Хелминтологични методи. Тестване за ентеробиоза и тениоза
За откриване на фрагменти от хелминти, изпражненията се изследват с просто око, след това се смесват с вода и се изследват на малки порции в петриево блюдо на тъмен фон. Всички подозрителни частици се поставят върху предметно стъкло в капка вода и се изследват под лупа. Можете да поставите дневна порция в цилиндър с добавяне на 5-10 пъти количество вода. След разбъркване съдът се оставя до пълното утаяване на суспендираните частици. Повърхностен слойТечностите се отцеждат и се налива чиста вода. Измитата утайка се изследва на малки порции с просто око или под лупа. За откриване на яйца се използват микроскопски методи за изследване.
Метод нативна цитонамазка. Не голям бройизпражнения от различни местаТестовата порция се смила върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол, изотоничен разтвор на натриев хлорид или вода. Сместа се покрива с покривно стъкло и се гледа под микроскоп.
Плаващ метод на Fulleborn. Една част от изпражненията се смесва с 20 части наситен разтвор на натриев хлорид ( специфично тегло 1.18), добавен на малки порции. Едрите частици, които изплуват на повърхността, веднага се отстраняват и сместа се оставя за 45 минути. През това време яйцата на хелминтите, които имат по-ниско специфично тегло от разтвора на натриев хлорид, изплуват на повърхността. Повърхностният филм се отстранява с телена примка с диаметър около 1 cm и се прехвърля върху предметно стъкло за изследване под микроскоп.
Метод на Калантарян. Ефективността на плаващия метод се увеличава, когато натриевият хлорид се замени с наситен разтвор на натриев нитрат. В този случай сместа се държи 10-15 минути.
Повърхностният филм, образуван след утаяване на смес от изпражнения с разтвор на натриев хлорид или натриев нитрат, също може да бъде отстранен с предметно стъкло. За тази цел буркан, напълнен до ръба със смес от изпражнения и солен разтвор, се покрива с предметно стъкло, така че долната му повърхност да е в контакт с течността. След утаяване стъклото се отстранява и бързо се обръща нагоре с повърхността, върху която е разположен филмът, се изследва под микроскоп.
Остъргване на сперианални гънки (за идентифициране на яйца и онкосфери от острици говежда тения) правете сутрин преди да отидете до тоалетната. С помощта на дървена шпатула, напоена с вода или 50% разтвор на глицерин, изстържете около ануса. Полученият материал се прехвърля върху предметно стъкло в капка вода или 50% разтвор на глицерол и се гледа под микроскоп. Шпатулата може да бъде заменена с влажен памучен тампон, който се използва за избърсване на перианалната област, след което се изплаква добре с вода. Водата се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп.
Метод на Behrmann (за идентифициране на ларви). Метална мрежа с нанесени върху нея 5-6 g фекалии се фиксира върху стъклена фуния, поставена в статив. В долния край на фунията се поставя гумена тръба със скоба. Фунията се напълва с вода, загрята до t° 50°, така че Долна частмрежата, съдържаща изпражнения, влезе в контакт с водата. Ларвите активно се движат във водата и се натрупват в долната част на гумената тръба. След 4 часа течността се отцежда в центрофужни епруветки, центрофугира се и утайката се изследва под микроскоп.
Анализ на храчки, назална слуз и вагинално течениеза идентифициране на яйца на белодробния трематод paragonimus, ларви на кръгли червеи и анкилостоми, яйца на острици и фрагменти от ехинококов пикочен мехур. Частта от слуз (отделяне), която се изследва, се намазва върху стъкло и се разглежда макроскопски на черен и бял фон и след това под микроскоп. Можете да добавите 25% разтвор на антиформин към тестовия материал, да разклатите добре и да оставите за 1-1,5 часа, за да разтворите слузта. Сместа се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп.
Анализ на дуоденален и стомашен сок за откриване на яйца от чернодробни метили, анкилостоми и ларви на Strongyloides. И трите порции дуоденално съдържимо, получени с, се центрофугират и утайката се изследва под микроскоп. Те също проучват.
Изследване на тъкани. За да се идентифицират ларвите на Trichinella, парчета от биопсиран мускул внимателно се разделят на влакна, притискат се между компресорни стъкла (дебели стъкла с винтове) и се изследват под микроскоп на затъмнена светлина. За идентифициране на цистицерци мускулите се дисектират с дисекционни игли, изолираният везикул се изчиства от околната тъкан, притиска се между две предметни стъкла и се изследва под лупа.
Кръвен тест (за откриване на ларви на филарии). Разгледайте висящата капка върху покриващо стъкло, поръбено с вазелин. Можете да смесите 0,3 ml кръв с 10 пъти повече от 3% разтвор. Сместа се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп. За обогатяване на лекарства до 1 мл венозна кръвдобавете 3 ml 2% разтвор на формалин или 5 пъти количеството течност, състоящо се от 95 ml 5% разтвор на формалин, 5 ml оцетна киселинаи 2 ml концентриран алкохолен разтвор на хематоксилин. Сместа се центрофугира, утайката се промива с дестилирана вода и се изследва под микроскоп. За разграничаване различни видовефиляриите се изследват чрез петна, оцветени по метода на Гимза-Романовски.
Методи имунологична диагностика. Използват се и алергични диагностични тестове (виж) със съответния тип хелминти (аглутинация, фиксиране на комплемента).
Хелминтологични методиизследвания. Ориз. Яйца от хелминти. 1-10 - яйца кръгли червеи(нематоди): 1 - 3 - кръгли червеи (1 - оплодено яйце, 2 - оплодено яйце без белтък, 3 - неоплодено яйце); 4 - котешки кръгли червеи; 5 - месоядни кръгли червеи; 5 - острици; 7 - камшичен червей; 8 - томинкс; 9 - анкилостома; 10 - трихостронгилид. 11-15 - яйца тения(цестоди): 11 - говежда тения; 12 - джудже тения; 13 - плъх тения; 14 - тиквена тения; 15 широка лента. 16 - 24 - яйца на метили (трематоди): 16 - трематоди (шистозоми) японски; 17 - трематоди (шистозоми) урина - полови; 18 - трематоди (шистозоми) Munson; 19 - трематоди (парогонимус) белодробен; 20 - трематоди (описторхис) сибирски (котешки); 21 - трематоди (clonorchis) chinensis; 22 - чревни трематоди (метагонимус); 23 - трематоди (фасциоли) на черния дроб; 24 - трематоди (дикроцелий) ланцетни.
