Metode helmintologice. Testare pentru enterobiaza și taeniasis

Pentru a detecta fragmente de helminți, fecalele sunt examinate cu ochiul liber, apoi amestecate cu apă și examinate în porții mici într-o cutie Petri pe un fundal întunecat. Toate particulele suspecte sunt plasate pe o lamă de sticlă într-o picătură de apă și examinate cu o lupă. Puteți pune o porție zilnică într-un cilindru cu adaos de 5-10 ori cantitatea de apă. După agitare, vasul este lăsat până când particulele în suspensie se depun complet. Strat de suprafață Se scurg lichidele și se toarnă apă curată. Sedimentul spălat se examinează în porțiuni mici cu ochiul liber sau sub lupă. Pentru detectarea ouălor se folosesc metode de examinare microscopică.

Metoda frotiului nativ. Nu un numar mare de fecale din locuri diferite Porțiunea de testat este măcinată pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție de glicerol 50%, soluție izotonică de clorură de sodiu sau apă. Amestecul este acoperit cu o lametă și vizualizat la microscop.

Metoda de plutire Fulleborn. O parte din fecale este amestecată cu 20 de părți dintr-o soluție saturată de clorură de sodiu ( gravitație specifică 1.18), adăugat în porții mici. Particulele mari care plutesc la suprafață sunt imediat îndepărtate, iar amestecul este lăsat timp de 45 de minute. În acest timp, ouăle de helminți, având o greutate specifică mai mică decât soluția de clorură de sodiu, plutesc la suprafață. Filmul de suprafață este îndepărtat cu o buclă de sârmă de aproximativ 1 cm în diametru și transferat pe o lamă de sticlă pentru examinare la microscop.

Metoda Kalantariană. Eficacitatea metodei plutitoare crește atunci când se înlocuiește clorură de sodiu cu o soluție saturată de azotat de sodiu. În acest caz, amestecul se păstrează timp de 10-15 minute.

Filmul de suprafață format după decantarea unui amestec de fecale cu o soluție de clorură de sodiu sau azotat de sodiu poate fi îndepărtat și cu o lamă de sticlă. În acest scop, un borcan umplut până la refuz cu un amestec de fecale și o soluție de sare este acoperit cu o lamă de sticlă, astfel încât suprafața sa inferioară să fie în contact cu lichidul. După decantare, sticla este îndepărtată și, întorcându-se rapid în sus cu suprafața pe care se află filmul, este examinată la microscop.

Razuirea pliurilor sperianale (pentru a identifica ouale de oxiuri si oncosferele tenia bovină) faceți dimineața înainte de a merge la toaletă. Folosind o spatulă de lemn înmuiată în apă sau o soluție de glicerină 50%, răzuiește în jurul anusului. Materialul rezultat este transferat pe o lamă de sticlă într-o picătură de apă sau soluție de glicerol 50% și vizualizat la microscop. Spatula poate fi înlocuită cu un tampon de bumbac umed, care este folosit pentru a șterge zona perianală, apoi clătiți bine cu apă. Apa este centrifugată și sedimentul este examinat la microscop.

Metoda Behrmann (pentru identificarea larvelor). Pe o pâlnie de sticlă introdusă într-un trepied se fixează o plasă metalică cu 5-6 g de fecale aplicate. Un tub de cauciuc cu o clemă este plasat la capătul inferior al pâlniei. Pâlnia este umplută cu apă încălzită la t° 50°, astfel încât Partea de jos plasa care conținea fecale a intrat în contact cu apa. Larvele se deplasează activ în apă și se acumulează în partea inferioară a tubului de cauciuc. După 4 ore, lichidul este drenat în tuburi de centrifugă, centrifugat, iar sedimentul este examinat la microscop.

Analiza sputei, mucusului nazal și scurgeri vaginale pentru a identifica ouăle de trematod pulmonar paragonimus, larvele de viermi rotunzi și anchilostoma, ouăle de oxiuri și fragmentele de vezică echinococică. Porțiunea de mucus (descărcare) care este examinată este unsă pe sticlă și vizualizată macroscopic pe un fundal alb-negru și apoi la microscop. Puteți adăuga o soluție de antiformină 25% la materialul de testat, agitați bine și lăsați timp de 1-1,5 ore pentru a dizolva mucusul. Amestecul este centrifugat și precipitatul este examinat la microscop.

Analiza sucului duodenal și gastric pentru a detecta ouăle de dorloe hepatice, viermi anchilostomi și larvele Strongyloides. Toate cele trei porțiuni de conținut duodenal obținut cu sunt centrifugate și sedimentul este examinat la microscop. De asemenea, cercetează.

Cercetarea țesuturilor. Pentru a identifica larvele de Trichinella, bucăți de mușchi biopsiat sunt împărțite cu grijă în fibre, strânse între pahare compresoare (pahare groase cu șuruburi) și examinate la microscop cu o lumină întunecată. Pentru a identifica cisticercii, mușchii sunt disecați cu ace de disecție, vezicula izolată este curățată de țesutul înconjurător, strânsă între două lame de sticlă și examinată cu o lupă.

Test de sânge (pentru a detecta larvele de filarie). Examinați picătura agățată pe o sticlă de acoperire tăiată cu vaselină. Puteți amesteca 0,3 ml de sânge cu o cantitate de 10 ori mai mare de soluție 3%. Amestecul este centrifugat și precipitatul este examinat la microscop. Pentru îmbogățirea medicamentelor la 1 ml sânge venos adăugați 3 ml soluție de formol 2% sau de 5 ori cantitatea de lichid constând din 95 ml soluție de formol 5%, 5 ml acid aceticși 2 ml de soluție alcoolică concentrată de hematoxilină. Amestecul este centrifugat, precipitatul este spălat cu apă distilată și examinat la microscop. Pentru diferențiere tipuri diferite filariae sunt examinate prin frotiuri colorate prin metoda Giemsa-Romanovsky.

Metode diagnosticul imunologic. De asemenea, sunt utilizate teste de diagnostic alergic (vezi) cu tipul corespunzător de helmint (aglutinare, fixare a complementului).

Metode helmintologice cercetare. Orez. Ouă de helminți. 1-10 - ouă viermi rotunzi(nematode): 1 - 3 - viermi rotunzi (1 - ou fecundat, 2 - ou fecundat fără albumen, 3 - ou nefertilizat); 4 - viermi rotunzi de pisică; 5 - viermi rotunzi carnivori; 5 - oxiuri; 7 - vierme; 8 - tominx; 9 - anchilostoma; 10 - tricostrongilid. 11-15 - ouă tenii(cestode): 11 - tenia bovină; 12 - tenia pitica; 13 - tenia de șobolan; 14 - tenia de dovleac; 15 bandă lată. 16 - 24 - ouă de trematode (trematode): 16 - trematode (schistozomi) japoneze; 17 - trematode (schistozomi) urina - sexuale; 18 - trematode (schistozomi) Munson; 19 - trematode (parogonim) pulmonare; 20 - trematode (opisthorchis) siberiene (feline); 21 - trematode (clonorchis) chinensis; 22 - trematode intestinale (metagonimus); 23 - trematode (fasciole) ale ficatului; 24 - trematode (dicrocelium) lanceolate.

