Helmintologické metódy. Testovanie na enterobiázu a taeniazu

Na detekciu fragmentov helmintov sa výkaly skúmajú voľným okom, potom sa zmiešajú s vodou a skúmajú sa po malých častiach v Petriho miske na tmavom pozadí. Všetky podozrivé častice sa umiestnia na podložné sklíčko do kvapky vody a skúmajú sa pod lupou. Dennú porciu môžete umiestniť do valca s pridaním 5-10-násobného množstva vody. Po premiešaní sa nádoba nechá, kým sa suspendované častice úplne neusadia. Povrchová vrstva Kvapaliny sa vypustia a naleje sa čistá voda. Premytý sediment sa po malých častiach skúma voľným okom alebo pod lupou. Na detekciu vajíčok sa používajú mikroskopické vyšetrovacie metódy.

Metóda natívneho rozmazania. nie veľké množstvo výkaly z rôzne miesta Skúšobná dávka sa rozomelie na podložnom sklíčku v kvapke 50 % roztoku glycerolu, izotonického roztoku chloridu sodného alebo vody. Zmes sa prekryje krycím sklíčkom a pozoruje sa pod mikroskopom.

Plávajúca metóda Fulleborn. Jedna časť výkalov sa zmieša s 20 časťami nasýteného roztoku chloridu sodného ( špecifická hmotnosť 1.18), pridávané v malých dávkach. Veľké častice, ktoré vyplávajú na povrch, sa okamžite odstránia a zmes sa nechá 45 minút. Počas tejto doby vyplávajú na povrch vajíčka helmintov, ktoré majú nižšiu špecifickú hmotnosť ako roztok chloridu sodného. Povrchový film sa odstráni drôtenou slučkou s priemerom asi 1 cm a prenesie sa na podložné sklíčko na vyšetrenie pod mikroskopom.

Kalantariánska metóda. Účinnosť plávajúcej metódy sa zvyšuje pri nahradení chloridu sodného nasýteným roztokom dusičnanu sodného. V tomto prípade sa zmes uchováva 10-15 minút.

Povrchový film vytvorený po usadení zmesi fekálií roztokom chloridu sodného alebo dusičnanu sodného možno odstrániť aj podložným sklíčkom. Na tento účel sa nádoba naplnená až po okraj zmesou výkalov a soľného roztoku prikryje podložným sklom tak, aby jej spodný povrch bol v kontakte s kvapalinou. Po usadení sa sklo vyberie a rýchlo sa otáča nahor s povrchom, na ktorom sa nachádza film, a skúma sa pod mikroskopom.

Škrabanie špirálovitých záhybov (na identifikáciu vajíčok červov a onkosfér hovädzia pásomnica) urobte ráno pred odchodom na toaletu. Pomocou drevenej špachtle namočenej vo vode alebo 50% roztoku glycerínu zoškrabte okolo konečníka. Výsledný materiál sa prenesie na podložné sklíčko v kvapke vody alebo 50% roztoku glycerolu a prezerá sa pod mikroskopom. Špachtľu je možné nahradiť navlhčeným vatovým tampónom, ktorým sa perianálna oblasť utrie a potom dobre opláchnite vo vode. Voda sa odstredí a sediment sa skúma pod mikroskopom.

Behrmannova metóda (na identifikáciu lariev). Kovová sieťka s nanesenými 5-6 g výkalov je upevnená na sklenenom lieviku vloženom do statívu. Na spodnom konci lievika je umiestnená gumová trubica so svorkou. Lievik je naplnený vodou zohriatou na t° 50°, takže Spodná časť sieťka obsahujúca výkaly prišla do kontaktu s vodou. Larvy sa aktívne pohybujú do vody a hromadia sa v spodnej časti gumenej trubice. Po 4 hodinách sa kvapalina vypustí do centrifugačných skúmaviek, odstredí sa a sediment sa skúma pod mikroskopom.

Analýza spúta, nosového hlienu a vaginálny výtok na identifikáciu vajíčok pľúcnej trematódy paragonimus, lariev škrkavky a ankylostomózy, vajíčok červotoča a fragmentov echinokokového mechúra. Časť hlienu (výtok), ktorá sa skúma, sa rozotrie na sklo a pozoruje sa makroskopicky na čiernobielom pozadí a potom pod mikroskopom. K testovanému materiálu môžete pridať 25% roztok antiformínu, dôkladne pretrepať a nechať pôsobiť 1-1,5 hodiny, aby sa hlien rozpustil. Zmes sa odstredí a zrazenina sa skúma pod mikroskopom.

Analýza duodenálnej a žalúdočnej šťavy na detekciu vajíčok motolíc pečene, háčkovitých červov a lariev Strongyloides. Všetky tri časti získaného obsahu dvanástnika sa odstredia a sediment sa skúma pod mikroskopom. Tiež skúmajú.

Výskum tkanív. Na identifikáciu lariev Trichinella sa kúsky bioptického svalu opatrne rozdelia na vlákna, stlačia sa medzi sklá kompresora (hrubé sklá so skrutkami) a skúmajú sa pod mikroskopom pri tmavšom svetle. Na identifikáciu cysticerkov sa svaly vypreparujú pitevnými ihlami, izolovaná vezikula sa zbaví okolitého tkaniva, vtlačí sa medzi dve podložné sklíčka a vyšetrí sa pod lupou.

Krvný test (na zistenie lariev filaria). Preskúmajte visiacu kvapku na krycom skle pokrytom vazelínou. Môžete zmiešať 0,3 ml krvi s 10-násobným množstvom 3% roztoku. Zmes sa odstredí a zrazenina sa skúma pod mikroskopom. Na obohatenie liečiva na 1 ml žilovej krvi pridajte 3 ml 2 % roztoku formalínu alebo 5-násobok množstva tekutiny pozostávajúcej z 95 ml 5 % roztoku formalínu, 5 ml octová kyselina a 2 ml koncentrovaného alkoholového roztoku hematoxylínu. Zmes sa odstredí, zrazenina sa premyje destilovanou vodou a skúma sa pod mikroskopom. Na odlíšenie odlišné typy filárie sa vyšetrujú nátermi zafarbenými metódou Giemsa-Romanovského.

Metódy imunologická diagnostika. Používajú sa aj alergické diagnostické testy (pozri) s príslušným typom helmintov (aglutinácia, fixácia komplementu).

Helmintologické metódy výskumu. Ryža. Vajcia helmintov. 1-10 vajec škrkavky(háďatká): 1 - 3 - škrkavky (1 - oplodnené vajíčko, 2 - oplodnené vajíčko bez bielka, 3 - neoplodnené vajíčko); 4 - mačacie škrkavky; 5 - mäsožravé škrkavky; 5 - pinworms; 7 - bičíkovec; 8 - tominx; 9 - háďatka; 10 - trichostrongylid. 11-15 - vajcia pásomnice(cestódy): 11 - pásomnica hovädzia; 12 - trpasličí pásomnica; 13 - pásomnica potkana; 14 - tekvicová pásomnica; 15 široká páska. 16 - 24 - vajíčok motolíc (trematód): 16 - motoliek (schistozómov) japonských; 17 - trematódy (schistozómy) moč - sexuálne; 18 - trematódy (schistozómy) Munson; 19 - trematódy (parogonymus) pľúcne; 20 - trematódy (opisthorchis) sibírske (mačky); 21 - trematódy (clonorchis) chinensis; 22 - črevné trematódy (metagonimus); 23 - trematódy (fascioly) pečene; 24 - trematódy (dikrocélium) kopijovité.

