Кристалічна структура слини. збереження здоров'я зубів

Глава 2. Актуальні проблеми діагностики та контролю ефективності лікування виразкової хвороби дванадцятипалої кишки. Особливості кристалографії слини при гастродуоденальній патології (огляд літератури).

2.1 Інструментальне визначення дефекту слизової оболонки при виразковій хворобі дванадцятипалої кишки.

2.2 Морфологічна діагностика фази запалення при виразковій хворобі дванадцятипалої кишки.

2.3 Сучасний стандіагностики інфекції Helicobacter pylori

2.4 Можливості застосування кристалографії слини у діагностиці та оцінці ефективності лікування виразкової хвороби.

Глава 3. Обсяг та методи дослідження.

Глава 4. Особливості кристалографічної картини слини при виразковій хворобі дванадцятипалої кишки.

Розділ 5. Обговорення результатів досліджень.

Глава 6. Висновки.

Введення дисертації (частина автореферату) на тему "Кристалографія слини в діагностиці та контролі ефективності лікування виразкової хвороби дванадцятипалої кишки"

Список літератури дисертаційного дослідження кандидат медичних наук Воробйов, Олександр Вікторович, 2004 рік

Зверніть увагу, представлені вище наукові тексти розміщені для ознайомлення та отримані за допомогою розпізнавання оригінальних текстівдисертацій (OCR). У зв'язку з чим у них можуть бути помилки, пов'язані з недосконалістю алгоритмів розпізнавання. У PDF файлах дисертацій та авторефератів, які ми доставляємо, таких помилок немає.

ВИПУСКНА КВАЛІФІКАЦІЙНА РОБОТА
«Використання кристалоскопії для виявлення гострого лейкозуу мишей лінії AKR»

Вступ............................................... ................................. 3
Глава I. Огляд літератури........................................... .............. 3
1.1 Кристалографія біологічних рідин........................... 6
1.1.1 Основні поняття кристалічного стану речовини.......... 6
1.1.2 Процеси кристалізації в живих системах........................... 8
1.1.3 Кристалографічні особливості біологічних рідин... 8
1.1.4 Морфологія біологічних рідин............................... 8
1.2 Кристалографічні методи дослідження......................... 12
1.2.1 Передумови дослідження феномену кристалізації біологічних рідин......................................... ............. 12
1.2.2 Сучасний стан уявлень про кристалографічні методи дослідження...................................... ......................... 18
1.2.2.1 Загальна характеристика методики тезіокристалоскопії біологічних субстратів......................................... .................. 25
2. Об'єкти, цілі та методи дослідження.................................. 26
2.1 Цілі, завдання та етапи дослідження...................................... 26
2.2 Підготовка посуду та робочого місця 28
2.3 Застосовувані методи дослідження 28
2.3.1 Методика тезіокристалоскопічного тесту........................ 28
2.4 Статистична обробка даних.......................................... 43
3. Результати дослідження.............................................. ........ 44
3.1 Морфологія сечі здорових та штучно заражених лейкозом мишей......................................... ....................................... 44
3.2 Основні критерії оцінки тезиграфічних фацій сечі у мишей в нормі і при патології (лейкоз)............................... .......... 46
3.3 Миші лінії AKR.............................................. .............. 49
3.4.Динаміка розвитку лейкозу ............................................. ... 50
3.5 Висновки................................................ ...........................
Список використаної літератури............................................. 52

Вступ

Сучасні біотехнології є синтезом наукових досягнень у різних галузях природознавства: медицини, біології, математики, фізики, хімії та інших наук. Ж.Алферов - лауреат Нобелівської премії у галузі фізики зазначив, що в останні роки особливо значущі результати були отримані його учнями у роботах, виконаних на стику фізики та біології, фізики та медицини. Таким прикладом може бути підхід до вирішення найгострішої сучасної соціальної проблеми – діагностики та ефективного лікування злоякісних захворювань. Щороку від лейкозів гинуть багато мільйонів людей дитячого та старшого віку, а також сільськогосподарських тварин високоцінних порід. У всьому світі технології розвитку та лікування лейкозу у людей вивчаються на тваринах строго певної генетичної лінії. У ФДМ «КНДІГ та ПК ФМБА Росії» понад 10 років проводяться дослідження розвитку перевивного лейкозу на моделі мишей лінії АКR. Незважаючи на досягнуті успіхи в галузі експериментальної та клінічної лейкозології, проблема описаної патології дуже далека від остаточного вирішення.
В останні 40 років активно розроблятиметься новий діагностичний напрямок – кристалоскопія, заснована на визначенні якісного складу біологічних рідин за утворенням в них кристалічних структур.
Перший досвід клінічного застосуваннякристалографії відноситься до початку 60-х років минулого сторіччя. Спочатку більшість дослідників використовували тезиграфічний метод. У 1964 році Daems провів дослідження кристалограм крові хворих пацієнтів з гіпертрофією та карциномою простати. J.Leal та B.Finlayson (1977) встановили особливості кристалоутворення сечі.

А.А.Кожинової та Л.С. Масленникової (1968). В.Я. Неретін і В.І. Кірьяковим (1977) даний метод був використаний для дослідження спинномозкової рідини хворих з різними захворюваннями головного та спинного мозку. Діяльність Д.Б.Каликштейна із співавторами (1981) досліджено тезиграфічна картина сечі хворих із різними захворюваннями нирок. В.В.Усін (1995) вивчив кристалографічні зміни ліквору та слини у хворих з хронічними нейрогенними больовими синдромами голови та обличчя. Крім того, тезиграфія застосовувалася з діагностичними та прогностичними цілями в педіатрії, гінекології, гастроентерології та інших галузях медицини.
В даний час кристалоскопічний аналіз використовується для дослідження практично всіх біологічних рідин (кров, сеча, слина, спинномозкова рідина, жовч, назальний секрет та ін). Кристалічні структури біологічних рідин містять найважливішу інформацію про стан певного органу, окремої системи організму та організму в цілому.
В даний час інтерес вчених до використання методу кристалографії біологічних рідин у медицині залишається високим. Так, розроблено та впроваджено в практику численні діагностичні методики, що сприяють вивченню широкого спектра характеристик біосубстратів (біохімічні, імунологічні, морфологічні, біофізичні тести та ін.). Слабким місцем більшості перерахованих методик є висока затратність через залучення дорогих реактивів, обладнання та підготовки висококваліфікованих кадрів. Все вищезгадане обумовлює необхідність утримання та підтримки досить великої кількості допоміжних служб.
Однак економічні умови, що змінилися, вимагають розробки та впровадження в практику високоефективних та економічних методів діагностики лейкозів.
Кристаллоскопічний метод має значну діагностичну чутливість і тому знайшов широке застосування спочатку в практиці судово-хімічного аналізу, а потім і в медицині. Він дозволив розширити диференціально-діагностичні можливості у визначенні характеру патологічного процесу (алергічного, запального та ін.), у виявленні наявності анемії, набряку, інтоксикації та ступеня її виразності. За допомогою методу кристалографії біополімерів можливе визначення патології. різних органів. Оскільки дана методика має на увазі поєднання матеріальних частинок з кристалоутворюючим розчином, за утвореним малюнком кристалів можна судити і про характер злоякісного процесу (Конторщикова К.Н. та співавт. (2002-2012).
Метою цієї дипломної роботи було розробка методу кристалоскопічного аналізу сечі мишей лінії АKR для діагностики гострого лейкозу.

1 Огляд літератури.
1.1 Кристалографія біологічних рідин

Термін «кристал» походить від грецького слова «krystallos», що означає «лід». У кристалі атоми та молекули утворюють упорядковану структуру (кристалічні грати). Кристали мають важливе значення як у неживій, так і в живій природі, що стало основою виділення самостійної галузі – кристалографії. Кристалографія – це наука про структуру та фізичні властивості одиночних кристалів і кристалічних агрегатів, явища, що протікають у кристалічному середовищі під впливом внутрішніх властивостей або зовнішніх впливів.

1.1.1 Основні поняття кристалічного стану речовини

Кристали утворюються з пари, розчину, розплаву, аморфної речовини або речовини, що знаходиться в іншому фізичному стані. Кристалізація починається за певних зовнішніх умов, наприклад, переохолодження рідини, перенасичення пари, дегідратації розчину, коли поступово виникає безліч дрібних кристалів навколо центрів кристалізації. Кристал росте, приєднуючи атоми чи молекули з рідини чи пари.
Розрізняють рівноважні та реальні форми кристалів. Рівноважна форма кристалів досягається лише у рівноважних умовах, тобто. при нескінченно повільному процесі кристалізації.
Оскільки параметри зовнішнього середовищанеоднорідні у часі та у просторі, у структурі кристала неминуче виникають різні дефекти. Так, реальні (вимушені) форми кристалів відбивають як симетрію кристала, а й вплив зовнішніх умов зростання (концентрація різних речовин у середовищі формування кристала, температура, тиск та інше) будь-які зміни яких кристали дуже чуйно реагують. Деякі форми кристалів представлені рис.1.

а б в

г д е

ж з і

Рис.1 Форми кристалів у різних біологічних рідинах: а, б-ниткоподібні, в, г, д, е, ж - сферолітні утворення з радіально розташованими голками; з-пригнічений дендрит; і – розгалужений дендрит.
Більшість природних та технічних твердих матеріалівє полікристалами, одиночні кристали називають монокристалами. При кристалізації металів та солей часто утворюються деревоподібні кристали – дендрити. При кристалізації з одного або декількох центрів утворюються сфероліти, що складаються з радіально розташованих кристалічних голок.

1.1.2 Процеси кристалізації у живих системах

Всі біологічні середовища організму тварин і людини мають специфічну молекулярну впорядковану структуру, оскільки є рідкими ліотропними кристалами. Живий організм є складною високодинамічною системою, у якій постійно відбуваються процеси взаємодії безлічі структурних компонентів між собою та навколишнім середовищем. У разі норми коливання біофізичних показників організму обмежені порівняно вузькими межами. Однак у певних ситуаціяхвони можуть виходити за межі нормальних кордонівна достатньо довготривалий період. В одних випадках це пояснюється адаптацією організму до незвичайних нових умов існування, в інших – глибоким порушенням гомеостазу зі стійкою декомпенсацією. Ці складні високодинамічні процеси знаходять своє чітке відображення в особливостях кристалічних структур різних біологічних рідин або біополімерів.

1.1.3 Кристалографічні особливості біологічних рідин

Відомо, що порушення метаболізму як компонента патогенезу різних захворювань, призводить до зміни хімічного складута фізикохімічних властивостей біологічних рідин (далі біорідин). Складні динамічні процеси, що протікають у біорідинах, відображаються у морфологічних особливостях структур, що утворюються під час кристалізації зразків біорідини. В даний час розроблені та використовуються в клінічній практиці оригінальні методи діагностики на основі структурного аналізу біологічних рідин. Структури твердої фази біологічних рідин формуються молекулами і, переважно, мікроагрегатами органічних і мінеральних речовин, розчинених у биожидкости. Специфічні особливості структур визначаються загальними фізико-хімічними властивостями біорідини, кількісним та якісним складом молекул даних речовин, їх здатністю встановлювати внутрішньомолекулярні та міжмолекулярні хімічні зв'язки. В результаті структура біологічних рідин несе інтегральну інформацію про стан метаболізму органів, що омиваються біорідкістю, суб'єкта і про гомеостаз організму в цілому.
Морфологія біологічних рідин є апробованим науковим напрямому галузі медицини, ветеринарії та інших наук. Структуроутворення біорідини при кристалізації має чіткі закономірності.
Забруднення навколишнього середовища різними токсинами, серед яких особливе місце займають важкі метали (ТМ), призводить до суттєвого збільшення ймовірності виникнення певних захворювань, у тому числі і онкологічних. Поєднання морфологічного аналізу біорідкості організму з її локальним елементним аналізом може стати новим аналітичним інструментом для досліджень у галузі ранньої діагностики онкологічних захворювань.
Успіхи у вдосконаленні мікрохімічного аналізу, кристалооптики та тезиграфії стали основою вивчення кристалічних структур біологічних рідин людини та тварин при різній патології. Кристалографічні процеси в біологічних рідинах привертають дедалі більшу увагу вчених. Дослідження, проведені протягом останніх десятиліть, були спрямовані на виявлення взаємозв'язку кристалографічних особливостей біорідин з розвитком патологічних процесів в організмі; або ставили своїм завданням вивчення впливу зовнішніх впливів на формування кристалічних структур у біорідинах (Скопінов С.А. та ін.1997).
Таким чином, в біологічній рідині можна спостерігати комплекс структурних перебудов від розчину до кристалів. Кристалографічний аналіз дає можливість виявляти патологічні зміни кристалічних ґрат на надмолекулярному рівні. Ці зміни можуть бути раннім діагностичним критерієм розвитку патологічного процесу.

