Ανάλυση μικτής καλλιέργειας skl λεμφοκυττάρων. Μικτή καλλιέργεια λεμφοκυττάρων

Κάθε προγραμματιστής ιστού πρέπει να γνωρίζει την SQL για να γράψει ερωτήματα βάσης δεδομένων. Και, παρόλο που το phpMyAdmin δεν έχει ακυρωθεί, είναι συχνά απαραίτητο να λερώσετε τα χέρια σας για να γράψετε SQL χαμηλού επιπέδου.

Γι' αυτό ετοιμάσαμε μια σύντομη περιήγηση στα βασικά της SQL. Ας αρχίσουμε!

1. Δημιουργήστε έναν πίνακα

Η πρόταση CREATE TABLE χρησιμοποιείται για τη δημιουργία πινάκων. Τα ορίσματα πρέπει να είναι το όνομα των στηλών, καθώς και οι τύποι δεδομένων τους.

Ας δημιουργήσουμε έναν απλό πίνακα με το όνομα μήνας. Αποτελείται από 3 στήλες:

• ταυτότητα– Αριθμός του μήνα του ημερολογιακού έτους (ακέραιος).
• όνομα– Όνομα του μήνα (συμβολοσειρά, έως 10 χαρακτήρες).
• ημέρες– Αριθμός ημερών αυτού του μήνα (ακέραιος).

Δείτε πώς θα μοιάζει το αντίστοιχο ερώτημα SQL:

ΔΗΜΙΟΥΡΓΙΑ ΠΙΝΑΚΑΣ μήνες (αναγνωριστικό int, όνομα varchar(10), ημέρες int)

Επίσης, κατά τη δημιουργία πινάκων, καλό είναι να προσθέσετε ένα πρωτεύον κλειδί για μία από τις στήλες. Αυτό θα διατηρήσει τα αρχεία μοναδικά και θα επιταχύνει επιλεγμένα ερωτήματα. Ας είναι στην περίπτωσή μας το όνομα του μήνα μοναδικό (στήλη όνομα)

ΔΗΜΙΟΥΡΓΙΑ ΠΙΝΑΚΑ μηνών (αναγνωριστικό int, όνομα varchar(10), ημέρες int, ΚΥΡΙΑ ΚΛΕΙΔΙ (όνομα));

ημερομηνία και ώρα

Τύπος δεδομένων	Περιγραφή
ΗΜΕΡΟΜΗΝΙΑ	Τιμές ημερομηνίας
ΗΜΕΡΟΜΗΝΙΑ ΩΡΑ	Τιμές ημερομηνίας και ώρας με ακρίβεια λεπτών
ΧΡΟΝΟΣ	Χρονικές αξίες

2. Εισαγάγετε σειρές

Ας συμπληρώσουμε τώρα τον πίνακα μας μήνες ΧΡΗΣΙΜΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ. Η προσθήκη εγγραφών σε έναν πίνακα γίνεται μέσω της εντολής INSERT. Υπάρχουν δύο τρόποι για να γράψετε αυτήν την οδηγία.

Ο πρώτος τρόπος είναι να μην καθορίσετε τα ονόματα των στηλών όπου θα εισαχθούν τα δεδομένα, αλλά να καθορίσετε μόνο τις τιμές.

Αυτή η σημείωση είναι απλή, αλλά μη ασφαλής, επειδή δεν υπάρχει καμία εγγύηση ότι καθώς το έργο επεκτείνεται και ο πίνακας επεξεργάζεται, οι στήλες θα έχουν την ίδια σειρά όπως πριν. Ένας ασφαλέστερος (και ταυτόχρονα πιο επαχθής) τρόπος σύνταξης μιας δήλωσης INSERT απαιτεί τον καθορισμό τόσο των τιμών όσο και της σειράς των στηλών:

Εδώ είναι η πρώτη τιμή στη λίστα ΑΞΙΕΣταιριάζει με το όνομα της πρώτης καθορισμένης στήλης και ούτω καθεξής.

3. Εξαγωγή δεδομένων από πίνακες

Η δήλωση SELECT είναι δική μας ο καλύτερος φίλοςόταν θέλουμε να πάρουμε δεδομένα από τη βάση δεδομένων. Χρησιμοποιείται πολύ συχνά, γι' αυτό διαβάστε προσεκτικά αυτήν την ενότητα.

Η απλούστερη χρήση της πρότασης SELECT είναι ένα ερώτημα που επιστρέφει όλες τις στήλες και τις σειρές από έναν πίνακα (για παράδειγμα, έναν πίνακα με όνομα χαρακτήρες):

ΕΠΙΛΟΓΗ * ΑΠΟ "χαρακτήρες"

Ο χαρακτήρας αστερίσκου (*) σημαίνει ότι θέλουμε να λάβουμε δεδομένα από όλες τις στήλες. Δεδομένου ότι οι βάσεις δεδομένων SQL συνήθως αποτελούνται από περισσότερους από έναν πίνακες, απαιτείται να καθοριστεί λέξη-κλειδί FROM , ακολουθούμενο από ένα κενό που ακολουθείται από το όνομα του πίνακα.

Μερικές φορές δεν θέλουμε να λαμβάνουμε δεδομένα από όλες τις στήλες ενός πίνακα. Για να γίνει αυτό, αντί για αστερίσκο (*), πρέπει να γράψουμε τα ονόματα των επιθυμητών στηλών διαχωρισμένα με κόμμα.

SELECT id, όνομα ΑΠΟ μήνα

Επίσης, σε πολλές περιπτώσεις θέλουμε τα αποτελέσματα να ταξινομούνται με συγκεκριμένη σειρά. Στην SQL, το κάνουμε αυτό με ORDER BY. Μπορεί να χρειαστεί ένας προαιρετικός τροποποιητής - ASC (προεπιλογή) για ταξινόμηση με αύξουσα σειρά ή DESC για ταξινόμηση με φθίνουσα σειρά:

ΕΠΙΛΟΓΗ αναγνωριστικού, όνομα ΑΠΟ μήνα ΤΑΞΗ ΑΝΑ Όνομα DESC

Όταν χρησιμοποιείτε ORDER BY, βεβαιωθείτε ότι είναι τελευταίο στη δήλωση SELECT. Διαφορετικά, θα εκδοθεί μήνυμα σφάλματος.

4. Φιλτράρισμα δεδομένων

Έχετε μάθει πώς να επιλέγετε συγκεκριμένες στήλες από μια βάση δεδομένων χρησιμοποιώντας ένα ερώτημα SQL, αλλά τι γίνεται αν θέλουμε να ανακτήσουμε και συγκεκριμένες σειρές; Η ρήτρα WHERE έρχεται στη διάσωση εδώ, επιτρέποντάς μας να φιλτράρουμε δεδομένα με βάση μια συνθήκη.

Σε αυτό το ερώτημα, επιλέγουμε μόνο αυτούς τους μήνες από τον πίνακα μήναςπου είναι μεγαλύτερες από 30 ημέρες χρησιμοποιώντας τον τελεστή μεγαλύτερο από (>).

