رنگ و شفافیت محیط نهایی. واکنش زنجیره ای اورانیوم و واکنش زنجیره ای احساسات

119. واکنش های پاندی و نونه - آپلت

به عنوان یک معرف برای انجام واکنش پاندی، از مایع شفاف رویی استفاده می شود که با تکان دادن شدید 100 گرم اسید کربولیک مایع با 1000 میلی لیتر آب مقطر به دست می آید. برای به دست آوردن رسوب و مایع شفاف(معرف)، این مخلوط ابتدا به مدت 3-4 ساعت در ترموستات قرار می گیرد و سپس به مدت 2-3 روز در دمای اتاق نگهداری می شود.

یک لیوان ساعت یا شیشه کشویی روی کاغذ تیره قرار داده می شود و 2-3 قطره از معرف روی آن ریخته می شود و سپس 1 قطره مایع مغزی نخاعی. اگر قطره کدر شود یا کدورت نخ مانند در امتداد حاشیه آن ظاهر شود، واکنش مثبت در نظر گرفته می شود.

برای انجام واکنش Nonne-Apelt، به لوله های آزمایش تمیز، محلول سولفات آمونیوم اشباع، آب مقطر و کاغذ تیره نیاز دارید. محلول اشباع سولفات آمونیوم تهیه می شود به روش زیر: 0.5 گرم از سولفات آمونیوم خنثی خالص شیمیایی را در یک بالن 1000 میلی لیتری قرار داده سپس 100 میلی لیتر آب مقطر را که تا دمای 95 درجه سانتیگراد گرم شده ریخته، تکان داده تا نمک کاملا حل شود و چند روز در دمای اتاق بماند. پس از 2-3 روز، محلول فیلتر شده و pH تعیین می شود. واکنش باید خنثی باشد.

0.5-1 میلی لیتر از محلول به دست آمده را در لوله آزمایش ریخته و به همان میزان مایع مغزی نخاعی با دقت در امتداد دیواره لوله آزمایش اضافه می شود. بعد از 3 دقیقه، نتیجه را ارزیابی کنید. ظاهر یک حلقه سفید رنگ نشان دهنده یک واکنش مثبت است. سپس محتویات لوله آزمایش تکان داده می شود، درجه کدورت با مقایسه آن با لوله آزمایش حاوی آب مقطر مشخص می شود. نتایج واکنش در پس زمینه کاغذ سیاه ارزیابی می شود.

120. واکنش Bordet - Zhangou

یک تست تشخیصی ارزشمند در صورت شناسایی سوزاک مزمندر میان افرادی که از بیماری مزمن رنج می برند بیماری های التهابی سیستم تناسلی ادراری. با توجه به ادبیات، زمانی که استفاده صحیحاین روش تا 80 درصد موارد سوزاک را که با روش های باکتریوسکوپی یا باکتریولوژیکی تشخیص داده نشده اند، شناسایی می کند.

واکنش Bordet-Zhang می تواند ردیابی در نتیجه یک بیماری قبلی یا استفاده از یک گنواکسین برای تشخیص (روش ایمونوبیولوژیکی تحریک) و همچنین درمانی (درمان فرآیندهای التهابی مزمن دستگاه تناسلی در زنان طبق گفته باکشف) باشد. هدف بنابراین، قبل از انجام آن، لازم است به دقت جمع آوری اطلاعات،

هنگامی که شیر مصرف می شود، واکنش ممکن است مثبت کاذب باشد اهداف داروییتب زا.

در نتیجه، یک واکنش مثبت Bordet-Giangu به عنوان شاهد غیرقابل انکار وجود نیست. عفونت گنوکوکیدرست مانند منفی، نمی تواند دلیلی بر عدم وجود سوزاک باشد. با این حال نتایج مثبتدر یک دوره طولانی، پزشک باید بر روی یافتن منبع عفونت گنوککی در بدن تمرکز کند.

کشت گنوکوک کشته شده حاوی 3-4 میلیارد اجسام میکروبی در 1 میلی لیتر به عنوان آنتی ژن استفاده می شود. آنتی ژن گونوکوکی با محلول فرمالدئید حفظ می شود و در آمپول های 1-5 میلی لیتری ریخته می شود. آمپول های باز نشده برای 6 ماه مناسب است، آمپول های باز شده را می توان به مدت 2-3 روز در یک لوله استریل در یخچال با دمای 3-5 درجه سانتیگراد نگهداری کرد.

واکنش تثبیت مکمل Bordet-Giangu مشابه واکنش واسرمن انجام می شود (به شماره 121 مراجعه کنید). آنتی ژن گونوکوکی با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم مطابق با تیتر نشان داده شده در برچسب آمپول رقیق می شود. واکنش اغلب در حجم 2.5 میلی لیتر انجام می شود، بنابراین به 0.5 میلی لیتر سرم آزمایش 1:5 رقیق شده، 0.5 میلی لیتر آنتی ژن رقیق شده به هر لوله اضافه می شود. 1.5 میلی لیتر باقیمانده 1 میلی لیتر سیستم همولیتیک و 0.5 میلی لیتر مکمل است.

واکنش در صورتی مثبت تلقی می شود که در آن بیان شود درجات مختلفتأخیر همولیز در سرم آزمایش در کنترل (سرم خون افراد سالم) همولیز کامل مشاهده می شود.

121. واکنش واسرمن

سرم خون بیماران مبتلا به سیفلیس حاوی ریجین و آنتی بادی است. ریگین ها دارای خاصیت ترکیب شدن با آنتی ژن کاردیولیپین هستند. آنتی بادی های اختصاصی علیه ترپونما پالیدوم با آنتی ژن های خاص ترکیب می شوند. کمپلکس های آنتی ژن-آنتی بادی حاصل توسط مکمل اضافه شده به واکنش جذب می شوند. اندیکاسیون با معرفی یک سیستم همولیتیک (گلبول های قرمز گوسفند + سرم همولیتیک) انجام می شود.

