Причинителят на дифтерия (Corynebacterium diphtheriae). Corynebacterium diphtheriae (дифтериен коринебактериум)
Причинителят на дифтерията принадлежи към рода Corynebacterium (от латински coryna - клуб, diphthera - филм). Бактериите имат клубообразни удебеления в краищата. Този род включва патогенни за човека дифтерийни бацили и непатогенни видове - псевдодифтерийни бацили и дифтероиди, открити по лигавиците и кожата.
Причинителите на дифтерия - Corynebacterium diphtheriae - са открити от T. Klebs (1883) и изолирани в чиста формаФ. Лефлер (1884).
Морфология. Причинителите на дифтерия са леко извити, тънки пръчици с размери 3-6 × 0,3-0,5 микрона, с удебеления в краищата. Тези удебеления съдържат зърна от волютин (зърна на Babesch-Ernst). Дифтерийните бактерии са неподвижни и нямат спори или капсули. Грам положителен. Те се оцветяват добре с основни анилинови багрила, докато волютиновите зърна са оцветени по-интензивно. За оцветяване обикновено се използва алкално метиленово синьо или кристално виолетово. Характеристика на Corynebacteria diphtheria е техният полиморфизъм; в една култура има пръчки с различни форми и размери: извити, прави, дълги, къси, дебели, понякога кокобактерии. Характерно е разположението на бактериите в натривките - те обикновено са разположени по двойки под остър или тъп ъгъл, под формата на разперени пръсти и др. Разположението в натривките и наличието на волютинови зърна е диференциално диагностичен признак при микроскопско изследване. Непатогенните представители на род Corynebacteria - псевдодифтерийните бацили и дифтериоди често са подредени във вид на палисада, могат да нямат волютинови зърна или да са в единия край (виж фиг. 4).
Култивиране. Corynebacterium diphtheria са факултативни анаероби. Виреят при температура 35-37° C, pH 7,4-7,8. Те не се възпроизвеждат нормално хранителни среди. Култивират се върху среда, съдържаща кръв или серум.
В края на 19 век френският учен E. Roux предложи да се използва коагулиран говежди или конски серум за култивиране на дифтерийни бактерии, а F. Leffler препоръчва да се добави бульон (25%) и 1% глюкоза към него. В тези среди коринебактериите растат бързо, в рамките на 14-18 часа те образуват несливащи се изпъкнали колонии с кремав цвят (растежът върху наклонена среда прилича на шагренова кожа). Въпреки това е невъзможно да се разграничат дифтерийните бацили от псевдодифтерийните бацили върху тези среди.
Понастоящем основните среди за отглеждане са средата на Клауберг (съдържаща кръвен серум и калиев телурит), средата на хинозол на Бунин, средата на Тинсдал и др. Въз основа на културните и ензимни свойства на коринебактериите, дифтерията се разделя на три биовара: gravis, mitis ), intermedius . Biovar gravis обикновено се намира под формата R. В средата на Клауберг бактериите от този биовар растат под формата на големи колонии 2-3 mm, сиво-черни на цвят (тъй като редуцират телурит до телур) и имат назъбени ръбове, което им придава вид на розетка. Когато докоснете колонията с примка, тя сякаш се разпада. В бульона бактериите от този биовар образуват разпадащ се филм и гранулирана утайка.
Corynebacterium biovar mitis расте върху средата на Клауберг под формата на малки гладки колонии (S-образна форма) с черен цвят. В бульона те дават еднаква облачност.
Corynebacteria biovar intermedius (intermedins) са междинни. В средата на Клауберг бактериите от този биовар често растат под формата на лъскави, малки черни колонии (този биовар е рядък).
Ензимни свойства. И трите биовара на дифтерийни бактерии притежават ензима цистиназа, който разгражда цистина, за да произведе сероводород. Тези свойства се използват за разграничаване на патогени на дифтерия от непатогенни представители на този род (Таблица 49).
Забележка. + положителна реакция (разваля се); - отрицателна реакция (не се разцепва).
Патогените и на трите биовара разграждат глюкозата и малтозата, за да образуват киселина. C. gravis разгражда нишестето. Това свойство го отличава от другите два биовара. Corynebacterium diphtheria редуцира нитратите до нитрити, не образува индол и не разлага уреята.
Corynebacterium diphtheria произвежда невраминидаза, хиалуронидаза и други патогенни ензими.
Образуване на токсини. Вирулентни щамове на патогени на дифтерия произвеждат екзотоксин. Химически това е термолабилен протеин, състоящ се от две фракции. Фракция B фиксира токсина върху чувствителните към него телесни тъкани. Фракция А е отговорна за токсичен ефект. Ефективността на културите от дифтериен токсин може да се определи "in vivo" при морски свинчета, чувствителни към токсина. Dim diphtheria exotoxin е минималната летална доза, това е минималното количество отрова, което убива 250 g морско свинче на 4-ия ден.
Наличието на екзотоксин може да се установи и “ин витро” - върху твърда хранителна среда. Този метод се използва широко в практическата работа. Дифтерийният екзотоксин е нестабилен. Той бързо се разпада под въздействието на температура, светлина и атмосферен кислород. След добавяне на формалин (0,3-0,4%) към токсина и задържане при температура 37-38 ° C в продължение на няколко седмици, той се превръща в токсоид, който губи своята токсичност, но запазва антигенните свойства на токсина. Токсините, произведени от различни щамове, не се различават един от друг и могат да бъдат неутрализирани от дифтериен антитоксин *.
* (Сега е установено, че всички биовари на коринебактерии могат да бъдат токсигенни и нетоксигенни.)
Антигенна структура. Дифтерийните бактерии имат повърхностен термолабилен протеинов антиген и типоспецифичен полизахарид О-антиген. В допълнение, сред коринебактериите се разграничават 19 фагови продукта, които се вземат предвид при идентифициране на култури. Фаговарите се използват за идентифициране на източника на заболяването.
Устойчивост на фактори на околната среда. Причинителите на дифтерията са относително стабилни. Температура от 60°C ги убива за 10-15 минути, 100°C ги убива за минута. На фолио издържат на нагряване до 90° C. На валцувани сурвачки при стайна температура издържат до 2 месеца, на детски играчки - няколко дни. Коринебактериите понасят добре ниските температури. Патогените на дифтерия са доста устойчиви на изсушаване. Дезинфектанти (3% разтвор на фенол, 1% разтвор на сублимат, 10% разтвор на водороден прекис) убиват тези бактерии в рамките на няколко минути.
Възприемчивост на животните. IN природни условияживотните не боледуват от дифтерия. От опитните животни най-податливи са морските свинчета и зайците. При интрадермална или подкожна инфекция те развиват картина на токсична инфекция с образуване на възпаление, оток и некроза на мястото на инжектиране. Наблюдават се кръвоизливи в надбъбречните жлези.
Източници на болестта. Болни хора и бактерионосители.
Пътища на предаване. Въздушно-капков, битов контакт (чрез съдове, играчки, книги, кърпи и др.).
Заболяване при хората: 1) дифтерия на фаринкса; 2) дифтерия на носа.
По-рядко се среща дифтерия на трахеята, бронхите, очите, ушите, вагината и дифтерия на увредената кожа.
Патогенеза. Входните врати са лигавиците на дихателните пътища и увредената кожа. Попаднали върху лигавицата, дифтерийните патогени се размножават на мястото на проникване и причиняват тъканна некроза. Образува се филм, който е тясно свързан с подлежащите тъкани. По повърхността на лигавицата се появяват мръсни сиви или жълтеникави налепи, състоящи се от разрушен епител, фибрин, левкоцити и коринебактерия дифтерия. При отстраняване на филма с памучен тампон или шпатула повърхността на лигавицата може да кърви.
По време на пролиферацията на Corynebacterium diphtheria екзотоксинът се натрупва в некротични зони, което може да доведе до подуване на лигавицата и тъканта. От лигавицата подуването може да се разпространи в ларинкса, бронхите и да причини асфиксия. Токсинът, който циркулира в кръвта, засяга селективно сърдечния мускул, надбъбречните жлези и клетките на нервната тъкан.
Дифтерията е токсична инфекция. Тежестта на процеса зависи от степента на токсигенност на щама и от защитните сили на организма.
Имунитет. Имунитетът се създава от антитоксичен и антибактериален имунитет. Кърмачетане се разболяват, защото имат пасивен имунитет, предаден от майка си.
За наличието на антитоксичен имунитет се съди по реакцията на Шик. За настройка на реакция 1 / 40 Dlm ( смъртоносна дозаТоксин от морско свинче), съдържащ се в 0,2 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид, се инжектира интрадермално в предмишницата. Ако в кръвта няма антитоксин, след 24-48 часа на мястото на инжектиране се появява зачервяване и подуване (до 2 см в диаметър). Ако има антитоксин, няма подуване или зачервяване (наличието на антитоксин в кръвта неутрализира инжектирания токсин).
Прехвърленото заболяване оставя имунитета. Въпреки това, в 6-7% от случаите се наблюдават рецидивиращи заболявания.
Предотвратяване. Ранна диагностика. Изолация. Дезинфекция. Идентифициране на носители на токсигенен дифтериен бацил.
Специфична профилактика извършва се чрез въвеждане на токсоид. В СССР провеждат задължителна ваксинациядеца с DTP ваксината е комплексна ваксина, която включва дифтерия и тетаничен токсоиди суспензия от убити коклюшни пръчици. Децата се ваксинират от 5-6 месеца с последваща реваксинация. За реваксинация се прилага ваксина без коклюшни пръчици.
Специфично лечение. Използва се антидифтериен антитоксичен серум. Дозата и честотата се определят от лекуващия лекар, като се прилагат и антимикробни лекарства.
Контролни въпроси
1. Каква е морфологията на Corynebacterium diphtheria и какви биовари има?
2. На какви среди се отглеждат дифтерийните бактерии и какъв е моделът на растеж?
