Test fals negativ - test Coombs indirect. Testul Coombs: direct și indirect

– un test de antiglobulină care vizează identificarea în sângele Rh-negativ a anticorpilor antieritrocitari incompleti la factorul Rh - o proteină specifică care se află pe suprafața eritrocitelor din sângele Rh-pozitiv. Există două tipuri acest test: directă – detectarea anticorpilor la suprafața globulelor roșii, indirectă – detectarea anticorpilor în serul sanguin. Testarea directă se efectuează în diagnosticarea și monitorizarea tratamentului bolilor de sânge: anemie hemolitică, boala hemolitica nou-născuți și altele. Se efectuează un test indirect pentru a evalua compatibilitatea sângelui donatorului și al primitorului în timpul transfuziei, precum și pentru a determina prezența și riscul de conflict Rh la planificarea și gestionarea sarcinii. Materialul pentru testul Coombs este sânge dezoxigenat, studiul se realizează folosind metode bazate pe reacția de aglutinare. În mod normal, ambele teste dau rezultat negativ. Analiza este finalizată într-o zi. În total, la Moscova au fost găsite 87 de adrese unde s-ar putea face această analiză.

– un test de antiglobulină care vizează identificarea în sângele Rh-negativ a anticorpilor antieritrocitari incompleti la factorul Rh - o proteină specifică care se află pe suprafața eritrocitelor din sângele Rh-pozitiv. Există două tipuri de acest test: direct - detectarea anticorpilor pe suprafața globulelor roșii, indirect - detectarea anticorpilor în serul sanguin. Testarea directă se efectuează în diagnosticarea și monitorizarea tratamentului bolilor de sânge: anemie hemolitică, boala hemolitică a nou-născuților și altele. Se efectuează un test indirect pentru a evalua compatibilitatea sângelui donatorului și al primitorului în timpul transfuziei, precum și pentru a determina prezența și riscul de conflict Rh la planificarea și gestionarea sarcinii. Materialul pentru testul Coombs este sânge venos; studiul se realizează folosind metode bazate pe reacția de aglutinare. În mod normal, ambele teste dau un rezultat negativ. Analiza este finalizată într-o zi.

testul Coombs - studiu clinic Sânge Rh negativ, care vizează detectarea anticorpilor la factorul Rh. Testul este utilizat pentru a identifica riscul de a dezvolta conflicte Rh și reacții hemolitice. La fiecare persoană, suprafața globulelor roșii conține un anumit set de antigeni sau aglutinogeni - compuși de natură diferită, după prezența sau absența cărui grupă de sânge și factor Rh sunt judecate. Există multe tipuri de antigene, inclusiv practică medicală cel mai mare semnificație practică au aglutinogeni A și B, care determină grupa sanguină, și aglutinogen D, care determină factorul Rh. La factor Rh pozitiv Antigenele D sunt detectate pe membrana exterioară a eritrocitelor, dar nu și dacă sunt negative.

Testul Coombs, numit și testul antiglobulinei, are ca scop detectarea anticorpilor anti-eritrocitari incompleti la sistemul factorului Rh din sânge. Anticorpi la factorul Rh - imunoglobuline specifice, care sunt produse în sângele Rh-negativ atunci când intră în el eritrocite cu aglutinogeni D. Acest lucru poate apărea atunci când sângele unui făt și al unei gravide este amestecat, în timpul transfuziilor de sânge efectuate fără gruparea prealabilă a sângelui. Testul Coombs există în două versiuni - directă și indirectă. Când se efectuează un test Coombs direct, sunt detectați anticorpi atașați la suprafața globulelor roșii. Studiul este utilizat pentru a determina cauza reacției hemolitice. Testul indirect Coombs are ca scop detectarea anticorpilor anti-eritrocitari în plasma sanguină. Este necesar să se determine compatibilitatea sângelui dintre donator și primitor sau mamă și făt și ajută la prevenirea dezvoltării conflictului Rh și a hemolizei ulterioare a globulelor roșii.

Sângele pentru ambele versiuni ale testului Coombs este prelevat dintr-o venă. Analiza se face prin aglutinare cu ser antiglobulinic. Rezultatele studiului sunt folosite în hematologie pentru a identifica cauzele reacțiilor hemolitice, în chirurgie și resuscitare la efectuarea transfuziilor de sânge, în obstetrică și ginecologie la monitorizarea sarcinilor la femeile cu sânge Rh negativ.

Indicatii

Testul Coombs direct, care detectează anticorpii atașați la suprafața globulelor roșii, este prescris pentru reacțiile hemolitice (distrugerea globulelor roșii) de diverse origini. Studiul este indicat pentru anemie hemolitică primară autoimună, anemie hemolitică post-transfuzională, boala hemolitică a nou-născutului, hemoliza eritrocitelor cauzată de boli autoimune, tumorale sau infecțioase, precum și luarea medicamente, de exemplu, chinidină, metildopa, procainamidă. Testul indirect Coombs, care determină anticorpii în plasma sanguină, este utilizat pentru a preveni dezvoltarea conflictului Rh. Este indicat pacienților în pregătire pentru transfuzii de sânge, precum și femeilor însărcinate cu factor Rh negativ cu conditia ca viitor tată copilul are un factor Rh pozitiv.

