लिम्फोसाइटों की एसकेएल मिश्रित संस्कृति का विश्लेषण। लिम्फोसाइटों की मिश्रित संस्कृति

प्रत्येक वेब डेवलपर को डेटाबेस क्वेरी लिखने के लिए SQL जानने की आवश्यकता होती है। और, हालांकि phpMyAdmin को रद्द नहीं किया गया है, निम्न-स्तरीय SQL लिखने के लिए अक्सर अपने हाथों को गंदा करना आवश्यक होता है।

इसीलिए हमने SQL की बुनियादी बातों का एक संक्षिप्त दौरा तैयार किया है। आएँ शुरू करें!

1. एक तालिका बनाएं

CREATE TABLE स्टेटमेंट का उपयोग टेबल बनाने के लिए किया जाता है। तर्कों में स्तंभों के नाम, साथ ही उनके डेटा प्रकार होने चाहिए।

आइए नाम की एक सरल तालिका बनाएं महीना. इसमें 3 कॉलम हैं:

• पहचान- कैलेंडर वर्ष में माह संख्या (पूर्णांक)।
• नाम- महीने का नाम (स्ट्रिंग, अधिकतम 10 अक्षर)।
• दिन- इस माह में दिनों की संख्या (पूर्णांक)।

संबंधित SQL क्वेरी इस प्रकार दिखाई देगी:

तालिका बनाएं महीने (आईडी int, नाम varchar(10), दिन int);

साथ ही, तालिकाएँ बनाते समय, किसी एक कॉलम के लिए प्राथमिक कुंजी जोड़ने की सलाह दी जाती है। इससे रिकॉर्ड अद्वितीय रहेंगे और लाने के अनुरोधों में तेजी आएगी। हमारे मामले में, महीने का नाम अद्वितीय (कॉलम) होना चाहिए नाम)

तालिका बनाएं महीने (आईडी int, नाम varchar(10), दिन int, प्राथमिक कुंजी (नाम));

तिथि और समय

डेटा प्रकार	विवरण
तारीख	दिनांक मान
दिनांक समय	दिनांक और समय मान मिनट के अनुसार सटीक होते हैं
समय	समय का मूल्य

2. पंक्तियाँ सम्मिलित करना

आइए अब अपनी तालिका भरें महीने उपयोगी जानकारी. किसी तालिका में रिकॉर्ड जोड़ना INSERT कथन का उपयोग करके किया जाता है। इस निर्देश को लिखने के दो तरीके हैं।

पहली विधि उन कॉलमों के नाम निर्दिष्ट करना नहीं है जहां डेटा डाला जाएगा, बल्कि केवल मान निर्दिष्ट करना है।

यह रिकॉर्डिंग विधि सरल है, लेकिन असुरक्षित है, क्योंकि इसकी कोई गारंटी नहीं है कि जैसे-जैसे परियोजना का विस्तार होगा और तालिका संपादित की जाएगी, कॉलम पहले की तरह उसी क्रम में होंगे। INSERT स्टेटमेंट लिखने के एक सुरक्षित (और साथ ही अधिक बोझिल) तरीके के लिए मान और कॉलम के क्रम दोनों को निर्दिष्ट करने की आवश्यकता होती है:

यहां सूची में पहला मान है मानपहले निर्दिष्ट कॉलम नाम आदि से मेल खाता है।

3. तालिकाओं से डेटा निकालना

SELECT स्टेटमेंट हमारा है सबसे अच्छा दोस्तजब हम डेटाबेस से डेटा प्राप्त करना चाहते हैं। इसका उपयोग अक्सर किया जाता है, इसलिए इस अनुभाग पर बहुत ध्यान दें।

SELECT स्टेटमेंट का सबसे सरल उपयोग एक क्वेरी है जो एक तालिका से सभी कॉलम और पंक्तियों को लौटाता है (उदाहरण के लिए, नाम से तालिकाएँ पात्र):

"अक्षर" में से * चुनें

तारक (*) चिन्ह का अर्थ है कि हम सभी स्तंभों से डेटा प्राप्त करना चाहते हैं। चूँकि SQL डेटाबेस में आमतौर पर एक से अधिक तालिकाएँ होती हैं, इसलिए इसे निर्दिष्ट करना आवश्यक है कीवर्ड FROM, उसके बाद तालिका नाम को एक स्थान से अलग किया जाता है।

कभी-कभी हम किसी तालिका के सभी कॉलमों से डेटा प्राप्त नहीं करना चाहते हैं। ऐसा करने के लिए, तारांकन चिह्न (*) के स्थान पर, हमें वांछित स्तंभों के नाम अल्पविराम से अलग करके लिखने होंगे।

महीने से आईडी, नाम चुनें

इसके अतिरिक्त, कई मामलों में हम चाहते हैं कि परिणामी परिणाम एक विशिष्ट क्रम में क्रमबद्ध हों। SQL में हम इसे ORDER BY का उपयोग करके करते हैं। यह एक वैकल्पिक संशोधक को स्वीकार कर सकता है - एएससी (डिफ़ॉल्ट) आरोही क्रम में सॉर्ट करना या डीईएससी, अवरोही क्रम में सॉर्ट करना:

महीने से आईडी, नाम चुनें, नाम से ऑर्डर करें DESC

ORDER BY का उपयोग करते समय, सुनिश्चित करें कि यह SELECT स्टेटमेंट में सबसे आखिर में आता है। अन्यथा एक त्रुटि संदेश प्रदर्शित किया जाएगा.

4. डेटा फ़िल्टरिंग

आपने सीखा है कि SQL क्वेरी का उपयोग करके डेटाबेस से विशिष्ट कॉलम कैसे चुनें, लेकिन क्या होगा यदि हमें विशिष्ट पंक्तियों को भी पुनः प्राप्त करने की आवश्यकता हो? WHERE क्लॉज यहां बचाव के लिए आता है, जो हमें स्थिति के आधार पर डेटा को फ़िल्टर करने की अनुमति देता है।

इस क्वेरी में हम तालिका से केवल उन्हीं महीनों का चयन कर रहे हैं महीना, जिसमें ग्रेटर दैन (>) ऑपरेटर का उपयोग करते हुए 30 से अधिक दिन हैं।

महीने से आईडी, नाम चुनें जहां दिन > 30

5. उन्नत डेटा फ़िल्टरिंग। AND और OR ऑपरेटर

पहले, हम एकल मानदंड का उपयोग करके डेटा फ़िल्टरिंग का उपयोग करते थे। अधिक जटिल डेटा फ़िल्टरिंग के लिए, आप AND और OR ऑपरेटरों और तुलना ऑपरेटरों (=) का उपयोग कर सकते हैं<,>,<=,>=,<>).