1.1.4. Морфологія біологічних рідин

Вивчення морфологічної картини різних биожидкостей – відомий у природознавстві напрям, якого останніми роками стало виявлятися особливу увагу вченими багатьох дисциплін. В даний час розроблено спосіб отримання інформації про стан організму, функції окремих органів та тканин на стадії виражених клінічних проявівзахворювання та на досимптомному етапі, тобто на рівні розвитку патологічного процесу тієї чи іншої природи (запальний, онкологічний, каменеутворення, гіпоксично-ішемічний, склеротичний та ін.). Спосіб кристалографії різних біополімерів простий за технікою постановки та обліку результатів. Досліджується морфологічна картинадегідратованої (висушеної) краплі біологічної рідини, яка є стандартним тонким зрізом. Наприклад, при дослідженні краплі сечі можна визначити активність процесу каменеутворення в нирковій тканині і склад ниркового каменю, що існує або формується (уратний, оксалатно-кальцієвий, фосфатно-кальцієвий); гострий чи хронічний перебіг кандидозу органів сечостатевої системи, гіпоксично-ішемічне пошкодження ниркової тканини та ступінь тяжкості процесу (гіпоксична нефропатія, інтерстиціальний нефрит, гостра ниркова недостатність, інфаркти нирок); бактеріальне інфікування (без визначення виду збудника)
Одна крапля біологічної рідини може розповісти, на що хвора людина і яка її біологічний вік. Крапелька сухої рідини поміщається на справжнє скельце мікроскопа, і на моніторі утворюється в багато разів збільшене зображення. "У краплі слини, взятої натще, видно дробові трипроменеві тріщини, це свідчення застою. А в краплі, взятій після сніданку, тріщин немає, значить, протоки слинних залоз у порядку. А ось кислотність шлункового соку трохи знижена", тепер на екрані - крапелька сироватки крові, вона виглядає як гудзик з обідком і покритий радіальними тріщинами, структура тріщин піддається ретельному аналізу: малюнок на периферії говорить про те, що у пацієнтки часом підвищується тиск через спазму судин.
Професор С.М. Шатохіна пояснює, що організм можна умовно розділити на дві системи: клітинну та неклітинну. Весь світ вивчає в першому клітини, проте біологічні рідини, які пов'язують клітини між собою, несуть масу інформації про їхню життєдіяльність. Коли крапля біорідкості висихає, закодована інформація стає видимою. "При переході у стійкий стан міцність зв'язків підвищується на два порядки, - пояснюють дослідники. - Після видалення води залишається плівка, на якій зафіксований малюнок просторового розташування елементів, які раніше знаходилися в розчиненому стані", хвороба завжди супроводжується накопиченням якихось хімічних речовин, що змінює структуру, симетрія порушується, і з'являються ті самі "язички", "листики" або "пластинки", які професор С.М. Шатохіна виявила у пацієнтки. А щоб визначити ці закономірності, дослідники розробили особливий спосіб висушування крапель. Багато про що може розповісти і краплина слини. У ній відбивається карієс та пародонтит. А ще, наприклад, гнійний отит, що веде до появи у краплі слини пластинчастих форм. Аналізуючи краплю шлункового соку, фахівці виявляють хронічний гастрит та виразку; суглобової рідини – артроз; нарешті, сльози – глаукому, катаракту, запальні процеси у сітківці.
Сьогодні вчені впритул працюють із клініцистами, допомагаючи їм побачити таємні патології та уточнити методи лікування. Аналізуючи біорідини, дослідники можуть визначити справжній біологічний вік людини. Його видають пластинчасті структури в сироватці крові, що за хімічною природою є холестерином. З нього ж у майбутньому утворюються атеросклеротичні бляшкина судинах. Це один з найбільших "маркерів старіння". А ще вчені оцінюють взаємний потенціал здоров'я, для цього кров у пробірці опромінюють електромагнітним полем або лазером – після такого впливу міжмолекулярні зв'язки руйнуються, тому при висиханні такої крові малюнок плівки буде іншим, у здорової людини на відновлення зв'язків після опромінення йде чотири години. Якщо ж на це потрібно доба – три – варто занепокоїтися. Дослідники вважають, що за допомогою цього методу можна визначити, чи здатна людина працювати в екстремальних умовах

1.2 Кристалографічні методи дослідження.
1.2.1 Передумови дослідження феномену кристалізації біологічних рідин

В останню чверть минулого століття було відзначено значний інтерес наукової громадськості до кристалографічних методів дослідження, що вивчаються в аспекті їхнього практичного застосування як альтернативний підхід у клінічній діагностиці. Вони дозволяють інтегрально оцінити здатність кристалізації різних біологічних субстратів. Останніми роками почав активно розроблятися новий діагностичний напрямок – клінічна кристалографія, заснована на визначенні якісного складу рідини за утворенням кристалічних структур.
Метод якісного визначення хімічних речовин за їхніми кристалографічними ознаками вперше запропонував учень М.В. Ломоносова - Т.Є.Ловіц. У 1804 році останній описав два методи якісного аналізу речовин - метод «вивітряних нальотів солей» і метод, заснований на зміні нормального утворення кристалів шляхом введення в розчин речовини іншого інгредієнта, що кристалізується, заклавши цим основу двох сучасних напрямів кристалографії:
1) кристалографія нативних рідин - метод, заснований на визначенні якісного складу рідини за утворюваним їй при випаровуванні кристалів;
2) тезиграфія – метод, заснований на додаванні до досліджуваної рідини стандартного кристалообразующего розчину та аналізі змін у кристалах стандартного розчину в присутності випробуваної рідини.
Перший досвід клінічного застосування кристалографії відноситься до початку 60-х років минулого сторіччя. Спочатку більшість дослідників використовували тезиграфічний метод. У 1964 році Daems провів дослідження кристалограм крові пацієнтів з гіпертрофією та карциномою простати. Leal J. і Finlayson B. (1977) встановили особливості кристалоутворення сечі.
Про використання у вітчизняній медицині методів кристалографічного дослідження (КДМ) вперше повідомлено у роботі
Кожинової А.А. та Масленникової Л.С. (1968). Неретін В.Я. та Кір'яковим В.І. (1977) даний метод був використаний для дослідження спинномозкової рідини хворих з різними захворюваннями головного та спинного мозку. Діяльність Д.Б.Каликштейна із співавторами (1981) досліджено тезиграфічна картина сечі хворих із різними захворюваннями нирок. Усін В.В. (1995) вивчив кристалографічні зміни ліквору та слини у хворих з хронічними нейрогенними больовими синдромами голови та обличчя. Крім того, тезиграфія застосовувалася з діагностичними та прогностичними цілями в педіатрії, гінекології, гастроентерології та інших галузях медицини.
В даний час кристалографічний аналіз використовується для дослідження практично всіх біологічних рідин (кров, сеча, слина, спинномозкова рідина, жовч, назальний секрет та ін.). Кристалічні структури біологічних рідин містять найважливішу інформацію про стан відповідних органів та тканин.
Кристалографічний аналіз слізної рідини (СЖ) для діагностики офтальмологічної патології вперше був використаний
Ченцової О.Б. із співавторами у 1985 році. Ними було запропоновано методику тезиграфії слізної рідини – кристалографія з додаванням спиртового розчину хлорної міді. У конічну пробірку міститься 0,02 мл сльози і при постійному струшуванні додається 0,1 мл 2% спиртового розчину хлориду міді. Пробірку закривають ватним тампоном і залишають для відстоювання за кімнатної температури. Через 1 годину 20 хвилин крапля отриманого розчину наноситься на предметне скло, яке у чашці Петрі поміщається в термостат при температурі 25°С на дві години. Після закінчення терміну інкубації проводиться макро- та мікроскопічна оцінка результатів.
Були відзначені особливості тезиграфічної картини у хворих із запальними, дистрофічними та пухлинними захворюваннями очей та очниці. За даними Ченцової О.Б. зі співавторами кристалографічна картина (КГК) слізної рідини в нормі у дорослих і дітей є прозорими, довгими, рідко розташованими кристалами циліндричної форми, які зібрані в правильний геометричний малюнок, найчастіше у вигляді трикутника. Ченцової О.Б. із співавторами (1989) проводилося КДІ СЖ для диференціальної діагностики захворювань орбіти. Авторами виявлено якісні відмінності від норми у препаратах сльози у пацієнтів з ендокринною офтальмопатією, захворюваннями орбіти запального характеру та новоутвореннями.
З цього часу кристалографічне дослідження використовувалося цими та іншими авторами у діагностиці різних захворювань очей.
Тюріков Ю.А., Покоєва В.А. (1992) використовували методику тези-графії з додаванням насиченого водного розчину гліцину та добової експозиції при кімнатній температурі. Виявлено характерні зміни в кристалограмах хворих із внутрішньоочними та орбітальними новоутвореннями.
Ряд авторів використовували тезиграфію СЖ як для діагностики, але й динамічного спостереження КДК СЖ ураженого ока (Кокарев В.Ю. з співавт., 1990; Сомов Є.Є., Бржеський В.В.,1994; Е.И.Устинова з співавт.(1996) рекомендували метод кристалографічного дослідження СЖ як додатковий лабораторний тест для диференціальної діагностики та уточнення фази активності туберкульозного процесу.
Чухман Т.П. (1999) удосконалила методику тезиграфії СЖ, запропонувавши замінити тривале відстоювання суміші сльози та кристалоутворюючого розчину центрифугуванням, що скоротило час дослідження. Також проведено КДІ СЖ при різних запальних захворюваннях очей та виділено характерні типикристалів, що дозволило своєчасно виявляти ускладнення ще доклінічної стадії. Крім того, автором вивчено вплив на кристалогенез різних зовнішніх факторів (температура висушування препаратів, вологість), а також методів забору сльози.
Інтерес вчених до використання методу тезиграфії біологічних рідин у медицині і нині залишається високим. Проте тези-графия виявилася досить трудомісткою методикою, що вимагає застосування додаткових реактивів і складною при інтерпретації результатів (Шатохіна С.Н., Шабалін В.М., 1997). З іншого боку, невідомі закономірності процесу кристалізації, у яких будується метод тезиграфії. Пошук більш простих та доступних способів кристалографічного дослідження призвів до появи низки робіт, присвячених кристалографії нативних препаратів біорідин.
Внаслідок цього назріла необхідність розробки експрес-методики, яку можна було б застосувати як первинний тест при діагностиці різних захворювань. Причому необхідними вимогами при його виборі є достатній ступінь точності та можливість широкого застосування без вкладення значних матеріальних засобів (Меньшиков В. В., 1988; Назаренко Г. І., Кішкун А. А., 2000; .Ф., Стеклова Г. П. з співавт., 2004).
Цією проблемою зацікавилися фахівці різних галузей медицини. Наслідком цього став бурхливий розвиток салівадіагностики, яка, з одного боку, була неінвазивною, з іншого, дозволяла отримати швидко попередні результати (Боровський Є. В., Леонтьєв В. К., 1991; Сукманський О. І., 1991; Р., Алексєєва О. П., 1994; Антропова І. П., Габінський Я. Л., 1997; Бутаєв М. Т., 1998; Григор'єв І. Ст, Чиркін А. А., 1998; Булгакова Ст. А., 1999; Єричев І. Ст, Коротько Г. Р., Решетова І. Ст, 1999; Денисов А. Би., 2000, 2001;).
Методи якісного визначення хімічних сполук за їх здатністю до кристалізації були вперше запропоновані Т. Є. Ловицем, учнем М. В. Ломоносова, ще в 1804-1805 рр. Він у своїх роботах описав два оригінальні тести для якісного аналізу структури досліджуваних речовин. Це «метод вивітряних нальотів солей» (кристалічних нальотів), і навіть мікрокристалічні реакції. Перший з перерахованих вище і був покладений в основу розробленого значно пізніше способу якісного визначення лікарських препаратів (Книжко П. О., 1956; Бубон Н. Т., Пузиревський К. Я., 1965; Микільська М. Н., Гандель В. Г.). , Попков Ст А., 1965; Лобанов Ст І., 1966). Методика мікрокристалічних реакцій зараз знайшла застосування в судовій медицині (Бєлова А. В., 1960; Семенова Т. Д., 1972; Тахер М. А. Ассад, 1995).
В умовах розвитку уявлень про кристалізацію біологічних рідин людини актуальність набуває питання про застосовність її при діагностиці різних патологічних станів (Кокуєва О. В., Савіна Л. В., Лі А. М., 2000; Зубєєва Г. Н., Мотильова І. І.). М., Потєхіна Ю. П., 2001; Шабалін Ст Н., Шатохіна С. Н., 2001; Воробйов А. Ст, Воробйова Ст А., Нештакова Н. Л., 2002; , Воробйов А. Ст, 2003; Волоснікова Н. Н., Музлаєв Г. Р., Савіна Л. Ст з співавт., 2003; Рапис Е. Р., 2003; ., Чучалін А. Р., 2004).
У зв'язку з цим у досить відокремлену галузь медичної науки зараз виділяються кристалоскопічні методи дослідження, що мають на меті розшифрування метаболічної інформації, прихованої в якісному та кількісному складібіологічних середовищ.
Крім того, уніфікації та спрощення проведення кристалографічних досліджень може сприяти єдина схема аналізу. Це буде корисним як у диференціальній діагностиці, так і при виконанні орієнтовного тесту.
Важливим фактором стандартизації результатів діагностичної кристалізації біологічних субстратів організму може стати і єдина форма висновку по кристалоскопічному тесту, що включає відомості про якісні та кількісні зрушення складу фації пацієнта по відношенню до фації практично здорових осіб (зміни кількості та розмірів структур, поява патологічних для даної біорідини). утворень тощо).

