مطالعه باکتریولوژیک برای اسهال خونی. تشخیص آزمایشگاهی اسهال خونی، آمیبیاز و بالانتیدیا

اسهال خونی

اسهال خونی - عفونتکه با مسمومیت عمومی بدن، مدفوع شل و ضایعه عجیب غشای مخاطی روده بزرگ مشخص می شود. یکی از شایع ترین بیماری های حاد روده ای در جهان است. این بیماری از زمان های قدیم تحت نام "اسهال خونی" شناخته شده است، اما ماهیت آن متفاوت است. در سال 1875م دانشمند روسی لش یک آمیب را از بیمار مبتلا به اسهال خونی جدا کرد انتامبا هیستولیتیکا،طی 15 سال بعد، استقلال این بیماری ایجاد شد که نام آمیبیازیس برای آن حفظ شد. عوامل ایجاد کننده اسهال خونی گروه بزرگی از باکتری های مشابه بیولوژیکی هستند که در جنس یکسان هستند. شیگلتا.پاتوژن برای اولین بار در سال 1888 کشف شد. A. Chantemes و Vidal; در سال 1891 توسط A.V. Grigoriev توصیف شد و در سال 1898. K. Shiga با استفاده از سرم به دست آمده از بیمار، عامل بیماری زا را در 34 بیمار مبتلا به اسهال خونی شناسایی کرد و در نهایت نقش اتیولوژیکی این باکتری را به اثبات رساند. با این حال، در سال های بعدی، سایر پاتوژن های اسهال خونی کشف شد: در سال 1900. - اس. فلکسنر، در سال 1915 - K. Sonne، در سال 1917 - K. Stutzer و K. Schmitz، در سال 1932. - جی بوید، در سال 1934 - دی لارج، در سال 1943 - A. Sax.

جنس در حال حاضر شیگلاشامل بیش از 40 سروتیپ است. همه آنها میله های گرم منفی کوتاه و غیر متحرک هستند که هاگ یا کپسول تشکیل نمی دهند که (روی معمولی به خوبی رشد می کنند. رسانه های مغذیروی محیطی با سیترات به عنوان تنها منبع کربن رشد نکنید. H2S تشکیل نمی دهند، اوره آز ندارند. واکنش Voges-Proskauer منفی است. گلوکز و برخی دیگر از کربوهیدرات ها برای تشکیل اسید بدون گاز تخمیر می شوند (به جز برخی از بیوتیپ ها) Shigella flexneri: S.manchesterو ewcastle)؛به عنوان یک قاعده، آنها لاکتوز را تخمیر نمی کنند (به استثنای شیگلا سون)، آدونیتول، اینوزیتول، ژلاتین را مایع نمی کنند، معمولاً کاتالاز تشکیل می دهند و لیزین دکربوکسیلاز و فنیل آلانین دآمیناز ندارند. محتوای G+C در DNA 49-53 مول است. شیگلا بی هوازی اختیاری است، دمای مطلوب برای رشد 37 درجه سانتیگراد است، آنها بالاتر از 45 درجه سانتیگراد رشد نمی کنند، pH مطلوب محیط 6.7-7.2 است. مستعمرات در محیط های متراکم گرد، محدب، نیمه شفاف هستند؛ در صورت تداعی، کلنی های R شکل خشن تشکیل می شوند. رشد روی MPB به شکل کدورت یکنواخت، اشکال خشن یک رسوب را تشکیل می دهند. کشت های تازه جدا شده شیگلا سون J4HO مستعمرات دو نوع را تشکیل می دهند: محدب گرد کوچک (فاز I)، مسطح بزرگ (فاز 2). ماهیت کلنی به حضور (فاز I) یا عدم حضور (فاز II) یک پلاسمید با میلی متر 120 MD بستگی دارد که میزان حدت Shigella Sonne را نیز تعیین می کند.

در شیگلا، آنتی ژن های O با ویژگی های مختلف یافت شد: مشترک در خانواده انتروباکتریاسهژنریک، گونه، گروه و نوع خاص، و همچنین آنتی ژن K. آنها آنتی ژن N ندارند.

طبقه بندی فقط آنتی ژن های O گروه و نوع خاص را در نظر می گیرد. مطابق با این خصوصیات، جنس شیگلابه 4 زیر گروه یا 4 گونه تقسیم می شود و شامل 44 سروتیپ می باشد. در زیر گروه A (نوع شیگلا دیسانتری)شامل شیگلا است که مانیتول را تخمیر نمی کند. این گونه شامل 12 سروتیپ (1-12) می باشد. هر کلیشه آنتی ژن نوع خاص خود را دارد. اتصالات آنتی ژنی بین سروتیپ ها، و همچنین با سایر گونه های شیگلا، ضعیف بیان می شود. به زیر گروه B (نوع شیگلا فلکسنری)شامل شیگلا است که معمولاً مانیتول را تخمیر می کند. شیگلای این گونه از نظر سرولوژیکی به یکدیگر مرتبط هستند: آنها حاوی آنتی ژن های نوع خاص (I-VI) هستند که به وسیله آن به سروتیپ های (1-6) و آنتی ژن های گروهی تقسیم می شوند که در ترکیبات مختلف در هر سروتیپ یافت می شوند و که توسط آن سروتیپ ها به زیرسروتیپ ها تقسیم می شوند. علاوه بر این، این گونه شامل دو نوع آنتی ژنی است - X و Y، که آنتی ژن های معمولی ندارند؛ آنها در مجموعه ای از آنتی ژن های گروه متفاوت هستند. سروتیپ S.flexneri 6هیچ زیرسروتیپ ندارد، اما بر اساس ویژگی های تخمیر گلوکز، مانیتول و دولسیتول به 3 نوع بیوشیمیایی تقسیم می شود.

برای زیر گروه C (نوع شلگلا بویدل)شامل شیگلا است که معمولاً مانیتول را تخمیر می کند. اعضای گروه از نظر سرولوژیکی با یکدیگر متفاوت هستند. اتصالات آنتی ژنی در گونه ضعیف بیان می شود. این گونه شامل 18 سروتیپ (1-18) است که هر کدام آنتی ژن نوع اصلی خود را دارند.

در زیر گروه D (نوع شلگلا سونل)شامل شیگلا است که معمولاً مانیتول را تخمیر می کند و قادر است به آرامی (پس از 24 ساعت انکوباسیون و بعد از آن) لاکتوز و ساکارز را تخمیر کند. چشم انداز S. sonneiشامل یک سروتیپ است، اما کلنی های فاز I و II آنتی ژن های نوع خاص خود را دارند. برای طبقه بندی درون گونه ای شیگلا سون دو روش پیشنهاد شده است:

1) تقسیم آنها به 14 نوع و زیرگروه بیوشیمیایی با توجه به توانایی آنها در تخمیر مالتوز، رامنوز و زایلوز.

2) تقسیم به انواع فاژ بر اساس حساسیت به مجموعه ای از فاژهای مربوطه.

این روش های تایپ عمدتاً اهمیت اپیدمیولوژیک دارند. علاوه بر این، Shigella Sonne و Shigella Flexner بر اساس توانایی آنها در سنتز کولیسین های خاص (colicinogenotyping) و حساسیت به کولیسین های شناخته شده (colicinotyping) برای یک هدف تایپ می شوند. برای تعیین نوع کولیسین های تولید شده توسط شیگلا، J. Abbott و R. Shenon مجموعه ای از سویه های استاندارد و شاخص شیگلا را پیشنهاد کردند و برای تعیین حساسیت شیگلا به آن انواع شناخته شدهکولیسین ها از مجموعه ای از سویه های مرجع colicinogenic P. Frederick استفاده می کنند.

مقاومت. شیگلا مقاومت نسبتا بالایی در برابر عوامل محیطی دارد. آنها روی پارچه و کاغذ پنبه ای تا 30-36 روز زنده می مانند، در مدفوع خشک - تا 4-5 ماه، در خاک - تا 3-4 ماه، در آب - از 0.5 تا 3 ماه، روی میوه ها و سبزیجات - تا 2 غذا، در شیر و محصولات لبنی - تا چند هفته؛ در دمای 60 درجه سانتیگراد در 15-20 دقیقه می میرند.

حساس به محلول های کلرامین، کلر فعال و سایر مواد ضد عفونی کننده.

عوامل بیماری زایی. مهم ترین خاصیت بیولوژیکیشیگلا که بیماری زایی آنها را تعیین می کند، توانایی حمله به سلول های اپیتلیال، تکثیر در آنها و مرگ آنها است. این اثر را می توان با استفاده از آزمایش کراتوکونژونکتیو (معرفی یک حلقه از کشت شیگلا (3-2 میلیارد باکتری) در زیر پلک تحتانی خوکچه هندی باعث ایجاد کراتوکونژونکتیویت سروزی-چرکی) و همچنین با عفونت کشت های سلولی تشخیص داد. (اثر سیتوتوکسیک)، یا جنین مرغ (مرگ آنها)، یا داخل بینی در موش های سفید (توسعه پنومونی). عوامل اصلی بیماری زایی شیگلا را می توان به سه گروه تقسیم کرد:

1) عوامل تعیین کننده تعامل با اپیتلیوم غشای مخاطی.

2) عواملی که مقاومت در برابر مکانیسم های دفاعی هومورال و سلولی ماکرو ارگانیسم و ​​توانایی شیگلا برای تولید مثل در سلول های آن را تضمین می کند.

3) توانایی تولید سموم و محصولات سمی که توسعه خود فرآیند پاتولوژیک را تعیین می کند.

گروه اول شامل عوامل چسبندگی و کلونیزاسیون است: نقش آنها توسط پیلی، پروتئین های غشای خارجی و LPS ایفا می شود. چسبندگی و کلونیزاسیون توسط آنزیم هایی که مخاط را از بین می برند - نورآمینیداز، هیالورونیداز، موسیناز تقویت می شود. گروه دوم شامل عوامل تهاجم است که باعث نفوذ شیگلا به انتروسیت ها و تولید مثل آنها در آنها و در ماکروفاژها با تظاهر همزمان یک اثر سیتوتوکسیک و (یا) انتروتوکسیک می شود. این خواص توسط ژن های پلاسمید با m.m کنترل می شود. 140 MD (این سنتز پروتئین‌های غشای خارجی را رمزگذاری می‌کند که باعث تهاجم می‌شوند) و ژن‌های کروموزومی شیگلا: KSR A (باعث کراتوکونژونکتیویت)، cyt (مسئول تخریب سلولی) و همچنین ژن‌های دیگری که هنوز شناسایی نشده‌اند. محافظت از شیگلا در برابر فاگوسیتوز توسط آنتی ژن K سطحی، آنتی ژن های 3، 4 و لیپوپلی ساکارید انجام می شود. علاوه بر این، لیپید A اندوتوکسین شیگلا دارای اثر سرکوب کننده سیستم ایمنی است - فعالیت سلول های حافظه ایمنی را سرکوب می کند.

گروه سوم عوامل بیماری زایی شامل اندوتوکسین و دو نوع اگزوتوکسین موجود در شیگلا - شیگا و اگزوتوکسین های شبه شیگا (SLT-I و SLT-II) است که خواص سیتوتوکسیک آن ها بیشتر در S. dysenteriae 1.سموم شیگا و شیگا مانند در سروتیپ های دیگر نیز یافت شده است S. dysenteriae،آنها نیز تشکیل می شوند S.flexneri، S.sonnei، S.boydii، ETEC و مقداری سالمونلا. سنتز این سموم توسط ژن های سمی فاژهای تبدیل کننده کنترل می شود. انتروتوکسین های نوع LT در شیگلا فلکسنر، سون و بوید یافت می شوند. سنتز LT آنها توسط ژن های پلاسمید کنترل می شود. انتروتوکسین فعالیت آدنیلات سیکلاز را تحریک می کند و مسئول ایجاد اسهال است. شیگا توکسین یا نوروتوکسین با سیستم آدنیلات سیکلاز واکنش نمی دهد، اما اثر سیتوتوکسیک مستقیم دارد. شیگا و سموم شیگا مانند (SLT-I و SLT-II) دارای m.m. -70 کیلو دالتون و از زیر واحدهای A و B (آخری از 5 زیر واحد کوچک یکسان) تشکیل شده است. گیرنده سموم گلیکولیپید غشای سلولی است.

حدت شیگلا سون به پلاسمید با m.m نیز بستگی دارد. 120 MD. سنتز حدود 40 پلی پپتید غشای بیرونی را کنترل می کند که هفت مورد از آنها با بیماری زاست. شیگلا سون با داشتن این پلاسمید، مستعمرات فاز I را تشکیل می دهد و خطرناک است. کشت هایی که پلاسمید را از دست داده اند، مستعمرات فاز II را تشکیل می دهند و فاقد حدت هستند. پلاسمیدهای با m.m. 120-140 MD در شیگلا فلکسنر و بوید یافت شد. لیپوپلی ساکارید شیگلا یک اندوتوکسین قوی است.

ویژگی های اپیدمیولوژیمنبع عفونت فقط انسان است. هیچ حیوانی در طبیعت از اسهال خونی رنج نمی برد. در شرایط تجربی، اسهال خونی فقط در میمون ها قابل تکثیر است. روش عفونت مدفوعی – دهانی است. راه‌های انتقال: آب (بیشتر برای شیگلا فلکسنر)، غذا، به‌ویژه شیر و محصولات لبنی (مسیر اصلی عفونت برای شیگلا سون)، و تماس خانگی، به‌ویژه برای گونه S. dysenteriae.

یکی از ویژگی های اپیدمیولوژی اسهال خونی تغییر در ترکیب گونه ای پاتوژن ها و همچنین بیوتیپ های Sonne و سروتیپ های فلکسنر در مناطق خاص است. به عنوان مثال، تا پایان دهه 30 قرن بیستم، سهم S.dysenteriae 1 30-40٪ از کل موارد اسهال خونی را تشکیل می دهد و سپس این سروتیپ کمتر و کمتر شروع به رخ دادن کرد و تقریباً ناپدید شد. با این حال، در دهه 60-80 S.dysenteriaeدوباره در عرصه تاریخی ظاهر شد و باعث یک سری اپیدمی شد که منجر به تشکیل سه کانون هیپرآندمیک آن - در آمریکای مرکزی، آفریقای مرکزی و جنوب آسیا (هند، پاکستان، بنگلادش و سایر کشورها) شد. دلایل تغییر در ترکیب گونه ای پاتوژن های اسهال خونی احتمالاً با تغییرات مرتبط است مصونیت گلهو با تغییر در خواص باکتری های اسهال خونی. به ویژه، بازگشت S.dysenteriae 1و توزیع گسترده آن، که باعث تشکیل کانون های هیپرآندمیک اسهال خونی می شود، با کسب پلاسمیدهایی که باعث مقاومت چند دارویی و افزایش حدت می شود، همراه است.