यहां हमारे पास एक तालिका है जिसमें सभी समय के चार सबसे अधिक बिकने वाले एल्बम शामिल हैं। आइए उन्हें चुनें जिन्हें रॉक के रूप में वर्गीकृत किया गया है और जिनकी 50 मिलियन से कम प्रतियां बिकी हैं। इन दो स्थितियों के बीच AND ऑपरेटर रखकर यह आसानी से किया जा सकता है।

* एल्बमों से चुनें जहां शैली = "रॉक" और बिक्री_मिलियनों में<= 50 ORDER BY released

6. अंदर/बीच/पसंद

WHERE कई विशेष कमांडों का भी समर्थन करता है, जिससे आप सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली क्वेरी को तुरंत जांच सकते हैं। वे यहाँ हैं:

• IN - कई शर्तों को इंगित करने का कार्य करता है, जिनमें से किसी को भी पूरा किया जा सकता है
• बीच - जाँचता है कि कोई मान निर्दिष्ट सीमा के भीतर है या नहीं
• जैसे - विशिष्ट पैटर्न की खोज करता है

उदाहरण के लिए, यदि हम एल्बम का चयन करना चाहते हैं जल्दी से आनाऔर आत्मासंगीत, हम IN("value1","value2") का उपयोग कर सकते हैं।

चुनें * उन एल्बमों से जहां शैली ("पॉप", "सोल");

यदि हम 1975 और 1985 के बीच रिलीज़ हुए सभी एल्बम प्राप्त करना चाहते हैं, तो हमें लिखना होगा:

1975 और 1985 के बीच रिलीज़ हुए एल्बमों में से चुनें *;

7. कार्य

SQL ऐसे फ़ंक्शंस से भरा हुआ है जो सभी प्रकार की उपयोगी चीज़ें करते हैं। यहां सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले कुछ हैं:

• COUNT() - पंक्तियों की संख्या लौटाता है
• SUM() - संख्यात्मक कॉलम का कुल योग लौटाता है
• AVG() - मानों के एक सेट का औसत लौटाता है
• MIN() / MAX() - एक कॉलम से न्यूनतम/अधिकतम मान प्राप्त करता है

अपनी तालिका में नवीनतम वर्ष प्राप्त करने के लिए, हमें निम्नलिखित SQL क्वेरी लिखनी होगी:

एल्बमों में से MAX(रिलीज़) चुनें;

8. उपश्रेणियाँ

पिछले पैराग्राफ में, हमने सीखा कि डेटा के साथ सरल गणना कैसे करें। यदि हम इन गणनाओं से परिणाम का उपयोग करना चाहते हैं, तो हम नेस्टेड प्रश्नों के बिना नहीं कर सकते। मान लीजिए कि हम आउटपुट करना चाहते हैं कलाकार, एल्बमऔर रिहाई का वर्षतालिका में सबसे पुराने एल्बम के लिए।

हम जानते हैं कि ये विशिष्ट कॉलम कैसे प्राप्त करें:

एल्बम से जारी किए गए कलाकार, एल्बम का चयन करें;

हम यह भी जानते हैं कि शुरुआती वर्ष कैसे प्राप्त करें:

एल्बम से न्यूनतम (रिलीज़) चुनें;

अब केवल WHERE का उपयोग करके दो प्रश्नों को संयोजित करने की आवश्यकता है:

उन एल्बमों से कलाकार, एल्बम का चयन करें, जिन्हें रिलीज़ किया गया है = (एल्बमों से न्यूनतम (रिलीज़) चुनें);

9. तालिकाओं को जोड़ना

अधिक जटिल डेटाबेस में, एक-दूसरे से संबंधित कई तालिकाएँ होती हैं। उदाहरण के लिए, नीचे वीडियो गेम के बारे में दो तालिकाएँ दी गई हैं ( वीडियो गेम) और वीडियो गेम डेवलपर्स ( गेम_डेवलपर्स).

मेज पर वीडियो गेमएक डेवलपर कॉलम है ( डेवलपर_आईडी), लेकिन इसमें एक पूर्णांक है, डेवलपर का नाम नहीं। यह संख्या पहचानकर्ता का प्रतिनिधित्व करती है ( पहचान) गेम डेवलपर्स की तालिका से संबंधित डेवलपर का ( गेम_डेवलपर्स), तार्किक रूप से दो सूचियों को जोड़ना, हमें एक ही समय में उन दोनों में संग्रहीत जानकारी का उपयोग करने की अनुमति देता है।

यदि हम एक ऐसी क्वेरी बनाना चाहते हैं जो गेम के बारे में हमें जो कुछ जानने की जरूरत है उसे लौटाए, तो हम दोनों तालिकाओं से कॉलम लिंक करने के लिए INNER JOIN का उपयोग कर सकते हैं।

वीडियो_गेम्स से वीडियो_गेम्स.नाम, वीडियो_गेम्स.शैली, गेम_डेवलपर्स.नाम, गेम_डेवलपर्स.देश चुनें। वीडियो_गेम्स.डेवलपर्स.आईडी पर गेम_डेवलपर्स से जुड़ें = गेम_डेवलपर्स.आईडी;

यह सबसे सरल और सबसे सामान्य JOIN प्रकार है। कई अन्य विकल्प भी हैं, लेकिन ये कम सामान्य मामलों पर लागू होते हैं।

10. उपनाम

यदि आप पिछले उदाहरण को देखें, तो आप देखेंगे कि वहां दो कॉलम हैं नाम. यह भ्रमित करने वाला है, तो आइए दोहराए जाने वाले स्तंभों में से किसी एक के लिए उपनाम सेट करें, जैसे कि नाममेज से गेम_डेवलपर्सबुलाया जाएगा डेवलपर.

हम तालिका नामों को उपनाम देकर क्वेरी को छोटा भी कर सकते हैं: वीडियो गेमचलो कॉल करो खेल, गेम_डेवलपर्स - देव:

गेम्स.नाम, गेम्स.जेनरे, डेव्स.नेम एएस डेवलपर, डेव्स.कंट्री को वीडियो_गेम्स एएस गेम्स से चुनें इनर जॉइन गेम_डेवलपर्स एएस डेव्स ऑन गेम्स.डेवलपर_आईडी = डेव्स.आईडी;

11. डेटा अपडेट

अक्सर हमें कुछ पंक्तियों में डेटा बदलने की आवश्यकता होती है। SQL में यह UPDATE स्टेटमेंट का उपयोग करके किया जाता है। अद्यतन विवरण में निम्न शामिल हैं:

• वह तालिका जिसमें प्रतिस्थापन मान स्थित है;
• कॉलम के नाम और उनके नए मूल्य;
• WHERE का उपयोग करके चयनित पंक्तियाँ जिन्हें हम अद्यतन करना चाहते हैं। यदि ऐसा नहीं किया जाता है, तो तालिका की सभी पंक्तियाँ बदल जाएँगी।

नीचे तालिका है टीवी श्रृंखलाटीवी श्रृंखला और उनकी रेटिंग के साथ। हालाँकि, तालिका में एक छोटी सी त्रुटि आ गई: हालाँकि श्रृंखला गेम ऑफ़ थ्रोन्सऔर इसे एक कॉमेडी के रूप में वर्णित किया गया है, वास्तव में ऐसा नहीं है। आइए इसे ठीक करें!