Ефективен и удобен метод за хелминтологично изследване е изследване на дебела цитонамазка по Kato, чиято същност е да се открият яйца на хелминти в дебела петна от изпражнения, изчистени с глицерин и оцветени с малахитово зелено. Състав на Като смес - 6 мл 3% воден разтвормалахитово зелено, 500 ml глицерин, 500 ml 6% разтвор на фенол. Разтворът е стабилен и може да се съхранява при стайна температура. За да се приготвят препаратите, парчета изпражнения с размер на грахово зърно се нанасят върху предметно стъкло, покриват се с филм от хидрофилен целофан, който се държи в сместа Kato за 24 часа и се притиска върху стъклото, за да равномерно разпределениематериал. Пречистените за 40-60 минути натривки се изследват под микроскоп. Откритите яйца на хелминти се преброяват и морфологични характеристикиопределя техния вид. Методът ви позволява да идентифицирате яйца от кръгли червеи, камшични червеи, цестоди, трематоди и в по-малка степен анкилостоми и джуджета.
Също така широко използван методи за обогатяване. Принципът на флотационните методи е да се суспендират изпражненията във физиологичен разтвор, който има по-висока относителна плътност в сравнение с яйцата на хелминтите, в резултат на което те изплуват на повърхността. Съдържанието на повърхностния филм се изследва под микроскоп. Като обогатителни смеси се използват следните разтвори: готварска сол - 400 g в 1 l вода (относителна плътност по Фулеборн -1,18); натриев нитрат - 1 кг в 1 л вода (относителна плътност по "Калантарян-1,38); натриева селитра - 900 г и калиев нитрат - 400 г в 1 л вода (относителна плътност по Брудастов и Краснонос-1,48). Приготвен разтворите се кипват и охлаждат.
За изследване добавете 5-10 g изпражнения в стъклена или фаянсова чаша, добавете към него 100-200 ml физиологичен разтвори разбъркайте старателно. След това плаващите големи частици се отстраняват с дървена шпатула или лъжичка от хартия или картон и незабавно върху повърхностния филм се нанася широко предметно стъкло, така че физиологичният разтвор и предметното стъкло да са в пълен контакт. След като сместа се остави да престои 30-40 минути, предметното стъкло се отстранява, поставя се под микроскоп с филма нагоре и цялата повърхност се изследва внимателно. За да избегнете изсушаване, можете да добавите 2-3 капки 50% разтвор на глицерин. Повърхностният филм може да се отстрани и с телена примка. Ефективността на флотационните методи се увеличава с увеличаване на относителната плътност на солевите разтвори. С помощта на тези методи е възможно да се открият яйца от нематоди, цестоди и трематоди.
За откриване на яйца в изпражненията се използва методът на утаяване на Красилников. Изпражненията се смесват с 1% разтвор на детергент ( прах за пране“Lotus” и др.) в съотношение 1:10 до образуване на суспензия. Под въздействието на детергента различни компоненти на изпражненията (протеини, мазнини, тъканни елементи) се разтварят. След 30 минути съдържанието на епруветката се разклаща за 1-2 минути, след което се центрофугира за 5 минути. От утайката се приготвят препарати, които се изследват под микроскоп.
IN полеви условия, както и по време на масови прегледи на населението за хелминтна инвазия, е удобно да се използва методът на дебелото намазка Като. IN стационарни условияПри изследване на пациенти е за предпочитане да се използват най-ефективните флотационни методи. При използване на тези методи по време на микроскопия е препоръчително да се преброят яйцата, намерени в препарата. Ако пробата или обемът, взет за изследване на изпражненията, е стандартизиран (например 1 чаена лъжица или супена лъжица) и постоянен равномерен обем на физиологичните разтвори, може грубо да се прецени интензивността на инвазиите. Това количествено отчитане може да бъде полезно за обосноваване на предписаното лечение и оценка на ефективността на обезпаразитяването. В допълнение, други по-точни количествени методи, по-специално методът на Stoll, могат да се използват за установяване на интензивността на инфекцията.
За диагностика на тениаринхоза и ентеробиозаИзползва се методът за изследване на перианално-ректални остъргвания. С дървена шпатула, напоена с 50% разтвор на глицерин, изстържете перианалните гънки сутрин преди дефекация в обиколката анусИ долни секцииректума. Полученият материал, почистен от шпатула с ръба на покривно стъкло, се поставя върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол, покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп. Може да се изследва и лента от целулозна лента, която първо се притиска с адхезивната страна към перинаралните гънки, след което се поставя върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп.
Откриване на ларви на нематоди в изпражненията по метода на Берман. Методът се основава на термотропното свойство на ларвите. За изследване вземете 1 супена лъжица изпражнения и ги поставете в метална мрежа или мрежа от няколко слоя марля върху телена рамка. Мрежата е монтирана във фуния, монтирана на статив. Към фунията е прикрепена гумена тръба със скоба. След повдигане на мрежата фунията се напълва с вода (температура +40°...+50°C), така че долната част на мрежата да е потопена във вода. Ларвите от изпражненията активно мигрират към топла водаи, утаявайки се, се натрупват в долната част на фунията. След 2-4 часа скобата се отваря, водата се източва в центрофужна епруветка и се центрофугира за 2-3 минути. След това супернатантната течност се отцежда, утайката се прехвърля върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп, където се откриват подвижни ларви на причинителя на стронгилоидозата.
Метод на Харада и Mori прави възможно разграничаването между ларвите на анкилостома и некатор. Ларвите на анкилостомите се култивират върху филтърна хартия. За целта върху ленти от филтърна хартия с размери 12Х1,5 см се нанасят 0,5 g пресни изпражнения, взети от болния не по-късно от 1 час след дефекацията, като двата края на лентата се оставят чисти. Единият край на лентата се потапя в епруветка, една четвърт от която се пълни с вода, а другият се захваща със запушалка. Епруветките се поставят в термостат при температура +26... + 28°C. Ларвите, които се развиват от яйцата, се спускат през филтърната хартия и се утаяват на дъното на епруветката. След 5-6 дни хартиената лента се отстранява и течността, останала в епруветката, се изследва под лупа или се центрофугира. Образуваната при центрофугирането утайка се изследва под светлинен микроскоп. При използване на тетраедрични стъклени буркани (с размери 15xxx7 cm) вместо епруветки, с 4 хартиени ленти, прикрепени към стените, ефективността на анализите се увеличава (G.M. Maruashvili et al., 1966).