ویژگی های پاتوژنز و کلینیک.دوره نهفتگی اسهال خونی 2 تا 5 روز و گاهی کمتر از یک روز است. تشکیل تمرکز عفونیدر غشای مخاطی قسمت نزولی روده بزرگ (سیگموئید و رکتوم)، جایی که پاتوژن اسهال خونی نفوذ می کند، ماهیت چرخه ای دارد: چسبندگی، کلونیزاسیون، ورود شیگلا به سیتوپلاسم انتروسیت ها، تولید مثل داخل سلولی، تخریب و رد آنها. سلول های اپیتلیال، انتشار پاتوژن ها در لومن روده. پس از این، چرخه بعدی شروع می شود - چسبندگی، استعمار، و غیره. شدت چرخه ها به غلظت پاتوژن ها در لایه جداری غشای مخاطی بستگی دارد. در نتیجه چرخه های مکرر، کانون التهابی رشد می کند، زخم های ایجاد شده، اتصال، افزایش قرار گرفتن در معرض دیواره رودهدر نتیجه خون، توده های مخاطی چرکی و لکوسیت های پلی مورفونکلئر در مدفوع ظاهر می شوند. سیتوتوکسین ها (SLT-I و SLT-II) باعث تخریب سلولی، انتروتوکسین - اسهال، اندوتوکسین ها - مسمومیت عمومی می شوند. تصویر بالینی اسهال خونی تا حد زیادی با توجه به نوع اگزوتوکسین های تولید شده توسط پاتوژن، میزان اثر آلرژی زا و وضعیت ایمنیبدن با این حال، بسیاری از مسائل مربوط به پاتوژنز اسهال خونی مشخص نیست، به ویژه: ویژگی های دوره اسهال خونی در کودکان دو سال اول زندگی، دلایل انتقال اسهال خونی حاد به مزمن، اهمیت حساسیت، مکانیسم مصونیت موضعی مخاط روده، و غیره تظاهرات بالینیاسهال خونی ناشی از اسهال است، اصرار مکرر- در موارد شدید، تا 50 بار یا بیشتر در روز، تنسموس (اسپاسم دردناک راست روده) و مسمومیت عمومی. ماهیت مدفوع با درجه آسیب به روده بزرگ تعیین می شود. شدیدترین اسهال خونی ناشی از S.dysenteriae 1، راحت ترین - اسهال خونی Sonne.

ایمنی پس از عفونی. همانطور که مشاهدات میمون ها نشان داده است، پس از ابتلا به اسهال خونی، ایمنی قوی و نسبتاً طولانی مدت باقی می ماند. این بیماری توسط آنتی بادی های ضد میکروبی، آنتی توکسین ها، افزایش فعالیت ماکروفاژها و لنفوسیت های T ایجاد می شود. نقش بسزایی دارد مصونیت موضعیمخاط روده با واسطه IgAs. با این حال، ایمنی نوع خاص است؛ ایمنی متقابل قوی رخ نمی دهد.

تشخیص آزمایشگاهی . روش اصلی باکتریولوژیک است. ماده برای تحقیق مدفوع است. طرح جداسازی پاتوژن: تلقیح بر روی محیط های تشخیصی افتراقی اندو و پلوسکیرف (به موازات محیط غنی سازی و سپس تلقیح روی محیط های اندو و پلوسکیرف) برای جداسازی کلنی های جدا شده، به دست آوردن فرهنگ نابمطالعه خواص بیوشیمیایی آن و با در نظر گرفتن مورد دوم شناسایی با استفاده از سرم های آگلوتینه کننده تشخیصی چند ظرفیتی و تک ظرفیتی. سرم های تجاری زیر تولید می شوند:

1. به شیگلا که مانیتول را تخمیر نمی کند: به S.dysenteriae 1 تا 2 S.dysenteriae 3-7(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی)، به S.dysenteriae 8-12(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی).

2. مانیتول تخمیرکننده شیگلا:

به آنتی ژن های معمولی S.flexneri I, II, III, IV, V, VI,

برای گروه بندی آنتی ژن ها S.flexneri 3، 4، 6،7،8- چند ظرفیتی،

به آنتی ژن ها S.boydii 1-18(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی)

به آنتی ژن ها S. sonneiفاز اول، فاز دوم،

به آنتی ژن ها S.flexneri I-VI+ S.sonnei- چند ظرفیتی

برای تشخیص آنتی ژن ها در خون (از جمله به عنوان بخشی از CEC)، می توان از ادرار و مدفوع استفاده کرد روش های زیر: RPHA، RSK، واکنش انعقادی (در ادرار و مدفوع)، IFM، RPGA (در سرم خون). این روش ها بسیار موثر، اختصاصی و برای تشخیص زودهنگام مناسب هستند.

برای تشخیص سرولوژیکی می توان از موارد زیر استفاده کرد: RPGA با مناسب تشخیص گلبول های قرمز، روش ایمونوفلورسانس (اصلاح غیر مستقیم)، روش کومبس (تعیین تیتر آنتی بادی های ناقص). ارزش تشخیصیهمچنین دارای تست آلرژی با دیسنترین (محلول فراکسیون های پروتئینی شیگلا فلکسنر و سون) است. واکنش پس از 24 ساعت در نظر گرفته می شود و در صورت وجود پرخونی و نفوذ با قطر 10-20 میلی متر مثبت در نظر گرفته می شود.

رفتار.تمرکز بر بازگرداندن حالت عادی است متابولیسم آب و نمک, تغذیه منطقی، سم زدایی، آنتی بیوتیک درمانی منطقی (با در نظر گرفتن حساسیت پاتوژن به آنتی بیوتیک ها). اثر خوباستفاده زود هنگام از باکتریوفاژ اسهال خونی چند ظرفیتی، به ویژه قرص با پوشش پکتین، که فاژ را از عمل آب معده HC1 محافظت می کند. V روده کوچکپکتین حل می شود، فاژها آزاد می شوند و اثر خود را اعمال می کنند. برای اهداف پیشگیرانه، فاژ باید حداقل هر سه روز یک بار (دوره بقای آن در روده) داده شود.

مشکل پیشگیری خاصبرای ایجاد مصونیت مصنوعیواکسن های مختلفی علیه اسهال خونی استفاده شد: از باکتری های کشته شده، مواد شیمیایی، الکل، اما همه آنها بی اثر بودند و متوقف شدند. واکسن های ضد اسهال خونی فلکسنر از شیگلا فلکسنر زنده (جهش یافته، وابسته به استرپتومایسین) ایجاد شده است. واکسن های ریبوزومی، اما آنها نیز پیدا نکردند کاربرد گسترده. بنابراین، مشکل پیشگیری خاص از اسهال خونی حل نشده باقی مانده است. راه اصلی مبارزه با اسهال خونی، بهبود سیستم تامین آب و فاضلاب، اطمینان از رژیم های بهداشتی و بهداشتی سختگیرانه در شرکت های غذایی، به ویژه صنایع لبنی، در موسسات مراقبت از کودکان، اماکن عمومی و رعایت بهداشت فردی است.

میکروبیولوژی وبا

به گفته سازمان جهانی بهداشت، وبا یک بیماری است که با اسهال حاد، شدید و کم‌آبی همراه با مدفوع آب برنج مانند، که در نتیجه عفونت با ویبریو کلرا ایجاد می‌شود، مشخص می‌شود. با توجه به این واقعیت که با توانایی بارز برای گسترش گسترده همه گیر مشخص می شود، دوره شدیدوبا مرگ و میر بالا یکی از خطرناک ترین عفونت هاست.

موطن تاریخی وبا هند است، به طور دقیق تر، دلتای رودخانه های گنگ و برهماپوترا (در حال حاضر هند شرقی و بنگلادش)، جایی که از زمان های بسیار قدیم وجود داشته است (اپیدمی های وبا در این منطقه از زمان مشاهده شده است. 500 سال قبل از میلاد). وجود طولانی مدت منبع بومی وبا در اینجا با دلایل زیادی توضیح داده شده است. Vibrio cholerae نه تنها می تواند برای مدت طولانی در آب زنده بماند، بلکه در شرایط مساعد - دمای بالای +12 درجه سانتیگراد و وجود مواد آلی در آن نیز تکثیر می شود. همه این شرایط در هند - آب و هوای گرمسیری (متوسط ​​دمای سالانه از +25 تا +29 درجه سانتیگراد)، بارش فراوان و باتلاقی، تراکم بالاجمعیت، به ویژه در دلتای گنگ، تعداد زیادی ازمواد آلی در آب، آلودگی مداوم آب در طول سال فاضلابو مدفوع، سطح پایین مادی زندگی و مراسم مذهبی و مذهبی خاص مردم.

عامل ایجاد کننده وبا ویبریوکلرادر سال 1883 افتتاح شد. با این حال، در طول پنجمین بیماری همه گیر توسط R. Koch، ویبریو برای اولین بار در مدفوع بیماران مبتلا به اسهال در سال 1854 کشف شد. اف. پاچینی.

V.choleraeمتعلق به خانواده است Vibrionaceaeکه شامل چندین جنس است (ویبریو، آئروموناس، پلزیوموناس، فوتوباکتریوم).جنس ویبریواز سال 1985 دارای بیش از 25 گونه است که از آنها می باشد بالاترین ارزشبرای یک فرد دارند V.cholerae، V.parahaemolyticus، V.alginolyticus، dnificusو V. fluvialis.

ویژگی های کلیدی جنس ویبریو : کوتاه، بدون تشکیل هاگ و کپسول، میله های گرم منفی منحنی یا مستقیم، قطر 0.5 میکرومتر، طول 1.5-3.0 میکرومتر، متحرک ( V.cholerae- یکنواخت، برخی از گونه ها دارای دو یا چند تاژک قطبی هستند. به خوبی و به سرعت در محیط های معمولی، شیمی ارگانوتروف ها، کربوهیدرات های تخمیر با تشکیل اسید بدون گاز رشد می کنند (گلوکز از طریق مسیر Embden-Meyerhof تخمیر می شود). اکسیداز مثبت، تشکیل ایندول، کاهش نیترات به نیتریت (V.choleraeواکنش نیتروزو ایندول مثبت می دهد)، ژلاتین را تجزیه می کند، اغلب واکنش Voges-Proskauer مثبت می دهد (یعنی استیل متیل کربینول را تشکیل می دهند)، اوره آز ندارند، H S تشکیل نمی دهند. لیزین و اورنیتین دکربوکسیلاز دارند، اما ندارند. آرژنین دی هیدرولاز

Vibrio cholerae برای مواد مغذی بسیار بی تکلف است. در پپتون آب قلیایی 1% (pH 8.6-9.0) حاوی 0.5-1.0% NaCl به خوبی و به سرعت تکثیر می شود و از رشد سایر باکتری ها پیشی می گیرد. برای سرکوب رشد پروتئوس، اضافه کردن تلوریت پتاسیم 4 تا 1 درصد (PV) توصیه می شود (رقت نهایی 1:100000). 1% PV بهترین محیط غنی‌کننده برای ویبریوکلرا است. همانطور که رشد می کند، پس از 6-8 ساعت بر روی سطح PV، یک لایه ظریف، شل و خاکستری تشکیل می دهد که با تکان دادن به راحتی شکسته می شود و به صورت ورقه ای به پایین می افتد؛ PV نسبتاً کدر می شود. . محیط های انتخابی مختلفی برای جداسازی ویبریوکلرا پیشنهاد شده است: آگار قلیایی، زرده نمک آگار، آلکالین آلبومینات، آگار خون قلیایی، لاکتوز-ساکارز و سایر محیط ها. بهترین محیط TCBS (تیوسولفات سیترات-بروموتیمول ساکارز آگار) و تغییرات آن است. با این حال، اغلب آنها از MPA قلیایی استفاده می کنند که روی آن Vibrio cholerae مستعمرات دیسکی شکل صاف و شفاف شیشه ای با قوام چسبناک با رنگ مایل به آبی تشکیل می دهد.

هنگامی که ویبریو با تزریق در ستونی از ژلاتین کاشته می شود، پس از 2 روز در دمای 22-23 درجه سانتیگراد باعث مایع شدن از سطح به صورت حباب و سپس قیفی شکل و در نهایت لایه به لایه می شود.

در شیر ویبریو به سرعت تکثیر می شود و پس از 24-48 ساعت باعث انعقاد می شود و سپس پپتونیزاسیون شیر اتفاق می افتد و پس از 3-4 روز به دلیل جابجایی PH شیر به سمت اسیدی ویبریو می میرد.

ب. هایبرگ، بر اساس توانایی تخمیر مانوز، ساکارز و آرابینوز، تمام ویبریوها (وبا و شبه وبا) را به تعدادی گروه تقسیم کرد که تعداد آنها اکنون 8 است. ویبریوکلرا به گروه اول هایبرگ تعلق دارد.

ویبریوها که از نظر خصوصیات مورفولوژیکی، فرهنگی و بیوشیمیایی شبیه به وبا بودند، به طور متفاوتی نامیده می شدند: پاراکلرا، شبه وبا، NAG-vibrios (ویبریوهای غیر آگلوتینه). ویبریوهایی که به گروه 01 تعلق ندارند. نام خانوادگی به درستی بر رابطه آنها با ویبریوکلرا تأکید می کند. همانطور که توسط A. Gardner و K. Venkatraman مشخص شد، وبا و ویبریوهای شبه وبا یک آنتی ژن H مشترک دارند، اما در آنتی ژن O متفاوت هستند. با توجه به آنتی ژن O، وبا و ویبریوهای شبه وبا در حال حاضر به 139 سروگروه O تقسیم می شوند، اما تعداد آنها دائما در حال افزایش است. Vibrio cholerae متعلق به گروه 01 است. دارای یک آنتی ژن A مشترک و دو آنتی ژن نوع خاص - B و C است که سه سروتیپ را متمایز می کند. V.cholerae- سروتیپ Ogawa (AB)، سروتیپ Inaba (AS) و سروتیپ Gikoshima (ABC). ویبریوکلرا در مرحله تفکیک دارای آنتی ژن OR است. در این راستا برای شناسایی V.choleraeسرم O، سرم OR و سرم های نوع خاص Inaba و Ogawa استفاده می شود.

عوامل بیماری زایی V.cholerae :

1. تحرک.

2. کموتاکسی. با کمک این خواص، ویبریو بر لایه مخاطی غلبه می کند و با سلول های اپیتلیال تعامل می کند. در موتانت‌های Che (که توانایی کموتاکسی را از دست داده‌اند)، بیماری‌زایی به شدت کاهش می‌یابد. ویروس‌زایی در موتانت‌های Mot (که تحرک خود را از دست داده‌اند) یا به طور کامل ناپدید می‌شوند یا 100-1000 برابر کاهش می‌یابند.

3. عوامل چسبندگی و کلونیزاسیون که به کمک آنها ویبریو به میکروویلی ها می چسبد و غشای مخاطی روده کوچک را کلونیزه می کند.

4. آنزیم ها: موسیناز، پروتئازها، نورآمینیداز، لسیتیناز و غیره.

آنها چسبندگی و استعمار را تقویت می کنند، زیرا مواد تشکیل دهنده مخاط را از بین می برند. نورآمینیداز، با جدا کردن اسید سیالیک از گلیکوپروتئین های اپیتلیال، یک محل فرود برای ویبریوها ایجاد می کند. علاوه بر این، تعداد گیرنده‌های کلرژن را با تغییر تری و دی‌سیالوگانگلیوزیدها به مونوسیالوگانگلیوزید Gmb افزایش می‌دهد که به عنوان گیرنده‌ای برای کلروژن عمل می‌کند.