तालिका डेटा टीवी_श्रृंखला अद्यतन टीवी_श्रृंखला सेट शैली = "नाटक" जहां आईडी = 2;

12. डेटा हटाना

SQL का उपयोग करके तालिका पंक्ति को हटाना एक बहुत ही सरल प्रक्रिया है। आपको बस उस तालिका और पंक्ति का चयन करना है जिसे आप हटाना चाहते हैं। आइए पिछले उदाहरण से तालिका की अंतिम पंक्ति को हटा दें टीवी श्रृंखला. यह >DELETE निर्देश का उपयोग करके किया जाता है।

टीवी_श्रृंखला से हटाएं जहां आईडी = 4

DELETE स्टेटमेंट लिखते समय सावधान रहें और सुनिश्चित करें कि WHERE क्लॉज मौजूद है, अन्यथा तालिका की सभी पंक्तियाँ हटा दी जाएंगी!

13. एक तालिका हटाएँ

यदि हम सभी पंक्तियों को हटाना चाहते हैं लेकिन तालिका को ही छोड़ना चाहते हैं, तो TRUNCATE कमांड का उपयोग करें:

ट्रंकेट टेबल टेबल_नाम;

उस स्थिति में जब हम वास्तव में डेटा और तालिका दोनों को ही हटाना चाहते हैं, तो DROP कमांड हमारे लिए उपयोगी होगी:

ड्रॉप टेबल टेबल_नाम;

इन आदेशों से बहुत सावधान रहें. उन्हें रद्द नहीं किया जा सकता!/p>

यह हमारे SQL ट्यूटोरियल का समापन करता है! ऐसा बहुत कुछ है जिसे हमने कवर नहीं किया है, लेकिन जो आप पहले से जानते हैं वह आपको अपने वेब करियर के लिए कुछ व्यावहारिक कौशल देने के लिए पर्याप्त होना चाहिए।

विभिन्न हैप्लोटाइप के एमएचसी-II अणुओं वाले लिम्फोसाइटों की सह-खेती उनके विस्फोट परिवर्तन और प्रसार का कारण बनती है। प्रतिक्रिया करने वाली कोशिकाएं टी-लिम्फोसाइट्स से संबंधित होती हैं और बी-लिम्फोसाइट्स और मैक्रोफेज पर स्थित विदेशी एमएचसी-द्वितीय निर्धारकों द्वारा उत्तेजित होती हैं। प्रतिक्रिया की ताकत हिस्टोकोम्पैटिबिलिटी एंटीजन के बीच अंतर की डिग्री पर निर्भर करती है। एमएचसी एलीलिक वेरिएंट के प्रति किसी व्यक्ति की प्रतिक्रिया का आकलन करने के लिए, एक यूनिडायरेक्शनल लिम्फोसाइट कल्चर तैयार किया जाता है। ऐसा करने के लिए, उत्तेजक कोशिकाओं को माइटोमाइसिन के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है या विकिरणित किया जाता है, जबकि उत्तेजक कोशिकाएं विभाजित होने की क्षमता खो देती हैं, लेकिन व्यवहार्य बनी रहती हैं।

लिम्फोसाइटों की मिश्रित संस्कृति में प्रतिक्रियाशीलता मूल्यांकन में मानदंडों में से एक है सेलुलर प्रतिरक्षा. एससीएल आपको कार्यान्वित करने की अनुमति देता है एचएलए टाइपिंग, ऊतक और अंग प्रत्यारोपण के लिए दाता-प्राप्तकर्ता जोड़ी का चयन करें, और एचएलए एंटीजन और कुछ बीमारियों के बीच सहसंबंध का संचालन करें।

प्रतिक्रिया को चरणबद्ध करने के लिए, रोगियों (दाता और प्राप्तकर्ता) के रक्त से पृथक लिम्फोसाइटों के निलंबन का उपयोग किया जाता है। धुली हुई प्रतिक्रिया करने वाली कोशिकाओं को मध्यम 199 (0.5 मिली) की एक छोटी मात्रा में निलंबित कर दिया जाता है और, कोशिकाओं की संख्या की गणना करने के बाद, 0.6 * 10 6 कोशिकाओं/एमएल पर समायोजित किया जाता है। उत्तेजक कोशिकाओं का एक निलंबन इसी तरह तैयार किया जाएगा, जिसमें 0.1 मिलीलीटर प्रति 1 मिलीलीटर निलंबन की दर से माइटोमाइसिन सी (बफ़र्ड सलाइन के 1 मिलीलीटर में 500 μg माइटोमाइसिन सी) का घोल मिलाया जाएगा। कोशिका मिश्रण को पानी के स्नान में 37 डिग्री सेल्सियस पर 40 मिनट तक हिलाते हुए रखा जाता है, फिर ठंडे माध्यम 199 को निलंबन में जोड़ा जाता है और कोशिकाओं को सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा तीन बार धोया जाता है। तलछट अंदर निलंबित है पोषक माध्यमखेती, कोशिकाओं की संख्या 0.6 * 10 6 कोशिकाओं/एमएल तक लाना।

हैंक्स समाधान में 0.1 मिली सेल सस्पेंशन को एक बाँझ गोल-तले वाली इम्यूनोलॉजिकल प्लेट के कुओं में जोड़ा जाता है और एमएचसी एलीलिक वेरिएंट वाले 0.1 मिली सेल सस्पेंशन को जोड़ा जाता है। नियंत्रण में हैंक्स समाधान की समान मात्रा जोड़ी जाती है।

परिणाम 3-5 दिनों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर कोशिकाओं को इनक्यूबेट करने के बाद दर्ज किए जाते हैं, जो रूपात्मक या आइसोटोप विधि (आरबीटीएल देखें) का उपयोग करके प्रतिक्रिया सेटअप पर निर्भर करता है।

प्रत्यारोपण के दौरान अस्थि मज्जाहिस्टोकम्पैटिबल दाता का चयन दाता और प्राप्तकर्ता के एचएलए टाइपिंग के परिणामों के आधार पर किया जाता है, साथ ही एससीएल में चयनित एचएलए-समान दाता-प्राप्तकर्ता जोड़े की संगतता का निर्धारण करते समय किया जाता है, जो संगतता मूल्यांकन का अंतिम चरण है। इस प्रयोजन के लिए, प्रसार करने वाले लिम्फोसाइटों के डीएनए में रेडियोधर्मी एच 3-थाइमिडीन को शामिल करके प्रसार की मात्रा के आकलन के साथ 96-वेल प्लेट में एक सांस्कृतिक माइक्रोमेथोड का उपयोग करके एक द्विदिश एससीएल प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है।

वर्तमान में भूमिका पर शोध पर बहुत ध्यान दिया जा रहा है प्रतिरक्षा तंत्रप्रजनन प्रक्रिया में, चूंकि उनके उल्लंघन से बांझपन का विकास होता है और गर्भावस्था जल्दी समाप्त हो जाती है। प्रतिरक्षाविज्ञानी मापदंडों और उनके संबंध का अध्ययन प्रजनन प्रक्रियाएँहमें यह निष्कर्ष निकालने की अनुमति दी कि पुनर्गठन आवश्यक था प्रतिरक्षा तंत्रगर्भावस्था के लिए माँ के शरीर को तैयार करते समय, शुरुआत से डिम्बग्रंथि अवधि, भ्रूण प्रत्यारोपण के समय और अंदर शुरुआती समयगर्भावस्था.