1.2.2 Сучасний стан уявлень про кристалографічні
методи дослідження

Кристалографічні методи дослідження- сукупність методологічних підходів до вилучення інформації про метаболізм і гомеостаз організму та/або його частин, заснованих на феномені вільного або ініційованого базисними речовинами різного хімічного складу кристалоутворення висушеного рідкого або приведеного в рідкий стан біологічного матеріалу з подальшою інтерпретацією результатів кристалів.
За останні тридцять років були сформовані численні методичні підходи до проведення діагностичної кристалоскопії, проте необхідно зазначити, що більшість з них мають своєю сутністю лише модифікацію умов проведення дегідратаційного процесу, тоді як удається можливим виділити лише принципово лише три варіанти: вільна кристалізація, у разі якщо висушуванню піддається безпосередньо аналізована біологічна рідина; ініційований кристалогенез, коли візуалізується результат дегідратації системи «біосередовища – базисне кристалоутворююча речовина» переважно на підставі дослідження структурогенезу останнього; парціальна кристалізація (метод модельних композитів) – сукупність способів відтворення окремих складових кристалоскопічної картини певного біологічного субстрату, у зв'язку з чим є важливим насамперед для наукових досліджень.
У цілому нині в сучасної кристалоскопії запропоновані такі методы:
1) Класична кристалоскопія (Калікштейн Д. Би., Мороз Л. А., Квітко Н. Н. з співавт., 1990; Савіна Л. Ст, 1992, 1999; Шабалін Ст Н., Шатохіна С. Н., 2001; Алексєєва О. П., Воробйов А. В., 2003) - один з найбільш поширених варіантів виконання дегідратаційного тесту, сутністю якого, як уже вказувалося, є безпосередня кристалізація біологічних рідин. Підготовка препаратів може проводитися як за кімнатних умов, так і в термостаті (37-400С), проте, за даними численної літератури, тривалість приготування мікропрепаратів біологічних середовищ становить 1-2 діб, що явно не відповідає вимогам до експрес-тестів. У зв'язку з цим потрібне суттєве коригування умов висушування з метою оптимізації часу, що витрачається на приготування мікропрепарату.
Необхідно відзначити, що даний кристалоскопічний підхід дозволяє оцінити кристалоутворюючі властивості біорідини, а, отже, не тільки отримати діагностично значущі фації (зразки-кристалізати), а й встановити присутність окремих компонентів субстрату, що аналізується (Савіна Л. В., Павлищук С. А., Самсигін Ст Ю. з співавт., 2003). Дане питання не має адекватного дозволу у спеціалізованій літературі, але важливим є як практичне виявлення патологічних включень у біологічні середовищі, біології та медицині – дослідження патогенетичних моментів патології людини та тварин, а також обґрунтований підбір та оцінка ефективності медикаментозної та немедикаментозної терапії (Буйко А.С. , Цикало А. Л., Терентьєва Л. С. з співавт., 1977; Єричев І. Ст, Коротько Р. Р., Решетова І. Ст, 1999; Зайчик А. Ш., Чурилов Л. П., 2001; Алексєєва О. П., Воробйов А. В., 2003; Байдаулет І. О., 2003). Це обумовлює необхідність вивчення особливостей кристалогенезу складових біологічних рідин, у тому числі шляхом парціального моделювання дегідратації. Певні шляхи вирішення поставленого питання запропоновано Л. В. Савіною із співавт. (2003), відповідно до робіт якої відтворення єдиної картини біокристалізації є можливим зробити поетапним дослідженням кристалоутворення розчинів, що являють собою моносистеми, що містять 1 компонент біосередовища в концентрації, чітко їй відповідної («модельний композит»). При всій значущості даного методичного підходу необхідно визнати, що в цьому випадку не враховується один з найбільш суттєвих факторів, що визначають характер кристалогенезу біосубстрату – наявність міжмолекулярних взаємодій між складовими біорідини, що розрізняються за хімічною будовою, яка, у свою чергу, відіграє значну роль у формуванні дефінітивної кристалоскопії. картини, зокрема визначаючи кількість та діаметр «первинних зон» фації, що трансформуються з плином дегідратаційного процесу в пояси кристалізації (Коледінцев М. Н., 1999; Коледінцев М. Н., Нечаєв Д. Ф., Майчук Н. В., 2002 ; Коледінцев М. Н., Майчук Н. В., 2002).
Подібні спроби моделювання кристалоутворення були зроблені Г. Г. Коротько (2000), що буде обговорено далі.
2) Тезиграфія (Нефедова Н. Би., Цивенкова Л. А., 1985; Мороз Л. А., Калікштейн Д. Би., 1986; Гугутишвілі Ц. Р., Сімонішвілі Л. М., 1990; Кідалов Ст Н ., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004) також відноситься до превалюючих і найбільш загальних способів виконання кристалоскопічного тесту і являє собою додаткове введення в біорідість, що висушується, організму людини різних хімічних речовин з метою ініціації процесів кристалоутворення. Для цього використовують широкий спектр кристалоутворювачів (NaCl, CaCl2, MgCl2 та інші), які здебільшого володіють комплексоутворюючими властивостями, причому концентрації у різних авторівзначною мірою варіюють.
У лабораторіях, використовують цей кристалографічний метод, його реалізація здійснюється шляхом застосування класичної тезиграфії, тобто. розгляду виключно результату дегідратації системи, що складається з біоматеріалу та базисної кристалоутворюючої речовини як самостійного зразка, що суттєво ускладнює інтерпретацію отриманих відомостей внаслідок об'єктивних труднощів у зіставленні зразків, отриманих у різних умовах та неоднаковому функціональному статусі організму обстежуваних осіб. У зв'язку з цим тезиграма, сформована відповідно до описаного вище підходу, вимагає звірення отриманого результату з заздалегідь наявними "патернами" ("фотографічний" підхід) (Шабалін В. Н., Шатохіна С. Н., 2002; Байдаулет І. Про ., 2003;Білоглазов Ст Р., Атьков Є. Л., Федоров А. А. з співавт., 2003; Волоснікова Н. Н., Музлаєв Г. Р., Савіна Л. Ст з співавт., 2003; Кідалов Ст Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004) або значеннями емпірично виявлених параметрів (Тарусінов Г. А., 1994; Коледінцев М. Н., Нечаєв Д. Ф., Майчук Н. В. ., 2002), однак даний фактор виразно і значуще знижує інформативність та достовірність тезиграфічної діагностики.
Важливим видається підкреслити, що нині відсутня загальноприйнята схема-алгоритм опису, аналізу та інтерпретації тезиграфічної фації, як і єдиної методики її отримання.
Є поодинокі повідомлення, присвячені використанню контрольного зразка базисних речовин (Тарусинов Г. А., 1994), проте його застосування з незрозумілих причин різко обмежене (Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К., 2003; Мартусевич А. К.). , 2004).
3) Профільна дегідратація (Шабалін Ст Н., Шатохіна С. Н., 1999). Має на увазі нанесення біологічних рідин на предметне скло, попередньо оброблене розчином лецитину певної концентрації. За допомогою лецитину є можливим, на думку авторів, змінити спорідненість кристалів до основи, а, отже, трансформувати термодинамічні характеристики біосубстрату, що дегідратується.
4) Вакуумна кристалоскопія (Савіна Л. В., 1999) передбачає приготування (висушування) препаратів в умовах вакууму. Цим досягається ізольованість дегідратованого зразка від зовнішнього середовища, створюється відносно закрита система, в якій здійснюється безпосередньо видалення рідкої частини біосередовища і процеси біокристалізації.
5) Кристалізація біологічних рідин у закритому осередку (Ан-тропова І. П., Габінський Я. Л., 1997). Забезпечується ізоляція формується зразка від зовнішнього середовища аналогічно вакуумної кристалоскопії, проте технічно даний спосіб зручніший для практичного застосування, так як не вимагає створення умов вакууму, а лише використання закритого осередку, в якій можливим представляється проводити безпосередній мікроскопічний аналіз. Авторами модифікації застосовувалося попереднє центрифугування біоматеріалу.
6) Поясна кристалоскопія - кристалографічний метод дослідження, заснований на вивченні поясів кристалів та окремих кристалічних утворень (Коледінцев М. Н., 1999; Коледінців М. Н., Нечаєв Д. Ф., Майчук Н. В., 2002; Коледінцев М. М. М., 1999; Н., Майчук Н. Ст, 2002). Фізико-хімічним базисом способу є неоднорідність компонентного складу біологічних рідин залежно від молекулярних мас речовин, що є елементами даної біосередовища, а, отже, різної їх здатності до пересування фації в процесі ступінчастої дегідратації зразка та формування фації. Це призводить до утворення одного або (набагато частіше) кількох поясів кристалізації, реєстрація яких і дозволяє судити про дану характеристику біологічної рідини (Коледінцев М. Н., Нечаєв Д. Ф., Майчук Н. В., 2002).
7) Метод клиноподібної дегідратації (В. Н. Шабалін, С. Н. Шатохіна, 2001-2005). Спосіб дегідратації краплі біологічної рідини розміщеної на прозорій площині. Крапля має форму клину на поперечному розрізі, що створює умови нерівномірної швидкості дегідратації в радіальному напрямку. Це викликає осмофоретичне переміщення розчинених речовин в обсязі краплі, що дегідратується, відповідно до фізико-хімічних параметрів і формування чітких, строго індивідуалізованих структур, відповідних стану організму, з якого була отримана досліджувана рідина.
8) Поляризаційна мікроскопія (Рапис Є. Г., 1976; Антропова І. П., Габінський Я. Л., 1997; Савіна Л. В., Павлищук С. А., Самсигін Ст Ю. з співавт., 2003) - спосіб оцінки результатів вільного або ініційованого кристалоутворення біологічної рідини в поляризованому світлі, що дозволяє виявити деякі додаткові особливостіяк фації загалом, і окремих її структурних елементів, і навіть охарактеризувати її текстуру. Є універсальною модифікацією підходу до візуалізації результатів кристалогенезу і може бути використаний як доповнення до будь-якого з кристалографічних методів дослідження біосред.
9) Субстратна конгрегація (Г. Г. Коротько, 2000) – допоміжний кристалографічний метод, що дозволяє моделювати кристалоутворення окремих компонентів, що є складовими біологічних субстратів (ліпідів, білків, полісахаридів). В даному випадку, в порівнянні з методом «модельних композитів», досягається більше наближення до реального складу біологічного середовища за асортиментом, але не за точним співвідношенням компонентів, проте є можливість урахування змін біорідини за основними її біохімічними елементами.
10) Рідкокристалічна термографія (Буйко А. С., Цикало А. Л., Терентьєва Л. С. з співавт., 1977; Шкроміда М. І., Поспішин Ю. А., 1977) - перспективна методика кристалографічних досліджень, принциповим моментом якою є використання холестеричних рідкокристалічних (температурний інтервал плавлення 33,5-38,20С або 36,8-41,20С) покриттів поверхонь, що вивчаються, системами з холестерилпеларголеатом, холестерилолеатом і т. д. В якості «підкладки» при цьому використовується шкіра, на яку наноситься склад. Інтерпретація перетворення рідких кристалів оцінюється за допомогою спеціалізованого спектрофотометра.
Досить широкі діагностичні можливості даного методичного підходу в даний час практично не використовуються, незважаючи на його очевидну перспективність, простоту і швидкість виконання.
11) Метод енергоінформаційного перенесення з біологічних рідин на носій (Воробйов А. В., Воробйова В. А., Нештакова Н. Л. з співавт., 2002) полягає в перенесенні інформації з біосред на «чисті горошини молочного цукру», потім на предметному склі виробляється їх сполука з 0,1 мл базисної речовини (5% водного розчину мідного купоросу). Приготування мікропрепаратів виконується у темному приміщенні протягом 24 год. Оцінка здійснюється шляхом якісного аналізу одержуваних зразків-кристалізатів.
Таке різноманіття методологічних варіантів проведення тесту, що має у своїй основі дегідратацію біологічних субстратів, пов'язане, можливо, з тим, що використання різних підходів сприяє кращій ідентифікації результатів (таблиця). Вилучення інформації, прихованої в сукупності метаболітів, їх кількісному та якісному співвідношенні в біоматеріалі, - одне з найбільш важливих та важливих завдань кристалоскопічної діагностики. З точки зору численних авторів (Алексєєва Ст І., 1965; Гугутишвілі Ц. Р., Сімонішвілі Л. М., 1990; Калікштейн Д. Би., Мороз Л. А., Квітко Н. Н. з співавт., 1990 ;Антропова І. П., Габінський Я. Л., 1997; 2001, 2004; Алексєєва О. П., Воробйов А. В., 2003; Байдаулет І. О., 2003; Рапіс Е. Р., 2003; Савіна Л. Ст, 1999; 2003; Дєєв Л. А., 2004;Залеський М. Р., Еммануель Ст Л., Краснова М. Ст, 2004; Кідалов Ст Н., Хадарцев А. А., Якушина Р. Н., 2004; Громова І П., 2005), переважна роль у розкритті метаболічних зрушень складу середовищ організму людини і тварин відводиться якісному компоненту з урахуванням детермінованих взаємин між окремими утвореннями (кристалічної та аморфної природи). Кількісному компоненту приділяється значно менше уваги, хоча він є чітким критерієм об'єктивності спостережуваних відмінностей.