SELECT ID, όνομα ΑΠΟ μήνα WHERE ημέρες > 30

5. Προηγμένο φιλτράρισμα δεδομένων. τελεστές AND και OR

Παλαιότερα, φιλτράραμε δεδομένα χρησιμοποιώντας ένα μόνο κριτήριο. Για πιο πολύπλοκο φιλτράρισμα δεδομένων, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε τους τελεστές AND και OR και τους τελεστές σύγκρισης (=,<,>,<=,>=,<>).

Εδώ έχουμε έναν πίνακα που περιέχει τα τέσσερα άλμπουμ με τις μεγαλύτερες πωλήσεις όλων των εποχών. Ας διαλέξουμε αυτά που έχουν χαρακτηριστεί ως ροκ και έχουν πουλήσει λιγότερα από 50 εκατομμύρια αντίτυπα. Αυτό μπορεί να γίνει εύκολα τοποθετώντας έναν τελεστή AND μεταξύ αυτών των δύο συνθηκών.

ΕΠΙΛΟΓΗ * ΑΠΟ άλμπουμ WHERE είδος = "rock" ΚΑΙ πωλήσεις_σε_εκατομμύρια<= 50 ORDER BY released

6. In/Between/Like

Το WHERE υποστηρίζει επίσης πολλές ειδικές εντολές, επιτρέποντάς σας να ελέγχετε γρήγορα τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα ερωτήματα. Εδώ είναι:

• IN - χρησιμοποιείται για τον καθορισμό μιας σειράς συνθηκών, οποιαδήποτε από τις οποίες μπορεί να εκπληρωθεί
• BETWEEN - Ελέγχει εάν η τιμή βρίσκεται στο καθορισμένο εύρος
• LIKE - αναζητά συγκεκριμένα μοτίβα

Για παράδειγμα, αν θέλουμε να επιλέξουμε άλμπουμ με κρότοςΚαι ψυχήμουσική, μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε IN("value1","value2") .

ΕΠΙΛΟΓΗ * ΑΠΟ άλμπουμ WHERE IN ("pop","soul");

Αν θέλουμε να έχουμε όλα τα άλμπουμ που κυκλοφόρησαν μεταξύ 1975 και 1985, θα γράφαμε:

ΕΠΙΛΟΓΗ * ΑΠΟ άλμπουμ WHERE που κυκλοφόρησε Μεταξύ 1975 ΚΑΙ 1985.

7. Λειτουργίες

Η SQL είναι γεμάτη λειτουργίες που κάνουν κάθε είδους χρήσιμα πράγματα. Εδώ είναι μερικά από τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα:

• COUNT() - επιστρέφει τον αριθμό των σειρών
• SUM() - επιστρέφει το συνολικό άθροισμα μιας αριθμητικής στήλης
• AVG() - επιστρέφει τη μέση τιμή από ένα σύνολο τιμών
• MIN() / MAX() - Λαμβάνει την ελάχιστη / μέγιστη τιμή από μια στήλη

Για να λάβουμε το πιο πρόσφατο έτος στον πίνακά μας, πρέπει να γράψουμε το ακόλουθο ερώτημα SQL:

SELECT MAX (κυκλοφόρησε) ΑΠΟ άλμπουμ.

8. Υποερωτήματα

Στην προηγούμενη παράγραφο, μάθαμε πώς να κάνουμε απλούς υπολογισμούς με δεδομένα. Εάν θέλουμε να χρησιμοποιήσουμε το αποτέλεσμα από αυτούς τους υπολογισμούς, δεν μπορούμε να κάνουμε χωρίς ένθετα ερωτήματα. Ας πούμε ότι θέλουμε να βγούμε καλλιτέχνης, άλμπουμΚαι έτος κυκλοφορίαςγια το παλαιότερο άλμπουμ στον πίνακα.

Γνωρίζουμε πώς να λάβουμε αυτές τις συγκεκριμένες στήλες:

ΕΠΙΛΟΓΗ καλλιτέχνη, άλμπουμ, που κυκλοφόρησε ΑΠΟ άλμπουμ.

Ξέρουμε επίσης πώς να αποκτήσουμε το νωρίτερο έτος:

ΕΠΙΛΟΓΗ MIN (κυκλοφόρησε) ΑΠΟ άλμπουμ.

Το μόνο που χρειάζεται τώρα είναι να συνδυάσετε τα δύο ερωτήματα με ένα WHERE:

ΕΠΙΛΟΓΗ καλλιτέχνη,άλμπουμ,κυκλοφόρησε ΑΠΟ άλμπουμ WHERE κυκλοφορήσει = (ΕΠΙΛΟΓΗ MIN(κυκλοφόρησε) FROM άλμπουμ);

9. Συγχώνευση πινάκων

Σε πιο σύνθετες βάσεις δεδομένων, υπάρχουν πολλοί πίνακες που σχετίζονται μεταξύ τους. Για παράδειγμα, παρακάτω είναι δύο πίνακες σχετικά με βιντεοπαιχνίδια ( βιντεοπαιχνίδια) και προγραμματιστές βιντεοπαιχνιδιών ( game_developers).

Τραπέζι βιντεοπαιχνίδιαυπάρχει μια στήλη προγραμματιστή ( developer_id), αλλά περιέχει έναν ακέραιο, όχι το όνομα του προγραμματιστή. Αυτός ο αριθμός είναι αναγνωριστικό ( ταυτότητα) του αντίστοιχου προγραμματιστή από τον πίνακα προγραμματιστών παιχνιδιών ( game_developers) συνδέοντας τις δύο λίστες λογικά, επιτρέποντάς μας να χρησιμοποιούμε τις πληροφορίες που είναι αποθηκευμένες και στις δύο ταυτόχρονα.

Εάν θέλουμε να δημιουργήσουμε ένα ερώτημα που επιστρέφει όλα όσα πρέπει να γνωρίζουμε για τα παιχνίδια, μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε ένα ΕΣΩΤΕΡΙΚΟ ΣΥΝΔΕΣΗ για να συνδέσουμε στήλες και από τους δύο πίνακες.

ΕΠΙΛΟΓΗ video_games.name, video_games.genre, game_developers.name, game_developers.country ΑΠΟ video_games Εσωτερική συμμετοχή στο game_developers ON video_games.developer_id = game_developers.id;

Αυτός είναι ο απλούστερος και πιο κοινός τύπος JOIN. Υπάρχουν πολλές άλλες επιλογές, αλλά ισχύουν για λιγότερο συχνές περιπτώσεις.

10. Ψευδώνυμα

Αν κοιτάξετε το προηγούμενο παράδειγμα, θα παρατηρήσετε ότι υπάρχουν δύο στήλες που ονομάζονται όνομα. Αυτό προκαλεί σύγχυση, οπότε ας ορίσουμε ένα ψευδώνυμο σε μία από τις επαναλαμβανόμενες στήλες, για παράδειγμα, όνομααπό το τραπέζι game_developersθα κληθεί προγραμματιστής.