बांझपन और बार-बार होने वाले सहज गर्भपात के सबसे जटिल और निदान करने में कठिन कारणों में से एक है प्रतिरक्षा संबंधी शिथिलता।

के उद्देश्य के साथ समय पर पता लगानाप्रजनन की प्रतिरक्षा विज्ञान की प्रयोगशाला में प्रतिरक्षाविज्ञानी बांझपन परीक्षण किया जाता है विवाहित युगलका उपयोग करते हुए निम्नलिखित विधियाँनिदान:

• साथी के एंटीजन के प्रति महिला के लिम्फोसाइटों की प्रसारात्मक प्रतिक्रिया के स्तर का अध्ययन (लिम्फोसाइटों की मिश्रित संस्कृति में)
• एक महिला के रक्त सीरम में अवरोधक कारकों की गतिविधि का निर्धारण।
• प्राकृतिक साइटोटोक्सिक कोशिकाओं की उप-आबादी की मात्रात्मक सामग्री का आकलन परिधीय रक्तऔरत।
• विस्तारित इम्यूनोग्राम
• परिधीय रक्त में दमनकारी गतिविधि के साथ नियामक कोशिकाओं की सामग्री का अध्ययन।
• नैदानिक ​​​​और की पहचान करते समय प्रयोगशाला संकेतबांझपन के रोगियों की इम्यूनोलॉजिकल जांच कराने की सलाह दी जाती है चिकित्सा प्रक्रिया- पति के लिम्फोसाइटों के साथ एलोइम्यूनाइजेशन, जो एक व्यक्तिगत कार्यक्रम के अनुसार किया जाता है।

परामर्श आवश्यक:

• यदि स्त्री रोग संबंधी और के अभाव में अंतःस्रावी रोगएक वर्ष तक नियमित यौन क्रिया करने से गर्भधारण नहीं होता है।
• बार-बार (एक से अधिक बार) सहज गर्भपात (गर्भपात) के मामले में।
• पर असफल आईवीएफइतिहास में.
• जब वास्तविक गर्भावस्था की समाप्ति का खतरा हो।

यदि विकारों का पता लगाया जाता है, तो विकारों के प्रतिरक्षण सुधार के उद्देश्य से एक प्रक्रिया निर्धारित की जाती है पार्टनर लिम्फोसाइट्स (एआईएल) के साथ एलोइम्यूनाइजेशन. यह विधिउपचार उपयोग के लिए अनुमोदित संघीय सेवास्वास्थ्य सेवा के क्षेत्र में पर्यवेक्षण के लिए (लाइसेंस एफएस संख्या 2009/179 दिनांक 07/02/2009)

प्रक्रिया केवल तभी की जाती है जब भागीदार के पास हो नकारात्मक परिणामएचआईवी संक्रमण, सिफलिस और के लिए विश्लेषण वायरल हेपेटाइटिस(बी, सी)। एआईएल के साथ किसी भी जटिलता की पहचान नहीं की गई। एआईएल विधि में एक स्पष्ट प्रतिरक्षा सुधारात्मक प्रभाव होता है, जिससे बांझपन उपचार की प्रभावशीलता बढ़ जाती है प्राकृतिक चक्र, और साथ टेस्ट ट्यूब के अंदर निषेचन(ईसीओ)। इन विट्रो फर्टिलाइजेशन के असफल प्रयासों के लिए भी निर्धारित है।

एआईएल हर 28-30 दिनों में एक बार किया जाता है (के अनुसार)। मासिक धर्ममहिलाएं) चक्र के पहले चरण में। पहले कोर्स में 3 एआईएल प्रक्रियाएं शामिल हैं। दूसरी प्रक्रिया के बाद, युगल फिर से नियंत्रण परीक्षण लेता है। यदि सकारात्मक गतिशीलता है, तो तीसरी एआईएल प्रक्रिया अंतिम है। यदि कोई गतिशीलता नहीं है, तो टीकाकरण के लिए कोशिकाओं की खुराक बढ़ा दी जाती है और 2 प्रक्रियाओं सहित दूसरा कोर्स किया जाता है। नियंत्रण विश्लेषण के बाद, कुछ मामलों में कोशिकाओं की खुराक में वृद्धि के साथ टीकाकरण का तीसरा कोर्स निर्धारित करना आवश्यक है। मानक मूल्यों तक पहुंचने के बाद, सकारात्मक प्रभाव 6-8 महीने तक रहता है।

2003 से 2013 की अवधि के लिए. सेलुलर इम्यूनोथेरेपी की प्रयोगशाला में, पार्टनर लिम्फोसाइटों के साथ लगभग 3000 एलोइम्यूनाइजेशन प्रक्रियाएं की गईं। इस प्रक्रिया के लिए, साथी के रक्त से केवल लिम्फोसाइट्स को अलग किया जाता है, जो हमेशा वीर्य द्रव में मौजूद होते हैं। अन्य देशों* में, एलोइम्यूनाइजेशन प्रक्रिया भी 20 वर्षों से की जा रही है, जो एक महिला को स्वस्थ बच्चे को जन्म देने में मदद करती है।

सेवा का प्रकार	कीमत, रगड़ना।
लिम्फोसाइट परिवर्तन परीक्षण (पहली शताब्दी में सेसिबिलाइजेशन का पता लगाना)	1650
लिम्फोसाइट परिवर्तन परीक्षण (2बी-वीए पर सेसिबिलाइजेशन का पता लगाना)	2 900
लिम्फोसाइट परिवर्तन परीक्षण (3बी-वीए पर सेसिबिलाइजेशन का पता लगाना)	3 900
लिम्फोसाइट परिवर्तन परीक्षण (बांझपन के लिए प्रतिरक्षाविज्ञानी परीक्षण)	3 200
सक्रियण मार्करों के साथ विस्तारित इम्यूनोग्राम	4 625
प्रतिरक्षा स्थिति का व्यापक अध्ययन	4 125
टीकाकरण (साथी के लिम्फोसाइटों के साथ एलोइम्यूनाइजेशन 1 खुराक)	1 900
टीकाकरण (साथी के लिम्फोसाइटों के साथ एलोइम्यूनाइजेशन, दूसरी खुराक)	2 750
टीकाकरण (साथी के लिम्फोसाइटों के साथ एलोइम्यूनाइजेशन, तीसरी खुराक)	3 400
सीडी16+/सीडी56+ लिम्फोसाइटों का अध्ययन (केवल एनके कोशिकाओं के बांझपन के लिए प्रतिरक्षाविज्ञानी परीक्षण)	1 250
मैक्रोफेज गतिविधि का अध्ययन (वातानुकूलित मैक्रोफेज मीडिया)	9 400
मैक्रोफेज गतिविधि का अध्ययन (वातानुकूलित मीडिया)	1 500
एलोइम्यूनाइजेशन के लिए मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं का क्रायोप्रिजर्वेशन	650