1.2.2.1. Загальна характеристика методики тезіокристалоскопії біологічних субстратів

На підставі аналізу відомостей літератури, наведених вище, а також був запропонований інтегративний метод тезіокристалоскопії біологічних субстратів, що базується на одночасному та паралельному виконанні класичної кристалоскопії та порівняльної тезиграфії, що здійснюються на одному склі. Це дозволяє оцінити як здатність біологічної рідини до безпосередньої кристалізації, так і її ініціаторний потенціал по відношенню до заданого дослідником базисної кристалоутворюючої речовини (таблиця 1).

Таблиця 1. Порівняльна характеристика деяких кристалографічних методів

• експериментальна частина

• 2.Об'єкти, цілі та методи дослідження

• 2.1. Цілі, завдання та етапи дослідження.

• Метою даного дослідженнявивчення морфології висушених зразків сечі здорових та мишей, хворих на лімфоїдний лейкоз (ЛЛ).
• Для досягнення наміченої у роботі мети були сформульовані такі завдання:
• 1. Вивчити сучасну літературу з проблем кристалографії біосубстратів.
• 2. Освоїти методику виконання тезіокристалоскопії біосубстратів.
• 3.Оцінити характер кристалоутворення сечі у здорових мишей.
• 4.Встановити особливості ініційованого кристалогенезу сечі мишей при ЛЛ.
• Робота виконана на базі лабораторії консервування крові та тканин Кіровського науково-дослідного інституту гематології та переливання крові.
• Етапи дослідження:

1. Підготовка здорових лабораторних мишей лінії АКR до досліджень.
2. Щеплення лімфоїдної форми лейкозу мишам лінії АКR.
3. Забір біосубстрату (сечі) на дослідження у здорових мишей та мишей, що мають лейкоз.
4. Приготування мікропрепаратів сечі здорових мишей та мишей, що мають лейкоз.
5. Тезиграфічний аналіз висушених мікропрепаратів сечі здорових мишей та мишей, що мають лейкоз.

• Як предмет дослідження виступали тезиграфічні «патерни» сечі здорових мишей та мишей, що мають лейкоз.
• Об'єктом даного експериментального дослідження служила сеча 10 здорових мишей і 10 мишей, що мають лейкоз.
• Як базисну речовину при тезиграфічному тесті ми використовували 10% розчин хлориду натрію, який є активним кристалоутворювачем.
• Загалом було отримано 20 мікропрепаратів сечі, взятих від контрольної групи (здорові миші), від мишей, які мають лейкоз (дослідна група).
• Експериментальна частина роботи включала вивчення у вивченні морфології висушених зразків сечі здорових, хворих на лейкоз мишей.

2.2 Підготовка посуду та робочого місця

Посуд, що використовується в роботі (пробірки, вимірювальні піпетки, предметні скла), мили гарячою водою із застосуванням миючого засобу, ополіскували спочатку водопровідною, потім дистильованою водою і висушували.
Стерилізацію посуду, попередньо загорнутої в обгорткову папір, проводили в автоклаві при температурі 120°С і тиску 1 атм протягом 25 хв.
Роботи при заборі біологічної рідини проводилася в лабораторії (віварії) тварин ФДМ «КНДІГ та ПК» Росздраву. Подальше отримання тезіокристалоскопічних фацій сироватки крові проводили в лабораторії консервування крові та тканин ФДМ «КНДІГ та ПК» Росздраву. Перед роботою приміщення опромінювали кварцовою лампою протягом 30 хв. Робочий стіл перед роботою та після її закінчення обробляли 70% спиртом.

2.3. Методи дослідження, що застосовуються

2.3.1 Методика тезіокристалоскопічного тесту

Дослідження кристалооптичних властивостей біосубстратів (сироватки крові) здорових і хворих на лейкоз мишей проводилося за методикою тезіокристалоскопії (Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К., 2005; Мартусевич А. К. з співавт., 2000-2006).
На попередньо знежирене, промите і просушене предметне скло наносять зразки біологічного матеріалу (сироватки крові, сечі, слини, поту, сльози і т. д.) в обсязі 0,3 мл, який, як нами встановлено раніше, є оптимальним як у ракурсі площі скла, так і щодо кількості кристалічних та аморфних структур, що підлягають подальшому аналізу. При цьому відмінність методу тезіокристалоскопії полягає в тому, що на досліджуване скло наносять 3 зразки (рис. 2.1.), перший (1) з яких містить тільки біоматеріал, другий (2) - суміш біорідини та кристалоутворюючої (базисної) речовини, третій (3 ) - контроль кристалоутворювальної сполуки. Як базисну речовину використовувався 10% розчин NaCl.

Рис.2.1. Схема препарату, приготовленого за методом тезіокристалоскопії

Сушіння отриманого мікропрепарату проводиться модифікованим способом струму теплого повітря. При цьому горизонтальне положення скла та відповідний напрямок потоку має забезпечувати дегідратацію проб в однакових умовах, не допускаючи їх об'єднання. Потім проводиться аналіз кристалоскопічних картин, що утворилися, за традиційною схемою окремо за кристалографічним і тезиграфічним компонентом.
Висихання краплі субстрату на поверхні, що змочується (скло) призводить до утворення 3 різних зон: зовнішня (маргінальна - вода, електроліти, низькомолекулярні сполуки); внутрішня (центральна – зосереджені високомолекулярні білки, електроліти, низькомолекулярні сполуки) та проміжна, що відрізняється найменшою концентрацією речовин. Внутрішня зона може мати виражені та невиражені межі. Часто до зовнішнього контуру внутрішнього кордону примикають кристалічні та аморфні структури.
Висихання колоїду супроводжується його ретракцією, наростанням концентрації низькомолекулярних сполук та утворенням кристалічних структур різного виду.
Статистична обробка отриманих результатів здійснювалася у середовищі Microsoft Excel XP із застосуванням вбудованих функцій.
Для інтерпретації кристалоскопічних картин ми прокласифікували всі кристалічні та аморфні утворення, які ми зустрічаємо (таблиця 2.1, рис. 2). Відповідно до цієї класифікації та проводилася оцінка препаратів, підготовлених для аналізу за методикою класичної кристалоскопії. Проводилося як загальне вивчення кристалоскопічних особливостей биожидкости, і порівняльна їх характеристика.

Таблиця 2.1. Кристалічні та аморфні структури, що зустрічаються при «класичному» кристалоскопічному аналізі біорідин

Примітка: * - розрізняються за кількістю (трохи – сумарно займають менше 30% площі поля зору, помірна кількість – сумарно займають 30-50% площі поля зору, велика кількість – сумарно займають понад 50% площі поля зору) та за розміром (дрібні, середні, великі, агрегати).
На підставі аналізу численних мікропрепаратів висушених біологічних рідин виділено (Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К., 2005;) 5 класів кристалічних структур, кожен з яких, у свою чергу, включає конкретні утворення (таблиця 2.1). Для деяких з них розшифровано хімічний склад, що дозволяє з певним ступенем наближення судити про зміну якісно-кількісних характеристик компонентних співвідношень у біологічному середовищі у разі динамічного дослідження кристалоутворювальних властивостей останньої.
Відокремлену категорію утворюють тіла некристалічної природи – аморфні утворення. Похідні карбонату кальцію, що є надзвичайно варіабельними за розміром і кількістю, що може мати діагностичне значення.
Інтерес також представляє тип взаємодії великих кристалів та аморфних частинок у фації дегідратованого біосубстрату (рисунок 2). Інформативність даного феномену не на даний момент не встановлена, але вимагає, на наш погляд, пильної уваги до себе, тому що може відображати вплив на кристалогенез кристалоскопічно не візуалізованих складових біорідини (наприклад, білкових макромолекул, жирів, вуглеводів і т. д.) .