O metodă eficientă și convenabilă de cercetare helmintologică este studiul frotiului gros după Kato, a cărui esență este detectarea ouălor de helminți într-un frotiu gros de fecale, curățat cu glicerină și nuanțat cu verde malachit. Compoziția amestecului Kato - 6 ml 3% soluție apoasă verde malachit, 500 ml glicerină, 500 ml soluție de fenol 6%. Soluția este stabilă și poate fi păstrată la temperatura camerei. Pentru prepararea preparatelor, bucăți de fecale de mărimea unui bob de mazăre sunt aplicate pe o lamă de sticlă, acoperite cu o peliculă de celofan hidrofil ținut în amestecul Kato timp de 24 de ore și presate pe sticla pentru distributie uniforma material. Frotiurile îndepărtate timp de 40-60 de minute sunt examinate la microscop. Se numără ouăle de helminți detectate și caracteristici morfologice determina specia lor. Metoda vă permite să identificați ouă de viermi rotunzi, viermi bici, cestode, trematode și, într-o măsură mai mică, viermi anchilostoide și tenia pitici.

De asemenea, utilizat pe scară largă metode de îmbogățire. Principiul metodelor de flotație este suspendarea fecalelor într-o soluție salină, care are o densitate relativă mai mare în comparație cu ouăle de helminți, drept urmare acestea plutesc la suprafață. Conținutul filmului de suprafață este examinat la microscop. Ca amestecuri de îmbogățire se folosesc următoarele soluții: sare de masă - 400 g în 1 litru de apă (densitate relativă conform Fulleborn -1,18); azotat de sodiu - 1 kg în 1 litru de apă (densitate relativă conform "Kalantaryan-1,38); azotat de sodiu - 900 g și azotat de potasiu - 400 g în 1 litru de apă (densitate relativă conform Brudastov și Krasnonos-1,48). solutiile se fierb si se racesc.
Pentru cercetare, adăugați 5-10 g de fecale într-un pahar sau pahar de faianță, adăugați 100-200 ml la acesta soluție salinăși amestecați bine. Apoi particulele mari plutitoare sunt îndepărtate cu o spatulă de lemn sau o linguriță din hârtie sau carton și imediat se aplică o lamă largă pe filmul de suprafață, astfel încât soluția salină și lama să fie în contact complet. După ce a lăsat amestecul să stea timp de 30-40 de minute, lama este îndepărtată, plasată la microscop cu filmul în sus și întreaga suprafață este examinată cu atenție. Pentru a evita uscarea, puteți adăuga 2-3 picături dintr-o soluție de glicerină 50%. Filmul de suprafață poate fi îndepărtat și cu o buclă de sârmă. Eficiența metodelor de flotație crește pe măsură ce densitatea relativă a soluțiilor de saramură crește. Folosind aceste metode, este posibilă detectarea ouălor de nematode, cestode și trematode.

Pentru a detecta ouăle în fecale, se utilizează metoda de sedimentare Krasilnikov. Fecalele sunt amestecate cu o soluție de detergent 1% ( detergent„Lotus”, etc.) într-un raport de 1:10 până când se formează o suspensie. Sub influența detergentului, diverse componente ale fecalelor (proteine, grăsimi, elemente tisulare) se dizolvă. După 30 de minute, conținutul tubului este agitat timp de 1-2 minute, după care este centrifugat timp de 5 minute. Preparatele sunt pregătite din sediment și examinate la microscop.
ÎN condiţiile de teren, precum și în timpul examinărilor în masă ale populației pentru infestarea cu helminți, este convenabil să se folosească metoda de frotiu gros Kato. ÎN condiţiile de internare Când se examinează pacienții, este de preferat să se folosească cele mai eficiente metode de flotare. Atunci când utilizați aceste metode în timpul microscopiei, este indicat să numărați ouăle găsite în preparat. Dacă eșantionul sau volumul prelevat pentru studiul fecalelor este standardizat (de exemplu, 1 linguriță sau lingură) și un volum uniform constant de soluții saline, se poate aprecia aproximativ intensitatea invaziilor. Această contabilitate cantitativă poate fi utilă în justificarea tratamentului prescris și evaluarea eficacității deparazitării. În plus, alte metode cantitative mai precise, în special metoda Stoll, pot fi utilizate pentru a stabili intensitatea infecției.

Pentru diagnosticul teniarinhozei și enterobiazei Se folosește metoda de studiere a răzuirilor perianal-rectale. Folosind o spatulă de lemn înmuiată într-o soluție de glicerină 50%, răzuiți pliurile perianale dimineața înainte de defecare în circumferință anusȘi secțiuni inferioare rect. Materialul rezultat, curățat dintr-o spatulă cu marginea unui pahar de acoperire, se așează pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție de glicerol 50%, se acoperă cu un pahar de acoperire și se examinează la microscop. De asemenea, puteți examina o bandă de bandă de celuloză, care este mai întâi presată cu partea adezivă pe pliurile perinanale, apoi plasată pe o lamă de sticlă și examinată la microscop.

Detectarea larvelor de nematode în fecale folosind metoda Berman. Metoda se bazează pe proprietatea termotropă a larvelor. Pentru cercetare, luați 1 lingură de fecale și puneți-o într-o plasă metalică sau o plasă din mai multe straturi de tifon pe un cadru de sârmă. Plasa este instalată într-o pâlnie montată pe un trepied. Un tub de cauciuc cu o clemă este atașat de pâlnie. După ce ați ridicat plasa, pâlnia este umplută cu apă (temperatura +40°...+50°C), astfel încât partea inferioară a plasei să fie scufundată în apă. Larvele din fecale migrează activ către apa caldași, depunându-se, se acumulează în partea inferioară a pâlniei. După 2-4 ore, clema este deschisă, apa este scursă într-un tub de centrifugă și centrifugată timp de 2-3 minute. Apoi lichidul supernatant este drenat, sedimentul este transferat pe o lamă de sticlă și examinat la microscop, unde se găsesc larve mobile ale agentului cauzator al strongiloidiozei.

metoda Harada si Mori face posibilă diferențierea între larvele de vierme și necator. Larvele de vierme sunt cultivate pe hârtie de filtru. În acest scop, 0,5 g de fecale proaspete, prelevate de la pacient în cel mult 1 oră de la defecare, se aplică pe benzi de hârtie de filtru cu dimensiunile 12X1,5 cm, lăsând ambele capete ale benzii curate. Un capăt al benzii este scufundat într-o eprubetă, din care un sfert este umplut cu apă, iar celălalt este prins cu un dop. Eprubetele se pun într-un termostat la o temperatură de +26... + 28°C. Larvele care se dezvoltă din ouă coboară prin hârtia de filtru și se așează pe fundul eprubetei. După 5-6 zile, banda de hârtie este îndepărtată, iar lichidul rămas în eprubetă este examinat sub lupă sau centrifugat. Precipitatul format în timpul centrifugării este examinat la microscop cu lumină. Când se folosesc borcane de sticlă tetraedrice (dimensiunea de 15xxx7 cm) în loc de eprubete, cu 4 benzi de hârtie atașate pe pereți, eficiența analizelor crește (G.M. Maruashvili și colab., 1966).