3. Връзката с кой въглехидрат позволява да се разграничи биоварът gravis от другите биовари на дифтерия?
4. Какъв е пътят на предаване и къде най-често се локализира причинителят на дифтерията при болния?
5. Какви са специфичната профилактика и специфичното лечение на дифтерията?
Микробиологично изследване
Цел на изследването: изолиране на патогена за диагностика. Идентифициране на дифтерийни бактерионосители по епидемиологични показания. Откриване на екзотоксин в изолирана култура.
Материал за изследване
1. Секреция от лигавицата на фаринкса.
2. Секреция от носната лигавица.
3. Секреция от лигавицата на окото.
4. Гной от ухото.
5. Секреция от влагалищната лигавица.
6. Секреция от рана.
Материалът за изследване зависи от локализацията на процеса.
За всяка локализация на процеса не забравяйте да изследвате лигавицата на фаринкса и носа. Материалът се събира с памучен тампон, като за това се използва метална тел, за предпочитане алуминиева, в единия край на която се навива плътно памук, след което тампонът се монтира в коркова тапа, поставя се в епруветка и се стерилизира в Пастьорна пещ при температура 160°C 1 тампон за един час или в автоклав при температура 112°C.
Бележки 1. Материалът се взема на празен стомах или не по-рано от 2 часа след хранене и не по-рано от 4 дни след лечение с антибиотици или други антибактериални средства. 2. Ако материалът се взема от гърлото и носа, епруветките с двата тампона се надписват и завързват. Посявките се правят отделно и материалът от всеки тампон се изследва като самостоятелна работа. 3 Материалът, събран със сух тампон, трябва да се инокулира не по-късно от 2-3 часа след вземането. При необходимост от транспортиране на събрания материал тампонът се навлажнява предварително с 5% разтвор на глицерин в изотоничен разтвор на натриев хлорид.
Основни методи на изследване
1. Микробиологичен.
2. Бактериоскопски.
3. Биологичен.
Напредък на изследването
Втори ден от изследването
Чашите се изваждат от термостата и се проверяват. Растежът на бактериите върху средата на Клауберг може да се забави поради наличието на инхибитори в средата. В този случай чашите се поставят в термостата за още 24 часа.
Трети ден от изследването
Чашите се изваждат от термостата и се изследват с помощта на лупа или стереоскопичен микроскоп. Ако има съмнителни колонии, част от тях под контрола на стереоскопичен микроскоп се изолира върху агар с 25% серум и върху колона със среда Pisa за определяне на ензима цистиназа. От друга част от колониите се взема тест за токсигенност.
По време на микроскопско изследване на колонии, взети от средата на Клауберг, дифтерийните коринебактерии губят своята специфичност: няма грануларност, размерът се променя и местоположението остава същото. Когато се инокулират върху среда със серум, морфологичната специфичност на дифтерийните патогени се възстановява.
Тестът за наличие на ензима цистиназа и определянето на токсигенността са задължителни при идентифициране на патогени на дифтерия. Ако резултатът от тези опити, проведени с част от колониите от средата на Клауберг, не е достатъчно ясен или е отрицателен, тогава опитът се повтаря с изолираната чиста култура.
Цистиназен тест. Изследваната култура се засява чрез инжектиране в центъра на колона от среда Пиза. Ако реакцията е положителна, след 18-24 часа се наблюдава почерняване по време на инжектирането и се образува тъмен облак около черната пръчка; почерняването възниква в резултат на това, че ензимът цистиназа разгражда цистина, който е част от средата на Пиза, а освободената сяра реагира с оловен ацетат - образува се черен оловен сулфит. Дифтероидите и псевдодифтерийните бацили не съдържат ензима цистиназа, следователно, когато растат в среда Pisu, цветът на средата не се променя.
Определяне на екзотоксин. Извършва се по метода на дифузно утаяване в гел. Методът се основава на взаимодействието на токсин с антитоксин. В тези области на агара, където тези компоненти взаимодействат, се образува утайка под формата на заоблени линии.
Метод за определяне: разтопен и охладен до 50°C Мартен агар, pH 7,8, се изсипва в петриеви панички (Мартин агар произвежда по-добър екзотоксин). Количеството агар в съда трябва да бъде не повече от 12-15 ml, за да се запази прозрачността - в дебел слой линиите на утаяване са трудно забележими. След като агарът се втвърди, нанесете лента от стерилна филтърна хартия, навлажнена с антидифтериен антитоксичен серум.
Тестовата култура се инокулира с „плаки“. Засяването се извършва с помощта на примка. Диаметърът на плаките е 0,8-1,0 см. Разстоянието на плаките от ръба на хартиените ленти е 0,5-0,7 см, между две плаки от тестовата култура се инокулират плаки от известен токсигенен щам. Тестовата култура се счита за токсигенна, ако линиите на утаяване са ясни и се сливат с линиите на утаяване на контролния (токсигенен) щам. Ако линиите на утаяване се пресичат с линиите на контролния щам или липсват, изолираната култура се счита за нетоксигенна (фиг. 50).
Подготовка на ленти от хартия. От филтърна хартия се изрязват ленти с размери 1,5 х 8 cm, няколко парчета се увиват в хартия и се стерилизират в автоклав при температура 120 ° C за 30 минути. Преди да извършите експеримента, отстранете една лента със стерилна пинсета, поставете я в стерилна петриева паничка и я навлажнете с антидифтериен антитоксичен серум. Серумът първо се разрежда така, че 1 ml да съдържа 500 AE (антитоксични единици). Хартията се навлажнява с 0,25 ml серум (125 AU) и се поставя върху повърхността на средата. След това културите се извършват по начина, посочен по-горе. Всички култури се поставят в термостат. Резултатите се записват след 18-24 и 48 часа.
Четвърти ден на изследване
Културите се отстраняват от термостата и резултатите се вземат предвид. Натривките се правят от култура, култивирана върху среда със серум и оцветена със синьо на Loeffler.
Наличието в петната на пръчки, характерни за тяхната морфология, черна пръчка с облак в средата на Пизу и линии на утаяване в агар ни позволява да дадем предварителен отговор: „Открит е Corynebacterium diphtheria“. Проучването продължава. Ако в агара няма линии на утаяване или тяхната прозрачност е недостатъчна, тестът за токсигенност трябва да се повтори с изолирана чиста култура.
За окончателно идентифициране на изолираната култура и определяне на биовара на патогена се извършва инокулация върху глюкоза, захароза, нишесте и бульон с урея (за откриване на ензима уреаза). Засяването върху хранителна среда се извършва по обичайния начин.
Тест за уреаза. Изолираната култура се засява в бульон с урея и индикатор (крезолово червено) и се поставя в термостат. Само след 30-40 минути резултатът може да се вземе предвид: при инокулиране на истински патогени на дифтерия цветът на средата не се променя, тъй като те не съдържат уреаза. Псевдодифтерийните бацили разграждат уреята и променят индикатора - средата става пурпурночервена.
Пети ден изследвания
Резултатите се записват (Таблица 50).
Контролни въпроси
1. Какъв материал се изследва за идентифициране на причинителя на дифтерия?
2. Как се взема материал за изследване за дифтерия от гърлото и носа?
3. Какво трябва да се направи с тампона, ако взетият материал трябва да се транспортира?
4. Какво устройство се използва за изследване на колонии върху среда на Клауберг?
5. Какви изследвания се провеждат за окончателното идентифициране на изолираната култура?
6. Какви методи се използват за определяне на токсигенността на Corynebacterium diphtheria?
1. Вземете тел и памучна вата от учителя и пригответе 10 тампона, поставете ги в коркова тапа, поставете ги в епруветка и стерилизирайте.
внимание! Преди стерилизация проверете дали тампонът е навит достатъчно плътно.
2. Вземете стерилни тампони от учителя и вземете материал от гърлото и носа на другия (с различни тампони).
3. Проучване от таблицата. 49 свойства на патогени на дифтерия и сродни коринебактерии.
4. Тест за токсичност. Направете плаките в цикъл без култура.
5. Очертайте напредъка на изследването и положителните и отрицателните резултати от теста за токсичност.
Културни медии
Телур среда на Клауберг: първа смес - 1,5 месеца предварително се приготвя смес от 20 мл агнешка или конска кръв и 10 мл глицерин. В деня на приготвяне на средата се приготвят две други смеси; втората смес - 50 ml MPA pH 7,5 се разтопява и охлажда до температура 50 ° C, след което се добавят 2,5 ml от първата смес; трета смес - смесват се 17 ml овча кръв и 33 ml дестилирана вода (сместа се приготвя стерилно), загрята на водна баня до температура 50 ° C. Комбинирайте втората и третата смес, добавете 4 ml 1% разтвор на калиев телурит K 2 TeO 3, бързо всичко се разбърква и се изсипва в чаши. Средата е прозрачна и с цвят на червено вино.
сряда Пиза. Към 90 ml разтопен 2% MPA (pH 7,6) добавете 2 ml разтвор на цистин (1% разтвор на цистин в 0,1 N разтвор на натриев хидроксид), разбъркайте добре и добавете същия обем от 0,1 N. разтвор на сярна киселина. Средата се стерилизира в продължение на 30 минути при температура 112 ° C. Към разтопената и охладена до 50 ° C среда се добавя 1 ml 10% разтвор на оловен ацетат, стерилизиран два пъти с течаща пара, разбърква се и се добавят 9 ml от нормален конски серум. Средата се излива стерилно в малки епруветки от 2 ml. Сеитбата се извършва чрез инжектиране.
Сряда Бунин. Суха среда хинозол се добавя към 100 ml студена вода(рН 7,6-7,8), разбърква се и се загрява на слаб огън до разтопяване на агара (според указанията на етикета). След това средата се вари в продължение на 2-3 минути до образуване на пяна, след което средата се охлажда до 50 ° C и се добавят 5-10 ml стерилна дефибринирана кръв. Средата се смесва и се изсипва в петриеви панички. Приготвената среда може да се съхранява 3-4 дни при температура 4-10°.