Мал. 2.2.Взаємодії кристалічних та аморфних структур

З метою отримання додаткової інформації про фізико-хімічні властивості аналізованої біологічної рідини були розроблені (Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К., 2005) додаткові критерії оцінки результату класичної кристалоскопії, що включають такі параметри:
1. Пористість (I)- Відображає особливості органіко-мінеральних взаємодій у фації. Оцінка проводиться за шестибальною прямою шкалою (0-5 балів), причому за 0 балів прийнято повну відсутність ознак появи даного явища, а за 5 балів – прозорість пористості без мікроскопа.
2. Рівномірність розподілу елементів (R)– критерій, що свідчить про правильність перебігу процесу вільного кристалогенезу. Також інтерпретується відповідно до шестибальної шкали (0-5 балів), наведеної в розділі, присвяченому тезиграфічному компоненту.
3. Виразність крайової зони (Кз)- Параметр, що вказує на наявність і кількість білкового компонента біологічного середовища (Шатохіна С. Н., 1995; Назарова Л. О., Шатохіна С. Н., Шабалін В. Н., 2000). Нами пропонується схема оцінки цього показника за напівкількісною шестибальною шкалою:
- 0 балів – абсолютна відсутністьмаргінальної зони, виражені стрії, локальні ознаки деструкції в ділянці краю фації;
- 1 бал – крайова зона слабо помітна при малому збільшенні світлового мікроскопа, спостерігаються поодинокі «розломи», зокрема нечітко виражені, «завуальовані»;
- 2 бали - крайова зона добре помітна, вона практично однорідна, спостерігається невелика кількість «розломів»;
- 3 бали – крайова зона чітко відмежована від проміжної, однорідна, по всьому крайовому кільцю відзначаються «розлами», що не вносять деструктивного характеру;
- 4 бали – крайова зона чітко візуалізується, відмежована «валом» від проміжної, має значну кількість «розломів», але без мікроскопії невиразна.
- 5 балів – крайова зона візуалізується без мікроскопії, вона однорідна, без ознак деструкції; Мікроскопія вказує на значну кількість "розломів".
4. Ступінь деструкції фації (СДФ)- інтегральний показник, що відображає правильність протікання кристалогенезу (основна якісна характеристика фації) і підсумовує як екзогенні (умови дегідратаційного процесу - температура, вологість, тиск, швидкість потоків повітря, потрапляння додаткових речовин і т. д.), так і ендогенні фактори (термодинамічна складова кристалоутворення, наявність адекватної для формування кристалогідратів та стабілізації органічних макромолекул кількості води і т. д.).
* 0 ступінь- Всі елементи фації правильної конфігурації, не зруйновані як в цілому, так і на окремих їх ділянках, ознаки руйнування текстури фації відсутні;
* I ступінь- Елементи фації мають початкові ознаки руйнування, не спостерігається деструктивних змін текстури;
* II ступінь- Візуалізуються численні зруйновані або змінені структури, є локальні порушення цілісності текстури;
* III ступінь- Всі елементи фації зруйновані, неможливо розрізнити окремі частини фації і структури, зразок являє собою безформну масу аморфного, часто забарвленого, матеріалу; зазначаються чіткі ознаки руйнування текстури.
Загалом моделювання утворюваних структур та застосування різних критеріїв оцінки сприятиме більш чіткій диференціації змін кристалоскопічної картини, хоча зайве "перевантаження" ними призведе до значного ускладнення процесу аналізу фації.
Як більш інформативний, ніж розглянута вище класична тезиграфія (Тарусінов Г. А., 1994), способу оцінки ініціюючої здатності біологічних субстратів нами застосовувалася порівняльна тезиграфія (Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К., 2002-2005; Мартусевич; А. К. зі співавт., 2000-2005), яка включає застосування додаткового контрольного зразка чистої базисної речовини з метою нівелювання різних екстернальних умов; дає можливість вказувати на напрям ініціації (активації або депресії кристалогенезу кристалоутворювача) та її вираженість.
Як уже зазначалося вище, оцінка тезиграфічних фацій представляє більшу скруту, ніж кристалоскопічних, що пов'язано з однорідністю морфології першої, а, отже, якщо щодо класичної кристалоскопії вже розроблена ідентифікаційна таблиця, і додаткові критерії відіграватимуть лише уточнюючу роль, то в тезиграфічному тесті вони виступають на чільні позиції (Нефедова Н. Би., Цивенкова Л. А., 1985; Мороз Л. А., Калікштейн Д. Би., 1986; Гугутишвілі Ц. Р., Сімонішвілі Л. М., 1990; Кідалов Ст. Н., Хадарцев А. А., Якушина Р. Н., 2004; Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К., 2003-2005). У зв'язку з цим пропонується класифікація критеріїв, які можуть бути використані при розгляді тезиграфічних фацій:
I. Основні критерії
- Основний тезиграфічний коефіцієнт Q
- Коефіцієнт поясності Р
- Коефіцієнт ініціації M
- співвідносний коефіцієнт N
ІІ. Додаткові критерії
рівномірність щільності фації (R);
ступінь пористості картини (I);
індекс хаотичності (ЇХ)
виразність окремих зон кристалізації (Z)

Виділення вищеописаних критеріїв дозволило сформувати єдиний математичний підхід до оцінки тезиграфічної фації (Мартусевич А. К. зі співавт., 2004, 2005), який базується на верифікації значущості кожного з показників у визначенні необхідного похідного коефіцієнта.

Пояснення до використаних розрахункових коефіцієнтів:
I. Основні критерії:
Q = A/B, де A – кількість центрів кристалізації в дослідному зразку, од.; B – кількість центрів кристалізації в контрольному зразку, од.
P = d1/d2, де d1 – радіус мінімального поясу кристалізації, мм; d2 – радіус максимального поясу кристалізації, мм.

ІІ. Додаткові критерії:
R - ступінь рівномірності щільності розподілу елементів тезиграфічної фації, бали;
I – ступінь пористості тезиграфічної фації, бали.

Проведені нами дослідження дозволили передбачити інформаційну значущість виділених вище коефіцієнтів під час ідентифікації тезиграфічної фації:
1. Основний тезиграфічний коефіцієнт Q– вказує на ступінь організації/дезорганізації кристалогенезу базисної речовини (у більшості випадків – розчину хлориду натрію ізоосмотичної концентрації, у природних нейтральних умовах схильного до утворення типових дегідратаційних структур) під впливом досліджуваного матеріалу.
2. Коефіцієнт поясності Р- Демонструє ступінь різнорідності молекулярних мас компонентів субстрату, що вивчається.
3. Ступінь пористості картини I- можливо, демонструє наявність конгломератів білків різного хімічного складу та властивостей на ступінь гідрофільності/гідрофобності, а також присутність жиророзчинних компонентів у водному розчині біосередовища.
4. Параметр R – підкреслює рівномірність розподілу структур за тезиграфічною фацією. Може вказувати на вміст компонентів, що не візуалізуються в матеріалі, здатних локально викликати пригнічення кристалогенезу. Може бути взаємопов'язаний із способом сушіння мікропрепарату.
За наведеними вище показниками оцінки тезиграфічної фації було сформульовано коротку градацію особливостей реєстрації складу тезиграфічної фації за додатковими критеріями оцінки (Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К., 2005):
1. Рівномірність щільності розподілу кристалічних структур по фації (R):
0 балів - повна хаотичність фації, наявність різнорідних елементів, порожнин, місць накопичення кристалічних структур, різна орієнтація утворень у полі зору.
1 бал - деяка згрупованість кристалів, намічаються одиничні ділянки правильної побудови, що займають менше ніж 30% від загальної площі поля зору, спрямованість фігур ще хаотична.
2 бали - спостерігаються чіткі "острівці" упорядкованості, що займають від 30% до 50% простору поля зору (у кожному з не менше ніж трьох вивчених), відстані між елементами в групах приблизно зрівнюються, реєструється деяка закономірність спрямованості структурних утвореньфації.
3 бали - досить значна кількість структурних елементів фації (понад 50% від загальної кількості) структуровані, "острівці" рівномірності переходять в ділянки порівняно великої площі. Усередині цих зон спостерігаються правильне розташування та рівномірність відстаней між окремими утвореннями. Закономірність спрямованості елементів та зональність виділяються досить чітко.
4 бали - більшість елементів фації структуровано (понад 75% від загальної кількості), решта поширюється "острівцями" по полю зору, частіше в маргінальній зоні. Відстань між окремими утвореннями практично постійні. Орієнтація елементів підпорядковується певної закономірності на всій поверхні поля зору.
5 балів - всі елементи тезиграфічної фації чітко структуровані по всьому зору, що підтверджується розглядом кількох полів. Розподіл на центральну, інтермедіатну та маргінальну зони чітко проглядається навіть за візуального безмікроскопного контролю, можна встановити межі останніх. Відстані між елементами картини постійні, орієнтація фігур правильна, закономірна по всій поверхні фації.
2. Ступінь прояву пористості фації (I):
0 балів - повна відсутність ознак появи пористості, однорідність картини, немає виділення "острівців" кристалів. Фації представляють єдиний "пласт" кристалічних утворень.
1 бал - наявність перших ознак неоднорідності, "дроблення" кристалоскопічної картини (виділено найбільш діагностично значущі принципи):
початок відокремлення груп елементів (менше 30% від усіх утворень, що займають менше ніж 30% площі поля зору);
деяка неоднорідність картини;
початок "дроблення" єдиного "пласту" кристалічних фігур.
2 бали - відзначається тенденція до "дроблення" фації, утворення "острівців" кристалів (виділені найбільш діагностично значущі принципи):
кількість відокремлених елементів в "острівцях" - від 30% до 50% від усіх структур, вони займають понад 30% поверхні поля зору фації;
виражена неоднорідність; зональність картини;
візуалізується процес "поділу" фації на ділянки, реєструються пояси кристалізації, що формуються, службовці межами останніх, в деяких випадках не на всіх протязі, товщиною в 1 кристал.
3 бали - спостерігаються виражені зміни у фації:
елементи в "острівцях" становлять від 50% до 75% від загального числа, займана ними поверхня понад 50% від поля зору (за кількома полями);
виражена неоднорідність, "зернистість" картини;
чітко проглядається процес "розчленування" фації у кількох полях зору;
пояси кристалізації досить чіткі, утворені більш ніж одним рядом кристалічних структур.
4 бали - достовірно проглядається ознаки появи пористості (виділено найбільш діагностично значущі принципи):
кількість згрупованих у осередках структур від 75% до 100% від загальної кількості останніх;
згруповані елементи займають все поле зору (при вивченні кількох, не менш ніж трьох полів зору);
пояси кристалізації утворені більш ніж одним рядом кристалів, є на всій поверхні поля зору, оточують "острівці" повністю.
5 балів - картина характеризується наступними морфологічними ознаками (виділено найбільш діагностично значущі принципи):
число згрупованих у осередках структур від 75% до 100% від загальної кількості останніх;
згруповані елементи займають все поле зору (при вивченні кількох, не менш ніж трьох полів зору);
дуже чітко виражена "дрібність", "зернистість" картини;
пояси кристалізації утворені більш ніж одним рядом кристалів, є на всій поверхні поля зору, оточують "острівці" повністю;
присутні "розлами" картини (крім фацій сироватки крові, для яких даний феномен є самостійнимидіагностичною ознакою).