Metode de testare pentru schistosomiaza . Examinarea fecalelor - o porțiune de fecale se amestecă cu 250 ml de apă, se filtrează prin 3 straturi de tifon într-un vas conic, care se umple până la vârf cu apă. După 30 de minute, stratul lichid este drenat și se adaugă o porție proaspătă de apă în sediment. Precipitatul se spală până când se obține un supernatant limpede și se examinează la microscop.

Metoda larvoscopiei - 20-25 g de fecale se pun într-un balon Erlenmeyer cu un tub de sticlă lipit pe lateral, îndreptat în sus și se spală apă de la robinet. Apoi balonul este acoperit cu hârtie de culoare închisă, lăsând un tub de sticlă lipit la lumină la o temperatură de +25...+30°C. Miracidiile eclozate sunt concentrate la menisc în tubul lateral, unde pot fi văzute cu lupa sau cu ochiul liber. Examinarea urinei - 100 ml de urină colectată între orele 10:00 și 14:00, sau o porție zilnică, sunt decontate și apoi centrifugate la 1500 rpm. Sedimentul rezultat este aplicat* pe o lamă de sticlă și examinat la microscop. OMS recomandă o metodă de filtrare a întregii probe de urină. După filtrare, filtrele sunt tratate cu formaldehidă sau încălzite (pentru a ucide ouăle) și apoi umezite cu o soluție apoasă de ninhidrin. În preparatele uscate, embrionii de ou capătă o culoare violet.

Aplicarea imunologică metodele de cercetare pentru diagnosticarea schistosomiazei sunt asociate cu dificultăți, deoarece schistozomii adulți și ouăle lor conțin un număr mare de antigeni care provoacă reacții imune, care nu sunt specifice speciei (D. Bradley, 1979).

La noi, pentru stadializarea reacțiilor imunologice pentru helmintiază, se produce întreaga linie diagnostice standard. Uz practic au alergii test de piele pentru echinococoză și alveococoză, RLA cu antigen echinococic, RSC la rece, reacție de precipitare la rece în diverse modificări (precipitare inelară, precipitare în eprubete sau capilare, care sunt plasate cu antigene de trichineloză, cisticercoză și migroascariază). Trusele standard de diagnosticare pentru efectuarea reacțiilor serologice menționate mai sus sunt produse de întreprinderile producătoare de preparate bacteriene. Producătorul include cu trusele de diagnosticare produse instrucțiuni detaliate privind regulile de depozitare, termenul de valabilitate al medicamentului și instrucțiunile privind utilizarea antigenelor relevanți cu tehnica de stadializare a reacției.

ÎN anul trecut Lista reacțiilor serologice utilizate pentru a diagnostica helmintiaza sa extins semnificativ. În aceste scopuri se folosesc următoarele reacții: RIGA, imunofluorescență indirectă (RIF), imunodifuzie în gel (RID), contra imunoelectroforeză (CIEF), CEMA. Aceste reacții pot fi utilizate pentru ascariază, toxocaroză, trichineloză, boala anchilostoma, filarioză, echinococoză și alveococoză, opistorhiază, schistosomiază, paragonimiază. Cu toate acestea, pentru aceste reacții în țara noastră nu se emit teste de diagnostic standard și nu este reglementată tehnica de diagnosticare a acestora. Laboratoarele individuale, în principal cele științifice, pregătesc în mod independent antigene specifice și le folosesc în diferite modificări. Descrierea acestor metode este prezentată pe scară largă în literatură și nu este strict unificată. Interpretarea datelor analizei imunologice ar trebui să se bazeze pe studierea dinamicii răspunsului imun, ținând cont de nivelul de specificitate și sensibilitate al fiecărei metode utilizate. reacție serologică. Prin urmare, atunci când se pune un diagnostic, precum și în timpul anchetelor seroepidemiologice ale populației, este recomandabil să se utilizeze câteva dintre cele mai sensibile reacții. Din acest punct de vedere, reacțiile VIEF și REMA, care diferă, s-au dovedit bine sensibilitate crescutăşi o specificitate destul de mare (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negreanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978 etc.). Eficacitatea REMA a fost testată pentru amibiază, leishmanioză, tripanosomiază și toxoplasmoză (G. A. Ermolin, 1980).

Capitolul III. Diagnosticul helmintiazelor și metodele de cercetare helmintologică

Este necesar să se examineze pentru helmintiază toți pacienții pentru care solicită îngrijire medicală, și în special pacienții care apelează la un pediatru, terapeut și neurolog cu plângeri de efecte secundare tract gastrointestinal, sistem nervos si cu anemie. Dacă medicul nu este întotdeauna capabil să utilizeze metode de cercetare de laborator, atunci fiecare lucrător medical care oferă îngrijiri într-o clinică ambulatorie sau într-un spital este obligat să intervieveze pacientul cu privire la izolarea helminților.

Dacă există indicații clinice date în capitolele relevante, diagnosticul trebuie clarificat folosind metode de laborator studii pentru helmintiază.

Datorita predominantei helmintiazele intestinale cel mai mare semnificație practică are o examinare a scaunului.

Metode de testare a scaunului pentru helmintiază

Scaunul este livrat la laborator într-un recipient de sticlă curat (aproximativ un sfert de cană de scaun luat din diferite locuri într-o singură porție); În timpul unei examinări de rutină, este permisă livrarea scaunului în laborator în cutii de chibrituri sau cutii cu atele.

Pentru a controla deparazitarea, se livrează întreaga porțiune de fecale colectată după administrare (așa cum este prescris de medic). antihelminticși laxativ (în borcane mari de sticlă închise, găleți).

Examenul microscopic al scaunului este de bază în diagnosticul helmintiazelor intestinale; ar trebui să fie întotdeauna precedată de o examinare macroscopică generală a fecalelor pentru a detecta segmente de cestode mari, oxiuri, viermi rotunzi etc.

Scaunul trebuie să fie proaspăt sau conservat (într-o soluție de formaldehidă 5%), deoarece uscarea schimbă dramatic structura ouălor. În plus, când fecalele stau, dezvoltare rapidă ouă ale unor helminți (de exemplu, viermi anchilostomi), ceea ce face diagnosticul dificil.

Conform instrucțiunilor Ministerului Sănătății al URSS, este necesar să se examineze scaunul simultan folosind metoda Fulleborn și frotiul nativ.

