Кристалната структура на слюнката. поддържане на здравето на зъбите

Глава 2. Актуални проблеми при диагностицирането и проследяването на ефективността на лечението на язва на дванадесетопръстника. Характеристики на кристалографията на слюнката при гастродуоденална патология (преглед на литературата).

2.1 Инструментално определяне на лигавичен дефект при язва на дванадесетопръстника.

2.2 Морфологична диагностика на фазата на възпаление при дуоденална язва.

2.3 Сегашно състояниедиагностика на инфекция с Helicobacter pylori.

2.4 Възможности за използване на кристалография на слюнката в диагностиката и оценката на ефективността на лечението на пептична язва.

Глава 3. Обхват и методи на изследване.

Глава 4. Характеристики на кристалографската картина на слюнката при язва на дванадесетопръстника.

Глава 5. Обсъждане на резултатите от изследването.

Глава 6. Изводи.

Въведение в дисертацията (част от автореферата) на тема "Кристалография на слюнката в диагностиката и мониторинга на ефективността на лечението на язва на дванадесетопръстника"

Списък с литература за дисертационно изследване Кандидат на медицинските науки Воробьов, Александър Викторович, 2004 г

Моля, имайте предвид, че представените по-горе научни текстове са публикувани с информационна цел и са получени чрез разпознаване оригинални текстоведисертации (OCR). Следователно те могат да съдържат грешки, свързани с несъвършени алгоритми за разпознаване. В PDF файловете на дисертациите и резюметата, които предоставяме, няма такива грешки.

ДИПЛОМНА КВАЛИФИКАЦИОННА РАБОТА
„Използване на кристалоскопия за идентифициране остра левкемияв AKR мишки"

Въведение................................................. ....... ................................... 3
Глава I. Литературен преглед............................................. ......... 3
1.1 Кристалография на биологични течности 6
1.1.1 Основни понятия за кристалното състояние на материята 6
1.1.2 Процеси на кристализация в живи системи.................................. 8
1.1.3 Кристалографски характеристики на биологични течности... 8
1.1.4 Морфология на биологичните течности 8
1.2 Кристалографски методи на изследване.................................. 12
1.2.1 Предпоставки за изучаване на явлението кристализация на биологични течности..................................... ............. ............. 12
1.2.2 Съвременно състояние на идеите за кристалографските методи на изследване.................................................. ............. 18
1.2.2.1 Общи характеристики на техниката за тезиокристалоскопия на биологични субстрати. ............. ............... 25
2. Обекти, цели и методи на изследване..................................... ........... 26
2.1 Цели, задачи и етапи на изследването.................................................. ........... 26
2.2 Приготвяне на ястия и работна зона..................................... ...... 28
2.3 Приложни методи на изследване.................................................. ...... 28
2.3.1 Тестова процедура на тезиокристалоскопия 28
2.4 Статистическа обработка на данни ............................................. ...... 43
3. Резултати от изследванията ............................................. ........... 44
3.1 Морфология на урината на здрави и изкуствено заразени мишки с левкемия.................................................. ............................................................ 44
3.2 Основните критерии за оценка на тезиграфския фациес на урината при мишки при нормални условия и при патология (левкемия). ......... 46
3.3 Линейни мишки AKR ............................................. ...................... 49
3.4. Динамика на развитие на левкемия.................................................. ......... 50
3.5 Заключения................................................. ... .............................
Списък на използваната литература ............................................. ..... 52

Въведение

Съвременните биотехнологии са синтез от научни постижения в различни области на природните науки: медицина, биология, математика, физика, химия и други науки. Ж. Алферов, лауреат на Нобелова награда по физика, отбеляза, че през последните години неговите ученици са постигнали особено значими резултати в работата, извършена в пресечната точка на физиката и биологията, физиката и медицината. Пример за това е подходът към решаването на най-актуалния съвременен социален проблем – диагностиката и ефективното лечение на злокачествените заболявания. Всяка година много милиони деца и възрастни хора, както и ценни селскостопански животни, умират от левкемия. В цял свят технологиите за развитие и лечение на левкемия при хората се изучават върху животни от строго определена генетична линия. Повече от 10 години Федералната държавна институция „KNIIG и PC FMBA на Русия“ провежда изследвания за развитието на продължителна левкемия, използвайки модела на мишка ACR. Въпреки напредъка, постигнат в областта на експерименталната и клинична левкемия, проблемът с описаната патология е много далеч от окончателното си разрешаване.
През последните 40 години активно се развива нова диагностична посока - кристалоскопия, основана на определяне на качествения състав на биологичните течности чрез образуването на кристални структури в тях.
Първи опит клинично приложениекристалографията датира от началото на 60-те години на миналия век. Първоначално повечето изследователи използват тезиграфския метод. През 1964 г. Daems провежда изследване на кръвни кристалограми на пациенти с хипертрофия на простатата и карцином. J.Leal и B.Finlayson (1977) установиха особеностите на образуването на кристали в урината.

А.А.Кожинова и Л.С. Масленникова (1968). В.Я. Неретин и В.И. Киряков (1977) използва този метод за изследване на цереброспиналната течност на пациенти с различни заболявания на главния и гръбначния мозък. В работата на D.B.Kalikshtein и др.(1981) е изследвана тезиграфската картина на урината на пациенти с различни бъбречни заболявания. VV Usin (1995) изследва кристалографските промени в цереброспиналната течност и слюнката при пациенти с хронични неврогенни болкови синдроми на главата и лицето. Освен това тезиграфията се използва за диагностични и прогностични цели в педиатрията, гинекологията, гастроентерологията и други области на медицината.
Понастоящем кристалоскопският анализ се използва за изследване на почти всички биологични течности (кръв, урина, слюнка, цереброспинална течност, жлъчка, назален секрет и др.). Кристалните структури на биологичните течности съдържат най-важната информация за състоянието на даден орган, отделна система на тялото и тялото като цяло.
В момента интересът на учените към използването на метода за кристалография на биологични течности в медицината остава висок. По този начин са разработени и въведени в практиката множество диагностични техники за улесняване на изследването на широк спектър от характеристики на биосубстратите (биохимични, имунологични, морфологични, биофизични тестове и др.). Слабото място на повечето от изброените методи е високата им цена поради използването на скъпи реактиви, оборудване и обучението на висококвалифициран персонал. Всичко гореизложено налага поддържането и поддръжката на достатъчно голям брой поддържащи услуги.
Въпреки това, променящите се икономически условия изискват разработването и прилагането на високоефективни и рентабилни методи за диагностициране на левкемия.
Кристалоскопският метод има значителна диагностична чувствителност и затова е намерил широко приложение първо в практиката на съдебно-химическия анализ, а след това и в медицината. Това позволи да се разширят възможностите за диференциална диагностика при определяне на естеството на патологичния процес (алергичен, възпалителен и др.), При идентифициране на наличието на анемия, оток, интоксикация и степента на нейната тежест. Използвайки метода на кристалография на биополимери, е възможно да се определи патологията различни органи. Тъй като тази техника включва комбинирането на материални частици с кристалообразуващ разтвор, естеството на злокачествения процес може да се съди по образувания модел на кристали (Kontorschikova K.N. et al. (2002-2012).
Целта на тази дисертация е да се разработи метод за кристалоскопски анализ на урина на AKR мишки за диагностика на остра левкемия.

1 Литературен преглед.
1.1 Кристалография на биологични течности

Терминът "кристал" идва от гръцката дума "krystallos", което означава "лед". В кристала атомите и молекулите образуват подредена структура (кристална решетка). Кристалите са важни както в неживата, така и в живата природа, което е основата за обособяването на самостоятелен клон - кристалография. Кристалографията е наука за структурата и физичните свойства на единични кристали и кристални агрегати, явления, възникващи в кристална среда под влияние на вътрешни свойства или външни влияния.

1.1.1 Основни понятия за кристалното състояние на материята

Кристалите се образуват от пара, разтвор, стопилка, аморфно вещество или от вещество в друго агрегатно състояние. Кристализацията започва при определени външни условия, например преохлаждане на течността, пренасищане на пара, дехидратация на разтвора, когато много малки кристали постепенно се появяват около центровете на кристализация. Кристалът расте чрез добавяне на атоми или молекули от течност или пара.
Има равновесни и реални форми на кристалите. Равновесната форма на кристалите се постига само при равновесни условия, т.е. с безкрайно бавен процес на кристализация.
Тъй като параметрите външна средаразнородни във времето и пространството, в кристалната структура неизбежно възникват различни дефекти. По този начин реалните (принудени) форми на кристалите отразяват не само симетрията на кристала, но и влиянието на външните условия на растеж (концентрацията на различни вещества в средата на образуване на кристали, температура, налягане и т.н.) върху всякакви промени в което кристалите реагират много чувствително. Някои кристални форми са показани на фиг. 1.

А b V

Ж д д

и ч И

Фиг. 1 Форми на кристали в различни биологични течности: a, b - нишковидни, c, d, e, f, g - сферулитни образувания с радиално разположени игли; z-потиснат дендрит; и – разклонен дендрит.
Най-естествен и технически твърди материалиса поликристали, монокристалите се наричат ​​монокристали. Когато металите и солите кристализират, често се образуват дървовидни кристали - дендрити. При кристализация от един или няколко центъра се образуват сферолити, състоящи се от радиално разположени кристални игли.

1.1.2 Процеси на кристализация в живите системи

Всички биологични среди на животинското и човешкото тяло имат специфична молекулярно подредена структура, тъй като те са лиотропни течни кристали. Живият организъм е сложна, силно динамична система, в която непрекъснато протичат процеси на взаимодействие на много структурни компоненти помежду си и околната среда. При нормални условия колебанията в биофизичните параметри на тялото са ограничени в относително тесни граници. Въпреки това, в определени ситуациите могат да надхвърлят нормални границиза достатъчно дълъг период. В някои случаи това се обяснява с адаптирането на тялото към необичайни нови условия на съществуване, в други с дълбоко нарушение на хомеостазата с постоянна декомпенсация. Тези сложни, силно динамични процеси са ясно отразени в характеристиките на кристалните структури на различни биологични течности или биополимери.

1.1.3 Кристалографски характеристики на биологични течности

Известно е, че метаболитните нарушения, като компонент на патогенезата различни заболявания, води до промяна химичен състави физикохимични свойства на биологични течности (наричани по-нататък биофлуиди). Сложните динамични процеси, протичащи в биофлуидите, се отразяват в морфологичните характеристики на структурите, образувани по време на кристализацията на проби от биофлуиди. Понастоящем са разработени и се използват в клиничната практика оригинални диагностични методи, базирани на структурен анализ на биологични течности. Структурите на твърдата фаза на биологичните течности се образуват от молекули и главно микроагрегати от органични и минерални вещества, разтворени в биологичната течност. Специфичните характеристики на структурите се определят от общите физикохимични свойства на биофлуида, количествения и качествен състав на молекулите на тези вещества и способността им да установяват вътремолекулни и междумолекулни химични връзки. В резултат на това структурата на биологичните течности носи цялостна информация за състоянието на метаболизма на органите на субекта, измити от биофлуида, и за хомеостазата на тялото като цяло.
Морфологията на биологичните течности е доказана научно направлениев областта на медицината, ветеринарната медицина и други науки. Образуването на структурата на биофлуид по време на кристализация има ясни модели.
Замърсяването на околната среда с различни токсини, сред които тежките метали (ТМ) заемат специално място, води до значително повишаване на вероятността от някои заболявания, включително рак. Комбинацията от морфологичен анализ на телесна течност с нейния локален елементен анализ може да служи като нов аналитичен инструмент за изследвания в областта на ранната диагностика на рака.
Напредъкът в подобряването на микрохимичния анализ, кристалната оптика и тезиграфията предостави основата за изучаване на кристалните структури на биологични течности на хора и животни при различни патологии. Кристалографските процеси в биологичните течности привличат все по-голямо внимание от учените. Изследванията, проведени през последните десетилетия, са фокусирани върху идентифицирането на връзката между кристалографските характеристики на биофлуидите и развитието на патологични процеси в тялото; или си поставят за задача да изследват влиянието на външни въздействия върху образуването на кристални структури в биофлуидите (Skopinov S.A. et al. 1997).
Така в една биологична течност може да се наблюдава комплекс от структурни пренареждания от разтвор към кристали. Кристалографският анализ дава възможност да се открият патологични промени в кристалната решетка на супрамолекулно ниво. Тези промени могат да служат като ранен диагностичен критерий за развитие на патологичен процес.