Методи за изследване на шистозомиаза . Изследване на изпражнения - порция изпражнения се смесва с 250 мл вода, прецежда се през 3 пласта марля в коничен съд, който се пълни до горе с вода. След 30 минути течният слой се отцежда и към утайката се добавя прясна порция вода. Утайката се промива, докато се получи бистър супернатант и се изследва под микроскоп.
Метод на ларвоскопия - 20-25 g изпражнения се поставят в ерленмайерова колба със стъклена тръба, запоена отстрани, насочена нагоре, и се измиват вода от чешмата. След това колбата се покрива с тъмна хартия, оставяйки запоена стъклена тръба на светлина при температура +25...+30°C. Излюпените мирацидии се концентрират в менискуса в страничната тръба, където могат да се видят с лупа или с просто око. Изследване на урината - 100 ml урина, събрана между 10 и 14 часа, или дневна порция, се утаяват и след това се центрофугират при 1500 rpm. Получената утайка се нанася* върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп. СЗО препоръчва метод за филтриране на цялата проба от урина. След филтриране филтрите се обработват с формалдехид или се нагряват (за унищожаване на яйцата) и след това се навлажняват с воден разтвор на нинхидрин. В изсушени препарати яйчните ембриони придобиват лилав цвят.
Приложение на имунологични изследователските методи за диагностициране на шистозомиаза са свързани с трудности, тъй като възрастните шистозоми и техните яйца съдържат голям брой антигени, които причиняват имунни реакции, които не са видоспецифични (D. Bradley, 1979).
У нас за поставяне на имунологични реакции при хелминтоза се произвежда цяла линиястандартна диагностика. Практическа употребаимате алергии кожен тестза ехинококоза и алвеококоза, RLA с ехинококов антиген, RSC на студено, преципитационна реакция на студено в различни модификации (пръстеновидни утайки, утайки в епруветки или капиляри, които се поставят с антигени на трихинелоза, цистицеркоза и мигроаскариоза). Стандартните диагностични комплекти за извършване на горепосочените серологични реакции се произвеждат от предприятия, произвеждащи бактериални препарати. Производителят включва с произвежданите диагностични комплекти подробни инструкцииотносно правилата за съхранение, срока на годност на лекарството и инструкциите за употребата на съответните антигени с техниката на поставяне на реакцията.
IN последните годиниСписъкът на серологичните реакции, използвани за диагностициране на хелминтоза, се разшири значително. За тези цели се използват следните реакции: RIGA, индиректна имунофлуоресценция (RIF), имунодифузия в гел (RID), противоимуноелектрофореза (CIEF), CEMA. Тези реакции могат да се използват при аскариаза, токсокароза, трихинелоза, анкилостомоза, филариаза, ехинококоза и алвеококоза, описторхоза, шистозомиаза, парагонимиаза. За тези реакции обаче у нас не се издават стандартни диагностични тестове и не е регламентирана техниката за диагностицирането им. Отделни лаборатории, предимно научни, самостоятелно подготвят специфични антигени и ги използват в различни модификации. Описанието на тези методи е широко представено в литературата и не е строго унифицирано. Тълкуването на данните от имунологичния анализ трябва да се основава на изучаване на динамиката на имунния отговор, като се вземе предвид нивото на специфичност и чувствителност на всеки използван метод. серологична реакция. Ето защо при поставяне на диагноза, както и по време на сероепидемиологични изследвания на населението, е препоръчително да се използват няколко от най-чувствителните реакции. От тази гледна точка реакциите на VIEF и REMA, които се различават, се доказаха добре висока чувствителности доста висока специфичност (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negreanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978 и др.). Ефективността на REMA е тествана за амебиаза, лайшманиоза, трипанозомиаза и токсоплазмоза (G. A. Ermolin, 1980).
Глава III. Диагностика на хелминтоза и методи за хелминтологично изследване
Необходимо е да се изследват за хелминтиоза всички пациенти, кандидатстващи за медицински грижи, и особено пациенти, които се обръщат към педиатър, терапевт и невролог с оплаквания от странични ефекти стомашно-чревния тракт, нервна системаи с анемия. Ако лекарят не винаги може да използва лабораторни методи за изследване, тогава всеки медицински работник, който предоставя грижи в амбулаторна клиника или болница, е длъжен да интервюира пациента за изолирането на хелминти.
Ако има клинични показания, дадени в съответните глави, диагнозата трябва да се изясни с помощта на лабораторни методиизследвания за хелминтоза.
Поради преобладаването чревни хелминтиазинай велик практическо значениеима преглед на изпражненията.
Методи за изследване на изпражненията за хелминтиаза
Изпражненията се доставят в лабораторията в чист стъклен съд (около четвърт чаша изпражнения, взети от различни места в една порция); По време на рутинен преглед е разрешено да се доставят изпражнения в лабораторията в кибритени кутии или кутии за шини.
За контрол на обезпаразитяването се доставя цялата порция изпражнения, събрана след приложението (по предписание на лекаря). противоглистно средствои слабително (в големи затворени стъклени буркани, кофи).
Микроскопското изследване на изпражненията е основно при диагностицирането на чревни хелминтози; винаги трябва да се предхожда от общо макроскопско изследване на изпражненията за откриване на сегменти от големи цестоди, острици, кръгли червеи и др.
Изпражненията трябва да са пресни или консервирани (в 5% разтвор на формалдехид), тъй като сушенето драматично променя структурата на яйцата. Освен това, когато изпражненията стоят, бързо развитиеяйца на някои хелминти (например анкилостоми), което затруднява диагнозата.
Съгласно инструкциите на Министерството на здравеопазването на СССР е необходимо едновременно да се изследват изпражненията по метода на Фулеборн и нативната цитонамазка.
Нативна цитонамазка
Нативна цитонамазка: малко парче фецес (с големината на грахово зърно), взето с кибрит, стъклена или дървена клечка от различни места в доставената порция, се стрива старателно върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол или в солен разтвор или във вода. Покрийте с покривно стъкло, като го натиснете леко (с дисекционна игла). Намазката трябва да е тънка, прозрачна и еднородна. Използва се само като допълнение към други методи, които осигуряват обогатяване на лекарството. Най-малко две лекарства трябва да бъдат прегледани.