Frotiu nativ

Frotiu nativ: o bucată mică de fecale (aproximativ de mărimea unui bob de mazăre), luată cu un chibrit, sticlă sau bețișon de lemn din diferite locuri din porțiunea livrată, este măcinată temeinic pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție de glicerol 50% sau în soluție salină sau în apă. Acoperiți cu o lametă, apăsând ușor pe acesta din urmă (cu un ac de disecție). Frotiul trebuie să fie subțire, transparent și uniform. Este utilizat doar ca o completare la alte metode care asigură îmbogățirea medicamentului. Cel puțin două medicamente ar trebui revizuite.

Pentru a detecta larvele de helminți (precum și ouăle acestora), se face un frotiu nativ după cum urmează (conform lui Shulman): 2-3 g de fecale sunt bine amestecate prin „răsucirea” unei baghete de sticlă într-o emulsie cu cinci îndoiți cantitatea de apă curată sau soluție salină. În timpul amestecării, larvele se acumulează în apropierea tijei de sticlă, așa că imediat după terminarea amestecării, o picătură de emulsie este transferată rapid cu o tijă de sticlă pe o lamă de sticlă, acoperită cu o lamă și examinată. S. D. Lyubchenko (1936) a dovedit că metoda răsucirii este mai eficientă decât metoda frotiului, în special în ceea ce privește ouăle de viermi rotunzi. Pe baza lucrării lui S. D. Lyubchenko, considerăm că este recomandabil să înlocuim metoda frotiului cu metoda răsucirii.

Metoda Fulleborn

Metoda Fulleborn: 5-10 g de fecale prelevate din diferite locuri se pun intr-un borcan cu o capacitate de 50-100 ml si se freaca bine cu o bagheta de sticla sau lemn intr-o solutie saturata. sare de masă(400 g din această sare se dizolvă în 1 litru de apă, se încălzește până la fierbere și se filtrează printr-un strat de vată sau tifon; soluția se folosește la rece: greutate specifică 1,2). Soluția se adaugă treptat până se obține o suspensie uniformă, iar cantitatea totală de soluție adăugată trebuie să fie de aproximativ 20 de ori mai multa cantitate fecale. Pentru amestecarea fecalelor, Fulleborn a recomandat folosirea paharelor de ceai, dar este mai convenabil să se pregătească o suspensie în borcane cu unguent cu o capacitate de 50-100 ml, folosind două borcane pentru fiecare analiză (sau în căni cu o capacitate de 100 ml).

Imediat după prepararea suspensiei, particulele mari care au plutit la suprafață sunt îndepărtate de pe suprafață cu o spatulă, o linguriță de metal sau o bucată de hârtie curată ( formatiuni vegetale, rămân alimente nedigerate etc.), după care amestecul se lasă să stea 1-1,5 ore. După acest timp, întregul film este îndepărtat de pe suprafața amestecului atingând o sârmă sau buclă de platină (plată) cu un diametru de cel mult 1 cm, îndoită în unghi drept; Filmul este scuturat pe o lamă de sticlă și acoperit cu o lamă. Puneți 3-4 picături sub fiecare lamelă (18x18 mm). În total, trebuie pregătite cel puțin 4 preparate (un pahar de acoperire pentru fiecare preparat). Bucla este încălzită la foc și spălată cu apă după fiecare analiză.

Folosind metoda Fulleborn, ouăle tuturor nematodelor (cu excepția ouălor de viermi rotunzi nefertilizate) și ouăle de tenie pitice sunt detectate rapid și ușor.

Metoda Berman este utilizată pentru a examina fecalele pentru larvele de helminți (pentru strongiloidiază). Această metodă este următoarea: 5 g de fecale pe o plasă metalică (o strecurătoare de lapte este convenabilă în acest scop) se așează pe o pâlnie de sticlă atașată la un trepied. Un tub de cauciuc cu o clemă este plasat la capătul inferior al pâlniei.

Plasa cu fecale este ridicată și apă încălzită la aproximativ 50° este turnată în pâlnie, astfel încât partea inferioară a plasei cu fecale să fie scufundată în apă. Larvele se deplasează activ în apă și se acumulează în partea inferioară a tubului de cauciuc. După 2-4 ore, clema este deschisă și lichidul este drenat într-una sau două tuburi de centrifugă.

După centrifugare timp de 1-2 minute top parte lichidul este scurs rapid, iar sedimentul este plasat în picături pe lame de sticlă și examinat sub lame de acoperire sau întins strat subțire pe 2-3 pahare mari și apoi examinați fără ochelari de acoperire.

Metoda Berman este, de asemenea, folosită pentru a testa solul pentru prezența larvelor de vierme.

Metoda Stoll

Metoda Stoll este folosită pentru a determina intensitatea invaziei. O soluție decinormală de sodă caustică este turnată într-un balon special de sticlă până la marcajul de 56 cm 3, apoi se adaugă fecale până când nivelul lichidului atinge 60 cm 3, adică 4 cm 3. După agitarea cu perle de sticlă, 0,075 ml de amestec sunt luate pentru examinare și examinate sub una sau două lame obișnuite. Cantitatea rezultată se înmulțește cu 200 pentru a obține numărul de ouă conținute în 1 cm 3 de fecale.

Studiul conținutului duodenal

Sucul duodenal și bila vezicii urinare, obținute în mod obișnuit prin sondare (și bila vezicii urinare și după un reflex din vezica biliară), se amestecă temeinic cu un volum egal. eter etilic; amestecul este centrifugat, dupa care sedimentul este examinat la microscop. Pe lângă sedimente, examinare microscopica fulgii care plutesc în lichid, care pot conține ouă de helminți, sunt în mod necesar expuși. Când testați sucul gastric și vărsăturile pentru ouă de helminți, puteți utiliza aceeași tehnică.

Examinarea sucului duodenal și a conținutului stomacului trebuie efectuată dacă există suspiciunea de boli helmintice ficat, vezica biliară (opistorhiază, fascioliază, dicrocelioză) și duoden(strongiloidiaza).

Examinarea sputei

Sputa este măcinată pe o placă de sticlă, acoperită strâns cu o altă placă de sticlă și examinată cu ochiul liber pe un fundal deschis și negru, precum și sub lupă în lumină transmisă. Bucăți individuale de spută (acumulări „ruginite”, resturi de țesut etc.) sunt aplicate într-un strat subțire pe o lamă de sticlă, acoperite strâns cu o lametă și examinate la nivel scăzut și scăzut. mărire mare microscop

a) pentru a diagnostica cisticercoza cutanată, țesut subcutanat sau mușchi, o bucată excizată aseptic din țesutul relevant este examinată mai întâi cu ochiul liber. Zonele de țesut sunt îndepărtate folosind ace de disecție pentru a dezvălui vizibil cu ochiul liber veziculă - cisticerc (foto A); lungimea sa este de 6-20 mm, lățimea 5-10 mm. Când este detectată o veziculă suspectă pentru cisticerc, aceasta este zdrobită între două lame de sticlă și examinată la microscop. Cisticercul (Cistycercus cellulosae) este determinat de prezența unui scolex cu patru ventuze și o corolă de cârlige (foto B).