Pentru a determina compatibilitatea Rh, testul Coombs nu este prescris pacienților cu sânge Rh pozitiv. În aceste cazuri, există deja antigene pe suprafața globulelor roșii; producția de anticorpi nu poate fi provocată de transfuzia de sânge sau de intrarea sângelui fetal în sângele femeii însărcinate. De asemenea, studiul nu este indicat femeilor însărcinate dacă ambii părinți au un factor Rh negativ - o trăsătură recesivă moștenită. Un copil în astfel de cupluri a făcut-o întotdeauna Sânge Rh negativ, un conflict imunologic cu mama este imposibil. La patologii hemolitice Testul antiglobulinei nu este utilizat pentru a monitoriza succesul terapiei, deoarece rezultatele nu reflectă activitatea procesului de distrugere a globulelor roșii.

O limitare a testului Coombs este complexitatea procedurii de cercetare - de a obține rezultate de încredere este necesar să se respecte condițiile de temperatură și timp, regulile de preparare a reactivilor și biomaterialelor. Avantajele testului Coombs includ și acesta sensibilitate crescută. În anemia hemolitică, rezultatele acestui test rămân pozitive, chiar dacă nivelurile de hemoglobină, bilirubină și reticulocite sunt normalizate.

Pregatirea pentru analiza si colectarea materialului

Materialul folosit pentru efectuarea testului Coombs este sângele venos. Cerinte speciale Nu există timp pentru procedura de prelevare de sânge și pentru pregătirea pacientului. Ca în cazul oricărui studiu, se recomandă să faceți o pauză după ce ați mâncat cel puțin 4 ore și să vă opriți de fumat în ultimele 30 de minute. activitate fizica, evita stres emoțional. De asemenea, merită să discutați cu medicul dumneavoastră în prealabil necesitatea de a înceta să luați medicamente - unele medicamente pot distorsiona rezultatele testului Coombs. Sângele se prelevează cu o seringă din vena cubitală, mai rar dintr-o venă în continuare partea din spate perii În câteva ore, materialul este livrat la laborator.

La efectuarea unui test Coombs direct, serul antiglobulinic este adăugat în serul sanguin al pacientului. După ceva timp, amestecul este examinat pentru prezența aglutinaților - aceștia se formează dacă există anticorpi pe globulele roșii. Dacă rezultatul este pozitiv, se determină titrul aglutinant. Testul Coombs indirect constă în Mai mult etape. În primul rând, anticorpii prezenți în ser sunt fixați pe globulele roșii injectate în timpul incubației. Apoi se adaugă ser antiglobulinic în probă, după un timp se determină prezența și titrul aglutinaților. Perioada de analiză este de 1 zi.

Rezultate normale

În mod normal, rezultatul testului Coombs direct este negativ (-). Aceasta înseamnă că nu există anticorpi asociați cu celulele roșii din sânge în sânge și nu pot provoca hemoliză. Rezultat normal Testul Coombs indirect este, de asemenea, negativ (-), adică nu există anticorpi împotriva factorului Rh în plasma sanguină. Atunci când se pregătește pentru transfuzia de sânge pentru primitoare, aceasta înseamnă compatibilitate cu sângele donatorului; la monitorizarea sarcinii, aceasta înseamnă absența sensibilizării Rh a mamei, un risc scăzut de a dezvolta un conflict imunologic. Factori fiziologici, cum ar fi obiceiurile alimentare sau activitate fizica, nu poate afecta rezultatul testului. Prin urmare, dacă rezultatul este pozitiv, este necesară consultarea unui medic.

Valoarea diagnostică a analizei

Un rezultat pozitiv al testului Coombs este exprimat calitativ, de la (+) la (++++), sau cantitativ, prin titruri de la 1:16 la 1:256. Determinarea concentrației de anticorpi pe globulele roșii și în serul sanguin se realizează în ambele tipuri de probe. Dacă testul Coombs direct este pozitiv, anticorpii sunt detectați pe membrana exterioară a globulelor roșii, care duc la distrugerea acestor celule sanguine. Cauza poate fi transfuzia de sânge fără tipizare prealabilă - reacție hemolitică post-transfuzie, precum și eritroblastoza nou-născutului, reacție hemolitică datorată utilizării medicamentelor, anemie hemolitică autoimună primară sau secundară. Distrugerea secundară a globulelor roșii poate fi cauzată de lupus eritematos sistemic, sindrom Evans, macroglobulinemie Waldenström, hemoglobinurie paroxistică rece, leucemie limfocitară cronică, limfom, mononucleoză infecțioasă, sifilis, pneumonie cu micoplasmă.

Un rezultat pozitiv al testului Coombs indirect indică prezența anticorpilor la factorul Rh în plasmă. În practică, aceasta înseamnă că a avut loc sensibilizarea Rh și există posibilitatea de a dezvolta un conflict Rh după perfuzia de sânge de la donator în timpul sarcinii. Pentru a preveni complicațiile sarcinii, femeile cu un rezultat pozitiv la testul Coombs sunt plasate într-un registru special.

Tratamentul anomaliilor

Testul Coombs se referă la studii izoserologice. Rezultatele sale fac posibilă identificarea unei reacții hemolitice, precum și determinarea compatibilității sângelui donatorului și al primitorului, al mamei și al fătului, pentru a preveni dezvoltarea conflictului Rh. Dacă rezultatul testului este pozitiv, atunci trebuie să solicitați sfatul medicului curant - obstetrician-ginecolog, hematolog, chirurg.

Anticorpi, situat pe suprafața eritrocitelor, poate fi fie în stare statică, fie în stare liberă în plasma din sânge. În funcție de starea anticorpilor, se realizează o reacție Coombs directă sau indirectă. Dacă există motive să credem că anticorpii sunt fixați pe suprafața globulelor roșii, se efectuează un test Coombs direct. În acest caz, testul are loc într-o singură etapă - adăugarea ser antiglobulinic. Dacă pe suprafața globulelor roșii sunt prezenți anticorpi incompleti, aglutinare globule rosii

Reacție indirectă

Reacția indirectă Coombs are loc în 2 etape. Mai întâi trebuie să implementați artificial sensibilizare globule rosii Pentru a face acest lucru, celulele roșii din sânge și serul sanguin testat sunt incubate, ceea ce determină fixarea anticorpilor pe suprafața globulelor roșii. După care se efectuează a doua etapă a testului Coombs - adăugarea de ser antiglobulină.