Тинсдалска сряда. Към 100 ml 2% хранителен агар, разтопен и охладен до 50 ° C, добавете: 1) 12 ml 1% разтвор на цистин при 0,1 N. разтвор на сярна киселина; 2) 12 ml 1% разтвор на натриев хидроксид; 3) 1,8 ml 2% разтвор на калиев телурит; 4) 1,8 ml 2,5% разтвор на натриев хипосулфит, 20 ml нормален конски или говежди серум. След добавяне на всяка съставка, средата се разбърква старателно. Чашите със среда се съхраняват 3-4 дни при 10°С.
Въпрос 2. Corynebacterium diphtheriae (род Corynebacterium)
C. diphtheriae - пръчковидни бактерии; причиняват дифтерия (на гръцки diphtheria - кожа, филм) - остра инфекция, характеризираща се с фибринозно възпаление във фаринкса, ларинкса, по-рядко в други органи и симптоми на интоксикация.
Морфологични и културни свойства.
Corinebacterium diphteriae са тънки, леко извити или прави грам-положителни пръчици, разположени под ъгъл една спрямо друга под формата на римски петици. Те са удебелени в краищата поради наличието на зърна валутана единия или двата полюса на клетката. Валутните зърна се състоят от полифосфати, те възприемат анилинови багрила по-интензивно от цитоплазмата на клетката и лесно се откриват при оцветяване по Neisser под формата на синьо-черни гранули, докато телата на бактериите са оцветени в жълто-зелено. Оцветяването по грам не разкрива валутни зърна.
Вземане на цитонамазка от чиста култура. Петно по Neisser Натривка от чиста култура.
Алкално синьо оцветяване на Loeffler
Дифтерийният бацил няма киселинна устойчивост, неподвижен е, не образува спори, има микрокапсула с включен в състава си корд фактор. Клетъчната стена съдържа галактоза, маноза, арабиноза, както и голям брой липиди, включително киселинно неустойчиви миколови киселини.
Причинителят на дифтерия е факултативен анаероб, хетеротроф, расте при 37 o C върху сложни хранителни среди: коагулиран кръвен серум, кръвен телурит агар.
В избирателни среди след 8-14 часа образува пунктирани, изпъкнали жълтеникаво-кремави колонии с гладка или леко гранулирана повърхност. Колониите не се сливат и имат вид на шагренова кожа.
Върху телуритни среди причинителят на дифтерията образува черни или черно-сиви колонии след 24-48 часа в резултат на редукцията на телурит до метален телур.
Причинителят на дифтерията има висока ензимна активност. Диференциално диагностични характеристики C. diphteriae са:
липса на способност за ферментация на захароза и разграждане на урея,
способността да произвежда ензима цистиназа.
Причинителят на дифтерията не е еднакъв по културни и биохимични свойства. В съответствие с препоръките на Регионалния офис на СЗО за Европа видът C. diphteriae е разделен на 4 биовара: gravis, mitis, intermedius, belfanti.
Върху телуритна среда биоварът гравис образува сухи, матови, големи, плоски, сиво-черни колонии, надигнати в центъра. Периферията на колонията е светла с радиални ивици и неравен ръб. Такива колонии приличат на цвете на маргаритка. Biovar mitis образува малки, гладки, лъскави, черни, изпъкнали колонии с гладък ръб, заобиколени от зона на хемолиза. Биоваровете intermedius и belfanti всъщност принадлежат към биовара mitis, тъй като те не разграждат нишестето и тази характеристика е най-стабилна при C. diphteriae.
Антигенна структура. C. diphteriae имат О-антиген (липидни и полизахаридни фракции, разположени дълбоко в клетъчната стена) и К-антиген (повърхностен топлолабилен протеин). О антигенът е междувидов. Въз основа на К антигена се разграничават около 58 серовара.
Фактори на патогенност.Основните фактори за патогенност на C. diphteriae са повърхностни структури, ензими и токсини.
Повърхностни структури (пили, компоненти на микрокапсулата: корд фактор, К-антиген, миколови киселини) имат протеинова и липидна природа, насърчават адхезията на микробите на място входна порта, предотвратяват фагоцитозата на бактериите, имат токсичен ефект върху клетките на макроорганизма и разрушават митохондриите.
Патогенни ензими: невраминидаза, хиалуронидаза, хемолизин, дермонекротоксин. Невраминидазаразделя N-ацетилневраминовата киселина от слуз и гликопротеини на клетъчната повърхност, лиазаго разгражда на пируват и N-ацетилманозамин, и пируватстимулира растежа на бактериите. В резултат на действието хиалуронидазапропускливостта на кръвоносните съдове се увеличава и освобождаването на плазма извън техните граници, което води до подуване на околните тъкани. Дермонекротоксинпричинява некроза на клетките на мястото на локализиране на патогена. Плазменият фибриноген, освободен извън съдовете, влиза в контакт с тромбокиназата на некротичните клетки на тялото и се превръща във фибрин, който е същността на дифтерийното възпаление. Вътре в дифтерийния филм C. diphteriae намира защита от ефекторите на имунната система и антибиотиците, размножавайки се и образувайки големи количества основният фактор на патогенността едифтериен хистотоксин.
Дифтериен хистотоксин има блокиращ ефект върху синтеза на протеини в органите, които са най-интензивно кръвоснабдени: сърдечно-съдовата система, миокарда, нервната система, бъбреците и надбъбречните жлези.
Епидемиология.При естествени условия от дифтерия страдат само хора, които нямат резистентност към патогена и антитоксичен имунитет. Заболяването е широко разпространено. Най-голям брой болни се наблюдават през втората половина на септември, октомври и ноември. Най-податливи са децата в предучилищна и начална училищна възраст. Сред възрастни към група повишен рисквключват работещите в общественото хранене и търговията, училищата, предучилищните и лечебните заведения.
C. diphteriae е устойчив на фактори на околната среда: в капчици слюнка, полепнали върху съдове или играчки, върху дръжките на вратите те могат да се задържат до 15 дни, върху предмети от околната среда за 5,5 месеца и могат да се размножават в млякото. При варене C. diphteriae умират в рамките на 1 минута, в 10% разтвор на водороден прекис - след 3 минути, в 5% разтвор на карболова киселина и 50-60% алкохол - след 1 минута.
Дифтерийният хистотоксин е много нестабилен и бързо се разрушава при излагане на светлина, нагряване и окисление.
Патогенеза.
Източник на инфекцияса:
1. носители на токсигенни щамове - особено опасни са тези носители, които нямат клинични прояви на заболяването, тъй като имат антитоксичен имунитет.
2.пациенти: Сред пациентите най-голямо значение имат тези с локализация на процеса в горните дихателни пътища. Пациентът е епидемиологично опасен през целия период на заболяването, дори по време на периода на възстановяване той отделя токсигенни щамове в околната среда.
Основен механизъм на инфекция е аерозол. Пътища на предаване:
водещата роля принадлежи на въздушните капчици,
понякога могат да се появят въздушен прах, битов контакт, а също и хранителни (чрез мляко) пътища на предаване.
Входна портаинфекции обслужват лигавиците на орофаринкса ( сливицитеи околните тъкани), носа, ларинкса, трахеята, както и лигавиците на очите и гениталиите, увредена кожа, повърхност на рана или изгаряне, незараснала пъпна рана.
Най-често дифтерия на гърлото ( 90-95%). Инкубационният период продължава от 2 до 10 дни. По своята патогенеза дифтерията спада към токсинемични инфекциикогато микробът остава на входната врата на инфекцията и всички клинични прояви са свързани с действието на екзотоксина.
Начална фаза инфекциозен процесе адхезията на микроба на входната врата. Размножавайки се там, микробът отделя g истотоксин, който има локален ефект върху тъканните клетки и също така навлиза в кръвта, което води до токсинемия.
В областта на входната врата се развива възпалителна реакция, която е придружена от некроза на епителните клетки и оток, образува се бяло покритие със сивкав или жълтеникав оттенък, съдържащо голям брой микроби, които произвеждат токсин.
Характерен симптом на дифтерията е фибринозен филм:
Ако се образува лигавицата еднослоен епител(ларинкс, трахея, бронхи), възниква лобарно възпаление, тук филмът е разположен повърхностно и лесно се отделя от подлежащите тъкани.
Ако се образува лигавицата стратифициран епител(орофаринкс, епиглотис, гласни струни), възниква дифтеритно възпалениекогато всички клетки са здраво свързани една с друга и с подлежащата основа на съединителната тъкан. В този случай фибринозният филм е плътно споен с подлежащите тъкани и не може да бъде отстранен с тампон. Когато се опитате да направите това, лигавицата кърви.
Имунитет.След боледуване се формира устойчив и интензивен хуморален антитоксичен имунитет. Продължителността на постваксиналния имунитет е 3-5 години.
Микробиологична диагностика.
Материал за изследванее фибринозен филм, слуз от гърлото или носа.
Вземането на материал трябва да се извърши в рамките на 3-4 часа (не по-късно от 12 часа) от момента на контакт с пациента. За събиране на материал се използват сухи памучни тампони, ако сеитбата ще се извърши в рамките на 2-3 часа, при транспортиране на материала тампоните се навлажняват с 5% разтвор на глицерин.
Диагностични методи:
Основният диагностичен метод е бактериологичен.Бактериологичната лаборатория трябва да даде отговор до 48 часа за наличието или отсъствието на C. diphteriae в изследванията.
Материалът се посява върху хранителна среда. Подозрителните колонии се избират и изолираната култура се идентифицира:
Въз основа на наличието на цистиназа (тест на Pizou): тестовата култура се инокулира в колона от хранителен агар с цистин. Посевите се инкубират 24 часа при 37 o C. C. diphteriae причинява почерняване на средата по дължината на инжекцията в резултат на образуването на оловен сулфид.