Efektívna a pohodlná metóda helmintologického výskumu je štúdium hustého mazu podľa Kato, ktorého podstatou je detekovať vajíčka hlíst v hustom nátere výkalov, vyčistenom glycerínom a zafarbenom malachitovou zelenou. Zloženie Kato zmesi - 6 ml 3% vodný roztok malachitová zeleň, 500 ml glycerínu, 500 ml 6% roztoku fenolu. Roztok je stabilný a môže sa skladovať pri izbovej teplote. Na prípravu prípravkov sa kúsky výkalov veľkosti hrášku nanesú na podložné sklíčko, prikryjú sa filmom hydrofilného celofánu uchovávaného v Kato zmesi počas 24 hodín a pritlačia sa na sklo, aby Rovnomerné rozdelenie materiál. Nátery vyčistené počas 40 až 60 minút sa skúmajú pod mikroskopom. Zistené vajíčka helmintov sa spočítajú a morfologické charakteristiky určiť ich druh. Metóda umožňuje identifikovať vajíčka škrkaviek, bičíkovcov, pásomníc, motoliec a v menšej miere aj hákovitých a trpasličích pásomníc.

Tiež široko používaný metódy obohacovania. Princípom flotačných metód je suspendovanie výkalov v soľnom roztoku, ktorý má vyššiu relatívnu hustotu v porovnaní s vajíčkami helmintov, v dôsledku čoho vyplávajú na povrch. Obsah povrchového filmu sa skúma pod mikroskopom. Ako obohacovacie zmesi sa používajú tieto roztoky: kuchynská soľ - 400 g v 1 litri vody (relatívna hustota podľa Fulleborna -1,18); dusičnan sodný - 1 kg v 1 litri vody (relatívna hustota podľa "Kalantaryan-1,38); dusičnan sodný - 900 g a dusičnan draselný - 400 g v 1 litri vody (relatívna hustota podľa Brudastova a Krasnonosa - 1,48). roztoky sa varia a ochladzujú.
Pre výskum pridajte 5-10 g fekálií do pohára alebo kameninového pohára, pridajte 100-200 ml soľný roztok a dôkladne premiešame. Potom sa plávajúce veľké častice odstránia drevenou špachtľou alebo naberačkou vyrobenou z papiera alebo lepenky a ihneď sa na povrchovú fóliu priloží široké sklíčko tak, aby soľný roztok a sklíčko boli v úplnom kontakte. Po ponechaní zmesi na 30-40 minút sa sklíčko vyberie, umiestni sa pod mikroskop s filmom smerom nahor a celý povrch sa starostlivo preskúma. Aby ste predišli vysychaniu, môžete pridať 2-3 kvapky 50% roztoku glycerínu. Povrchovú fóliu je možné odstrániť aj drôtenou slučkou. Účinnosť flotačných metód sa zvyšuje so zvyšujúcou sa relatívnou hustotou soľných roztokov. Pomocou týchto metód je možné zistiť vajíčka háďatiek, pásomníc a motolíc.

Na detekciu vajec vo výkaloch sa používa metóda sedimentácie Krasilnikov. Feces sa zmiešajú s 1% roztokom čistiaceho prostriedku ( prací prášok„Lotus“ atď.) v pomere 1:10, kým sa nevytvorí suspenzia. Pod vplyvom pracieho prostriedku sa rozpúšťajú rôzne zložky výkalov (bielkoviny, tuky, tkanivové prvky). Po 30 minútach sa obsah skúmavky pretrepáva 1-2 minúty a potom sa 5 minút odstreďuje. Zo sedimentu sa pripravujú prípravky a skúmajú sa pod mikroskopom.
IN terénne podmienky, ako aj pri hromadných vyšetreniach populácie na napadnutie hlístami je vhodné použiť metódu hrubého náteru Kato. IN lôžkových podmienkach Pri vyšetrovaní pacientov je vhodnejšie použiť najúčinnejšie flotačné metódy. Pri použití týchto metód pri mikroskopovaní je vhodné spočítať vajíčka nájdené v preparáte. Ak je vzorka alebo objem odobratý na štúdium výkalov štandardizovaný (napríklad 1 čajová lyžička alebo polievková lyžica) a konštantný jednotný objem soľných roztokov, možno zhruba posúdiť intenzitu invázií. Toto kvantitatívne účtovanie môže byť užitočné pri zdôvodňovaní predpísanej liečby a pri hodnotení účinnosti odčervenia. Okrem toho sa na stanovenie intenzity infekcie môžu použiť iné presnejšie kvantitatívne metódy, najmä metóda Stoll.

Na diagnostiku teniarhynchózy a enterobiázy Používa sa metóda štúdia perianálno-rektálnych škrabancov. Pomocou drevenej špachtle namočenej v 50% roztoku glycerínu zoškrabte perianálne záhyby ráno pred defekáciou po obvode konečník A spodné časti konečníka. Výsledný materiál očistený od špachtle s okrajom krycieho sklíčka sa vloží na podložné sklíčko do kvapky 50% roztoku glycerolu, prikryje sa krycím sklíčkom a skúma sa pod mikroskopom. Môžete tiež preskúmať prúžok celulózovej pásky, ktorý sa najskôr pritlačí lepiacou stranou k perinaálnym záhybom, potom sa umiestni na podložné sklíčko a mikroskopicky sa skúma.

Detekcia lariev háďatka vo výkaloch pomocou Bermanovej metódy. Metóda je založená na termotropných vlastnostiach lariev. Na výskum vezmite 1 polievkovú lyžicu výkalov a umiestnite ju do kovovej siete alebo sieťky z niekoľkých vrstiev gázy na drôtenom ráme. Pletivo je inštalované v lieviku namontovanom na statíve. Na lieviku je pripevnená gumová trubica so svorkou. Po zdvihnutí pletiva sa lievik naplní vodou (teplota +40°...+50°C) tak, aby spodná časť sieťky bola ponorená do vody. Larvy z výkalov aktívne migrujú do teplá voda a usadzujú sa, hromadia sa v spodnej časti lievika. Po 2-4 hodinách sa svorka otvorí, voda sa vypustí do centrifugačnej skúmavky a odstreďuje sa 2-3 minúty. Potom sa supernatant vypustí, sediment sa prenesie na podložné sklíčko a vyšetrí sa pod mikroskopom, kde sa nachádzajú mobilné larvy pôvodcu strongyloidózy.

Haradova metóda a Mori umožňuje rozlíšiť medzi larvami ankylostomie a necator. Larvy háčikovca sa kultivujú na filtračnom papieri. Na tento účel sa na prúžky filtračného papiera s rozmermi 12 x 1,5 cm nanesie 0,5 g čerstvého trusu odobraného pacientovi najneskôr 1 hodinu po defekácii, pričom oba konce prúžku zostanú čisté. Jeden koniec prúžku je ponorený do skúmavky, z ktorej štvrtina je naplnená vodou, a druhý je upnutý zátkou. Skúmavky sa umiestnia do termostatu pri teplote +26... + 28°C. Larvy, ktoré sa vyvinú z vajíčok, zostúpia cez filtračný papier a usadia sa na dne skúmavky. Po 5-6 dňoch sa prúžok papiera odstráni a kvapalina zostávajúca v skúmavke sa skúma pod lupou alebo sa odstredí. Zrazenina vytvorená počas odstreďovania sa skúma pod svetelným mikroskopom. Pri použití štvorstenných sklenených nádob (veľkosť 15xxx7 cm) namiesto skúmaviek so 4 papierovými pásikmi pripevnenými na stenách sa zvyšuje účinnosť analýz (G.M. Maruashvili et al., 1966).