Reacția de precipitare - RP (din latinescul praecipilo a precipita) este formarea si precipitarea unui complex de antigen molecular solubil cu anticorpi sub forma unei tulburari numite precipitat. Se formează prin amestecarea antigenelor și anticorpilor în cantități echivalente; un exces al unuia dintre aceștia reduce nivelul de formare a complexului imun. Reacția de precipitare se realizează în eprubete (reacție de precipitare inelară), în geluri, medii nutritive etc. Varietăți ale reacției de precipitare în agar semi-lichid sau gel de agaroză, imunodifuzie dublă prin Ouchterlony, imunodifuzie radiap, imunoepectroforeza si etc.

Reacția de precipitare inelară. Reacția se efectuează în tuburi înguste de precipitare: un antigen solubil este stratificat pe serul imunitar. Cu un raport optim de antigen și anticorpi, la marginea acestor două soluții se formează un strat opac. inel precipitat. Dacă extractele de țesut fierte și filtrate sunt folosite ca antigene în reacție, atunci această reacție se numește prima reacție de termoprecipitare (reacția în care este detectată haptena de antrax).
Reacție de imunodifuzie dublă Ouchterlony. Pentru a stabili reacția, gelul de agar topit strat subțire se toarnă pe o placă de sticlă și după întărire, se decupează găuri în ea. Antigenele și serurile imune sunt plasate separat în godeurile gelului, care difuzează unul spre celălalt. La punctul de întâlnire, în proporții echivalente, formează un precipitat sub formă de dungă albă. În sistemele multicomponente, între godeurile cu antigeni și anticorpi apar mai multe linii de precipitat; în AG identice, liniile de precipitat se îmbină; în AG-uri neidentice se intersectează.
Reacție de imunodifuzie radială. Serul imunitar cu gel de agar topit este turnat uniform pe pahar. După solidificare în gel, se fac godeuri în care antigenul este plasat în diferite diluții. Antigenul, difuzând în gel, formează zone de precipitare în inel în jurul godeurilor cu anticorpi. Diametrul inelului de precipitare este proporțional cu concentrația de antigen. Reacția este utilizată pentru determinarea imunoglobulinelor de diferite clase, componente ale sistemului complementului etc. în serul sanguin.
Imunoelectroforeza- o combinație a metodei de electroforeză și imunoprecipitare: un amestec de antigeni este introdus în godeurile gelului și separat în gel folosind electroforeză, apoi imunoserum este adăugat în șanțul paralel cu zonele de electroforeză, ai căror anticorpi difuzează în gelul și formează linii de precipitare la locul „întâlnirii” cu antigenul.
Reacția de floculare(după Ramon) (din latină f1oecus - fulgi de lână) - apariția opalescenței sau a masei floculente (imunoprecipitare) într-o eprubetă în timpul reacției toxină - antitoxină sau toxoid - antitoxină. Este utilizat pentru determinarea activității serului antitoxic sau a toxoidului.

Tastarea HLA- studiul complexului major de histocompatibilitate uman - complex HLA. Această formațiune include o regiune de gene de pe cromozomul 6 care codifică antigenele HLA implicate în diferite răspunsuri imune.

Sarcini pentru Tastarea HLA poate fi foarte diferită - identificarea biologică (tipul HLA este moștenit împreună cu genele parentale), determinarea predispoziției la diverse boli, selecția donatorilor pentru transplantul de organe - aceasta implică compararea rezultatelor tipării HLA a țesuturilor donatorului și primitorului. Folosind tiparea HLA se determină cât de similari sau diferiți sunt soții în ceea ce privește antigenele de histocompatibilitate pentru a diagnostica cazurile de infertilitate.

Tastarea HLA sugerează Analiza polimorfismului HLAși se realizează prin două metode - serologică și genetică moleculară. Metoda serologică clasică de tipare HLA se bazează pe un test microlimfocitotoxic, iar metoda moleculară utilizează PCR (reacția în lanț a polimerazei).

Serologic Tastarea HLA efectuate pe populații de celule izolate. Antigenele complexe majore de histocompatibilitate sunt transportate în principal de limfocite. Prin urmare, o suspensie de limfocite T este utilizată ca purtători principali ai antigenelor de clasa I și o suspensie de limfocite B pentru a determina antigenele HLA clasa II. Pentru a izola populațiile de celule necesare din sângele integral, se utilizează fie centrifugarea, fie separarea imunomagnetică. Se crede că prima metodă poate duce la date fals pozitive, deoarece aceasta duce la moartea unor celule. A doua metodă este recunoscută ca fiind mai specifică - mai mult de 95% din celule rămân viabile.

Dar baza pentru efectuarea unui test limfocitotoxic Tastarea HLA este un ser specific care conține anticorpi la diferite variante alelice ale antigenelor HLA clasa I și II. Un test serologic poate determina tipul HLA examinând ce seruri reacţionează cu limfocitele şi care nu.