2.2. सेल इंटरैक्शन के तरीके

क्लिनिकल इम्युनोजेनेटिक्स में उपयोग की जाने वाली सेल इंटरैक्शन की लगभग सभी विधियां कनाडाई शोधकर्ता बारबरा बेन द्वारा खोजी गई लिम्फोसाइटों की मिश्रित संस्कृति में विस्फोट गठन की घटना पर आधारित हैं। मिश्रित लिम्फोसाइट कल्चर (एमएलसी) की प्रतिक्रिया ने एचएलए कॉम्प्लेक्स और विशेष रूप से, इसके सबयूनिट - एचएलए-डी लोकस का एक बारीक विभेदित अध्ययन करना संभव बना दिया। सेल इंटरैक्शन के कई अन्य तरीके - सेल-मध्यस्थ लिम्फोलिसिस (सीएमएल), लिम्फोसाइट प्राइमिंग टेस्ट (प्राइमेड लिम्फोसाइट टाइपिंग) - एमएलसी विधि पर आधारित हैं या इसे एक अभिन्न अंग के रूप में शामिल करते हैं।

2.2.1. मिश्रित लिम्फोसाइट संस्कृति (एमसीएल)

विधि का सिद्धांत चित्र में दिखाया गया है। 10, जिससे यह स्पष्ट है कि आनुवंशिक रूप से भिन्न लिम्फोसाइटों की दो आबादी इन विट्रो संस्कृति में एक दूसरे के साथ बातचीत करती हैं। आबादी में से एक को माइटोमाइसिन सी के साथ इलाज किया जाता है या विकिरणित किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप यह विस्फोट बनाने और थाइमिडीन (3 एचटी) को शामिल करने की क्षमता खो देता है, हालांकि, अपने एंटीजेनिक गुणों को खोए बिना, यह उत्तेजित करने की क्षमता बरकरार रखता है (उत्तेजक; एस)। -जनसंख्या)।

कोशिकाएं जो उत्तेजना पर प्रतिक्रिया करती हैं (प्रतिक्रियाकर्ता, आर-जनसंख्या) कुछ दिनों के बाद विस्फोट में बदल जाती हैं और कल्चर में जोड़ा गया थाइमिडीन शामिल कर लेती हैं। प्रतिक्रिया की तीव्रता को 3 एच-थाइमिडीन के समावेश के लिए एक विकिरण अनुरेखक का उपयोग करके मापा जाता है।

लिम्फोसाइटों की मिश्रित संस्कृति की प्रतिक्रिया के कई प्रकार ज्ञात हैं, जिनमें से दो यहां प्रस्तावित हैं: कुक टैबलेट में लागू पारंपरिक और माइक्रोवैरिएंट (चित्र 11)।

चावल। 11. माइक्रो-वेरिएंट एमएलसी और सीएमएल के लिए उपकरण। 1 - 96 छेद वाली गोल तले वाली गोली; 2-स्वचालित पिपेट ("पिपेटमैन") विभिन्न संस्करणों के लिए एक कार्यक्रम के साथ; 3 - एक निश्चित मात्रा के लिए स्वचालित पिपेट ("सिग्मा"); 4 - डिस्पोजेबल पिपेट टिप; 5 - लैमिनर फ्लो बॉक्स

एमएलसी का पारंपरिक संस्करण (एफ.एस. बारानोवा द्वारा संशोधन):

जैसा कि ऊपर वर्णित है, लिम्फोसाइट्स को फिकोल-यूरोग्राफिन ग्रेडिएंट पर अलग किया जाता है। पहली धुलाई पीबीएस (NaCl - 8.0 ग्राम, Na 2 HP0 4 - 1.15 ग्राम, KH 2 PO 4 - 0.2 ग्राम, KC1 - 0.2 ग्राम प्रति 1 लीटर H 2 O) में की जाती है; अगले दो का उत्पादन मध्यम 199 में 5% एबी सीरम (15 दाताओं से पूल) के साथ किया जाता है;

प्रतिक्रिया करने वाली कोशिकाओं को 10% एबी सीरम के साथ माध्यम 199 में फिर से निलंबित कर दिया जाता है और सेल एकाग्रता को 0.6 x 10 6 प्रति मिलीलीटर पर समायोजित किया जाता है;

5-10 6 प्रति 1 मिली की सांद्रता पर उसी तरह पृथक की गई उत्तेजक कोशिकाओं को सर्वा से माइटोमाइसिन सी (60 γ/एमएल) के साथ उपचारित किया जाता है और पानी के स्नान में 37 डिग्री सेल्सियस पर 40 मिनट के लिए रखा जाता है। ऊष्मायन के बाद, कोशिकाओं को 5% एबी सीरम के साथ मध्यम 199 के साथ 3 बार धोया जाता है, 10% एबी सीरम के साथ मध्यम 199 में फिर से निलंबित कर दिया जाता है, जिससे 1 मिलीलीटर में एकाग्रता 0.6 x 10 6 हो जाती है;

प्रतिक्रिया करने वाली कोशिकाओं के 0.5 मिलीलीटर और उत्तेजक कोशिकाओं के 0.5 मिलीलीटर को एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में मिलाया जाता है, हेप्स समाधान (सर्वा) के 10 मिलीलीटर में से 0.04 मिलीलीटर जोड़ा जाता है और 144 घंटों के लिए ऊष्मायन किया जाता है; अनुभव को तीन समानांतरों (ट्रिप्लेट) में रखा गया है;

ऊष्मायन के अंत से 24 घंटे पहले, प्रति नमूना, परीक्षण ट्यूबों में 3 एच-थाइमिडीन 1μCi (3.7x10 4 बीसी) जोड़ें निश्चित गतिविधि 5mCi/mmol (18.5x10 7 BC/mmol) और ऊष्मायन जारी रखें;

ऊष्मायन के अंत में, कोशिकाओं को मिलिपोर फिल्टर (0.6 - 0.9 माइक्रोन) में स्थानांतरित किया जाता है और धोया जाता है नमकीन घोल(37°C) और ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड (4°C) का ठंडा 5% घोल। फिल्टर को सुखाया जाता है और 5 मिलीलीटर जगमगाहट तरल (5 ग्राम पीपीओ और 0.5 ग्राम पीओपीओपी - प्रति 1 लीटर टोल्यूनि) * के साथ शीशियों में रखा जाता है। 3H-थाइमिडीन निगमन गतिविधि को β-काउंटर में मापा जाता है; परिणाम प्रति मिनट रेडियोधर्मी लेबल के पूर्ण समावेशन या सूत्र के अनुसार उत्तेजना सूचकांक (एसआई) में व्यक्त किया जाता है:

* (पीपीओ - ​​2,5-फिनोल-ऑक्साज़ोल; पॉपोर - (1,4-डी-2-15-फेनोलॉक्साज़ोलिटेबेंजीन)।)

तीन प्रोटोटाइप में औसत सीपीएम मान

एसआई = तीन नियंत्रण नमूनों में सीपीएम का औसत मूल्य/प्रतिक्रिया देने वाली कोशिकाओं की सहज संस्कृतियां नियंत्रण नमूने के रूप में काम करती हैं।