Testovacie metódy na schistosomiázu . Vyšetrenie výkalov - časť výkalov sa zmieša s 250 ml vody, prefiltruje sa cez 3 vrstvy gázy do kónickej nádoby, ktorá sa po vrch naplní vodou. Po 30 minútach sa tekutá vrstva vypustí a k sedimentu sa pridá čerstvá časť vody. Zrazenina sa premýva, kým sa nezíska číry supernatant a skúma sa pod mikroskopom.

Larvoskopická metóda - 20 – 25 g výkalov sa umiestni do Erlenmeyerovej banky so sklenenou trubicou priletovanou na boku, smerujúcou nahor, a premyje sa voda z vodovodu. Potom sa banka prikryje tmavým papierom a na svetle sa nechá spájkovaná sklenená trubica pri teplote +25...+30°C. Vyliahnuté miracidie sú sústredené v menisku v laterálnej trubici, kde ich možno vidieť lupou alebo voľným okom. Vyšetrenie moču – 100 ml moču zozbieraného medzi 10. a 14. hodinou alebo denná porcia sa usadzuje a následne centrifuguje pri 1500 ot./min. Výsledný sediment sa aplikuje* na podložné sklíčko a skúma sa pod mikroskopom. WHO odporúča metódu filtrovania celej vzorky moču. Po filtrácii sa filtre ošetria formaldehydom alebo sa zahrejú (na usmrtenie vajíčok) a potom sa navlhčia vodným roztokom ninhydrínu. V sušených prípravkoch získavajú vaječné embryá fialovú farbu.

Aplikácia imunologického výskumné metódy diagnostiky schistosomiázy sú spojené s ťažkosťami, pretože dospelé schistozómy a ich vajíčka obsahujú veľké množstvo antigénov, ktoré spôsobujú imunitné reakcie, ktoré nie sú druhovo špecifické (D. Bradley, 1979).

V našej krajine sa vyrába na stanovenie imunologických reakcií na helmintiázu celý riadokštandardná diagnostika. Praktické využitie mať alergie kožný test na echinokokózu a alveokokózu, RLA s echinokokovým antigénom, RSC v chlade, precipitačná reakcia v chlade v rôznych modifikáciách (prstencová precipitácia, precipitácia v skúmavkách alebo kapilárach, ktoré sú umiestnené s antigénmi trichinelózy, cysticerkózy a migroascariózy). Štandardné diagnostické súpravy na vykonávanie vyššie uvedených sérologických reakcií vyrábajú podniky vyrábajúce bakteriálne prípravky. Výrobca pribalí k vyrobeným diagnostickým súpravám podrobné pokyny o pravidlách skladovania, dobe použiteľnosti lieku a návode na použitie príslušných antigénov s technikou stagingu reakcie.

IN posledné roky Zoznam sérologických reakcií používaných na diagnostiku helmintiázy sa výrazne rozšíril. Na tieto účely sa využívajú tieto reakcie: RIGA, nepriama imunofluorescencia (RIF), imunodifúzia v géli (RID), protiimunoelektroforéza (CIEF), CEMA. Tieto reakcie možno použiť na askariózu, toxokarózu, trichinelózu, ankylostomózu, filariózu, echinokokózu a alveokokózu, opisthorchiázu, schistosomiázu, paragonimiázu. Na tieto reakcie sa však u nás štandardné diagnostické testy nevydávajú a nie je regulovaná technika ich diagnostiky. Jednotlivé laboratóriá, najmä vedecké, samostatne pripravujú špecifické antigény a používajú ich v rôznych modifikáciách. Opis týchto metód je široko prezentovaný v literatúre a nie je striktne jednotný. Interpretácia údajov z imunologickej analýzy by mala byť založená na štúdiu dynamiky imunitnej odpovede, berúc do úvahy úroveň špecifickosti a citlivosti každej použitej metódy. sérologickej reakcie. Preto je pri stanovení diagnózy, ako aj pri séroepidemiologických prieskumoch populácie vhodné použiť niekoľko najcitlivejších reakcií. Z tohto pohľadu sa dobre osvedčili reakcie VIEF a REMA, ktoré sa líšia vysoká citlivosť a dosť vysoká špecifickosť (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negreanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978 atď.). Účinnosť REMA bola testovaná na amébiózu, leishmaniózu, trypanozomiázu a toxoplazmózu (G. A. Ermolin, 1980).

Kapitola III. Diagnóza helmintiázy a metódy helmintologického výskumu

Je potrebné vyšetriť na helmintiázu všetkých pacientov, o ktorých žiadajú zdravotná starostlivosť, a najmä pacienti, ktorí sa obracajú na pediatra, terapeuta a neurológa so sťažnosťami na vedľajšie účinky gastrointestinálny trakt, nervový systém a s anémiou. Ak lekár nie je vždy schopný použiť laboratórne metódy výskumu, potom každý zdravotnícky pracovník poskytujúci starostlivosť v ambulancii alebo nemocnici je povinný pohovor s pacientom o izolácii helmintov.

Ak sú v príslušných kapitolách uvedené klinické indikácie, diagnóza by mala byť objasnená pomocou laboratórne metódyštúdie na helmintiázy.

Vzhľadom na prevahu črevné helmintiázy najväčší praktický význam má vyšetrenie stolice.

Metódy testovania stolice na helmintiázu

Stolica sa dodáva do laboratória v čistej sklenenej nádobe (asi štvrtina šálky stolice odobratej z rôznych miest v jednej porcii); Pri rutinnom vyšetrení je dovolené dodávať stolicu do laboratória v zápalkových škatuľkách alebo dlahových krabičkách.

Na kontrolu odčervovania sa dodáva celá časť výkalov zozbieraných po podaní (podľa predpisu lekára). antihelmintikum a preháňadlo (vo veľkých uzavretých sklenených nádobách, vedierkach).

Mikroskopické vyšetrenie stolice je základom diagnostiky črevnej helmintiázy; vždy by mu malo predchádzať celkové makroskopické vyšetrenie trusu na zistenie segmentov veľkých pásomníc, škrkaviek, škrkaviek atď.

Stolica by mala byť čerstvá alebo konzervovaná (v 5% roztoku formaldehydu), pretože sušenie výrazne mení štruktúru vajec. Okrem toho, keď stoja výkaly, rýchly vývoj vajíčka niektorých helmintov (napríklad hákovitých), čo sťažuje diagnostiku.

Podľa pokynov Ministerstva zdravotníctva ZSSR je potrebné súčasne vyšetrovať stolicu Fullebornovou metódou a natívnym náterom.