Загалом застосування описаних вище критеріїв, показників та розрахункових коефіцієнтів дозволило нам алгоритмізувати процедуру вилучення інформаційного навантаження, прихованого в якісному та кількісному складі аналізованих субстратів.
Відповідно до даної схеми аналіз проводиться поетапно за двома основними напрямами – дослідження вільного кристалогенезу та ініційованого кристалоутворення, що дозволяє комплексно розглянути як безпосередню кристалоутворювальну здатність біорідості, так і її ініціаторний потенціал.

Мал. 2.3.Алгоритм оцінки тезіокристалоскопічної фації.

Отже, широке залучення математичного апарату дозволяє мультипараметрично оцінювати біологічні рідини за їх кристалогенезом, який дає великий обсяг інформації про їх фізико-хімічні властивості, і, побічно, якісно-кількісний компонентний склад, що, на нашу думку, становить особливе значення для клінічної, насамперед всього діагностичної, практики та фундаментальної науки.

2.4 Статистична обробка даних

Фактичний матеріал, отриманий при проведенні досліджень у всіх вивчених змивів, був опрацьований методом варіаційної статистики (Тюрін Ю. Н., Макаров А. А., 1998; Спадкоєм А. Д., 2004). Обчислювали середні величини (М), їхню стандартну помилку (m) та середньоквадратичне відхилення (). Показники вважалися достовірними при значеннях р<0,05 (по t-критерию Стьюдента и U-критерия Манна-Уитни). Зависимость между признаками оценивали при помощи коэффициента парной корреляции (r), его ошибки (mr) и уровня значимости различий (по t-критерию Стьюдента). Зависимость считалась сильной при r  >0,7 середньої у разі, якщо модуль значення парної кореляції лежить в межах 0,3-0,7. При знаходженні величини кореляції, меншої за модальним значенням 0,3 вона приймалася за слабку. Проводилося також обчислення достовірності знайденої парної кореляції (р).
Розрахунки виконувались серед електронних таблиць Microsoft Excel 2003, і ​​навіть з допомогою програмних статистичних пакетів Primer of biostatistics 4.03 і SPSS 11.0.

3. Результати дослідження.

Безпосередню оцінку результатів вільного кристалогенезу проводили за допомогою єдиної ідентифікаційної таблиці, що включає 5 основних класів кристалічних та аморфних речовин (морфометрія), а також додаткових критеріїв (ступінь деструкції фації – СДФ, вираженість її крайової зони (Кз) та пористість (I), рівномірність елементів (R)). Тезиграфічна фація аналізувалася із застосуванням системи основних (основний тезиграфічний коефіцієнт Q, коефіцієнт поясності Р) та додаткових параметрів (аналогічні використовуваним для класичної кристалоскопії).
Нами вивчена динаміка вільного та ініційованого кристалогенезу сечі у здорових та хворих на лейкоз мишей.

3.1. Морфологія сечі здорових та штучно заражених лейкозом мишей.

Проведений нами аналіз мікропрепаратів висушених зразків сечі дозволив встановити чіткі «патерни» для цих станів.
Виконувалося зіставлення кристалоскопічних картин, отриманих від здорових і хворих тварин.

Таблиця 3.1. Кристаллоскопічна характеристика мишей здорових та хворих на лейкоз.

Відповідно до даних, наведених у таблиці 3.1, очевидно, що спостерігаються чіткі варіації кристалоскопічної картини між контрольною та дослідною групою.

За результатами візуальної морфометрії встановлено, що мають місце суттєві особливості кристалоскопічної картини сечі хворих на лейкоз мишей у порівнянні зі здоровими тваринами, серед яких найбільш значущими є:
збільшення кількості дендритів у хворих мишей, за винятком повної відсутності лінійних полікристалічних структур, що є підтвердженням змін, зареєстрованих по одиночно-кристалічному компоненту;
концентрування аморфних утворень, що полягає в їхньому укрупненні та зниженні кількості, їх підкреслена відмежованість від великих кристалічних фігур;
збільшення ступеня деструкції фації (основний показник нестабільності кристалоскопічної фації);
зниження рівномірності розподілу кристалічних та аморфних утворень у мікропрепараті, що супроводжується дезагрегацією елементів фації, що виявляється у достовірному збільшенні ступеня осередку-стості (p<0,05).
За результатами оцінки кристалоутворюючої здатності сироватки крові мишей був сформований «патерн», характерний для здорових мишей та мишей, що мають лейкоз.

3.2. Основні критерії оцінки тезиграфічних фацій сироватки крові у мишей у нормі та при патології (лейкоз).

Дослідження передбачало як пошук якісних маркерів лейкозу, так і формування кількісних «патернів» тезиграфії. Сукупність діагностично значимих якісних параметрів складалася на підставі виявлення ознак патологічних змін у сечі хворих мишей.
Відповідно до даних, представлених на рис. 2.4, найбільш значимими диференціюючими показниками тезиграм сечі здорових мишей і мишей хворих на лейкоз при використанні в якості базисної речовини 10% розчину хлориду натрію є:
- характер ініціації біологічним середовищем базисної речовини (у здорових мишей – виражена активація кристалогенезу базисної речовини, у хворих мишей, що мають лейкоз – помірне інгібування);
- неоднаковий органіко-мінеральний склад біорідкості (переважання мінеральних компонентів – у здорових мишей та превалювання органічних сполук – у хворих на лейкоз мишей);
- Ступінь деструкції фації, яка трохи вище у представників дослідної групи;
- розширення крайової зони у фаціях хворих на лейкоз мишей при значній її вираженості у практично здорових осіб, що є передбачуваним маркером лейкозу.

Таблиця 3.2.Порівняльна тезиграфія сечі здорових мишей та мишей, що мають лейкоз (базисна речовина – 10% розчин хлориду натрію)

Примітка: «*» – достовірність відмінностей щодо контрольної групи p<0,05

Мал. 2.4. Зміна основних та додаткових критеріїв тезиграфії сечі у хворих на лейкоз мишей у порівнянні зі здоровими

3.3 Миші лінії AKR

Високолейкозна лінія мишей AKR отримана в результаті схрещування близькоспоріднених особин в 1928 р. Миші обох статей схильні до лімфоїдної лейкемії. Близько 91% самок гинуть від лейкозів до 300-го дня.

3.4 Динаміка розвитку лейкозу.

Мал. 3.1 Фація однорідна, немає виражених утворень – здорова миша X40

Мал. 3.2 Фація однорідна, з'являються перші ознаки дроблення крайової зони – перші ознаки розвитку лейкозу, вік 5 місяців. X40

Мал. 3.3 Неоднорідність структури, слабка вираженість крайової зони, прояв пористості – початок розвитку лейкозу. 7 міс. X40

Мал. 3.4 Початок появи лінійних дендритних структур – розвиток лейкозу. 8 міс. X40

Мал. 3.5 У структурі фації переважають лінійчасті та прямокутні дендритні структури – розвинений лейкоз, 9 міс. X40

Мал. 3.6 Виражена пористість фації, нерівномірна щільність розподілу елементів – сильно розвинений лейкоз. 13 міс. X40

3.5 Висновки

На підставі виявлення на фації сухої краплі сечі кількох якісних параметрів (не менше 3) дослідної біопроби можна виявити наявність патологічних змін або ступінь розвитку гострого лейкозу.
Використовуючи дані, наведені в таблиці 3.2, можна відзначити, що щодо коефіцієнтів Q і Р реєструються достовірні відмінності його значень тезиграмах сечі.
Відповідно до даних, представлених у таблиці 3.2, достовірність відмінностей між основними показниками тезиграфії підтверджує значимість виявлених за допомогою якісних ознак особливостей тезиграфічної фації сечі.
Таким чином, використання методу порівняльної тезиграфії сечі у здорових мишей та мишей, що мають лейкоз, дозволяє виявити якісні та кількісні маркери присутності лейкозу.
Тезіокристалоскопічний аналіз біорідин дозволяє здійснювати мультипараметричну оцінку метаболічної інформації, що міститься в них, що може бути корисно при індикації фізіологічних і патологічних станів людини і тварин. Кожна біорідість має свої особливості кристалогенезу, що пов'язано з диференційованістю їх хімічного складу і виконуваних функцій.
При вивченні кристалоскопічного компонента рекомендують використовувати єдину ідентифікаційну таблицю, а тезиграфічного - основні (коефіцієнти Q і Р) і додаткові (рівномірність розподілу картини, пористість і т. д.) критерії оцінки. Продовження досліджень слугуватиме розвитку уявлень про суб- та молекулярні механізми розвитку фізіологічних та патологічних реакцій організму людини.

Список використаної литературы:

1. Агафонов В. А., Багров С. Н. Дослідження стану склоподібного тіла методом висушування // Зб. наукових статей «Трансциліарна хірургія кришталика та склоподібного тіла». - Москва. - 1982. - С. 158-164.
2. Алексєєва О. П., Воробйов А. В. Кристалографія слини - новий неінвазивний метод діагностики H. pylori // Нижегородський медичний журнал. - 2003. - №2. - С. 73-78.
3. Антропова І. П., Габінський Я. Л. Кристалізація біорідкості в закритому осередку на прикладі слини // Клінічна лабораторна діагностика. – 1997. – №8. – С. 36-38.
4. Бабенко Г.А. Злоякісне зростання, метали та хелатуючі агенти. Біологічна роль мікроелементів - М: Наука, 1983.
5. Барер Г. М., Денисов А. Б., Михальова І. Н. із співавт. Кристалізація ротової рідини. Склад та чистота поверхні підкладки // Бюлетень експериментальної біології та медицини. - 1998. - Т. 126, №12. - С. 693-696.
6. Безпека життєдіяльності. Безпека технологічних процесів та виробництв (Охорона праці). Уч. посібник для вузів/П. П. Кукін та ін. - М., 1999.
7. Браун Г., Уолкен Дж. Рідкі кристали та біологічні структури. М.: Світ, 1982. - 198с.
8. Бубон Н. Т., Пузиревський К. Я. Мікрокристаллоскопічна реакція виявлення папаверину // Аптечна справа. - 1965. - №2. - С. 50-52.
9. Бузовер М. Е., Шішпор І. В., Шатохіна С. Н. з співавт. Морфометричний аналіз фацій сироватки крові// Клінічна лабораторна діагностика. – 2003. – №9. – С. 22-23.
10. Бистревська А. А., Дєєв Л. А. Залежність структуропобудови слізної рідини від виду подразника та якості підкладки // Матеріали III Всеросійської науково-практичної конференції «Функціональна морфологія біологічних рідин». - Москва. - 2004. - С. 17-19.
11. Вегман Є. Ф., Руфанов Ю. Г., Федорченко І. Н. Кристалографія, мінералогія, петрографія та рентгенографія. М.: Металургія, 1990. - 263с.
12. Волчецький А. Л., Рувінова Л. Г., Спасєнніков Б. А. з співавт. Кристалізація та кристалографія: медико-біологічні аспекти. Архангельськ, 1999. - 374с.
13. Волчецький А. Л., Спасєнніков Б. А., Агафонов Ст М. з співавт. Модифікація методу та комп'ютерний напрямок тезиграфічного аналізу // Екологія людини. - 1999. - №3. - С. 38-42.
14. Воробйов А. В., Воробйов П. В., Воробйова В. А. Визначення енергоінформаційної складової людини за допомогою методу чутливої ​​кристалографії // Тез. доповідей XI Московської міжнародної гомеопатичної конференції "Розвиток гомеопатичного методу в сучасній медицині". - Москва. -2001. - С. 202-207.
15. Воробйова В. А., Воробйов А. В., Замаренов Н. А. Закономірність формування кристалографічної картини при взаємодії біологічної рідини людини та гомеопатичного препарату з кристалоутворюючим розчином / Відкриття. – Диплом РАПН №231. (пріоритет від 8.06.2002).
16. Голубєв З. М. Живі кристали // Природа. - 1989. - №3. - С. 13-21.
17. Гордієнко А. Н., Курбатова Л. А., Філіппов А. Н. // Фізика кристалізації. - Калінін. - 1985. - Вип. 8. - С. 83-86.
18. Громова І. П. Кристаллоскопічний спосіб вивчення сироватки крові в токсиколого-гігієнічному експерименті методом «відкрита крапля» // Гігієна та санітарія. - 2005. - №2. - С. 66-69.
19. Гуляєв В. Г., Мартусевич А. К., Кошкін А. Н. Особливості та перспективи застосування кристалографічних методів дослідження у криміналістиці // Мат. міжвузівській науково-практичній конференції з Інтернет-участю "Актуальні питання криміналістики та експертної діяльності: проблеми та перспективи". - Кіров: КФ МДЮА. – 2004. – С. 35-39.
20. Гуляєва С. Ф., Мартусевич А. К., Помаскіна Т. В. Математичне моделювання результату ініційованого кристалогенезу слини як критерій ефективності прийому мінеральних вод // Екологія людини. - 2005. - №7. - С. 33-35.
21. Де Же В. Фізичні властивості рідкокристалічних речовин. М.: Світ, 1982. - 175с.
22. Дерябіна Н. І., Залеський М. Г. Зміст білкових компонентів у краплі сироватки крові при її висиханні // Вісник нових медичних технологій. - 2005. - Т. XII, №1. - С. 85-87.
23. Досон Р., Елліот Д., Елліот У. з співавт. Довідник біохіміка. М.: Світ, 1997. – 544с.
24. Замкова Н. Г., Зіненко В. І. Динаміка решітки іонних кристалів у моделі дихальних та поляризованих іонів. // ФТТ. – 1998. – Т. 40, № 2. – С. 350-354.
25. Зайцев В.В., Зайцева Н.Б., Усольцева Н.В. Текстури біологічних рідких кристалів хворих на інфаркт міокарда // Вісті Академії наук. Серія фізична - 1996. - Т.60, № 4 - С. 115-118.
26. Зіненко В. І., Замкова Н. Г. Дослідження фазових переходів і несумірної фази в кристалах АСВХ 4 методом Монте-Карло. // Кристалографія. – 2000. – Т. 45, № 3. – С. 513-517.
27. Зіненко В. І., Замкова Н. Г. Мікроскопічні розрахунки структурних фазових переходів типу зміщення (кристали зі структурою ельпасоліту) та типу порядок-безлад (сімейство сульфату калію). // Кристалографія. – 2004. – Т. 1, №1. - С. 38-45.
28. Іванов О. В., Шпорт Д. А., Максимов Є. Г. Мікроскопічні розрахунки сегнетоэлектрической нестійкості в перовскітних кристалах // ЖЕТФ - 1998. - Т. 114, № 1. - С. 333-358.
29. Калікштейн Д. Б., Мороз Л. А., Квітко Н. Н. із співавт. Кристалографічне дослідження біологічних субстратів // Клінічна медицина. - 1990. - №4. - С. 28-31.
30. Калікштейн Д. Б., Мороз Л. А., Черняков В. Л. Значення тезиграфічного методу дослідження сечі // Лабораторна справа. - 1981. - №2. - С. 79-81.
31. Калінін А.П. та ін Інформативність методу кристалічних нальотів сироватки крові при деяких ендокринних захворюваннях // Збірник праць Всеросійської науково-практичної конференції. "Кристалографічні методи дослідження в медицині", Москва - 1997. - С. 131-133
32. Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К. До методики тезіокристалоскопії біорідин // Клінічна лабораторна діагностика. – 2002. – №10. – С. 3.
33. Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К. Сучасні підходи до кристало-скопічної ідентифікації складу біологічних рідин // Екологія людини. – 2003. – №5. – С. 23-25.
34. Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К. Характеристика тезіокристалоскопічного портрета біологічних рідин організму людини в нормі та при патології // Вісник нових медичних технологій. – 2003. – Т. X, №4. – С. 57-59.
35. Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К., Колюватих Є. П. Про первинну та вторинну біокристалізації // Зб. наукових праць «Природознавство та гуманізм». - Томськ. - 2005. - Т. 2, №1. - С. 18-19.
36. Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К., Кошкін А. Н. Перспективи розвитку кристалографічних методів дослідження // Вятський медичний вісник. – 2003. – №3. – С. 6-11. Камакін Н.Ф., Мартусевич А.К. Характеристика тезіокристалоскопічного портрета біологічних рідин організму людини в нормі та при патології // Вісник нових медичних технологій. 2003. Т. X. № 4. С. 57-59.
37. Камишников В. С. Довідник з клініко-біохімічної лабораторної діагностики. У 2 т. Мінськ: Білорусь, 2000. Т.1. 495с.; Т.2. 463с.
38. Каркіщенко Н. Н. Основи біомоделювання. М.: Вид-во ВПК, 2004. - 608 с.
39. Карачунський А.І. Гострий лімфобластний лейкоз у дітей. Лекції з актуальних проблем педіатрії. За ред. В.Ф.Дьоміна, С.О.Ключникова., М: РДМУ; 2000.
40. Кідалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н. Тезіографічні дослідження крові та їх практичні можливості // Вісник нових медичних технологій. - 2004. - Т. XI, №1-2. – С. 23-25.
41. Коледінцев М. Н., Нечаєв Д. Ф., Майчук Н. В. Фізичні основи кристалографічного аналізу в офтальмології // Зб. тез. доповідей міжрегіональної науково-практичної конференції молодих вчених та студентів з міжнародною участю "Санкт-Петербурзькі наукові читання-2002". - СПб. – 2002. – С. 42-43.
42. Колотилов Н. Н., Бакай Е. А. Рідкокристалічна структура біологічних об'єктів // Молекулярна біологія. - 1980. - Вип. 27. - С. 87-96.
43. Кононенко Є. В., Миронов Є. В. Дислокаційно-дисклінаційні механізми перетворення текстури біорідини при агрегуванні // Зб. наукових праць 2-ї всеросійської науково-практичної конференції «Морфологія біологічних рідин у діагностиці та контролі ефективності лікування». - Москва. - 2001. - С. 21-26.
44. Кораго А. А. Введення в біомінералогію. СПб.: Надра, 1992. - 280с.
45. Кошкін А. Н., Мартусевич А. К., Лопатін М. А. Кристалоскопія біорідин організму людини як метод діагностики // Вісник Російського державного медичного університету. - 2002. - №1. - С. 134.
46. ​​Кристалографічні методи дослідження в медицині: Зб. наук. праць 1-ї Всеросійської науково-практичної конференції. - М., 1997.
47. Кристалоскопічний метод дослідження біологічних субстратів: Метод. рекомендації / Л. А. Мороз, І. Л. Теодор, В. Є. Брик із співавт. - М., 1981. - 9с.
48. Кузнєцов В. Д. Кристали та кристалізація. М., 1954. - 65с.
49. Кузнєцов А. В., Речкалов А. В., Смилишева Л. Н. Шлунково-кишковий тракт та стрес. Курган: Вид-во Курганського державного університету, 2004. - 254с.
50. Кузнєцов Н. Н., Вершиніна Г. А., Скопінов С. М. із співавт. Оптико-поляризаційні та рефрактометричні методи в оцінці ступеня тяжкості синдрому ендогенної інтоксикації у дітей // Зб. наукових праць 2-ї всеросійської науково-практичної конференції «Морфологія біологічних рідин у діагностиці та контролі ефективності лікування». - Москва. - 2001. - С. 30-33.
51. Кузнєцов Н. Н., Скопінов С. А., Вершиніна Г. А. із співавт. Кристаллоскопічний спосіб діагностики ендогенної інтоксикації у дітей. Патент РФ №2158923 від 04.03.1998 р.
52. Кунгуров Н. В., Кохан М. М., Кононенко Є. В. із співавт. Кристалографічні дослідження біологічних рідин у хворих на хронічні дерматози. Єкатеринбург, 1997. - 41с.
53. Курнишева Н. І., Дєєв А. І., Гризунов Ю. А. з співавт. Спосіб оцінки інволюційного офтальмоендотоксикозу шляхом флуоресцентного дослідження слізної рідини // Вісник офтальмології. - 2000. - №3. - С. 16-19.
54. Лобанов В. І. Мікрокристаллоскопічні реакції виявлення деяких похідних барбітурової кислоти // Журнал аналітичної хімії. - 1966. - №1. - С. 110.
55. Локтюшин А. А., Манаков А. В. Мінерали та життя в голографічній моделі речовини // Тез. 2-го Міжнародного семінару «Мінералологія та життя: біомінеральні взаємодії». - Сиктивкар. - 1996. - С. 10-11.
56. Мартусевич А. К. Кристалоскопічні методи дослідження у фізіології // Російський фізіологічний журнал ім. І. М. Сєченова. - 2004. - Т. 90, №8. - С. 18.
57. Мартусевич А. К. Інформаційна фізико-біохімічна теорія кристалізації як відображення морфології біологічних рідин// Бюлетень сибірської медицини. - 2005. - Т. 4. - Додаток 1. - С. 185.
58. Мартусевич А. К., Кошкін А. Н. Проблеми дослідницького підходу в кристалографії біорідин // Мат. третьої міждисциплінарної конференції з міжнародною участю НБІТТ-21. - Петрозаводськ. - 2004. - С. 50.
59. Мартусевич А. К., Кошкін А. Н. Особливості впливу умов проведення кристалізації біологічних рідин організму людини на результат тезіокристалоскопічного тесту // Зб. наук. статей молодих вчених та фахівців РФ, присвячений конференції ім. акад. Б. С. Гракова "Актуальні питання медицини та нові технології-2003". - Красноярськ. – 2003. – С. 154-157.
60. Мартусевич А. К., Пономарьова Г. Л. Математичні способи ідентифікації тезиграфічних фацій із застосуванням оцінного числа у хворих на поперековий остеохондроз // Клінічна лабораторна діагностика. - 2004. - №9. - С. 85-86.
61. Меньшиков В. В. Лабораторні тести у клінічній практиці. М.: Медицина, 1988. – 428с.
62. Мікрометод визначення вільних амінокислот у сироватці крові за допомогою хроматографії на папері // Медичні лабораторні технології. СПб., 1999. - Т. 2. - С. 106-108.
63. Мороз Л. А., Калікштейн Д. Б. Кристалографічний метод дослідження біологічних субстратів. Методичні рекомендації. М., 1986. - 24с.
64. Мушкамбаров Н. Н. Фізична та колоїдна хімія: Курс лекцій. М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001. - 384с.
65. Назаренко Г. І., Кішкун А. А. Клінічна оцінка результатів лабораторних досліджень. М.: Медицина, 2000. - 544 с.
66. Микільська М. Н., Гандель В. Г., Попков В. А. Виявлення сульфаніламідних препаратів методом кристалізації в тонкому шарі // Аптечна справа. - 1965. - №4. - С. 13-14.
67. ПБ 10-115-96. Правила влаштування та безпечної експлуатації судин, що працюють під тиском.
68. Пікін С. А. Структурні перетворення рідких кристалів. – М. – 1981. – 269с.
69. Плаксин Г. В., Комолова Г. С., Машков А. Є. з співавт. Стабілізуючий ефект ангіогеніну з молока на кристалічну структуру біологічних рідин // Бюлетень експериментальної біології та медицини. - 2003. - Т. 136, №10. - С. 406-409.
70. Плаксин Г. В., Римарчук Г. В., Бутенко С. В. з співавт. Клінічне значення кристалографічного та кристалоскопічного методу дослідження сечі // Клінічна лабораторна діагностика. - 1999. - №10. - С. 34.
71. Пригожин І., Стенгерс І. Порядок з хаосу/Пер. з англ. М.: Прогрес, 1986. - 429с.
72. Рапис Е. Г. Мікрокристаллооптичний спосіб використання склоподібного тіла людини і тварин у нормі та при гемофтальмі // Вісник офтальмології. - 1976. - №4. - С. 62-67.
73. Рапис Є. Г. Білок та життя. Самоорганізація, самоскладання та симетрія наноструктурних супрамолекулярних плівок білка. М.: «МІЛТА - ВКП ГІТ», 2003. - 368с.
74. Романов Ю. А. Теорія біологічних систем та проблема їх тимчасової організації // Проблеми хронобіології. - 1992. - №3-4. - С. 105-123.
75. Савіна Л. В. Кристалоскопічні структури сироватки крові в клініці внутрішніх хвороб: Автореф. дис... д. м. н. – Перм, 1992. – 40с.
76. Савіна Л. В. Кристалоскопічні структури сироватки крові здорової та хворої людини. Краснодар, 1999. - 238с.
77. Савіна Л. В. Структуроутворення сироватки крові в умовах вакууму // Клінічна лабораторна діагностика. - 1999. - №11. - С. 48.
78. Савіна Л. В., Конуєва О. В., Коротько Г. Г. із співавт. Кристалоскопічна діагностика порушень екзокринної функції підшлункової залози у хворих на хронічний панкреатит / IV Міжнародний конгрес "Парентеральне та ентеральне харчування". – Москва, 2000. – С. 98.
79. Савіна Л. В., Павлищук С. А., Самсигін В. Ю. із співавт. Поляризаційна мікроскопія у діагностиці обмінних порушень // Клінічна лабораторна діагностика. – 2003. – №3. – С. 11-13.
80. Салтиков А. Б. Морфологічні аспекти процесу утворення функціональних систем // Успіхи сучасної біології. - 2005. - Т. 125, №2. - С. 167-178.
81. Скальний А.В., Єсенін А.В. Моніторинг та оцінка ризику впливу свинцю на людину та навколишнє середовище з використанням біосубстратів людини // Токсикологічний вісник. №6, 1996. – С. 16-23.
82. Скопінов С. А. Комп'ютерне моделювання кристалізації солі з біорідин.// Кристалографічні методи дослідження в медицині. Зб. наук. праць 1-ї Всеросійської науково-практичної конференції. . М., 1997. . с. 33.36
83. Смотрова С.П., Чеснокова С.М. та ін Селеновий дефіцит в умовах забруднення навколишнього середовища // Матеріали III міжнародної науково-технічної конференції "Фізика та радіоелектроніка в медицині та біотехнології" - Володимир, 1998. - С. 304-305.
84. Собур С.В. Пожежна безпека електроустановок: Справ./С. Ст Собур.- М., 2003.
85. Сонін А. С. Введення у фізику рідких кристалів. М., 1989. - 369с.
86. Кошти індивідуального захисту: Справ. посібник/С. Л. Камінський. - Л., 1989.
87. Суровкін М. С., Шатохіна С. Н., Суровкін Ст А. з співавт. Зміни рівня молекул середньої маси та системної організації плазми крові у хворих похилого віку // Зб. наукових праць 2-ї всеросійської науково-практичної конференції «Морфологія біологічних рідин у діагностиці та контролі ефективності лікування». - Москва. - 2001. - С. 18-20.
88. Тарасевіч С. Ю. // Журнал технічної фізики. - 2001. - Т. 71, Вип. 5. - С. 123-125.
89. Тарусінов Г. А. Кристалографічне дослідження сечі в діагностиці та диференціальній діагностиці дифузних захворювань сполучної тканини у дітей // Педіатрія. - 1994. - №1. - С. 55-57.
90. Текуцька Є.Є., Соф'їна Л.І. та ін. Методи та практика контролю вмісту важких металів у біосередовищах. // Гігієна та санітарія – 1999-№4–С.72-74.
91. Тезіокристалоскопічне дослідження біологічних субстратів: Методичні рекомендації / Камакін Н. Ф., Мартусевич А. К. - Кі-ров, 2005. - 34с.

