues, i plotë ose i holluar 1:5, 1:10, derdhet në një tub precipitimi.

2) Precipitinogjeni shtresohet me kujdes përgjatë murit të epruvetës Reaksioni konsiderohet pozitiv nëse në kufirin e dy lëngjeve formohet një unazë e turbullt e proteinave precipituese jo më vonë se 5-15 minuta.

Kur vendosni reaksionin e reshjeve, përdoren kontrollet e mëposhtme:

a) antigjen dhe tretësirë ​​fiziologjike;

b) serum specifik dhe fizik.

c) antigjen dhe serum jospecifik.

Në të gjithë tubat e kontrollit nuk duhet të ketë turbullira.Për reaksionin e reshjeve përdoren tuba të posaçëm precipitimi me lartësi 40-60 mm dhe me diametër 4-5 mm. Reshjet në tuba të ngushtë ndodhin shumë më shpejt dhe shfaqen më qartë se në tuba të zakonshëm, ato lahen dhe thahen mirë, në mënyrë që xhami i tyre të jetë plotësisht transparent dhe i thatë.

Në reaksionin e precipitimit, precipitohet një kompleks imunitar specifik, i përbërë nga një antigjen i tretshëm (lizat, ekstrakt, hapten) dhe një antitrup specifik në prani të elektroliteve.

Unaza me re ose precipitati i formuar si rezultat i këtij reaksioni quhet precipitojnë. Ky reagim ndryshon kryesisht nga reaksioni i aglutinimit në madhësinë e grimcave të antigjenit.

Reaksioni i precipitimit zakonisht përdoret për të përcaktuar antigjenin në diagnostikimin e një numri infeksionesh (antraks, meningjiti, etj.); në mjekësinë ligjore - për të përcaktuar llojin e gjakut, spermës etj.; në studimet sanitare dhe higjienike - kur vendoset falsifikimi i produkteve; me ndihmën e saj përcaktohet marrëdhënia filogjenetike e kafshëve dhe bimëve. Për reagimin ju nevojitet:

1. Antitrupat (precipitina) - serum imunitar me një titër të lartë antitrupash (jo më të ulët se 1:100.000). Titri i serumit precipitues përcaktohet nga hollimi më i lartë i antigjenit me të cilin ai reagon. Serumi zakonisht përdoret i paholluar ose i holluar 1:5 -1:10.

2. Antigjen - substanca të tretura me natyrë proteinike ose polisakaride lipoide (antigjene dhe haptene të plota).

3. Tretësirë ​​izotonike.

Metodat kryesore për kryerjen e reaksionit të precipitimit janë: reaksioni i precipitimit unazor dhe reaksioni i precipitimit në agar (xhel).

Kujdes! Të gjithë përbërësit e përfshirë në reaksionin e precipitimit duhet të jenë plotësisht transparent.

Reaksioni i reshjeve të unazës. Duke përdorur një pipetë Pasteur, shtoni 0,2 - 0,3 ml (5-6 pika) serum në tubin e precipitimit (serumi nuk duhet të futet në muret e tubit). Antigjeni në të njëjtin vëllim vendoset me kujdes në serum, duke e derdhur me një pipetë të hollë Pasteur përgjatë murit të epruvetës. Provëza mbahet në një pozicion të pjerrët. Kur shtresohet siç duhet, duhet të ketë një kufi të qartë midis serumit dhe antigjenit. Me kujdes, që të mos përzihet lëngu, vendoseni epruvetën në një stendë. Nëse reagimi është pozitiv, një "unazë" e turbullt - një precipitat - formohet në ndërfaqen e antigjenit dhe antitrupit.

Reagimi i reshjeve në agar(gele). E veçanta e reaksionit është se ndërveprimi i antigjenit dhe antitrupave ndodh në një mjedis të dendur, d.m.th. xhel. Precipitati që rezulton jep një brez të turbullt në trashësinë e mediumit. Mungesa e një brezi tregon një mospërputhje midis përbërësve të reagimit. Ky reagim përdoret gjerësisht në kërkimet biomjekësore, veçanërisht në studimin e formimit të toksinave në agjentin shkaktar të difterisë.

Reagimi i lizës (citoliza imune)

Liza imune- kjo është shpërbërja e qelizave nën ndikimin e antitrupave me pjesëmarrjen e detyrueshme të komplementit. Për reagimin ju nevojitet:

1. Antigjeni- mikrobet, qelizat e kuqe të gjakut ose qelizat e tjera.

2. Antitrupat(lizina) - serum imunitar, më rrallë serumi i pacientit. Serumi bakterolitik përmban antitrupa të përfshirë në lizën e baktereve; hemolitik - hemolizina që nxisin lizën e qelizave të kuqe të gjakut; për lizën e spiroketeve nevojiten spiroketolizina, qeliza-itolizina etj.

3. Komplement. Serumi i derrave gini përmban më së shumti komplement. Ky serum (përzierje nga disa kafshë) zakonisht përdoret si plotësues.

4. Zgjidhje izotonike.

Reagimi i reshjeve.

Emri i parametrit	Kuptimi
Tema e artikullit:	Reagimi i reshjeve.
Rubrika (kategoria tematike)	Arsimi

Reaksioni i precipitimit (RP) - precipitimi i një antigjeni të tretshëm nën veprimin e antitrupave në prani të një elektroliti. Efekti i dukshëm i reagimit (fenomeni i reshjeve) - turbullira (formimi i një unaze me re ose sedimenti - precipitojnë).