Natívny náter

Natívny náter: malý kúsok trusu (asi ako hrášok) odobratý zápalkou, sklenenou alebo drevenou tyčinkou z rôznych miest v dodanej porcii sa dôkladne rozomelie na podložnom sklíčku v kvapke 50% roztoku glycerolu resp. vo fyziologickom roztoku alebo vo vode. Prikryte krycím sklíčkom, pričom naň zľahka zatlačte (preparovacou ihlou). Náter by mal byť tenký, priehľadný a jednotný. Používa sa len ako doplnok k iným metódam, ktoré poskytujú obohatenie lieku. Mali by sa preskúmať aspoň dva lieky.

Na detekciu lariev helmintov (ako aj ich vajíčok) sa natívny náter urobí nasledovne (podľa Shulmana): 2-3 g výkalov sa dôkladne premiešajú „zatočením“ sklenenej tyčinky do emulzie s päť- násobok množstva čistej vody alebo fyziologického roztoku. Počas miešania sa larvy hromadia v blízkosti sklenenej tyčinky, preto sa ihneď po skončení miešania kvapka emulzie rýchlo prenesie sklenenou tyčinkou na podložné sklíčko, prikryje sa krycím sklíčkom a vyšetrí sa. S. D. Lyubchenko (1936) dokázal, že metóda krútenia je účinnejšia ako metóda náteru, najmä pokiaľ ide o vajíčka škrkavky. Na základe práce S. D. Lyubchenka považujeme za vhodné nahradiť metódu rozmazania metódou krútenia.

Fulleborn metóda

Fulleborn metóda: 5-10 g výkalov odobratých z rôznych miest sa umiestni do nádoby s objemom 50-100 ml a dôkladne sa rozotrie sklenenou alebo drevenou tyčinkou v nasýtenom roztoku. stolová soľ(400 g tejto soli sa rozpustí v 1 litri vody, zahreje sa do varu a prefiltruje sa cez vrstvu vaty alebo gázy; roztok sa používa za studena: merná hmotnosť 1,2). Roztok sa pridáva postupne, kým sa nezíska homogénna suspenzia a celkové množstvo pridaného roztoku by malo byť približne 20-násobné väčšie množstvo výkaly. Na miešanie výkalov Fulleborn odporúčal použiť čajové poháre, ale vhodnejšie je pripraviť suspenziu v nádobách na masť s objemom 50 – 100 ml, pričom na každú analýzu použite dve nádoby (alebo v pohároch s objemom 100 ml).

Ihneď po príprave suspenzie sa veľké častice, ktoré vyplávali na povrch, odstránia z povrchu špachtľou, kovovou naberačkou alebo kúskom čistého papiera ( rastlinné útvary, nestrávené zvyšky jedla a pod.), potom sa zmes nechá 1-1,5 hodiny odstáť. Po uplynutí tejto doby sa celý film odstráni z povrchu zmesi dotykom drôtenej alebo platinovej slučky (plochej) s priemerom nie väčším ako 1 cm, ohnutej v pravom uhle; Film sa pretrepe na sklíčko a prikryje sa krycím sklíčkom. Nakvapkajte 3-4 kvapky pod každé krycie sklíčko (18x18 mm). Celkovo by sa mali pripraviť aspoň 4 prípravky (na každý prípravok jedno krycie sklo). Slučka sa zahrieva nad ohňom a po každej analýze sa premyje vodou.

Pomocou metódy Fulleborn sa rýchlo a jednoducho zistia vajíčka všetkých háďatiek (s výnimkou vajíčok neoplodnených škrkaviek) a vajíčka trpasličích pásomníc.

Bermanova metóda sa používa na vyšetrenie trusu lariev helmintov (na strongyloidózu). Táto metóda je nasledovná: 5 g výkalov na kovovej sieťke (na tento účel je vhodné sitko na mlieko) sa umiestni na sklenený lievik pripevnený na statíve. Na spodnom konci lievika je umiestnená gumová trubica so svorkou.

Sieťka s výkalmi sa zdvihne a do lievika sa naleje voda zohriata na približne 50° tak, aby spodná časť sieťky s výkalmi bola ponorená do vody. Larvy sa aktívne pohybujú do vody a hromadia sa v spodnej časti gumenej trubice. Po 2-4 hodinách sa svorka otvorí a kvapalina sa vypustí do jednej alebo dvoch centrifugačných skúmaviek.

Po odstredení počas 1-2 minút vrchná časť kvapalina sa rýchlo scedí a sediment sa po kvapkách umiestni na podložné sklíčka a skúma sa pod krycími sklíčkami alebo rozotrie tenká vrstva na 2-3 veľké sklá a potom vyšetrovať bez krycích skiel.

Bermanova metóda sa používa aj na testovanie pôdy na prítomnosť lariev machovca.

Stollova metóda

Na určenie intenzity invázie sa používa metóda Stoll. Decinormálny roztok lúhu sodného sa naleje do špeciálnej sklenenej banky po značku 56 cm3 a potom sa pridávajú výkaly, kým hladina kvapaliny nedosiahne 60 cm3, t.j. 4 cm3. Po pretrepaní sklenenými guľôčkami sa odoberie 0,075 ml zmesi na vyšetrenie a vyšetrí sa pod jedným alebo dvoma obyčajnými krycími sklíčkami. Výsledné množstvo sa vynásobí 200, čím sa získa počet vajíčok obsiahnutých v 1 cm 3 výkalov.

Štúdium obsahu dvanástnika

Dvanástniková šťava a žlč z močového mechúra získané obvyklým spôsobom pomocou sondovania (a žlče močového mechúra a po reflexe zo žlčníka) sa dôkladne premiešajú v rovnakom objeme etyléter; zmes sa odstredí, potom sa sediment skúma pod mikroskopom. Okrem sedimentu, mikroskopické vyšetrenie vločky plávajúce v kvapaline, ktoré môžu obsahovať vajíčka helmintov, sú nevyhnutne vystavené. Pri testovaní žalúdočnej šťavy a zvratkov na vajíčka helmintov môžete použiť rovnakú techniku.

V prípade podozrenia sa má vykonať vyšetrenie duodenálnej šťavy a obsahu žalúdka helmintické ochorenia pečeň, žlčník (opistorchiáza, fasciolóza, dikrocelióza) a dvanástnik(strongyloidóza).

Vyšetrenie spúta

Spútum sa rozomelie na sklenenej platni, pevne sa prikryje ďalšou sklenenou platňou a skúma sa voľným okom na svetlom a čiernom pozadí, ako aj pod lupou v prechádzajúcom svetle. Jednotlivé kúsky spúta („hrdzavé“ nahromadenia, odrezky tkaniva a pod.) sa nanesú v tenkej vrstve na podložné sklíčko, pevne prikryjú krycím sklíčkom a vyšetria sa pri nízkej a veľké zväčšenie mikroskop

a) Na diagnostiku kožnej cysticerkózy, podkožného tkaniva alebo svalu sa asepticky vyrezaný kúsok príslušného tkaniva vyšetrí najskôr voľným okom. Oblasti tkaniva sa pohybujú od seba pomocou pitevných ihiel, aby boli viditeľné voľným okom vezikula - cysticercus (foto A); jeho dĺžka je 6-20 mm, šírka 5-10 mm. Keď sa zistí vezikula podozrivá z cysticerku, rozdrví sa medzi dve podložné sklíčka a vyšetrí sa pod mikroskopom. Cysticercus (Cistycercus cellulosae) je determinovaný prítomnosťou skolexu so štyrmi prísavkami a korunou háčikov (foto B).