За откриване на ларви на хелминти (както и техните яйца) се прави нативна цитонамазка по следния начин (по Шулман): 2-3 g изпражнения се разбъркват старателно, като стъклена пръчица се "завърта" в емулсия с пет- кратно количество чиста вода или физиологичен разтвор. По време на разбъркване ларвите се натрупват близо до стъклената пръчица, така че веднага след края на разбъркването една капка от емулсията бързо се прехвърля със стъклена пръчка върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се изследва. С. Д. Любченко (1936) доказва, че методът на усукване е по-ефективен от метода на намазката, особено по отношение на яйцата на аскаридите. Въз основа на работата на С. Д. Любченко считаме за препоръчително да заменим метода на намазката с метода на усукване.
Метод на Фуллеборн
Метод на Фуллеборн: 5-10 g изпражнения, взети от различни места, се поставят в буркан с вместимост 50-100 ml и се стриват старателно със стъклена или дървена клечка в наситен разтвор. трапезна сол(400 g от тази сол се разтварят в 1 l вода, загрява се до кипене и се прецежда през слой памук или марля; разтворът се използва студен: плътност 1,2). Разтворът се добавя постепенно до получаване на еднородна суспензия, като общото количество добавен разтвор трябва да бъде приблизително 20 пъти повече количествоизпражнения. За смесване на изпражненията Fulleborn препоръчва използването на чаши за чай, но е по-удобно да се приготви суспензия в буркани с мехлем с вместимост 50-100 ml, като се използват два буркана за всеки анализ (или в чаши с вместимост 100 ml).
Веднага след приготвяне на суспензията, големите частици, изплували на повърхността, се отстраняват от повърхността с помощта на шпатула, метална лъжичка или парче чиста хартия ( растителни образувания, остатъци от несмляна храна и др.), след което сместа се оставя да престои 1-1,5 часа. След това време целият филм се отстранява от повърхността на сместа чрез докосване на тел или платинен контур (плосък) с диаметър не повече от 1 см, огънат под прав ъгъл; Филмът се разклаща върху предметно стъкло и се покрива с покривно стъкло. Поставете 3-4 капки под всяко покривно стъкло (18x18 mm). Общо трябва да се приготвят поне 4 препарата (по едно покривно стъкло за всеки препарат). Примката се нагрява на огън и се измива с вода след всеки анализ.
С помощта на метода на Фулеборн бързо и лесно се откриват яйца на всички нематоди (с изключение на неоплодените яйца на аскариди) и яйца на тения джудже.
Методът на Берман се използва за изследване на изпражненията за ларви на хелминти (за стронгилоидоза). Този метод е следният: 5 g изпражнения върху метална мрежа (за целта е удобна цедка за мляко) се поставят върху стъклена фуния, закрепена на статив. В долния край на фунията се поставя гумена тръба със скоба.
Мрежата с изпражненията се повдига и във фунията се налива вода, загрята до около 50 °, така че долната част на мрежата с изпражнения да се потопи във вода. Ларвите активно се движат във водата и се натрупват в долната част на гумената тръба. След 2-4 часа скобата се отваря и течността се източва в една или две центрофужни епруветки.
След центрофугиране за 1-2 минути горна часттечността се отцежда бързо и утайката се поставя на капки върху предметни стъкла и се изследва под покривни стъкла или се разстила тънък слойвърху 2-3 големи стъкла и след това прегледайте без покривни стъкла.
Методът на Берман също се използва за изследване на почвата за наличие на ларви на анкилостоми.
Метод на Стол
Методът Stoll се използва за определяне на интензивността на инвазията. Децинормален разтвор на сода каустик се излива в специална стъклена колба до марката 56 cm 3 и след това се добавят изпражнения, докато нивото на течността достигне 60 cm 3, т.е. 4 cm 3. След разклащане със стъклени перли се взема 0,075 ml от сместа за изследване и се изследва под едно или две обикновени покривни стъкла. Полученото количество се умножава по 200, за да се получи броят на яйцата, съдържащи се в 1 cm 3 изпражнения.
Изследване на съдържанието на дванадесетопръстника
Дуоденалният сок и жлъчката от пикочния мехур, получени по обичайния начин чрез сондиране (и жлъчката от пикочния мехур и след рефлекс от жлъчния мехур), се смесват старателно с равен обем етилов етер; сместа се центрофугира, след което утайката се изследва под микроскоп. В допълнение към утайката, микроскопско изследванелюспите, плаващи в течността, които могат да съдържат яйца от хелминти, задължително се излагат. Когато изследвате стомашния сок и повърнатото за яйца на хелминти, можете да използвате същата техника.
Изследване на дуоденален сок и стомашно съдържимо трябва да се извърши при съмнение за хелминтни заболяваниячерен дроб, жлъчен мехур (описторхоза, фасциолиаза, дикроцелиоза) и дванадесетопръстника(стронгилоидоза).
Изследване на храчки
Храчките се стриват върху стъклена пластина, плътно се покриват с друга стъклена пластина и се изследват с невъоръжено око на светъл и черен фон, както и под лупа в пропускаща светлина. Отделни парчета храчки („ръждиви“ натрупвания, остатъци от тъкани и др.) се нанасят в тънък слой върху предметно стъкло, плътно се покриват с покривно стъкло и се изследват при ниски и голямо увеличениемикроскоп
а) За диагностициране на кожна цистицеркоза, подкожна тъканили мускул, асептично изрязано парче от съответната тъкан се изследва първо с просто око. Участъци от тъкан се раздалечават с помощта на дисекционни игли, за да се разкрият видими с просто оковезикула - цистицерк (снимка А); дължината му е 6-20 мм, ширината 5-10 мм. При откриване на везикула, съмнителна за цистицерк, тя се раздробява между две предметни стъкла и се изследва под микроскоп. Cysticercus (Cistycercus cellulosae) се определя от наличието на сколекс с четири издънки и венче от куки (снимка B).
| снимка.А - цистицерки със сколекс, обърнат навън; Б - Глава на свинска тения. | |
 |
 |
б) За диагностициране на трихинелоза, асептично изрязано парче мускул (бицепс или гастрокнемиус) внимателно се раздробява в 50% разтвор на глицерин в най-фините влакна с помощта на дисекционни игли. Смачканите мускули се притискат между две предметни стъкла и се изследват под микроскоп с ниска мощност в затъмнено зрително поле. Препоръчително е да се изследват мускулите за трихинелоза не по-рано от 8-ия ден от заболяването. Ларвите на трихинелата се намират в мускулите в навито положение: те са затворени в капсули с форма на лимон.
| снимка.А - ларви на трихинела в мускулите; Б — Калцирани капсули от трихинела. | |
 |
 |
Рентгенов
Най-често флуороскопията се използва за диагностициране на ехинококоза и по-рядко цистицеркоза. Цистицерките се откриват чрез флуороскопия само след калцификация (в случаите дългосрочно заболяване). През последните години флуороскопията също се използва за диагностициране на аскариаза както в ранния ларвен стадий, така и отчасти в чревния стадий.