Для правильного планування вагітності, виявлення різних порушень репродуктивної системи, вибору оптимального методу контрацепції необхідно мати чітке уявлення про характер менструальної функції жінки, однією з ключових ланок якої є овуляція .

Менструальний циклжінки, що є періодом від 1-го дня однієї менструації до 1-го дня наступної менструації, в середньому триває 28-30 днів. Протягом першої половини менструального циклу в одному з яєчників дозріває фолікул, Що являє собою бульбашку, заповнений рідиною і містить яйцеклітину, що зріє. на 14-15 день циклувідбувається овуляція, яка полягає в тому, що з фолікула виходить дозріла яйцеклітина, готова до запліднення.

Зріла яйцеклітина після овуляції здатна до запліднення протягом 2 діб, а сперматозоїди мають запліднювальну активність протягом 4 діб після еякуляції. Отже, загальний період є найбільш ймовірним можливості зачаття складає 6 днів .

Для визначення періоду ймовірного зачаття використовують різні способи, що дозволяють визначити момент овуляції, до яких відносять оцінку характеру кристалізації слизу, що міститься в каналі шийки матки, або кристалізації слини; вимірювання температури у прямій кишці; дані ультразвукового дослідження; Вивчення рівня гормонів.

Так, у період овуляції слиз, що міститься в каналі шийки матки, після того, як вона нанесена на предметне скло і висушена, кристалізується з утворенням малюнка схожої на лист папороті. Цей процес кристалізації обумовлений низкою біофізичних та біохімічних змін, що відбуваються в цервікальному слизу.

Активність вироблення слизу залозами, які розташовані у стінках каналу шийки матки, перебуває під контролем рівня жіночих статевих гормонів. естрогенів. У міру наближення моменту овуляції концентрація та активність естрогенів зростає. Це призводить до збільшення кількості слизу, що виробляється, і до підвищення в ній солей натрію і калію. Отже, при висиханні слизу відбувається взаємодія солей з муцином, що містяться в ній, що і утворює малюнок, що нагадує лист папороті.

При вивченні мазка слизу під мікроскопом видно, що з 9-го дня циклу з'являються слабкі ознаки кристалізації. Далі ступінь виразності малюнка поступово посилюється, виразніше проявляється за 3–4 дні до овуляції і досягає найчіткіших обрисів у день овуляції. Після овуляції кристалізація зменшується. Малюнок стає нечітким і протягом 2-3 днів набуває «розмитого» вигляду.

Визначення часу овуляції за допомогою тесту кристалізації слизу шийки вимагає щоденного відвідування гінеколога. У цілому ряді випадків через патологічні зміни в шийці матки або при запальному процесі дослідження може бути утруднене або знижується достовірність результату, оскільки спотворюється картина кристалізації.

Зміни малюнка кристалізації під час менструального циклу, подібні до слизом шийки, відбуваються і в слині. Підвищення рівня естрогенів у міру наближення овуляції призводить до збільшення в слині, так само як і в слизу шийки, кількості солей натрію і калію. Їхня концентрація досягає максимуму в день овуляції, що і призводить до кристалізації слини при висушуванні. Достовірність тесту кристалізації слини визначення овуляції становить від 96% до 99%.

Для оцінки малюнка кристалізації слини і, відповідно, визначення часу овуляції використовують різні міні-мікроскопи, що є компактними і легкими оптичними приладами, зручними для застосування в повсякденних умовах.

У дні, коли зачаття ще неможливе(за 5-6 днів до овуляції та більше) або коли вона вже неможлива (через 3-4 дні після овуляції), висохла слина утворює точкоподібний нечіткий малюнок. За 3-4 дні до овуляції відзначається картина початку формування папоротеподібної структури малюнка. У міру наближення овуляції малюнок ставатиме чіткішим, що вказуватиме на високу ймовірність можливості зачаття. Протягом 2-3 днів після овуляції відбувається зменшення чіткості малюнка.

Запальні процеси в ротовій порожнині або в гортані можуть призвести до спотворення результату. Рекомендується використовувати ранкову слину або скористатися тестом не раніше, ніж за 2-3 години до їжі, чищення зубів, вживання алкоголю та куріння.

Якщо тривалість існування кожної мікроскопічної картини кристалізації як слизу шийки, так і слини, а також зміна її іншою картиною, має постійний і послідовний характер відповідно до фаз менструального циклу, то це свідчить про відсутність його порушень, а овуляція відбувається в належний термін і в кожен менструальний цикл. Тривале існування однієї й тієї картини кристалізації, відсутність чи невчасна зміна її інший картиною свідчить про порушення функції яєчників. І тут необхідно обов'язково звернутися до лікаря.

Для визначення овуляціїможна також скористатися температурним тестомякий заснований на тому, що в залежності від фази менструального циклу температура тіла змінюється певним чином. Найбільш точні дані про характер термічних змін, що відбуваються, можна отримати, вимірюючи температуру у прямій кишцівідразу після сну, у спокої, не встаючи з ліжка, щодня протягом усього менструального циклу. У першій фазі нормального менструального циклу температура зазвичай нижча 37°С. Буквально напередодні овуляції вона дещо знижується, а відразу після неї температура підвищується на 0,4–0,6°С порівняно з вихідною і стає, як правило, дещо вищою за 37°С. Коливання температури, що відбуваються, пов'язані зі зміною рівня естрогенів в першу і другу фази менструального циклу і підвищенням рівня прогестеронуу другу фазу. При цьому прогестерон, який починає вироблятися в яєчнику у вищій кількості саме після овуляції, впливає на центр терморегуляції, що призводить до деякого підвищення температури тіла. Якщо овуляції з якихось причин немає, то температура протягом усього циклу буде приблизно однаковою.

В рамках комплексної діагностики можливе застосування методів визначення рівня жіночих статевих гормонів (різних фракцій естрогенів та прогестерону), а також фолікулостимулюючого та лютеїнізуючого гормонів у крові. Концентрація цих гормонів змінюється певним чином щодня залежно від фаз менструального циклу, наявності чи відсутності овуляції.

За допомогою ультразвукового дослідження можна простежити за формуванням фолікула, визначити його розміри і встановити момент овуляції. Про наявність у яєчнику фолікула, що зріє, свідчить порожнинне утворення, що поступово збільшується до 2-3 см в діаметрі в першій половині менструального циклу і зникає в його середині. Зміна розмірів цієї освіти, як правило, чітко взаємопов'язана зі змінами картини кристалізації слизу, з величиною температури у прямій кишці та з рівнем гормонів. Ознакою зрілості фолікула та швидкого (1,5 - 2 діб) настання овуляції за даними УЗД є виявлення яйценосного горбка, який має вигляд невеликого світлого утворення, що примикає до внутрішньої поверхні фолікула. Про овуляцію свідчить як зникнення фолікула, а й одночасна поява рідини кзади від матки.

Вважається, що УЗД дозволяє отримати більш достовірну інформацію про дозрівання фолікулівпорівняно з гормональними тестами, оскільки кілька патологічно незрілих фолікулів сумарно можуть забезпечити нормальний рівень досліджуваних гормонів, що створюватиме хибне уявлення про нормальну течію менструального циклу.

В даний час УЗД є одним із важливих методів контролю процесу стимуляції овуляції та її ефективності. Так, при надмірній стимуляції спостерігається значне збільшення яєчників із формуванням у них множинних порожнинних структур.

Таким чином, використання різних методик визначення овуляції дає можливість контролювати характер менструального циклу і вибрати найбільш сприятливий період для зачаття при планованій вагітності. Використовуючи ці тести для запобігання настанню небажаної вагітності, можна вибрати найбільш раціональну схему контрацепціїабо просто виключити статеву активність у ті дні, коли зачаття найімовірніше. Застосовуючи перелічені тести, можливо також контролювати ефективність лікування, спрямованого на корекцію менструальної функції.

Крім того, за допомогою низки таких нескладних тестів, як вимірювання температури у прямій кишці або оцінка кристалізації слини, жінка може самостійно контролювати свою менструальну функцію.