5. عامل اصلی بیماری زایی V.choleraeیک اگزوتوکسین-کلروژن است که پاتوژنز وبا را تعیین می کند. مولکول کلروژن دارای m.m. 84 کیلو دالتون و از دو قطعه - A و B تشکیل شده است. قطعه A از دو پپتید - A1 و A2 - تشکیل شده و دارای خاصیت خاص سم وبا است. قطعه B از 5 زیر واحد یکسان تشکیل شده است و دو عملکرد را انجام می دهد: 1) گیرنده (مونوسیالوگانگلیوزید) انتروسیت را می شناسد و به آن متصل می شود.

2) یک کانال آبگریز درون غشایی برای عبور زیرواحد A تشکیل می دهد. پپتید A 2 Cl برای اتصال قطعات A و B استفاده می شود. عملکرد سمی واقعی توسط پپتید A t انجام می شود. با NAD تعامل می کند، باعث هیدرولیز آن می شود و ADP-ریبوز حاصل به زیر واحد تنظیمی آدنیلات سیکلاز متصل می شود. این منجر به مهار هیدرولیز GTP می شود. کمپلکس GTP + آدنیلات سیکلاز حاصل باعث هیدرولیز ATP با تشکیل cAMP می شود. (یک راه دیگر برای تجمع cAMP سرکوب آنزیمی است که cAMP را به 5-AMP توسط کلروژن ها هیدرولیز می کند).

6. ویبریو کلرا علاوه بر کلراژن، عاملی را سنتز و ترشح می کند که باعث افزایش نفوذپذیری مویرگی می شود.

7. اگزوتوکسین های دیگری نیز در ویبریوکلرا یافت شده است، به ویژه انواع LT، ST و SLT.

8. اندوتوکسین. لیپوپلی ساکارید V.choleraeدارای خواص اندوتوکسیک قوی است. مسئول مسمومیت عمومی بدن و استفراغ است. آنتی بادی های تشکیل شده علیه اندوتوکسین دارای اثر ویبریوسیدال واضحی هستند (ویبریوها را در حضور مکمل حل می کنند) و جزء مهم ایمنی پس از عفونی و پس از واکسیناسیون هستند.

توانایی ویبریوهایی که به گروه 01 تعلق ندارند در ایجاد بیماری های اسهال پراکنده یا گروهی در انسان با حضور انتروتوکسین های نوع LT یا ST مرتبط است که به ترتیب سیستم های آدنیلات یا گوانیلات سیکلاز را تحریک می کنند.

سنتز کلروژن - مهمترین ملک V.cholerae.ژن‌هایی که سنتز قطعات A و B کلروژن‌ها را کنترل می‌کنند در اپرون vctAB یا ctxB ترکیب می‌شوند؛ این ژن‌ها روی کروموزوم ویبریو قرار دارند. برخی از سویه های ویبریو کلرا دارای دو اپرون غیر پشت سر هم هستند. عملکرد اپرون توسط دو ژن تنظیم کننده کنترل می شود. ژن toxR کنترل مثبت را فراهم می کند؛ جهش های این ژن منجر به کاهش 1000 برابری تولید سم می شود. ژن htx کنترل منفی اعمال می کند؛ جهش در این ژن تولید سم را 3-7 برابر افزایش می دهد.

برای تشخیص کلروژن ها می توان از روش های زیر استفاده کرد:

1. آزمایشات بیولوژیکی روی خرگوش. هنگامی که ویبریوهای وبا به صورت داخل روده ای به خرگوش های شیرخوار تزریق می شوند (بیشتر از 2 هفته)، آنها دچار یک سندرم کلروژنیک معمولی می شوند: اسهال، کم آبی بدن و مرگ خرگوش. در کالبد شکافی - تزریق تیز عروق معده و کوچک
روده، گاهی اوقات مایع شفاف در آن جمع می شود. اما تغییرات روده بزرگ به ویژه مشخص است - بزرگ شده و با مایع کاملاً شفاف و نی رنگی با تکه ها و حباب های گاز پر شده است. هنگامی که ویبریوهای وبا در ناحیه بسته شده روده کوچک به خرگوش های بالغ وارد می شوند، همان تغییراتی را در روده بزرگ تجربه می کنند که خرگوش های شیرخوار آلوده می شوند.

2. تشخیص مستقیم کلروژن ها با استفاده از روش های ایمونوفلورسانس یا ایمونوسوربنت متصل به آنزیم یا واکنش همولیز ایمنی غیرفعال (کلروژن به Gm1 گلبول های قرمز متصل می شود و آنها با افزودن آنتی بادی های آنتی سمی و مکمل لیز می شوند).

3. تحریک آدنیلات سیکلاز سلولی در کشت های سلولی.

4. استفاده از قطعه کروموزوم به عنوان پروب DNA V.cholerae،حامل یک اپرون کلروژن

در طول همه گیری هفتم، سویه ها جدا شدند V.choleraeبا درجات مختلفحدت زایی: کلروژنیک (خارش زا)، کم کلروژنیک (با حدت کم) و غیرکلروژنیک (غیر بیماریزا). غیر کلروژنیک V.cholerae،به عنوان یک قاعده، آنها فعالیت همولیتیک دارند، توسط فاژ 5 تشخیصی وبا (CDF-5) لیز نمی شوند و باعث بیماری انسان نمی شوند.

برای تایپ فاژ V.cholerae(شامل V.eltor) S. Mukherjee مجموعه های مربوطه از فاژها را پیشنهاد کرد که سپس با فاژهای دیگر در روسیه تکمیل شد. مجموعه ای از این فاژها (1-7) امکان تمایز بین آنها را فراهم می کند V.cholerae 16 فاگوتیپ HDF-3 به طور انتخابی ویبریو کلرا را لیز می کند نوع کلاسیک، HDF-4 - ویبریوهای El Tor و HDF-5 فقط ویبریوهای کلروژنیک (خارجی) از هر دو نوع را لیز می کند و ویبریوهای غیرکلروژنیک را لیز نمی کند.

ویبریوهای کلروژنیک معمولاً دارای فعالیت همولیتیک نیستند، توسط HDF-5 لیز می شوند و باعث ایجاد وبا در انسان می شوند.

مقاومت در برابر عوامل بیماری زا وبا. Vibrios cholerae در دماهای پایین به خوبی زنده می مانند: در یخ تا 1 ماه زنده می مانند. در آب دریا - تا 47 روز، در آب رودخانه - از 3-5 روز تا چند هفته، در آب جوشیده آب معدنیماندگاری بیش از 1 سال، در خاک - از 8 روز تا 3 ماه، در مدفوع تازه - تا 3 روز، در غذاهای پخته شده (برنج، رشته فرنگی، گوشت، غلات و غیره) به مدت 2-5 روز، در خام سبزیجات - 2-4 روز، در میوه ها - 1-2 روز، در شیر و محصولات لبنی - 5 روز؛ هنگامی که در سرما ذخیره می شود، دوره بقا 1-3 روز افزایش می یابد: روی کتانی آلوده به مدفوع، آنها تا 2 روز و در مواد مرطوب - یک هفته دوام می آورند. ویبریوهای وبا در دمای 80 درجه سانتیگراد در 5 دقیقه، در 100 درجه سانتیگراد - بلافاصله می میرند. بسیار حساس به اسیدها؛ تحت تأثیر کلرامین و سایر مواد ضد عفونی کننده آنها در عرض 5-15 دقیقه می میرند. نسبت به خشک شدن حساس و مستقیم هستند اشعه های خورشیداما به خوبی و برای مدت طولانی باقی می مانند و حتی در مخازن باز و فاضلاب، غنی از مواد آلی، دارای PH قلیایی و دمای بالای 10-12 درجه سانتیگراد تکثیر می شوند. بسیار حساس به کلر: دوز کلر فعال 0.3-0.4 میلی گرم در لیتر آب در 30 دقیقه باعث ضد عفونی مطمئن از ویبریو کلرا می شود.

ویژگی های اپیدمیولوژی. منبع اصلی عفونت فقط یک فرد است - یک فرد مبتلا به وبا یا یک ناقل ویبریو و همچنین آب آلوده به آنها. هیچ حیوانی در طبیعت به وبا مبتلا نمی شود. روش عفونت مدفوعی – دهانی است. راه های آلودگی: الف) اصلی - از طریق آبی که برای آشامیدن، حمام کردن و نیازهای خانگی استفاده می شود. ب) تماس و خانواده و ج) از طریق غذا. تمام اپیدمی‌ها و همه‌گیری‌های بزرگ وبا از طریق آب منتقل می‌شدند. Vibrios cholerae دارای چنین مکانیسم های سازگاری است که وجود جمعیت آنها را هم در بدن انسان و هم در اکوسیستم های خاصی از آب های آزاد تضمین می کند. اسهال فراوان ناشی از ویبریو کلرا منجر به پاکسازی روده ها از باکتری های رقیب می شود و به توزیع گسترده پاتوژن در محیط، عمدتاً در فاضلاب و در آب های آزاد که در آنجا تخلیه می شوند، کمک می کند. فرد مبتلا به وبا پاتوژن را به داخل ترشح می کند تعداد زیادی- از 100 میلیون تا 1 میلیارد در هر 1 میلی لیتر مدفوع، حامل ویبریو 100-100000 ویبریو در هر 1 میلی لیتر آزاد می کند، دوز عفونی حدود 1 میلیون ویبریو است. طول مدت دفع ویبریو وبا در ناقلین سالم بین 7 تا 42 روز و در کسانی که از بیماری بهبود یافته اند 7 تا 10 روز است. ترشح طولانی تر بسیار نادر است.

ویژگی وبا این است که پس از آن، به طور معمول، حمل و نقل طولانی مدت وجود ندارد و کانون های بومی پایدار تشکیل نمی شوند. با این حال، همانطور که در بالا ذکر شد، به دلیل آلودگی آب های آزاد با فاضلاب حاوی مقادیر زیاد مواد آلی، مواد شوینده و نمک سفره، در تابستان، ویبریو وبا نه تنها برای مدت طولانی در آنها زنده می ماند، بلکه حتی چند برابر می شود.

از اهمیت اپیدمیولوژیک زیادی برخوردار است که ویبریوهای وبا از گروه 01، اعم از غیر سمی و سمی، می توانند برای مدت طولانی در موارد مختلف باقی بمانند. اکوسیستم های آبیبه شکل اشکال کشت نشده با استفاده از واکنش زنجیره ای پلیمراز، با مطالعات منفی باکتریولوژیک، ژن های دامپزشکی از اشکال کشت نشده در تعدادی از مناطق بومی CIS در آب های مختلف کشف شد. V.cholerae.

هنگامی که بیماری های وبا رخ می دهد، مجموعه ای از اقدامات ضد اپیدمی انجام می شود که در میان آنها یکی از مهمترین و تعیین کننده ترین آنها فعال است. تشخیص به موقعو ایزوله ( بستری، درمان ) بیماران در حاد و فرم غیر معمولو حامل های ویبریو سالم؛ اقداماتی برای سرکوب راه های احتمالی انتشار عفونت انجام می شود. توجه ویژه ای به تامین آب (کلرزنی) می شود آب آشامیدنی) رعایت رژیم بهداشتی و بهداشتی در شرکت های مواد غذایی، موسسات مراقبت از کودکان و اماکن عمومی؛ کنترل دقیق، از جمله کنترل باکتریولوژیک، بر روی آب های آزاد انجام می شود، ایمن سازی جمعیت و غیره انجام می شود.

ویژگی های پاتوژنز و کلینیک. دوره کمون وبا از چند ساعت تا 6 روز و اغلب 2-3 روز متغیر است. هنگامی که در مجرای روده کوچک، ویبریوهای وبا به دلیل تحرک و کموتاکسی به غشای مخاطی به سمت مخاط هدایت می شوند. برای نفوذ از طریق آن، ویبریوها تعدادی آنزیم تولید می کنند: نورآمینیداز، موسیناز، پروتئازها، لسیتیناز، برخی مواد موجود در مخاط را از بین می برند و حرکت ویبریوها را به سلول های اپیتلیال تسهیل می کنند. با چسبندگی، ویبریوها به گلیکوکالیکس اپیتلیوم متصل می‌شوند و با از دست دادن تحرک، شروع به تکثیر شدید می‌کنند، میکروویلی‌های روده کوچک را مستعمره می‌کنند و در عین حال مقادیر زیادی اگزوتوکسین-کلروژن تولید می‌کنند. مولکول‌های کلروژن به مونوسیالوگانگلیوزید Gm1 متصل می‌شوند و به غشای سلولی نفوذ می‌کنند، سیستم آدنیلات سیکلاز را فعال می‌کنند و cAMP تجمع‌یافته باعث ترشح بیش از حد مایع، کاتیون‌ها و آنیون‌های Na +، HCO 3 ~، K +، SG از انتروسیت‌ها می‌شود که منجر به وبا، وبا می‌شود. بدن کم آبی و نمک زدایی سه نوع بیماری وجود دارد:

1. بیماری اسهالی خشن و شدید کم آبی که منجر به مرگ بیمار در عرض چند ساعت می شود.

2. دوره کمتر شدید، یا اسهال بدون کم آبی.

3. سیر بدون علامت بیماری (ناقل ویبریو).

در اشکال شدید وبا، بیماران دچار اسهال می شوند، مدفوع بیشتر می شود، حرکات روده زیادتر می شود، آبکی می شود، بوی مدفوع خود را از دست می دهد و شبیه آب برنج می شود (مایع کدر با بقایای مخاطی و سلول های اپیتلیال شناور در آن). سپس استفراغ ناتوان کننده، ابتدا با محتویات روده ای ایجاد می شود و سپس استفراغ ظاهر آب برنج را به خود می گیرد. دمای بیمار کمتر از حد طبیعی می شود، پوست مایل به آبی، چروکیده و سرد می شود - آلژید وبا. در نتیجه کم آبی، خون غلیظ می شود و سیانوز ایجاد می شود. گرسنگی اکسیژن، عملکرد کلیه به شدت آسیب می بیند، تشنج ظاهر می شود، بیمار هوشیاری خود را از دست می دهد و مرگ رخ می دهد. میزان مرگ و میر ناشی از وبا در طول همه گیری هفتم از 1.5 درصد در کشورهای توسعه یافته تا 50 درصد در کشورهای در حال توسعه متغیر بود.

ایمنی پس از عفونیبیماری های بادوام، طولانی مدت و عود کننده نادر هستند. ایمنی ضد سمی و ضد میکروبی توسط آنتی بادی ها (آنتی توکسین ها بیشتر از آنتی بادی های ضد میکروبی دوام می آورند)، سلول های حافظه ایمنی و فاگوسیت ها ایجاد می شود.

تشخیص آزمایشگاهی.اصلی و روش تعیین کنندهتشخیص وبا باکتریولوژیک است. ماده برای تحقیق از بیمار مدفوع و استفراغ است. مدفوع برای حمل ویبریو بررسی می شود. از افرادی که در اثر وبا جان خود را از دست داده اند، یک بخش بسته شده از روده کوچک و کیسه صفرا برای تحقیق گرفته می شود. در میان اشیاء محیطی، آب از مخازن باز و فاضلاب بیشتر مورد مطالعه قرار می گیرد.