За наличие на уреаза (проба на Сакс): приготвят се алкохолен разтвор на урея и разтвор на индикатор - фенолово червено, които се смесват преди употреба в съотношение 1:9 и се изсипват в аглутинационни епруветки. Бактериите, които трябва да се изследват, се въвеждат в примка и се търкат по стената на подреденото средство. В положителния случай, след 20-30 минути инкубация при 37 o C, средата става червена в резултат на разграждането на уреята от уреаза.
Способността на C. diphteriae да произвежда токсин (определена чрез реакция на утаяване в агар). За да направите това, лента от филтърна хартия, импрегнирана с антитоксичен дифтериен серум, съдържащ 5000 AE/ml, се поставя в петриево блюдо с хранителен агар, съдържащ 15-20% конски серум, 0,3% малтоза и 0,03% цистин. Чашата се изсушава при 37 0 С в продължение на 30 минути и тестовите щамове се инокулират с плаки на разстояние 0,6-0,8 cm от ръба на хартията. Културите се инкубират при 37 0 С в продължение на 24 часа.В положителен случай на кръстовището на токсина с антитоксина в средата се образува утайка под формата на бели линии - "антени".
За да се определи токсигенността на причинителя на дифтерия, може да се използва биоанализ.Морското свинче се инжектира интрадермално или подкожно с тестовата култура. Токсигенните култури убиват животните в рамките на 3-5 дни; при аутопсия се откриват хиперемирани надбъбречни жлези, а при интрадермална инфекция се открива кожна некроза.
За бактериоскопско изследване(като независим диагностичен методрядко се използва поради полиморфизма на патогена, но може да се извърши при поискване от лекар) намазки се приготвят от материала върху няколко стъкла, едната намазка се оцветява с Грам, другата с Найсер, третата се третира с флуорохром - корифосфин за флуоресцентна микроскопия.
Наличието на антитоксичен имунитет се оценява по реакцията на Шик - реакцията на неутрализиране на токсин от антитоксин. 1/40 DLM дифтериен токсин се инжектира в кожата на предмишницата. Зачервяването и подуването на мястото на инжектиране показва липсата на антитоксини в кръвта. Отрицателната реакция от Chic показва наличието на антитоксини.
За ускорено откриване на дифтериен токсин, както в бактериални култури, така и в кръвен серум, се използва следното: RNGA с антитяло еритроцитна диагностика, RIA и ELISA.Използват се молекулярно-генетични методи на изследване PCR.
Препарати за специфично лечение на дифтерия.
За неутрализиране на дифтериен хистотоксин се използва специфичен антидифтериен конски пречистен концентриран серум,който се получава чрез хиперимунизиране на коне с дифтериен антитоксин.
При клинично съмнение за дифтерия веднага се започва специфично лечение с антидифтериен серум.Необходимо е да се избере оптималният режим на приложение на серума, тъй като антитоксинът може да неутрализира само токсина, който не е свързан с тъканите. За да се предотврати развитието на анафилактичен шок, серумът се прилага частично според A.M. Безредке. Прилагането на серум по-късно от 3-тия ден от заболяването не е препоръчително.
Проектирана от човешки антидифтериен имуноглобулинза интравенозно приложение. Използването му причинява по-малко нежелани реакции.
За да се потисне пролиферацията на C. diphteriae на входната врата, трябва да се предписват антибиотици. Лекарствата по избор са пеницилин или еритромицин, или други β-лактами и макролиди.
Препарати за специфична профилактика на дифтерия.
За създаване на изкуствен активен антитоксичен имунитет те използват дифтериен токсоид.Пречистеното и концентрирано лекарство е част от свързаните ваксини:
1. адсорбирана ваксина срещу коклюш-дифтерия-тетанус (DTP ваксина),
2. адсорбиран дифтерийно-тетаничен токсоид (ADS-токсоид),
3. адсорбиран дифтерийно-тетаничен токсоид с намалено съдържание на антиген (ADS-M),
4. адсорбиран дифтериен токсоид с намалено съдържание на антиген (AD-M).
При децата се създава основен имунитет според схемата за ваксиниране. Само 95% ваксинационен обхват на населението гарантира ефективността на ваксинацията.
Микробиологично изследване, позволяващо идентифициране на причинителя на дифтерия (C. diphtheriae) в изследвания биоматериал.
Синоними руски
Култура за бацил на Льофлер, посявка за BL, посявка за дифтериен бацил.
английски синоними
Култура на Corynebacterium diphtheriae, култура на дифтерия.
Изследователски метод
Микробиологичен метод.
Какъв биоматериал може да се използва за изследване?
Тампон от гърлото и носа.
Какъв е правилният начин за изследване?
Не е необходима подготовка.
Обща информация за изследването
Corynebacterium diphtheriae (бацили на Leffler) са грам-положителни бактерии от род Corynebacterium, които са причинители на дифтерия и са способни да произвеждат дифтериен токсин. Болестта се предава по въздушно-капков път, източник на инфекция са болни хора или бактерионосители.
Инкубационният период е средно 2-5 дни. Протича фибринозно възпаление на лигавиците на орофаринкса и дихателните пътища с образуване на псевдомембрани и симптоми на обща интоксикация.
При токсична формаДифтерията може също да засегне сърцето и нервната система. В някои случаи е възможно безсимптомно носителство.
Диагнозата на дифтерия се основава на клинични данни, за потвърждение се извършва дифтерийна култура.
За какво се използва изследването?
- За потвърждаване на диагнозата дифтерия.
- За диференциална диагнозазаболявания, протичащи с подобни симптоми, като тонзилит от различен произход, перитонзиларен абсцес, инфекциозна мононуклеоза, остър ларинготрахеит, епиглотит, бронхиална астма.
- За оценка на ефективността на провежданата антибактериална терапия.
Кога е насрочено изследването?
- Ако има съмнение за дифтерия.
- Когато е известно, че пациентът е бил в контакт с болни от дифтерия.
- След антибактериална терапия– не по-малко от 2 седмици след приключване на курса на антибиотици.
- В някои случаи, преди хоспитализация в болница (за профилактични цели).
Какво означават резултатите?
Референтни стойности:няма растеж.
Идентифицирането на причинителя на дифтерия потвърждава диагнозата дифтерия или, ако няма симптоми на заболяването, показва носителство на бактерията. При отрицателен резултаткултура при пациент със съмнение за дифтерия, диагнозата може да бъде потвърдена, когато контактни лицаРезултатът от културата е положителен, т.е. причинителят на дифтерията е изолиран.
Причини за положителен резултат
- Дифтерия или асимптоматично носителство на C. diphtheriae.
Причини за отрицателен резултат
- Няма дифтерия. Изключение правят случаите, когато по време на изследването е проведено антибиотично лечение.
Какво може да повлияе на резултата?
Предишна антибактериална терапия.
Важни бележки
Диагнозата дифтерия се основава на клиничната картина на заболяването, така че лечението трябва да започне преди да се получи лабораторно потвърждение на заболяването. Ако резултатът от културата е положителен, е необходимо да се изследва изолираният щам на C. diphtheriae за токсигенност.
- Култура на флората с определяне на чувствителността към антибиотици
Кой поръчва изследването?
Специалист по инфекциозни заболявания, терапевт, лекар Генерална репетиция, педиатър, УНГ.
Литература
- Макгрегър Р.Р. Corynebacterium diphtheriae. В: Принципи и практика на инфекциозните заболявания / G.L. Mandell, Bennett JE, Dolin R (Eds); 6-то изд. – Чърчил Ливингстън, Филаделфия, Пенсилвания 2005. – 2701 p.
- Efstratiou A. Лабораторни указания задиагностика на инфекции, причинени от Corynebacterium diphtheriae и C. ulceran / A. Efstratiou, R.C. Георг // Заразни болести и обществено здраве. – 1999. – кн. 2, № 4. – С. 250–257.
- Съвременни подходи към лабораторната диагностика на дифтерия / A. Efstratiou // J. Infect. дис. – 2000. – кн. 181 (Допълнение 1). – С. S138–S145.