По време на периода на миграция на ларвите на кръгли червеи (и анкилостоми) в белите дробове се откриват нестабилни, понякога множество възпалителни огнища; в същото време се появява значителна еозинофилия в кръвта.
Полово зрелите кръгли червеи са ясно видими при флуороскопия на червата на засегнатите индивиди. Този метод, въпреки неговата сложност и тромавост, трябва да се използва като допълнителен метод за диагностициране на аскаридоза в случаи с отрицателен скатологичен анализ. Според E. S. Geselevich, от 180 пациенти с аскариаза, идентифицирани чрез флуороскопия, 54 не са намерили яйца от ascaris в изпражненията (виж).
Хелминтологични методи за изследване. Методите за диагностициране на хелминтни инфекции се разделят на директни, базирани на директно откриване на самите хелминти или техни фрагменти, както и на ларви и яйца на хелминти (методи за изследване на изпражнения, урина, жлъчка и дуоденално съдържание, храчки, кръв и тъкани, материал получени чрез изстъргване от перианалната област и поднокътните пространства), и индиректни, с помощта на които разкриват вторични промени, възникващи в човешкото тяло в резултат на жизнената дейност на хелминти (изследвания на морфологичния състав на кръвта, имунологични методидиагностика на хелминтози, рентгенови изследвания и др.). От директните методи най-разпространени са скатологичните, които се делят на макро- и микрохелминтоскопски. В някои случаи се използват специални методи.
Макрохелмитоскопски методи на изследваненасочени към търсене на хелминти или техни фрагменти (сколекси, сегменти, части от стробили на цестоди). Те се използват за диагностициране на тези хелминтози, при които яйцата не се екскретират в екскрементите на пациента или се екскретират в малки количества и не винаги (например при ентеробиоза, острици се откриват в изпражненията, при тениаза - сегменти).
За да се открият острици или цестодни сегменти в изпражненията, изпражненията се изследват с просто око. За диференциална диагноза Taeniasis, се препоръчва да се гледат изпражненията, разредени с вода, на отделни малки порции в черни фотографски кювети или в панички на Петри на тъмен фон. Големи образувания, съмнителни за фрагменти от хелминти, се изследват под лупа между две предметни стъкла. Ако според клинични показанияпредполагат откриване на малки хелминти или глави на цестоди след третиране, след това подозрителните частици се изследват под лупа в капка глицерин и, ако е необходимо, под микроскоп.
Микрохелминтоскопски методи на изследване(качествени) са насочени към идентифициране на яйца и ларви на хелминти. Използва се методът на дебелото намазване с целофаново покритие по Kato. Като сместа се състои от 6 мл 3% воден разтвор на малахитово зелено, 500 млглицерин и 500 мл 6% разтвор на фенол. Kato плочи (хидрофилен целофан се нарязва на парчета с размери 20´ 40 мм) потопен за 24 чв сместа Като, така че да са съседни една на друга (3-5 мл Kato разтвор на 100 плаки). 100 мгизпражненията се нанасят върху предметно стъкло, покриват се с целофаново покритие според Като и се притискат надолу, така че изпражненията да се размажат върху предметното стъкло в рамките на целофановата пластина. Намазката се оставя на стайна температура да изсветли с 40-50 мин.,и след това се изследва под микроскоп. В горещия сезон, за да предотвратите изсъхването на препарата, поставете влажна гъба върху чинията на приготвения препарат.
За пълно откриване на хелминти от всички видове трябва да се използва методът за дебело натриване Kato с целофаново покритие в комбинация с един от методите за обогатяване. Най-често срещаните от тях са методът на Калантарян и методът на Фулеборн.
Метод на Калантарян: в бутилки с широко гърло с обем 100 бр млразбъркайте старателно със стъклена пръчка 5 Жизпражнения, като постепенно се добавя наситен разтвор на натриев нитрат (1 килограманатриев нитрат на 1 лвода при кипене) до ръба на чашата. Едрите частици, които изплуват на повърхността, се отстраняват с хартиена лъжичка. Предметно стъкло се поставя върху повърхността на физиологичния разтвор (физиологичният разтвор се добавя, докато сместа влезе в пълен контакт с предметното стъкло). През 20-30г минслайдът се отстранява и филмът се изследва под микроскоп. При липса на тази сол можете да използвате наситен разтвор на готварска сол според Fholleborn (400 Жсол в 1 лвряща вода).
Поради факта, че яйца с голямо специфично тегло (неоплодени яйца на кръгли червеи, яйца на трематоди и големи цестоди) не плават, освен изследване на повърхностния слой на течността, при използване на метода на Фуллеборн е необходимо да се изследва 2-4 препарата от утайката под микроскоп.
Специални лабораторни методи за изследване на различни хелминтози.
7.7. Методи за определяне на жизнеспособността на яйца и ларви на хелминти
Жизнеспособността на яйцата на хелминтите се определя от външен вид, чрез оцветяване с витални бои, отглеждане в оптимални условияи създаване на биологична проба.
7.7.1. Определяне на жизнеспособността на яйца или ларви на хелминти по външен видЯйцата на хелминтите се микроскопират първо при ниско, след това при голямо увеличение. При деформирани и мъртви яйца на хелминти черупката е разкъсана или огъната навътре, плазмата е мътна и разхлабена. Сегментираните яйца имат раздробяващи топки (бластомери) с различен размер, неправилна форма, често изместени към един полюс. Понякога има анормални яйца, които въпреки външните деформации се развиват нормално. В живите ларви на кръгли червеи фината грануларност присъства само в средната част на тялото; докато умират, тя се разпространява по цялото тяло, появяват се големи блестящи хиалинови вакуоли, така наречените „низи от перли“.