هنگام انجام یک مطالعه باکتریولوژیکی، سه شرط زیر باید رعایت شود:

1) هر چه سریعتر مواد را از بیمار تلقیح کنید (ویبریوکلرا در مدفوع باقی می ماند. کوتاه مدت);

2) ظرفی که در آن مواد گرفته می شود نباید با مواد شیمیایی ضد عفونی شود و نباید آثاری از آنها وجود داشته باشد، زیرا ویبریو کلرا به آنها بسیار حساس است.

3) امکان آلودگی و عفونت دیگران را حذف کنید.

در مواردی که وجود دارد V.choleraeنه گروه های 01، آنها باید با استفاده از سرم های آگلوتینه کننده مناسب سایر سروگروه ها تایپ شوند. ترشح از بیمار مبتلا به اسهال (از جمله وبا) V.choleraeنه گروه 01 به همان اقدامات ضد اپیدمی مانند در مورد جداسازی نیاز دارد V.cholerae 01-گروه ها. در صورت لزوم، توانایی سنتز کلروژن یا وجود ژن های کلروژن در ویبریوهای جدا شده وبا با استفاده از پروب DNA با استفاده از یکی از روش ها تعیین می شود.

تشخیص سرولوژیکی وبا کمکی است. برای این منظور می توان از واکنش آگلوتیناسیون استفاده کرد، اما بهتر است تیتر آنتی بادی های ویبریوسیدال یا آنتی توکسین ها را تعیین کرد (آنتی بادی های کلروژن با روش ایمونوسوربنت یا ایمونوفلورسانس متصل به آنزیم تعیین می شوند).

رفتاربرای بیماران مبتلا به وبا باید در درجه اول شامل آبرسانی مجدد و بازیابی متابولیسم طبیعی آب نمک باشد. برای این منظور، توصیه می شود از محلول های نمکی، به عنوان مثال، از ترکیب زیر استفاده کنید: NaCl - 3.5. NaHCO 3 - 2.5; KS1 - 1.5 و گلوکز - 20.0 گرم در هر 1 لیتر آب. چنین درمان مبتنی بر پاتوژنتیک در ترکیب با آنتی بیوتیک درمانی منطقی می تواند میزان مرگ و میر در وبا را تا 1٪ یا کمتر کاهش دهد.

پیشگیری خاصواکسن های مختلفی برای ایجاد مصونیت مصنوعی پیشنهاد شده است، از جمله سویه های کشته شده Inaba و Ogawa. توکسوئید کلروژن برای استفاده زیر جلدی و واکسن شیمیایی دو ظرفیتی روده، sos

تشخيص آزمايشگاهي اسهال خوني، آميبياز و بالانتيديازيس

در شرایط مدرن، در موارد منزوی یا در شیوع‌های کانونی کوچک بیماری‌های روده، که اغلب با علائم نامشخص رخ می‌دهند، روش‌های تحقیق آزمایشگاهی اهمیت عملی مهمی پیدا می‌کنند.

مطالعات انجام شده برای اهداف تشخیصی باید با رعایت دقیق توصیه های تعیین شده و در اسرع وقت انجام شود.

مجموعه مدفوعبرای تحقیق، در ظروف تمیز (گلدان های شبانه، روتختی) که حاوی مواد ضدعفونی کننده باقی مانده نیستند، تولید کنید؛ مواد لازم برای تحقیق از مخاط رکتوم با سواب در طول سیگموئیدوسکوپی گرفته می شود.

برای تایید باکتریولوژیک تشخیص، بهتر است قبل از درمان با آنتی بیوتیک ها و سولفونامیدها از بیماران مبتلا به اسهال خونی مدفوع گرفته شود و پس از درمان با این داروها ناقل باکتری تعیین شود.

کاشت روی ظروف پتری باید بلافاصله پس از گرفتن مواد انجام شود.

اول از همه، یک معاینه ماکروسکوپی مدفوع انجام می شود که می تواند: بقایای غذا - تکه های گوشت، باقی مانده های چربی، غذای گیاهیو ناخالصی های پاتولوژیک - مخاط با قوام چسبناک به شکل توده (در اسهال خونی شفاف نیست و در آمیبیاز شفاف است). خون با اسهال خونی تغییر نمی کند و ضایعه اولسراتیوقسمت پایین روده بزرگ با علت متفاوت و تغییر رنگ ("ژله تمشک") با آمیبیازیس، بالانتیدازیس. چرک در اشکال شدید طولانی اسهال خونی تشخیص داده می شود.

بررسی میکروسکوپی مدفوع برای تشخیص عناصر سلولی خون، آمیب، بالانتیدیا و کیست های آنها استفاده می شود. آماده سازی بومی به شرح زیر تهیه می شود: یک توده مدفوع روی یک لام شیشه ای با یک حلقه و یک قطره محلول کلرید سدیم ایزوتونیک در کنار آن قرار می گیرد، مخلوط می شود و با یک لپه پوشانده می شود. محلول لوگول برای رنگ آمیزی تک یاخته ها استفاده می شود.

برای تمایز عناصر سلولی خون، آماده سازی با رنگ Romanovsky-Giemsa یا لاجورد-ائوزین درمان می شود. در اسهال خونی، در یک آماده‌سازی تهیه شده از مخاط، بسیاری از گرانولوسیت‌های نوتروفیل (بیش از 90 درصد کل عناصر سلولی)، گرانولوسیت‌های ائوزینوفیل منفرد (ائوزینوفیل) و مقدار متفاوتسلول های قرمز خون؛ در آمیبیاز، عناصر سلولی کمی وجود دارد که توده اصلی آنها از سلولهای تغییر یافته با هسته پیکنوتیک و لبه باریک پروتوپلاسم تشکیل شده است. گرانولوسیت های ائوزینوفیل و کریستال های Charcot-Leiden یافت می شوند.

اشکال بافتی آمیب (Entamoeba histolytica) در یک آماده سازی بدون رنگ بی رنگ، متحرک (با کمک شبه پودی)، در حالت کشیده به 50-60 میکرون می رسد، آنها اغلب در آندوپلاسم با گلبول های قرمز و به سمت محیط یافت می شوند - هسته. وجود گلبول های قرمز در سلول، تشخیص انتامبا هیستولوتیکا از اشکال غیر بیماری زا (E. hartmani، E. coli.) را ممکن می سازد.

شکل مجرای آمیب از نظر اندازه کوچکتر (تا 20 میکرون)، غیر فعال و فاقد گلبول های قرمز است. کیست ها حتی از نظر اندازه کوچکتر هستند (10-12 میکرون)، شکل گرد، بی حرکت؛ در مراحل اولیه رشد آنها دارای 2 هسته، و هسته بالغ - 4 است. در آماده سازی های رنگ آمیزی شده با محلول لوگول، هسته آمیب ها و کیست های آنها قهوه ای روشن هستند (شکل 6).

بالانتیدیا(بالانتیدیوم کلی) مژک داران بزرگی هستند که گاه به طول 200 میکرون و قطر 50-70 میکرون می رسد، به دلیل وجود مژک متحرک و دارای منافذ دهانی (پریستوم) و مقعدی (سیتوپیگوت) هستند. در آندوپلاسم، هسته های بزرگ (ماکرونوکلئوس) و کوچک (ریزانوکلئوس)، واکوئل ها و گلبول های قرمز به دام افتاده قابل مشاهده هستند. کیست های بالانتیدیا بی حرکت، به شکل گرد، به قطر 50-60 میکرومتر، دارای یک پوسته مدار دوگانه و حاوی ماکرونوکلئوزها و واکوئل ها در داخل هستند (شکل 7).

بررسی باکتریولوژیک مدفوع برای اسهال خونی باکتریایی بهتر است بلافاصله پس از اجابت مزاج انجام شود و مواد (مخاط و چرک) باید از آخرین قسمت های مدفوع گرفته شود. ماده آزمایش با یک حلقه روی ظروف پتری با محیط های انتخابی (پلوسکیروا، پلوسکیروا + کلرامفنیکل، لوین) تلقیح می شود و به مدت 18 تا 24 ساعت در ترموستات در دمای 37+ درجه سانتی گراد قرار می گیرد. روز بعد، مشکوک (بی رنگ) کلنی ها روی محیط Ressel زیر کشت می شوند و لوله های آزمایش را به مدت یک روز در یک ترموستات در دمای +370 درجه سانتیگراد قرار می دهند. در روز سوم پس از دریافت کشت خالص، اسمیر برای میکروسکوپ و مطالعه تحرک آماده می شود (شیگلا بی حرکت است). یک واکنش آگلوتیناسیون روی شیشه با سرم‌های نوع خاص انجام می‌شود، ابتدا یک واکنش نشان‌دهنده با سرم‌ها در برابر انواع غالب در منطقه، و سپس گسترش می‌یابد و روی ردیف «متنوع» تلقیح می‌شود تا مشخص شود. خواص بیوشیمیاییفرهنگ انتخاب شده

عوامل ایجاد کننده اسهال خونی لاکتوز و ساکارز را تخمیر نمی کنند (به جز Sonne)، گلوکز را تجزیه نمی کنند (به اسید) و سولفید هیدروژن را تشکیل نمی دهند.

پاسخ نهایی در معاینه باکتریولوژیک در روز پنجم داده می شود. گاهی اوقات سویه های آتیپیک پاتوژن جدا می شوند، کشت هایی که چسبندگی پذیری خود را از دست داده اند و دارای ویژگی های دیگر هستند. در چنین مواردی، تحقیقات در دوره های طولانی تری ادامه می یابد.

همچنین روش‌های باکتریولوژیک تسریع‌شده وجود دارد - کشت مجدد کلنی‌های مشکوک از ظروف پتری 20-18 ساعت از شروع مطالعه در 2 لوله با محیط Ressel's (آگار اریب با 1٪ لاکتوز و 0.1٪ گلوکز - در یک و 1٪ ساکارز و 0.1٪). مانیتول - در دیگری). پس از 4 ساعت، رشد کلنی ها ممکن است ظاهر شود، که از آنها اسمیر تهیه می شود، با گرم رنگ آمیزی می شود، تحرک مورد مطالعه قرار می گیرد و یک واکنش آگلوتیناسیون تقریبی با سرم ها علیه شایع ترین عوامل بیماری زا در منطقه انجام می شود. بنابراین، در حال حاضر در روز دوم می توان یک پاسخ اولیه داد. پاسخ نهایی در روز سوم پس از در نظر گرفتن نتایج کاشت در ردیف "تنوع" و واکنش آگلوتیناسیون دقیق داده می شود.

میزان تلقیح پاتوژن های اسهال خونی همیشه یکسان نیست؛ این به عوامل زیادی بستگی دارد - روش جمع آوری مواد برای تحقیق، کیفیت محیط و دلایل دیگر، که یکی از آنها تعداد پاتوژن ها در واحد حجم مدفوع است. ثابت شده است که پاتوژن های اسهال خونی در مواردی کاشته می شوند که یک گرم مدفوع حاوی حداقل صدها میلیون اجسام میکروبی باشد. که در در موارد نادرجداسازی عامل اسهال خونی از خون امکان پذیر است.

در حضور میکروسکوپ فلورسنت و سرم های اختصاصی با فلوروکروم، روش فلورسانس مستقیم آنتی بادی ها به دانش آموزان نشان داده می شود.

همچنین می توان با سرم خون بیمار و آزمایشات تشخیصی واکنش آگلوتیناسیون انجام داد، اما تیتر آنتی بادی در بیماران مبتلا به اسهال خونی کم است و علاوه بر این، پدیده های پاراآگلوتیناسیون نیز شایع است که به دست آوردن آن را دشوار می کند. نتایج قابل اعتماد. واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم (IRHA) با تشخیص استاندارد گلبول قرمز حساس تر است. با روش کمکیاین مطالعه یک تست آلرژی داخل جلدی با دیسانترین طبق گفته D. A. Tsuverkalov است که پس از 24 ساعت با توجه به اندازه پاپول حاصل در نظر گرفته می شود.

راهنمای دانش آموزان درس عملی شماره 28.

موضوع درس:

هدف: مطالعه روش های تشخیص میکروبیولوژیک، درمان اتیوتروپیک و پیشگیری از شیگلوزیس.

ماژول 2 . میکروبیولوژی ویژه، بالینی و محیطی.

مبحث 5: روش های تشخیص میکروبیولوژیک اسهال خونی

مرتبط بودن موضوع:شیگلوزیس گسترده است و در کشورهایی با سطح فرهنگی بهداشتی پایین و شیوع بالای تغذیه ناکافی و بی کیفیت، یک مشکل جدی ایجاد می کند. در کشورهای در حال توسعه، گسترش عفونت توسط بهداشت نامناسب، بهداشت شخصی ضعیف، ازدحام بیش از حد و نسبت زیادی از کودکان در میان جمعیت تسهیل می‌شود. در اوکراین، شیوع شیگلوز در گروه های بسته در پس زمینه شایع تر است سطح پایینبهداشت و بهداشت، به عنوان مثال در مهدکودک ها و مهدکودک ها، در قایق های توریستی، در کلینیک های روانپزشکی یا پناهگاه های معلولان. شیگلا عامل اسهال در مسافران و گردشگران بوده است.

علت بیماری های گروهی را می توان مصرف مواد غذایی آلوده به دلیل بی توجهی کارکنان فروش ناقل شیگلا دانست. شیوع هایی در ارتباط با آب آشامیدنی وجود دارد و شنا در آب های آلوده نیز منجر به عفونت شده است. با این حال، به نظر می رسد مسیرهای انتقال غذا و آب در مقایسه با وبا و تب حصبه، که معمولاً به آن نیاز دارند، نقش کمتری در گسترش شیگلوز دارند. دوزهای بزرگعوامل بیماری زا در کشورهای در حال توسعه، که شیوع بیماری عمدتاً شخص به فرد است، ناقلین ممکن است مخزن مهم عامل عفونی باشند. در بیمارانی که داروهای ضد باکتری مصرف نکرده اند، دفع شیگلا از طریق مدفوع معمولاً به مدت 1×4 هفته ادامه می یابد، اما در بخش کمی از موارد به طور قابل توجهی بیشتر ادامه می یابد.

شیگلوز یک عفونت باکتریایی حاد روده است که توسط یکی از چهار نوع شیگلا ایجاد می شود. طیف اشکال بالینی عفونت شامل اسهال خفیف، آبکی و اسهال خونی شدید است که با درد گرفتگی شکم، تنسموس، تب و علائم مسمومیت عمومی مشخص می شود.

اتیولوژی.

جنس Shigella (به نام K. Shiga، که در سال 1898 عامل جدا شده اسهال خونی باکتریایی توسط A.V. Grigoriev را مطالعه و توصیف کرد) از خانواده Enterobacteriaceae شامل گروهی از گونه های نزدیک از باکتری ها با خواص زیر:

من. ریخت شناسی: شیگلا - چوب های کوچکبا انتهای گرد آنها با سایر نمایندگان خانواده Enterobacteriaceae در فقدان تاژک (بی حرکت) متفاوت هستند، اسپور یا کپسول ندارند و گرم منفی هستند.