Съдържанието на статията
Corynebacterium дифтерия
Описан за първи път от E. Klebs през 1983 г. и изолиран от F. Leffler през 1984 г.Морфология и физиология
Corynebacterium diphtheria има форма, характерна за целия род. Те са разположени под ъгъл един спрямо друг под формата на римски петици. Волутиновите зърна се идентифицират чрез оцветяване с оцетна киселина в синьо по метода на Neisser, който оцветява само включванията, без да засяга цитоплазмата. Дифтерийният бацил е заобиколен от микрокапсула и има пили. C. diphtheriae е взискателна по отношение на хранителния субстрат. Те се нуждаят от много аминокиселини, въглехидрати, минерални соли. Те обикновено се култивират върху съсирена кръв и кръвен агар с калиев телурит. Върху последната среда се образуват колонии от два вида: gravis - тъмно сиви на цвят и mitis - черни на цвят, които се различават една от друга по биохимични характеристики.Антигени
C. diphtheriae съдържа К-антиген в микрокапсула, което им позволява да бъдат диференцирани в серовари и групово-специфичен полизахариден антиген на клетъчната стена, който дава кръстосани серологични реакции с микобактерии и нокардия. Патогенност и патогенеза. Вирулентните фактори на дифтерийните бактерии са пили и микрокапсули, с помощта на които те се прикрепят към епителните клетки на сливиците, по-рядко ларинкса, трахеята, носната кухина, конюнктивата на окото и вулвата. След това настъпва колонизация на епителни клетки, което е придружено от появата възпалителен процес. Токсичността е свързана със секрецията на хистотоксин, който се състои от две субединици: токсичен полипептид и транспортен полипептид, отговорен за доставянето на токсичния компонент до целевите клетки. Образуването на първия се контролира от бактериални гени, а вторият - от гените на фага, който лизогенизира бактериалната клетка. Това показва, че само лизогенните клетки на C. diphtheriae могат да секретират хистотоксин.Фиксирането на хистотоксина се извършва върху рецепторите на мембраните на мускулните клетки на сърцето, сърдечния паренхим, бъбреците, надбъбречните жлези и нервните ганглии. В този случай протеиновият синтез на рибозомите е блокиран, което в крайна сметка води до клетъчна смърт. При дифтерия, като правило, няма бактериемия и септицемия поради локализирането на C. diphtheriae в клетките на ларинкса, където се развива фибринозно-некротично възпаление с образуването на филми, лимфаденит и оток, което може да доведе до асфиксия. В допълнение към дифтерия на ларинкса, C. diphtheriae причинява дифтерия на раневи повърхности и гениталии. Дифтериоподобните коринебактерии включват: C. xerosis причинява хроничен конюнктивит, C. ulcerans - леки форми на дифтериоподобни заболявания, C. pyogenes и C. haemolyticum - улцерозен некротичен фарингит, тонзилит, гингивостоматит. C. pseudodyphtheriae е постоянен обитател на кожата и лигавиците.Имунитет
Интензивността на постинфекциозния имунитет при дифтерия се дължи на високо нивоантитоксин в кръвния серум. Антибактериалните антитела, образувани по време на дифтерия - аглутинини, преципитини и други - нямат защитни свойства. За наличието или отсъствието на антитоксичен имунитет се съди по реакцията на Шик - неутрализиране на токсин от антитоксин. Когато V40 DLM дифтериен токсин се инжектира в кожата на предмишницата, се появява зачервяване и подуване при липса на антитоксин в кръвта. При наличие на антитоксин реакцията на Шик е отрицателна.Екология и епидемиология
Местообитанието на C. diphtheriae са хората, в чиито гърла са локализирани. Дифтерията засяга предимно децата. Въпреки това през последните 30 години дифтерията е узряла. При възрастни дифтерията е тежка и може да бъде фатална. IN заобикаляща средаДифтерийните бактерии остават жизнеспособни няколко дни, тъй като понасят изсушаване. Заразяването става по въздушно-капков път и по-рядко чрез контакт.дифтерия
Дифтерия - остра, предимно при деца заразна болест, което се проявява с характерно фибринозно възпаление на мястото на локализиране на патогена и тежка интоксикация на тялото с дифтериен екзотоксин. Неговият причинител е Corynebacterium diphtheriae, който принадлежи към род Corynebacterium. Преди този род има още около 20 вида бактерии, които са патогенни за хората, животните и растенията. От тях най-голямо значение има за практическа медицинаимат следното:1. S. ulcerans - може да причини фарингит, кожни лезии, открива се и при здрави хора, в млечни продукти и съдове за транспортирането им, някои щамове са токсигенни.2. S. jeikeium (бивш Corynebacterium JK) - причинява пневмония, ендокардит, перитонит, инфектира рани и кожа.3. C. cistitidis (бивш коринебактериум група D2) - инициира образуването на камъни в пикочните пътищаи пневмония.4. S. minutissimum - причинява еритразма, белодробни абсцеси, ендокардит.5. S. haemolyticum - може да причини тонзилит, целулит, мозъчни абсцеси, остеомиелит, хроничен дерматит.6. C. xerosis - преди се смяташе за причинител на ксерозата (хроничен конюнктивит), сега се класифицира като сапрофит.7. C. pseudodiphtheriticum е сапрофит, който живее върху лигавицата на човешкия назофаринкс.Вземане и доставка на материал в лабораторията
Материалът за изследване е филм от сливиците, арките, небцето, увулата, слуз от фаринкса и носа, по-рядко секрет от окото, ухото, раната, вагината, засегнатата област на кожата. По заявка на епидемиолога се изследват измивки от играчки и други предмети, някои хранителни продукти(мляко, сладолед). Материалът трябва да се вземе преди началото на етиотропното лечение на гладно или 2 часа след хранене.За вземане на материала се използват сухи или предварително навлажнени с 5% разтвор на глицерин тампони, поставени в епруветка и стерилизирани с то. Материалът за изследване се взема от орофаринкса и носа с два отделни тампона, като се стреми да се вземе на границата на здравата и засегнатата зона с ротационни движения, без да се допира тампона до лигавицата на бузите, зъбите и езика, което е притиснати с шпатула. По време на ларингоскопията се взема филм или слуз директно от ларинкса. Филми и слуз от устата и носа трябва да се вземат във всички случаи, дори и при дифтерия с редки локализации (кожа, рана, око, ухо, вулва).Ако е необходимо да се проведе първоначална бактериоскопия по искане на лекар, материал се взема с отделен (допълнителен) тампон или част от заснетата проба се изпраща филм, внимателно смлян между две предметни стъкла.След вземането на материала тампоните се поставят в същите епруветки, на които се записват номерът, датата и изписват се час на вземане и името на лекаря. Те трябва да бъдат доставени в лабораторията не по-късно от 3 часа след вземането на материала. Ако схемата за вземане на проби включва вземането му до леглото на пациента, тогава епруветките и съдовете с култури незабавно се изпращат в лабораторията или се инкубират при 37 ° C и се доставят след 20-23 часа, в студено време в торби с нагревателни подложки.Бактериоскопско изследване
Бактериоскопско изследване на материал от пациент се извършва само по искане на лекар и само за разпознаване на некротизираща ангина на Симановски-Плаут-Венсънт (идентификация на вретеновидни пръчици и спирохети на Винсент, които не растат при конвенционално култивиране методи).В продължение на много години микроскопско изследванеи идентифицирането на волютинови зърна, оцветени по методите на Leffler и Neisser, беше основата за лабораторната диагностика на дифтерия и откриването на бактериално носителство. Сега, поради променливостта на дифтерийните бактерии под въздействието на антибиотици, не се препоръчва първична микроскопия на тестовия материал.Бактериоскопичното изследване се извършва за идентифициране на атипични колонии върху кръвно-телуритни среди и при проверка на чистотата на изолирани култури. Натривките се оцветяват с Gram, Leffler и Neisser. Можете да ги боядисате с метилацетатно виолетово, толуидиново синьо или бентиазолови и тиазинови багрила.Дифтерийните бацили в петна са разположени под ъгъл, под формата на латински букви V, X, Y, или образуват клъстери, наподобяващи купчина разпръснати кибрит. Волутиновите зърна са разположени, като правило, на полюсите на микробните клетки. Псевдодифтерийните бактерии и дифтероидите са разположени успоредно (под формата на „ограда“) и, разбира се, нямат волютинови зърна. Зърната на Babesch-Ernst могат да бъдат открити с помощта на флуоресцентна микроскопия, когато петната се оцветяват с корифосфин. Зърната придобиват оранжево-червен цвят на фона на жълто-зелени тела на бактериални клетки.Бактериологични изследвания
Клиничният материал се инокулира върху кръвен агар и кръвен телуритен агар (или среда на Клауберг II), изсипва се в петриеви панички. Посяването върху кръвен агар е необходимо за откриване на друга микрофлора. В допълнение, някои щамове на Cdiphtheriae са чувствителни към действието на калиев телурит, така че техният растеж върху телуритна среда може да бъде инхибиран. За откриване на носителство на дифтерийни бактерии, културите се правят само върху кръвен телуритен агар, тъй като инокулумът може да съдържа малко количество дифтерийни бацили, чийто растеж върху неселективни среди ще бъде потиснат от друга микрофлора. В този случай се допуска и използването на транспортна среда.Кръвен телурин агар
Към 100 ml 2% хранителен агар, pH 7,6, разтопен и охладен до 50 ° C, добавете 10-15 ml дефибринирана кръв и 2 ml 2% разтвор на калиев телурит. Сместа се разбърква старателно и се изсипва в стерилни петриеви панички на слой с дебелина 3-4 mm.Клауберг сряда II
Към 100 ml 3% хранителен агар с рН 7,6, разтопен и охладен до 50 ° C, добавете 3 ml 2% разтвор на калиев телурит, 10 ml глицеринова смес и 50 ml хемолизирана кръв. Приготвя се глицеринова смес чрез добавяне на 20 ml стерилен глицерин към 40 ml дефибринирана кръв. Сместа може да се съхранява в хладилник 4 месеца. За да приготвите хемолизирана („лакирана“) кръв, добавете 16 ml дефибринирана кръв към 34 ml стерилна дестилирана вода.Транспортна полутечна среда
Към 100 ml Hottinger's digest или месопептонен бульон добавете 1 g всеки търговски агар, настройте рН на 7,6, стерилизирайте в автоклав при 112 ° C за 30 минути, добавете 10 ml серум и 1 ml 2% калиев телурит асептично . Средата се излива в епруветки от 5 ml. При възможност се използва и по-сложна транспортна среда Emes (AMIES), модифицирана от Stewart.Инокулацията от един пациент се извършва в една плака, като се използва половината от средата за инокулация от орофаринкса (сливици, дъги, увула), а втората за посявка с друг тампон от носа. Ако има материал за изследване от кожата, очите, ушите и други локализации, добавете още една чаша. Не можете да засеете материал от няколко пациенти върху една чиния. Преди инокулацията средата се затопля в термостат за 15-20 мин. При инокулация на тестовия материал се втрива с тампон първо в отделен участък кръвен агар с площ 2x1 cm, след това по същия начин върху кръвен телуритен агар (или среда Clauberg II), докато тампонът се върти постоянно, за да се инокулира целият материал от него. След това със същия тампон останалите повърхности на средата (половин чаша) се инокулират с ивици. Тази техника на посяване произвежда изолирани колонии (чиста култура), които се използват директно от плаката за определяне на токсигенността и последваща идентификация. Инокулираните блюда или епруветки с транспортна среда се инкубират в термостат при 37 ° С в продължение на 20-24 часа.На втория ден естеството на колониите се изследва с помощта на стереоскопичен микроскоп. Ако няма растеж и на двете среди, материалът се взема повторно.Избират се блюда с типични и съмнителни колонии за C.diphtheriae за по-нататъшно идентифициране на културата с помощта на всички тестове. Не е необходимо да се прави микроскопия на подозрителни колонии Колониите от дифтериен бацил върху кръвен агар са белезникави или жълтеникав цвят, непрозрачни, кръгли, леко изпъкнали, 1-2 mm в диаметър. Те обикновено имат мазна консистенция, въпреки че някои могат да образуват крехки, твърди колонии R. Върху кръвно-телуритни среди KonomiC.diphtheriae имат сив цвят , изпъкнал, с гладък ръб, вискозен. След 48 часа те придобиват тъмносив или черен цвят с метален блясък, равни или леко назъбени ръбове, гладка или с радиално набраздена повърхност (R-форма), вискозни или крехки при докосване с примка. 