За да определите жизнеспособността на зрели яйца на кръгли червеи, камшични червеи и острици, трябва да се обадите активни движенияларви чрез леко нагряване на препарата (до температура не по-висока от 37 °C). По-удобно е да се наблюдава жизнеспособността на ларвите на аскариди и червеи след изолирането им от черупката на яйцето чрез натискане върху покривното стъкло на препарата с дисекционна игла или пинсети.
При инвазивните ларви на кръгли червеи често се вижда обвивка, която се отлепва в края на главата, а при ларвите на камшичен червей, които са завършили развитието си в яйцето, на това място се открива стилет при голямо увеличение. При мъртвите ларви на хелминти, независимо от тяхното местоположение (в яйцето или извън него), се забелязва разпадане на тялото. В този случай вътрешната структура на ларвата става блокова или гранулирана, а тялото става мътна и непрозрачна. В тялото се намират вакуоли, а на кутикулата се откриват счупвания.
Жизнеспособността на тениидните онкосфери (говежда, свинска тения и др.) се определя от движението на ембрионите, когато са изложени на тях храносмилателни ензими. Яйцата се поставят върху часовниково стъкло със стомашен сок на кучето или изкуствен дуоденален сок. Съставът на последния: панкреатин - 0,5 g, натриев бикарбонат - 0,09 g, дестилирана вода - 5 ml. Часовникови стъкла с яйца се поставят в термостат при 36 - 38°С за 4 часа. В този случай живите ембриони се освобождават от мембраните си. Обвивките на живите онкосфери също се разтварят в подкиселен пепсин и в алкален разтвортрипсин след 6 - 8 часа в термостат при 38 ° C.
Ако поставите яйца на тенииди в 1% разтвор на натриев сулфид или 20% разтвор на натриев хипохлорид, или в 1% разтвор на хлорирана вода при 36 - 38 °C, зрелите и живи ембриони се освобождават от мембраните и не промяна за 1 ден. Незрелите и мъртви онкосфери се свиват или набъбват и се уголемяват рязко и след това се „разтварят“ в рамките на 10 минути до 2 часа. Живите ембриони на тенидите също се движат активно в смес от 1% разтвор на натриев хлорид, 0,5% разтвор на натриев бикарбонат и жлъчка при 36 - 38 °C.
Жизнеспособността на Adolescaria fascioli, събрана върху растения и други обекти от водни обекти, се проверява чрез изследването им върху предметно стъкло във физиологичен разтвор под микроскоп с нагряващ етап. Когато ларвите на трематодите се нагреят, те започват да се движат.
За да се определи жизнеспособността на яйцата на тения джудже, най-простият метод е на N.S. Ionina: в живите яйца средната двойка ембрионални куки е или успоредна на страничните, или последните образуват ъгъл с медианата в основата по-малък от 45°. В мъртвите яйца страничните двойки образуват ъгъл със средната двойка в основата от повече от 45° или куките са произволно разпръснати (подреждането им по двойки се губи); Понякога ембрионът се свива и се образуват гранули. По-точен метод се основава на появата на движения на онкосферата по време на рязка промяна на температурата: от 5 - 10 ° до 38 - 40 ° C.
Определянето на жизнеспособността на незрели яйца на нематоди трябва да се изследва във влажна камера (блюда на Петри), като яйцата на кръглите червеи се поставят в 3% разтвор на формалдехид, приготвен в изотоничен разтвор на натриев хлорид при температура 24 - 30 ° C, яйцата на червеите в 3% разтвор на солна киселинапри температура 30 - 35 °C; яйца на острици в изотоничен разтвор на натриев хлорид при температура 37 °C. Петриевите панички трябва да се отварят 1-2 пъти седмично за по-добра аерация и филтърната хартия трябва да се намокри отново чиста вода.
Наблюденията за развитието на яйцата на хелминтите се извършват най-малко 2 пъти седмично. Липсата на признаци на развитие в рамките на 2-3 месеца показва тяхната нежизнеспособност. Признаци за развитието на яйца от хелминти са първите етапи на раздробяване, разделяне на съдържанието на яйцето на отделни бластомери. През първите дни се развиват до 16 бластомера, които преминават във втори стадий - морула и т.н.
Яйцата на анкилостомите се култивират в стъклен цилиндър (висок 50 cm и диаметър 7 cm), затворен със запушалка. Смес от равни обемистерилен пясък, дървени въглищаи изпражненията с яйца от анкилостоми, разредени с вода до полутечна консистенция, внимателно се изсипват върху дъното на цилиндъра с помощта на стъклена тръба. По време на 1 - 2 дни утаяване на тъмно при температура 25 - 30 ° C, рабдитиформните ларви се излюпват от яйцата и след 5 - 7 дни те стават филариформени: ларвите пълзят нагоре по стените на цилиндъра, където се намират видими дори с невъоръжено око.
Яйцата на трематоди, които естествено се развиват във вода, например opisthorchis, diphyllobothriidae, fasciolae и други, се поставят върху часовниково стъкло, петриево блюдо или друг съд и се излива малък слой обикновена вода. При култивирането на яйцата на Fasciola трябва да се има предвид, че те се развиват по-бързо на тъмно, докато в живите яйца при температура 22 - 24 ° C мирацидият се образува за 9 - 12 дни. При микроскопиране на развиващите се яйца на трематоди движенията на мирацидиума са ясно видими. Miracidium fasciola излиза от черупката на яйцето само на светлина.
Метод на Фуллеборн. Ларвите на анкилостомата и стронгилида се култивират върху агар в петриево блюдо с животински въглен. След задържане в термостат при температура 25 - 30 ° C в продължение на 5 - 6 часа, ларвите пълзят по агара, оставяйки след себе си пътека от бактерии.