برای انجام واکنش شما نیاز دارید:

الف) محلول ایزوتونیک کلرید سدیم؛

ب) آنتی ژن های ترپونمال اولتراسونیک (ذخیره شده در یخچال در دمای +4 درجه سانتیگراد) و کاردیولیپین (ذخیره شده در دمای اتاق).

ج) مکمل، که سرم خونی است که از سوراخ قلبی 5-10 خوکچه هندی سالم به دست می آید. قابل نگهداری در یخچال به مدت 2 ماه به شرطی
کنسرو کردن با محلول 4 درصد اسید بوریکو محلول سولفات سدیم 5%؛

د) همولیزین - سرم خون همولیتیک خرگوش ایمن سازی شده با گلبول های قرمز گوسفند با تیترهای مختلف (در یخچال در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری می شود).

ه) گلبول های قرمز گوسفند که از طریق سوراخ به دست می آیند ورید گردنی. خون در یک شیشه استریل با گلوله های شیشه ای (برای مخلوط کردن) جمع آوری می شود، به مدت 15 دقیقه تکان داده می شود. لخته های فیبرین با فیلتراسیون از طریق گاز استریل جدا می شوند. خون دفیبره را می توان تا 5 روز در یخچال نگهداری کرد.

گاهی اوقات نیاز به ذخیره طولانی تری خون گوسفند وجود دارد و بنابراین با نگهدارنده مخصوص (6 گرم گلوکز، 4.5 گرم اسید بوریک، 100 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک) نگهداری می شود که در حمام آب جوشانده می شود. 20 دقیقه در روز به مدت 3 روز برای 100 میلی لیتر خون دفیبرینه شده گوسفند، 15 میلی لیتر نگهدارنده لازم است. خون دفیبره نگهداری شده به این روش در یخچال نگهداری می شود.

آزمایش اصلی با چندین مرحله انجام می شود.

یک بیمار از ورید اولنار 5-10 میلی لیتر خون بگیرید و سرم را پردازش کنید. در کودکان می توان از ورید تمپورال یا یک برش در پاشنه خون گرفت. سوراخ با ابزار استریل، سرنگ و سوزن انجام می شود.
از قبل با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم شسته شده است.

خون برای تحقیق با معده خالی گرفته می شود. 3-4 روز قبل از مطالعه، بیمار از مصرف منع می شود مواد مخدر، آماده سازی دیژیتال، مصرف الکل.

مطالعه نباید در بیماران مبتلا به درجه حرارت بالابدن، بعد از آسیب، جراحی، بیهوشی، بیماری های عفونی اخیر، در زنان در دوران قاعدگی، در زنان باردار (در 10 روز آخر بارداری)، زنان در حال زایمان (در 10 روز اول پس از تولد) و همچنین در نوزادان ( در 10 روز اول زندگی).

خون به دست آمده در یک لوله استریل در ترموستات با دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30-15 دقیقه قرار می گیرد. لخته به دست آمده با یک میله شیشه ای استریل از دیواره های لوله آزمایش جدا شده و به مدت یک روز در یخچال قرار می گیرد. سرم شفاف جدا شده (در بالای لخته) با پیپت پاستور با استفاده از یک حباب لاستیکی مکیده می شود یا با دقت در لوله استریل دیگری ریخته می شود و به مدت 30 دقیقه در حمام آب در دمای 56 درجه سانتی گراد غیرفعال می شود. سرم تهیه شده به این روش برای آزمایش تا 5-6 روز در یخچال قابل نگهداری است.

آنتی ژن ها بر اساس روش و تیتر مشخص شده روی برچسب رقیق می شوند.

یک سیستم همولیتیک آماده کنید. برای انجام این کار، خون گوسفند دفیبرینه شده یا گلبول های قرمز خون به مقدار لازم برای واکنش سانتریفیوژ می شود، پلاسما به دقت جدا می شود و رسوب با 6-5 حجم محلول کلرید سدیم ایزوتونیک شسته می شود تا مایع رویی کاملاً بی رنگ شود. از رسوب، یک سوسپانسیون 3٪ از گلبول های قرمز خون در یک محلول ایزوتونیک کلرید سدیم با تیتر سه برابر تهیه می شود.

محلول سرم همولیتیک و سوسپانسیون گلبول های قرمز گوسفند به سرعت مخلوط می شوند و به مدت 30 دقیقه در ترموستات قرار می گیرند.

مکمل خشک با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک به نسبت 1:10 رقیق می شود، سرم طبیعی غیرفعال انسانی - 1:5.

کمپلمان در 30 لوله که در یک قفسه 10 تیوبی در 3 ردیف قرار گرفته اند تیتر می شود. در دو ردیف در حضور دو آنتی ژن، در سوم - با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک تیتر می شود. پنج لوله، لوله های کنترل هستند: دو تا برای دو آنتی ژن مربوطه و یکی برای نظارت بر کمپلمان، سرم همولیتیک و محلول ایزوتونیک کلرید سدیم برای سمیت خون. آنها را به صورت زیر پر کنید:

لوله های آزمایش به مدت 45 دقیقه در ترموستات قرار می گیرند و پس از آن بررسی می شوند. در هیچ لوله آزمایشی نباید همولیز وجود داشته باشد.

مکمل با رقت 1:10 در 10 لوله از ردیف اول قفسه در دوزهای 0.1، 0.16، 0.2، 0.24، 0.3، 0.36، 0.4، 0.44، 0.5 و 0.55 میلی لیتر ریخته می شود. به محتویات هر لوله آزمایش محلول ایزوتونیک کلرید سدیم تا 1 میلی لیتر اضافه کنید و کاملاً مخلوط کنید. 0.25 میلی لیتر از مخلوط هر لوله آزمایش به لوله های آزمایش مربوطه ردیف 2 و 3 منتقل می شود. قفسه با لوله های آزمایش تکان داده می شود، 0.5 میلی لیتر سیستم همولیتیک به ردیف سوم لوله های آزمایش اضافه می شود، دوباره تکان داده می شود و به مدت 45 دقیقه در ترموستات با دمای 37 درجه سانتیگراد قرار می گیرد. سرم خون طبیعی انسان، رقیق شده با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک به نسبت 1:5، در هر 30 لوله آزمایش، هر کدام 0.25 میلی لیتر ریخته می شود.