Μπορούμε επίσης να συντομεύσουμε το ερώτημα με το ψευδώνυμο των ονομάτων του πίνακα: βιντεοπαιχνίδιαας καλέσουμε Παιχνίδια, game_developers - προγραμματιστές:

ΕΠΙΛΕΞΤΕ games.name, games.genre, devs.name AS προγραμματιστής, devs.country ΑΠΟ video_games AS παιχνίδια ΕΣΩΤΕΡΙΚΟΣ ΕΓΓΡΑΦΗ game_developers AS προγραμματιστές ON games.developer_id = devs.id;

11. Ενημέρωση δεδομένων

Συχνά χρειάζεται να αλλάξουμε τα δεδομένα σε ορισμένες σειρές. Στην SQL, αυτό γίνεται με την πρόταση UPDATE. Η δήλωση UPDATE αποτελείται από:

• Ο πίνακας που περιέχει την τιμή αντικατάστασης.
• Ονόματα στηλών και οι νέες τους τιμές.
• Οι σειρές που επιλέχθηκαν με WHERE που θέλουμε να ενημερώσουμε. Εάν αυτό δεν γίνει, τότε όλες οι σειρές στον πίνακα θα αλλάξουν.

Παρακάτω είναι ο πίνακας Τηλεοπτική σειράμε σειρές με τη βαθμολογία τους. Ωστόσο, ένα μικρό λάθος μπήκε στον πίνακα: αν και η σειρά Παιχνίδι των θρόνωνκαι περιγράφεται ως κωμωδία, πραγματικά δεν είναι. Ας το φτιάξουμε αυτό!

Δεδομένα πίνακα tv_series ΕΝΗΜΕΡΩΣΗ tv_series SET genre = "drama" WHERE id = 2;

12. Διαγραφή δεδομένων

Η διαγραφή μιας γραμμής πίνακα με SQL είναι μια πολύ απλή διαδικασία. Το μόνο που έχετε να κάνετε είναι να επιλέξετε τον πίνακα και τη σειρά που θέλετε να διαγράψετε. Ας αφαιρέσουμε την τελευταία σειρά στον πίνακα από το προηγούμενο παράδειγμα Τηλεοπτική σειρά. Αυτό γίνεται χρησιμοποιώντας τη δήλωση >ΔΙΑΓΡΑΦΗ.

ΔΙΑΓΡΑΦΗ ΑΠΟ tv_series WHERE id = 4

Να είστε προσεκτικοί όταν γράφετε τη δήλωση DELETE και να βεβαιωθείτε ότι υπάρχει η ρήτρα WHERE, διαφορετικά όλες οι σειρές του πίνακα θα διαγραφούν!

13. Διαγραφή πίνακα

Εάν θέλουμε να αφαιρέσουμε όλες τις σειρές, αλλά να αφήσουμε τον ίδιο τον πίνακα, χρησιμοποιήστε την εντολή TRUNCATE:

TRUNCATE TABLE table_name;

Στην περίπτωση που θέλουμε πραγματικά να διαγράψουμε τόσο τα δεδομένα όσο και τον ίδιο τον πίνακα, τότε η εντολή DROP θα είναι χρήσιμη:

DOP TABLE table_name;

Να είστε πολύ προσεκτικοί με αυτές τις εντολές. Δεν μπορούν να αναιρεθούν!/p>

Αυτό ολοκληρώνει το σεμινάριο SQL! Υπάρχουν πολλά που δεν έχουμε καλύψει, αλλά αυτά που ήδη γνωρίζετε θα πρέπει να είναι αρκετά για να σας δώσουν κάποιες πρακτικές δεξιότητες στην καριέρα σας στο διαδίκτυο.

Η συγκαλλιέργεια λεμφοκυττάρων με μόρια MHC-II διαφορετικού απλότυπου προκαλεί τον βλαστικό μετασχηματισμό και τον πολλαπλασιασμό τους. Τα κύτταρα που αντιδρούν ανήκουν σε Τ-λεμφοκύτταρα και διεγείρονται από ξένους προσδιοριστές MHC-II που βρίσκονται σε Β-λεμφοκύτταρα, μακροφάγα. Η ισχύς της αντίδρασης εξαρτάται από το βαθμό διαφοράς μεταξύ των αντιγόνων ιστοσυμβατότητας. Για να εκτιμηθεί η αντιδραστικότητα ενός ατόμου σε σχέση με την αλληλική παραλλαγή MHC, παρασκευάζεται μια μονοκατευθυντική καλλιέργεια λεμφοκυττάρων. Για να γίνει αυτό, τα διεγερτικά κύτταρα υποβάλλονται σε προεπεξεργασία με μιτομυκίνη ή ακτινοβολούνται, ενώ τα διεγερτικά κύτταρα χάνουν την ικανότητά τους να διαιρούνται, αλλά παραμένουν βιώσιμα.

Η αντιδραστικότητα σε μικτή καλλιέργεια λεμφοκυττάρων είναι ένα από τα κριτήρια στην αξιολόγηση κυτταρική ανοσία. Το SKL επιτρέπει τη διεξαγωγή Δακτυλογράφηση HLA, για την επιλογή ενός ζεύγους δότη-λήπτη για μεταμόσχευση ιστού και οργάνων, για να γίνει συσχέτιση μεταξύ των αντιγόνων HLA και ορισμένων ασθενειών.

Για τη ρύθμιση της αντίδρασης, χρησιμοποιείται ένα εναιώρημα λεμφοκυττάρων που απομονώνονται από το αίμα ασθενών (δότης και λήπτης). Τα πλυμένα αποκρινόμενα κύτταρα εναιωρούνται σε μικρή ποσότητα μέσου 199 (0,5 ml) και, μετά από μέτρηση του αριθμού των κυττάρων, ρυθμίζονται σε 0,6 * 106 κύτταρα/ml. Το εναιώρημα διεγερτικών κυττάρων παρασκευάζεται ομοίως με την προσθήκη διαλύματος μιτομυκίνης C (500 μg μιτομυκίνης C σε 1 ml ρυθμισμένου φυσιολογικού ορού) με ρυθμό 0,1 ml ανά 1 ml εναιωρήματος. Το μίγμα κυττάρων επωάζεται για 40 λεπτά στους 37°C σε ένα λουτρό νερού με ανάδευση, στη συνέχεια προστίθεται ψυχρό μέσο 199 στο εναιώρημα και τα κύτταρα πλένονται τρεις φορές με φυγοκέντρηση. Το ίζημα αιωρείται μέσα μέσο καλλιέργειαςκαλλιέργεια, φέρνοντας τον αριθμό των κυττάρων σε 0,6 * 10 6 κύτταρα/ml.

0,1 ml του κυτταρικού εναιωρήματος στο διάλυμα Hank's προστίθεται στα φρεάτια μιας στείρας ανοσολογικής πλάκας με στρογγυλό πυθμένα και προστίθεται 0,1 ml του κυτταρικού εναιωρήματος που φέρει παραλλαγές αλληλόμορφων MHC. Η ίδια ποσότητα διαλύματος Hank προστέθηκε στον έλεγχο.

Ο υπολογισμός των αποτελεσμάτων πραγματοποιείται μετά την επώαση των κυττάρων στους 37 °C για 3-5 ημέρες, ανάλογα με τη σύνθεση της αντίδρασης χρησιμοποιώντας μια μορφολογική ή ισοτοπική μέθοδο (βλ. RBTL).