II. فرهنگی: شیگلا هوازی یا بی هوازی اختیاری است. شرایط بهینه کشت: دمای 37 درجه سانتی گراد، pH 7.27.4. آنها بر روی محیط های غذایی ساده (MPA، MPB) به شکل کلنی های کوچک، براق، نیمه شفاف، خاکستری، گرد به اندازه 1.5×2 میلی متر رشد می کنند.اس فرم. استثنا Shigella Sonne است که اغلب جدا می شود و کلونی های بزرگ، صاف و ابری با لبه های دندانه دار تشکیل می دهد.آر اشکال (مستعمرات ظاهری مانند "برگ انگور" دارند). در محیط های غذایی مایع، شیگلا کدورت یکنواختی ایجاد می کند.آر تشکیل رسوب می دهد. محیط غنی‌کننده مایع، براث سلنیت است.

III. آنزیمیویژگی های اصلی بیوشیمیایی لازم برای شناسایی شیگلا هنگام جداسازی یک کشت خالص به شرح زیر است:

1. عدم تشکیل گاز در طی تخمیر گلوکز؛
2. عدم تولید سولفید هیدروژن؛
3. بدون تخمیر لاکتوز به مدت 48 ساعت.

به طور کلی، این چهار گونه بیشتر به حدود 40 سروتیپ تقسیم می شوند. با توجه به ویژگی های آنتی ژن های اصلی سوماتیک (O) و خواص بیوشیمیایی، چهار گونه یا گروه زیر متمایز می شوند: S. dysenteriae (گروه A، شامل: Grigoriev-Shigi، Stutzer-Schmitz، Large-Sachs)، S. flexneri. (گروه B)، S. boydii (گروه C) و S. sonnei (گروه D).

در رابطه با مانیتول، همه شیگلاها به دو دسته مانیتول تقسیم شونده (شیگلا فلکسنر، بوید، سون) و غیر شکافنده (شیگلا گریگوریف-شیگا، اشتوتزر-اشمیتز، لارج ساکس) تقسیم می شوند.

IV. عوامل بیماری زایی:

1. پلاسمید تهاجمتوانایی شیگلا را برای ایجاد تهاجم با انتشار و تولید مثل بین سلولی بعدی در اپیتلیوم مخاط کولون فراهم می کند.
2. تشکیل سم: شیگلا دارای اندوتوکسین لیپوپلی ساکارید است که از نظر شیمیایی و بیوشیمیایی شبیه اندوتوکسین های سایر اعضای خانواده انتروباکتریاسه است. علاوه بر این، S. dysenteriae نوع I (شیگا باسیلوس) یک اگزوتوکسین تولید می کند. از زمان کشف دومی، مشخص شده است که دارای فعالیت انتروتوکسین است و می تواند باعث ترشح روده شود، و همچنین دارای اثر سیتوتوکسیک علیه سلول های اپیتلیال روده است. فراهم می کند اثر عصبیکه در کودکان مبتلا به شیگلوز مشاهده می شود. سم شیگا با ورود به خون همراه با آسیب به اندوتلیوم زیر مخاطی، گلومرول کلیه را نیز تحت تأثیر قرار می دهد، در نتیجه، علاوه بر اسهال خونی، سندرم اورمیک همولیتیک با ایجاد نارسایی کلیوی ایجاد می شود.

V. ساختار آنتی ژنی:همه شیگلاها دارای یک آنتی ژن O سوماتیک هستند که بسته به ساختار آن به سرووارها تقسیم می شوند.

VI. مقاومت:دما 100 0 C فوراً شیگلا را می کشد. شیگلا در برابر دماهای پایین مقاوم است آب رودخانهآنها تا 3 ماه، در سبزیجات و میوه ها - تا 15 ماه دوام می آورند.در شرایط مساعد، شیگلا قابلیت تکثیر در محصولات غذایی (سالاد، وینگرت، گوشت آب پز، گوشت چرخ کرده، ماهی آب پز، شیر و محصولات لبنی، کمپوت و ژله) به ویژه شیگلا سون را دارد.

همهگیرشناسی.

1. منبع عفونت:فردی که از اشکال حاد و مزمن شیگلوز رنج می برد. ناقل باکتری

2. مسیرهای انتقال:

• درجه غذا (عمدتا برای S. sonnei)
• آبزی (عمدتا برای S. flexneri)
• تماس با خانواده (عمدتا برای S. dysenteriae)

3. دروازه ورودیعفونت خدمت می کند دستگاه گوارش.

پاتوژنز و تغییرات پاتولوژیک.

پس از مصرف، شیگلا کلونیزه می شود بخش های بالاییروده کوچک و تکثیر در آنجا، احتمالا باعث افزایش ترشح در داخل می شود مرحله اولیهعفونت ها شیگلا سپس از طریق سلول های M به زیر مخاط نفوذ می کند، جایی که توسط ماکروفاژها جذب می شود. این منجر به مرگ برخی از شیگلا می شود و در نتیجه واسطه های التهابی آزاد می شود که باعث شروع التهاب در زیر مخاط می شود. آپوپتوز فاگوسیت ها به بخش دیگری از شیگلا اجازه زنده ماندن و نفوذ به سلول های اپیتلیال مخاط را می دهد. پوسته ی مقر اصلی. شیگلا تکثیر شده و به صورت بین سلولی در داخل انتروسیت ها پخش می شود و در نتیجه فرسایش ایجاد می شود. هنگامی که شیگلا می میرد، سموم شیگا و شیگا مانند ترشح می شود که عمل آنها منجر به مسمومیت می شود. آسیب به غشای مخاطی با تورم، نکروز و خونریزی همراه است که باعث ظاهر شدن خون در مدفوع می شود. علاوه بر این، این سم بر سیستم عصبی مرکزی تأثیر می گذارد که منجر به اختلالات تغذیه ای می شود.

تظاهرات بالینی.

دامنه تظاهرات بالینی شیگلوز بسیار گسترده است، از اسهال خفیف تا اسهال خونی شدید همراه با درد گرفتگی شکم، تنسموس، تب و مسمومیت عمومی.

دوره نفهتگیاز چند ساعت تا 7 روز، اغلب 2-3 روز متغیر است.در ابتدا، بیماران تجربه می کنند مدفوع آبکی، تب (تا 41 درجه سانتیگراد)، درد منتشر شکم، تهوع و استفراغ. در کنار این، بیماران از درد عضلانی، لرز، کمردرد و سردرد. در روزهای آتی پس از شروع بیماری، علائم اسهال خونی ظاهر می شود: تنسموس، مدفوع مکرر، کم، خونی مخاطی. دمای بدن به تدریج کاهش می یابد، درد می تواند در ربع تحتانی شکم موضعی شود. شدت اسهال در اواخر هفته اول بیماری به حداکثر خود می رسد. اسهال خونی همراه با مدفوع خونی شایع تر است و در بیماری ناشی از آن زودتر ظاهر می شود S. dysenteriae نوع I نسبت به سایر اشکال شیگلوزیس.

برای شیگلوز Sonne دوره خفیف تر بیماری مشخص است (نوعی معده روده یا گاستروآنتروکولیتیک). دوره تب کوتاهتر است، علائم مسمومیت کوتاه مدت است و تغییرات مخرب در مخاط روده معمولی نیست.

شیگلوز فلکسنراساساً دو نوع دوره بالینی مشخص است - گاستروانتروکولیتیک و کولیت.

عوارض خارج روده ای در شیگلوزنادر:

1. یکی از عوارض شیگلوز می تواند ایجاد دیس بیوز روده باشد.
2. همراه با سردرد، علائم مننژیت و تشنج نیز ممکن است رخ دهد.
3. نوروپاتی محیطی در عفونت های S. dysenteriae نوع I و سندرم گیلن باره (پلی نوریت) در طی شیوع گاستروانتریت S. boydii گزارش شده است.
4. به استثنای کودکانی که از دیستروفی رنج می برند، انتشار هماتوژن پاتوژن نسبتا نادر است؛ مواردی از آبسه شیگلوزیس و مننژیت نیز شرح داده شده است.
5. با شیگلوز، ایجاد سندرم رایتر با آرتریت، ورم ملتحمه استریل و اورتریت امکان پذیر است؛ این معمولاً 1-4 هفته پس از شروع اسهال در بیماران رخ می دهد.
6. در کودکان، شیگلوز همراه با سندرم همولیتیک-اورمیک، اغلب همراه با واکنش های مشابه لوسمی، کولیت شدید و گردش خون اندوتوکسین است، اما باکتریمی معمولاً تشخیص داده نمی شود.
7. به ندرت، کراتوکونژونکتیویت چرکی توسط شیگلا ایجاد می شود که در نتیجه خود عفونت با انگشتان آلوده وارد چشم شده است.
8. شوک هیپوولمیک و سندرم انعقاد داخل عروقی منتشر.
9. پریتونیت، گانگرن روده، خونریزی روده.

مصونیت: انسان در برابر عفونت شیگلا مقاومت طبیعی دارد. بعد از بیماری گذشتهایمنی پایدار نیست و پس از شیگلوز، Sonne عملاً وجود ندارد. در صورت بیماری ناشی از Shigella Grigoriev Shiga، ایمنی ضد سمی پایدارتری ایجاد می شود. در محافظت در برابر عفونت، نقش اصلی مربوط به ترشح است IgA جلوگیری از چسبندگی و فعالیت وابسته به آنتی بادی سیتوتوکسیک لنفوسیت های داخل اپیتلیال، که همراه با ترشح IgA از بین بردن شیگلا

تست های تشخیصی و آزمایشگاهی.

هدف از مطالعه: تشخیص و شناسایی شیگلا برای تشخیص. شناسایی ناقلان باکتری؛ تشخیص شیگلا در محصولات غذایی

مواد برای تحقیق: مدفوع، مواد مقطعی، محصولات غذایی.

روش های تشخیصی:میکروبیولوژیک (باکتریولوژیک، میکروسکوپی (شوم آور)؛ سرولوژیکی، بیولوژیکی، تست آلرژی.

پیشرفت مطالعه:

1 روز مطالعه:کشت باید از مدفوع تازه دفع شده یا با استفاده از سواب رکتوم (لوله رکتوم) انجام شود. در صورت فراهم نبودن شرایط مناسب، مواد باید در محیط حمل و نقل قرار داده شوند. برای انجام این کار، از آگار روده (مک کانکی یا شیگلا-سالمونلا محیط)، آگار زایلوز-لیزین دئوکسی کولات با انتخاب متوسط، KLD و براث مواد مغذی (براث سلنیت) استفاده کنید. اگر زمان بین جمع آوری و تلقیح بیش از 2 ساعت باشد، باید از محلول های نگهدارنده استفاده کرد: 20% آبگوشت صفرا، محیط ترکیبی کافمن.

• مدفوع موجود در مخلوط گلیسیرین امولسیون می شود، یک قطره از امولسیون روی محیط ریخته می شود و با یک کاردک به داخل آن مالیده می شود. محیط های افتراقی برای شیگلا Ploskirev، Endo و EMS (ائوزین متیلن بلو آگار) هستند. محیط Ploskirev (محیط شامل: MPA، لاکتوز، نمک اسیدهای صفراویو شاخص سبز درخشان) نیز یک محیط انتخابی برای شیگلا است، زیرا رشد اشریشیا کلی را مهار می کند.
• به موازات کاشت مستقیم مواد جمع آوری شدهتلقیح شده بر روی آبگوشت سلنیت محیط غنی شده.
• همه محصولات در یک ترموستات قرار می گیرند.

روز دوم مطالعه:

• ظروف از ترموستات خارج می شوند، کلنی های مشکوک بر روی محیط Ressel (محیط غذایی که شامل: آگار-آگار، اندیکاتور اندره، 1٪ لاکتوز، 0.1٪ گلوکز) و مانیتول غربالگری می شوند. تلقیح با ضربه های روی یک سطح اریب و تزریق به ستون آگار انجام می شود. محیط Ressel تلقیح شده به مدت 18-24 ساعت در ترموستات قرار می گیرد (همزمان بذردهی مجدد از محیط سلنیت در محیط های تشخیص افتراقی انجام می شود).
• اسمیر ساخته می شود (رنگ آمیزی گرم) و زیر میکروسکوپ بررسی می شود.
• آماده سازی ها به صورت قطره "آویزان" یا "له شده" تهیه می شوند.
• ایجاد RA آزمایشی با سرم های شیگلای تشخیصی چند ظرفیتی.
• کاشت کلنی های مشکوک بر روی شیب های آگار.

روز سوم مطالعه:

• میکروسکوپ مواد از شیب های آگار.
• کشت هایی که لاکتوز را روی محیط Ressel تخمیر نکرده اند، مورد مطالعه بیشتر قرار می گیرند: اسمیر ساخته می شود (رنگ آمیزی گرم)، و خلوص کشت بررسی می شود. در حضور میله های گرم منفی، تلقیح بر روی محیط هیس، آبگوشت با کاغذهای شاخص (برای تشخیص ایندول و سولفید هیدروژن) و شیر لیتموس انجام می شود.
• محیط های تلقیح شده به مدت 18-24 ساعت در ترموستات قرار می گیرند.

روز چهارم مطالعه:

• حسابداری برای یک "ردیف متنوع" کوتاه.
• کشت های مشکوک به خواص آنزیمی و فرهنگی در رابطه با شیگلا در معرض شناسایی سرولوژیکی قرار می گیرند. بیان RA روی شیشه (سرم های تشخیصی معمولی و گروهی). راه اندازی RA مستقر شده

مانند روش های تسریع شدهبرای شیگلوز استفاده می شودمیکروسکوپ فلورسانسو نمونه بیولوژیکی(معرفی سویه های بدخیم شیگلا به کیسه ملتحمه (زیر پلک پایین) خوکچه هندی؛ ورم ملتحمه تا پایان روز اول ایجاد می شود).

تست آلرژی Tsuverkalovتست آلرژی داخل جلدی با دیسانترین (تزریق 0.1 میلی لیتر دیسانترین در واکنش مثبت ساعد در صورت انفیلتراسیون و پرخونی). تشخیص آلرژی در حال حاضر عملا استفاده نمی شود. آزمایش Tsurvekalov اختصاصی نیست، واکنش‌های مثبت نه تنها برای شیگلوز، بلکه برای سالمونلوز، اشریشیوز، یرسینیوز و غیره OKI و گاهی اوقات در افراد سالم نیز ثبت می‌شود.

درمان و پیشگیری.برای درمان و پیشگیری با توجه به نشانه های اپیدمیولوژیک از باکتریوفاژ استفاده می شود تجویز خوراکیآنتی بیوتیک پس از تعیین آنتی بیوگرام; در صورت دیس باکتریوز، آماده سازی پروبیوتیک برای اصلاح میکرو فلور. برای جبران از دست دادن مایعات و الکترولیت ها، محلول گلوکز-الکترولیت را داخل آن قرار دهید.

اهداف خاص:

خواص بیولوژیکی پاتوژن های شیگلوز را تفسیر کنید.

با طبقه بندی شیگلا آشنا شوید.

یاد بگیرید که الگوهای بیماری زایی فرآیند عفونی ناشی از شیگلا را تفسیر کنید.

تعیین روش های تشخیص میکروبیولوژیکی، درمان اتیوتروپیک و پیشگیری از شیگلوز.