Fotografia. A - cysticerci so scolexom otočeným smerom von; B - Hlava pásomnice bravčovej.

b) Na diagnostiku trichinelózy sa asepticky vyrezaný kúsok svalu (biceps alebo gastrocnemius) opatrne rozdrví v 50% glycerínovom roztoku na najjemnejšie vlákna pomocou pitevných ihiel. Rozdrvené svaly sú stlačené medzi dvoma sklenenými sklíčkami a skúmané pod mikroskopom s nízkym výkonom v zatemnenom zornom poli. Testovanie svalov na trichinelózu sa odporúča najskôr 8. deň choroby. Larvy trichinel sa nachádzajú vo svaloch v stočenej polohe: sú uzavreté v kapsulách citrónového tvaru.

Fotografia. A - Larvy Trichinella vo svaloch; B – Kalcifikované kapsuly Trichinella.

röntgen

Najčastejšie sa fluoroskopia používa na diagnostiku echinokokózy a menej často cysticerkózy. Cysticerci sa zisťujú skiaskopiou až po kalcifikácii (v prípadoch dlhodobá choroba). V posledných rokoch sa skiaskopia používa aj na diagnostiku askariózy v ranom štádiu lariev a čiastočne aj v črevnom štádiu.

Počas obdobia migrácie lariev škrkavky (a ankylostomózy) sa v pľúcach zisťujú nestabilné, niekedy viacnásobné zápalové ložiská; súčasne sa v krvi objavuje výrazná eozinofília.

Sexuálne zrelé škrkavky sú jasne viditeľné na fluoroskopii čriev postihnutých jedincov. Táto metóda, napriek svojej zložitosti a ťažkopádnosti, by sa mala používať ako doplnková metóda na diagnostikovanie askariózy v prípadoch s negatívnym skatologickým rozborom. Podľa E. S. Geselevicha zo 180 pacientov s ascaridózou identifikovaných fluoroskopiou sa u 54 nenašli v stolici žiadne vajíčka ascaris (pozri).

Helmintologické metódy výskumu. Metódy diagnostiky hlístových infekcií sa delia na priame, založené na priamej detekcii samotných hlíst alebo ich fragmentov, ako aj lariev a vajíčok hlíst (metódy na vyšetrenie výkalov, moču, obsahu žlče a dvanástnika, spúta, krvi a tkanív, materiálu získané zoškrabaním z perianálnej oblasti a subungválnych priestorov) a nepriame, pomocou ktorých odhalia sekundárne zmeny vznikajúce v ľudskom tele v dôsledku životne dôležitej činnosti helmintov (štúdie morfologického zloženia krvi, imunologické metódy diagnostika helmintiázy, röntgenové vyšetrenia atď.). Z priamych metód sú najčastejšie skatologické, ktoré sa delia na makro- a mikrohelmintoskopické. V niektorých prípadoch sa používajú špeciálne metódy.

Makrohelmitoskopické metódy výskumu zamerané na vyhľadávanie helmintov alebo ich fragmentov (skolex, segmenty, časti strobila cestodónov). Používajú sa na diagnostiku tých helmintiáz, pri ktorých sa vajíčka nevylučujú v exkrementoch pacienta alebo sa vylučujú v malých množstvách a nie vždy (napríklad pri enterobiáze sa červy nachádzajú vo výkaloch, s taeniasis - segmenty).

Na detekciu červov alebo segmentov pásomníc vo výkaloch sa výkaly skúmajú voľným okom. Pre odlišná diagnóza Taeniasis, odporúča sa prezerať výkaly zriedené vodou v oddelených malých porciách v čiernych fotografických kyvetách alebo v Petriho miskách na tmavom pozadí. Veľké útvary podozrivé z fragmentov helmintov skúmame pod lupou medzi dvoma sklíčkami. Ak podľa klinické indikácie navrhnú detekciu malých helmintov alebo hlavičiek pásomníc po ošetrení, potom sa podozrivé častice skúmajú pod lupou v kvapke glycerínu, a ak je to potrebné, pod mikroskopom.

Mikrohelmintoskopické metódy výskumu(kvalitatívne) sú zamerané na identifikáciu vajíčok a lariev helmintov. Používa sa metóda hustého rozmazania s celofánovou krycou doskou podľa Kato. Kato zmes pozostáva zo 6 ml 3% vodný roztok malachitovej zelene, 500 ml glycerín a 500 ml 6% roztok fenolu. Kato taniere (hydrofilný celofán je narezaný na kúsky s rozmermi 20´ 40 mm) ponorený na 24 h do Kato zmesi tak, aby boli vedľa seba (3-5 ml Kato roztok na 100 platní). 100 mg výkaly sa nanesú na podložné sklíčko, prikryjú sa celofánovou krycou doskou podľa Kata a stlačia sa tak, aby sa výkaly rozmazali na podložnom sklíčku v medziach celofánovej platne. Náter sa nechá pri izbovej teplote zosvetliť o 40-50 °C min, a potom skúmané pod mikroskopom. V horúcom období, aby prípravok nevysychal, položte na tanier pripraveného prípravku vlhkú špongiu.

Pre kompletnú detekciu helmintov všetkých typov je potrebné použiť metódu hrubého náteru Kato s celofánovou krycou platňou v kombinácii s jednou z metód obohatenia. Najbežnejšie z nich sú Kalantaryanova metóda a Fullebornova metóda.

Kalantaryánska metóda: vo fľašiach so širokým hrdlom s objemom 100 ml dôkladne premiešajte sklenenou tyčinkou 5 G výkalmi, postupným pridávaním nasýteného roztoku dusičnanu sodného (1 kg dusičnan sodný na 1 l voda pri vare) po okraj pohára. Veľké častice, ktoré vyplávajú na povrch, sa odstránia papierovou naberačkou. Na povrch soľného roztoku sa priloží podložné sklíčko (fyziologický roztok sa pridáva dovtedy, kým zmes nepríde do úplného kontaktu so sklíčkom). V 20-30 min sklíčko sa vyberie a film sa skúma pod mikroskopom. Pri absencii tejto soli môžete použiť nasýtený roztok kuchynskej soli podľa Fholleborna (400 G soľ v 1 l vriaca voda).

Vzhľadom na to, že vajíčka s veľkou špecifickou hmotnosťou (neoplodnené vajíčka oblých červov, vajíčka motolic a veľkých pásomníc) neplávajú, je okrem vyšetrenia povrchovej vrstvy tekutiny pri použití Fullebornovej metódy potrebné vyšetriť 2-4 preparáty zo sedimentu pod mikroskopom.

Špeciálne laboratórne metódy na testovanie rôznych helmintiáz.

7.7. Metódy stanovenia životaschopnosti vajíčok a lariev helmintov

Životaschopnosť vajíčok helmintov je určená vzhľad, morením vitálnymi farbami, pestovaním v optimálne podmienky a nastavenie biologickej vzorky.