Κατά τη μεταφύτευση μυελός των οστώνΗ επιλογή ενός ιστοσυμβατού δότη βασίζεται στα αποτελέσματα του τύπου HLA του δότη και του λήπτη, καθώς και κατά τον προσδιορισμό της συμβατότητας επιλεγμένων ζευγών δότη-λήπτη πανομοιότυπων HLA στο SCL, που είναι το τελικό στάδιο αξιολόγησης συμβατότητας. Για αυτό, χρησιμοποιείται μια αμφίδρομη αντίδραση SCL χρησιμοποιώντας μια μέθοδο μικροκαλλιέργειας σε μια πλάκα 96 φρεατίων με εκτίμηση του μεγέθους του πολλαπλασιασμού με την ενσωμάτωση ραδιενεργού Η3-θυμιδίνης στο DNA των πολλαπλασιαζόμενων λεμφοκυττάρων.

Αυτή τη στιγμή δίνεται μεγάλη προσοχή στη μελέτη του ρόλου ανοσοποιητικούς μηχανισμούςστην αναπαραγωγική διαδικασία, αφού η παραβίασή τους οδηγεί στην ανάπτυξη υπογονιμότητας και πρόωρη διακοπή της εγκυμοσύνης. Μελέτες ανοσολογικών παραμέτρων και σχέση τους με αναπαραγωγικές διαδικασίεςοδήγησε στο συμπέρασμα ότι η αναδιάρθρωση είναι απαραίτητη ανοσοποιητικό σύστημαστην προετοιμασία του σώματος της μητέρας για εγκυμοσύνη, ξεκινώντας από περίοδος ωορρηξίας, κατά τη στιγμή της εμφύτευσης του εμβρύου και στις πρώιμη περίοδοεγκυμοσύνη.

Μία από τις πιο περίπλοκες και δύσκολα διαγνώσιμες αιτίες υπογονιμότητας και επαναλαμβανόμενων αυθόρμητων αποβολών είναι η δυσλειτουργία του ανοσοποιητικού.

Με στόχο την έγκαιρη ανίχνευσηη ανοσολογική υπογονιμότητα στο εργαστήριο ανοσολογίας της αναπαραγωγής εξετάζεται ζευγάριαχρησιμοποιώντας παρακάτω μεθόδουςδιαγνωστικά:

• μελέτη του επιπέδου της πολλαπλασιαστικής απόκρισης των λεμφοκυττάρων μιας γυναίκας στα αντιγόνα εταίρου (σε μικτή καλλιέργεια λεμφοκυττάρων)
• προσδιορισμός της δραστηριότητας των παραγόντων αποκλεισμού στον ορό αίματος μιας γυναίκας.
• αξιολόγηση του ποσοτικού περιεχομένου υποπληθυσμών φυσικών κυτταροτοξικών κυττάρων σε περιφερικό αίμαγυναίκες.
• διευρυμένο ανοσογράφημα
• μελέτη του περιεχομένου ρυθμιστικών κυττάρων με κατασταλτική δραστηριότητα στο περιφερικό αίμα.
• κατά τον εντοπισμό κλινικών και εργαστηριακά σημάδιαανοσολογική υπογονιμότητα, οι ασθενείς συνιστάται να υποβληθούν ιατρική διαδικασία- αλλοανοσοποίηση με λεμφοκύτταρα του συζύγου, η οποία πραγματοποιείται σύμφωνα με ατομικό πρόγραμμα.

Απαιτείται διαβούλευση:

• εάν ελλείψει γυναικολογικών και ενδοκρινικές παθήσειςμε τακτική σεξουαλική ζωή κατά τη διάρκεια του έτους δεν υπάρχουν εγκυμοσύνες.
• σε περίπτωση επαναλαμβανόμενων (πάνω από 1 φορά) αυτόματων αμβλώσεων (αποβολή).
• στο ανεπιτυχής εξωσωματική γονιμοποίησηστην ιστορία.
• με την απειλή διακοπής μιας πραγματικής εγκυμοσύνης.

Εάν εντοπιστούν παραβιάσεις, συνταγογραφείται διαδικασία για το σκοπό της ανοσοδιόρθωσης των παραβιάσεων. αλλοανοσοποίηση με συνεργαζόμενα λεμφοκύτταρα (AIL). Αυτή η μέθοδοςεγκρίνονται οι θεραπείες Ομοσπονδιακή Υπηρεσίαπερί εποπτείας στον τομέα της υγείας (άδεια ΦΣ Αρ. 2009/179 ημερομηνίας 02.07.2009)

Η διαδικασία πραγματοποιείται μόνο εάν ο συνεργάτης έχει αρνητικά αποτελέσματατεστ για HIV λοίμωξη, σύφιλη και ιογενής ηπατίτιδα(ΠΡΟ ΧΡΙΣΤΟΥ). Δεν εντοπίστηκαν επιπλοκές στο AIL. Η μέθοδος AIL έχει έντονο ανοσοδιορθωτικό αποτέλεσμα, αυξάνει την αποτελεσματικότητα της θεραπείας υπογονιμότητας, όπως φυσικός κύκλος, καθώς τεχνητή γονιμοποίηση(ΟΙΚΟ). Συνταγογραφείται επίσης για ανεπιτυχείς προσπάθειες εξωσωματικής γονιμοποίησης.

Το AIL πραγματοποιείται 1 φορά σε 28-30 ημέρες (σύμφωνα με εμμηνορρυσιακός κύκλοςγυναίκες) στην 1η φάση του κύκλου. Το πρώτο μάθημα περιλαμβάνει 3 διαδικασίες AIL. Μετά τη 2η διαδικασία, το ζευγάρι επαναλαμβάνει την ανάλυση ελέγχου. Με την παρουσία θετικής δυναμικής, η τρίτη διαδικασία AIL είναι η τελευταία. Ελλείψει δυναμικής, αυξάνεται η δόση των κυττάρων για ανοσοποίηση και πραγματοποιείται η 2η πορεία, η οποία περιλαμβάνει 2 διαδικασίες. Μετά από ανάλυση ελέγχου, σε ορισμένες περιπτώσεις, είναι απαραίτητο να συνταγογραφηθεί μια 3η πορεία ανοσοποίησης με αύξηση της δόσης των κυττάρων. Μετά την επίτευξη των τυπικών τιμών, το θετικό αποτέλεσμα διαρκεί εντός 6-8 μηνών.

Για την περίοδο από το 2003 έως το 2013. Στο εργαστήριο κυτταρικής ανοσοθεραπείας πραγματοποιήθηκαν περίπου 3000 διαδικασίες αλλοανοσοποίησης με λεμφοκύτταρα συνεργατών. Για αυτή τη διαδικασία, μόνο λεμφοκύτταρα απομονώνονται από το αίμα του συντρόφου, τα οποία υπάρχουν πάντα στο σπέρμα. Σε άλλες χώρες*, η διαδικασία αλλοανοσοποίησης γίνεται επίσης εδώ και 20 χρόνια, η οποία βοηθά μια γυναίκα να γεννήσει και να γεννήσει ένα υγιές παιδί.