آنتی ژن I (التراسونیک ترپونمال)، با تیتر با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک رقیق شده، 0.25 میلی لیتر به 10 لوله آزمایش ردیف 1 اضافه می شود. آنتی ژن II (کاردیولیپین در رقت یکسان و به همان مقدار) - در 10 لوله از ردیف 2. 0.25 میلی لیتر محلول ایزوتونیک کلرید سدیم در 10 لوله آزمایش ردیف 3 ریخته می شود و 0.25 میلی لیتر باقی مانده ریخته می شود. پس از انکوباسیون در ترموستات، 0.5 میلی لیتر از سیستم همولیتیک به 20 لوله (ردیف 1 و 2) اضافه می شود، تکان داده می شود و دوباره به مدت 45 دقیقه در ترموستات قرار می گیرد.

پس از 45 دقیقه، دوز کاری مکمل تعیین می شود، یعنی تیتر آن با افزایش 15-20٪.

عنوان مکمل در نظر گرفته می شود حداقل مقدار، باعث همولیز کامل گلبول های قرمز گوسفند در حضور آنتی ژن و سرم خون طبیعی انسان می شود.

آزمایش اصلی این است که هر سرم غیرفعال آزمایشی که به نسبت 1: 5 با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم رقیق شده است، در 0.25 میلی لیتر در سه لوله آزمایش ریخته می شود. 0.25 میلی لیتر آنتی ژن I به لوله آزمایش اول، 0.25 میلی لیتر آنتی ژن II به لوله آزمایش دوم و 0.25 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک به لوله آزمایش سوم (شاهد) اضافه کنید. 0.25 میلی لیتر مکمل رقیق شده به دوز کاری نیز به تمام لوله های آزمایش اضافه می شود. تمام لوله های آزمایش به مدت 45 دقیقه در ترموستات قرار می گیرند، سپس 0.5 میلی لیتر سیستم همولیتیک به آنها اضافه می شود، تکان داده می شود و به مدت 45-50 دقیقه در ترموستات قرار می گیرد. نتیجه آزمایش پس از شروع همولیز کامل در لوله های کنترل ثبت می شود.

نتایج واکنش به صورت مثبت ارزیابی می شود: تأخیر کامل همولیز (واکنش به شدت مثبت) ++++، معنی دار (واکنش مثبت) +++، جزئی (واکنش مثبت ضعیف) ++، ناچیز (واکنش مشکوک) - ±، عدم تاخیر در همولیز (واکنش منفی) - .

در روش کمیبرای انجام واکنش واسرمن، آزمایش با کاهش حجم سرم رقیق شده با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم انجام شد.

طرح آزمایش اصلی واکنش واسرمن

اهمیت بالینی واکنش واسرمن به سختی قابل برآورد است. قبل از درمان بر روی همه بیماران انجام می شود اما معنی خاصاو در سیفلیس نهفته، شکست اعضای داخلیو سیستم عصبی

نتایج واکنش Wasserman کیفیت درمان ارائه شده را مشخص می کند، که زمینه را برای حذف بیماران تحت درمان از ثبت در یک دوره زمانی مشخص فراهم می کند.

در سیفلیس اولیه، واکنش واسرمن معمولاً در پایان هفته ششم از لحظه عفونت مثبت است. با سیفلیس تازه ثانویه تقریباً در 100٪ موارد مثبت است، با سیفلیس عود کننده ثانویه - در 98-100٪. فعال سوم - در 85٪؛ دوره سوم پنهان - در 60٪ موارد.

واکنش واسرمن دو بار برای همه زنان باردار، بیماران جسمی، عصبی، روانی و بیماری های پوستیو همچنین جمعیت های مصوب. در عین حال، نتایج واکنش مثبت و ضعیف باید به طور جدی درمان شود، زیرا ممکن است در پایان بارداری و پس از زایمان، با پرکاری تیروئید، مالاریا، جذام، پوسیدگی رخ دهد. تومور بدخیم، بیماری های عفونی، کلاژنوز و ... بنابراین در صورت وجود تظاهرات بالینیقبل از هر چیز باید بیماری آنها را در کنار داده های باکتریوسکوپی در نظر گرفت.

در عین حال، عواملی وجود دارند که می‌توانند ماهیت واقعی نتایج به‌دست‌آمده از واکنش واسرمن را مخدوش کنند: ظروف شیشه‌ای آزمایشگاهی که شسته نشده‌اند (اثر اسید و قلیایی در لوله‌های آزمایش)، ذخیره طولانی‌مدت خون گرفته‌شده برای تحقیق، مصرف چربی و الکل توسط بیماران قبل از معاینه، دوره قاعدگی و غیره.

در همه موارد، انجام معاینه جامع از بیمار، از جمله، علاوه بر واکنش واسرمن، همچنین RIBT (نگاه کنید به 122، 123، 124) توصیه می شود.

122. واکنش ساکس ویتبسکی (سیتوکولی)

برای تشخیص سیفلیس استفاده می شود. این بر اساس تشکیل یک رسوب در هنگام مخلوط کردن سرم خون بیمار با یک آنتی ژن است.

برای تهیه آنتی ژن، ماهیچه های چند قلب گاو از تاندون ها، فاسیا و چربی پاک می شوند، در چرخ گوشت چرخ می شوند و با حجم 5 برابری اتیل الکل 96 درصد به مدت 15 روز با تکان دادن روزانه 20 دقیقه ای استخراج می شوند. عصاره به دست آمده در یک حمام آب در یک فنجان چینی تحت خلاء تبخیر می شود. اتیل الکل داغ 96% به باقیمانده (توده زرد روشن از لیپوئیدها) به مقدار 1/3 حجمی که برای استخراج عضله گرفته می شود، اضافه می شود.