Dacă are loc o reacție între celule și ser, rezultatul este formarea unui complex antigen-anticorp pe suprafața celulei. După adăugarea unei soluții care conține complement, are loc liza și moartea celulelor. Un test serologic de tipare HLA este evaluat folosind microscopia cu fluorescență pentru a evalua reacțiile pozitive (fluorescență roșie) și negative (fluorescență verde), sau microscopie cu contrast de fază pentru a evalua colorarea nucleară celule moarte. Rezultatul tipării HLA este derivat luând în considerare specificitatea serurilor reacţionate şi a grupurilor de antigene cu reacţie încrucişată, precum şi intensitatea reacţiei de citotoxicitate.

Dezavantajele serologice Tastarea HLA sunt prezența reacțiilor încrucișate, afinitatea slabă a anticorpilor sau expresia scăzută a antigenelor HLA, absența produselor proteice într-un număr de gene HLA.

Metode moleculare mai moderne Tastarea HLA folosesc probe sintetice deja standardizate care reacţionează nu cu antigenele de pe suprafaţa leucocitelor, ci cu ADN-ul şi indică direct ce antigene sunt prezente în probă. Metodele moleculare nu necesită celule albe vii din sânge; orice celulă umană poate fi studiată și câțiva microlitri de sânge sunt suficienți pentru a funcționa sau vă puteți limita la răzuirea mucoasei bucale.

Genetică moleculară Tastarea HLA folosește metoda PCR, al cărei prim pas este obținerea ADN-ului genomic pur (din sânge integral, suspensie de leucocite, țesuturi).

Proba de ADN este apoi copiată - amplificată in vitro folosind primeri (ADN monocatenar scurt) specifici unui locus HLA specific. Capetele fiecărei perechi de primeri trebuie să fie strict complementare cu secvența unică corespunzătoare unei alele specifice, altfel amplificarea nu va avea loc.

După PCR, în timpul copierii repetate, se dovedește un numar mare de Fragmente de ADN, care pot fi evaluate vizual. Pentru a face acest lucru, amestecurile de reacție sunt supuse electrolizei sau hibridizării și se determină dacă a avut loc o amplificare specifică folosind un program sau un tabel. Rezultatul tipării HLA este prezentat sub forma unui raport cuprinzător la nivel de genă și alelic. Datorită standardizării probelor utilizate, molecular Tastarea HLA mai precis serologic. În plus, oferă mai multe informații (mai multe alele ADN noi) și multe altele nivel inalt detalierea acestuia, deoarece face posibilă identificarea nu numai a antigenelor, ci și a alelelor în sine, care determină ce antigen este prezent pe celulă.

Reacție de liză imună. Reacția se bazează pe capacitatea anticorpilor specifici de a forma complexe imune cu celulele, inclusiv eritrocite și bacterii, ceea ce duce la activarea sistemului complementului de-a lungul căii clasice și la liza celulară. Dintre reacțiile de liză imună, reacția de hemoliză este folosită cel mai des, iar reacția de bacterioliză este rar folosită (în principal în diferențierea holerei și vibrioanelor asemănătoare holerei).

Reacția de hemoliză. Sub influența unei reacții cu anticorpi în prezența complementului, o suspensie tulbure de globule roșii se transformă în roșu aprins. lichid limpede- „sânge lac” datorită eliberării de hemoglobină. La stabilirea unei reacții de fixare a complementului de diagnostic (FFR), reacția de hemoliză este utilizată ca indicator: pentru a testa prezența sau absența (fixarea) complementului liber.

Reacție locală de hemoliză în gel(reacția Erne) este una dintre variantele reacției de hemoliză. Vă permite să determinați numărul de celule care formează anticorpi. Numărul de celule care secretă anticorpi - hemolizine - este determinat de numărul de plăci de hemoliză care apar într-un gel de agar ce conține eritrocite, fiind studiată și complementată o suspensie de celule ale țesutului limfoid.

Metoda imunofluorescenței

(RIF, reacție de imunofluorescență) este o metodă pentru detectarea Ags (Abs) specifici folosind Abs (Ags) conjugați la un fluorocrom. Are sensibilitate și specificitate ridicate. Folosit pentru diagnosticul expres al infecțiilor. boli (identificarea agentului patogen în materialul de cercetare), precum și pentru determinarea receptorilor Ab și de suprafață și markerilor leucocitelor (imunofenotiparea) și a altor celule. Direct I. m. constă în prelucrarea unei secțiuni de țesut sau a unui frotiu din material patologic sau crustă microbiană care conține Abs specific conjugat cu fluorocrom; preparatul este spălat pentru a-l elibera de Abs nelegat și examinat la microscop cu fluorescență. În cazuri pozitive, o lumină strălucitoare apare în jurul periferiei obiectului. complex imun. Controlul este necesar pentru a exclude luminiscența nespecifică. La indirect. Lor.în prima etapă, o secțiune de țesut sau frotiu este tratată cu un agent specific nefluorescent, în a doua - cu un agent luminiscent împotriva -globulinelor animalului care a fost utilizat în prima etapă. În cazul pozitiv, se formează un complex luminos, format din Ar, At to it și At contra At (metoda sandwich). Pe lângă un microscop fluorescent, RIF este luat în considerare la fenotipizarea celulelor. sortator de celule laser .

Citometrie în flux- o metodă de măsurare optică a parametrilor unei celule, ai organelelor acesteia și a proceselor care au loc în ea.

Tehnica implică detectarea împrăștierii luminii dintr-un fascicul laser pe măsură ce o celulă trece printr-un curent de lichid, iar gradul de dispersie a luminii permite să vă faceți o idee despre dimensiunea și structura celulei. În plus, analiza ține cont de nivelul de fluorescență al compușilor chimici care fac parte din celulă (autofluorescență) sau adăugați la probă înainte de citometria în flux.