Είδος υπηρεσίας	τιμή, τρίψτε.
Δοκιμή μετασχηματισμού λεμφοκυττάρων	1650
Δοκιμή μετασχηματισμού λεμφοκυττάρων (Ανίχνευση στειροποίησης σε 2v-va)	2 900
Δοκιμή μετασχηματισμού λεμφοκυττάρων (Ανίχνευση στειροποίησης σε 3v-va)	3 900
Δοκιμή μετασχηματισμού λεμφοκυττάρων (ανοσολογική εξέταση για υπογονιμότητα)	3 200
Διευρυμένο ανοσογράφημα με δείκτες ενεργοποίησης	4 625
Ολοκληρωμένη μελέτη της ανοσοποιητικής κατάστασης	4 125
Εμβολιασμός (αλλοανοσοποίηση με λεμφοκύτταρα συντρόφου 1 δόση)	1 900
Εμβολιασμός (αλλοανοσοποίηση με λεμφοκύτταρα συντρόφου 2 δόση)	2 750
Εμβολιασμός (αλλοανοσοποίηση με λεμφοκύτταρα συντρόφου 3 δόση)	3 400
Διερεύνηση λεμφοκυττάρων CD16+/CD56+ (ανοσολογική εξέταση για υπογονιμότητα μόνο ΝΚ κύτταρα)	1 250
Μελέτη της δραστηριότητας των μακροφάγων (ρυθμισμένα περιβάλλοντα μακροφάγων)	9 400
Μελέτη της δραστηριότητας των μακροφάγων (μέσα υπό όρους)	1 500
Κρυοσυντήρηση μονοπύρηνων κυττάρων για αλλοανοσοποίηση	650

2.2. Μέθοδοι αλληλεπιδράσεων κυττάρων

Σχεδόν όλες οι μέθοδοι κυτταρικών αλληλεπιδράσεων που χρησιμοποιούνται στην κλινική ανοσογενετική βασίζονται στο φαινόμενο του σχηματισμού βλαστών σε μια μικτή καλλιέργεια λεμφοκυττάρων, που ανακαλύφθηκε από την Καναδή ερευνήτρια Barbara Bain. Η αντίδραση μικτής καλλιέργειας λεμφοκυττάρων (MLC) επέτρεψε μια λεπτομερώς διαφοροποιημένη μελέτη του συμπλέγματος HLA και, ειδικότερα, μιας από τις υπομονάδες του, του τόπου HLA-D. Ένας αριθμός άλλων μεθόδων κυτταρικών αλληλεπιδράσεων - κυτταρομεσολαβούμενη λεμφόλυση (Cell-mediated Lympholysis - CML), η δοκιμή εκκίνησης λεμφοκυττάρων (Primed Lymphocyte Typing) - βασίζεται στη μέθοδο MLC ή την περιέχει ως αναπόσπαστο μέρος.

2.2.1. Μικτή καλλιέργεια λεμφοκυττάρων (MCL)

Η αρχή της μεθόδου φαίνεται στο σχ. 10, το οποίο δείχνει ότι δύο πληθυσμοί γενετικά διαφορετικών λεμφοκυττάρων αλληλεπιδρούν μεταξύ τους σε in vitro καλλιέργεια. Ένας από τους πληθυσμούς υποβάλλεται σε θεραπεία με μιτομυκίνη C ή ακτινοβολείται, με αποτέλεσμα να χάνει την ικανότητα σχηματισμού βλαστών και την ενσωμάτωση θυμιδίνης (3 HT), ωστόσο, χωρίς να χάσει τις αντιγονικές ιδιότητες, διατηρεί την ικανότητα να διεγείρει (διεγερτικά, S- πληθυσμός).

Τα κύτταρα που ανταποκρίνονται στη διέγερση (ανταποκρίνονται, R-πληθυσμός) μετατρέπονται σε βλάστες μετά από μερικές ημέρες και περιλαμβάνουν θυμιδίνη που προστίθεται στην καλλιέργεια. Η ένταση της αντίδρασης μετράται χρησιμοποιώντας μια ετικέτα ακτινοβολίας με την ενσωμάτωση 3Η-θυμιδίνης.

Είναι γνωστές αρκετές παραλλαγές της αντίδρασης μιας μικτής καλλιέργειας λεμφοκυττάρων, από τις οποίες δύο προτείνονται εδώ: μια παραδοσιακή και μια μικροπαραλλαγή που εφαρμόζεται σε πλάκες Cook (Εικ. 11).

Ρύζι. 11. Εξοπλισμός για μικροπαραλλαγές MLC και CML. 1 - δισκίο στρογγυλό πάτο e 96 οπές. 2-αυτόματη πιπέτα ("Pipetman") με πρόγραμμα για διαφορετικούς όγκους. 3 - αυτόματη πιπέτα ("Sigma") για συγκεκριμένο όγκο. 4 - μύτη πιπέτας μιας χρήσης. 5 - λαμιναρικό κουτί

Παραδοσιακή έκδοση του MLC (τροποποιημένη από τον F. S. Baranova):

Τα λεμφοκύτταρα απομονώνονται σε βαθμίδωση φικολλο-ουρογραφίνης όπως περιγράφεται παραπάνω. Η πρώτη πλύση πραγματοποιείται σε PBS (NaCl - 8,0 g, Na 2 HP0 4 - 1,15 g, KH2PO 4 - 0,2 g, KC1 - 0,2 g ανά 1 λίτρο Η2Ο). Τα επόμενα δύο παράγονται σε μέσο 199 με 5% ορό ΑΒ (δεξαμενή 15 δωρητών).

Τα αποκρινόμενα κύτταρα επαναιωρούνται σε μέσο 199 με 10% ορό ΑΒ και η συγκέντρωση των κυττάρων ρυθμίζεται σε 0,6 x 106 σε 1 ml.

Τα διεγερτικά κύτταρα που απομονώθηκαν με τον ίδιο τρόπο σε συγκέντρωση 5 - 106 ανά 1 ml υποβάλλονται σε επεξεργασία με μιτομυκίνη C (60 γ/ml) από το Serva και επωάζονται για 40 λεπτά στους 37°C σε λουτρό νερού. Μετά την επώαση, τα κύτταρα πλένονται 3 φορές με μέσο 199 με 5% ορό ΑΒ, επαναιωρούνται σε μέσο 199 με 10% ορό ΑΒ, φέρνοντας τη συγκέντρωση σε 0,6 χ 106 σε 1 ml.

0,5 ml αποκρινόμενων κυττάρων και 0,5 ml διεγερτικών κυττάρων αναμειγνύονται σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης, προστίθενται 0,04 ml 10 ml διαλύματος Hepes (Serva) και επωάζονται για 144 ώρες. Η εμπειρία τοποθετείται σε τρεις παραλλήλους (τριπλές).

24 ώρες πριν από το τέλος της επώασης, προστίθενται στα σωληνάρια 3 Η-θυμιδίνη 1μCi (3,7x10 4 π.Χ.), ανά δείγμα. συγκεκριμένη δραστηριότητα 5 mSi/mmol (18,5x10 7 Bq/mmol) και συνεχίστε την επώαση.