عصاره به مدت 3 روز در دمای اتاق نگهداری می شود، فیلتر شده (در آب سرد) و بسته به نتایج تیتراسیون با سرم های مثبت و منفی، محلول 0.3-0.6% کلسترول کریستالی اضافه کنید. آنتی ژن سیتوکولیک را در دمای اتاق در آمپول های مهر و موم شده یا لوله های بسته شده نگهداری کنید.

روش شناسی. 1 میلی لیتر آنتی ژن سیتوکولیک به سرعت به 2 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک اضافه می شود و به مدت 15 دقیقه در دمای اتاق قرار می گیرد تا پوسته ها ظاهر شوند. 0.1 میلی لیتر امولسیون آنتی ژن را به 0.2 میلی لیتر سرم غیرفعال داخل لوله آزمایش اضافه کنید، 3 دقیقه تکان دهید و 30 دقیقه بگذارید و پس از آن 1 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک اضافه کنید.

1.2 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک و 0.1 میلی لیتر امولسیون آنتی ژن به لوله کنترل حاوی آنتی ژن اضافه کنید. در کنترل نباید پوسته ای وجود داشته باشد. نتایج واکنش به صورت بصری یا با استفاده از ذره بین در نظر گرفته می شود و بسته به تعداد تکه هایی که می ریزند، با نقاط مثبت (++++، +++، ++) مشخص می شوند. اگر واکنش منفی باشد، هیچ پوسته ای وجود ندارد، اما محتویات لوله ممکن است کمی مادی شود.

در سال 1931، P. Sachs و E. Witebsky اصلاحی در این روش ارائه کردند که شامل رقیق کردن آنتی ژن در دو مرحله است: 2 قسمت محلول ایزوتونیک کلرید سدیم را به 1 قسمت از آنتی ژن اضافه کنید، به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق نگه دارید و 9 قسمت دیگر محلول ایزوتونیک کلرید سدیم را اضافه کنید. همچنین توصیه می شود آنتی ژن را با محلول 2% کلرید سدیم رقیق کنید، که به گفته نویسندگان، حساسیت واکنش را افزایش می دهد. اصلاح کمی واکنش با رقت سرم نیز امکان پذیر است (1:4، 1:8، 1:16، 1:32، 1:64، و غیره).

واکنش کاملا حساس است، زمان کمی (حدود 1 ساعت) طول می کشد و نتایج آن بلافاصله خوانده می شود.

123. واکنش بی حرکتی ترپونما پالیدوم (RIBT)

با استفاده از یک واکنش، آنتی‌بادی‌ها و مکمل‌هایی که ترپونما پالیدوم را بی‌حرکت می‌کنند، در سرم خون بیماران مبتلا به سیفلیس شناسایی می‌شوند.

در سیفلیس اولیه، RIBT عمدتا منفی است، در ثانویه - مثبت در 92-96٪ موارد، در سوم - در 92-100٪، در سیستم عصبی و سیفلیس مادرزادی - در 86-89٪ موارد.

نتایج مثبت RIBT در سارکوئید، اریتماتوز، دیابت، تومورهای بدخیم، هپاتیت ویروسی، سیروز کبدی، مالاریا، جذام، مونونوکلئوز عفونی، برخی بیماری های کشورهای گرم (پینتا، یاوس و غیره).

آنتی ژن سوسپانسیونی از ترپونما کم رنگ است که از بیضه خرگوش آلوده به سیفلیس با وارد کردن 0.75-1 میلی لیتر سوسپانسیون ترپونما کم رنگ در محلول کلرید سدیم ایزوتونیک (50 حیوان در هر میدان دید) به بیضه گرفته می شود.

مواد از بیضه باید 6-8 روز پس از آلوده شدن حیوان گرفته شود. قبل از مصرف آنتی ژن، خرگوش با خونریزی کشته می شود (پنکسیون قلبی یا شریان کاروتید). بافت بیضه خرد شده و با سرم خون یک خرگوش سالم پر می شود، با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک رقیق می شود، به مدت 30 دقیقه تکان داده می شود و سپس به مدت 10 دقیقه (1000 دور در دقیقه) سانتریفیوژ می شود. مایع رویی به صورت میکروسکوپی بررسی می شود. در هر میدان دید باید حداقل 10-15 ترپونما پالیدوم وجود داشته باشد.

مکمل تهیه شده است به روش معمولاز خون خوکچه هندی

برای انجام RIBT شما نیاز دارید: 1.2 میلی لیتر محلول ژلاتین 0.2٪، 2.8 میلی لیتر محلول آلبومین 5٪، 1.6 میلی لیتر سوسپانسیون Treponema pallidum. PH محیط 7.2 است. 0.15 میلی لیتر مکمل (کوکتل) به این مخلوط اضافه می شود. به طور موازی، دو آزمایش انجام می شود: با مکمل های فعال (آزمایش) و واکنشی (کنترل).

ملانژورها با سرم آزمایشی تا علامت "1" و سپس با کوکتل تا علامت "2" پر شده و با یک حلقه لاستیکی استریل بسته می شوند.

در همان زمان، واکنش مشابهی با سرم های آشکارا مثبت و آشکارا منفی انجام می شود.

ملانژورها شماره گذاری شده و به مدت 18-20 ساعت در ترموستات با دمای 35 درجه سانتیگراد قرار می گیرند و پس از آن به صورت جفتی (آزمایش - کنترل) از ترموستات خارج می شوند و محتویات در لوله های آزمایش مناسب ریخته می شود. 2 قطره روی یک اسلاید شیشه ای ریخته می شود: در سمت چپ آزمایش است، در سمت راست کنترل است، با یک شیشه پوشش و میکروسکوپ در یک میدان دید تاریک بپوشانید.