1.1.4. Морфология на биологичните течности

Изследването на морфологичната картина на различни биофлуиди е добре познато направление в естествените науки, на което учените от много дисциплини започнаха да обръщат специално внимание през последните години. Понастоящем е разработен метод за получаване на информация за състоянието на тялото, функциите на отделните органи и тъкани на етапа на изразено клинични проявлениязаболявания и в предсимптоматичен стадий, т.е. на ниво развитие на патологичен процес от едно или друго естество (възпалителни, онкологични, образуване на камъни, хипоксично-исхемични, склеротични и др.). Методът за кристалография на различни биополимери е прост в техниката и записването на резултатите. Проучени морфологична картинадехидратирана (изсъхнала) капка биологична течност, която представлява стандартна тънка секция. Например, когато се изследва капка урина, може да се определи активността на процеса на образуване на камъни в бъбречната тъкан и състава на съществуващ или развиващ се камък в бъбреците (урати, калциев оксалат, калциев фосфат); остър или хроничен ход на кандидоза на пикочно-половата система, хипоксично-исхемично увреждане на бъбречната тъкан и тежестта на процеса (хипоксична нефропатия, интерстициален нефрит, остра бъбречна недостатъчност, бъбречен инфаркт); бактериална инфекция (без определяне на вида на патогена).
Една капка биологична течност може да разбере от какво е болен човек и от какво е той биологична възраст. Капка изсъхнала течност се поставя върху истинско стъкло на микроскоп и на монитора се появява многократно увеличено изображение. "В капка слюнка, взета на празен стомах, се виждат фракционни трирадиални пукнатини, това е доказателство за стагнация. А в капка, взета след закуска, няма пукнатини, което означава, че каналите на слюнчените жлези са в ред. Но киселинността на стомашния сок е леко намалена, сега има капка на кръвния серум на екрана, тя прилича на бутон с ръб и е покрита с радиални пукнатини, структурата на пукнатините е подложена на внимателен анализ: моделът по периферията предполага, че кръвното налягане на пациента се повишава понякога поради вазоспазъм.
Професор С.Н. Шатохина обяснява, че тялото може да бъде разделено на две системи: клетъчна и неклетъчна. Целият свят изучава клетките на първо място, но биологичните течности, които свързват клетките една с друга, носят много информация за техните жизнени функции. Когато една капка биофлуид изсъхне, кодираната в нея информация става видима. „По време на прехода към стабилно състояние силата на връзките се увеличава с два порядъка", обясняват изследователите. „След отстраняване на водата остава филм, върху който модел на пространствено разположение на елементи, които преди това са били в се регистрира разтворено състояние”, болестта винаги е придружена от натрупване на някакви химикали, което променя структурата, нарушава се симетрията и се появяват същите тези „езици”, „листа” или „плочи”, които професор С.Н. Шатохина е открита в пациента. И за да открият тези модели, изследователите разработиха специален метод за изсушаване на капчици. Една капка слюнка може да ви каже много. Отразява кариес и пародонтоза. И също така, например, гноен отит, което води до появата на ламеларни форми в капка слюнка. Анализирайки капка стомашен сок, специалистите идентифицират хронични гастрити и язви; ставна течност - артроза; накрая, разкъсвания - глаукома, катаракта, възпалителни процеси в ретината.
Днес учените работят в тясно сътрудничество с клиницистите, като им помагат да видят скрити патологии и да усъвършенстват методите на лечение. Чрез анализиране на биофлуиди изследователите могат също така да определят истинската биологична възраст на човек. Произвежда се от ламеларни структури в кръвния серум, които по химическа природа са холестерол. От него в бъдеще ще се формира атеросклеротични плакина съдове. Това е един от най-важните „маркери на стареенето“. Учените също така оценяват взаимния потенциал на здравето; за това кръвта в епруветка се облъчва с електромагнитно поле или лазер - след такова излагане междумолекулните връзки се разрушават, следователно, когато такава кръв изсъхне, моделът на филма ще бъде различен; в здрав човек отнема четири часа за възстановяване на връзките след облъчване. Ако отнеме ден или три, трябва да се тревожите. Изследователите смятат, че с помощта на този метод е възможно да се определи дали човек е способен да работи в екстремни условия

1.2 Кристалографски методи на изследване.
1.2.1 Предпоставки за изучаване на явлението кристализация на биологични течности

През последната четвърт на миналия век се наблюдава значителен интерес от страна на научната общност към кристалографските методи на изследване, изследвани от гледна точка на практическото им приложение като алтернативен подход в клиничната диагностика. Те позволяват цялостна оценка на способността за кристализация на различни биологични субстрати. През последните години започна активно да се развива нова диагностична посока - клинична кристалография, основана на определяне на качествения състав на течност чрез образуването на кристални структури.
Методът за качествено определяне на химични вещества по техните кристалографски характеристики е предложен за първи път от студента M.V. Ломоносов - Т. Е. Ловиц. През 1804 г. последният описва два метода за качествен анализ на веществата - методът на „изветрените солни отлагания“ и методът, базиран на промяна на нормалното образуване на кристали чрез въвеждане на друга съставка в разтвора на кристализиращото вещество, като по този начин поставя основата за две съвременни области на кристалографията:
1) кристалография на естествени течности - метод, основан на определяне на качествения състав на течност от кристалите, които образува по време на изпаряване;
2) тезиграфия - метод, основан на добавяне на стандартен кристалообразуващ разтвор към тестваната течност и анализиране на промените в кристалите на стандартния разтвор в присъствието на тестваната течност.
Първият опит за клинично приложение на кристалографията датира от началото на 60-те години на миналия век. Първоначално повечето изследователи използват тезиграфския метод. През 1964 г. Daems провежда изследване на кръвни кристалограми на пациенти с хипертрофия на простатата и карцином. Leal J. и Finlayson B. (1977) установяват характеристиките на образуването на кристали в урината.
Използването на кристалографски методи за изследване (CRI) в домашната медицина е докладвано за първи път в работата
Кожинова А.А. и Масленникова Л.С. (1968). Неретин В.Я. и Киряков В.И. (1977) този метод е използван за изследване на цереброспиналната течност на пациенти с различни заболявания на мозъка и гръбначния мозък. В работата на D.B.Kalikshtein и др.(1981) е изследвана тезиграфската картина на урината на пациенти с различни бъбречни заболявания. Усин В.В. (1995) изследват кристалографските промени в цереброспиналната течност и слюнката при пациенти с хронични неврогенни болкови синдроми на главата и лицето. Освен това тезиграфията се използва за диагностични и прогностични цели в педиатрията, гинекологията, гастроентерологията и други области на медицината.
Понастоящем кристалографският анализ се използва за изследване на почти всички биологични течности (кръв, урина, слюнка, цереброспинална течност, жлъчка, назален секрет и др.). Кристалните структури на биологичните течности съдържат най-важната информация за състоянието на съответните органи и тъкани.
За първи път е използван кристалографски анализ на слъзна течност (TF) за диагностика на офталмологична патология
Ченцова О.Б. със съавтори през 1985 г. Те предложиха техника за тезиграфия на слъзната течност - кристалография с добавяне на алкохолен разтвор на меден хлорид. В конична епруветка се поставят 0,02 ml сълзи и при непрекъснато разклащане се добавят 0,1 ml 2% алкохолен разтвор на меден хлорид. Епруветката се затваря с памучен тампон и се оставя да се утаи на стайна температура. След 1 час и 20 минути капка от получения разтвор се нанася върху предметно стъкло, което се поставя в петриево блюдо в термостат при температура 25°С за два часа. След инкубационния период се извършва макро- и микроскопска оценка на резултатите.
Характеристики на тезиграфската картина са отбелязани при пациенти с възпалителни, дистрофични и туморни заболявания на очите и орбитата. Според Ченцова O.B. et al., кристалографският модел (CPC) на слъзната течност при възрастни и деца обикновено представлява прозрачни, дълги, рядко разположени цилиндрични кристали, които са събрани в правилен геометричен модел, най-често под формата на триъгълник. Ченцова О.Б. et al.(1989) извършват CGI на SF за диференциална диагноза на орбитални заболявания. Авторите идентифицират качествени разлики от нормата в сълзните препарати при пациенти с ендокринна офталмопатия, възпалителни заболявания на орбитата и неоплазми.
Оттогава кристалографското изследване се използва от тези и други автори при диагностицирането на различни очни заболявания.
Тюриков Ю.А., Покоева В.А. (1992) използва техниката тезиграфия с добавяне на наситен воден разтвор на глицин и ежедневно излагане на стайна температура. Характерни промени са открити в кристалограмите на пациенти с вътреочни и орбитални неоплазми.
Редица автори използват SG тезиграфия не само за диагностика, но и за динамично наблюдение на GC на SG на засегнатото око (Kokarev V.Yu. et al., 1990; Somov E.E., Brzhesky V.V., 1994; E.I. Ustinova et al. (1996) препоръчват метода на кристалографско изследване на SF като допълнителен лабораторен тест за диференциална диагноза и изясняване на фазата на активност на туберкулозния процес.
Чухман Т.П. (1999) подобриха техниката на SG тезиграфия, като предложиха да се замени дългосрочното утаяване на смес от сълзи и кристалообразуващ разтвор с центрофугиране, което намали времето за изследване. Също така беше извършен CGI на SG за различни възпалителни очни заболявания и идентифицирани характерни видовекристали, което направи възможно навременното идентифициране на усложненията дори на предклиничния етап. В допълнение, авторът изследва влиянието на различни външни фактори (температура на сушене на препаратите, влажност), както и методите за събиране на сълзи върху кристалогенезата.
Интересът на учените към използването на метода на тезиграфия на биологични течности в медицината остава висок и до днес. Тезиграфията обаче се оказа доста трудоемка техника, изискваща използването на допълнителни реактиви и трудна за интерпретация на резултатите (Шатохина С.Н., Шабалин В.Н., 1997). Освен това моделите на процеса на кристализация, на които се основава методът на тезиграфията, не са известни. Търсенето на по-прости и по-достъпни методи за кристалографско изследване доведе до появата на редица трудове, посветени на кристалографията на естествени препарати от биофлуиди.
В резултат на това възниква необходимостта от разработване на експресен метод, който да се използва като първичен тест при диагностицирането на различни заболявания. Освен това необходимите изисквания за неговия избор са достатъчна степен на точност и възможност за широко използване без инвестиране на значителни материални ресурси (Меншиков В.В., 1988; Назаренко Г.И., Кишкун А.А., 2000; Зеленин В.А., Буличев В.Ф., Стеклова Г.П. и др., 2004).
Специалисти от различни области на медицината се заинтересуваха от този проблем. Последствието от това беше бързото развитие на диагностиката на слюнката, която, от една страна, беше неинвазивна, от друга, направи възможно бързото получаване на предварителни резултати (Боровски E.V., Леонтьев V.K., 1991; Sukmansky O.I., 1991; Комарова Л. Г., Алексеева О. П., 1994; Антропова И. П., Габински Я. Л., 1997; Бутаев М. Т., 1998; Григориев И. В., Чиркин А. А., 1998; Булгакова В. А., 1999; Еричев И. В., Коротко Г. Г., Решетова I.V., 1999; Денисов A.B., 2000, 2001;).
Методите за качествено определяне на химичните съединения по способността им да кристализират са предложени за първи път от Т. Е. Ловиц, ученик на М. В. Ломоносов, през 1804-1805 г. В своите трудове той описва два оригинални теста за качествен анализ на структурата на изследваните вещества. Това е „методът на отлагане на изветрена сол“ (кристални отлагания), както и микрокристални реакции. Първото от горното беше основата на метода за качествено определяне на лекарства, разработен много по-късно (Книжко П. О., 1956; Бубон Н. Т., Пузиревски К. Я., 1965; Николская М. Н., Гандел В. Г., Попков В. А., 1965; Лобанов В. И., 1966). Техниката на микрокристалните реакции сега е намерила приложение в съдебната медицина (Белова A.V., 1960; Semenova T.D., 1972; Taher M.A. Assad, 1995).
В контекста на развитието на идеите за кристализацията на човешките биологични течности става актуален въпросът за неговата приложимост в диагностиката на различни патологични състояния (Кокуева О.В., Савина Л.В., Лий А.М., 2000; Зубеева Г.Н., Мотилева И.М. , Потехина Ю. П., 2001; Шабалин В. Н., Шатохина С. Н., 2001; Воробьов А. В., Воробьова В. А., Нещакова Н. Л., 2002; Алексеева О. П. , Воробьов А. В., 2003; Волосникова Н. Н., Музлаев Г. Г., Савина Л. В. и др. др., 2003; Рапис Е. Г., 2003; Анаев Е. Х., Шатохина С. Н. ., Чучалин А. Г., 2004).
В тази връзка, кристалоскопските методи за изследване, насочени към дешифриране на метаболитна информация, скрита в качествени и количествен съставбиологични среди.
Освен това една унифицирана схема за анализ може да допринесе за обединяването и опростяването на кристалографските изследвания. Това ще бъде полезно както при диференциална диагноза, така и при извършване на тест за ориентация.
Важен фактор за стандартизиране на резултатите от диагностичната кристализация на биологичните субстрати на тялото може да бъде унифицирана форма на заключение върху кристалоскопски тест, включително информация за качествени и количествени промени в състава на лицето на пациента по отношение на лицето на практически здрави. индивиди (промени в броя и размера на структурите, поява на патологични за даден биофлуид образувания и др.).