Στο τέλος της επώασης, τα κύτταρα μεταφέρονται σε φίλτρα millipore (0,6 - 0,9 μικρά), πλένονται αλατούχος(37°C) και ψυγμένο διάλυμα τριχλωροξικού οξέος 5% (4°C). Τα φίλτρα ξηραίνονται και τοποθετούνται σε φιαλίδια με 5 ml υγρού σπινθηρισμού (5 g PPO και 0,5 g POPOP ανά 1 λίτρο τολουολίου)*. Η δραστηριότητα ενσωμάτωσης 3Η-θυμιδίνης μετράται σε β-μετρητή. το αποτέλεσμα εκφράζεται σε απόλυτους εγκλεισμούς μιας ραδιενεργής ετικέτας σε 1 λεπτό ή στον δείκτη διέγερσης (SI) σύμφωνα με τον τύπο:

* (PPO - 2,5-φαινόλη-οξαζόλη; POPOP - (1,4-δι-2-15-φαινόλη οξαζολιτβενζόλιο).)

Μέση τιμή CPM σε τρία πρωτότυπα

SI = Μέση CPM τριών μαρτύρων/μάρτυρες είναι αυθόρμητες καλλιέργειες αποκρινόμενων κυττάρων.

Μικροπαραλλαγή MLC σε ταμπλέτες Cook. Στο 8ο Εργαστήριο αναπτύχθηκαν απαιτήσεις που τυποποιούν τη μικροπαραλλαγή MLC, σύμφωνα με την οποία παρουσιάζεται παρακάτω:

Τα λεμφοκύτταρα απομονώνονται σε βαθμίδωση isopac-ficoll και επαναιωρούνται σε μέσο RPMJ-1640*, φέρνοντας τη συγκέντρωση σε 5x105 σε 1 ml.

* (Μπορεί να χρησιμοποιηθεί το μέσο 199 αναμεμειγμένο με ανθρώπινο ορό της ομάδας ΑΒ (5% ορός που λαμβάνεται από πολλά άτομα).)

Τα διεγερτικά κύτταρα υποβάλλονται σε επεξεργασία με μιτομυκίνη C ή εκπαίδευση.

5x10 4 ανταποκριτές και ο ίδιος αριθμός διεγερτικών τοποθετούνται χρησιμοποιώντας μια μικροπιπέτα τύπου Pipetman σε κάθε φρεάτιο μιας μικροπλάκας με στρογγυλό πυθμένα Cook.

Οι πλάκες επωάζονται σε θερμοστάτη με αυτόματη παροχή 5% CO 2 για 120 ώρες. Στη συνέχεια lμmCi 3H-θυμιδίνη προστίθεται σε κάθε φρεάτιο με ειδική δράση θυμιδίνης 6 Ci/mmol. όλοι οι χειρισμοί πραγματοποιούνται με πιπέτα Pipetman.

16 ώρες μετά την προσθήκη θυμιδίνης, οι καλλιέργειες από κάθε φρεάτιο μεταφέρονται σε φίλτρα millipore με αυτόματη πιπέτα και πλένονται με φυσιολογικό ορό και μετά με τριχλωροξικό οξύ 5%. είναι βολικό να χρησιμοποιείτε ειδικούς "θεριστές" για τη μεταφορά της καλλιέργειας σε φίλτρα millipore.

Η δραστικότητα ενσωμάτωσης θυμιδίνης προσδιορίζεται όπως περιγράφεται παραπάνω.

2.2.2. Κυτταρική λεμφόλυση (CML)

Η ΧΜΛ έχει χρησιμοποιηθεί σε ανοσογενετικές μελέτες σχετικά πρόσφατα (από το 1972), αλλά σε Πρόσφαταγίνεται όλο και περισσότερο δημοφιλής τεχνική, επιτρέποντάς σας να μελετήσετε λεπτομερώς τον ρόλο του απαγωγού συνδέσμου της ανοσίας των μεταμοσχεύσεων και να κερδίσετε την αναγνώριση ως ενημερωτική μέθοδοςανοσολογική παρακολούθηση. Η αρχή της μεθόδου φαίνεται στο σχ. 12. Η μέθοδος βασίζεται στην τεχνική που προτείνεται από τον J. Lightbody (1971), η οποία συνοψίζεται ως εξής.

1. Η ΧΜΛ ξεκινά με μια συμβατική δοκιμασία HLC στην οποία τα αποκρινόμενα κύτταρα αναγνωρίζουν «διεγέρτες», ευαισθητοποιούν τα κύτταρα που αποκρίνονται και σχηματίζουν ευαισθητοποιημένους δολοφόνους.

2. Η δεύτερη φάση, στην οποία οι ευαισθητοποιημένοι δολοφόνοι αναμειγνύονται με 51 Cr-επισημασμένα κύτταρα-στόχους, συνίσταται στην καταστροφή των τελευταίων από τελεστές φονικά κύτταρα. Τα κύτταρα-στόχοι μπορεί να έχουν τον ίδιο γονότυπο με τους «διεγέρτες» στην πρώτη φάση της MLC ή μπορεί να είναι κύτταρα του «τρίτου» εταίρου, προικισμένα με αντιγονικούς καθοριστές από κοινού με τους «διεγέρτες» ή χωρίς αυτούς.

3. Η ποσότητα ραδιενεργού χρωμίου που απελευθερώνεται από τα κατεστραμμένα κύτταρα στόχους και απελευθερώνεται στο μέσο καλλιέργειας χρησιμεύει ως μέτρο της έντασης του φονικού φαινομένου.

Ρύζι. 12. Η αρχή της κυτταρομεσολαβούμενης λεμφόλυσης (CML). I σειρά - ευαισθητοποίηση των κυττάρων που απαντούν, ο σχηματισμός δολοφόνων. II σειρά - η αλληλεπίδραση των δολοφόνων με τον στόχο. Σειρά III - καταστροφή του κυττάρου στόχου. έξοδος 51 Cr μέσο καλλιέργειας

Τρεις παραλλαγές της ΧΜΛ περιγράφονται εδώ: η παραδοσιακή έκδοση που τροποποιήθηκε από τον L.P. Alekseev (1979), η μικρο-παραλλαγή στα πιάτα Cook, η άμεση ΧΜΛ (Direct-CML -D-CML.

Παραδοσιακή επιλογή[Alekseev L.P., 1979].

Η μέθοδος χωρίζεται σε διάφορα στάδια.

Λήψη δολοφόνων:

Περιφερικά λεμφοκύτταρα και των δύο πληθυσμών (κύτταρα R και S-κύτταρα) απομονώνονται με τον συνήθη τρόπο, πλένονται σε διαβάθμιση πυκνότητας τρεις φορές σε μέσο 199 με 5% ορό ΑΒ (10 λεπτά, 150 g).

1x106 R κύτταρα (0,8 ml) αναμιγνύονται σε σωλήνες φυγοκέντρησης με 2x106 S κύτταρα (0,2 ml) που έχουν υποστεί επεξεργασία με μιτομυκίνη C και επωάζονται για 144 ώρες στους 37°C.

Τα κύτταρα φυγοκεντρούνται στα 150 g για 10 λεπτά και το ίζημα επαναιωρείται στο μέσο 199 με την προσθήκη 20% ορού μόσχου (μέσο 199 + δηλ.), φέρνοντας τη συγκέντρωση στο 1x106 σε 1 ml.