ابتدا نتایج کنترل بررسی می شود: درصد ترپونما پالیدوم متحرک و بی حرکت تعیین می شود. فرمول محاسبه: X = (A - B)/A * 100، که در آن A تعداد ترپونما پالیدوم متحرک در کنترل است. ب - تعداد ترپونمهای متحرک پالیدوم در آزمایش.

مثال: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.

ارزیابی نتایج RIBT: زیر 20٪ - منفی. 21-30٪ - مشکوک، 31-50٪ - ضعیف مثبت، بیش از 50٪ - مثبت.

آنتی ژن، مکمل و کمکی، شاخص یا سیستم همولیتیک - سرم همولیتیک و گلبول های قرمز گوسفند.

اگر در سیستم اول یک کمپلکس اختصاصی آنتی ژن + آنتی بادی تشکیل شود، مکمل جذب می شود (با این کمپلکس ترکیب می شود) و در سیستم دوم همولیز رخ نمی دهد.

واکنش مستلزم:

1. سرم آزمایش که از خون گرفته شده با سوراخ کردن ورید اولنار بیمار به دست می آید. پس از لخته شدن خون، سرم در یک لوله جداگانه مکیده شده و به مدت 30 دقیقه در دمای 56 درجه سانتیگراد در حمام آب غیرفعال می شود.

2. آنتی ژن - تعلیق گونوکوک کشته شده.

3. گلبول های قرمز گوسفند از خون دفیبرینه استریل جمع آوری شده به دست می آید. آنها با سانتریفیوژ کردن 3 بار با بخش های جدید محلول نمک شسته می شوند. در واکنش از یک سوسپانسیون 3 درصدی گلبول های قرمز استفاده می شود.

4. سرم همولیتیک از قبل با ایمن سازی خرگوش با گلبول های قرمز گوسفند تهیه می شود. قبل از استفاده، سرم تیتر می شود.

5. مکمل - سرم تازه خوکچه هندی. خون از قلب خوکچه هندی با سرنگ مکیده شده و پس از لخته شدن، سرم جدا می شود. قبل از آزمایش، دوز کاری مکمل تیتر می شود. برای این کار رقت پایه مکمل 1:10 را گرفته و در لوله های آزمایش از 0.1 تا 0.5 بریزید و پس از آن حجم در هر لوله آزمایش با محلول نمکی به 1.5 میلی لیتر تنظیم می شود.

در همان زمان، یک سیستم همولیتیک تهیه می شود - رقیق شده در تیتر سه گانه، سرم همولیتیک + 3٪ سوسپانسیون گلبول های قرمز گوسفند. هر دو ماده در حجم های مختلف هستند و به مدت 30 دقیقه در ترموستات نگهداری می شوند (حساس شدن مخلوط) پس از آن مخلوط 1 میلی لیتر در لوله های آزمایش اضافه شده و به مدت 30 دقیقه در ترموستات قرار می گیرد. 2 لوله آزمایش به عنوان کنترل عمل می کنند:

1. 1 میلی لیتر سیستم همولیتیک + 1.5 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی.

2. 0.5 میلی لیتر مکمل 1:10 + 0.5 میلی لیتر سوسپانسیون گلبول قرمز + 1.5 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی.

تیتر کمپلمان حداقل مقداری است که هنوز همولیز در آن رخ می دهد. برای تنظیم واکنش، دوز کاری مکمل را مصرف کنید که در برابر تیتر 20-25٪ افزایش یافته است، یعنی معمولاً مقدار مکملی که در لوله آزمایش ماقبل آخر با همولیز وجود دارد. افزایش دوز مکمل ضروری است زیرا در واکنش ممکن است فعالیت مکمل تا حدودی توسط سایر اجزای واکنش (آنتی ژن، سرم) سرکوب شود.
43) RSK Wasserman

برای تشخیص سیفلیس به منظور شناسایی آنتی بادی ها و همچنین تعیین اثربخشی قرار داده شده است درمان خاص. این بر اساس اصل واکنش تثبیت مکمل Bordet-Gengou است. تفاوت قابل توجهی بین واکنش Wasserman عدم اختصاصی بودن آنتی ژن است: عصاره لیپوئیدی از اندام های طبیعیحیوانات

برای انجام واکنش واسرمن، داشتن سرم، تشخیص، آنتی ژن های متقاطع شماره 1، شماره 2، مکمل، سرم همولیتیک، گلبول های قرمز گوسفند، ضروری است. شور.

Diagnosticum شماره 1 - اختصاصی، ترپونمال.

تشخیص شماره 2 - غیر اختصاصی، آنتی ژن کاردیولیپینکه عصاره های قلب گاو بسیار خالص شده با ترکیب شیمیایی ثابت لیپوئیدها هستند. لیپوئیدها، توسط ترکیب شیمیایینزدیک به لیپوئیدهای ترپونما پالیدوم هستند، بنابراین، اگرچه اختصاصی نیستند، آنتی بادی هایی را علیه اسپیروکت تثبیت می کنند.

این آنتی ژن ها به صورت مرکزی تولید می شوند و به صورت رقیق شده در واکنش با توجه به تیتر نشان داده شده در برچسب استفاده می شوند.

همزمان با آزمایش اصلی، 2 کنترل قرار داده می شود: با سرم های واضح منفی و با سرم های آشکارا مثبت.