7.7.1. Stanovenie životaschopnosti vajíčok alebo lariev helmintov podľa vzhľadu

Vajíčka helmintov sa mikroskopujú najskôr pri malom a potom pri veľkom zväčšení. V deformovaných a mŕtvych vajíčkach helmintov je škrupina roztrhnutá alebo ohnutá dovnútra, plazma je zakalená a uvoľnená. Segmentované vajcia majú drviace gule (blastoméry) nerovnakej veľkosti, nepravidelný tvar, často posunuté na jeden pól. Niekedy existujú abnormálne vajíčka, ktoré sa napriek vonkajším deformáciám vyvíjajú normálne. U živých lariev škrkavky je jemná zrnitosť prítomná len v strednej časti tela, odumieraním sa šíri po tele, vznikajú veľké lesklé hyalínové vakuoly, takzvané „perličky“.

Ak chcete zistiť životaschopnosť zrelých vajíčok škrkaviek, vreteníc a škrkaviek, mali by ste zavolať aktívne pohyby lariev miernym zahriatím prípravku (na teplotu nepresahujúcu 37 °C). Vhodnejšie je sledovať životaschopnosť lariev škrkavky a vretenice po ich izolovaní z obalu vajíčka stlačením krycieho skla prípravku pitevnou ihlou alebo pinzetou.

U lariev invazívnych škrkaviek je často vidieť odlupovanie puzdra na hlavovom konci a u lariev bičíkovcov, ktoré ukončili vývoj vo vajíčku, sa na tomto mieste pri veľkom zväčšení nachádza vodič. U mŕtvych lariev helmintov, bez ohľadu na ich umiestnenie (vo vajíčku alebo mimo neho), je zaznamenaný rozpad tela. V tomto prípade sa vnútorná štruktúra larvy stáva blokovou alebo granulovanou a telo sa stáva zakaleným a nepriehľadným. V tele sa nachádzajú vakuoly a na kutikule sa nachádzajú zlomy.

Životaschopnosť taeniidných onkosfér (hovädzí, bravčová pásomnica atď.) je určená pohybom embryí, keď sú im vystavené. tráviace enzýmy. Vajíčka sú umiestnené na hodinovom sklíčku so žalúdočnou šťavou psa alebo umelou duodenálnou šťavou. Zloženie druhého: pankreatín - 0,5 g, hydrogénuhličitan sodný - 0,09 g, destilovaná voda - 5 ml. Hodinkové sklá s vajíčkami sa umiestnia na 4 hodiny do termostatu pri 36 - 38 °C. V tomto prípade sú živé embryá uvoľnené z ich membrán. Škrupiny živých onkosfér sa rozpúšťajú aj v okyslenom pepsíne a v alkalický roztok trypsín po 6 - 8 hodinách v termostate pri 38 ° C.

Ak umiestnite teniidové vajíčka do 1% roztoku sulfidu sodného alebo 20% roztoku chlórnanu sodného alebo do 1% roztoku chlórovej vody s teplotou 36 - 38 ° C, zrelé a živé embryá sa uvoľnia z membrán a neuvoľnia sa. zmena počas 1 dňa. Nezrelé a mŕtve onkosféry sa zmenšujú alebo napučiavajú a prudko zväčšujú a potom sa „rozpustia“ v priebehu 10 minút až 2 hodín. Živé embryá taenidov sa aktívne pohybujú aj v zmesi 1% roztoku chloridu sodného, ​​0,5% roztoku hydrogénuhličitanu sodného a žlče pri 36 - 38 °C.

Životaschopnosť Adolescaria fascioli zozbieraných na rastlinách a iných objektoch vodných útvarov sa kontroluje ich skúmaním na podložnom sklíčku vo fyziologickom roztoku pod mikroskopom s vyhrievacím stolíkom. Keď sa larvy trematód zahrejú, začnú sa pohybovať.

Na určenie životaschopnosti vajíčok pásomnice je najjednoduchšia metóda N.S. Ionina: v živých vajíčkach je stredný pár embryonálnych háčikov buď rovnobežný s laterálnymi háčikmi, alebo tieto háčiky zvierajú so stredom na spodnej časti uhol menší ako 45°. V odumretých vajciach bočné páry zvierajú so stredným párom uhol na báze viac ako 45° alebo sú háčiky náhodne rozhádzané (ich párové usporiadanie sa stráca); Niekedy sa embryo zmršťuje a tvoria sa granule. Presnejšia metóda je založená na objavení sa pohybov onkosféry počas prudkej zmeny teploty: od 5 - 10 ° do 38 - 40 ° C.

Stanovenie životaschopnosti nezrelých vajíčok háďatiek by sa malo študovať vo vlhkej komore (Petriho misky), vajíčka škrkavky vložiť do 3 % roztoku formaldehydu pripraveného v izotonickom roztoku chloridu sodného pri teplote 24 - 30 °C, vajíčka škrkavky do 3% roztoku kyseliny chlorovodíkovej pri teplote 30 - 35 °C; vajce červov v izotonickom roztoku chloridu sodného pri teplote 37 °C. Petriho misky by ste mali otvárať 1-2 krát týždenne pre lepšie prevzdušnenie a filtračný papier by ste mali znovu navlhčiť čistá voda.

Pozorovania vývoja vajíčok helmintov sa vykonávajú najmenej 2-krát týždenne. Absencia príznakov vývoja v priebehu 2 - 3 mesiacov naznačuje ich neživotaschopnosť. Známky vývoja vajíčok helmintov sú najskôr štádiami drvenia, rozdeľovaním obsahu vajíčka na samostatné blastoméry. Počas prvých dní sa vyvinie až 16 blastomér, ktoré prechádzajú do druhého štádia - morula atď.

Vajíčka húsenice sa pestujú v sklenenom valci (50 cm vysoký a 7 cm v priemere) uzavretom zátkou. Zmes z rovnaké objemy sterilný piesok, drevené uhlie a výkaly s vajíčkami machovca, zriedené vodou na polotekutú konzistenciu, sa opatrne nalejú na dno valca pomocou sklenenej trubice. Počas 1 - 2 dní usadzovania v tme pri teplote 25 - 30 ° C sa z vajíčok vyliahnu rabditiformné larvy, ktoré sa po 5 - 7 dňoch stanú filariformnými: larvy vyliezajú po stenách valca, kde sú viditeľné aj voľným okom.

Vajíčka trematód, ktoré sa prirodzene vyvíjajú vo vode, napríklad opisthorchis, diphyllobothriidae, fasciolae a iné, sa umiestnia na hodinové sklíčko, Petriho misku alebo inú nádobu a nalejú sa malou vrstvou obyčajnej vody. Pri pestovaní vajíčok Fasciola treba brať do úvahy, že v tme sa rýchlejšie vyvíjajú, pričom v živých vajíčkach pri teplote 22 - 24 °C sa miracídium vytvorí za 9 - 12 dní. Pri mikroskopovaní vyvíjajúcich sa vajíčok motolice sú pohyby miracidia jasne viditeľné. Miracidium fasciola vychádza zo škrupiny vajíčka iba na svetle.

Fulleborn metóda. Larvy háčikovca a strongylidov sa kultivujú na agare v Petriho miske so živočíšnym uhlím. Po udržaní v termostate pri teplote 25 - 30 °C počas 5 - 6 hodín sa larvy plazia po agare a zanechávajú za sebou cestu baktérií.