1.2.2 Съвременно състояние на идеите за кристалографията
изследователски методи

Кристалографски методи на изследване– набор от методологични подходи за извличане на информация за метаболизма и хомеостазата на тялото и/или неговите части, базирани на феномена на свободно или инициирано от основни вещества с различен химичен състав кристално образуване на изсушена течност или течен биологичен материал с последваща интерпретация от резултатите от кристалогенезата.
През последните тридесет години са формирани множество методологични подходи за извършване на диагностична кристалоскопия, но трябва да се отбележи, че повечето от тях са по същество само модификация на условията за провеждане на процеса на дехидратация, докато изглежда възможно да се разграничат само три принципни възможности: свободна кристализация, в случай че анализираната биологична течност е директно изсушена; инициирана кристалогенеза, когато се визуализира резултатът от дехидратацията на системата "биологична среда - основно кристалообразуващо вещество", основно въз основа на изследването на структурния генезис на последното; частична кристализация (метод на моделни композити) е набор от методи за пресъздаване на отделни компоненти на кристалоскопската картина на определен биологичен субстрат и поради това е значим преди всичко за научни изследвания.
Като цяло, към днешна дата в съвременната кристалоскопия са предложени следните методи:
1) Класическата кристалоскопия (Kalikshtein D.B., Moroz L.A., Kvitko N.N. et al., 1990; Savina L.V., 1992, 1999; Shabalin V.N., Shatokhina S.N., 2001; Alekseeva O.P., Vorobyov A.V., 2003) е един от най-често срещаните варианти за извършване на тест за дехидратация, чиято същност, както вече беше посочено, е директната кристализация на биологични течности. Приготвянето на препарати може да се извърши както при стайни условия, така и в термостат (37-400 ° C), но според многобройна литература продължителността на приготвяне на микропрепарати от биологични среди е 1-2 дни, което очевидно не отговаря на изискванията за бързи тестове. В тази връзка са необходими значителни корекции на условията на сушене, за да се оптимизира времето, изразходвано за приготвяне на микропробата.
Трябва да се отбележи, че този кристалоскопски подход позволява да се оценят кристалообразуващите свойства на биофлуид и следователно не само да се получат диагностично значими фациеси (кристализирани проби), но и да се установи наличието на отделни компоненти на анализирания субстрат (Savina L.V., Pavlishchuk S.A., Samsygin V. Yu. et al., 2003). Този въпрос не е адекватно разрешен в специализираната литература, но е важен за практическото идентифициране на патологични включвания в биологични среди, биология и медицина - изследване на патогенетичните аспекти на патологията на човека и животните, както и разумния подбор и оценка на ефективността на лекарствената и немедикаментозната терапия (Буйко А. С., Цикало А. Л., Терентьева Л. С. и др., 1977; Еричев И. В., Коротко Г. Г., Решетова И. В., 1999; Зайчик А. Ш., Чурилов Л. П., 2001; Алексеева О. П., Воробьов A. V., 2003; Baydaulet I. O., 2003). Това налага изследването на особеностите на кристалогенезата на компонентите на биологичните течности, включително чрез частично моделиране на дехидратацията. Някои начини за решаване на този проблем бяха предложени от L.V. Savina et al. (2003). С цялото значение на този методологичен подход трябва да се признае, че в този случай не се взема предвид един от най-важните фактори, които определят естеството на кристалогенезата на биосубстрат - наличието на междумолекулни взаимодействия между компоненти на биофлуид, които се различават в химическата структура, което от своя страна играе важна роля във формирането на окончателни кристалоскопични картини, по-специално определяне на броя и диаметъра на „първичните зони“ на фациесите, трансформирани по време на процеса на дехидратация в кристализационни пояси (Колединцев М.Н. , 1999; Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В., 2002; Колединцев М. Н., Майчук Н. В., 2002).
Подобни опити за симулиране на образуването на кристали са направени от G. G. Korotko (2000), които ще бъдат обсъдени по-нататък.
2) Тезиграфия (Нефедова Н. Б., Цивенкова Л. А., 1985; Мороз Л. А., Каликщейн Д. Б., 1986; Гугутишвили Т. Г., Симонишвили Л. М., 1990; Кидалов В. Н. ., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004) също се отнася до преди vailing и най-често срещаните методи на извършване на кристалоскопски тест и представлява допълнително въвеждане на различни химични вещества в изсъхналата биофлуид на човешкото тяло с цел иницииране на процесите на кристалообразуване. За тази цел се използва широка гама от кристалообразуващи агенти (NaCl, CaCl2, MgCl2 и други), повечето от които притежават комплексообразуващи свойства и концентрации при различни авториварират значително.
В лабораториите, използващи този кристалографски метод, прилагането му се извършва чрез използване на класическа тезиграфия, т.е. разглеждайки изключително резултата от дехидратация на система, състояща се от биоматериал и основно кристалообразуващо вещество като независима проба, което значително усложнява интерпретацията на получената информация поради обективни трудности при сравняване на проби, получени при различни условия и различно функционално състояние на тялото на изследваните субекти. В тази връзка тесиграмата, генерирана в съответствие с описания по-горе подход, изисква сравнение на получения резултат с вече съществуващи „модели“ („фотографски“ подход) (Шабалин В.Н., Шатохина С.Н., 2002; Байдаулет И.О., 2003; Белоглазов В.Г. , Атков Е. Л., Федоров А. А. и др., 2003; Волосникова Н. Н., Музлаев Г. Г., Савина Л. В. и др., 2003; Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004) или стойностите на емпирично открити параметри (Тарусинов Г. А., 1994; Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В. ., 2002), но този фактор определено и значително намалява информационното съдържание и надеждността на тезиграфската диагностика.
Струва ми се важно да се подчертае, че към момента няма общоприета схема-алгоритъм за описание, анализ и интерпретация на тезиграфския фациес, както няма и единен метод за получаването му.
Има отделни съобщения за използването на контролна проба от основни вещества (Tarusinov G. A., 1994), но по неизвестни причини използването му е рязко ограничено (Kamakin N. F., Martusevich A. K., 2003; Martusevich A. K. , 2004).
3) Профилна дехидратация (Shabalin V.N., Shatokhina S.N., 1999). Това включва нанасяне на биологични течности върху предметно стъкло, предварително обработено с разтвор на лецитин с определена концентрация. С помощта на лецитин, според авторите, изглежда възможно да се промени афинитета на кристалите към основата и следователно да се трансформират термодинамичните характеристики на дехидратирания биосубстрат.
4) Вакуумната кристалоскопия (Savina L.V., 1999) включва подготовката (сушенето) на препарати във вакуумни условия. Това гарантира изолирането на дехидратираната проба от външната среда, създавайки относително затворена система, в която течната част от биологичната среда и процесите на биокристализация се отстраняват директно.
5) Кристализация на биологични течности в затворена клетка (Антропова И.П., Габински Я.Л., 1997). Осигурява се изолация на образуващата се проба от външната среда, подобно на вакуумната кристалоскопия, но технически този метод е по-удобен за практическо използване, тъй като не изисква създаване на вакуумни условия, а само използване на затворена клетка, в която възможно е извършването на директен микроскопски анализ. Авторите на модификацията са използвали предварително центрофугиране на биоматериала.
6) Колановата кристалоскопия е кристалографски метод за изследване, основан на изследването на кристални пояси и отделни кристални образувания (Колединцев М.Н., 1999; Колединцев М.Н., Нечаев Д.Ф., Майчук Н.В., 2002; Колединцев М.Н., Майчук Н.В., 2002). Физико-химичната основа на метода е хетерогенността на компонентния състав на биологичните течности в зависимост от молекулните маси на веществата, които са елементи на дадена биологична среда, и следователно тяхната различна способност да се движат през фациите в процеса на поетапно дехидратиране на пробата и образуване на фациес. Това води до образуването на един или (много по-често) няколко кристализационни пояса, чието регистриране позволява да се съди за дадена характеристика на биологична течност (М. Н. Колединцев, Д. Ф. Нечаев, Н. В. Майчук, 2002).
7) Метод на клиновидна дехидратация (V.N. Shabalin, S.N. Shatokhina, 2001-2005). Метод за дехидратиране на капка биологична течност, поставена върху прозрачна плоскост. Капката има клиновидна форма в напречното сечение, което създава условия за неравномерна скорост на дехидратация в радиална посока. Това предизвиква осмофоретично движение на разтворените вещества в обема на дехидратираната капка в съответствие с физикохимичните параметри и образуването на ясни, строго индивидуализирани структури, съответстващи на състоянието на организма, от който е получена изследваната течност.
8) Поляризационна микроскопия (Rapis E.G., 1976; Antropova I.P., Gabinsky Ya.L., 1997; Savina L.V., Pavlishchuk S.A., Samsygin V.Y. et al., 2003) – метод за оценка на резултатите от свободен или иницииран кристал образуване на биологична течност в поляризирана светлина, което позволява да се идентифицират някои Допълнителни функциикакто фациесът като цяло, така и отделните му структурни елементи, както и характеризират текстурата му. Той е универсална модификация на подхода за визуализиране на резултатите от кристалогенезата и може да се използва като допълнение към всеки от кристалографските методи за изследване на биологични среди.
9) Конгрегация на субстрата (G. G. Korotko, 2000) - спомагателен кристалографски метод, който ви позволява да симулирате образуването на кристали на отделни компоненти, които са компоненти на биологични субстрати (липиди, протеини, полизахариди). В този случай, в сравнение с метода „моделни композити“, се постига по-голямо приближение до реалния състав на биологичната среда по отношение на асортимента, но не и в точното съотношение на компонентите, но е възможно да се вземат предвид промените в биофлуида в неговите основни биохимични елементи.
10) Течнокристална термография (Buiko A.S., Tsykalo A.L., Terentyeva L.S. et al., 1977; Shkromida M.I., Pospishin Yu.A., 1977) - обещаваща техника за кристалографски изследвания, основна точка, която е използването на холестерични течни кристали (температурен диапазон на топене 33.5-38.20C или 36.8-41.20C) покрития на изследваните повърхности със системи с холестерил пеларголеат, холестерил олеат и др. В този случай кожата се използва като "субстрат", върху който се нанася съставът. Интерпретацията на трансформацията на състоянието на течните кристали се оценява с помощта на специализиран спектрофотометър.
Доста широките диагностични възможности на този методологичен подход в момента практически не се използват, въпреки очевидното обещание, простота и скорост на прилагане.
11) Методът за пренос на енергийна информация от биологични течности към носител (Vorobiev A.V., Vorobyova V.A., Neshtakova N.L. et al., 2002) се състои в прехвърляне на информация от биологична среда към „чист грах от млечна захар“, след което те се комбинират на предметно стъкло с 0,1 ml от основното вещество (5% воден разтвор на меден сулфат). Приготвянето на микропредметните стъкла се извършва в тъмна стая за 24 ч. Оценката се извършва чрез качествен анализ на получените проби от кристали.
Такова разнообразие от методологични възможности за провеждане на тест, базиран на дехидратация на биологични субстрати, вероятно се дължи на факта, че използването на различни подходи допринася за по-добро идентифициране на получените резултати (таблица). Извличането на информация, скрита в съвкупността от метаболити, техните количествени и качествени взаимоотношения в биоматериалите е една от най-важните и важни задачи на кристалоскопската диагностика. От гледна точка на много автори (Алексеева В.И., 1965; Гугутишвили Ц.Г., Симонишвили Л.М., 1990; Каликщейн Д.Б., Мороз Л.А., Квитко Н.Н. и др., 1990; Антропова И.П., Габински Я.Л., 1997; Плаксина Г. В., Римарчук Г. В., Бутенко С. В. и др., 1999; Шабалин В. Н., Шатохина С. Н., 2001, 2004; Алексеева О. П., Воробьов А. В., 2003; Байдаулет И. О., 2003; Рапис Е. Г., 2003; Савина Л. В., 19 99; 2003; Бистревская А. А., Деев Л. А., 2004; Залески М. Г., Емануил В. Л., Краснова М. В., 2004; Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004; Громова И. П., 2005), основната роля в разкриването на метаболитни промени в състава на среда на човешкото и животинското тяло се отдава на качествения компонент, като се вземат предвид детерминистичните връзки между отделните образувания (кристална и аморфна природа). Значително по-малко внимание се обръща на количествения компонент, въпреки че той е ясен критерий за обективност на наблюдаваните различия.