48-часови колонии върху телуритни среди и Някои ензимни характеристики на причинителя на дифтерия разграничават четири културни и биохимични варианта (биовари) - gravis, mitis, belfanti, intermedius Биоварът gravis обикновено образува сиви или черни матови сухи колонии, крехки, плоски, гладка, 1,5-2 мм в диаметър, с радиална ивица на повърхността, силно токсична, не предизвиква хемолиза, разгражда нишесте и гликоген.Биоварите mitis и belfanti растат под формата на сиви или черни, кръгли гладки изпъкнали колонии с гладки ръбове, 1-1,5 mm в диаметър, тези опции са по-малко токсични, причиняват хемолиза, но не разграждат нишестето и гликогена Biovar intermedius образува малки, сиви, прозрачни колонии с диаметър 0,5-1 mm, с плоска, гладка повърхност, той е слабо токсичен, не разгражда нишестето и гликогена.Ако няма типичен растеж, се приготвят намазки от други, съмнителни колонии. Ако в тях се открият спорови бацили, коки, дрожди и др., изследванията за дифтерия се спират и се дава отрицателен отговор. Важно е обаче да запомните, че дифтерийните бактерии, които са образували нетипични колонии върху среда с инхибитори на растежа (калиев телурит), могат да бъдат съкратени, удебелени, но запазват полиморфизъм и характерно местоположение.Когато типичните колонии растат, те веднага започват да изучават тяхната токсигенност и идентифициране. Токсигенните свойства се изследват в най-малко 2 изолирани колонии чрез посяване на една половина от всяка колония върху среда за определяне на токсигенността и неизгоряла с примка върху среда Pisa, а втората половина върху наклонен серумен агар за изолиране на чиста култура и съхраняването й до край на лабораторната диагностика. Ако токсигенни и нетоксигенни разновидности на C. diphtheriae растат едновременно върху плоча, е необходимо да се изследват токсигенните свойства на около 20 колонии в случай на многократен растеж на подозрителни колонии, засяване на материал от 5-6 колонии в една плака. Когато само една колония расте, тя се инокулира върху среда за определяне на токсигенността и, калцинирайки примката, в епруветка със среда Pisu.Ако е използвана транспортна среда, висящата среда се превръща в плътна кръвно-телуритна среда. трети ден, когато се появят специфични линии на утаяване в агар гел и положителен тест за цистиназа, изолираната култура се определя като токсигенна C. дифтерия. Ако след 24 часа няма линии на утаяване, съдовете се инкубират за още един ден. В случай на отрицателен Пиза тест, културата се идентифицира като вид коринебактерия.Чиста култура върху наклонен суроватъчен агар се засява върху въглеводородна среда с глюкоза, захароза, разтворимо нишесте и се вземат проби за откриване на уреаза, пиразинамидаза и нитратредуктаза.На четвъртия ден се записват резултатите от всички култури и се дава мотивиран доклад.бактериологично заключение за изолираната култура.Използват се следните методи за идентифициране на коринебактериите.Определяне на токсичността in vitro
Основава се на взаимодействието на токсин с антитоксин в агар гел. На местата на оптимално количествено съотношениеТоксинът и антитоксинът се утаяват в дебелината на агара под формата на тънки деликатни бели линии („стрелки“, „антени“). Този тест се нарича Elek тест в много страни в чужбина Тестът за токсигенност обикновено се извършва с чисти култури. Може да се определи и с култури, замърсени с чужда микрофлора, което ускорява лабораторната диагностика на дифтерия на ден. Но ако тестът е отрицателен, той се повтаря с изолирана чиста култура.За извършването на този тест микробиологичната индустрия произвежда специална суха стандартна среда за определяне на токсигенността на дифтерийни микроби (DTDM) и стандартни хартиени дискове, напоени с антитоксични анти- дифтериен серум и се изсушава.Върху повърхността на прясно приготвената DTDM среда с антитоксин (не повече от четири на чаша) се поставят хартиени дискове. На разстояние 0,5 cm от диска около него се засяват култури под формата на "плаки" с диаметър 7-8 mm, редуващи се "плаки" на изследваната култура и контролния щам.Резултатите се вземат предвид след 18-24 и 48 години. Критерият за специфичност на преципитатите е сливането на преципитационните линии на изследваната култура с линиите на токсигенния щам. В този случай изолираната култура се счита за токсигенна.При липса на стандартни хартиени дискове могат да се използват ленти от филтърна хартия, напоени с дифтериен антитоксин. те се правят директно в лабораторията. Хартиени ленти, нарязани на определените размери и стерилизирани в автоклав при 121 ° C за 30 минути, се навлажняват с 0,25 ml пречистен дифтериен антитоксин, който съдържа 500 IU на ml. В този случай върху чашата с подходяща среда нанесете хартиена лента, навлажнена с антитоксин, и я подсушете, като отворите чашата за 15-20 минути в термостат и я обърнете надолу. След това се инокулират култури от „плаки" от двете страни на лентите, редуващи се тестови и контролни щамове. За да се определи токсигенността на патогена на дифтерия, можете да използвате и други среди (AGV, открит агар и др.), рецептите за които са дадени в "Инструкции за бактериологична диагностика на дифтерия", Киев (1999 г.). В продължение на много години токсигенността на дифтерийните бактерии се определя чрез подкожно или интрадермално инжектиране на култура в две морски свинчета, едното от които е инжектиран със 100-1000 IU антитоксичен дифтериен серум предишния ден. Сега този метод бактериологични лабораториипрактически почти не се използва поради висока цена и значително забавяне на реакцията.B напоследъкразработи много чувствителен и силно специфичен метод за определяне на гена на дифтериен токсин чрез полимеризация верижна реакция. Базира се на определяне на ДНК региона на C. diphtheriae, където генът на дифтериен токсин е локализиран с помощта на специфични праймери. Методът има предимства пред традиционното определяне на токсигенността: висока чувствителност, бързи резултати (4-6 часа) и не изисква изолиране на чиста култура. Но изисква специално оборудване, скъпи реактиви и подходящи помещения, поради което може да се извърши само в специализирана лаборатория. Всички нетоксигенни щамове на дифтерийни бактерии, изолирани от пациенти и носители на бактерии, трябва да бъдат изпратени в Украинския център за държавен санитарен и епидемиологичен надзор (където има такава лаборатория) за окончателно определяне на токсигенните свойства на C. diphtheriae.Определяне на цистиназа (тест на Pizou)
C. diphtheriae, C. ulcerans отделят ензима цистиназа, псевдодифтерийните бактерии и други дифтероиди го произвеждат.Изолираната култура се инокулира в среда с цистин, излята в колона в тесни епруветки. Позитивните за цистиназа бактерии разграждат цистина с отделянето на сероводород, който с оловен ацетат, включен в средата, образува оловен сулфат, в резултат на което средата става тъмнокафява. S. diphtheriae не само причинява потъмняване на средата след хода на инжектирането, но също така образува „облак“ около нея тъмно кафявона разстояние 1 см от повърхността. Резултатите се отчитат след 20-24 часа инкубация в термостат.Определяне на уреаза (тест на Sachse)
Дифтерийните бактерии не произвеждат този ензим. Само няколко други вида коринебактерии дават положителен тест за уреаза. За извършване на теста изолираната култура се засява в бульон с урея. Уреазата разлага уреята, променя pH на околната среда, придружено от нейното зачервяване. Ако ензимът не се отдели, цветът на бульона не се променя.Определяне на пиразинамидаза
Определянето на пиразинамидаза се извършва чрез хидролиза на пиразинамид в пиразинова киселина и амоний. За да направите това, изсипете 0,25 ml стерилна дестилирана вода в стерилна епруветка, в която се приготвя гъста суспензия от изолираната култура, след което добавете една диагностична таблетка Rosko 598-21. Инкубира се 4 часа при 37°C, след което се добавя една капка прясно приготвен 5%. воден разтворамониев железен сулфат. В присъствието на ензим суспензията става червена или оранжева. Патогенните коринебактерии не отделят пиразинамидаза и следователно не променят цвета на суспензията.Захаролитични ензими
Захаролитичните ензими се определят чрез посяване на пълна бримка от изолираната култура във всяка епруветка от съкратената пъстра серия Hiss (глюкоза, захароза, разтворимо нишесте). Резултатите се вземат предвид след 24 часа инкубация в термостат. Разграждането на нишестето може да се забави до 48 часа.Определяне на нитратредуктаза
Определянето на нитратредуктаза е допълнителен тест за идентифициране на C. belfanti и C. ulcerans, които не произвеждат този ензим. Тестовата култура се инокулира в епруветка с бульон, към който се добавя 0,1% KN03 и се инкубира в термостат за 24 часа. Задължителен контрол с незасята среда. В случай на наличие на нитратредуктаза, когато 3 капки от реагента на Касаткин се добавят към инокулирания бульон, се появява червен цвят. Средата в контролната епруветка не променя цвета си.За идентифициране на коринебактерии наскоро бяха използвани хартиени индикаторни дискове с глюкоза, захароза, урея и нишесте от набор „Б“ за идентифициране на ентеробактерии (компания ImBio, Нижни Новгород). В 4 епруветки се приготвя гъста суспензия от тест културата и във всяка от тях се потапя диск със съответния въглехидрат или друг реактив. След инкубиране в термостат освобождаването на уреаза се записва след 40-120 минути и захаролитичната активност се определя след 5-24 часа. При наличие на уреаза белият диск с урея става розово-пурпурен, при липса остава бял. Дискове с глюкоза и захароза, в присъствието на подходящи ензими, променят цвета си от червено на жълто след 5-6 часа. При определяне на амилазата към епруветка със съответния субстрат се добавя индикаторен диск с йод. Ако няма ензим, се появява тъмносин цвят, ако има, цветът на разтвора остава непроменен.Специфична профилактика и лечение
Ваксиналната профилактика на дифтерия се извършва чрез прилагане на дифтериен токсоид, получен чрез третиране на дифтериен токсин с формалдехид. У нас за ваксиниране се използва DPT - адсорбирана ваксина срещу коклюш-дифтерия-тетанус. Антитоксичен серумизползвани за специфична терапия, а антибиотиците - за саниране на бактерионосителите. Антибиотиците включват пеницилин, ванкомицин, еритромицин и др.Corynebacterium diphtheriae е открита и след това изолирана в чиста култура преди 100 години. Окончателното му етиологично значение за появата на дифтерия се потвърждава няколко години по-късно, когато се получава специфичен токсин, който причинява смъртта на животни с явления, подобни на тези, наблюдавани при пациенти с дифтерия. Corynebacterium diphtheriae принадлежи към род Corynebacterium, група коринефромни бактерии. Corynebacterium diphtheriae са прави или леко извити пръчици с разширени или заострени краища. Разделянето на счупване и разцепване осигурява характерно подреждане под формата на римска цифра V или разперени пръсти, но индивидуално разположените пръчки често се срещат в удари. Големи натрупвания от тях, които се срещат в намазки, приготвени от слуз от гърлото, носа и секрети от рани, имат филцов характер. Средната дължина на пръчиците им е 1-8 микрона, ширина - 0,3/0,8 микрона. Те са неподвижни и не образуват спори или капсули. Corynebacterium diphtheriae е факултативен анаероб. Дифтерийните бацили са устойчиви на изсушаване. При температура 60 °C в чистите култури те се разрушават за 45-60 минути. В патологични продукти, т.е. при наличие на протеинова защита, те могат да останат жизнеспособни за един час при температура 90 ° C. Ниските температури не оказват пагубно влияние върху дифтерийния бацил. IN дезинфектантиПри нормални концентрации те бързо умират.