تنظیم آزمایش اصلی

ابتدا سرم آزمایش غیرفعال و رقیق شده 1:5 در 4 لوله آزمایش ریخته می شود. سپس آنتی ژن ها در 2 لوله آزمایش (شماره 1، شماره 2) ریخته می شود و محلول فیزیولوژیکی در لوله آزمایش 3 ریخته می شود. پس از این، دوز کاری مکمل به تمام لوله ها اضافه می شود. پس از مخلوط کردن مواد، قفسه با لوله های آزمایش به مدت 30 دقیقه در ترموستات با دمای 37 درجه سانتیگراد قرار می گیرد. پس از نگهداری در ترموستات، سیستم همولیتیک به تمام لوله های آزمایش اضافه می شود. لوله ها دوباره به مدت 2 ساعت در یک ترموستات قرار می گیرند و سپس در دمای اتاق قرار می گیرند. روز بعد، نتیجه یادداشت می شود. درجه شدت واکنش ارزیابی می شود، چهار مثبت (++++)، سه (+++)، دو (++) و یک (+) - بسته به شدت. از رنگ مایع و اندازه رسوب گلبول قرمز در پایین. همولیز کامل با یک (-) منهای نشان داده می شود. اگر اختلاف شدیدی بین نتایج با آنتی ژن های مختلف وجود داشته باشد، آزمایش با قسمت جدیدی از خون تکرار می شود.
44) RIT-r. بی حرکتی ترپونما پالیدوم

این واکنش مانند در استفاده می شود اهداف تشخیصی، و برای شناخت نتایج مثبت کاذبواکنش های سرولوژیکی استاندارد، به ویژه برای سیفلیس نهفته.

RIBT این است که در حضور ایموبیلیسین در سرم بیماران مبتلا به سیفلیس و کمپلمان فعال، ترپونما پالیدوم حرکت خود را از دست می دهد.

RIBT در جعبه های استریل قرار می گیرد. واکنش شامل سرم آزمایش، مکمل و آنتی ژن است.

در RIBT، آنتی ژن تعلیق ترپونما کم رنگ از بیضه خرگوش در تاریخ های اولیه(7-8 روز پس از عفونت) اورکیت سیفلیس. یک محیط تعلیق ویژه، زنده ماندن ترپونما پالیدوم را حداقل برای یک روز حفظ می کند. مکمل در RIBT استفاده می شود خوک گینه. RIBT در شرایط بی هوازی رخ می دهد. لوله های آزمایش با مواد تشکیل دهنده در یک میکروآناروستات قرار می گیرند که از آن هوای جویو مخلوط گازی (95 قسمت نیتروژن و 5 قسمت) تزریق می شود دی اکسید کربن). میکروآناروستات با لوله های آزمایش در یک ترموستات (35 درجه سانتیگراد) به مدت 18-20 ساعت قرار می گیرد.

به موازات فرمولاسیون واکنش، مطالعات کنترلیبا سرم خون مثبت و منفی که از تجربیات قبلی گرفته شده است.

نتایج RIBT پس از خارج کردن لوله ها از ترموستات (یعنی پس از 18-20 ساعت آزمایش) ارزیابی می شود. با استفاده از پیپت پاستور، قطره ای از محتویات لوله آزمایش به لام شیشه ای ریخته می شود که با شیشه پوششی پوشانده شده و در میکروسکوپ میدان تاریک بررسی می شود (هدف 40، چشمی 10). هنگامی که تا 20٪ از ترپونما پالیدوم بی حرکت می شود، واکنش منفی، از 21 تا 30٪ - مشکوک، از 31 تا 50٪ ضعیف مثبت، از 51 تا 100٪ - مثبت در نظر گرفته می شود. درصد بی حرکتی ترپونما پالیدوم با استفاده از جدول مخصوص تعیین می شود.

45) واکنش اپسون فاگوسیتیک

مکانیسم: افزایش فاگوسیتوز سلول های میکروبی تحت تأثیر اثرات دوستانه آنتی بادی ها، سرم ایمنی و مکمل.

اجزای واکنش:

1) آنتی ژن - کشت میکروبی روزانه؛

3) مکمل - سرم تازه خوکچه هندی؛

4) فاگوسیت ها - سوسپانسیون لکوسیت.

آپسونین ها آنتی بادی هایی هستند که در سرم های طبیعی و ایمنی یافت می شوند و میکروب ها را برای فاگوسیتوز آماده می کنند.

واکنش در لوله های آزمایشی ویژه در دمای 37 درجه دقیقه انجام می شود. سپس از هر لوله آزمایش اسمیر تهیه می شود، 100 فاگوسیت شمارش می شود و تعداد میکروکنترل های فاگوسیت شده مشخص می شود.

شاخص اپسونیک = شاخص فاگوسیتی. سرم/شاخص فاگوسیتیک سرم طبیعی

هر چه شاخص اپسونیک (باید > 1) سرم مورد آزمایش بیشتر باشد، و بنابراین، بالاتر است! بروسلوز).

برای تعیین اپسونین ها - آنتی بادی هایی که فعالیت فاگوسیتی لکوسیت ها را تحریک می کنند، استفاده می شود. تشخیص سرمی عفونت ها، مانند بروسلوز.

تقویت فاگوسیتوز به دلیل اتصال اپسونین ها با مراکز فعال (قطعه Rav) به عوامل تعیین کننده باکتری و سپس با کمک قطعات Pc به گیرنده های Pc فاگوسیت ها اتفاق می افتد. سرم معمولی حاوی مقادیر کمی اپسونین است که اثرات خود را در حضور مکمل اعمال می کند. اپسونین های بیشتری در سرم ایمنی وجود دارد و فعالیت آنها کمتر به مکمل وابسته است.

اجزاء:

سرم تست

سرم معمولی

کشت میکروبی روزانه (به عنوان مثال، استافیلوکوک)

فاگوسیت ها - تعلیق نوتروفیل ها

به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید. از هر لوله آزمایش اسمیر تهیه می شود، طبق رومانوفسکی-گیمسا رنگ آمیزی می شود و تعداد میکروب ها در 100 نوگروفیل یا بیشتر زیر میکروسکوپ شمارش می شود. شاخص فاگوسیتی را تعیین کنید.

شاخص فاگوسیتیک - تعداد میکروب های جذب شده توسط یک نوتروفیل.

شاخص اپسونیک - شاخص فاگوسیتیک سرم ایمنی (تست) / شاخص فاگوسیتیک سرم طبیعی.