Suspensia celulară, pre-marcată cu anticorpi monoclonali fluorescenți sau coloranți fluorescenți, intră în fluxul de fluid care trece prin celula de curgere. Condițiile sunt selectate în așa fel încât celulele să se alinieze una după alta datorită așa-numitelor. focalizarea hidrodinamică a jetului în jet. În momentul în care o celulă traversează fasciculul laser, detectoarele înregistrează:

împrăștierea luminii la unghiuri mici (de la 1° la 10°) ( această caracteristică folosit pentru a determina dimensiunea celulei).

împrăștierea luminii la un unghi de 90° (ne permite să judecăm raportul nucleu/citoplasmă, precum și eterogenitatea și granularitatea celulelor).

intensitatea fluorescenței prin mai multe canale de fluorescență (de la 2 la 18-20) - vă permite să determinați compoziția subpopulației suspensiei celulare etc.

Aplicați 1 picătură mare de ser O(I), A(II), B(III) pe o placă sau o lamă de sticlă folosind pipete (diferite!). După ce notați timpul, utilizați o tijă de sticlă curată sau un colț curat al unei lame de sticlă pentru a combina picăturile de ser cu picăturile de sânge. Determinarea durează 5 minute, scuturând placa, apoi adăugați 1 picătură de soluție salină la fiecare amestec de picături și evaluați rezultatele. Este mai bine dacă serul vine în 2 serii diferite. Rezultatele grupei sanguine trebuie să se potrivească în ambele loturi de ser.

Evaluarea rezultatelor izohemaglutinarii:

izohemaglutinare. Dacă reacția este pozitivă, în amestec apar mici granule roșii de globule roșii adezive. Boabele se contopesc în boabe mai mari, iar acestea din urmă în fulgi. Serul este aproape decolorat;

dacă reacția este negativă, amestecul rămâne uniform colorat timp de 5 minute culoarea rozși nu se găsesc boabe;

Când se lucrează cu 3 seruri din grupele O(I), A(II), B(III), sunt posibile 4 combinații de reacții:

1. dacă toate cele 3 seruri au dat o reacție negativă, adică amestecul este colorat uniform în roz - acesta este grupa sanguină O(I);

   dacă numai serul grupului A(II) a dat o reacție negativă, iar serurile O(I) și B(III) au dat o reacție pozitivă, adică au apărut boabe - aceasta este grupa sanguină A(II);

   serul grupului B(II) a dat o reacție negativă, iar serul grupului O(I) și A(II) a dat o reacție pozitivă - aceasta este grupa sanguină B(III).

toate cele 3 seruri au dat reacții pozitive - sângele testat a fost grupul AB(IV). În acest caz, se efectuează un studiu cu ser de grup AB(IV).

Notă! Picăturile de sânge testate trebuie să fie de 5-10 ori mai mici decât picăturile de ser.

Erori de izohemaglutinare.

Neefectuarea aglutinarii acolo unde ar trebui sa fie si prezenta aglutinarii acolo unde nu ar trebui. Acest lucru se poate datora unui titr seric slab plus aglutinarea slabă a celulelor roșii din sânge.

Prezența aglutinarii acolo unde nu ar trebui să existe- Aceasta este pseudoaglutinarea, când grămezi de globule roșii formează „coloane de monede”. Agitarea farfurii sau adăugarea de soluție salină le distruge.

Panaglutinare, când serul lipește toate celulele roșii din sânge, inclusiv cele ale grupului său de sânge. Până în al 5-lea minut, semnele de aglutinare dispar.

Există și așa-numita panaglutinare la rece, când celulele roșii din sânge se lipesc împreună din cauza temperaturii scăzute a aerului (sub 15 ° C) din cameră.

În toate aceste cazuri, fie se efectuează o reacție repetată, fie se utilizează globule roșii standard.

Determinarea sangelui Rh

Pentru a determina starea Rh, adică pentru a detecta prezența sau absența antigenelor sistemului Rh în sângele oamenilor, sunt utilizate seruri (reactivi) standard anti-Rh, care variază în specificitate, adică conțin anticorpi la diferiți antigeni ai acestui sistem. Pentru a determina antigenul Rh 0 (D), serul anti-Rhesus este utilizat cel mai adesea cu adăugarea unei soluții de gelatină 10% sau se folosește un reactiv anti-Rhesus standard preparat în prealabil cu o soluție de poliglucină 33%. Pentru a obține rezultate mai precise ale cercetării, precum și pentru a identifica antigenele altor sisteme serologice, se folosește testul Coombs (este și foarte sensibil în determinarea compatibilității sângelui transfuzat). Pentru cercetare se folosește sânge nativ sau sânge preparat cu ceva conservant. În acest caz, sângele trebuie spălat din conservant cu un volum de zece ori soluție izotonică de clorură de sodiu. La determinarea stării Rh- Rh 0 (D) trebuie utilizate două probe de ser sau reactiv anti-Rhesus din două serii diferite și, în același timp, celule roșii standard obținute din sânge din Rh pozitiv (Rh +) și Rh negativ (Rh -) indivizii ar trebui folosiți pentru control. Atunci când se determină alte izoantigene, celulele roșii de control care conțin sau lipsesc antigenul împotriva căruia sunt direcționați anticorpii din serul standard ar trebui să fie utilizate în consecință.

Aglutininele termice parțiale sunt cel mai frecvent tip de anticorpi care pot provoca dezvoltarea anemiei hemolitice autoimune. Acești anticorpi aparțin IgG, rareori IgM, IgA.

TEST COOMBS

Testul Coombs: introducere. Testul Coombs este o metodă de diagnostic de laborator bazată pe reacția de hemaglutinare.