Необходимо е да се отбележи изключително големият полиморфизъм на дифтерийните бацили, изразяващ се в промени в тяхната дебелина и форма (подути, колбовидни, сегментирани, нишковидни, разклонени).В крайните удебеления, а понякога и в централната част, след 12 часа на растежа на културата се откриват зърна Бабеш със специално оцветяване Ernst, които са натрупвания на волютин. Има доказателства, че волутинът е дълговерижен неорганичен полифосфат. М. А. Пешков предполага тяхната метафосфатна природа. A. A. Imshanetsky смята, че волутинът е страничен продукт от метаболитните процеси. Известно е, че фосфорът е необходим за образуването на зърна. Има и предположения за необходимостта от манган и цинк за този процес.
Волутинови зърна се намират в еднодневни култури, а след това броят на бактериите с наличие на зърна намалява.Цитоплазмата също съдържа нуклеотид, интрацитоплазмени мембрани - лизозоми, вакуоли.
Бактериите се оцветяват с всички анилинови бои. При оцветяване по метода на Грам те са положителни. Методът на Neisser се използва за оцветяване на волютинови зърна. При оцветяване с този метод зърната на волютин, които имат висок афинитет към метиленово синьо, са устойчиво оцветени Син цвят, а от тялото на бактерията, с допълнително оцветяване с хризоидин или бисмаркбраун, се измества метиленово синьо.
Причинителят на дифтерията е хетеротроф, т.е. принадлежи към групата бактерии, които изискват за своя растеж органична материя. Средите, използвани за култивиране, трябва да съдържат аминокиселини като източник на въглерод и азот - аланин, цистин, метионин, валин и др. В тази връзка избираеми среди за култивиране са тези, съдържащи животински протеин: кръв, серум, асцитна течност. Въз основа на това е създадена класическата среда на Leffler, а след това средите на Clauberg, Tyndall и натрупването.
В средата на Leffler колониите от дифтериен бацил имат лъскава, влажна повърхност, гладки ръбове и жълтеникав цвят. След няколко дни растеж се появяват радиални ивици на колониите и слабо дефинирани концентрични линии. Диаметърът на колониите достига 4 mm. Първите признаци на растеж се появяват след 6 часа в термостат при 36-38 °C. Растежът е ясно видим 18 часа след сеитбата. Оптимална стойност pH за растеж на дифтериен бацил е 7,6. Corynebacterium diphtheria често е трудно да се разграничи от други видове коринебактерии. За определяне на вида се използва комплекс от културни и биохимични характеристики.
Типът Corynebacterium diphtheria също е хетерогенен, той се разделя на 3 културни и биохимични типа gravis, mitis, intermedins, на две разновидности - токсигенни и нетоксигенни, редица серологични типове и фаготипове.
В момента в повечето територии циркулират два културно-биохимични типа - gravis и mitis. Типът интермедини, който по-рано се отличаваше доста широко, напоследък се среща рядко. Най-ясно разграничаване на видовете може да се направи по формата на колониите, когато културата се отглежда върху кръвен агар с добавка на телурит. Колониите от типа gravis достигат 1-2 mm в диаметър след 48-72 часа, имат вълнообразни ръбове, радиални ивици и плосък център. Външният им вид обикновено се сравнява с цвете на маргаритка. Колониите са матови поради способността на бактерията да редуцира телурит, който след това се свързва с получения сероводород, сиво-черен на цвят. Когато растат в бульон, културите тип gravis образуват разпадащ се филм на повърхността. Когато се засяват върху среда на Hiss с добавяне на суроватка, те разграждат полизахаридите - нишесте, декстрин, гликоген с образуването на киселина.
Култури от типа mitis върху телуритов кръвен агар растат като кръгли, леко изпъкнали колонии с гладки ръбове, матово черни. Когато се отглеждат в бульон, те произвеждат равномерна мътност и утайка. Те не разграждат нишестето, декстрина и гликогена.
В намазките пръчките от типа gravis често са къси, а типът mitis е по-тънък и по-дълъг.
Сравнително електронно микроскопско изследване на дифтерийни бацили от различни биохимични типове показва наличието на трислойна структура в типовете gravis и mitis. клетъчната мембрана. Обвивката на интермединовия тип е двуслойна и почти 3 пъти по-дебела. Между цитоплазмата и мембраната има пространства, изпълнени със зърна, които могат да бъдат свързани с екзотоксина. Виждат се косите ивици на бактериите, които се създават от разделителните стени между дъщерните клетки. Хромозомният апарат в типовете gravis и mitis е представен от обикновени зърна с вакуоли, в типа intermedins е разпределен в цялата цитоплазма. Електронен микроскоп разкрива многослойна мембрана, наличието на която обяснява защо дифтерийните бацили понякога са грам-отрицателни.
Колониите от дифтерийни бактерии се предлагат в S-, R- и SR-форми, като последната се счита за междинна. Н. Мортън смята, че колониите от S-форми са характерни за типа mitis, а SR-формите - за типа gravis. Освен тези основни форми се срещат мукоидни колонии – М-форми, колонии джуджета – D-форми и гонидиални колонии – L-форми. Всички те се считат за форми на дисоциативна променливост.
Дифтерийните бактерии трябва да се разграничават от дифтероидите и псевдодифтерийния бацил.
Голям брой изследвания са посветени на променливостта на дифтерийния бацил. Възможност за възникване атипични формив лабораторни условия е потвърдено от епидемиологични изследвания.
Биохимичната, морфологичната, физикохимичната променливост на дифтерийните бактерии, призната от голям брой изследователи, в някои случаи усложнява бактериологичната диагностика и налага цялостно изследване на културите.
Разделихме всички култури, изолирани при различни епидемиологични условия, на 8 групи; те включват всички възможни морфологични варианти на представителите на коринебактериите, които ни интересуват:
1-ва група - къси пръчици, дълги около 2 микрона, без зърна;
2-ра група - къси пръчици, дълги около 2 микрона, но понякога със зърна;
3-та група - пръчки със среден размер, дълги 3-6 микрона, широки 0,3-0,8 микрона, без характерна грануларност;
4-та група - пръчки със среден размер, дълги 3-7 микрона, широки 0,3-0,8 микрона, леко извити, понякога със зърна;
5-та група - пръчки със среден размер, дълги 3-6 микрона, широки 0,3-0,8 микрона, леко извити, гранулирани;
6-та група - дълги пръчици, дълги 6-8 микрона, широки 0,3-0,6 микрона, леко извити, понякога със зърна;
7-ма група - дълги пръчици, дълги 6-8 микрона, широки 0,3-0,8 микрона, обикновено извити, без зърна;
Група 8 - къси, грапави пръчици, дълги около 2 микрона, широки около 1 микрона, без зърна.
Местоположението на пръчките не се взема предвид при разпределянето им в групи, но обикновено характерното разположение съответства на морфологията.
В 1-ва, 2-ра, 3-та и 8-ма група, които съответстват по морфология на пръчките на Хофман, разположението е групово, успоредно или под формата на единични индивиди, в 4-та, 5-та и 6-та група, които съответстват главно по морфология на истинската дифтерия бактерии, пръчици, разположени под ъгъл или под формата на единични индивиди. В група 7 пръчките са били по-често подредени произволно, преплитайки се една в друга. В 8-ма група пръчките са разположени под формата на единични индивиди.