هرچه شاخص اپسونیک بالاتر باشد (باید > 1 باشد)، ایمنی بالاتر است.

شاخص اپسون فاگوسیتیک یک نشانگر دیجیتال = تعداد فاگوسیت ها x ارزیابی فاگوسیتوز (بسته به تعداد میکروب های جذب شده) است. حداکثر مقدار -75 است.

46) RN روی موش برای ایجاد اگزوتوکسین

این واکنش بر اساس توانایی یک سرم آنتی سمی خاص برای خنثی کردن اگزوتوکسین است.

آنتی بادی های سرم ایمنی قادر به خنثی کردن اثرات مخرب میکروب ها یا سموم آنها بر روی سلول ها و بافت های حساس هستند که با مسدود شدن آنتی ژن های میکروبی توسط آنتی بادی ها، یعنی خنثی سازی آنها همراه است.

واکنش خنثی سازی (RN) با وارد کردن مخلوط آنتی ژن-آنتی بادی به حیوانات یا اجسام حساس آزمایشی (کشت سلولی، جنین) انجام می شود. در غیاب اثرات مخرب میکروارگانیسم ها یا آنتی ژن ها یا سموم آنها در حیوانات و اشیاء آزمایشی، آنها از اثر خنثی کننده سرم ایمنی و در نتیجه ویژگی تعامل مجموعه آنتی ژن-آنتی بادی صحبت می کنند.

برای انجام واکنش، ماده آزمایشی که انتظار می رود حاوی اگزوتوکسین باشد، با آن مخلوط می شود سرم آنتی سمی، در ترموستات نگهداری می شود و به حیوانات (خوکچه هندی، موش) تجویز می شود. به حیوانات کنترل، فیلتر ماده آزمایش تزریق می شود، نه با سرم درمان می شود. اگر اگزوتوکسین با سرم آنتی سمی خنثی شود، حیوانات گروه آزمایشی زنده می مانند. حیوانات کنترل در نتیجه اگزوتوکسین خواهند مرد.

واکنش خنثی سازی اگزوتوکسین زمانی رخ می دهد که با سرم آنتی توکسیک (آنتی بادی های آنتی توکسین) تعامل داشته باشد. در نتیجه تشکیل کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی، سم خاصیت سمی خود را از دست می دهد.

واکنش خنثی سازی برای شناسایی و تیتراسیون سموم، سموم یا آنتی توکسین ها انجام می شود.

سموم با فیلتر کردن مایع به دست می آیند محیط مغذییا موادی را آزمایش کنید که در آن باکتری های سمی رشد کرده اند. هنگامی که با فرمالدئید به مدت 30 تا 45 روز در دمای 37 درجه سانتیگراد درمان می شود، سم به سموم تبدیل می شود که برای ایمن سازی حیوانات برای بدست آوردن سرم آنتی سمی استفاده می شود.

واکنش خنثی سازی در داخل بدن برای تعیین نوع سم آن را با سرم آنتی توکسیک تشخیصی مخلوط کرده و به موش های سفید رنگ تزریق می کنند. هنگام خنثی سازی سم با سرم آنتی سمی، موش ها نمی میرند.

واکنش خنثی سازی برای تعیین ایمنی آنتی سمی در کودکان مبتلا به دیفتری (تست شیک) و مخملک (تست دیک) استفاده می شود. برای انجام این کار، مقدار مشخصی از سم مربوطه (1/40 DLM) به صورت داخل پوستی به ناحیه ساعد تزریق می شود. در صورت وجود آنتی توکسین در بدن، سم خنثی شده و واکنش منفی خواهد بود. در صورت عدم وجود آنتی توکسین در بدن، واکنش التهابیدر محل تزریق سم
47) RN (واکنش خنثی سازی) در موش برای شناسایی ویروس آنسفالیت ناشی از کنه

ویروس TBE برای تعدادی از حیوانات آزمایشگاهی و وحشی بیماری زا است. موش های سفید تازه متولد شده و جوان حساس ترین هستند. پس از عفونت در مغز، داخل صفاقی، عضلانی، این حیوانات دچار آنسفالیت می شوند که منجر به مرگ حیوانات می شود. در بین حیوانات مزرعه، بزها بیشترین حساسیت را به ویروس TBE دارند، گوسفند و گاو کمتر حساس هستند و اسب ها کمی حساس هستند. ویروس TBE دارای اثر سیتوپاتوژنیک (CPE) است که باعث تغییرات سیتوپاتیک در کشت های اولیه و پیوسته سلول های کلیه جنینی خوک (PEB و PES) می شود و در بسیاری دیگر بدون CPE مشخص تکثیر می شود. کشت های سلولی. در مغز موش های آلوده و مایع کشت کشت های آلوده، تجمع ویروس TBE و آنتی ژن های ویروسی خاص رخ می دهد: تثبیت مکمل، هماگلوتینه، رسوب و غیره.

ویروس TBE مدت زمان طولانیدر دمای پایین نگهداری می شود ( حالت بهینه-60 درجه C و پایین تر)، لیوفیلیزاسیون را به خوبی تحمل می کند، می تواند سال ها در حالت خشک نگهداری شود، اما به سرعت در دمای اتاق غیرفعال می شود. جوشاندن آن را در 2 دقیقه و در شیر داغ در دمای 60 درجه از بین می برد. سی در 20 دقیقه می میرد.

فرمالین، فنل، الکل و سایر مواد ضدعفونی کننده و اشعه ماوراء بنفش نیز اثر غیرفعال کنندگی دارند.

واکنش خنثی سازی بر اساس توانایی سرم های ایمنی خاص برای خاموش کردن اثر عفونی ویروس ها است. قابل اجرا در دو جهت:

1) برای تایپ کردن ویروس های جدا شده؛

2) برای تیتراسیون آنتی بادی در سرم کسانی که بهبود یافته اند.