Principala metodă de diagnosticare a anemiei hemolitice autoimune este testul Coombs. Se bazează pe capacitatea anticorpilor specifici imunoglobulinelor (în special IgG) sau componentelor complementului (în special S3) de a aglutina eritrocitele acoperite cu IgG sau S3.

Legarea IgG și C3b la eritrocite este observată în anemia hemolitică autoimună și anemia hemolitică imună indusă de medicamente. Testul Coombs direct. Testul Coombs direct este utilizat pentru a detecta anticorpii sau componentele complementului fixate pe suprafața globulelor roșii. Se realizează astfel:

Pentru a obține anticorpi la imunoglobulinele umane (ser antiglobuline) sau complement (ser anticomplementar), animalul este imunizat cu ser uman, imunoglobuline sau complement uman. Serul obtinut de la animal este purificat de anticorpi la alte proteine.

Globulele roșii ale pacientului sunt spălate cu ser fiziologic pentru a elimina complet serul, care neutralizează anticorpii la imunoglobuline și complement și poate provoca un rezultat fals negativ.

Dacă anticorpii sau componentele complementului sunt fixați pe suprafața globulelor roșii, adăugarea de antiglobulină sau ser anti-complement provoacă aglutinarea globulelor roșii.

Testul Coombs direct este utilizat în următoarele cazuri:

Hemoliza autoimună.

Boala hemolitică a nou-născuților.

Anemia hemolitică imună indusă de medicamente.

Reacții hemolitice de transfuzie. Testul Coombs indirect. Testul indirect Coombs detectează anticorpi la globulele roșii din ser. Pentru a face acest lucru, serul pacientului este incubat cu globule roșii donatoare de grup 0, apoi se efectuează un test Coombs direct.

Testul Coombs indirect este utilizat în următoarele cazuri:

Determinarea compatibilității individuale a sângelui donator și primitor.

Detectarea aloanticorpilor, inclusiv a anticorpilor care provoacă reacții hemolitice de transfuzie.

Determinarea antigenelor eritrocitare de suprafață în genetica medicala si medicina legala.

Confirmarea gemenilor identici în timpul transplantului de măduvă osoasă.

Pentru a efectua un test biologic, sângele începe să fie transfuzat cât mai repede posibil (de preferință într-un flux). După transfuzia a 25 ml de sânge, tubul de sistem este prins cu o clemă. Apoi există o pauză de 3 minute, timp în care starea destinatarului este monitorizată. Pentru a efectua un test biologic, se injectează de trei ori 25 ml de sânge. La sfârșitul testului (după transfuzia primilor 75 ml de sânge în doze fracționate de 25 ml la intervale de 3 minute), sistemul este ajustat la viteza necesară transfuzie. Când transfuzi mai mult de o sticlă de sânge unui pacient, este necesar să scoți acul din venă. În acest caz, acul este scos din eprubeta flaconului în care s-a scurs sângele și este introdus în următorul flacon. Tubul de sistem (cauciuc sau plastic) este prins în acest moment cu o clemă. Dacă în timpul unei transfuzii de sânge devine necesară administrarea intravenoasă a oricărui alt medicament primitorului, aceasta se face prin străpungerea tubului de cauciuc al sistemului. Puncturile tubului de plastic sunt inacceptabile, deoarece nu cad. După fiecare transfuzie de sânge, pacientul trebuie monitorizat pentru identificarea și eliminarea promptă posibile complicații, inclusiv reactii alergice. La 2 ore după terminarea transfuziei de sânge, trebuie măsurată temperatura corpului. Dacă crește, măsurarea trebuie repetată la fiecare oră în următoarele 4 ore. La fel de importantă este monitorizarea urinării și a compoziției urinei, ceea ce face posibilă stabilirea prezenței unei reacții toxice post-transfuzie. Debutul oliguriei și anuriei după transfuzia de sânge, prezența celulelor sanguine și a proteinelor în urină sunt un indiciu direct al dezvoltării hemolizei post-transfuzie.

Testul Coombs– un test pentru detectarea anticorpilor atașați la o suprafață sau dizolvați în plasmă. Este folosit pentru a detecta imunizarea și anticorpii la celulele roșii din sânge. Al doilea titlu testul antiglobulinei. Poate fi direct sau indirect.

La testul direct cu antiglobulină detectează anticorpii fixați pe suprafața globulelor roșii. Se efectuează în caz de suspiciune, alte boli autoimune, după administrarea de medicamente (metildopa, penicilină, chinină), etc.

Globulele roșii au fost sensibilizate in vivo - anticorpii sunt deja ferm atașați de ele, iar adăugarea de ser antiglobulină (anti-IgG) face ca celulele sensibilizate să se lipească, ceea ce este vizibil cu ochiul liber.

Testul Coombs indirect detectează anticorpi antieritrocitari în plasma sanguină, se efectuează înaintea transfuziei de sânge și în timpul.

Anticorpii anti-eritrocitari sunt un tip de autoanticorpi, de ex. anticorpi împotriva propriilor țesuturi. Autoanticorpul apare în timpul reactivității patologice sistem imunitar pentru unele medicamente, de exemplu doze mari penicilină.

Globulele roșii de pe suprafața lor conțin diverse structuri chimice(glicolipide, zaharide, glicoproteine ​​și proteine), în medicina numită antigene. O persoană moștenește de la părinți o hartă specifică a antigenelor de pe fiecare globule roșie.