1.2.2.1. Обща характеристика на техниката за тезиокристалоскопия на биологични субстрати

Въз основа на анализа на литературната информация, представена по-горе, беше предложен и интегративен метод за тезиокристалоскопия на биологични субстрати, базиран на едновременното и паралелно прилагане на класическа кристалоскопия и сравнителна тезиграфия, извършени върху едно и също стъкло. Това дава възможност да се оцени както способността на биологичната течност да кристализира директно, така и нейния потенциал на инициатор по отношение на основното кристалообразуващо вещество, посочено от изследователя (Таблица 1.)

Таблица 1. Сравнителни характеристики на някои кристалографски методи

• експериментална част

• 2. Обекти, цели и методи на изследване

• 2.1. Цели, задачи и етапи на изследването.

• Целта на това изследванеизследване на морфологията на изсушени проби от урина от здрави мишки и мишки с лимфоидна левкемия (LL).
• За постигане на целта, очертана в работата, бяха формулирани следните: задачи:
• 1. Проучете съвременната литература по проблемите на кристалографията на биосубстратите.
• 2. Овладейте техниката за извършване на тезиокристалоскопия на биосубстрати.
• 3. Оценете естеството на образуването на кристали в урината при здрави мишки.
• 4. Да се ​​установят характеристиките на инициираната кристалогенеза в урина на мишка с LL.
• Работата е извършена на базата на лабораторията за консервиране на кръв и тъкани на Научноизследователския институт по хематология и кръвопреливане Киров.
• Етапи на изследване:

1. Подготовка на здрави лабораторни мишки от линията ACR за изследване.
2. Инокулация на лимфоидната форма на левкемия в ACR мишки.
3. Събиране на биосубстрат (урина) за изследване при здрави мишки и мишки с левкемия.
4. Приготвяне на микропроби от урина от здрави мишки и мишки с левкемия.
5. Тезиграфски анализ на изсушени микроспецимени от урина от здрави мишки и мишки с левкемия.

• Обект на изследване са тезиграфските „модели” на урината на здрави мишки и мишки с левкемия.
• Обект на това експериментално изследване е урината на 10 здрави мишки и 10 мишки с левкемия.
• Като основно вещество за тезиграфския тест използвахме 10% разтвор на натриев хлорид, който е активен кристалообразувател.
• Бяха получени общо 20 микропроби от урина, взети от контролната група (здрави мишки) и от мишки с левкемия (експериментална група).
• Експерименталната част от работата включваше изследване на морфологията на изсушени проби от урина от здрави мишки с левкемия.

2.2 Подготовка на съдове и работна зона

Съдовете, използвани в работата (епруветки, мерителни пипети, предметни стъкла), се измиват с гореща вода с детергент, изплакват се първо с чешмяна вода, след това с дестилирана вода и се изсушават.
Стерилизирането на съдове, предварително опаковани в опаковъчна хартия, се извършва в автоклав при температура 120 ° C и налягане 1 atm за 25 минути.
Работата по време на събирането на биологична течност се извършва в лабораторията за животни (вивариум) на Федералната държавна институция „КНИИГ и ПК“ на Росздрав. По-нататъшното получаване на тезиокристалоскопични фациеси на кръвен серум е извършено в лабораторията за консервиране на кръв и тъкани на Федералната държавна институция "КНИИГ и ПК" на Министерството на здравеопазването на Русия. Преди работа стаята се облъчва с кварцова лампа в продължение на 30 минути. Работната маса е обработена със 70% спирт преди и след работа.

2.3. Използвани методи на изследване

2.3.1 Процедура за тезиокристалоскопски тест

Изследването на кристалооптични свойства на биосубстрати (кръвен серум) на здрави и левкемични мишки е извършено по метода на тезиокристалоскопията (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2005; Martusevich A.K. et al., 2000-2006).
Проби от биологичен материал (кръвен серум, урина, слюнка, пот, сълзи и др.) В обем от 0,3 ml се нанасят върху предварително обезмаслено, измито и подсушено предметно стъкло, което, както вече установихме, е оптимално както по отношение на стъклена площ и по отношение на броя на кристалните и аморфни структури, които подлежат на последващ анализ. Разликата между метода на тезиокристалоскопията е, че върху изследваното стъкло се нанасят 3 проби (фиг. 2.1), първата (1) от които съдържа само биоматериал, втората (2) - смес от биофлуид и кристалообразуващ (основен ) вещество, третият (3 ) - контрол на кристалообразуващото съединение. Като основно вещество се използва 10% разтвор на NaCl.

Фиг.2.1. Схема на препарат, получен по метода на тезиокристалоскопията

Полученият микропрепарат се суши по модифициран метод в поток от топъл въздух. В този случай хоризонталното положение на стъклото и съответната посока на потока трябва да осигурят дехидратация на пробите при същите условия, предотвратявайки събирането им. След това получените кристалоскопични модели се анализират съгласно традиционната схема, отделно за кристалографските и тезиграфските компоненти.
Изсъхването на капка субстрат върху намокрена повърхност (стъкло) води до образуването на 3 различни зони: външна (маргинална - вода, електролити, нискомолекулни съединения); вътрешни (централни - концентрирани високомолекулни протеини, електролити, нискомолекулни съединения) и междинни, характеризиращи се с най-ниска концентрация на вещества. Вътрешната зона може да има изразени и неизразени граници. Кристалните и аморфните структури често са в съседство с външния контур на вътрешната граница.
Изсушаването на колоида е придружено от неговото прибиране, увеличаване на концентрацията на нискомолекулни съединения и образуване на кристални структури от различен тип.
Статистическата обработка на получените резултати е извършена в околната среда Microsoft Excel XP с помощта на вградени функции.
За да интерпретираме кристалоскопските модели, ние класифицирахме всички кристални и аморфни образувания, които срещнахме (Таблица 2.1, Фиг. 2). В съответствие с тази класификация беше извършена оценката на препаратите, подготвени за анализ, използвайки класическата кристалоскопска техника. Проведено е както общо изследване на кристалоскопските характеристики на биофлуида, така и техните сравнителни характеристики.

Таблица 2.1 Кристални и аморфни структури, срещани при „класическия“ кристалоскопски анализ на биофлуиди

Забележка: * - варират по количество (малки - общо заемат по-малко от 30% от площта на зрителното поле, умерено количество - общо заемат 30-50% от площта на зрителното поле, голям брой - общо заемат повече от 50% от зоната на зрителното поле) и по размер (малки, средни, големи, агрегати).
Въз основа на анализа на многобройни микропрепарати от изсушени биологични течности бяха идентифицирани 5 класа кристални структури (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2005;), всеки от които на свой ред включва специфични образувания (Таблица 2.1). За някои от тях химичният състав е дешифриран, което позволява с известна степен на приближение да се съди за промените в качествените и количествените характеристики на съотношенията на компонентите в биологичните среди в случай на динамично изследване на кристалите. формиращи свойства на последния.
Отделна категория се образува от тела с некристален характер - аморфни образувания. Производни на калциевия карбонат, те са изключително променливи по размер и количество, което може да бъде от диагностична стойност.
Също така представлява интерес видът на взаимодействие между големи кристали и аморфни частици в дехидратирания биосубстратен фациес (Фигура 2). Информационното съдържание на това явление все още не е установено, но според нас изисква внимателно внимание, тъй като може да отразява влиянието на кристалографски невизуализирани компоненти на биофлуид (например протеинови макромолекули, мазнини, въглехидрати и др. ) върху кристалогенезата.