Fotografie. A - cisticerci cu scolex întors spre exterior; B - Cap de tenia de porc.

b) Pentru a diagnostica trichineloza, o bucată de mușchi excizată aseptic (biceps sau gastrocnemius) este zdrobită cu grijă într-o soluție de glicerină 50% în cele mai fine fibre folosind ace de disecție. Mușchii zdrobiți sunt comprimați între două lame de sticlă și examinați la un microscop de putere redusă într-un câmp vizual întunecat. Se recomandă testarea mușchilor pentru trichineloză nu mai devreme de a 8-a zi a bolii. Larvele de Trichinella se găsesc în mușchi în poziție încolăcită: sunt închise în capsule în formă de lămâie.

Fotografie. A - Larve de Trichinella în mușchi; B — Capsule calcificate de Trichinella.

Raze X

Cel mai adesea, fluoroscopia este utilizată pentru a diagnostica echinococoza și, mai rar, cisticercoza. Cisticercii sunt detectați prin fluoroscopie numai după calcificare (în cazuri boala de lunga durata). În ultimii ani, fluoroscopia a fost folosită și pentru a diagnostica ascariaza atât în ​​stadiul larvar incipient, cât și, parțial, în stadiul intestinal.

În perioada de migrare a larvelor de viermi rotunzi (și anchilostomii), în plămâni sunt detectate focare inflamatorii instabile, uneori multiple; în același timp, în sânge apare o eozinofilie semnificativă.

Viermii rotunzi maturi din punct de vedere sexual sunt clar vizibili la fluoroscopia intestinelor persoanelor afectate. Această metodă, în ciuda complexității și a greutății sale, ar trebui utilizată ca metodă suplimentară pentru diagnosticarea ascariazei în cazurile cu o analiză scatologică negativă. Potrivit lui E. S. Geselevich, din 180 de pacienți cu ascariază identificați prin fluoroscopie, 54 nu aveau ouă de ascaris găsite în scaun (vezi).

Metode de cercetare helmintologică. Metodele de diagnosticare a infecțiilor cu helminți sunt împărțite în cele directe, bazate pe detectarea directă a helminților înșiși sau a fragmentelor acestora, precum și a larvelor și a ouălor de helminți (metode pentru examinarea fecalelor, urinei, bilei și conținutului duodenal, spută, sânge și țesuturi, material obținute prin răzuire din zona perianală și spațiile subunguale) și indirecte, cu ajutorul cărora dezvăluie modificări secundare, care apar în corpul uman ca urmare a activității vitale a helminților (studii ale compoziției morfologice a sângelui, metode imunologice diagnosticul helmintiazelor, examinări cu raze X etc.). Dintre metodele directe, cele mai frecvente sunt cele scatologice, care sunt împărțite în macro- și microhelmintoscopice. În unele cazuri, se folosesc metode speciale.

Metode de cercetare macrohelmitoscopică care vizează căutarea helminților sau a fragmentelor acestora (scolex, segmente, părți ale strobilei cestodelor). Ele sunt utilizate pentru a diagnostica acele helmintiaza în care ouăle nu sunt excretate în excrementele pacientului sau sunt excretate în cantități mici și nu întotdeauna (de exemplu, cu enterobiaza, oxiurii se găsesc în fecale, cu taeniasis - segmente).

Pentru a detecta oxiuri sau segmente de cestode în fecale, fecalele sunt examinate cu ochiul liber. Pentru diagnostic diferentiat Taeniasis, se recomandă vizualizarea fecalelor diluate cu apă în porții mici separate în cuve fotografice negre sau în vase Petri pe un fundal întunecat. Formatiunile mari suspecte de fragmente de helminti sunt examinate sub lupa intre doua lame. Dacă conform indicatii clinice sugerează detectarea unor mici helminți sau capete de cestode după tratament, apoi particulele suspecte sunt examinate sub o lupă într-o picătură de glicerină și, dacă este necesar, la microscop.

Metode de cercetare microhelmintoscopică(calitative) au ca scop identificarea ouălor și larvelor de helminți. Se folosește metoda de frotiu gros cu o placă de acoperire din celofan conform Kato. Amestecul Kato este format din 6 ml Soluție apoasă 3% de verde de malachit, 500 ml glicerină și 500 ml Soluție de fenol 6%. Plăci Kato (celofanul hidrofil este tăiat în bucăți care măsoară 20´40 mm) scufundat timp de 24 hîn amestecul Kato, astfel încât să fie adiacente unul altuia (3-5 ml soluție Kato la 100 de plăci). 100 mg fecalele sunt aplicate pe o lamă de sticlă, acoperite cu o placă de acoperire din celofan conform Kato și presate astfel încât fecalele să fie mânjite pe lama de sticlă în limitele plăcii de celofan. Frotiul se lasă la temperatura camerei pentru a se ușura cu 40-50 min,și apoi examinat la microscop. In sezonul cald, pentru a preveni uscarea preparatului, asezati un burete umed pe farfuria preparatului preparat.

Pentru detectarea completă a helminților de toate tipurile, metoda de frotiu gros Kato cu o placă de acoperire din celofan trebuie utilizată în combinație cu una dintre metodele de îmbogățire. Cele mai comune dintre ele sunt metoda Kalantaryană și metoda Fulleborn.

Metoda Kalantaryan: în sticle cu gura largă cu un volum de 100 ml se amestecă bine cu o baghetă de sticlă 5 G fecale, adăugând treptat soluție saturată de azotat de sodiu (1 kg azotat de sodiu la 1 l apă la fierbere) până la marginea paharului. Particulele mari care plutesc la suprafață sunt îndepărtate cu o linguriță de hârtie. Se aplică o lamă de sticlă pe suprafața soluției saline (soluția salină se adaugă până când amestecul intră în contact complet cu lama de sticlă). In 20-30 min lama este îndepărtată și filmul este examinat la microscop. În absența acestei săruri, puteți folosi o soluție saturată de sare de masă conform Fholleborn (400 G sare in 1 l apă clocotită).

Datorită faptului că ouăle cu o greutate specifică mare (ouă nefertilizate de viermi rotunzi, ouă de trematode și cestode mari) nu plutesc, pe lângă examinarea stratului de suprafață al lichidului, atunci când se utilizează metoda Fulleborn, este necesar să se examineze 2-4 preparate din sediment la microscop.

Metode speciale de laborator pentru testarea diferitelor helmintiază.

7.7. Metode de determinare a viabilității ouălor și larvelor de helminți

Viabilitatea ouălor de helminți este determinată de aspect, prin colorare cu vopsele vitale, cultivare in conditii optimeși stabilirea unei probe biologice.