قادر بودن به:

• مواد مورد آزمایش را روی محیط های غذایی تلقیح کنید.
  • اسمیر و لکه گرم تهیه کنید.
  • انجام میکروسکوپ آماده سازی با استفاده از میکروسکوپ غوطه وری.
  • ویژگی های مورفولوژیکی، فرهنگی، آنزیمی شیگلا را تجزیه و تحلیل کنید.

سوالات تئوری:

1. ویژگی های پاتوژن های شیگلوزیس. خواص بیولوژیکی

2. طبقه بندی شیگلا. اصول زیربنای آن.

3. اپیدمیولوژی، پاتوژنز و ویژگی های بالینیشیگلوزیس

4. تشخیص آزمایشگاهی.

5. اصول درمان و پیشگیری از شیگلوز.

کارهای عملی انجام شده در کلاس:

1. میکروسکوپ آماده سازی های نمایشی از کشت های خالص پاتوژن های شیگلوزیس.

2. کار بر روی تشخیص باکتریولوژیک شیگلوز: مطالعه کشت های مدفوع در محیط Ploskirev.

3. خرده‌فرهنگ کلنی‌های مشکوک روی محیط Ressel و MPB برای تعیین تشکیل ایندول و H 2 اس.

4. ترسیم آماده سازی های نمایشی و نمودارهای تشخیصی میکروبیولوژیکی شیگلوز در پروتکل درس.

5. تهیه پروتکل.

ادبیات:

1. Korotyaev A.I.، Babichev S.A.، میکروبیولوژی پزشکی، ایمونولوژی و ویروس شناسی / کتاب درسی برای دانشگاه های پزشکی، سنت پترزبورگ "ادبیات ویژه"، 1998. - 592 ص.

2. تیماکوف V.D.، Levashev V.S.، Borisov L.B. میکروبیولوژی / کتاب درسی. - ویرایش دوم، بازبینی شده. و اضافی - م.: پزشکی، 1983، - 512 ص.

3. پیاتکین ک.د. Krivoshein Yu.S. میکروب شناسی با ویروس شناسی و ایمونولوژی.- کیف: مدرسه V i scha، 1992. - 431 p.

4. میکروبیولوژی پزشکی / ویرایش شده توسط V.I. پوکروفسکی.-M.:GEOTAR-MED، 2001.-768p.

5. راهنمای به کلاس های عملیدر میکروبیولوژی، ایمونولوژی و ویروس شناسی. اد. M.P. زیکوا. م. "پزشکی". 1977. 288 ص.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. میکروبیولوژی. /اد. F.K. چرکس. م.: پزشکی، 1986. 512 ص.

7. یادداشت های سخنرانی.

ادبیات اضافی:

1. Makiyarov K.A. میکروبیولوژی، ویروس شناسی و ایمونولوژی. آلما آتا، «قزاقستان»، 1974. 372 ص.

2. تیتوف ام.و. بیماری های عفونی - ک.، 1995. 321 ص.

3. Shuvalova E.P. بیماری های عفونی. - م.: پزشکی، 1990. - 559 ص.

4. BME، T. 1، 2، 7.

5. پاولوویچ اس.ا. میکروبیولوژی پزشکی در نمودارها: کتاب درسی. کمک هزینه پزشکی Inst. Mn.: بالاتر. مدرسه، 1986. 255 ص.

مختصر دستورالعمل هابرای کار در یک درس عملی

در ابتدای درس میزان آمادگی دانش آموزان برای درس بررسی می شود.

کار مستقل شامل مطالعه طبقه بندی شیگلا، تجزیه و تحلیل طرح بیماری زایی و علائم بالینیشیگلوزیس بررسی روشهای تشخیص آزمایشگاهی شیگلوزیس. دانش آموزان بیومواد را روی محیط های غذایی تلقیح می کنند. سپس میکرواسلایدها تهیه شده، با گرم رنگ آمیزی می شوند، میکروسکوپ انجام می شود، میکرواسلایدها ترسیم می شوند و توضیحات لازم داده می شود. کار مستقل همچنین شامل میکروسکوپ آماده سازی نمایش و ترسیم آنها در پروتکل درس است.

در پایان درس، کنترل تست و تجزیه و تحلیل نتایج نهایی کار مستقل هر دانش آموز انجام می شود.

نقشه فن آوری برای برگزاری یک درس عملی.

p/p	مراحل	زمان در دقیقه	راه های یادگیری	تجهیزات	محل
	بررسی و تصحیح سطح اولیه آمادگی برای درس		وظایف تستخط پایه	جداول، اطلس	اتاق مطالعه
	کار مستقل		نمودار ساختار منطقی	میکروسکوپ غوطه‌وری، رنگ‌ها، اسلایدهای شیشه‌ای، حلقه‌های باکتریولوژیک، محیط‌های مغذی، محیط Ploskirev، Media Ressels، "Hiss variegated series"
	خود بررسیو تصحیح تسلط مادی		وظایف یادگیری هدفمند
	کنترل تست		تست ها
	تجزیه و تحلیل نتایج کار

وظایف آموزشی هدفمند:

1. مدفوع حاوی موکوس و چرک از یک کودک مبتلا به ACI گرفته شد (جمع آوری مدفوع با استفاده از لوله مقعدی انجام شد). چه روش تشخیصی اکسپرس باید استفاده شود؟

آ. الایزا

ب. تپه دریایی.

سی. RA

D. RSK.

E. RIA.

1. عامل اسهال خونی از یک کودک بیمار مبتلا به عفونت حاد روده ای جدا شد. کدام ویژگی های مورفولوژیکیویژگی پاتوژن؟

آ . میله غیر متحرک گرم منفی.

ب . میله متحرک گرم مثبت.

سی . یک کپسول روی یک محیط غذایی تشکیل می دهد.

D . در محیط خارجی هاگ تشکیل می دهد.

E . استرپتوباسیل های گرم مثبت

3-بیماری که سه روز پیش مریض شده و از دمای 38 درجه سانتیگراد، درد شکم، مکرر شکایت دارد. مدفوع شلوجود خون در مدفوع توسط پزشک تشخیص بالینی داده شد اسهال خونی باسیلی. استفاده از چه روش تشخیصی میکروبیولوژیکی در این مورد توصیه می شود و برای تایید تشخیص چه موادی باید از بیمار گرفته شود؟

A. باکتریوسکوپی کال.

B. باکتریولوژیک کال.

ج. خون باکتریوسکوپی.

د. ادرار باکتریولوژیک.

E. خون سرولوژیکی.

4. شیگلا سون از مدفوع بیمار جدا شد. چه باید انجام شود تحقیقات اضافیبرای تعیین منبع عفونت؟

آ . تایپ فاژی کشت خالص جدا شده را انجام دهید.

ب . آنتی بیوگرام را تعیین کنید.

سی . یک واکنش بارش را تنظیم کنید.

D . واکنش تثبیت مکمل را انجام دهید.

E . یک واکنش خنثی سازی را تنظیم کنید.

5. در میان گروهی از گردشگران (27 نفر) که از آب دریاچه برای نوشیدن استفاده می کردند، پس از دو روز، 7 نفر دچار علائم شدند. اسهال حاد. چه موادی برای تعیین علت مورد نیاز است؟ از این بیماریآیا باید به آزمایشگاه باکتریولوژیک فرستاده شود؟

الف- آب، مدفوع بیماران.

ب- آب، خون بیماران.

ج. محصولات غذایی.

D. دارم ادرار می کنم

E. خلط.

6. اشکال مهم روش تشخیصی میکروسکوپی عفونت حاد روده ای، کمبود محتوای اطلاعاتی آن به دلیل هویت مورفولوژیکی باکتری های خانواده است.انتروباکتریاسه . چه چیزی این روش را آموزنده تر می کند؟

آ . رادیوایمونواسی

ب . واکنش کومبز

سی . سنجش ایمونوسوربنت مرتبط

D . واکنش اپسونیزاسیون

E . واکنش ایمونوفلورسانس.

7. یک بیمار 29 ساله با حملات استفراغ، اسهال و تنسموس در بیمارستان بستری شد. مدفوع با تکه های مخاط و مقداری خون. یک مطالعه باکتریولوژیکی بر روی باکتری های مستعمرات روی محیط Ploskirev میله های بی حرکت و گرم منفی را نشان داد که لاکتوز را تخمیر نمی کنند. عامل ایجاد کننده فرآیند عفونی را نام ببرید.

آ. شیگلا فلکسنر.

ب. ویبریو التور.

سی ای کولی.

D. Proteus mirabilis.

E. سالمونلا انتریتیدیس

8. کاهو به آزمایشگاه میکروبیولوژی تحویل داده شد که احتمالاً علت حاد است عفونت روده. از چه محیط های غذایی برای کاشت اولیه استفاده می شود؟

آ . زرده نمک آگار، MPB.

ب. MPA، MPB.

سی . آبگوشت سلنیت، اندو، پلوسکیروا.

D . آبگوشت جگر، روکس متوسط.

E . آگار خون، آگار قلیایی.

9. طی یک مطالعه میکروبیولوژیکی روی گوشت چرخ کرده، باکتری های متعلق به جنس شیگلا جدا شدند. بررسی چه خواصی از میکروب ها به این نتیجه رسید؟

آ . فرهنگی، رنگارنگ.

ب . آنتی ژنیک، فرهنگی.

سی . ساکارولیتیک، پروتئولیتیک.

D . آنتی ژنیک، ایمنی زا.

E . مورفولوژیک، آنتی ژنیک.

10. وقتی آزمایش میکروسکوپیاستفراغ گرفته شده از یک بیمار با علائم عفونت حاد روده، چوب های بی حرکت پیدا شد. در چه اسمیر یا آماده سازی می توان تحرک باکتری ها را بررسی کرد؟

آ . در یک اسمیر رنگ آمیزی گرم.

ب . در اسمیر رنگ آمیزی شده بر اساس Ziehl-Neelsen.

سی . آماده سازی حاوی یک "قطره ضخیم" است.

D . در یک اسمیر رنگ آمیزی شده به گفته نایسر.

E . آماده سازی حاوی "قطره خرد شده" است.

الگوریتم کار آزمایشگاهی:

1. بررسی خواص بیولوژیکی شیگلا.

2. آشنایی با طبقه بندی شیگلا.

3. تجزیه و تحلیل طرح تظاهرات پاتوژنتیک و بالینی شیگلوز.

4. بررسی روش های تشخیص آزمایشگاهی شیگلوز.

5. مطالعه اصول اولیه درمان و پیشگیری از شیگلوز.

1. تهیه فرآورده های ثابت از کشت باکتری.
2. رنگ آمیزی میکرواسلایدهابا توجه به گرام
3. میکروسکوپ میکرو اسلایدهابا با استفاده از میکروسکوپ غوطه وری، تجزیه و تحلیل و ثبت آنها در پروتکل درس.
4. Mi کروسکوپی و تجزیه و تحلیل آماده‌سازی‌های نمایشی از کشت‌های خالص شیگلا.
5. ترسیم آماده سازی های نمایشی و نمودارهای تشخیصی آزمایشگاهی شیگلوز در پروتکل.
6. تنظیم پروتکل.

اسهال خونی یک عفونت دردناک همراه با اسهال همراه با ترشح خون، چرک و مخاط، درد شکم و علائم مسمومیت عمومی است که با ضایعه غالب روده بزرگ، ناشی از انواع متفاوتبه نوعی شیگلا(باکتری های اسهال خونی).

پاتوژن های اسهال خونی متعلق به بخش گراسیلیکوت، خانواده انتروباکتریاسه، خانواده شیگلا.
اسهال خونی ، تماس گرفت شیگلا دیسانتری، شدیدتر از بیماری های ناشی از سایر شیگلا است، زیرا علاوه بر اندوتوکسین که باعث التهاب روده می شود، این نوع باکتری یک اگزوتوکسین قوی تولید می کند که به عنوان نوروتوکسین عمل می کند.

اسهال خونی باکتریایی شیگلوز یا شیگلوز یک بیماری عفونی است که توسط باکتری های این جنس ایجاد می شود شیگلا,

اسهال خونیمورفولوژی و خواص رنگی.
شیگلا میله های گرم منفی با انتهای گرد، 2-3 میکرون طول، 0.5-7 میکرون ضخامت، تشکیل اسپور، فاقد تاژک و بی حرکت هستند. در بسیاری از سویه ها پرزهایی از نوع عمومی و جنس پیلی یافت می شود. برخی از شیگلا دارای میکروکپسول هستند.

اسهال خونی کشت.
باسیل های اسهال خونی بی هوازی اختیاری هستند. آنها نسبت به محیط های غذایی بی نیاز هستند و در دمای 37 درجه سانتی گراد و pH 7.2-7.4 به خوبی رشد می کنند. در رسانه های متراکم آنها کلنی های شفاف کوچک را تشکیل می دهند، در محیط های مایع - کدورت منتشر. آبگوشت سلنیت اغلب به عنوان یک محیط غنی‌کننده برای کشت شیگلا استفاده می‌شود.

اسهال خونیفعالیت آنزیمی
شیگلا نسبت به سایر انتروباکتری ها فعالیت آنزیمی کمتری دارد. آنها کربوهیدرات ها را تخمیر می کنند و اسید تشکیل می دهند. ویژگی مهمی که به شیگلا امکان تمایز را می دهد، ارتباط آنها با مانیتول است: S. dysenteriae مانیتول را تخمیر نمی کند، نمایندگان گروه های B، C، D مانیتول مثبت هستند. فعال ترین آنها از نظر بیوشیمیایی S. sonnei است که می تواند به آرامی (در عرض 2 روز) لاکتوز را تخمیر کند. بر اساس رابطه S. sonnei به رامنوز، زایلوز و مالتوز، 7 نوع بیوشیمیایی متمایز می شود.

اسهال خونیساختار آنتی ژنیک
شیگلا دارای یک آنتی ژن O است، ناهمگونی آن امکان تشخیص سرووارها و زیرسرووارها را در گروه ها فراهم می کند. برخی از اعضای این جنس آنتی ژن K را نشان می دهند.

اسهال خونیعوامل بیماری زایی
همه باسیل‌های اسهال خونی اندوتوکسین را تشکیل می‌دهند که دارای اثر آنتروتروپیک، نوروتروپیک و تب‌زا است. علاوه بر این، S. dysenteriae - Shigella Grigoriev-Shiga - یک اگزوتوکسین ترشح می کند که دارای اثرات انتروتوکسیک، نوروتوکسیک، سیتوتوکسیک و نفروتوکسیک بر بدن است که بر این اساس متابولیسم آب نمک و فعالیت سیستم عصبی مرکزی را مختل می کند و منجر به مرگ می شود. سلول های اپیتلیال روده های کولون، آسیب به لوله های کلیوی.

تشکیل یک اگزوتوکسین با دوره شدیدتر اسهال خونی ناشی از این پاتوژن همراه است. اگزوتوکسین می تواند توسط گونه های دیگر شیگلا نیز تولید شود. فاکتور نفوذپذیری RF کشف شده است که باعث آسیب به رگ های خونی می شود. عوامل بیماری زایی نیز شامل می شود پروتئین تهاجمی، تسهیل نفوذ آنها به سلول های اپیتلیال، و همچنین پروتئین های پیلی و غشای خارجی مسئول چسبندگی، و یک میکروکپسول.