Antigenele sunt combinate în grupuri și apoi sângele este împărțit în mai multe grupuri - conform sistemului AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Cele mai faimoase și semnificative în activitatea unui medic sunt AB0 și factorul Rh (Rh).

sistem AB0

Starea Rh al unei persoane este determinată de prezența acestor antigene. Un antigen deosebit de important al eritrocitelor este antigenul D. Dacă este prezent, atunci se vorbește despre Rh pozitiv din sânge RhD, iar dacă nu este acolo - oh Rh negativ Rhd.

Dacă anticorpul corespunzător se atașează de antigenele eritrocitare, eritrocitul este distrus - hemoliza.

Indicatii

Indicația principală pentru directtestul antiglobulinei- suspiciunea de anemie hemolitică. Cel mai adesea se efectuează pentru anemie hemolitică autoimună primară, hemoliza în reumatismă, tumorală, boli infecțioase, hemoliza indusă de medicamente.

Dacă anemia apare la câteva zile sau luni după o transfuzie de sânge sau în timpul icter pe termen lung Un test Coombs direct este, de asemenea, efectuat la nou-născut.

Indirectse efectuează testul antiglobulineiînainte de transfuzia de sânge și în timpul sarcinii unei femei Rh negativ.

Anemia hemolitică autoimună

Anemia hemolitică autoimună (primară)– o boală autoimună clasică cu cauze necunoscute. Interacțiunea în cadrul sistemului imunitar este perturbată, ceea ce duce la percepția propriilor celule roșii din sânge ca fiind străine. În ganglionii limfatici se sintetizează anticorpi din clasa IgG (reacționează la t 37°C) și/sau IgM (la t 40°C), care, atunci când sunt atașați la suprafața eritrocitelor, declanșează o serie de enzime ( sistemul de complement) și „perforează” peretele eritrocitei, ceea ce duce la distrugerea acestuia – hemoliză.

Primele simptome sunt cauzate atât de distrugerea globulelor roșii, cât și de scăderea hemoglobinei. Printre ei:

• oboseală, slăbiciune generală, iritabilitate
• dispnee
• dureri abdominale și toracice, greață
• culoare închisă a urinei
• dureri de spate
• decolorarea icterică a pielii și mucoaselor
• scăderea numărului de globule roșii și

Rezultat pozitiv direct Testele Coombs 100% confirmă diagnosticul de anemie hemolitică autoimună, dovedind originea sa autoimună. În același timp, un rezultat negativ nu face posibilă eliminarea diagnosticului.

Anemia hemolitică secundară

Anemia hemolitică autoimună secundară și un test Coombs pozitiv pot apărea în următoarele boli:

• sindromul Evans
• infecție cu pneumonie

Un test antiglobulină pozitiv pentru aceste boli este unul dintre simptome și nu un criteriu de diagnostic.

Boala hemolitică a nou-născutului

Cauză boala hemolitică a nou-născuților - incompatibilitatea grupei sanguine a mamei și fătului, în majoritatea cazurilor conform sistemului Rh, în cazuri unice - conform sistemului AB0, cazuistic - conform altor antigene.

Conflictul Rh se dezvoltă dacă fătul unei femei Rh negativ moștenește sânge Rh pozitiv de la tată.

Boala se dezvoltă la un nou-născut numai dacă mama a dezvoltat deja anticorpi la antigenele corespunzătoare, ceea ce se întâmplă după sarcini anterioare, avorturi, transfuzii sânge incompatibil. Cel mai frecvent motiv pentru declanșarea sintezei de anticorpi la antigenele membranei eritrocitare este nașterea (sângerarea feto-maternă). Prima naștere are loc în general fără complicații, dar cele ulterioare sunt pline de boală hemolitică a nou-născutului în primele zile după naștere.

Simptomele bolii hemolitice a nou-născutului:

• îngălbenirea pielii
• , și membranele mucoase
• ficatul și splina mărite
• probleme de respirație
• umflarea întregului corp
• excitația și deprimarea treptată a sistemului nervos central

Anemia după transfuzie de sânge

Testul Coombs indirect efectuat înainte de transfuzia de sânge pentru a evalua compatibilitatea și un test Coombs direct - după acesta dacă se suspectează hemoliză post-transfuzie, adică în prezența unor simptome precum febră, udare (citiți mai jos). Scopul analizei este identificarea anticorpilor la globulele roșii transfuzate care s-au legat de globulele roșii ale primitorului și sunt cauza hemolizei post-transfuzie, precum și îndepărtarea prematură a globulelor roșii ale donatorului din circulația sanguină a destinatarul (cel care a primit sângele).

Simptome:

• creșterea temperaturii corpului
• erupții cutanate
• dureri de spate
• roșu
• greaţă
• ameţeală

Decodare

Merită să reamintim că regulile fundamentale pentru descifrarea testelor antiglobuline directe și indirecte sunt aceleași. Singura diferență este localizarea anticorpilor - în sânge sau pe globulele roșii.

• Dacă testul Coombs direct este negativ– aceasta înseamnă că anticorpul nu „se așează” pe globulele roșii și trebuie căutată în continuare cauza simptomelor și trebuie efectuat un test Coombs indirect
• Dacă rezultat pozitiv Testul Coombs detectat după transfuzii de sânge, infecții, medicamente - pozitivitatea durează până la 3 luni (durata de viață a globulelor roșii 120 de zile - 3 luni)
• rezultat pozitiv la testul antiglobulinei cu boala autoimuna durează luni și chiar ani

Normă

• test Coombs direct - negativ
• testul Coombs indirect - negativ

Un rezultat calitativ pozitiv este măsurat în numărul de plusuri de la unu la patru (+, ++, +++, ++++) și cantitativ în formă digitală - 1:16, 1:256 etc.