От изследваните 428 култури 111, въз основа на съвкупността от техните характеристики, трябва да бъдат класифицирани като истинска дифтерия, 209 са култури от бацили на Хофман, а 108 представляват група от нетипични култури. В културите, близки до дифтерията, атипичността се проявява в намаляване на биохимичната активност, понякога в разлагането на урея; в култури, които са морфологично близки до пръчките на Хофман, те запазват положителен тест за цистеин и способността да разграждат една от захарите.
От 111 дифтерийни култури 81 култури (73%) са морфологично типични, 28 култури (27%) имат морфологията на хофманови пръчици. От 111 дифтерийни култури имаше 20 култури от типа gravis, като от тях само 9 бяха причислени към 1-ва и 2-ра морфологични групи.
Култури, които са класифицирани въз основа на комбинация от характеристики като култури от бацил на Хофман, имат морфологията на типични култури за дифтерия в 20% от случаите.
25% от изследваните щамове са класифицирани като атипични култури, тяхната морфология съответства както на дифтериен бацил, така и на бацил на Хофман.
По този начин биохимичните и морфологични свойствакултурите не винаги съвпадат и биохимичната атипичност, както и морфологичната, се наблюдават по-често в култури, изолирани по време на период на намалена честота и следователно намаляване на нивото на носителство.
Необходимо е да се отбележи общото намаляване на биохимичната активност на културите през последните 10-15 години. Показател за това е забавената ферментация на захарите, която понякога настъпва на 5-6-ия ден, както и различната биохимична активност на колониите от една и съща култура.
Биохимичната идентификация на чисти култури, изолирани при различни епидемиологични условия, показва, че въпреки че морфологията и биохимичните свойства често не съвпадат, общият принцип на разпределение на културите, установен според морфологичните данни, не се променя. Както при разпределяне на културите според морфологични и биохимични данни, така и при пълното им идентифициране с включването серологични реакциипринципът на разпространение остава същият: атипичните култури са по-често срещани по време на периоди на епидемичен просперитет, бацилите на Хофман се откриват по-често по време на периоди на епидемични проблеми и се засяват по-дълго от истинската дифтерия.
Изследването на токсигенните свойства на изолирани култури върху твърди хранителни среди показа, че дори в периода на епидемичен просперитет има достатъчен брой носители на токсигенни дифтерийни бацили. Трябва да се отбележи, че токсигенните свойства не винаги могат да бъдат открити дори в култури, изолирани от пациенти. Това показва необходимостта от усъвършенстване на прилаганите методи за определяне на токсигенността на културите.
Резултатите от реакцията на аглутинация на атипични култури, изолирани при различни епидемиологични условия, показват наличието на същите модели за серологични свойства, които отбелязахме при изследване на морфологията и биохимията на културите. Атипичността на културите, изолирани в проспериращ район, според серологичните данни, е по-дълбока, отколкото в необлагодетелстваните райони. Така в благоприятна зона 26% от атипичните култури са дали положителна реакция на аглутинация, в неблагоприятни райони - 19%.
Едно от основните свойства на дифтерийния бацил е способността да образува токсини. Токсиногенезата на Corynebacterium diphtheria се определя от гена, съдържащ се в профага; следователно основното средство за агресия - образуването на токсини - не е свързано с бактериалната хромозома.
Дифтерийният токсин е протеин с молекулно тегло 6200 далтона. Силата на токсина се определя чрез извършване на интрадермални тестове за наличие на некротични ефекти и ефект върху възприемчиви животни ( летален ефект). Силата на токсина се измерва с помощта на минималната летална доза, която е най-малкото количество токсин, което може да причини смъртта на морско свинче с тегло 250 g на 4-5-ия ден, когато се прилага интраперитонеално. Токсинът има антигенни свойства, които се запазват при третиране с формалдехид, който премахва токсичните му свойства. Това направи възможно използването му за приготвяне на профилактично лекарство.
Молекулата на токсина се състои от два фрагмента, единият от които е термостабилен и има ензимна активност, а вторият е термолабилен и изпълнява защитна функция. Доказана е вътреклетъчна синтеза на токсина с освобождаването му през тубулите на клетъчната стена. Синтезът на токсина се осъществява, когато микробът се отглежда в течна среда - месо-пептонен бульон с добавяне на глюкоза, малтоза и растежни фактори при рН 7,8-8,0.
Според последните данни дифтерийният токсин е продукт с вирусен произход. Като потвърждение И. В. Чистякова изтъква способността на нетоксигенните коринебактерии да се трансформират в токсигенни под въздействието на фаг. Възможността за превръщане на нетоксигенни култури в токсигенни е потвърдена в експерименти върху едноклетъчни култури. Описаното явление се нарича лизогенна конверсия. Използвайки умерени вируси, получени от токсигенни щамове на gravis, беше възможно да се превърне нетоксигенният вариант на Corynebacterium diphtheria gravis в токсигенен.
Е. В. Бакулина, М. Д. Крилова предполагат, че фокалната конверсия може да бъде важна в епидемичния процес. В тази връзка е започнато проучване на ролята му при образуването на токсигенни щамове на Corynebacterium diphtheria в природата. Възможността за преобразуване на токсигенността беше показана не само в системите фаги-бактерии, но и в природни условия. Но сред местните култури този процес, според редица изследователи, далеч не е обичаен. Причините за това вероятно са липсата на производители на умерени фаги, фаговата чувствителност на локалните щамове е различна от референтните щамове и следователно те не могат да бъдат реципиенти на конвертиращи фаги с известен спектър на действие.
Само в част от микробната популация е възможно да се преобразуват токсигенните свойства на дифтерийните бацили под въздействието на стафилококови и стрептококови фаги. В последните разработки въпросът за конверсията на фагите в епидемичния процес получава още по-сдържана оценка. Смята се, че tox+ коринефагите не играят роля в епидемичния процес на дифтерия независима роля. Носителите на нетоксигенни бацили могат да бъдат заразени с токс + фаг само заедно с токсигенен щам, а стафилококовите фаги не могат да преобразуват нетоксигенните коринебактерии. За да се извърши преобразуване в посока на токсигенност в човешкото тяло, очевидно е необходимо да има близък контакт между носител, който има конвертиращ фаг и носител, който секретира щам, който е лизочувствителен към този фаг. В допълнение към способността да образува токсини, дифтерийната бактерия има фактори на патогенност като хиалуронидаза, невраминидаза, дезоксирибонуклеаза, каталаза, естераза и пероксидаза. Изследването на извънклетъчните метаболитни продукти не показва разлики между токсигенните и нетоксигенните дифтерийни коринебактерии.
Понастоящем за вътрешноспецифично типизиране на Corynebacterium diphtheria, в допълнение към биохимичния метод, описан по-горе, могат да се използват серологични и фагови методи.
Наличието на серологични типове се дължи на типоспецифични, термостабилни, повърхностни и термолабилни антигени.
Съществуват редица схеми за серологично типизиране. В нашата страна използваме схемата, предложена от V. S. Suslova и M. V. Pelevina, но тя не може да осигури класификацията на всички нетоксигенни щамове. Броят на серологичните типове нараства. I. Ewing установява наличието на 4 серологични типа - A, B, C и D; D. Robinson и A. Peeney 5 типа - I, II, III, IV и V. L. P. Delyagina идентифицира още 2 серологични типа. Смята се, че броят на серологичните типове е много по-голям, главно поради типа митис. От малкото налични литературни данни за закономерностите при изолирането на един или друг серотип при различни формиинфекциозният процес и различните епидемиологични условия не са установени. Наред с данните за различната агресивност на културите, принадлежащи към различни серологични типове, има съобщения, които отхвърлят връзката на серологичния тип с патогенността на културите.
Характерно е, че в различни области се срещат различни серологични типове. Серологичното типизиране може да се използва за епидемиологичен анализ.
В условията на спорадична заболеваемост, ограничен брой носители, когато търсенето на източника на инфекция е много по-трудно, методът за фагово типизиране става важен, което позволява да се разделят коринебактериите на серологични и културни варианти. Маркирането може да се извърши според свойствата на фагите, изолирани от култура, и според чувствителността на културата към специфични бактериофаги. Най-широко използваната схема е предложената от R. Saragea и A. Maximesco. Тя ви позволява да етикетирате токсигенни и нетоксигенни щамове на всички културни варианти. С помощта на 22 типични фаги културите могат да бъдат разделени на 3 групи, в които са комбинирани 21 фагови варианта: 1-ва група - токсигенни и нетоксигенни щамове от типа mitis (фагови варианти I, la, II, III); 2-ри - токсигенни и нетоксигенни щамове от типа intermedins и нетоксигенен gravis (фагови варианти IV, V, VI, VII); 13 фагови варианта (от VIII до XIX) са включени в 3-та група, която обединява гравис токсигенни щамове.
Схемата е тествана върху голям брой щамове, изолирани в Румъния и получени от музеи в 14 страни. Фаговото типизиране е положително при 62% от щамовете; щамовете от типа gravis са особено успешно маркирани. Сред последните, принадлежността към един от фаговите варианти е установена в 93%. Специфичните реакции с типичните фаги в токсигенните щамове от типа gravis според схемата на тези автори се основават на инфекция на щамовете с различни вируси.
В нашата страна изследванията в областта на фаготипирането са извършени от М. Д. Крилова. Авторът разработи схема за маркиране на фаги, базирана на принципа, предложен от Williams и Rippon за типизиране на плазмокоагулиращи стафилококи: вариантът на фага беше обозначен с името на типа фаг, който го лизира в тестово разреждане. Фагите и вариантите на фагите в схемата на М. Д. Крилова са обозначени с букви от латинската азбука: главни букви - фаги, които дават конфлуентен и полуконфлуентен лизис, малки букви - лизис под формата на плаки. Въз основа на това бяха разработени модифицирана схема за типизиране на фаги за нетоксигенни коринебактерии от варианта gravis и схема за типизиране на фаги за токсигенни коринебактерии от варианта gravis.