कुक टैबलेट में एमएलसी का सूक्ष्म संस्करण. 8वीं कार्यशाला में, ऐसी आवश्यकताएं विकसित की गईं जो एमएलसी के सूक्ष्म विकल्प को मानकीकृत करती हैं, जिसके अनुसार इसे नीचे निर्धारित किया गया है:

लिम्फोसाइट्स को एक आइसोपेक-फिकोल ग्रेडिएंट में अलग किया जाता है और RPMJ-1640 * माध्यम में फिर से निलंबित कर दिया जाता है, जिससे 1 मिलीलीटर में एकाग्रता 5x10 5 हो जाती है;

* (मीडियम 199 को समूह AB के मानव सीरम (कई व्यक्तियों से लिया गया 5% सीरम) के साथ मिलाकर उपयोग किया जा सकता है।)

उत्तेजक कोशिकाओं का उपचार माइटोमाइसिन सी या प्रशिक्षण से किया जाता है;

कुक राउंड बॉटम माइक्रोप्लेट के प्रत्येक कुएं में पिपेटमैन प्रकार के माइक्रोपिपेट का उपयोग करके 5x10 4 उत्तरदाताओं और समान संख्या में उत्तेजक पदार्थ रखे जाते हैं;

प्लेटों को 120 घंटों के लिए 5% सीओ2 की स्वचालित आपूर्ति के साथ थर्मोस्टेट में इनक्यूबेट किया जाता है; फिर lμmCi 3 H-थाइमिडीन को थाइमिडीन 6 Ci/mmol की एक विशिष्ट गतिविधि पर प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है; सभी जोड़तोड़ पिपेटमैन पिपेट के साथ किए जाते हैं;

थाइमिडीन मिलाने के 16 घंटे बाद, प्रत्येक कुएं से संस्कृतियों को एक स्वचालित पिपेट का उपयोग करके मिलिपोर फिल्टर में स्थानांतरित किया जाता है और खारा से धोया जाता है और फिर 5% ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड के साथ धोया जाता है; कल्चर को मिलिपोर फिल्टर में स्थानांतरित करने के लिए विशेष "हार्वेस्टर" का उपयोग करना सुविधाजनक है;

थाइमिडीन निगमन गतिविधि ऊपर बताए अनुसार निर्धारित की गई थी।

2.2.2. कोशिका-मध्यस्थ लिम्फोलिसिस (सीएमएल)

सीएमएल का उपयोग इम्यूनोजेनेटिक अध्ययनों में अपेक्षाकृत हाल ही में (1972 से) किया गया है, लेकिन हाल ही मेंऔर अधिक होता जा रहा है लोकप्रिय प्रौद्योगिकी, जिससे प्रत्यारोपण प्रतिरक्षा के अपवाही लिंक की भूमिका का विस्तृत अध्ययन करने और मान्यता प्राप्त करने की अनुमति मिलती है जानकारीपूर्ण विधिप्रतिरक्षाविज्ञानी निगरानी. विधि का सिद्धांत चित्र में दिखाया गया है। 12. यह विधि जे. लाइटबॉडी (1971) द्वारा प्रस्तावित तकनीक पर आधारित है, जिसका संक्षेप में सारांश इस प्रकार है।

1. सीएमएल एक पारंपरिक एचएलसी परीक्षण से शुरू होता है, जिसमें प्रतिक्रिया करने वाली कोशिकाएं "उत्तेजक" को पहचानती हैं, प्रतिक्रिया करने वाली कोशिकाओं को संवेदनशील बनाती हैं और संवेदनशील हत्यारी कोशिकाएं बनाती हैं।

2. दूसरा चरण, जिसमें संवेदनशील हत्यारी कोशिकाएं 51 सीआर-लेबल लक्ष्य कोशिकाओं के साथ मिश्रित होती हैं, जिसमें प्रभावकारक हत्यारी कोशिकाओं द्वारा लक्ष्य कोशिकाओं का विनाश शामिल होता है; लक्ष्य कोशिकाओं में एमएलसी के पहले चरण में "उत्तेजक" के समान जीनोटाइप हो सकता है, या वे "तीसरे" साथी की कोशिकाएं हो सकती हैं, जो "उत्तेजक" या उनके बिना एंटीजेनिक निर्धारकों से संपन्न होती हैं।

3. नष्ट लक्ष्य कोशिकाओं से निकलने वाली और संस्कृति माध्यम में छोड़ी गई रेडियोधर्मी क्रोमियम की मात्रा हत्यारे प्रभाव की तीव्रता को मापने का काम करती है।

चावल। 12. कोशिका-मध्यस्थ लिम्फोलिसिस (सीएमएल) का सिद्धांत। पंक्ति I - प्रतिक्रिया करने वाली कोशिकाओं का संवेदीकरण, हत्यारी कोशिकाओं का निर्माण; पंक्ति II - लक्ष्य के साथ हत्यारों की बातचीत; पंक्ति III - लक्ष्य सेल का विनाश; उपज 51 करोड़ संस्कृति माध्यम

यहां सीएमएल के तीन प्रकारों का वर्णन किया गया है: एल.पी. अलेक्सेव (1979) द्वारा संशोधित पारंपरिक संस्करण, कुक टैबलेट में माइक्रोवेरिएंट, डायरेक्ट सीएमएल (डायरेक्ट-सीएमएल-डी-सीएमएल)।

पारंपरिक विकल्प[अलेक्सेव एल.पी., 1979]।

विधि को कई चरणों में विभाजित किया गया है।

हिटमैन मिल रहे हैं:

दोनों आबादी (आर-कोशिकाएं और एस-कोशिकाएं) के परिधीय लिम्फोसाइट्स को सामान्य तरीके से अलग किया जाता है, 5% एबी सीरम (10 मिनट, 150 ग्राम) के साथ मध्यम 199 में घनत्व ढाल में तीन बार धोया जाता है;

1x10 6 आर कोशिकाओं (0.8 मिली) को अपकेंद्रित्र ट्यूबों में 2x10 6 एस कोशिकाओं (0.2 मिली) के साथ मिलाया जाता है, जिसे माइटोमाइसिन सी से उपचारित किया जाता है और 37 डिग्री सेल्सियस पर 144 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया जाता है;

कोशिकाओं को 10 मिनट के लिए 150 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, और तलछट को 20% बछड़ा सीरम (मध्यम 199 + यानी) के साथ मध्यम 199 में फिर से निलंबित कर दिया जाता है, जिससे 1 मिलीलीटर में एकाग्रता 1x10 6 हो जाती है;

नमूनों में से एक को एमएलसी स्तर का अध्ययन करने के लिए छोड़ दिया जाता है, बाकी को तैयार हत्यारों के रूप में उपयोग किया जाता है।

लक्ष्य प्राप्त करना:

सामान्य तरीके से अलग किए गए लिम्फोसाइट्स को 20% एबी सीरम के साथ मध्यम 199 में पुन: निलंबित कर दिया जाता है और 37 डिग्री सेल्सियस पर 72 घंटे के लिए फाइटोहेमाग्लगुटिनिन (0.003 मिलीग्राम / एमएल वेलकम) के साथ ऊष्मायन किया जाता है; 1 मिली में कोशिका सांद्रता 1x10 6;