7.7.1. Determinarea viabilității ouălor sau larvelor de helminți după aspect

Ouăle de helminți sunt microscopate mai întâi la mic, apoi la mare mărire. În ouăle de helminți deformate și moarte, coaja este ruptă sau îndoită spre interior, plasma este tulbure și slăbită. Ouăle segmentate au bile zdrobitoare (blastomere) de dimensiuni inegale, formă neregulată, deseori deplasat la un singur pol. Uneori există ouă anormale care, în ciuda deformărilor externe, se dezvoltă normal. La larvele vii de viermi rotunzi, granularitatea fină este prezentă numai în partea mijlocie a corpului; pe măsură ce acestea mor, se răspândește în tot corpul, apar vacuole mari hialine strălucitoare, așa-numitele „șiruri de perle”.

Pentru a determina viabilitatea ouălor mature de viermi rotunzi, viermi bici și oxiuri, ar trebui să apelați mișcări active larvelor prin încălzirea ușoară a preparatului (la o temperatură care nu depășește 37 °C). Este mai convenabil să se observe viabilitatea larvelor de viermi rotunzi și tricoceluși după ce acestea sunt izolate din coaja de ou prin apăsarea pe paharul preparatului cu un ac de disecție sau o pensetă.

La larvele invazive de viermi rotunzi, se observă adesea o teacă desprinzându-se la capătul capului, iar la larvele de viermi bici care s-au dezvoltat complet în ou, se găsește un stilt în acest loc la o mărire mare. La larvele de helminți moarte, indiferent de locația lor (în ou sau în afara acestuia), se observă degradarea corpului. În acest caz, structura internă a larvei devine blocată sau granulară, iar corpul devine tulbure și opac. Vacuolele se găsesc în corp, iar rupturi se găsesc pe cuticulă.

Viabilitatea oncosferelor taeniide (bovine, tenia de porc etc.) este determinată de mișcarea embrionilor atunci când sunt expuși la acestea. enzime digestive. Ouăle se pun pe un pahar de ceas cu suc gastric al câinelui sau suc duodenal artificial. Compoziția acestuia din urmă: pancreatină - 0,5 g, bicarbonat de sodiu - 0,09 g, apă distilată - 5 ml. Paharele de ceas cu ouă se pun într-un termostat la 36 - 38 ° C timp de 4 ore. În acest caz, embrionii vii sunt eliberați de membranele lor. Cojile oncosferelor vii se dizolvă, de asemenea, în pepsină acidulată și în soluție alcalină tripsina după 6 - 8 ore într-un termostat la 38 ° C.

Dacă puneți ouă de teniide într-o soluție de 1% de sulfură de sodiu sau o soluție de 20% de hipoclorură de sodiu sau într-o soluție de 1% de apă cu clor la 36 - 38 ° C, embrionii maturi și vii sunt eliberați din membrane și nu schimbare pe parcursul unei zile. Oncosferele imature și moarte se micșorează sau se umflă și se măresc brusc, apoi se „dizolvă” în decurs de 10 minute până la 2 ore. De asemenea, embrionii vii de taeniid se mișcă activ într-un amestec de soluție de clorură de sodiu 1%, soluție de bicarbonat de sodiu 0,5% și bilă la 36 - 38 °C.

Viabilitatea Adolescaria fascioli colectată pe plante și alte obiecte ale corpurilor de apă este verificată prin examinarea lor pe o lamă de sticlă în soluție fiziologică la microscop cu o etapă de încălzire. Când larvele trematode sunt încălzite, ele încep să se miște.

Pentru a determina viabilitatea ouălor de tenie pitic, cea mai simplă metodă este a lui N.S. Ionina: la ouăle vii, perechea mediană de cârlige embrionare este fie paralelă cu cele laterale, fie acestea din urmă formează un unghi cu mediana de la bază mai mică de 45°. La ouăle moarte, perechile laterale formează un unghi cu perechea mediană la bază de mai mult de 45°, sau cârligele sunt împrăștiate aleatoriu (dispunerea lor pereche se pierde); Uneori, embrionul se micșorează și se formează granule. O metodă mai precisă se bazează pe apariția mișcărilor oncosferei în timpul unei schimbări bruște a temperaturii: de la 5 - 10 ° la 38 - 40 ° C.

Determinarea viabilității ouălor imature de nematod ar trebui studiată într-o cameră umedă (cube Petri), plasând ouă de viermi rotuși într-o soluție de formaldehidă 3% preparată într-o soluție izotonă de clorură de sodiu la o temperatură de 24 - 30 ° C, ouă de vierme într-un soluție 3%. de acid clorhidric la o temperatură de 30 - 35 ° C; ouă de oxiuri într-o soluție izotonă de clorură de sodiu la o temperatură de 37 °C. Vasele Petri trebuie deschise de 1 - 2 ori pe săptămână pentru o mai bună aerare, iar hârtia de filtru trebuie re-umedată apă curată.

Observațiile dezvoltării ouălor de helminți se efectuează de cel puțin 2 ori pe săptămână. Absența semnelor de dezvoltare în 2 - 3 luni indică non-viabilitatea acestora. Semnele dezvoltării ouălor de helminți sunt mai întâi etapele zdrobirii, împărțind conținutul oului în blastomere separate. În primele zile se dezvoltă până la 16 blastomeri, care trec în a doua etapă - morula etc.

Ouăle de anchilostoma se cultivă într-un cilindru de sticlă (50 cm înălțime și 7 cm în diametru) închis cu dop. Un amestec de volume egale nisip steril, cărbune iar fecalele cu ouă de anchilostoma, diluate cu apă până la o consistență semi-lichidă, se toarnă cu grijă pe fundul cilindrului folosind un tub de sticlă. În 1 - 2 zile de așezare în întuneric la o temperatură de 25 - 30 ° C, larvele rabditiforme eclozează din ouă, iar după 5 - 7 zile devin filariforme: larvele se târăsc pe pereții cilindrului, unde se află. vizibil chiar și cu ochiul liber.

Ouăle de trematode care se dezvoltă în mod natural în apă, de exemplu opisthorchis, diphyllobothriidae, fasciolae și altele, sunt așezate pe un pahar de ceas, vas Petri sau alt vas și se toarnă un strat mic de apă obișnuită. La cultivarea ouălor de Fasciola, trebuie avut în vedere faptul că acestea se dezvoltă mai repede în întuneric, în timp ce în ouăle vii la o temperatură de 22 - 24 ° C, miracidiul se formează în 9 - 12 zile. La microscopia ouălor trematode în curs de dezvoltare, mișcările miracidiului sunt clar vizibile. Miracidium fasciola iese din coaja ouă numai în lumină.