اسهال خونیمقاومت.
شیگلا مقاومت کمی دارد عوامل مختلف. S. sonnei که در آب لوله کشیتا 2.5 ماه دوام می آورند؛ در آب های آزاد تا 1.5 ماه زنده می مانند. S. sonnei نه تنها می تواند برای مدت طولانی زنده بماند، بلکه در محصولات، به ویژه محصولات لبنی نیز تولید مثل می کند.

اسهال خونیهمهگیرشناسی.
اسهال خونی یک عفونت آنتروپونوز است: منشا آن افراد بیمار و ناقلین است. مکانیسم انتقال عفونت ها مدفوعی-دهانی است. راه های انتقال می تواند متفاوت باشد - با اسهال خونی Sonne مسیر غذا غالب است، با اسهال خونی Flexner - آب، برای اسهال خونی Grigoriev-Shiga مسیر تماس و خانواده معمول است.

اسهال خونی در بسیاری از کشورهای جهان یافت می شود. که در سال های گذشتهافزایش شدید در بروز این عفونت وجود دارد. افراد در هر سنی به این بیماری مبتلا می شوند، اما کودکان 1 تا 3 ساله بیشتر مستعد ابتلا به اسهال خونی هستند. تعداد بیماران در ماه ژوئیه - سپتامبر افزایش می یابد. انواع مختلف شیگلا به طور نابرابر در مناطق مختلف توزیع می شوند.

اسهال خونیپاتوژنز.
شیگلا از طریق دهان وارد دستگاه گوارش شده و به روده بزرگ می رسد. پاتوژن ها با داشتن تروپیسم برای اپیتلیوم خود، با کمک پیلی و پروتئین های غشای خارجی به سلول ها متصل می شوند. به لطف عامل مهاجم، آنها به داخل سلول ها نفوذ می کنند، در آنجا تکثیر می شوند و در نتیجه سلول ها می میرند.

زخم‌هایی در دیواره روده ایجاد می‌شود که در جای آن زخم‌ها تشکیل می‌شوند. اندوتوکسین که با از بین رفتن باکتری ها ترشح می شود، باعث مسمومیت عمومی، افزایش تحرک روده و اسهال می شود. خون از زخم های حاصل وارد مدفوع می شود. در نتیجه عمل اگزوتوکسین، اختلال بارزتر متابولیسم آب نمک، فعالیت سیستم عصبی مرکزی و آسیب کلیه مشاهده می شود.

اسهال خونیتصویر بالینی.
دوره کمون از 1 تا 5 روز طول می کشد. این بیماری به طور حاد با افزایش دمای بدن به 38-39 درجه سانتیگراد شروع می شود، درد شکم و اسهال ظاهر می شود. مخلوطی از خون و مخاط در مدفوع وجود دارد. اسهال خونی گریگوریف-شیگا شدیدترین است.

اسهال خونیمصونیت.
پس از یک بیماری، ایمنی به گونه خاص و نوع خاص است. کوتاه مدت و شکننده است. اغلب این بیماری مزمن می شود. بیماری های مکرر حتی در یک فصل مشاهده شده است.

اسهال خونیآزمایشگاه تشخیص
مدفوع بیمار به عنوان ماده آزمایش گرفته می شود. اساس تشخیص روش باکتریولوژیکی است که به فرد امکان شناسایی پاتوژن، تعیین حساسیت آن به آنتی بیوتیک ها و انجام شناسایی درون گونه ای (تعیین نوع بیوشیمیایی، سرووار یا colicinogenovar) را می دهد. در صورت طولانی شدن دوره اسهال خونی، می توان از آن به عنوان کمکی استفاده کرد روش سرولوژیکیکه شامل تشخیص RA، RNGA است (تشخیص را می توان با افزایش تیتر آنتی بادی در هنگام تکرار واکنش تایید کرد).

اسهال خونیرفتار.
بیماران مبتلا به اشکال شدید اسهال خونی Grigoriev-Shish و Flexner با آنتی بیوتیک درمان می شوند. طیف گسترده ایاقدامات با در نظر گرفتن اجباری آنتی بیوگرام، زیرا در بین شیگلا اغلب نه تنها اشکال مقاوم به آنتی بیوتیک، بلکه به آنتی بیوتیک نیز وجود دارد. برای اشکال خفیف اسهال خونی، از آنتی بیوتیک ها استفاده نمی شود، زیرا استفاده از آنها منجر به دیس باکتریوز می شود که بیماری را بدتر می کند. فرآیند پاتولوژیکو اختلال در فرآیندهای بازسازی در غشای مخاطی روده بزرگ.

اسهال خونیجلوگیری.
تنها دارویی که می تواند در کانون های عفونت برای اهداف پیشگیری استفاده شود، باکتریوفاژ اسهال خونی است. پیشگیری غیر اختصاصی نقش اصلی را ایفا می کند.

پیشگیری غیراختصاصی شامل تنظیم بهداشتی و بهداشتی مناسب زندگی مردم، تامین آب و غذای با کیفیت برای آنهاست.

در محیط بیمار باید اقداماتی برای جلوگیری از انتشار عامل بیماری زا انجام شود.

میکروبیولوژی اسهال خونی

اسهال خونی یک بیماری عفونی است که با مسمومیت عمومی بدن، اسهال و ضایعه عجیب غشای مخاطی روده بزرگ مشخص می شود. یکی از شایع ترین بیماری های حاد روده ای در جهان است. این بیماری از زمان های قدیم تحت نام "اسهال خونی" شناخته شده است، اما ماهیت آن متفاوت است. در سال 1875، دانشمند روسی F.A. Lesh یک آمیب را از یک بیمار مبتلا به اسهال خونی جدا کرد. انتامبا هیستولیتیکا، در 15 سال بعد استقلال این بیماری ایجاد شد که نام آمیب برای آن حفظ شد.

عوامل ایجاد کننده اسهال خونی گروه بزرگی از باکتری های مشابه بیولوژیکی هستند که در جنس یکسان هستند. شیگلا. پاتوژن اولین بار در سال 1888 توسط A. Chantemes و F. Vidal کشف شد. در سال 1891 توسط A.V. Grigoriev توصیف شد و در سال 1898 K. Shiga با استفاده از سرم به دست آمده از یک بیمار، عامل بیماری زا را در 34 بیمار مبتلا به اسهال خونی شناسایی کرد و در نهایت نقش سبب شناختی این باکتری را ثابت کرد. با این حال، در سال های بعدی، عوامل ایجاد کننده دیگر اسهال خونی کشف شد: در سال 1900 - توسط S. Flexner، در سال 1915 - توسط K. Sonne، در سال 1917 - توسط K. Stutzer و K. Schmitz، در سال 1932 - توسط J. Boyd. در 1934 - D. Large، در 1943 - A. Sax. جنس در حال حاضر شیگلاشامل بیش از 40 سروتیپ است. همه آنها میله های گرم منفی کوتاه و غیر متحرک هستند که هاگ یا کپسول تشکیل نمی دهند، که به خوبی در محیط های غذایی معمولی رشد می کنند و در محیط های گرسنگی با سیترات یا مالونات به عنوان تنها منبع کربن رشد نمی کنند. H 2 S تشکیل نمی دهند، اوره آز ندارند. واکنش Voges-Proskauer منفی است. گلوکز و برخی دیگر از کربوهیدرات ها برای تشکیل اسید بدون گاز تخمیر می شوند (به جز برخی از بیوتیپ ها) شیگلا فلکسنر: اس. منچسترو اس نیوکاسل) به عنوان یک قاعده، آنها لاکتوز (به استثنای شیگلا سون)، آدونیتول، سالیسین و اینوزیتول را تخمیر نمی کنند، ژلاتین را مایع نمی کنند، معمولاً کاتالاز تشکیل می دهند و لیزین دکربوکسیلاز و فنیل آلانین دآمیناز ندارند. محتوای G + C در DNA 49-53 مول است. شیگلا بی هوازی اختیاری است، دمای مطلوب برای رشد 37 درجه سانتیگراد است، آنها در دمای بالاتر از 45 درجه سانتیگراد رشد نمی کنند، pH مطلوب محیط 6.7 - 7.2 است. مستعمرات در محیط های متراکم گرد، محدب، نیمه شفاف هستند؛ در صورت تفکیک، کلنی های خشن R شکل تشکیل می شوند. رشد روی MPB به شکل کدورت یکنواخت، اشکال خشن یک رسوب را تشکیل می دهند. کشت‌های تازه جدا شده شیگلا سون معمولاً مستعمره‌هایی از دو نوع تشکیل می‌دهند: محدب گرد کوچک (فاز I)، مسطح بزرگ (فاز II). ماهیت کلنی به حضور (فاز I) یا عدم حضور (فاز II) یک پلاسمید با وزن مولکولی 120 MD بستگی دارد که میزان حدت Shigella Sonne را نیز تعیین می کند.

طبقه بندی بین المللی شیگلا بر اساس ویژگی های بیوشیمیایی آنها (مانیتول غیر تخمیری، مانیتول تخمیر شونده، شیگلا با تخمیر آهسته لاکتوز) و ویژگی های ساختار آنتی ژنی آنها است (جدول 37).

در شیگلا، آنتی ژن های O با ویژگی های مختلف یافت شد: مشترک در خانواده انتروباکتریاسهژنریک، گونه، گروه و نوع خاص، و همچنین آنتی ژن K. آنها آنتی ژن N ندارند.

جدول 37

طبقه بندی جنس باکتری ها شیگلا

طبقه بندی فقط آنتی ژن های O گروه و نوع خاص را در نظر می گیرد. مطابق با این خصوصیات، جنس شیگلابه 4 زیر گروه یا 4 گونه تقسیم می شود و شامل 44 سروتیپ می باشد. در زیر گروه A (نوع شیگلا دیسانتری) شامل شیگلا است که مانیتول را تخمیر نمی کند. این گونه شامل 12 سروتیپ (1-12) می باشد. هر سروتیپ آنتی ژن نوع خاص خود را دارد. اتصالات آنتی ژنی بین سروتیپ ها، و همچنین با سایر گونه های شیگلا، ضعیف بیان می شود. به زیر گروه B (نوع شیگلا فلکسنر) شامل شیگلا است که معمولاً مانیتول را تخمیر می کند. شیگلای این گونه از نظر سرولوژیکی به یکدیگر مرتبط هستند: آنها حاوی آنتی ژن های نوع خاص (I - VI) هستند که به وسیله آن به سروتیپ های (1-6) و آنتی ژن های گروهی تقسیم می شوند که در ترکیبات مختلف در هر سروتیپ یافت می شوند. که توسط آن سروتیپ ها به زیرسروتیپ ها تقسیم می شوند. علاوه بر این، این گونه شامل دو نوع آنتی ژنی است - X و Y، که آنتی ژن های معمولی ندارند؛ آنها در مجموعه ای از آنتی ژن های گروه متفاوت هستند. سروتیپ S. flexneri 6هیچ زیرسروتیپ ندارد، اما با توجه به ویژگی های تخمیر گلوکز، مانیتول و دولسیتول به 3 نوع بیوشیمیایی تقسیم می شود (جدول 38).

جدول 38

بیوتیپ ها S. flexneri 6

توجه داشته باشید. K - تخمیر تنها با تشکیل اسید. CG - تخمیر با تشکیل اسید و گاز. (–) – بدون تخمیر.

آنتی ژن لیپوپلی ساکارید O در تمام شیگلا فلکسنر حاوی آنتی ژن گروه 3، 4 به عنوان ساختار اصلی اصلی است، سنتز آن توسط یک ژن کروموزومی که در نزدیکی محل قرار دارد کنترل می شود. آنتی ژن های نوع خاص I، II، IV، V و آنتی ژن های گروه 6، 7، 8 نتیجه اصلاح آنتی ژن های 3، 4 (گلیکوزیلاسیون یا استیلاسیون) هستند و توسط ژن های پروفاژهای تبدیل کننده مربوطه، محل ادغام تعیین می شوند. که در ناحیه lac - pro کروموزوم شیگلا قرار دارد.

در دهه 80 در کشور ظاهر شد. قرن XX و یک زیرسروتیپ جدید که فراگیر شده است S. flexneri 4(IV: 7، 8) با زیرسروتیپ 4a (IV: 3، 4) و 4b (IV: 3، 4، 6) متفاوت است، برخاسته از یک نوع S. flexneri Y(IV: 3، 4) به دلیل لیزوژن شدن توسط پروفاژهای تبدیل کننده آن IV و 7، 8.

برای زیر گروه C (نوع شیگلا بویدی) شامل شیگلا است که معمولاً مانیتول را تخمیر می کند. اعضای گروه از نظر سرولوژیکی با یکدیگر متفاوت هستند. اتصالات آنتی ژنی در گونه ضعیف بیان می شود. این گونه شامل 18 سروتیپ (1 تا 18) است که هر کدام آنتی ژن نوع اصلی خود را دارند.

در زیر گروه D (نوع شیگلا سونئی) شامل شیگلا است که معمولاً مانیتول را تخمیر می کند و می تواند به آرامی (پس از 24 ساعت انکوباسیون و بعد) لاکتوز و ساکارز را تخمیر کند. چشم انداز S. sonneiشامل یک سروتیپ است، اما کلنی های فاز I و II آنتی ژن های نوع خاص خود را دارند. برای طبقه بندی درون گونه ای شیگلا سون دو روش پیشنهاد شده است:

1) تقسیم آنها به 14 نوع و زیرگروه بیوشیمیایی با توجه به توانایی آنها در تخمیر مالتوز، رامنوز و زایلوز. 2) تقسیم به انواع فاژ بر اساس حساسیت به مجموعه ای از فاژهای مربوطه.

این روش های تایپ عمدتاً اهمیت اپیدمیولوژیک دارند. علاوه بر این، Shigella Sonne و Shigella Flexner بر اساس توانایی آنها در سنتز کولیسین های خاص (colicinogenotyping) و حساسیت به کولیسین های شناخته شده (colicinotyping) برای یک هدف تایپ می شوند. برای تعیین نوع کولیسین های تولید شده توسط شیگلا، J. Abbott و R. Chenon مجموعه ای از سویه های استاندارد و شاخص شیگلا را پیشنهاد کردند و برای تعیین حساسیت شیگلا به انواع شناخته شده کولیسین، مجموعه ای از سویه های استاندارد colicinogenic P. Frederick را پیشنهاد کردند. استفاده می شود.

مقاومت.شیگلا مقاومت نسبتا بالایی در برابر عوامل محیطی دارد. آنها روی پارچه و کاغذ پنبه ای تا 30 تا 36 روز، در مدفوع خشک - تا 4 - 5 ماه، در خاک - تا 3 - 4 ماه، در آب - از 0.5 تا 3 ماه، روی میوه ها و سبزیجات زنده می مانند. - تا 2 هفته، در شیر و محصولات لبنی - تا چند هفته؛ در دمای 60 درجه سانتیگراد در 15 تا 20 دقیقه می میرند. حساس به محلول های کلرامین، کلر فعال و سایر مواد ضد عفونی کننده.