Метод Харада и Мори. Добавете 7 ml дестилирана вода към епруветките, поставени в стойка. С помощта на дървена пръчка се вземат 0,5 g изпражнения и се прави петно върху филтърна хартия (15 х 150 mm) на 5 cm от левия ръб (тази операция се извършва върху лист хартия, за да се предпази повърхността на лабораторната маса). След това лентата с цитонамазката се вкарва в епруветката така, че левият край, свободен от цитонамазката, да стига до дъното на епруветката. Покрийте горния край с парче целофан и го увийте плътно с ластик. Върху епруветката се изписват номерът и фамилията на изследваното лице. В това състояние епруветките се съхраняват 8 - 10 дни при температура 28 °С. За да изследвате ларвите, отстранете целофановото покритие и отстранете лента от филтърна хартия с пинсети. Трябва да се внимава, когато се прави това, тъй като малък брой инфекциозни ларви могат да се преместят в горния край на филтърната хартия или отстрани на тръбата и да проникнат под повърхността на целофана.
Епруветките се поставят в горещо водна баняпри температура 50 ° C за 15 минути, след което съдържанието им се разклаща и бързо се излива в 15 ml епруветка за утаяване на ларвите. След центрофугиране супернатантата се отстранява и утайката се прехвърля върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп при слабо увеличение.
За диференциална диагнозафилариформни ларви, трябва да използвате данните в таблица 3.
Таблица 3
ДИФЕРЕНЦИАЛНА ДИАГНОСТИКА НА ФИЛАРИОИДНИ ЛАРВИ НА A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, TRICHOStrONGYLUS SP.
| Ларви | Размери | Характерни признаци |
| A. duodenale | Дължина на тялото около 660 µm, дължина на обвивката - 720 nm | Набраздяването на капачката е по-слабо изразено, оралната изпъкналост е по-малко забележима, предният край на тялото (но не и капачката) е тъп, диаметърът на чревната тръба е по-малък от луковицата на хранопровода, каудалният край е тъп |
| N. americanus | Дължина на тялото около 590 микрона, дължина на обвивката - 660 nm | Шапката е забележимо набраздена, особено в опашната част на тялото, устната издатина изглежда тъмна, предният край на тялото (но не и капачката) е заоблен като тесен край кокоше яйце, предната част на чревната тръба има същия диаметър като луковицата на хранопровода, опашният край е остро заострен |
| S. stercoralis | Дължина на тялото около 500 микрона | Ларвата е без обвивка, хранопроводът е около половината от дължината на тялото, опашката е тъпа или разклонена |
| Trichostrongylus sp. | Дължина на тялото около 750 µm | Чревният лумен не е прав, а зигзагообразен, опашният край е заоблен и оформен като копче |
Мъртвите тъкани в повечето случаи възприемат боите по-бързо от живите. Тези характеристики се използват в хелминтологията за определяне на жизнеспособността на яйцата и ларвите на хелминтите. В някои случаи обаче някои бои се възприемат по-добре от живите тъкани, отколкото от мъртвите.
За разграничаване на живи от мъртви яйца и ларви се използват следните бои и методи.
Leukobase метиленово синьо често се използва за оцветяване на живи и мъртви тъкани. Жива клеткаили тъканта редуцира метиленово синьо в безцветна левкобаза, мъртвата тъкан няма тази способност, така че придобива цвят.
Критерият за състоянието на едно яйце е оцветяването на ембриона, но не и черупката. Тази способност е свързана с условията, при които яйцеклетката умира. В случаите, когато фиброзната мембрана в мъртво яйце не губи своите полупропускливи свойства, тя няма да позволи на багрилата да преминат през нея и следователно мъртвият ембрион няма да бъде оцветен. Оцветеният ембрион винаги показва смъртта на яйцето.
За оцветяване на яйца от кръгли червеи можете да използвате метиленово синьо в разтвор на млечна киселина с каустик алкали (0,05 g метиленово синьо, 0,5 g натриев хидроксид, 15 ml млечна киселина). Живите яйца не възприемат цвят; са боядисани в Син цвятембриони от мъртви яйца. Оцветяването на ларви на кръгли червеи с основен разтвор на брилянтно-крезил синя боя в концентрация 1: 10 000 се извършва, както следва: капка течност с яйца на кръгли червеи и капка основен разтвор на боя се нанасят върху предметно стъкло. Препаратът се покрива с покривно стъкло, което се притиска плътно към предметното стъкло при леко почукване с дисекционна игла. Броят на появяващите се ларви и степента на тяхното оцветяване се наблюдават под микроскоп; след което същото лекарство се изследва отново след 2 - 3 часа. Само недеформирани ларви, които не са оцветени в продължение на 2 часа, се считат за живи. Мъртвите ларви или не излизат от яйцата, или се оцветяват, когато черупката се счупи (частично или напълно).
При определяне на жизнеспособността на яйца от птичи аскариди е възможно препаратите да се оцветят с 5% алкохолен разтворЙода. При нанасяне върху препарата зародишите на мъртвите яйца на Ascaridia стават за 1 - 3 секунди. са боядисани в оранжево.
Мъртвите яйца на описторхиса и онкосферите на говежди тения се оцветяват с разтвор на толуидиново синьо (1:1000), а мъртвите онкосфери на говежди тения с разтвор на брилянтно крезилово синьо (1:10000). В същото време ембрионите и черупките на мъртвите и живите яйца придобиват цвят. Следователно, след оцветяване, яйцата и онкосферите се измиват чиста водаи допълнително ги оцветете със сафранин (разреден 1:10000 в алкохол 10 °C). Алкохолът премахва боята от черупките, а сафранинът ги оцветява в червено. В резултат на това живите яйца стават червени; яйцата с мъртви ембриони стават сини, но черупката остава червена. Мъртвите ембриони на онкосфери от говежда тения бързо, в рамките на няколко минути, стават яркочервени или розов цвятсафранин или синьо брилянтно крезил синьо в разреждане 1:4000, или индигокармин в разреждане 1:1000 - 1:2000. Живите ембриони не се променят под въздействието на тези бои дори след 2 - 7 часа.
За да се определи жизнеспособността на яйцата на тения джудже, се препоръчва използването на следните бои:
1. Brilliantcreasyl blue (1:8000) - след 1 час онкосферата на мъртвите яйца става особено ярко оцветена, което се откроява рязко на бледия или безцветен фон на останалата част от яйцеклетката.
2. Сафранин (1:8000 при експозиция за 2 часа и 1:5000 за 3 - 5 часа).
3. 50% разтвор на пирогалова киселина в разреждане 1: 2 - при излагане в продължение на 1 час при температура 29 - 30 ° C (колкото по-ниска е температурата, толкова по-дълъг е процесът на боядисване).