RP përdoret për të zbuluar një antigjen të panjohur në një numër rastesh sëmundjet infektive: për antraksin, tulareminë, meningjitin, linë. Në mjekësinë ligjore përdoret për të përcaktuar llojin e gjakut dhe spermës; në studimet sanitare dhe higjienike - për të përcaktuar falsifikimin e produkteve ushqimore. RP është shumë e ndjeshme dhe mund të zbulojë antigjenin në hollimet 1:1,000,000 dhe 1:10,000,000.

Përbërësit e reaksionit të precipitimit.

1. Antigjeni (precipitinogjen) - Ky është një antigjen i natyrës molekulare, i vendosur në një gjendje të shpërndarë imët (të tretshëm). Precipitinogjenët - lizate të ndryshme ose ekstrakte të indeve, etj.
Postuar në ref.rf
Precipitinogjeni ndryshon nga aglutinogeni në madhësinë e grimcave të antigjenit. Aglutinogen Ajo ka madhësive të qelizave(këto nuk janë qeliza të tëra të shkatërruara), por dimensionet precipitinogjen në përpjesëtim me madhësive molekulare(këto janë proteina dhe komplekset e tyre me karbohidrate ose lipide). Tretësirë ​​precipitinogjene transparente.

2. Antitrupat (precipitina) gjenden në serumin e gjakut të njeriut ose në serumet precipituese diagnostikuese imune që përmbajnë antitrupa të njohur.

3. Elektrolit– tretësirë ​​izotonike e klorurit të natriumit.

Marrja e precipitinogjenit.

Përftohet duke bluar materialin dhe duke nxjerrë prej tij antigjene proteinike me zierje ose me metoda të tjera.

Shembuj të precipitinogjenëve: lizate ose ekstrakte të organeve dhe indeve të ndryshme, serum gjaku i huaj (serumi është zgjidhje, para së gjithash, të ndryshme proteinat), filtrate të kulturave të mishit të mikrobeve, ekstrakte kripërash të mikrobeve, autolizate etj.

Përgatitja e serumeve precipituese.

Marrë nga hiperimunizimi i lepujve me precipitinogjene të përshtatshme. Serumet e tilla përmbajnë antitrupa ndaj atyre precipitinogjenëve me të cilët janë imunizuar lepujt.

Shembuj të serumeve precipituese: serum precipitues i antraksit(përmban antitrupa ndaj antigjeneve të antraksit), precipitues i serumit antimeningokokal(përmban antitrupa kundër antigjeneve të shkaktarit të meningjitit), etj.

Titri serumi precipitues - hollimi më i lartë i precipitinogjenit në të cilin serumi ende jep një reaksion precipitimi.

Metodat për vendosjen e RP.

1. Reaksioni i reshjeve të unazës - kryhet në tuba të veçantë reshjesh (diametri - 0,4-0,5 cm, lartësia - 7-8 cm). 0,2 - 0,3 ml serum precipitues i shtohet epruvetës dhe e njëjta sasi precipitinogjeni shtrohet me kujdes përgjatë murit me grykën e gjatë të një pipete Pasteur. Më pas, me kujdes nga pozicion horizontal Tubat e provës vendosen vertikalisht.

Llogaritja e rezultateve të reagimit kryhet nga shfaqja e një unaze të bardhë në ndërfaqen antigjen-antitrup. Nëse reagimi është pozitiv vërehet formimi i një unaze të tillë. Në këtë rast, antigjeni përputhet me antitrupin dhe ata lidhen.

Nëse zihet dhe filtrohet ekstrakte ujore organet dhe indet, atëherë reaksioni zakonisht quhet reaksion reshjet termore (për shembull, kur diagnostikohet antraksi).

2. Reagimi i precipitimit në xhel - kryhet në enë Petri ose në rrëshqitës xhami, ku vendoset një shtresë xheli agar. Ndërsa xheli ngurtësohet, priten puse në të cilat vendosen antigjenet ose antitrupat, ose të dyja. Të dallojë 2 metoda RP në xhel:

a) metodë imunodifuzion i thjeshtë (radial).: një nga përbërësit e reaksionit imunitar (antigjen ose antitrup) vendoset në pus, dhe përbërësi tjetër përzihet me agar; nëse rezultati është pozitiv (antigjeni korrespondon me antitrupat) a unazë precipitimi ;

b) metodë imunodifuzion i dyfishtë: si antitrupi ashtu edhe antigjeni vendosen në puse të veçanta, ato shpërndahen drejt njëri-tjetrit në xhelin e agarit; nëse rezultati është pozitiv ku formohen antitrupat dhe antigjeni linjat e reshjeve.

Shembull i RP në xhelështë reaksioni i imunodifuzionit të dyfishtë Ouchterlony kur diagnostikohet difteria

imunoelektroforeza - Kjo është një metodë që kombinon metodën e elektroforezës dhe reaksionin e precipitimit. Një përzierje e antigjeneve (për shembull, proteinat e serumit) ndahet në një xhel duke përdorur elektroforezë. Më pas, për të gjetur dhe identifikuar proteinën e interesit (antigjen i panjohur), përdoret një serum precipitues diagnostikues që përmban antitrupa ndaj asaj proteine ​​(antitrup i njohur). Për ta bërë këtë, serumi diagnostikues futet në brazdë paralelisht me proteinat. Nëse midis proteinave ka një që korrespondon me antitrupin që gjendet në serum, atëherë linjat e reshjeve.

Reagimi i reshjeve. - koncepti dhe llojet. Klasifikimi dhe veçoritë e kategorisë "Reagimi i reshjeve". 2017, 2018.