Ένα από τα δείγματα αφήνεται να μελετήσει το επίπεδο MLC, τα υπόλοιπα χρησιμοποιούνται ως έτοιμοι δολοφόνοι.

Λήψη στόχων:

Τα συμβατικά απομονωμένα λεμφοκύτταρα επαναιωρούνται σε μέσο 199 με 20% ορό ΑΒ και επωάζονται με φυτοαιμοσυγκολλητίνη (0,003 mg/ml Wellcome) για 72 ώρες στους 37°C. συγκέντρωση κυττάρων 1x10 6 σε 1 ml;

Τα κύτταρα φυγοκεντρούνται για 10 λεπτά στα 150 g, το ίζημα επαναιωρείται σε μέσο 199 με 5% ορό ΑΒ και η συγκέντρωση των κυττάρων ρυθμίζεται σε 2x104 σε 1 ml.

51 Cr 100 μCi/ml (3,7x10 6 Bq/ml) προστίθεται στο εναιώρημα και επωάζεται για 40 λεπτά στους 37°C.

Τα κύτταρα πλένονται τρεις φορές σε μέσο 199 συμπληρωμένο με 5% ορό ΑΒ (150 g, 10 λεπτά) και το ίζημα επαναιωρείται σε μέσο 199 συμπληρωμένο με 5% ορό ΑΒ. φέρνοντας τη συγκέντρωση σε 2x10 4 σε 1 ml.

Δήλωση αντιδράσεων:

5x10 5 killers (0,5 ml) αναμιγνύονται με 1x10 4 στόχους (0,5 ml), επωάζονται για 4 ώρες (37°C) και φυγοκεντρούνται στα 150 g για 10 λεπτά.

Το υπερκείμενο αναρροφάται και η ώθηση που προκαλείται από 51 Cr υπολογίζεται σε έναν α-μετρητή. Η μέτρηση πραγματοποιείται σε 0,5 ml υπερκειμένου.

Το επίπεδο κυτταρόλυσης υπολογίζεται με τον ακόλουθο τύπο:

φύλακας. έξοδος 51 Cr - αυθόρμητη έξοδος 51 Cr/max, έξοδος 51 Cr - αυθόρμητη έξοδος 41 Cr × 100.

Η αυθόρμητη απελευθέρωση χρωμίου μετράται σε στόχους που επωάστηκαν για 4 ώρες (37°C) χωρίς φονικά κύτταρα. μέγιστη απόδοση χρωμίου - σε στόχους που καταστρέφονται πλήρως από κατάψυξη-απόψυξη. Όλες οι δοκιμές γίνονται σε τρίδυμα.

Μικροπαραλλαγή της ΧΜΛ σε δισκία [σύμφωνα με τον Mawas S., 1976]:

Η φάση παραγωγής φονιάς πραγματοποιείται ως MLC σε πλάκες στρογγυλού πυθμένα, αλλά τα κύτταρα R- και S αναμιγνύονται σε ίσες ποσότητες σε 2x105 PA κάθε φρεάτιο και επωάζονται στους 37°C.

Μετά από 5 ημέρες, τα κύτταρα συλλέγονται με μια πιπέτα Pasteur σε δοκιμαστικό σωλήνα, ο αριθμός των ζωντανών κυττάρων μετράται με μπλε τρυπάνης και η συγκέντρωση ρυθμίζεται σε 10x106 σε 1 ml.

Τα κύτταρα στόχοι καλλιεργούνται με ΡΗΑ για 3 ημέρες.

Την ημέρα της αντίδρασης, τα κύτταρα στόχοι πλένονται (300 g) και επαναιωρούνται στο μέσο καλλιέργειας, κατανέμοντας 1 ml σε δοκιμαστικούς σωλήνες και φέρνοντας σε 1x106 σε 1 ml.

200 μCi 51 Cr (7,4x10 6 BK) προστίθενται σε κάθε σωλήνα με κύτταρα στόχους και επωάζονται για 1 ώρα στους 37°C. πλύνετε τα κύτταρα 3 φορές. το ίζημα επαναιωρείται και ρυθμίζεται σε συγκέντρωση 1x10 σε 1 ml (ζωντανό).

Η δοκιμή εφαρμόζεται σε μικροπλάκες με στρογγυλό πυθμένα. Για αυτό, 0,7 - 1x10 6 κύτταρα φονείς (0,1 ml) και 1x10 4 κύτταρα στόχοι (0,1 ml) κατανέμονται σε κάθε φρεάτιο. Ο συνολικός όγκος του εναιωρήματος σε κάθε φρεάτιο είναι 0,2 ml, 0,05 ml του μέσου προστίθενται σε κάθε φρεάτιο και επωάζεται (37°C) για 4 ώρες.

Οι πλάκες φυγοκεντρούνται στα 800 g σε φυγόκεντρο Beckman για 10 λεπτά. Το υπερκείμενο από κάθε φρεάτιο μεταφέρεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες και μετράται σε μετρητή γ.

Η φάση παραγωγής φονιάς (MLC) διεξάγεται σε μέσο RPMJ-1640 συμπληρωμένο με 20% ανθρώπινο πλάσμα. για τη φάση θανάτωσης, χρησιμοποιείται μέσο ΜΕΜ με την προσθήκη 20% ανθρώπινου πλάσματος, προθερμασμένου.

Άμεση ΧΜΛ (D-CML).Η άμεση ΧΜΛ είναι μια τεχνική που αναπτύχθηκε ειδικά για κλινικούς σκοπούς και έχει βρει χρήση στην ανοσολογική παρακολούθηση. Το σχήμα αυτής της αντίδρασης φαίνεται στο σχ. 13.

Η κύρια διαφορά από την παραδοσιακή ΧΜΛ είναι ότι το στάδιο του σχηματισμού φονέων (φάση ευαισθητοποίησης) δεν συμβαίνει in vitro, αλλά in vivo, δηλαδή στο ανθρώπινο σώμα που ευαισθητοποιείται με μεταμόσχευση αλλογενούς οργάνου ή ιστού. Λόγω της επίδρασης του αλλογενούς ιστού, τα λεμφοκύτταρα του λήπτη ευαισθητοποιούνται στα αντιγόνα των ιστών του δότη και δεν χρειάζονται ειδική in vitro θεραπεία, η διάρκεια της δοκιμής μειώνεται σημαντικά χρονικά, αφού πρώτα πρέπει να προετοιμαστούν μόνο οι στόχοι.

Οι στόχοι είναι λεμφοκύτταρα που λαμβάνονται από το περιφερικό αίμα ή, συνηθέστερα, από τη σπλήνα ενός δότη (βλ. 2.1.2) και καταψύχονται με οποιαδήποτε από τις μεθόδους που περιγράφονται παραπάνω (βλ. 2.1.3).

2.2.3. Κυτταροτοξικότητα μεσολαβούμενη από αντισώματα (ADCC)

Αυτός ο τύπος κυτταρικής απόκρισης είναι παρόμοιος σε μηχανισμό δράσης με τη CML που περιγράφηκε παραπάνω. Η αρχή της αντίδρασης φαίνεται στο σχ. 14. Τα συστατικά της αντίδρασης είναι κύτταρα-στόχοι (κύτταρα δότες ή αλλογενή λεμφοκύτταρα), ορός (αλλογενής ή λήπτης), που πιθανώς περιέχει αντισώματα που κατευθύνονται σε καθοριστικούς κυτταρικούς παράγοντες και κύτταρα τελεστές (λεμφοκύτταρα λήπτες ή αλλογενή λεμφοκύτταρα).