Metoda Fulleborn. Larvele de anchilostoma și strongilid sunt cultivate pe agar într-o cutie Petri cu cărbune animal. După ținerea într-un termostat la o temperatură de 25 - 30 ° C timp de 5 - 6 ore, larvele se târăsc prin agar, lăsând în urmă o cale de bacterii.

metoda Harada și Mori. Adăugați 7 ml de apă distilată în eprubetele plasate într-un suport. Cu ajutorul unui bețișor de lemn, luați 0,5 g de fecale și faceți un frotiu pe hârtie de filtru (15 x 150 mm) la 5 cm de marginea stângă (această operațiune se realizează pe o foaie de hârtie pentru a proteja suprafața bancului de laborator). Apoi banda cu frotiu este introdusă în eprubetă, astfel încât capătul din stânga liber de frotiu să ajungă la fundul eprubetei. Acoperiți capătul superior cu o bucată de celofan și înfășurați-l strâns cu o bandă elastică. Pe eprubetă sunt scrise numărul și prenumele persoanei examinate. În această stare, tuburile sunt păstrate timp de 8 - 10 zile la o temperatură de 28 °C. Pentru a studia larvele, scoateți capacul din celofan și îndepărtați o bandă de hârtie de filtru cu penseta. Trebuie avut grijă atunci când faceți acest lucru, deoarece un număr mic de larve infecțioase se pot deplasa la capătul superior al hârtiei de filtru sau pe partea laterală a tubului și poate pătrunde sub suprafața celofanului.

Eprubetele se pun la cald baie de apă la o temperatură de 50 ° C timp de 15 minute, după care conținutul lor este agitat și turnat rapid într-o eprubetă de 15 ml pentru a sedimenta larvele. După centrifugare, supernatantul este îndepărtat, iar sedimentul este transferat pe o lamă de sticlă, acoperit cu o lamă și examinat microscopic la mărire mică.

Pentru diagnostic diferentiat larve filariforme, trebuie să utilizați datele din tabelul 3.

Tabelul 3

DIAGNOSTICUL DIFERENȚIAL AL ​​LARVELOR FILARIOIDE DE A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, TRICHOStrONGYLUS SP.

Larvele	Dimensiuni	Semne caracteristice
A. duodenale	Lungimea corpului aproximativ 660 µm, lungimea tecii - 720 nm	Striația calotei este mai puțin pronunțată, proeminența bucală este mai puțin vizibilă, capătul anterior al corpului (dar nu și capacul) este tocit, diametrul tubului intestinal este mai mic decât bulbul esofagian, capătul caudal este tocit.
N. americanus	Lungimea corpului aproximativ 590 microni, lungimea tecii - 660 nm	Calota este vizibil striată, în special în partea caudală a corpului, protuberanța bucală apare întunecată, capătul anterior al corpului (dar nu și capacul) este rotunjit ca un capăt îngust. ou de gaina, partea anterioară a tubului intestinal are același diametru ca și bulbul esofagian, capătul caudal este ascuțit
S. stercoralis	Lungimea corpului aproximativ 500 microni	Larva este fără teacă, esofagul are aproximativ jumătate din lungimea corpului, coada este tocită sau ramificată
Trichostrongylus sp.	Lungimea corpului aproximativ 750 µm	Lumenul intestinal nu este drept, ci în zig-zag, capătul cozii este rotunjit și în formă de nasture

7.7.2. Metode de colorare a ouălor și a larvelor de helminți

Țesuturile moarte în majoritatea cazurilor percep vopselele mai repede decât cele vii. Aceste caracteristici sunt folosite în helmintologie pentru a determina viabilitatea ouălor și larvelor de helminți. Cu toate acestea, în unele cazuri, unele vopsele sunt mai bine percepute de țesuturile vii decât de cele moarte.

Pentru a diferenția între ouăle și larvele vii și cele moarte, se folosesc următoarele vopsele și metode.

Albastrul de metilen leucobază este adesea folosit pentru a colora țesuturile vii și moarte. Celulă vie sau țesutul reduce albastrul de metilen în leucobază incoloră, țesutul mort nu are această capacitate, deci capătă culoare.

Criteriul pentru starea unui ou este colorarea embrionului, dar nu și coaja. Această abilitate este asociată cu condițiile în care oul moare. În cazurile în care membrana fibroasă dintr-un ou mort nu își pierde proprietățile semi-permeabile, nu va permite coloranților să treacă și, prin urmare, embrionul mort nu va fi pătat. Un embrion colorat indică întotdeauna moartea oului.

Pentru a colora ouăle de viermi rotunzi, puteți folosi albastru de metilen într-o soluție de acid lactic cu alcali caustic (0,05 g albastru de metilen, 0,5 g hidroxid de sodiu, 15 ml acid lactic). Ouăle vii nu percep culoarea; sunt pictate în Culoarea albastră embrioni de ouă moarte. Colorarea larvelor de viermi rotunzi cu o soluție de bază de vopsea albastru brillant cresyl la o concentrație de 1:10000 se efectuează după cum urmează: o picătură de lichid cu ouă de viermi rotuși și o picătură de soluție de vopsea de bază sunt aplicate pe o lamă de sticlă. Preparatul este acoperit cu o lamelă, care este presată strâns pe lamă în timp ce se bate ușor cu un ac de disecție. Numărul de larve care apar și gradul de colorare a acestora sunt observate la microscop; după care același medicament este din nou examinat după 2 - 3 ore. Numai larvele neformate care nu s-au pătat timp de 2 ore sunt considerate vii. Larvele moarte fie nu ies din ouă, fie devin colorate atunci când coaja se rupe (parțial sau complet).

La determinarea viabilității ouălor de viermi rotunzi aviari, este posibilă colorarea preparatelor cu 5% soluție alcoolică Yoda. Când este aplicat pe preparat, germenii ouălor moarte de Ascaridia apar în 1 - 3 secunde. sunt vopsite portocaliu.

Ouăle moarte de opistorhis și oncosferele de teniei de bovine sunt colorate cu o soluție de albastru de toluidină (1:1000), iar oncosferele de tenii de bovine moarte cu o soluție de albastru de cresil strălucitor (1:10000). În același timp, embrionii și cojile ouălor moarte și vii capătă culoare. Prin urmare, după colorare, ouăle și oncosferele sunt spălate apă curatăși apoi colorați-le cu safranină (diluată 1:10000 în alcool 10 °C). Alcoolul îndepărtează vopseaua de pe cochilii, iar safranina o înroșește. Ca rezultat, ouăle vii devin roșii; ouăle cu embrioni morți devin albastre, dar coaja rămâne roșie. Embrionii morți ai oncosferelor tenia de bovine devin rapid, în câteva minute, roșu aprins sau culoarea roz safranină sau albastru cresyl strălucitor la o diluție de 1:4000 sau indigo carmin la o diluție de 1:1000 - 1:2000. Embrionii vii nu se schimba sub influenta acestor vopsele nici dupa 2 - 7 ore.

Pentru a determina viabilitatea ouălor de tenia pitici, se recomandă utilizarea următoarelor vopsele:

1. Albastru de creasil strălucitor (1:8000) - după 1 oră, oncosfera ouălor moarte devine deosebit de viu colorată, care iese în evidență puternic pe fundalul pal sau incolor al restului oului.

2. Safranină (1:8000 când este expus timp de 2 ore și 1:5000 pentru 3 - 5 ore).

3. Soluție 50% de acid pirogalic într-o diluție de 1:2 - atunci când este expus timp de 1 oră la o temperatură de 29 - 30 ° C (cu cât temperatura este mai mică, cu atât procesul de vopsire este mai lung).