Ориз. 2.2.Взаимодействие на кристални и аморфни структури

За да се получи допълнителна информация за физикохимичните свойства на анализираната биологична течност, бяха разработени допълнителни критерии за оценка на резултата от класическата кристалоскопия (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2005), включително следните параметри:
1. Клетъчност (I)– отразява особеностите на органоминералните взаимодействия във фациесите. Оценката се извършва по шестобална права скала (0-5 точки), като 0 точки е пълната липса на признаци за появата на това явление, а 5 точки е видимостта на клетъчността без микроскоп.
2. Еднородност разпределения на елементи (R)– критерий, показващ правилността на процеса на свободна кристалогенеза. Също така се тълкува според шестобалната скала (0-5 точки), дадена в раздела за тезиграфския компонент.
3. Интензивност на маргиналната зона (Kz)– параметър, показващ наличието и количеството на протеиновия компонент на биологичната среда (Шатохина С.Н., 1995; Назарова Л.О., Шатохина С.Н., Шабалин В.Н., 2000). Предлагаме схема за оценка на този показател по полуколичествена шестобална скала:
- 0 точки – абсолютна липсамаргинална зона, стрии са изразени, локални признаци на разрушаване в областта на ръба на фацеса;
- 1 точка – ръбовата зона е слабо различима при слабо увеличение на светлинен микроскоп, наблюдават се единични „счупвания“, включително неясно изразени, „завоалирани“;
- 2 точки – зоната на ръба е ясно видима, почти равномерна, наблюдават се малък брой „разломи“;
- 3 точки – зоната на ръба е ясно разграничена от междинната зона, хомогенна, „разломите“ се отбелязват в целия пръстен на ръба и не са разрушителни;
- 4 точки – ясно се визуализира маргиналната зона, отграничена с „вал” от междинната зона, има значителен брой „счупвания”, но е неразличима без микроскопия.
- 5 точки – маргиналната зона се визуализира без микроскопия, еднородна е, без признаци на деструкция; микроскопията показва значителен брой "счупвания".
4. Степен на унищожаване на фациес (SDF)– интегрален показател, който отразява правилния ход на кристалогенезата (основната качествена характеристика на фациесите) и обобщава както екзогенните (условията на процеса на дехидратация – температура, влажност, налягане, скорост на въздушния поток, навлизане на допълнителни вещества и др.) и ендогенни фактори (термодинамичен компонент образуване на кристали, наличие на достатъчно количество вода за образуване на кристални хидрати и стабилизиране на органични макромолекули и др.).
* 0 градуса– всички елементи на фациеса са с правилна конфигурация, неразрушени както като цяло, така и в отделни участъци, няма признаци на разрушаване на фациесната текстура;
* I степен– елементите на фациуса имат първоначални признаци на деструкция, не се наблюдават деструктивни промени в текстурата;
* II степен– визуализират се множество разрушени или променени структури, има локални нарушения на целостта на текстурата;
* III степен– всички елементи на фациеса са унищожени, невъзможно е да се разграничат отделни части от фациеса и структурата, пробата е безформена маса от аморфен, често оцветен материал; има ясни признаци на разрушаване на текстурата.
Като цяло, моделирането на формираните структури и използването на различни критерии за оценка ще допринесат за по-ясно разграничаване на промените в кристалоскопската картина, въпреки че прекомерното „претоварване“ с тях ще доведе до значително усложняване на процеса на фациален анализ.
Като по-информативен начин за оценка на иницииращата способност на биологичните субстрати от класическата тезиграфия, обсъдена по-горе (Tarusinov G.A., 1994), използвахме сравнителна тезиграфия (Kamakin N.F., Martusevich A.K., 2002-2005; Martusevich A.K. et al., 2000-2005 ), което включва използването на допълнителна контролна проба от чисто основно вещество, за да се изравнят различни външни условия; дава възможност да се посочи посоката на започване (активиране или депресия на кристалогенезата на кристалообразувателя) и нейната тежест.
Както вече беше споменато по-горе, оценката на тезиграфските фациеси е по-трудна от кристалоскопските, което се свързва с хомогенността на морфологията на първата и следователно, ако вече е разработена идентификационна таблица за класическата кристалоскопия, и допълнителни критерии ще играят само изясняваща роля, тогава в тезиграфския тест те заемат водещи позиции (Нефедова Н.Б., Цывенкова Л.А., 1985; Мороз Л.А., Каликщейн Д.Б., 1986; Гугутишвили Ц.Г., Симонишвили Л.М., 1990; Кидалов В.Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н., 2004; Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., 2003-2005). В тази връзка се предлага класификация на критериите, които могат да се използват при разглеждане на тезиграфски фациес:
I. Основни критерии
- Основен тезиграфски коефициент Q
- Рационален коефициент P
- Коефициент на иницииране М
- Относителен коефициент N
II. Допълнителни критерии
равномерност на плътността на фациесите (R);
степен на клетъчност на картината (I);
индекс на хаоса (CH)
тежест на отделните зони на кристализация (Z)

Идентифицирането на горните критерии позволи да се формира единен математически подход за оценка на тезиграфските фациеси (Martusevich A.K. et al., 2004, 2005), който се основава на проверка на значимостта на всеки показател при определяне на необходимия производен коефициент.

Обяснения за използваните изчислителни коефициенти:
I. Основни критерии:
Q = A / B, където A е броят на центровете за кристализация в тестовата проба, единици; B - брой центрове на кристализация в контролната проба, единици.
P = d1 / d2, където d1 е радиусът на минималната зона на кристализация, mm; d2 - радиус на максималната зона на кристализация, mm.

II. Допълнителни критерии:
R - степен на равномерност на плътността на разпределение на елементите на тезиграфския фациес, точки;
I - степен на клетъчност на тезиграфския фациес, точки.

Нашето изследване ни позволи да приемем информационното значение на подчертаните по-горе коефициенти при идентифицирането на тезиграфския фациес:
1. Основен тезиграфски коефициент Q– показва степента на организация/дезорганизация на кристалогенезата на основното вещество (в повечето случаи разтвор на натриев хлорид с изосмотична концентрация, който при естествени неутрални условия е склонен към образуване на типични дехидратационни структури) под въздействието на материала под проучване.
2. Коефициент на обосновка P– демонстрира степента на хетерогенност на молекулните маси на компонентите на изследвания субстрат.
3. Степен на клетъчност на картината I- евентуално демонстрира наличието на протеинови конгломерати с различен химичен състав и свойства по отношение на степента на хидрофилност/хидрофобност, както и наличието на мастноразтворими компоненти във воден разтвор на биологичната среда.
4. Параметър R - подчертава равномерното разпределение на структурите в тезиграфския фациес. Може да показва съдържанието на невизуализируеми компоненти в материала, които могат локално да причинят инхибиране на кристалогенезата. Може да е свързано с метода на изсушаване на микропрепарата.
Въз основа на горните показатели за оценка на тезиграфския фациес е формулирана кратка градация на характеристиките на записване на състава на тезиграфския фациес съгласно допълнителни критерии за оценка (Камакин Н.Ф., Мартусевич А.К., 2005):
1. Еднородност на плътността на разпределение на кристалните структури във фациесите (R):
0 точки - пълен хаос на фациесите, наличие на разнородни елементи, кухини, места на натрупване на кристални структури, различна ориентация на образуванията в зрителното поле.
1 точка - очертани са някакви групи от кристали, отделни зони правилна конструкция, заемащи по-малко от 30% от общата площ на зрителното поле, посоката на фигурите все още е хаотична.
2 точки - наблюдават се ясни "острови" на ред, заемащи от 30% до 50% от пространството на зрителното поле (във всяко от поне три изследвани), разстоянията между елементите в групите са приблизително изравнени, някакъв модел на насоченост се записва структурни образуванияфациес.
3 точки - доста значителен брой структурни елементи на фациесите (повече от 50% от общия брой) са структурирани, „островите“ на еднородност се превръщат в области на относително голяма площ. В рамките на тези зони се спазва правилното разположение и равномерност на разстоянията между отделните образувания. Моделът на посоката на елементите и зонирането се разграничават доста ясно.
4 точки - повечето фациални елементи са структурирани (повече от 75% от общия брой), останалите са разпределени в „острови“ в зрителното поле, често в маргиналната зона. Разстоянията между отделните образувания са почти постоянни. Ориентацията на елементите следва определен модел по почти цялата повърхност на зрителното поле.
5 точки - всички елементи на тезиграфския фациес са ясно структурирани в цялото зрително поле, което се потвърждава от изследването на няколко полета. Разделянето на централни, междинни и маргинални зони е ясно видимо дори при визуален контрол без микроскоп; границите на последните могат да бъдат установени. Разстоянията между елементите на картината са постоянни, ориентацията на фигурите е правилна, естествена по цялата повърхност на фациуса.
2. Степен на проявление на фациалната клетъчност (I):
0 точки - пълна липса на признаци на клетъчност, хомогенност на картината, липса на идентифициране на "острови" от кристали. Фациесът представлява един „слой“ от кристални образувания.
1 точка - наличието на първите признаци на хетерогенност, "смачкване" на кристалоскопската картина (маркирани са най-диагностично значимите принципи):
началото на разделянето на групи от елементи (по-малко от 30% от всички образувания, заемащи по-малко от 30% от площта на зрителното поле);
известна хетерогенност на картината;
началото на „смачкването“ на един „пласт“ от кристални фигури.
2 точки - има доста видима тенденция към "раздробяване" на фациесите, образуване на "острови" от кристали (откроени са най-диагностично значимите принципи):
броят на изолираните елементи в „островите“ е от 30% до 50% от всички структури, те заемат повече от 30% от повърхността на зрителното поле на фациеса;
изразена хетерогенност, зоналност на картината;
визуализира се процеса на “разделяне” на фациесите на участъци, записват се образуващите се кристализационни пояси, служещи за граници на последните, в някои случаи не по цялата дължина, с дебелина 1 кристал.
3 точки - наблюдават се изразени промени във фациуса:
елементите в „островите“ съставляват от 50% до 75% от общия брой, повърхността, която заемат, е повече от 50% от зрителното поле (в няколко полета);
изразена хетерогенност, „зърнистост“ на картината;
процесът на "разчленяване" на фациите е ясно видим в няколко зрителни полета;
Поясите на кристализация са доста различни, образувани от повече от един ред кристални структури.
4 точки - признаците на клетъчност са надеждно видими (маркирани са най-диагностично значимите принципи):
броят на структурите, групирани в клетки от 75% до 100% от общия брой на последните;
групираните елементи заемат цялото зрително поле (при изучаване на няколко, поне три зрителни полета);
кристализационните пояси се образуват от повече от един ред кристали и присъстват по цялата повърхност на зрителното поле, обграждат напълно "островите".
5 точки - картината се характеризира със следните морфологични характеристики (маркирани са най-диагностично значимите принципи):
броят на структурите, групирани в клетки, е от 75% до 100% от общия брой на последните;
групираните елементи заемат цялото зрително поле (при изучаване на няколко, поне три зрителни полета);
"фрагментацията" и "зърнистостта" на картината са много ясно изразени;
кристализационните пояси се образуват от повече от един ред кристали, присъстват по цялата повърхност на зрителното поле и напълно обграждат „островите“;
има „счупвания“ в картината (с изключение на фациесите на кръвния серум, за които това явление е независимадиагностичен знак).

Като цяло използването на описаните по-горе критерии, показатели и изчислени коефициенти ни позволи да алгоритмизираме процедурата за извличане на информационния товар, скрит в качествения и количествен състав на анализираните субстрати.
В съответствие с тази схема, анализът се извършва стъпка по стъпка в две основни посоки - изследване на свободната кристалогенеза и инициираното образуване на кристали, което дава възможност да се разгледа изчерпателно както пряката кристалообразуваща способност на биофлуид, така и неговия иницииращ потенциал .

Ориз. 2.3. Алгоритъм за оценка на тезиокристалоскопския фациес.