تنظیم واکنش:

1. بر روی حیوانات آزمایشگاهی. معیارهای وجود ویروس

در خدمت مرگ حیوانات آزمایشگاهی است. LD50 محاسبه می شود

حداکثر رقت سوسپانسیون ویروسی که

باعث مرگ 50 درصد دام های آلوده شده است. برای

شناسایی ویروس آنسفالیت منتقله از کنه انجام می شود

عفونت داخل مغزی موش سفید

2. در کشت بافت. نتایج در نظر گرفته شده است

با توجه به اثر سیتوپاتیک (CPE)

با توجه به روش تست رنگ بر اساس تغییر رنگ

با جذب خون

3. در جنین مرغ. نتایج بر اساس ثبت می شود

ظاهر پوک مارک در امتداد غشای کوریوآلانتوئیک.

48) RTGA

این واکنش در عمل ویروس شناسی استفاده می شود:

برای تعیین نوع ویروس (روی شیشه)؛

برای تشخیص در سرم بیماران (بسط یافته).

هنگام تنظیم یک واکنش نشان دهنده مهار هماگلوتیناسیون، 1 قطره از سرم ایمنی نوع خاص روی شیشه اعمال می شود، سپس 1 قطره از ماده آزمایش و 1 قطره سوسپانسیون 5٪ گلبول های قرمز اضافه می شود.

محاسبه نتایج: نوع ویروس توسط سرمی تعیین می‌شود که واکنش با آن انجام نشده است، زیرا سرم ایمنی مخصوص ویروس جدا شده، فعالیت هماگلوتیناسیون آن را سرکوب می‌کند و گلبول‌های قرمز خون آگلوتینه نمی‌شوند.
49) RIF

از رنگهای فلوروکروم درخشان (فلوریسئین ایزوتیوسیانات و غیره) به عنوان برچسب استفاده می شود.

تغییرات مختلفی در RIF وجود دارد. برای تشخیص سریع بیماری های عفونی، Koons RIF برای شناسایی میکروب ها یا آنتی ژن های آنها در مواد آزمایش استفاده می شود.

از نظر کونز دو روش RIF وجود دارد: مستقیم و غیر مستقیم.

اجزای RIF مستقیم:

1) مواد مورد بررسی (مدفوع تخلیه شده توسط نازوفارنکس و غیره)؛

2) سرم ایمنی خاص حاوی AT-la به آنتی ژن مورد نظر نشاندار شده است.

3) محلول ایزوتونیک کلرید سدیم.

اسمیر از مواد مورد آزمایش با آنتی سرم نشاندار درمان می شود.

واکنش AG-AT رخ می دهد. در طی یک بررسی میکروسکوپی شب تاب، فلورسانس در ناحیه ای که کمپلکس های AG-AT در آن قرار دارند تشخیص داده می شود.

اجزای RIF غیر مستقیم:

1) مطالب مورد مطالعه؛

2) آنتی سرم اختصاصی.

3) سرم آنتی گلوبولین (AT-la در برابر ایمونوگلوبولین)، نشاندار شده با فلوریکروم.

4) محلول ایزوتونیک کلرید سدیم.

اسمیر از مواد مورد آزمایش ابتدا با سرم ایمنی به آنتی ژن مورد نظر و سپس با سرم آنتی گلوبولین نشاندار درمان می شود.

کمپلکس های درخشان AG-AT - AT نشاندار شده با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت شناسایی می شوند.

مزیت روش غیر مستقیم این است که نیازی به تهیه طیف وسیعی از سرم های اختصاصی فلورسنت نیست، بلکه فقط از یک سرم آنتی گلوبولین فلورسنت استفاده می شود.

همچنین یک نوع 4 جزئی از RIF غیرمستقیم وجود دارد که مکمل (سرم خوکچه هندی) نیز اضافه می شود. در یک واکنش مثبت، مجموعه ای از AG-AT - برچسب - AT- مکمل تشکیل می شود.

واکنش اشاره دارد واکنش های سرولوژیکیشامل آنتی ژن ها یا آنتی بادی های نشاندار شده است.

به روش های مستقیم و غیر مستقیم انجام می شود.

در روش مستقیمشناسایی آنتی ژن در مواد بیمار یک سرم فلورسنت تشخیصی استفاده می شود که حاوی ایمونوگلوبولین های جدا شده از سرم های ایمنی و برچسب گذاری شده با فلوروکروم است.

آنتی ژن خاص به شکل کنگلومراهای درخشان سبز روشن شناسایی می شود و پس زمینه آماده سازی به رنگ نارنجی مایل به قرمز است.

اجزای واکنش ایمونوفلورسانس مستقیم:

1) مطالب مورد مطالعه؛

2) سرم فلورسنت خاص.

3) میکروسکوپ فلورسنت.

هنگام تشخیص آنفولانزا، تمایز از پاتوژن های پاراآنفلوآنزا و عفونت آدنوویروس. سواب نازوفارنکس با سرم فلورسنت آنفلوانزا یا ایمونوگلوبولین آنفلوانزا درمان می شود.

نتیجه "+" به شکل درخشش سبز پس از 3 ساعت به دست می آید.

با روش غیر مستقیم، آنتی بادی های اختصاصی شناسایی و تیتر می شوند. تیتر سرم حداکثر رقت آن است که در آن فلورسانس "+ +" مشخص می شود.

اجزای واکنش ایمونوفلورسانس غیرمستقیم

برای جستجوی آنتی ژن در تشخیص سریع:

1) مواد تست (آنتی ژن)؛

2) سرم خاص؛

3) سرم فلورسنت آنتی گلوبولین

4) میکروسکوپ فلورسنت.

/ فاز خاص

آنتی بادی های سرم به آنتی ژن جذب می شوند.

// فاز غیر اختصاصی

سرم آنتی گلوبولین با آنتی بادی های نشاندار شده با فلوروکروم استفاده می شود. یک آنتی ژن پیچیده + آنتی بادی (I) + سرم آنتی گلوبولین (II) تشکیل می شود که می درخشد.