Harada a Mori metóda. Pridajte 7 ml destilovanej vody do skúmaviek umiestnených na stojane. Drevenou tyčinkou odoberte 0,5 g výkalov a urobte rozmazanie na filtračný papier (15 x 150 mm) 5 cm od ľavého okraja (táto operácia sa vykonáva na hárku papiera na ochranu povrchu laboratórnej lavice). Potom sa prúžok s náterom vloží do skúmavky tak, aby ľavý koniec bez náteru dosiahol dno skúmavky. Horný koniec zakryte kúskom celofánu a pevne ho omotajte gumičkou. Na skúmavku sa napíše číslo a priezvisko vyšetrovanej osoby. V tomto stave sa skúmavky skladujú 8 - 10 dní pri teplote 28 °C. Na štúdium lariev odstráňte celofánový kryt a pomocou pinzety odstráňte prúžok filtračného papiera. Pri tomto postupe je potrebné postupovať opatrne, pretože malé množstvo infekčných lariev sa môže presunúť na horný koniec filtračného papiera alebo na stranu skúmavky a preniknúť pod povrch celofánu.

Skúmavky sa umiestnia do horúcej vodný kúpeľ pri teplote 50 ° C počas 15 minút, potom sa ich obsah pretrepe a rýchlo sa naleje do 15 ml skúmavky, aby sa larvy sedimentovali. Po odstredení sa supernatant odstráni a sediment sa prenesie na podložné sklíčko, prikryje sa krycím sklíčkom a mikroskopicky sa skúma pri malom zväčšení.

Pre odlišná diagnóza filariformné larvy, musíte použiť údaje v tabuľke 3.

Tabuľka 3

DIFERENCIÁLNA DIAGNOSTIKA FILARIoidných lariev A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, TRICHOStrONGYLUS SP.

Larvy	Rozmery	Charakteristické znaky
A. duodenale	Dĺžka tela asi 660 µm, dĺžka plášťa - 720 nm	Pruhovanie uzáveru je menej výrazné, ústny výbežok je menej nápadný, predný koniec tela (nie však uzáver) je tupý, priemer črevnej trubice je menší ako bulbus pažeráka, kaudálny koniec je tupý
N. americanus	Dĺžka tela asi 590 mikrónov, dĺžka plášťa - 660 nm	Čiapočka je nápadne pruhovaná, najmä v kaudálnej časti tela, ústny výbežok je tmavý, predný koniec tela (nie však čiapka) je zaoblený ako úzky koniec kuracie vajce, predná časť črevnej trubice má rovnaký priemer ako bulbus pažeráka, chvostový koniec je ostro zahrotený
S. stercoralis	Dĺžka tela asi 500 mikrónov	Larva je bez pošvy, pažerák má asi polovicu dĺžky tela, chvost je tupý alebo rozvetvený
Trichostrongylus sp.	Dĺžka tela asi 750 µm	Črevný lúmen nie je rovný, ale cikcak, koniec chvosta je zaoblený a má tvar gombíka

7.7.2. Metódy farbenia vajíčok a lariev helmintov

Mŕtve tkanivá vo väčšine prípadov vnímajú farby rýchlejšie ako živé. Tieto znaky sa používajú v helmintológii na určenie životaschopnosti vajíčok a lariev helmintov. V niektorých prípadoch sú však niektoré farby lepšie vnímané živými tkanivami ako mŕtvymi.

Na rozlíšenie medzi živými a mŕtvymi vajíčkami a larvami sa používajú nasledujúce farby a metódy.

Leukobase metylénová modrá sa často používa na farbenie živých a mŕtvych tkanív. Živá bunka alebo tkanivo redukuje metylénovú modrú na bezfarebnú leukobázu, odumreté tkanivo túto schopnosť nemá, preto získava farbu.

Kritériom stavu vajíčka je sfarbenie embrya, nie však škrupiny. Táto schopnosť je spojená s podmienkami, za ktorých vajíčko odumiera. V prípadoch, keď vláknitá membrána v mŕtvom vajci nestráca svoje polopriepustné vlastnosti, neprepustí farbivá, a preto sa mŕtve embryo nezafarbí. Farebné embryo vždy naznačuje smrť vajíčka.

Na farbenie vajíčok škrkavky môžete použiť metylénovú modrú v roztoku kyseliny mliečnej so žieravinou (0,05 g metylénovej modrej, 0,5 g hydroxidu sodného, ​​15 ml kyseliny mliečnej). Živé vajcia nevnímajú farbu; sú maľované v Modrá farba embryá mŕtvych vajíčok. Farbenie lariev škrkavky zásaditým roztokom briliantkrezylovej modrej farby v koncentrácii 1:10000 sa vykonáva nasledovne: na podložné sklíčko sa nanesie kvapka tekutiny s vajíčkami škrkavky a kvapka roztoku základnej farby. Preparát sa prekryje krycím sklíčkom, ktoré sa pri miernom poklepávaní pitevnou ihlou tesne pritlačí k podložnému sklíčku. Počet objavujúcich sa lariev a stupeň ich sfarbenia sa sleduje pod mikroskopom; po ktorej sa po 2 - 3 hodinách znova vyšetrí ten istý liek. Za živé sa považujú iba nedeformované larvy, ktoré sa nezafarbili 2 hodiny. Mŕtve larvy buď nevychádzajú z vajíčok, alebo sa sfarbia, keď sa škrupina zlomí (čiastočne alebo úplne).

Pri zisťovaní životaschopnosti vajíčok škrkavky vtáčej je možné prípravky zafarbiť 5 % alkoholový roztok Yoda. Pri aplikácii na prípravok sa v priebehu 1 - 3 sekúnd vyskytnú zárodky mŕtvych vajíčok Ascaridia. sú natreté oranžovou farbou.

Mŕtve vajíčka opisthorchis a onkosféry pásomnice hovädzieho dobytka sa zafarbia roztokom toluidínovej modrej (1:1000) a onkosféry mŕtvej pásomnice hovädzieho dobytka roztokom brilantnej kresylovej modrej (1:10000). Zároveň embryá a škrupiny mŕtvych aj živých vajec získavajú farbu. Preto sa po farbení vajíčka a onkosféry umyjú čistá voda a dodatočne ich zafarbíme safranínom (zriedeným 1:10000 v alkohole 10 °C). Alkohol zo škrupín odstráni farbu a safranín ich zafarbí do červena. Výsledkom je, že živé vajcia sčervenajú; vajíčka s mŕtvymi embryami zmodrajú, ale škrupina zostane červená. Mŕtve embryá onkosfér pásomnice hovädzieho dobytka sa rýchlo, v priebehu niekoľkých minút, sfarbia do jasne červenej resp ružová farba safranín alebo modrá brilantná krezylová modrá v riedení 1:4000, alebo indigokarmínová v riedení 1:1000 - 1:2000. Živé embryá sa vplyvom týchto náterov nemenia ani po 2 - 7 hodinách.

Na určenie životaschopnosti vajíčok trpasličích pásomníc sa odporúča použiť nasledujúce farby:

1. Brilliantcreasyl blue (1:8000) - po 1 hodine sa onkosféra mŕtvych vajíčok obzvlášť jasne zafarbí, čo ostro vynikne na bledom alebo bezfarebnom pozadí zvyšku vajíčka.

2. Safranín (1:8000 pri expozícii 2 hodiny a 1:5000 3 - 5 hodín).

3. 50% roztok kyseliny pyrogalovej v riedení 1:2 - pri vystavení 1 hodine pri teplote 29 - 30 °C (čím nižšia teplota, tým dlhší je proces farbenia).