И така, широкото използване на математически апарат дава възможност за многопараметрична оценка на биологичните течности чрез тяхната кристалогенеза, което предоставя голямо количество информация за техните физични и химични свойства и, косвено, качествения и количествен компонентен състав, който според нас , е от особено значение за клиничната, преди всичко диагностична, практическа и фундаментална наука.

2.4 Статистическа обработка на данните

Фактическият материал, получен по време на изследването от всички изследвани измивки, е обработен по метода на вариационната статистика (Тюрин Ю. Н., Макаров А. А., 1998; Наследов А. Д., 2004). Изчислени са средните стойности (M), тяхната стандартна грешка (m) и стандартното отклонение (). Индикаторите се считат за надеждни при p стойности<0,05 (по t-критерию Стьюдента и U-критерия Манна-Уитни). Зависимость между признаками оценивали при помощи коэффициента парной корреляции (r), его ошибки (mr) и уровня значимости различий (по t-критерию Стьюдента). Зависимость считалась сильной при r  >0,7, средно, ако модулът на корелационната стойност на двойката е в диапазона 0,3-0,7. Когато се установи корелационна стойност, която е по-малка от модалната стойност от 0,3, тя се приема за слаба. Надеждността на намерената двойна корелация (p) също беше изчислена.
Изчисленията бяха извършени в средата на електронни таблици Microsoft Excel 2003, както и с помощта на статистическите софтуерни пакети Primer of biostatistics 4.03 и SPSS 11.0.

3. Резултати от изследванията.

Директната оценка на резултатите от свободната кристалогенеза беше извършена с помощта на единна идентификационна таблица, включваща 5 основни класа кристални и аморфни вещества (морфометрия), както и допълнителни критерии (степен на фациална деструкция - SDF, тежест на нейната маргинална зона (Kz ) и клетъчност (I), равномерност на елементите на разпределение (R)). Тезиграфският фациес е анализиран с помощта на система от основни (основен тезиграфски коефициент Q, коефициент на зоналност P) и допълнителни параметри (подобни на тези, използвани за класическата кристалоскопия).
Изследвахме динамиката на свободната и инициирана кристалогенеза на урината при здрави и левкемични мишки.

3.1. Морфология на урината на здрави и изкуствено заразени мишки с левкемия.

Нашият анализ на микропрепарати от изсушени проби от урина ни позволи да установим ясни „модели“ за разглежданите условия.
Направено е сравнение на кристалоскопски модели, получени от здрави и болни животни.

Таблица 3.1. Кристалоскопични характеристики на здрави мишки и пациенти с левкемия.

Според данните, дадени в таблица 3.1, е очевидно, че има ясни вариации в кристалоскопския модел между контролната и експерименталната групи.

Въз основа на резултатите от визуалната морфометрия е установено, че има значими характеристики на кристалоскопската картина на урината на мишки с левкемия в сравнение със здрави животни, сред които най-значимите са:
увеличаване на броя на дендритите при болни мишки, с изключение на пълната липса на облицовани поликристални структури, което потвърждава промените, регистрирани в монокристалния компонент;
концентрация на аморфни образувания, състояща се в тяхното увеличаване и намаляване на количеството, подчертаното им разграничаване от големи кристални фигури;
увеличаване на степента на разрушаване на фациесите (основният показател за нестабилността на кристалоскопските фациеси);
намаляване на равномерността на разпределение на кристални и аморфни образувания в микрообразец, придружено от дезагрегация на елементи на фациес, проявяващо се в значително увеличаване на степента на клетъчност (p<0,05).
Въз основа на резултатите от оценката на кристалообразуващата способност на миши кръвен серум се формира „модел“, който е характерен за здрави мишки и мишки с левкемия.

3.2. Основните критерии за оценка на тезиграфски фациес на кръвен серум при мишки при нормални условия и патология (левкемия).

Проучването включва както търсене на качествени маркери на левкемия, така и формиране на количествени „модели“ на тезиграфията. Въз основа на откриването на признаци на патологични промени в урината на болни мишки е съставен набор от диагностично значими качествени параметри.
В съответствие с данните, представени на фиг. 2.4, най-значимите диференциращи показатели на тезиграмите на урината на здрави мишки и мишки с левкемия при използване на 10% разтвор на натриев хлорид като основно вещество са:
- естеството на иницииране на основното вещество от биологичната среда (при здрави мишки - изразено активиране на кристалогенезата на основното вещество, при болни мишки с левкемия - умерено инхибиране);
- неравен органично-минерален състав на биофлуида (преобладаване на минерални компоненти при здрави мишки и преобладаване на органични съединения при мишки с левкемия);
- степента на фациална деструкция, която е малко по-висока при представителите на експерименталната група;
- разширяване на маргиналната зона във фациите на мишки с левкемия, със значителна тежест при практически здрави индивиди, което е предполагаем маркер за левкемия.

Таблица 3.2.Сравнителна тезиграфия на урина на здрави мишки и мишки с левкемия (основна субстанция – 10% разтвор на натриев хлорид)

Забележка: “*” – значимост на разликите спрямо контролната група Стр<0,05

Ориз. 2.4. Промени в основните и допълнителни критерии за тезиграфия на урина при мишки с левкемия в сравнение със здрави

3.3 AKR мишки

Силно левкемичната мишка линия AKR е получена чрез кръстосване на близкородствени индивиди през 1928 г. Мишките и от двата пола са податливи на лимфоидна левкемия. Около 91% от жените умират от левкемия до 300 дни.

3.4 Динамика на развитие на левкемия.

Ориз. 3.1 Фациесът е хомогенен, няма изразени образувания – здрава мишка X40

Ориз. 3.2 Фациесът е хомогенен, появяват се първите признаци на фрагментация на маргиналната зона - първите признаци на развитие на левкемия, възраст 5 месеца. X40

Ориз. 3.3 Хетерогенност на структурата, слаба експресия на маргиналната зона, проява на клетъчност - началото на развитието на левкемия. 7 месеца X40

Ориз. 3.4 Началото на появата на линейни дендритни структури е развитието на левкемия. 8 месеца X40

Ориз. 3.5 В структурата на фациесите преобладават линейни и правоъгълни дендритни структури - развита левкемия, 9 мес. X40

Ориз. 3.6 Изразена клетъчност на фациесите, неравномерна плътност на разпределение на елементите - силно развита левкемия. 13 месеца X40

3.5 Заключения

Въз основа на откриването на няколко качествени параметъра (поне 3) на експериментална биопроба върху повърхността на суха капка урина, изглежда възможно да се идентифицира наличието на патологични промени или степента на развитие на остра левкемия.
Използвайки данните, дадени в таблица 3.2, може да се отбележи, че по отношение на коефициентите Q и P, значителни разлики в неговите стойности се записват в тезиграмите на урината.
В съответствие с данните, представени в таблица 3.2, надеждността на разликите между основните показатели на тезиграфията потвърждава значимостта на характеристиките на тезиграфските фациеси на урината, открити с помощта на качествени признаци.
По този начин използването на метода за сравнителна тезиграфия на урината при здрави мишки и мишки с левкемия дава възможност да се идентифицират качествени и количествени маркери за наличие на левкемия.
Тезиокристалоскопичният анализ на биофлуиди позволява мултипараметрична оценка на съдържащата се в тях метаболитна информация, която може да бъде полезна при посочване на физиологични и патологични състояния при хора и животни. Всеки биофлуид има свои собствени характеристики на кристалогенезата, което е свързано с диференциацията на техния химичен състав и функции.
При изучаване на кристалоскопичния компонент се препоръчва използването на една таблица за идентификация, а тезиграфският компонент - основните (коефициенти Q и P) и допълнителни (еднородност на разпределението на модела, клетъчност и др.) Критерии за оценка. Продължаването на изследванията ще послужи за развитието на идеи за суб- и молекулярните механизми на развитие на физиологични и патологични реакции на човешкото тяло.

Списък на използваната литература:

1. Агафонов В. А., Багров С. Н. Изследване на състоянието на стъкловидното тяло по метода на сушене // Сборник статии. научни статии “Трансцилиарна хирургия на лещата и стъкловидното тяло”. - Москва. – 1982. – С. 158-164.
2. Алексеева О. П., Воробьов А. В. Кристалография на слюнка - нов неинвазивен метод за диагностициране на H. pylori // Медицински журнал Нижни Новгород. – 2003. - № 2. – с. 73-78.
3. Antropova I.P., Gabinsky Ya.L. Кристализация на биофлуид в затворена клетка на примера на слюнката // Клинична лабораторна диагностика. - 1997. - № 8. - С. 36-38.
4. Бабенко Г.А. Злокачествен растеж, метали и хелатиращи агенти. Биологична роля на микроелементите. - М.: Наука, 1983.
5. Барер Г. М., Денисов А. Б., Михалева И. Н. и др. Кристализация на устната течност. Състав и чистота на повърхността на субстрата // Бюлетин по експериментална биология и медицина. – 1998. – Т. 126, № 12. – стр. 693-696.
6. Безопасност на живота. Безопасност на технологичните процеси и производство (Охрана на труда). Уч. ръководство за ВУЗ/П. П. Кукин и др.– М., 1999.
7. Brown G., Walken J. Течни кристали и биологични структури. М.: Мир, 1982. – 198 с.
8. Бубон Н. Т., Пузиревски К. Я. Микрокристалоскопска реакция за откриване на папаверин // Аптечен бизнес. – 1965. - № 2. – С. 50-52.
9. Бузоверя М. Е., Шишпор И. В., Шатохина С. Н. и др. Морфометричен анализ на фациите на кръвния серум // Клинична лабораторна диагностика. - 2003. - № 9. - стр. 22-23.
10. Bystrevskaya A. A., Deev L. A. Зависимост на структурата на слъзната течност от вида на стимула и качеството на субстрата // Материали на III Всеруска научно-практическа конференция „Функционална морфология на биологичните течности“. - Москва. – 2004. – С. 17-19.
11. Вегман Е. Ф., Руфанов Ю. Г., Федорченко И. Н. Кристалография, минералогия, петрография и радиография. М.: Металургия, 1990. – 263 с.
12. Волчецки А. Л., Рувинова Л. Г., Спасенников Б. А. и др. Кристализация и кристалография: медицински и биологични аспекти. Архангелск, 1999. – 374 с.
13. Волчецки А. Л., Спасенников Б. А., Агафонов В. М. и др. Модификация на метода и компютърната посока на тезиграфския анализ // Екология на човека. – 1999. – №3. – с. 38-42.
14. Воробьов А.В., Воробьов П.В., Воробьова В.А. Определяне на енергийно-информационния компонент на човек с помощта на метода на чувствителната кристалография // Proc. доклади от XI Московска международна хомеопатична конференция “Развитие на хомеопатичния метод в съвременната медицина”. - Москва. –2001. – с. 202-207.
15. Воробьова В. А., Воробьов А. В., Замаренов Н. А. Моделът на образуване на кристалографска картина по време на взаимодействието на човешка биологична течност и хомеопатично лекарство с кристалообразуващ разтвор / Discovery. – Грамота на Руската академия по естествени науки № 231. (Приоритет от 8 юни 2002 г.).
16. Голубев С. Н. Живи кристали // Природа. – 1989. - №3. – С. 13-21.
17. Гордиенко А. Н., Курбатова Л. А., Филипов А. Н. // Физика на кристализацията. - Калинин. – 1985. – Бр. 8. – с. 83-86.
18. Gromova I. P. Кристалоскопичен метод за изследване на кръвен серум в токсикологичен и хигиеничен експеримент с помощта на метода "отворена капка" // Хигиена и санитария. – 2005. – №2. – с. 66-69.
19. Гуляев В. Г., Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Характеристики и перспективи за използване на кристалографски методи за изследване в криминалистиката // Мат. междууниверситетска научно-практическа конференция с интернет участие „Актуални проблеми на криминологията и експертната дейност: проблеми и перспективи“. - Киров : КФ МСАЛ. - 2004. – С. 35-39.
20. Gulyaeva S. F., Martusevich A. K., Pomaskina T. V. Математическо моделиране на резултата от инициираната кристалогенеза на слюнката като критерий за ефективността на приема на минерална вода // Екология на човека. – 2005. – №7. – с. 33-35.
21. De Zhe V. Физични свойства на течнокристални вещества. М.: Мир, 1982. – 175 с.
22. Deryabina N. I., Zalessky M. G. Съдържанието на протеинови компоненти в капка кръвен серум, когато изсъхне // Бюлетин за нови медицински технологии. – 2005. – Т. XII, № 1. – с. 85-87.
23. Dawson R, Elliot D, Elliot W et al. Наръчник на биохимика. М.: Мир, 1997. - 544 с.
24. Замкова Н. Г., Зиненко В. И. Динамика на решетката на йонни кристали в модела на дишането и поляризуемите йони. // FTT. - 1998. - Т. 40, № 2. - С. 350-354.
25. Зайцев В.В., Зайцева Н.Б., Усолцева Н.В. Текстури на биологични течни кристали на пациенти с инфаркт на миокарда // Сборници на Академията на науките. Физическа серия - 1996. - т. 60, № 4 - с. 115-118.
26. Зиненко В. И., Замкова Н. Г. Изследване на фазови преходи и несъизмерима фаза в кристали ASVKh 4 по метода на Монте Карло. // Кристалография. - 2000. - Т. 45, № 3. - С. 513-517.
27. Зиненко В. И., Замкова Н. Г. Микроскопски изчисления на структурни фазови преходи от типа на изместване (кристали с елпасолитна структура) и тип ред-разстройство (семейство на калиев сулфат). // Кристалография. - 2004. - Т. 1, № 1. – с. 38-45.
28. Иванов О. В., Шпорт Д. А., Максимов Е. Г. Микроскопски изчисления на сегнетоелектрична нестабилност в перовскитни кристали // ЖЕТФ - 1998. - Т. 114, № 1. - С. 333-358.
29. Каликщейн Д. Б., Мороз Л. А., Квитко Н. Н. и др. Кристалографско изследване на биологични субстрати // Клинична медицина. – 1990. - № 4. – С. 28-31.
30. Kalikshtein D. B., Moroz L. A., Chernyakov V. L. Значението на тезиграфския метод за изследване на урината // Лабораторна работа. – 1981. - № 2. – С. 79-81.
31. Калинин А.П. и др.. Информативност на метода на кристалните отлагания на кръвния серум при някои ендокринни заболявания // Сборник с доклади на Всеруската научно-практическа конференция. "Кристалографски методи на изследване в медицината", Москва - 1997. - С. 131-133
32. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. За техниката на тезиокристалоскопия на биофлуиди // Клинична лабораторна диагностика. - 2002. - № 10. - С. 3.
33. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. Съвременни подходи за кристалоскопска идентификация на състава на биологични течности // Екология на човека. - 2003. - № 5. - стр. 23-25.
34. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. Характеристики на тезиокристалоскопичния портрет на биологични течности на човешкото тяло в нормални условия и при патология // Бюлетин за нови медицински технологии. - 2003. - Т. X, № 4. - стр. 57-59.
35. Камакин Н.Ф., Мартусевич А.К., Колеватих Е.П. За първична и вторична биокристализация // Сборник статии. научни трудове “Естествознание и хуманизъм”. – Томск. – 2005. – Т. 2, № 1. – с. 18-19.
36. Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Перспективи за развитие на кристалографски методи за изследване // Vyatka Medical Bulletin. - 2003. - № 3. - С. 6-11. Камакин Н.Ф., Мартусевич А.К. Характеристики на тезиокристалоскопичния портрет на биологични течности на човешкото тяло в нормални и патологични състояния // Бюлетин за нови медицински технологии. 2003. Т. X. № 4. С. 57–59.
37. Камишников В. С. Наръчник по клинична и биохимична лабораторна диагностика. В 2 т. Минск: Беларус, 2000. Т.1. 495 стр.; Т.2. 463s.
38. Каркищенко Н. Н. Основи на биомоделирането. М.: Издателство ВПК, 2004. – 608 с.
39. Карачунски А.И. Остра лимфобластна левкемия при деца. Лекции по актуални проблеми на педиатрията. Изд. V.F.Demina, S.O.Klyuchnikova., M: RGMU; 2000 г.
40. Кидалов В. Н., Хадарцев А. А., Якушина Г. Н. Тезиографски кръвни тестове и техните практически възможности // Бюлетин за нови медицински технологии. – 2004. – Т. XI, No 1-2. - стр. 23-25.
41. Колединцев М. Н., Нечаев Д. Ф., Майчук Н. В. Физически основи на кристалографския анализ в офталмологията // Сборник статии. абстрактно доклади от междурегионалната научно-практическа конференция на млади учени и студенти с международно участие "Петербургски научни четения-2002". - Санкт Петербург. - 2002. - С. 42-43.
42. Колотилов Н. Н., Бакай Е. А. Течнокристална структура на биологични обекти // Молекулярна биология. – 1980. – Бр. 27. – с. 87-96.
43. Кононенко Е. В., Миронов Е. В. Дислокационно-дисклинационни механизми на трансформация на текстурата на биофлуид по време на агрегация // Proc. научни доклади на 2-ра Всеруска научно-практическа конференция „Морфология на биологичните течности в диагностиката и мониторинга на ефективността на лечението“. - Москва. – 2001. – С. 21-26.
44. Кораго А. А. Въведение в биоминералогията. СПб.: Недра, 1992. – 280 с.
45. Кошкин А. Н., Мартусевич А. К., Лопатин М. А. Кристалоскопия на биофлуиди на човешкото тяло като диагностичен метод // Бюлетин на Руския държавен медицински университет. – 2002. - No1. – С. 134.
46. ​​​​Кристалографски методи за изследване в медицината: сб. научен Доклади на 1-ва Всеруска научно-практическа конференция. - М., 1997.
47. Кристалоскопски метод за изследване на биологични субстрати: Метод. препоръки / L. A. Moroz, I. L. Theodor, V. E. Bryk и др. – М., 1981. – 9 с.
48. Кузнецов В. Д. Кристали и кристализация. М., 1954. – 65 с.
49. Кузнецов А.В., Речкалов А.В., Смелишева Л.Н. Стомашно-чревен тракт и стрес. Курган: Издателство на Курганския държавен университет, 2004. – 254 с.
50. Кузнецов Н. Н., Вершинина Г. А., Скопинов С. М. и др. Оптична поляризация и рефрактометрични методи за оценка на тежестта на синдрома на ендогенна интоксикация при деца // Сборник статии. научни доклади на 2-ра Всеруска научно-практическа конференция „Морфология на биологичните течности в диагностиката и мониторинга на ефективността на лечението“. - Москва. – 2001. – С. 30-33.
51. Кузнецов Н. Н., Скопинов С. А., Вершинина Г. А. и др. Кристалоскопски метод за диагностика на ендогенна интоксикация при деца. RF патент № 2158923 от 03/04/1998
52. Кунгуров Н.В., Кохан М.М., Кононенко Е.В. и др. Кристалографски изследвания на биологични течности при пациенти с хронични дерматози. Екатеринбург, 1997. – 41 с.
53. Курнишева Н. И., Деев А. И., Гризунов Ю. А. и др. Метод за оценка на инволюционна офталмологична ендотоксикоза чрез флуоресцентно изследване на слъзната течност Бюлетин по офталмология. – 2000. – №3. – с. 16-19.
54. Лобанов V. I. Микрокристалоскопични реакции за откриване на някои производни на барбитуровата киселина // Journal of Analytical Chemistry. – 1966. - No1. – С. 110.
55. Локтюшин А. А., Манаков А. В. Минерали и живот в холографски модел на материята // Proc. 2-ри международен семинар “Минералология и живот: биоминерални взаимодействия”. – Сиктивкар. – 1996. – С. 10-11.
56. Мартусевич А. К. Кристалоскопични методи на изследване във физиологията // Руско физиологично списание на името на. И. М. Сеченов. – 2004. – Т. 90, № 8. – С. 18.
57. Мартусевич А. К. Информация физическа и биохимична теория на кристализацията като отражение на морфологията на биологичните течности // Бюлетин на сибирската медицина. – 2005. – Т. 4. – Приложение 1. – С. 185.
58. Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Проблеми на изследователския подход в кристалографията на биофлуиди // Мат. трета интердисциплинарна конференция с международно участие “NBITT-21”. – Петрозаводск. – 2004. – С. 50.
59. Мартусевич А. К., Кошкин А. Н. Особености на влиянието на условията за кристализация на биологични течности на човешкото тяло върху резултата от тезиокристалоскопичния тест // Сборник статии. научен статии на млади учени и специалисти от Руската федерация, посветени на конференцията на името на. акад. B. S. Grakova "Актуални проблеми на медицината и новите технологии - 2003 г." - Красноярск. - 2003. - С. 154-157.
60. Мартусевич А. К., Пономарева Г. Л. Математически методи за идентифициране на тезиграфски фациес с помощта на число за оценка при пациенти с лумбална остеохондроза // Клинична лабораторна диагностика. – 2004. - № 9. – с. 85-86.
61. Меншиков В. В. Лабораторни изследвания в клиничната практика. М.: Медицина, 1988. - 428 с.
62. Микрометод за определяне на свободни аминокиселини в кръвен серум с помощта на хартиена хроматография // Медицински лабораторни технологии. Санкт Петербург, 1999. – Т. 2. – С. 106-108.
63. Мороз Л. А., Каликщейн Д. Б. Кристалографски метод за изследване на биологични субстрати. Насоки. М., 1986. – 24 с.
64. Мушкамбаров Н. Н. Физическа и колоидна химия: Курс на лекции. М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001. – 384 с.
65. Назаренко Г. И., Кишкун А. А. Клинична оценка на резултатите от лабораторните изследвания. М.: Медицина, 2000. – 544 с.
66. Николская М. Н., Гандел В. Г., Попков В. А. Откриване на сулфонамидни лекарства чрез кристализация в тънък слой // Аптечно дело. – 1965. - №4. – с. 13-14.
67. PB 10-115-96. Правила за устройство и безопасна експлоатация на съдове под налягане.
68. Пикин С. А. Структурни трансформации на течни кристали. - М. - 1981. - 269 с.
69. Плаксина Г.В., Комолова Г.С., Машков А.Е. и др. Стабилизиращ ефект на ангиогенин от мляко върху кристалната структура на биологични течности // Бюлетин за експериментална биология и медицина. – 2003. – Т. 136, № 10. – с. 406-409.
70. Плаксина Г. В., Римарчук Г. В., Бутенко С. В. и др. Клинично значение на кристалографския и кристалоскопския метод за изследване на урината // Клинична лабораторна диагностика. – 1999. - № 10. – С. 34.
71. Пригожин И., Стенгерс И. Ред от хаоса / Прев. от английски М.: Прогрес, 1986. – 429 с.
72. Rapis E. G. Микрокристално-оптичен метод за използване на стъкловидното тяло на хора и животни в нормални условия и при хемофталмия // Бюлетин по офталмология. – 1976. – №4. – с. 62-67.
73. Рапис Е. Г. Протеин и живот. Самоорганизация, самосглобяване и симетрия на наноструктурирани супрамолекулни протеинови филми. М.: “МИЛТА - ПКП ГИТ”, 2003. – 368 с.
74. Романов Ю. А. Теория на биологичните системи и проблемът за тяхната времева организация // Проблеми на хронобиологията. – 1992. – No 3-4. – с. 105-123.
75. Савина Л. В. Кристалоскопични структури на кръвен серум в клиниката по вътрешни болести: Резюме на дисертацията. дис... д.м.с. - Перм, 1992. - 40 с.
76. Савина Л. В. Кристалоскопични структури на кръвен серум на здрав и болен човек. Краснодар, 1999. – 238 с.
77. Савина Л. В. Образуване на структурата на кръвния серум при условия на вакуум // Клинична лабораторна диагностика. – 1999. - № 11. – С. 48.
78. Савина Л. В., Конуева О. В., Коротко Г. Г. и др. Кристалоскопска диагностика на нарушенията на екзокринната функция на панкреаса при пациенти с хроничен панкреатит / IV Международен конгрес "Парентерално и ентерално хранене". - Москва, 2000. - С. 98.
79. Савина Л. В., Павлишчук С. А., Самсигин В. Ю. и др. Поляризационна микроскопия в диагностиката на метаболитни нарушения // Клинична лабораторна диагностика. - 2003. - № 3. - стр. 11-13.
80. Салтиков А. Б. Морфологични аспекти на процеса на формиране на функционални системи // Напредък в съвременната биология. – 2005. – Т. 125, № 2. – с. 167-178.
81. Скални А.В., Есенин А.В. Мониторинг и оценка на риска от излагане на олово на хората и околната среда с помощта на човешки биосубстрати // Токсикологичен бюлетин. № 6, 1996. - стр. 16-23.
82. Скопинов С. А. Компютърно моделиране на кристализацията на соли от биофлуиди // Кристалографски методи за изследване в медицината. сб. научен Доклади на 1-ва Всеруска научно-практическа конференция. . М., 1997. с. 33.36
83. Смотрова С.П., Чеснокова С.М. и др.. Дефицит на селен в условията на замърсяване на околната среда // Материали на III Международна научно-техническа конференция "Физика и радиоелектроника в медицината и биотехнологиите" - Владимир, 1998. - С. 304-305.
84. Собур С.В. Пожарна безопасност на електрическите инсталации: Справка/С. В. Собур - М., 2003.
85. Сонин А. С. Въведение във физиката на течните кристали. М., 1989. – 369 с.
86. Лични предпазни средства: Реф. надбавка/S. Л. Камински. – Л., 1989.
87. Суровкина М. С., Шатохина С. Н., Суровкин В. А. и др. Промени в нивото на молекулите със средна маса и системна организация на кръвната плазма при пациенти в напреднала възраст // Sat. научни доклади на 2-ра Всеруска научно-практическа конференция „Морфология на биологичните течности в диагностиката и мониторинга на ефективността на лечението“. - Москва. – 2001. – С. 18-20.
88. Тарасевич С. Ю. // Вестник на техническата физика. – 2001. – Т. 71, бр. 5. – с. 123-125.
89. Тарусинов Г. А. Кристалографско изследване на урината в диагностиката и диференциалната диагноза на дифузни заболявания на съединителната тъкан при деца // Педиатрия. – 1994. - No1. – с. 55-57.
90. Текуцкая Е.Е., Софина Л.И. и др.. Методи и практика за мониторинг на съдържанието на тежки метали в биологични среди. // Хигиена и санитария – 1999-No.4–P.72-74.
91. Тезиокристалоскопично изследване на биологични субстрати: Методически препоръки / Камакин Н. Ф., Мартусевич А. К. - Киров, 2005. - 34 с.