Δραστικά κύτταρα σε αυτόν τον τύπο αλληλεπίδρασης είναι τα λεγόμενα Κ-κύτταρα που βρίσκονται στο περιφερικό αίμα. Σε αντίθεση με τα φονικά κύτταρα στη ΧΜΛ, ασκούν κυτταροτοξική δράση χωρίς προηγούμενη ευαισθητοποίηση, ωστόσο, η εκδήλωση της κυτταροτοξικής δράσης των κυττάρων Κ είναι δυνατή μόνο μέσω αντισωμάτων που κατευθύνονται στους καθοριστικούς παράγοντες των κυττάρων-στόχων. Η ειδική λύση μετράται με την απελευθέρωση 51 Cr εάν ο ορός δοκιμής περιέχει αντισώματα στους καθοριστικούς παράγοντες στόχους.

Οι καθοριστικοί παράγοντες στόχοι στο ADCC μπορεί να είναι ειδικότητες σχεδόν όλων των θέσεων HLA, συμπεριλαμβανομένων των HLA-D, HLA-DR, καθώς και καθοριστικών παραγόντων εκτός του συστήματος HLA.

Πιο διαδεδομένοΑυτή η πολύπλοκη αντίδραση ελήφθη σε ανοσολογική παρακολούθηση για την ανίχνευση αντισωμάτων Β-κυττάρων. Από αυτή την άποψη, έχουν προταθεί αρκετές τροποποιήσεις, που περιλαμβάνουν εμπλουτισμό του εναιωρήματος των κυττάρων-στόχων με Β-λεμφοκύτταρα, προσρόφηση ορών σε αιμοπετάλια κ.λπ.

Επιπλέον, λαμβάνονται υπόψη μια σειρά από άλλα χαρακτηριστικά της απόκρισης σε αυτό το σύστημα. Ο ορός δοκιμής πρέπει να αποσυμπληρώνεται, διαφορετικά η αντίδραση μπορεί να εξελιχθεί ως κυτταροτοξικότητα που εξαρτάται από το συμπλήρωμα με τη μεσολάβηση αντισώματος. Θεωρείται επίσης ότι τα τελεστικά κύτταρα μπορούν να προκαλέσουν ορισμένη καταστροφή στόχων από τον τύπο CML.

Τελικά, ολόκληρο το σύνολο των δειγμάτων στη δοκιμή της εξαρτώμενης από αντίσωμα κυτταρικής λεμφοκυτταροτοξικότητας έχει ως εξής:

Στόχοι + τελεστές + δοκιμασμένος ορός (πειραματικό δείγμα).

Στόχοι (δείγμα ελέγχου, δηλ. αυθόρμητη απελευθέρωση 51 Cr).

Στόχοι + τελεστές (δοκιμή ελέγχου για δραστηριότητα τελεστή).

Στόχοι + ορός δοκιμής (έλεγχος ορού).

Τα λεμφοκύτταρα απομονώνονται με τον συνήθη τρόπο και επαναιωρούνται σε RPMI-1640 + 10% εμβρυϊκό βόειο ορό. επεξεργασία του εναιωρήματος με καρβονυλικό σίδηρο για την απομάκρυνση των μονοκυττάρων. Προσθέστε χλωριούχο αμμώνιο ή Η 2 Ο για λύση των υπόλοιπων ερυθροκυττάρων.

51 Cr προστίθεται στο εναιώρημα κυττάρων στόχου με τη μορφή διαλύματος Na 2 CrO 4 100 - 200 μCi ml (3,7x10 6 - 7,4x106 BK / ml) και επωάζεται για 40 - 60 λεπτά.

Τα κύτταρα πλένονται τρεις φορές σε RPMI + 0,1% HSA, επαναιωρούνται στο ίδιο μέσο και ρυθμίζονται σε 2x108 σε 1 ml. 50 μl του επισημασμένου αιωρήματος κυττάρων τοποθετούνται σε δοκιμαστικό σωλήνα και η ισοτοπική δραστηριότητα στη συνέχεια μετράται σε μετρητή γ για την ανίχνευση της πλήρους ισοτοπικής "πρόσληψης". Το υπόλοιπο ρίχνεται στα φρεάτια του δισκίου σε 50 μl εναιωρήματος (1x105 κύτταρα ανά φρεάτιο).

Το εναιώρημα κυττάρων-ενεργών φέρεται σε 2x107 κύτταρα σε 1 ml και μέσα. βάλτε 50 μl εναιωρήματος (ή 100 μl) σε κάθε φρεάτιο, αναλογία τελεστή προς στόχο 10:1 (ή 20:1).

Η επώαση διαρκεί 4 ώρες σε θερμοκοιτίδα υγρής ατμόσφαιρας με 5% CO 2 (η διάρκεια της επώασης μπορεί να παραταθεί έως και 8 ώρες).

Προετοιμάστε σε δοκιμαστικούς σωλήνες αρκετές αραιώσεις του ορού δοκιμής (1:25; 1:100) και προσθέστε στα φρεάτια έως και 50 μl από κάθε αραίωση: και μη αραιωμένο ορό. Η τελική ρύθμιση της δοκιμής φαίνεται όπως φαίνεται στον Πίνακα. 23.

Πίνακας 23

Ρύθμιση ADCC. Όλες οι επιλογές δειγμάτων, μl

* (Αντί για τον ορό δοκιμής, ενσταλάσσεται μια δεξαμενή ορών AV.)

** (Αντί για τον δοκιμαστικό ορό, ενσταλάζεται ένας μονοειδικός ορός HLA που στρέφεται εναντίον στόχων (όχι τελεστών).)

Τα πάνελ επωάζονται για 4 ώρες σε υγρή ατμόσφαιρα με 4% CO2. η διάρκεια της επώασης μπορεί να παραταθεί έως και 8 ώρες.

Μετά την επώαση, ο μισός όγκος από κάθε φρεάτιο (100 μl) αναρροφάται προσεκτικά με μια αυτόματη πιπέτα και τοποθετείται σε σωλήνες για μέτρηση 51 παλμών Cr. Η δραστηριότητα υπολογίζεται σε ένα γ-μετρητή.

Οι υπολογισμοί έχουν ως εξής:

% απελευθέρωση 51 Cr = 2 × A op - δραστηριότητα στο παρασκήνιο/B - δραστηριότητα παρασκηνίου × 100;

% κυτταροτοξικότητα = A op - A sp /100 - A sp × 100, όπου A op - % απελευθέρωση 51 Cr σε πειραματικά δείγματα. Και cn -% αυθόρμητη απελευθέρωση? Β - πλήρης αφομοίωση του ισοτόπου.

Πως θετικό αποτέλεσμαΛαμβάνεται υπόψη η κυτταροτοξικότητα 5% ή μεγαλύτερη μετά από 4 ώρες επώασης.