7.7.3. Luminiscenčná metóda na štúdium vajíčok a lariev helmintov

Fluorescenčná mikroskopia umožňuje rozlíšiť živé a mŕtve predmety bez poškodenia vajíčka. Nepoužíva sa na fluorescenciu ultrafialové lúče a modrofialová časť viditeľného svetla pomocou bežného mikroskopu a podložných sklíčok; pridaný do iluminátora OI-18 špeciálna sada farebné filtre.

Živé a mŕtve vajíčka škrkaviek, škrkaviek, trpasličích pásomníc, hovädzích pásomníc, širokých pásomníc a iných helmintov fluoreskujú odlišne. Tento jav sa pozoruje ako počas primárnej luminiscencie bez použitia farbív, tak aj pri farbení fluorochrómmi (akridínová oranž, koryfosfín, primulín, aurolín, berlerínsulfát, trypaflavín, rivanol, akrín atď.).

Nefarbené, živé, nesegmentované vajíčka škrkavky žiaria jasnozelenou farbou so žltkastým odtieňom; v mŕtvych vajciach škrupina vyžaruje zelené svetlo oveľa jasnejšie ako tmavozelená embryonálna časť; Vo vajíčkach škrkavky s larvou sa objavuje iba škrupina a v mŕtvych vajíčkach je škrupina aj larva jasne žltá.

Nepigmentované a nesegmentované živé vajíčka červov a trpasličích pásomníc vyžarujú zelenožlté svetlo, škrupina mŕtvych vajíčok intenzívne svetielkuje na pozadí tmavozelenej embryonálnej hmoty.

Pri sekundárnej luminiscencii (pri farbení akridínovou oranžou v riedení 1:10 000 a 1:50 000 od 30 minút do 2 hodín) luminiscencia živých a mŕtvych hlíst, motolíc a cestód odlišne.

Škrupiny živých a odumretých vajíčok škrkaviek, toxocara, pinworms, trpasličí pásomnice, potkanie pásomnice, býčie pásomnice a pásomnice sú sfarbené do oranžovočervena. Embryá živých vajíčok škrkaviek, toxascaris, potkaních pásomníc, širokých pásomníc a onkosfér hovädzích pásomníc fluoreskujú matne tmavozelene resp. šedo-zelenej farby. Mŕtve embryonálne vajíčka týchto helmintov vyžarujú „horiacu“ oranžovo-červenú farbu. Živé larvy červca a toxocara (uvoľnené škrupiny vajíčok) vyžarujú matné šedozelené svetlo, keď uhynú, farba sa zmení z hlavového konca na „horiacu“ svetlozelenú, potom žltú, oranžovú a nakoniec jasne oranžovú.

Pri farbení fluorochrómmi - koryfosfylum, primulín, mŕtve vajíčka škrkaviek a bičíkovcov vykazujú žiaru od fialovožltej po medenočervenú. Životaschopné vajíčka neluminiscujú, ale sú zafarbené tmavozelená farba.

Živé vajíčka trematód (paragonimus a clonorchis) pri farbení akridínovou oranžovou neluminiscujú, ale mŕtve vajíčka majú žltozelenú farbu.

Na stanovenie životaschopnosti lariev helmintov možno použiť aj luminiscenčnú metódu. Tak žiaria strongylátové a rhabditatus larvy fluorochrómované roztokom akridínovej oranžovej (1:2000): živé - zelené (s odtieňom), mŕtve - jasne oranžovým svetlom.

Živé miracidia vychádzajúce z škrupiny vyžarujú tlmené modrasté svetlo so sotva znateľným svetložltým korolom riasiniek, ale 10 - 15 minút po smrti sa objavia s jasným „horiacim“ svetlozeleným a potom oranžovo-červeným svetlom.

7.7.4. Metóda biologických vzoriek

Napríklad na určenie životaschopnosti vajíčok ascaridov (škrkavka ošípaná, škrkavka ľudská, Toxocara, Toxascaris atď.) na zviera (morčatá, myši) potrebujete minimálne 100 - 300 vajíčok s vyvinutými larvami. Vajíčka Ascaris v izotonickom roztoku chloridu sodného sa pipetujú cez ústa myši alebo morčaťa. Po 6-7 dňoch sa zviera porazí, jeho pečeň a pľúca sa otvoria a oddelene sa vyšetrí na prítomnosť lariev askaridátu. Na tento účel sa pečeň a pľúca nasekajú nožnicami na malé kúsky a vyšetrí sa metódou Berman alebo Supryaga (časť 6.1.2).

Ak boli zvieratá infikované živými invazívnymi vajíčkami, potom sa pri pitve nachádzajú migrujúce larvy ascaridov v pečeni a pľúcach.

V prípade infekcie môžu byť vajíčka Fasciola vo výkaloch laboratórnych zvierat zistené u králikov po 2 mesiacoch, v r. morčatá- po 50 dňoch, u myší - po 35 - 40 dňoch.

Na rýchlejšie získanie odpovede sa laboratórne zvieratá otvoria po 20 - 30 dňoch a pečeň sa vyšetrí na prítomnosť mladých fasciol.

Na stanovenie životaschopnosti vajíčok trpasličích pásomníc sa tiež odporúča kŕmiť nimi predtým neinfikované biele myši, po 92 až 96 hodinách zvieratá otvoriť a identifikovať cysticerkoidy v črevných klkoch alebo cestodách v lúmene čreva.

Na stanovenie životaschopnosti vajíčok opisthorchis sa odporúča metóda (German S.M., Baer S.A., 1984), založená na fyzikálno-chemickej aktivácii liahnej žľazy miracidium a stimulácii motorická aktivita lariev, čo vedie k otvoreniu uzáveru vajíčka a aktívnemu uvoľneniu miracidia v experimentálnych podmienkach.

Suspenzia vajíčok opisthorchis vo vode sa vopred ochladí na 10 - 12 °C (všetky nasledujúce operácie sa vykonávajú pri izbovej teplote 19 - 20 °C). Do centrifugačnej skúmavky sa pridá 1 kvapka suspenzie obsahujúcej 100 - 150 vajec. Skúmavka sa umiestni na 5 - 10 minút do stojana. Počas tejto doby sa všetkým vajíčkam podarí klesnúť na dno. Potom sa prebytočná voda opatrne odsaje prúžkom filtračného papiera a do skúmavky sa pridajú 2 kvapky špeciálneho média. Médium sa pripraví v 0,005 M Tris-HCl pufri; do tlmivého roztoku sa pridá 12 - 13% roztok etanolu a farbivo (fuchsín, safranín, eozín, metylénová modrá atď.). Skúmavka sa pretrepe, jej obsah sa napipetuje na podložné sklíčko a nechá sa 10 minút za mierneho pretrepávania. Potom pridajte 2 kvapky určeného média. Prípravok je pripravený na mikroskopovanie pod bežným svetelným mikroskopom pri 20-násobnom zväčšení.

Počas tejto doby sa viečko životaschopných lariev otvorí a miracidium aktívne vystúpi do určeného prostredia. Vďaka prítomnosti etanolu v ňom sú po 2 - 5 minútach znehybnené a následne natreté farbivom. Môžu byť ľahko detekované a spočítané pomocou mikroskopu.