За да планирате правилно бременността, да идентифицирате различни нарушения на репродуктивната система и да изберете оптималния метод на контрацепция, е необходимо да имате ясно разбиране за естеството на менструалната функция на жената, една от ключовите връзки на която е овулация .

Менструален цикължени, представляващ периода от 1-вия ден на една менструация до 1-вия ден на следващата менструация, средно продължава 28-30 дни. През първата половина на менструалния цикъл един от яйчниците узрява фоликул, което представлява мехурче, пълно с течност и съдържащо зреещо яйце. На 14-15 ден от цикълаНастъпва овулация, което означава, че от фоликула излиза зряла яйцеклетка, готова за оплождане.

Зряла яйцеклетка след овулация способен на оплождане в рамките на 2 дни, а спермата има оплождаща активност в продължение на 4 дни след еякулацията. Следователно общият период на най-вероятния възможността за зачеване е 6 дни .

За определяне на периода на вероятно зачеване се използват различни методи за определяне на момента на овулация, които включват: оценка на естеството на кристализацията на слуз, съдържаща се в цервикалния канал, или кристализация на слюнката; измерване на температурата в ректума; ултразвукови данни; изследване на нивата на хормоните.

По този начин, по време на периода на овулация, слузта, съдържаща се в цервикалния канал, след като се нанесе върху предметно стъкло и се изсуши, претърпява кристализация, за да образува модел, подобен на лист от папрат. Този процес на кристализация се дължи на редица биофизични и биохимични промени, които настъпват в цервикалната слуз.

Активността на производството на слуз от жлезите, които се намират в стените на цервикалния канал, се контролира от нивото на женските полови хормони - естроген. С наближаването на момента на овулацията концентрацията и активността на естрогена се повишава. Това води до увеличаване на количеството на произведената слуз и до увеличаване на натриевите и калиеви соли в нея. Следователно, когато слузта изсъхне, съдържащите се в нея соли взаимодействат с муцина, което образува модел, наподобяващ лист от папрат.

При изследване на намазка от слуз под микроскоп става ясно, че от 9-ия ден на цикъла се появяват слаби признаци на кристализация. Освен това тежестта на модела постепенно се засилва, проявява се по-ясно 3-4 дни преди овулацията и достига най-ясните си очертания в деня на овулацията. След овулацията кристализацията намалява. Чертежът става размит и придобива "размазан" вид в рамките на 2-3 дни.

Определянето на времето на овулация с помощта на тест за кристализация на цервикална слуз изисква ежедневно посещение при гинеколога. В редица случаи, поради патологични промени в шийката на матката или възпалителен процес, изследването може да бъде затруднено или надеждността на резултата да бъде намалена, тъй като картината на кристализация е изкривена.

Промени в моделите на кристализация по време на менструалния цикъл, подобно на цервикалната слуз, се наблюдават и в слюнката. Увеличаването на нивата на естроген с наближаването на овулацията води до увеличаване на количеството натриеви и калиеви соли в слюнката, както и в цервикалната слуз. Тяхната концентрация достига максимум в деня на овулацията, което води до кристализация на слюнката при изсушаване. Надеждността на теста за кристализация на слюнката за определяне на овулацията е от 96% до 99%.

За да се оцени моделът на кристализация на слюнката и съответно да се определи времето на овулация, се използват различни мини-микроскопи, които са компактни и леки оптични инструменти, удобни за използване в ежедневни условия.

В дните, когато зачеването все още не е възможно(5-6 дни преди овулацията или повече) или когато това вече не е възможно (3-4 дни след овулацията), изсъхналата слюнка образува точковиден размит модел. 3-4 дни преди овулацията се отбелязва картина на началото на образуването на папратовидна структура на модела. С наближаването на овулацията моделът ще стане по-ясен, което показва висока вероятност за зачеване. В рамките на 2-3 дни след овулацията, яснотата на модела намалява.

Възпалителните процеси в устната кухина или ларинкса могат да доведат до изкривени резултати. Препоръчително е да използвате сутрешна слюнка или да използвате теста не по-рано от 2-3 часа преди хранене, миене на зъбите, пиене на алкохол или пушене.

Ако продължителността на съществуване на всеки микроскопичен модел на кристализация както на цервикалната слуз, така и на слюнката, както и заместването му с друг модел е постоянна и последователна в съответствие с фазите на менструалния цикъл, тогава това показва липсата на неговите нарушения, а овулацията настъпва в точното време и във всеки менструален цикъл. Дългосрочното съществуване на същия модел на кристализация, неговото отсъствие или ненавременно заместване с друг модел показва дисфункция на яйчниците. В този случай определено трябва да се консултирате с лекар.

За определяне на овулациятаможете също да използвате температурен тест, което се основава на факта, че в зависимост от фазата на менструалния цикъл телесната температура се променя по определен начин. Най-точни данни за естеството на настъпващите топлинни промени могат да бъдат получени чрез измерване температура в ректумаведнага след сън, в покой, без да ставате от леглото, ежедневно през целия менструален цикъл. В първата фаза на нормалния менструален цикъл температурата обикновено е по-ниска 37°C. Буквално в навечерието на овулацията тя леко намалява и веднага след нея температурата се повишава с 0,4–0,6 ° C в сравнение с първоначалната и като правило става малко по-висока от 37 ° C. Възникващите температурни колебания са свързани с промени в нивата на естроген през първата и втората фаза на менструалния цикъл и повишаване на нивото прогестеронвъв втората фаза. В същото време прогестеронът, който започва да се произвежда в яйчника в по-големи количества точно след овулацията, засяга центъра на терморегулацията, което води до леко повишаване на телесната температура. Ако овулацията не настъпи по някаква причина, тогава температурата през целия цикъл ще бъде приблизително еднаква.

Като част от цялостна диагностика е възможно да се използват методи за определяне на нивото на женските полови хормони (различни фракции на естрогени и прогестерон), както и фоликулостимулиращи и лутеинизиращи хормони в кръвта. Концентрацията на тези хормони се променя по определен начин от ден на ден в зависимост от фазите на менструалния цикъл, наличието или отсъствието на овулация.

С помощта на ултразвук също е възможно да се наблюдава образуването на фоликула, да се определи неговия размер и да се определи момента на овулация. Наличието на зреещ фоликул в яйчника се показва от образуване на кухина, която постепенно се увеличава до 2-3 cm в диаметър през първата половина на менструалния цикъл и изчезва в средата. Промените в размера на тази формация, като правило, са ясно свързани с промените в модела на кристализация на слуз, с температурата в ректума и с нивото на хормоните. Признак за зрялост на фоликула и предстоящо (1,5 - 2 дни) начало на овулация според ултразвука е откриването на яйценосна туберкула, която изглежда като малка светла формация, съседна на вътрешната повърхност на фоликула. Овулацията се показва не само от изчезването на фоликула, но и от едновременното появяване на течност зад матката.

Смята се, че ултразвукът позволява да се получи по-надеждна информация за узряването на фоликулитев сравнение с хормоналните тестове, тъй като няколко патологично незрели фоликула могат заедно да осигурят нормално ниво на изследваните хормони, което ще създаде погрешна представа за нормалното протичане на менструалния цикъл.

В момента ултразвукът е един от важните методи за наблюдение на процеса на стимулиране на овулацията и неговата ефективност. Така при прекомерна стимулация се наблюдава значително увеличение на яйчниците с образуването на множество кухини в тях.

По този начин използването на различни методи за определяне на овулацията позволява да се контролира естеството на менструалния цикъл и да се избере най-благоприятният период за зачеване по време на планирана бременност. Използвайки тези тестове за предотвратяване на нежелана бременност, можете да изберете най-рационалния контрацептивна схемаили просто избягвайте сексуална активност в дните, когато зачеването е най-вероятно. С помощта на изброените тестове е възможно също така да се следи ефективността на лечението, насочено към коригиране на менструалната функция.

Освен това, с помощта на редица прости тестове, като измерване на температурата в ректума или оценка на кристализацията на слюнката, жената може самостоятелно да следи менструалната си функция.