7.7.3. Metodă luminiscentă pentru studierea ouălor și larvelor de helminți

Microscopia fluorescentă face posibilă diferența dintre obiectele vii și cele moarte fără a deteriora oul. Nu este folosit pentru fluorescență raze ultraviolete, și partea albastru-violet a luminii vizibile, cu un microscop convențional și lamele de sticlă; adăugat la iluminatorul OI-18 set special filtre de culoare.

Ouăle vii și moarte de viermi rotunzi, oxiuri, tenii pitici, tenia bovine, tenii late și alți helminți fluoresc diferit. Acest fenomen se observă atât în ​​timpul luminiscenței primare fără utilizarea coloranților, cât și atunci când se colorează cu fluorocromi (acridină portocalie, corifosfină, primulină, aurolină, berlerina sulfat, tripaflavină, rivanol, acrină etc.).

Ouăle de viermi rotunzi necolorate, vii, nesegmentate strălucesc în verde strălucitor cu o nuanță gălbuie; în ouăle moarte coaja radiază lumina verde mult mai strălucitoare decât partea embrionară verde închis; În ouăle de viermi rotunzi cu o larvă, apare doar coaja, iar în ouăle moarte, atât coaja, cât și larva sunt galbene strălucitoare.

Ouăle vii nepigmentate și nesegmentate de oxiuri și tenii pitici emit o lumină galben-verzuie; coaja ouălor moarte luminesce intens pe fundalul unei mase embrionare de culoare verde închis.

Cu luminiscență secundară (atunci când este colorată cu portocaliu de acridină la o diluție de 1:10.000 și 1:50.000 de la 30 de minute la 2 ore), coaja nematodelor, trematodelor și cestodelor vii și morți luminesce diferit.

Cojile ouălor vii și moarte ale viermilor rotunzi, toxocara, oxiurii, teniei pitici, teniei de șobolan, teniei taurului și teniei sunt de culoare portocalie-roșu. Embrionii de ouă vii de viermi rotunzi, toxascari, tenii de șobolan, tenii late și oncosferelor de viermi teniei bovine au fluorescentă verde închis mac sau culoare gri-verde. Ouăle embrionare moarte ale acestor helminți emit o culoare roșu-portocaliu „arzătoare”. Larvele vii de oxiuri și toxocara (coji de ouă eliberate) emit o lumină de culoare gri-verde; atunci când mor, culoarea se schimbă de la capătul capului la un verde deschis „arzător”, apoi galben, portocaliu și în final portocaliu strălucitor.

Când sunt colorate cu fluorocromi - coryphosphylum, primulina, ouăle moarte de viermi rotunzi și tricocemii prezintă o strălucire de la galben-liliac la roșu-cupru. Ouăle viabile nu luminesc, ci sunt colorate culoare verde închis.

Ouăle vii ale trematodelor (paragonimus și clonorchis) nu luminesc atunci când sunt colorate cu portocaliu de acridină, dar ouăle moarte produc o culoare verde-gălbuie.

Metoda luminiscenței poate fi folosită și pentru a determina viabilitatea larvelor de helminți. Astfel, larvele de strongilat și rhabditatus fluorocromate cu o soluție de portocală de acridină (1:2000) strălucesc: cele vii - verzi (cu nuanță), cele moarte - cu o lumină portocalie strălucitoare.

Miracidiile vii care ies din coajă emit o lumină slabă albăstruie cu o corolă galben-deschis abia vizibilă a cililor, dar la 10 - 15 minute după moarte ele apar cu un verde deschis „arzător” strălucitor și apoi o lumină portocalie-roșie.

7.7.4. Metoda probei biologice

De exemplu, pentru a determina viabilitatea ouălor de ascaride (viermi rotunzi de porc, viermi rotunzi umani, Toxocara, Toxascaris etc.) per animal (cobai, șoareci) aveți nevoie de cel puțin 100 - 300 de ouă cu larve dezvoltate. Ouăle de Ascaris într-o soluție izotonă de clorură de sodiu sunt pipetate prin gura unui șoarece sau cobai. După 6-7 zile, animalul este sacrificat, ficatul și plămânii acestuia sunt deschise și examinate separat pentru prezența larvelor de ascaridat. Pentru a face acest lucru, ficatul și plămânii sunt tăiați în bucăți mici cu foarfecele și examinați folosind metoda Berman sau Supryaga (secțiunea 6.1.2).

Dacă animalele au fost infectate cu ouă invazive vii, atunci la autopsie, larvele de ascarid migratoare sunt găsite în ficat și plămâni.

În caz de infecție, ouăle de Fasciola din fecalele animalelor de laborator pot fi detectate la iepuri după 2 luni, în porcușori de Guineea- după 50 de zile, la șoareci - după 35 - 40 de zile.

Pentru a obține un răspuns mai rapid, animalele de laborator sunt deschise după 20 - 30 de zile și ficatul este examinat pentru prezența fasciolilor tineri.

Pentru a determina viabilitatea ouălor de tenie pitic, se recomandă, de asemenea, hrănirea acestora la șoareci albi neinfectați anterior, urmată de deschiderea animalelor după 92-96 de ore și identificarea cisticercoizilor din vilozitățile intestinale sau cestodele din lumenul intestinal.

Pentru a determina viabilitatea ouălor de opistorhis se recomandă o metodă (German S.M., Baer S.A., 1984), bazată pe activarea fizico-chimică a glandei de ecloziune miracidium și stimularea activitate motorie larve, ceea ce duce la deschiderea capacului de ou și eliberarea activă de miracidiu în condiții experimentale.

Suspensia de ouă de opistorhis în apă este prerăcită la 10 - 12 °C (toate operațiunile ulterioare se efectuează la temperatura camerei 19 - 20 °C). Se adaugă 1 picătură de suspensie care conține 100 - 150 de ouă într-un tub de centrifugă. Eprubeta se pune într-un suport timp de 5 - 10 minute. În acest timp, toate ouăle reușesc să se scufunde în fund. Apoi, excesul de apă este aspirat cu atenție cu o bandă de hârtie de filtru și se adaugă 2 picături dintr-un mediu special în eprubetă. Mediul este preparat în tampon Tris-HCI 0,005 M; se adaugă în tampon o soluție de etanol 12 - 13% și un colorant (fucsin, safranină, eozină, albastru de metilen etc.). Se agită eprubeta, se pipetează conținutul pe o lamă de sticlă și se lasă timp de 10 minute, agitând ușor. Apoi adăugați 2 picături din mediul specificat. Preparatul este gata pentru microscopie sub un microscop cu lumină convențional la mărire de 20x.

În acest timp, capacul larvelor viabile se deschide, iar miracidiul iese activ în mediul specificat. Datorită prezenței etanolului în el, acestea sunt imobilizate după 2 - 5 minute și apoi vopsite cu un colorant. Ele pot fi ușor detectate și numărate prin microscopie.