कोशिकाओं को 150 ग्राम पर 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, तलछट को 5% एबी सीरम के साथ माध्यम 199 में फिर से निलंबित कर दिया जाता है और सेल एकाग्रता को 1 मिलीलीटर में 2x10 4 पर समायोजित किया जाता है;

51 करोड़ 100 μCi/एमएल (3.7x10 6 बीसी/एमएल) को सस्पेंशन में जोड़ा जाता है और 37°C पर 40 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया जाता है;

कोशिकाओं को 5% एबी सीरम (150 ग्राम, 10 मिनट) के साथ मध्यम 199 में तीन बार धोया जाता है और तलछट को 5% एबी सीरम के साथ मध्यम 199 में फिर से निलंबित कर दिया जाता है। 1 मिलीलीटर में सांद्रता को 2x10 4 तक लाना।

प्रतिक्रियाएँ स्थापित करना:

5x10 5 किलर्स (0.5 मिली) को 1x10 4 टारगेट (0.5 मिली) के साथ मिलाया जाता है, 4 घंटे (37°C) के लिए इनक्यूबेट किया जाता है और 150 ग्राम पर 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया जाता है;

सतह पर तैरनेवाला महाप्राण होता है और 51 करोड़ के कारण उत्पन्न आवेग को एक काउंटर पर गिना जाता है; गिनती सतह पर तैरनेवाला के 0.5 मिलीलीटर में की जाती है;

साइटोलिसिस के स्तर की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके की जाती है:

एकपेर. आउटपुट 51 करोड़ - सहज आउटपुट 51 करोड़/अधिकतम, आउटपुट 51 करोड़ - सहज आउटपुट 41 करोड़ × 100।

क्रोमियम की सहज रिहाई को हत्यारी कोशिकाओं के बिना 4 घंटे (37 डिग्री सेल्सियस) के लिए ऊष्मायन किए गए लक्ष्यों पर मापा जाता है; क्रोमियम की अधिकतम उपज - ठंड और पिघलने से पूरी तरह से नष्ट हुए लक्ष्यों पर; सभी परीक्षण त्रिक में किए जाते हैं।

गोलियों में सीएमएल का सूक्ष्म संस्करण [मावास एस., 1976 के अनुसार]:

हत्यारों को प्राप्त करने का चरण गोल-तले वाली प्लेटों में एमएलसी के रूप में किया जाता है, लेकिन आर- और एस-कोशिकाओं को समान मात्रा में, 2x10 5 पीए प्रत्येक कुएं में मिलाया जाता है और 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया जाता है;

5 दिनों के बाद, कोशिकाओं को पाश्चर पिपेट के साथ एक टेस्ट ट्यूब में एकत्र किया जाता है, जीवित लोगों की संख्या को ट्रिपैन ब्लू के साथ गिना जाता है और एकाग्रता को 1 मिलीलीटर में 10x10 6 पर समायोजित किया जाता है;

लक्ष्य कोशिकाओं को 3 दिनों के लिए पीएचए के साथ संवर्धित किया जाता है;

प्रतिक्रिया के दिन, लक्ष्य कोशिकाओं को धोया जाता है (300 ग्राम) और एक संस्कृति माध्यम में पुन: निलंबित किया जाता है, 1 मिलीलीटर को टेस्ट ट्यूब में वितरित किया जाता है और 1 मिलीलीटर में 1x10 6 पर समायोजित किया जाता है;

लक्ष्य कोशिकाओं के साथ प्रत्येक ट्यूब में 200 μCi 51 Cr (7.4x10 6 BC) जोड़ें और 37°C पर 1 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें; कोशिकाओं को 3 बार धोएं; तलछट को पुनः निलंबित किया जाता है और 1 मिलीलीटर (जीवित) में 1x10 की सांद्रता में समायोजित किया जाता है;

परीक्षण को गोल-तले हुए माइक्रोप्लेट्स में कार्यान्वित किया जाता है; इसके लिए, 0.7 - 1x10 6 किलर कोशिकाएं (0.1 मिली) और 1x10 4 लक्ष्य कोशिकाएं (0.1 मिली) प्रत्येक कुएं में वितरित की जाती हैं; प्रत्येक कुएं में निलंबन की कुल मात्रा 0.2 मिली है, प्रत्येक कुएं में 0.05 मिली माध्यम डालें और 4 घंटे के लिए इनक्यूबेट (37 डिग्री सेल्सियस) करें;

प्लेटों को 10 मिनट के लिए बेकमैन सेंट्रीफ्यूज पर 800 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज किया जाता है; प्रत्येक कुएं से सतह पर तैरनेवाला को परीक्षण ट्यूबों में स्थानांतरित किया जाता है और γ-काउंटर पर गिना जाता है;

किलर कोशिकाओं (एमएलसी) के उत्पादन का चरण आरपीएमजे-1640 माध्यम पर 20% मानव प्लाज्मा के साथ किया जाता है; हत्या चरण के लिए, पहले से गरम 20% मानव प्लाज्मा के साथ एमईएम माध्यम का उपयोग करें।

डायरेक्ट सीएमएल (डी-सीएमएल)।डायरेक्ट सीएमएल विशेष रूप से नैदानिक ​​उद्देश्यों के लिए विकसित की गई एक तकनीक है जिसका उपयोग प्रतिरक्षाविज्ञानी निगरानी में किया गया है। इस प्रतिक्रिया की योजना चित्र में दिखाई गई है। 13.

पारंपरिक सीएमएल से मुख्य अंतर यह है कि किलर सेल निर्माण का चरण (संवेदीकरण चरण) इन विट्रो में नहीं, बल्कि विवो में होता है, यानी मानव शरीर में एक एलोजेनिक अंग या ऊतक के प्रत्यारोपण द्वारा संवेदनशील होता है। एलोजेनिक ऊतक के प्रभाव के कारण, प्राप्तकर्ता के लिम्फोसाइट्स दाता के ऊतक प्रतिजनों के प्रति संवेदनशील होते हैं और इन विट्रो में विशेष उपचार की आवश्यकता नहीं होती है; परीक्षण की अवधि समय में काफी कम हो जाती है, क्योंकि पहले केवल लक्ष्य तैयार करना होगा।

उपयोग किए जाने वाले लक्ष्य परिधीय रक्त से प्राप्त लिम्फोसाइट्स हैं या, अधिक बार, दाता की प्लीहा से (2.1.2 देखें) और ऊपर वर्णित किसी भी तरीके से जमे हुए हैं (2.1.3 देखें)।

2.2.3. एंटीबॉडी-निर्भर-सेल मध्यस्थता साइटोटॉक्सिसिटी (एडीसीसी)

इस प्रकार की सेलुलर प्रतिक्रिया क्रिया के तंत्र में ऊपर वर्णित सीएमएल के समान है। प्रतिक्रिया सिद्धांत चित्र में दिखाया गया है। 14. प्रतिक्रिया के घटक लक्ष्य कोशिकाएं (दाता कोशिकाएं या एलोजेनिक लिम्फोसाइट्स), सीरम (एलोजेनिक या प्राप्तकर्ता), संभवतः लक्ष्य कोशिकाओं के निर्धारकों के लिए निर्देशित एंटीबॉडी युक्त होते हैं, और प्रभावकारी कोशिकाएं (प्राप्तकर्ता लिम्फोसाइट्स या एलोजेनिक लिम्फोसाइट्स) होते हैं।