عوامل بیماری زاییمهمترین خاصیت بیولوژیکی شیگلا که مشخص کننده بیماری زایی آنهاست، توانایی حمله به سلول های اپیتلیال، تکثیر در آنها و مرگ آنها است. این اثر را می توان با استفاده از آزمایش قوز قرنیه تشخیص داد (معرفی یک حلقه از کشت شیگلا (2 تا 3 میلیارد باکتری) در زیر پلک تحتانی خوکچه هندی باعث ایجاد کراتوکونژونکتیویت سروزی-چرکی) و همچنین با آلوده کردن کشت های سلولی می شود. اثر سیتوتوکسیک) یا جنین مرغ (مرگ آنها)، یا داخل بینی در موش های سفید (توسعه پنومونی). عوامل اصلی بیماری زایی شیگلا را می توان به سه گروه تقسیم کرد:

1) عوامل تعیین کننده تعامل با اپیتلیوم غشای مخاطی.

2) عواملی که مقاومت در برابر مکانیسم های دفاعی هومورال و سلولی ماکرو ارگانیسم و ​​توانایی شیگلا برای تولید مثل در سلول های آن را تضمین می کند.

3) توانایی تولید سموم و محصولات سمی که توسعه خود فرآیند پاتولوژیک را تعیین می کند.

گروه اول شامل عوامل چسبندگی و کلونیزاسیون است: نقش آنها توسط پیلی، پروتئین های غشای خارجی و LPS ایفا می شود. چسبندگی و کلونیزاسیون توسط آنزیم هایی که مخاط را از بین می برند - نورآمینیداز، هیالورونیداز، موسیناز تقویت می شود. گروه دوم شامل عوامل تهاجم است که باعث نفوذ شیگلا به انتروسیت ها و تولید مثل آنها در آنها و در ماکروفاژها با تظاهر همزمان یک اثر سیتوتوکسیک و (یا) انتروتوکسیک می شود. این ویژگی‌ها توسط ژن‌های پلاسمید با وزن مولکولی 140 MD (که سنتز پروتئین‌های غشای خارجی را رمزگذاری می‌کند) و ژن‌های کروموزومی شیگلا کنترل می‌شوند: kcp A (باعث کراتوکونژونکتیویت)، cyt (مسئول تخریب سلولی می‌شود). و همچنین ژن های دیگری که هنوز شناسایی نشده اند. محافظت از شیگلا در برابر فاگوسیتوز توسط آنتی ژن K سطحی، آنتی ژن های 3، 4 و لیپوپلی ساکارید انجام می شود. علاوه بر این، لیپید A اندوتوکسین شیگلا دارای اثر سرکوب کننده سیستم ایمنی است: فعالیت سلول های حافظه ایمنی را سرکوب می کند.

گروه سوم عوامل بیماری زایی شامل اندوتوکسین و دو نوع اگزوتوکسین موجود در شیگلا - شیگا و اگزوتوکسین های شبه شیگا (SLT-I و SLT-II) است که خواص سیتوتوکسیک آن ها بیشتر در S. dysenteriae 1. سموم شیگا و شیگا مانند در سروتیپ های دیگر نیز یافت شده است S. dysenteriae، آنها نیز تشکیل می شوند S. flexneri، S. sonnei، S. boydii، EHEC و مقداری سالمونلا. سنتز این سموم توسط ژن های سمی فاژهای تبدیل کننده کنترل می شود. انتروتوکسین های نوع LT در شیگلا فلکسنر، سون و بوید یافت می شوند. سنتز LT آنها توسط ژن های پلاسمید کنترل می شود. انتروتوکسین فعالیت آدنیلات سیکلاز را تحریک می کند و مسئول ایجاد اسهال است. شیگا توکسین یا نوروتوکسین با سیستم آدنیلات سیکلاز واکنش نمی دهد، اما اثر سیتوتوکسیک مستقیم دارد. سموم شیگا و شیگا مانند (SLT-I و SLT-II) دارای وزن مولکولی 70 کیلو دالتون هستند و از زیر واحدهای A و B (آخری از 5 زیر واحد کوچک یکسان) تشکیل شده اند. گیرنده سموم گلیکولیپید غشای سلولی است.

حدت Shigella Sonne به پلاسمید با وزن مولکولی 120 MD نیز بستگی دارد. سنتز حدود 40 پلی پپتید غشای بیرونی را کنترل می کند که هفت مورد از آنها با بیماری زاست. شیگلا سون با داشتن این پلاسمید، مستعمرات فاز I را تشکیل می دهد و خطرناک است. کشت هایی که پلاسمید را از دست داده اند، مستعمرات فاز II را تشکیل می دهند و فاقد حدت هستند. پلاسمیدهایی با وزن مولکولی 120-140 MD در شیگلا فلکسنر و بوید یافت شدند. لیپوپلی ساکارید شیگلا یک اندوتوکسین قوی است.

ویژگی های اپیدمیولوژیمنبع عفونت فقط انسان است. هیچ حیوانی در طبیعت از اسهال خونی رنج نمی برد. در شرایط تجربی، اسهال خونی فقط در میمون ها قابل تکثیر است. روش عفونت مدفوعی – دهانی است. راه‌های انتقال: آب (بیشتر برای شیگلا فلکسنر)، غذا، به‌ویژه شیر و محصولات لبنی (مسیر اصلی عفونت برای شیگلا سون)، و تماس خانگی، به‌ویژه برای گونه S. dysenteriae.

یکی از ویژگی های اپیدمیولوژی اسهال خونی تغییر در ترکیب گونه ای پاتوژن ها و همچنین بیوتیپ های Sonne و سروتیپ های فلکسنر در مناطق خاص است. به عنوان مثال، تا پایان دهه 30. قرن XX به یک سهم S. dysenteriae 1 30 تا 40 درصد از کل موارد اسهال خونی را تشکیل می دهد و سپس این سروتیپ کمتر و کمتر رخ می دهد و تقریباً ناپدید می شود. با این حال، در دهه 1960 - 1980. S. dysenteriaeدوباره در عرصه تاریخی ظاهر شد و باعث یک سری اپیدمی شد که منجر به تشکیل سه کانون هیپرآندمیک آن - در آمریکای مرکزی، آفریقای مرکزی و جنوب آسیا (هند، پاکستان، بنگلادش و سایر کشورها) شد. دلایل تغییر در ترکیب گونه ای پاتوژن های اسهال خونی احتمالاً با تغییر در ایمنی جمعی و تغییر در خواص باکتری های اسهال خونی مرتبط است. به ویژه، بازگشت S. dysenteriae 1و توزیع گسترده آن، که باعث تشکیل کانون های هیپرآندمیک اسهال خونی می شود، با کسب پلاسمیدهایی که باعث مقاومت چند دارویی و افزایش حدت می شود، همراه است.

ویژگی های پاتوژنز و کلینیک.دوره کمون برای اسهال خونی 2 تا 5 روز است، گاهی اوقات کمتر از یک روز. تشکیل کانون عفونی در غشای مخاطی قسمت نزولی روده بزرگ (سیگموئید و رکتوم)، جایی که پاتوژن اسهال خونی نفوذ می کند، ماهیت چرخه ای دارد: چسبندگی، کلونیزاسیون، ورود شیگلا به سیتوپلاسم انتروسیت ها، داخل سلولی آنها. تولید مثل، تخریب و رد سلول های اپیتلیال، انتشار پاتوژن ها در روده لومن. پس از این، چرخه بعدی شروع می شود - چسبندگی، استعمار، و غیره. شدت چرخه ها به غلظت پاتوژن ها در لایه جداری غشای مخاطی بستگی دارد. در نتیجه چرخه های مکرر، کانون التهابی رشد می کند، زخم های ناشی از اتصال، قرار گرفتن در معرض دیواره روده را افزایش می دهد، در نتیجه خون، توده های مخاطی چرکی و لکوسیت های پلی مورفونوکلئر در مدفوع ظاهر می شوند. سیتوتوکسین ها (SLT-I و SLT-II) باعث تخریب سلولی، انتروتوکسین - اسهال، اندوتوکسین ها - مسمومیت عمومی می شوند. تصویر بالینی اسهال خونی تا حد زیادی با توجه به نوع اگزوتوکسین که توسط پاتوژن به میزان بیشتری تولید می شود، میزان اثر آلرژی زا آن و وضعیت ایمنی بدن تعیین می شود. با این حال، بسیاری از سوالات در مورد پاتوژنز اسهال خونی نامشخص است، به ویژه: ویژگی های دوره اسهال خونی در کودکان دو سال اول زندگی، دلایل انتقال اسهال خونی حاد به مزمن، اهمیت حساسیت، مکانیسم مصونیت موضعی مخاط روده و غیره. معمول ترین تظاهرات بالینی اسهال خونی عبارتند از اسهال، تمایل مکرر: در موارد شدید، تا 50 بار یا بیشتر در روز، تنسموس (اسپاسم دردناک رکتوم) و مسمومیت عمومی. ماهیت مدفوع با درجه آسیب به روده بزرگ تعیین می شود. شدیدترین اسهال خونی ناشی از S. dysenteriae 1، راحت ترین - اسهال خونی Sonne.

ایمنی پس از عفونیهمانطور که مشاهدات میمون ها نشان داده است، پس از ابتلا به اسهال خونی، ایمنی قوی و نسبتاً طولانی مدت باقی می ماند. این بیماری توسط آنتی بادی های ضد میکروبی، آنتی توکسین ها، افزایش فعالیت ماکروفاژها و لنفوسیت های T ایجاد می شود. ایمنی موضعی مخاط روده با واسطه IgAs نقش مهمی ایفا می کند. با این حال، ایمنی نوع خاص است؛ ایمنی متقابل قوی رخ نمی دهد.

تشخیص آزمایشگاهی.روش اصلی باکتریولوژیک است. ماده برای تحقیق مدفوع است. طرح جداسازی پاتوژن: تلقیح در محیط های تشخیصی افتراقی اندو و پلوسکیرو (به موازات محیط غنی سازی و سپس تلقیح روی محیط های اندو و پلوسکیرف) برای جداسازی کلنی های جدا شده، به دست آوردن کشت خالص، مطالعه خواص بیوشیمیایی آن و با در نظر گرفتن مورد دوم، شناسایی با استفاده از سرم های آگلوتینه کننده تشخیصی چند ظرفیتی و تک ظرفیتی. سرم های تجاری زیر تولید می شوند.

1. شیگلا که مانیتول را تخمیر نمی کند:

به S. dysenteriae 1و 2

به S. dysenteriae 3-7(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی)

به S. dysenteriae 8-12(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی).

2. مانیتول تخمیرکننده شیگلا:

به آنتی ژن های معمولی S. flexneri I, II, III, IV, V, VI,

برای گروه بندی آنتی ژن ها S. flexneri 3، 4، 6، 7، 8- چند ظرفیتی،

به آنتی ژن ها S. boydii 1 - 18(چند ظرفیتی و تک ظرفیتی)، به آنتی ژن ها S. sonneiفاز اول، فاز دوم،

به آنتی ژن ها S. flexneri I–VI+ S. sonnei- چند ظرفیتی

برای شناسایی سریع شیگلا، روش زیر توصیه می شود: یک کلنی مشکوک (لاکتوز منفی در محیط اندو) روی محیط TSI (انگلیسی) زیر کشت می شود. آهن سه قندی) - آگار سه قند (گلوکز، لاکتوز، ساکارز) با آهن برای تعیین تولید H2S. یا به محیطی حاوی گلوکز، لاکتوز، ساکارز، آهن و اوره. هر ارگانیسمی که پس از 4 تا 6 ساعت انکوباسیون اوره را تجزیه کند، به احتمال زیاد عضوی از این جنس است. پروتئوسو ممکن است مستثنی شوند. میکروارگانیسمی که H2S تولید می کند یا دارای مفصل اوره آز یا اسیدساز (فرمانتس لاکتوز یا ساکارز) است را می توان حذف کرد، اگرچه سویه های تولید کننده H2S باید به عنوان اعضای احتمالی این جنس بررسی شوند. سالمونلا. در تمام موارد دیگر، کشت رشد شده روی این محیط ها باید بررسی شود و در صورت تخمیر گلوکز (تغییر رنگ)، در شکل خالص. در عین حال می توان آن را در واکنش آگلوتیناسیون شیشه ای با آنتی سرم های مناسب جنس مورد مطالعه قرار داد شیگلا. در صورت لزوم، سایر آزمایشات بیوشیمیایی برای بررسی عضویت جنس انجام می شود. شیگلا، و همچنین تحرک را مطالعه کنید.

برای تشخیص آنتی ژن ها در خون (از جمله به عنوان بخشی از CEC)، ادرار و مدفوع، می توان از روش های زیر استفاده کرد: RPGA، RSK، واکنش انعقادی (در ادرار و مدفوع)، IFM، RAGA (در سرم خون). این روش ها بسیار موثر، اختصاصی و برای تشخیص زودهنگام مناسب هستند.

برای تشخیص سرولوژیکی می توان از موارد زیر استفاده کرد: RPHA با تشخیص گلبول قرمز مربوطه، روش ایمونوفلورسانس (اصلاح غیر مستقیم)، روش کومبس (تعیین تیتر آنتی بادی های ناقص). تست آلرژی با دیسانترین (محلولی از فراکسیون های پروتئینی شیگلا فلکسنر و سون) نیز ارزش تشخیصی دارد. واکنش پس از 24 ساعت در نظر گرفته می شود و در صورت وجود پرخونی و نفوذ با قطر 10-20 میلی متر مثبت در نظر گرفته می شود.

رفتار.توجه اصلی به بازگرداندن متابولیسم طبیعی آب نمک، تغذیه منطقی، سم زدایی، درمان منطقی آنتی بیوتیک (با در نظر گرفتن حساسیت پاتوژن به آنتی بیوتیک ها) است. با استفاده زودهنگام از یک باکتریوفاژ اسهال خونی چند ظرفیتی، به ویژه قرص هایی با پوشش پکتین، که فاژ را از اثر HCl آب معده محافظت می کند، اثر خوبی حاصل می شود. در روده کوچک، پکتین حل می شود، فاژها آزاد می شوند و اثر خود را اعمال می کنند. برای اهداف پیشگیرانه، فاژ باید حداقل هر سه روز یک بار (دوره بقای آن در روده) داده شود.

مشکل پیشگیری خاصبرای ایجاد ایمنی مصنوعی در برابر اسهال خونی، از واکسن های مختلفی استفاده شد: از باکتری های کشته شده، مواد شیمیایی، الکل، اما همه آنها ناکارآمد بودند و متوقف شدند. واکسن های ضد اسهال خونی فلکسنر از شیگلا فلکسنر زنده (جهش یافته، وابسته به استرپتومایسین) ایجاد شده است. واکسن های ریبوزومی، اما آنها نیز کاربرد گسترده ای پیدا نکرده اند. بنابراین، مشکل پیشگیری خاص از اسهال خونی حل نشده باقی مانده است. راه اصلی مبارزه با اسهال خونی، بهبود سیستم تامین آب و فاضلاب، اطمینان از رژیم های بهداشتی و بهداشتی سختگیرانه در شرکت های غذایی، به ویژه صنایع لبنی، در موسسات مراقبت از کودکان، اماکن عمومی و رعایت بهداشت فردی است.