7.7.3. Луминесцентен метод за изследване на яйца и ларви на хелминтиФлуоресцентната микроскопия позволява да се прави разлика между живи и мъртви обекти, без да се повреди яйцето. Не се използва за флуоресценция ултравиолетови лъчи, и синьо-виолетовата част на видимата светлина, с конвенционален микроскоп и предметни стъкла; добавен към осветителя OI-18 специален комплектцветни филтри.
Живите и мъртвите яйца на кръгли червеи, острици, тении джуджета, говежди тении, широки тении и други хелминти флуоресцират по различен начин. Това явление се наблюдава както по време на първична луминесценция без използване на багрила, така и при оцветяване с флуорохроми (акридин оранжево, корифосфин, примулин, ауролин, берлерин сулфат, трипафлавин, риванол, акрин и др.).
Неоцветени, живи, несегментирани яйца на кръгли червеи светят ярко зелено с жълтеникав оттенък; в мъртвите яйца черупката излъчва зелена светлинамного по-ярка от тъмнозелената ембрионална част; При яйцата на кръглите червеи с ларва се появява само черупката, а при мъртвите яйца и черупката, и ларвата са ярко жълти.
Непигментираните и несегментираните живи яйца от острици и джуджета тения излъчват зеленикаво-жълта светлина; черупката на мъртвите яйца интензивно свети на фона на тъмнозелена ембрионална маса.
С вторична луминесценция (при оцветяване с акридиново оранжево в разреждане 1: 10 000 и 1: 50 000 от 30 минути до 2 часа) черупката на живи и мъртви нематоди, трематоди и цестоди луминесцира по различен начин.
Черупките на живи и мъртви яйца на кръгли червеи, токсокари, острици, тении джуджета, тении на плъхове, тении и тении са оцветени в оранжево-червено. Ембрионите на живи яйца на кръгли червеи, токсаскариси, тении на плъхове, широки тении и онкосфери на говежди тении флуоресцират в матово тъмнозелено или сиво-зелен цвят. Мъртвите ембрионални яйца на тези хелминти излъчват "горящ" оранжево-червен цвят. Живите ларви на острици и токсокара (освободени яйчни черупки) излъчват матова сиво-зелена светлина; когато умрат, цветът се променя от края на главата до „горящо“ светлозелено, след това жълто, оранжево и накрая ярко оранжево.
При оцветяване с флуорохроми - корифосфилум, примулин, мъртвите яйца на кръгли червеи и камшични червеи показват блясък от лилаво-жълто до медно-червено. Жизнеспособните яйца не луминесцират, но са оцветени тъмно зелен цвят.
Живите яйца на трематодите (paragonimus и clonorchis) не луминесцират, когато се оцветят с акридиново оранжево, но мъртвите яйца произвеждат жълтеникаво-зелен цвят.
Методът на луминесценция може да се използва и за определяне на жизнеспособността на ларвите на хелминтите. По този начин ларвите на стронгилат и рабдитатус, флуорохромирани с разтвор на акридиново оранжево (1: 2000), светят: живи - зелени (с оттенък), мъртви - с ярко оранжева светлина.
Живите мирацидии, излизащи от черупката, излъчват слаба синкава светлина с едва забележимо светло жълто венче от реснички, но 10 - 15 минути след смъртта те се появяват с ярка „горяща“ светлозелена, а след това оранжево-червена светлина.
7.7.4. Метод на биологични пробиНапример, за да се определи жизнеспособността на яйцата от аскариди (свински аскариди, човешки аскариди, токсокара, токсаскарис и др.) на животно (морски свинчета, мишки) са необходими поне 100 - 300 яйца с развити ларви. Яйцата Ascaris в изотоничен разтвор на натриев хлорид се пипетират през устата на мишка или морско свинче. След 6-7 дни животното се заколва, черният дроб и белите му дробове се отварят и се изследват отделно за наличие на ларви на аскаридата. За да направите това, черният дроб и белите дробове се нарязват на малки парченца с ножица и се изследват по метода на Берман или Супряга (точка 6.1.2).
Ако животните са били заразени с живи инвазивни яйца, тогава при аутопсия в черния дроб и белите дробове се откриват мигриращи ларви на аскариди.
В случай на инфекция, яйцата на Fasciola в изпражненията на лабораторни животни могат да бъдат открити при зайци след 2 месеца, в морски свинчета- след 50 дни, при мишки - след 35 - 40 дни.
За по-бързо получаване на отговор лабораторните животни се отварят след 20 - 30 дни и черният дроб се изследва за наличие на млади фасциоли.
За да се определи жизнеспособността на яйцата на тения джудже, се препоръчва също така да се хранят с тях неинфектирани преди това бели мишки, последвано от отваряне на животните след 92-96 часа и идентифициране на цистицеркоиди в чревните въси или цестоди в чревния лумен.
За определяне на жизнеспособността на яйцата на описторхиса се препоръчва метод (German S.M., Baer S.A., 1984), базиран на физикохимичното активиране на жлезата за люпене на мирацидиум и стимулация двигателна активностларви, което води до отваряне на капачката на яйцето и активно освобождаване на мирацидий при експериментални условия.
Суспензията от яйца на opisthorchis във вода се охлажда предварително до 10 - 12 ° C (всички последващи операции се извършват при стайна температура 19 - 20 ° C). 1 капка суспензия, съдържаща 100 - 150 яйца, се добавя към центрофужна епруветка. Епруветката се поставя в поставка за 5 - 10 минути. През това време всички яйца успяват да потънат на дъното. След това излишната вода внимателно се изсмуква с лента от филтърна хартия и в епруветката се добавят 2 капки специална среда. Средата се приготвя в 0.005 М Tris-HCl буфер; 12 - 13% разтвор на етанол и багрило (фуксин, сафранин, еозин, метиленово синьо и др.) се добавят към буфера. Епруветката се разклаща, съдържанието й се пипетира върху предметно стъкло и се оставя за 10 минути при леко разклащане. След това добавете 2 капки от посочената среда. Препаратът е готов за микроскопиране под конвенционален светлинен микроскоп при 20x увеличение.
През това време капакът на жизнеспособните ларви се отваря и мирацидиумът активно излиза в определената среда. Благодарение на наличието на етанол в него, те се обездвижват след 2 - 5 минути и след това се боядисват с боя. Те могат лесно да бъдат открити и преброени чрез микроскопия.