इस प्रकार की अंतःक्रिया में प्रभावकारी कोशिकाएँ परिधीय रक्त में स्थित तथाकथित K-कोशिकाएँ होती हैं। सीएमएल में हत्यारी कोशिकाओं के विपरीत, वे पूर्व संवेदीकरण के बिना साइटोटोक्सिक प्रभाव डालते हैं, हालांकि, के कोशिकाओं के साइटोटोक्सिक प्रभाव की अभिव्यक्ति केवल लक्ष्य कोशिकाओं के निर्धारकों को निर्देशित एंटीबॉडी के माध्यम से संभव है। यदि परीक्षण सीरम में लक्ष्य निर्धारकों के प्रति एंटीबॉडी होते हैं तो विशिष्ट लसीका को 51 करोड़ की रिहाई से मापा जाता है।

ADCC में लक्ष्य निर्धारक व्यावहारिक रूप से सभी HLA लोकी की विशिष्टताएँ हो सकते हैं, जिनमें HLA-D, HLA-DR, साथ ही HLA प्रणाली के बाहर के निर्धारक शामिल हैं।

सर्वाधिक व्यापकयह जटिल प्रतिक्रिया बी-सेल एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए प्रतिरक्षाविज्ञानी निगरानी में प्राप्त की गई थी। इस संबंध में, कई संशोधन प्रस्तावित किए गए हैं, जो बी लिम्फोसाइटों के साथ लक्ष्य सेल निलंबन के संवर्धन, प्लेटलेट्स पर सीरम के सोखने आदि के लिए प्रदान करते हैं।

इसके अलावा, इस प्रणाली में कई अन्य प्रतिक्रिया सुविधाओं को भी ध्यान में रखा जाता है। परीक्षण सीरम को विघटित किया जाना चाहिए, अन्यथा प्रतिक्रिया एंटीबॉडी-मध्यस्थता पूरक-निर्भर साइटोटोक्सिसिटी हो सकती है। यह भी माना जाता है कि प्रभावकारी कोशिकाएं सीएमएल प्रकार के अनुसार लक्ष्यों के एक निश्चित विनाश का कारण बन सकती हैं।

अंततः, एंटीबॉडी-निर्भर कोशिका-मध्यस्थता लिम्फोसाइटोटॉक्सिसिटी परीक्षण में नमूनों का पूरा सेट इस प्रकार है:

लक्ष्य + प्रभावकारक + परीक्षण सीरम (प्रायोगिक नमूना);

लक्ष्य (नियंत्रण नमूना, यानी 51 करोड़ की सहज रिहाई);

लक्ष्य + प्रभावकारक (प्रभावकारक गतिविधि के लिए नियंत्रण परीक्षण);

लक्ष्य + परीक्षण सीरम (सीरम नियंत्रण)।

लिम्फोसाइटों को नियमित रूप से अलग किया गया और आरपीएमआई-1640 + 10% भ्रूण गोजातीय सीरम में पुन: निलंबित किया गया; मोनोसाइट्स को हटाने के लिए कार्बोनिल आयरन के साथ निलंबन का उपचार करना; शेष लाल रक्त कोशिकाओं को नष्ट करने के लिए अमोनियम क्लोराइड या एच2ओ मिलाएं;

Na 2 CrO 4 100 - 200 μCi ml (3.7x10 6 - 7.4x106 BC/ml) के घोल के रूप में 51 Cr को लक्ष्य सेल सस्पेंशन में मिलाया जाता है और 40 - 60 मिनट के लिए इनक्यूबेट किया जाता है;

कोशिकाओं को आरपीएमआई + 0.1% एचएसए में तीन बार धोया जाता है, उसी माध्यम में पुनः निलंबित किया जाता है और 1 मिलीलीटर में 2x10 8 पर समायोजित किया जाता है; लेबल की गई कोशिकाओं के निलंबन के 50 μl को एक परीक्षण ट्यूब में रखा जाता है और आइसोटोप गतिविधि की गणना बाद में पूर्ण आइसोटोपिक "आत्मसात" की पहचान करने के लिए γ-काउंटर पर की जाती है; बाकी को प्लेट के कुओं में डाला जाता है, निलंबन के 50 μl (प्रति कुएं 1x10 5 कोशिकाएं);

प्रभावकारक कोशिकाओं का निलंबन 1 मिली और सी में 2x10 7 कोशिकाओं तक लाया जाता है। प्रत्येक कुआँ 50 μl निलंबन (या 100 μl) से भरा हुआ है, प्रभावकों का लक्ष्य से अनुपात 10:1 (या 20:1) है;

5% सीओ2 के साथ आर्द्र थर्मोस्टेट वातावरण में 4 घंटे तक ऊष्मायन जारी रहता है (ऊष्मायन अवधि 8 घंटे तक बढ़ाई जा सकती है);

टेस्ट ट्यूब (1:25; 1:100) में परीक्षण सीरम के कई तनुकरण तैयार करें और कुओं में प्रत्येक तनुकरण के 50 μl तक जोड़ें: और बिना पतला सीरम; अंतिम परीक्षण सेटअप तालिका में दिखाए अनुसार दिखता है। 23.

तालिका 23

एडीसीसी मंचन. सभी नमूना विकल्प, μl

* (परीक्षण सीरम के बजाय, एबी सीरम का एक पूल डाला जाता है।)

** (परीक्षण सीरम के बजाय, लक्ष्य के विरुद्ध निर्देशित एक मोनोस्पेसिफिक एचएलए सीरम डाला जाता है (प्रभावकारक नहीं)।)

4% CO2 के साथ आर्द्र वातावरण में पैनलों का ऊष्मायन 4 घंटे तक जारी रहता है; ऊष्मायन की अवधि 8 घंटे तक बढ़ाई जा सकती है;

ऊष्मायन के बाद, प्रत्येक कुएं से आधी मात्रा (100 μl) को एक स्वचालित पिपेट के साथ सावधानीपूर्वक एस्पिरेट किया जाता है और 51 सीआर पल्स काउंटिंग ट्यूबों में रखा जाता है; गतिविधि की गणना γ-काउंटर पर की जाती है;

गणना इस प्रकार हैं:

51 करोड़ की % रिलीज़ = 2 × ए ऑप - पृष्ठभूमि गतिविधि/बी - पृष्ठभूमि गतिविधि × 100;

% साइटोटोक्सिसिटी = ए ऑप - ए एसपी /100 - ए एसपी × 100, जहां ए ऑप प्रयोगात्मक नमूनों में 51 करोड़ का% रिलीज है; एक एसपी - % सहज रिहाई; बी - आइसोटोप का पूर्ण आत्मसात।

कैसे सकारात्मक परिणामऊष्मायन के 4 घंटे के बाद 5% या अधिक साइटोटोक्सिसिटी पर विचार किया जाता है।