Da. Medicul dumneavoastră ar trebui să știe cu siguranță că ați primit o transfuzie de sânge, deoarece acum afectează interpretarea corectă a rezultatelor testelor. Când primiți sângele altcuiva (deși testat de multe ori), există întotdeauna posibilitatea ca organismul dumneavoastră să dezvolte anticorpi împotriva sângelui transfuzat. Acești anticorpi sunt cei care vor furniza influenta negativa asupra stării de sănătate. Pentru transfuziile de sânge ulterioare, medicul trebuie să știe că ați primit deja transfuzii, ceea ce înseamnă că a fost timp pentru sinteza anticorpilor. Pentru femeile însărcinate, aceste informații sunt și mai relevante.

3. Dacă există o nepotrivire a factorului Rh între mamă și copil, toți copiii vor fi bolnavi?

Depinde dacă copilul este Rh pozitiv sau negativ (RhD). Purtătorii grupelor de sânge I, II, III și IV pot fi Rh pozitiv sau negativ. Într-o situație în care mama este Rh negativ și copilul este Rh pozitiv, anticorpii vor fi produși deja cu prima sarcină, dar numai după prima naștere (sau întreruperea sarcinii) va exista contact direct între sângele mamei și copilul. Efectul hemolitic al anticorpilor se va realiza numai în timpul celui de-al doilea şi urmatoarea nastere, ceea ce va duce la boală hemolitică la nou-născut.

Fiecare femeie cu un factor Rh negativ trebuie examinată cu atenție în timpul sarcinii și după naștere tratament preventiv pentru a preveni apariția anticorpilor și a complicațiilor ulterioare.

4. În timpul sarcinii, este necesar să cunosc grupa de sânge a soțului meu înainte de a efectua un test Coombs?

Trebuie nu numai să știți, ci și să verificați grupa de sânge a tatălui biologic al copilului în timpul sarcinii.

Date

• propus pentru prima dată la Cambridge în 1945
• pragul de sensibilitate - cel puțin 300 de molecule de anticorpi fixe pe un glob roșu
• numărul de anticorpi care declanșează hemoliza - individual pentru fiecare persoană (de la 16-30 la 300)
• dinamica altor indicatori de laborator ai anemiei hemolitice (hemoglobina, bilirubina, reticulocite) se poate normaliza, iar testul Coombs va ramane la acelasi nivel.

Testul Coombs a fost modificat ultima dată: 16 martie 2018 de Maria Bodyan

În mod normal, nu există anticorpi împotriva globulelor roșii în sânge.

Testul Coombs direct este un test cu antiglobulină (aglutinare într-un gel care permite detectarea anticorpilor divalenți completi), care detectează anticorpii din clasa IgG și componenta C3 a complementului de pe suprafața globulelor roșii. De obicei, anticorpii detectați prin testul Coombs direct au o specificitate largă care nu este asociată cu un antigen bine stabilit. Un test Coombs direct pozitiv indică în mod clar că pacientul are anemie hemolitică, deși nu toți pacienții cu un test direct pozitiv la antiglobulină suferă de această boală. La aproximativ 10% dintre pacienți, anticorpii sau componentele complementului de pe membrana globulelor roșii nu pot fi determinați printr-un test Coombs direct (testul este negativ), dar cu toate acestea suferă de anemie hemolitică autoimună. Pentru a clarifica specificitatea anticorpilor în astfel de cazuri, se folosesc teste cu eluția lor. Un test Coombs direct, pozitiv doar pentru complement, se referă de obicei la anticorpi la rece de tip IgM. În acest caz, anticorpii IgM nu sunt prezenți pe globulele roșii când temperatura bazala corpuri. Totuși, datorită faptului că anticorpii IgM fixează în mod activ complementul, iar complementul rămâne pe globulele roșii, cu această formă de anemie hemolitică autoimună (boala agutinină rece), testul Coombs va fi pozitiv doar pentru complement.

Testul Coombs direct este pozitiv pentru anemie hemolitică autoimună cauzată de anticorpi caldi, anemie autoimună indusă de medicamente (când se iau metildopa, până la 20% dintre pacienți au o reacție pozitivă), anemie hemolitică de tip adsorbție de medicamente, complex imun de tip hemolitic anemie (testul este pozitiv doar pentru C3), cu anemie hemolitică autoimună cauzată de anticorpi la rece - boala aglutinină rece (testul este pozitiv doar pentru C3). În hemoglobinuria paroxistică rece, testul Coombs direct este negativ.

Testul Coombs indirect - un test indirect de antiglobulină (detectă anticorpi incompleti) vă permite să identificați anticorpi atipici din sânge, inclusiv aloanticorpi la antigenele eritrocitare străine. Și-a primit numele (indirect) datorită faptului că are loc în 2 etape. Inițial, serul sanguin al pacientului, care conține anticorpi incompleti, interacționează cu Ag diagnosticum corpuscular adăugat fără manifestări vizibile. În a doua etapă, serul antiglobulinic adăugat interacționează cu anticorpi incompleti adsorbiți pe antigeni, cu apariția unui precipitat vizibil. Transfuzia de globule roșii omoloage (alogene) sau sarcina sunt cele mai multe motive comune formarea acestor anticorpi antieritrocitari. Combinația dintre un test Coombs indirect pozitiv cu un test direct negativ nu oferă nimic pentru diagnosticarea anemiei hemolitice autoimune. Un test Coombs indirect pozitiv provoacă anumite dificultăți la selectarea sângelui pentru transfuzie și la efectuarea unui test încrucișat de compatibilitate cu sângele conservat, dar nu are altă valoare diagnostică.