Zastosowanie bakteriofagów w medycynie. Bakteriofagi i ich praktyczne zastosowanie. Bakteriofagi
Preparaty fagowe znajdują zastosowanie w leczeniu i profilaktyce chorób zakaźnych, a także w diagnostyce – w celu określenia wrażliwości fagów i typowania fagowego w identyfikacji mikroorganizmów. Działanie fagów opiera się na ich ścisłej specyficzności. O działaniu terapeutycznym i profilaktycznym fagów decyduje aktywność lityczna samego faga, a także właściwości immunizacyjne składników (antygenów) zniszczonych komórek drobnoustrojów w fagolizatach, szczególnie w przypadku wielokrotnego użycia. Przy otrzymywaniu preparatów fagowych wykorzystuje się sprawdzone szczepy produkcyjne fagów i odpowiednio typowe kultury mikroorganizmów. Hodowlę bakteryjną w płynnej pożywce, znajdującą się w logarytmicznej fazie rozmnażania, infekuje się zawiesiną matki faga.
Hodowlę poddaną lizie fagowej (zwykle następnego dnia) filtruje się przez filtry bakteryjne, a do filtratu zawierającego fagi dodaje się roztwór chinozolu jako środek konserwujący.
Gotowy lek fag jest klarowną cieczą żółtawy kolor. W przypadku dłuższego przechowywania niektóre fagi są dostępne w postaci suchej (w tabletkach). W leczeniu i profilaktyce infekcje jelitowe fagi stosuje się jednocześnie z roztworem wodorowęglanu sodu, ponieważ kwaśna zawartość żołądka niszczy faga. Fag nie utrzymuje się w organizmie długo (5-7 dni), dlatego zaleca się jego ponowne użycie.
Wyprodukowano w Związku Radzieckim następujące leki, stosowany w leczeniu i profilaktyce chorób: dur brzuszny, salmonella, czerwonka, kolifag, fag gronkowcowy i paciorkowcowy. Obecnie fagi stosuje się w leczeniu i profilaktyce w połączeniu z antybiotykami. Ta aplikacja ma więcej skuteczne działanie dla form bakterii odpornych na antybiotyki.
Bakteriofagi diagnostyczne są szeroko stosowane do identyfikacji bakterii wyizolowanych od pacjenta lub z zainfekowanych obiektów otoczenia. Za pomocą bakteriofagów, ze względu na ich dużą specyficzność, możliwe jest określenie typów bakterii i z większą dokładnością poszczególnych typów izolowanych bakterii. Obecnie rozwijana jest diagnostyka fagowa i typowanie fagowe bakterii z rodzaju Salmonella, Vibrio i gronkowców. Fagotypowanie pomaga ustalić źródło infekcji, zbadać powiązania epidemiologiczne i odróżnić sporadyczne przypadki chorób od epidemii.
Diagnostyka i typowanie fagów opierają się na zasadzie współhodowli wyizolowanego mikroorganizmu z fagami odpowiedniego gatunku lub typu. wynik pozytywny Uważa się, że zachodzi dobrze określona liza badanej kultury z fagiem gatunkowym, a następnie z jednym z typowych fagów.
Bakteriofagi, zastosowanie w medycynie.
Bakteriofagi. Zastosowanie w praktyce lekarskiej.
Bakteriofagi to wirusy bakteryjne zdolne do specyficznego przenikania komórek bakteryjnych, namnażania ich i powodowania lizy.
Występują wszędzie tam, gdzie występują bakterie – w glebie, wodzie, przewód jelitowy osoba. Wszystkie są nieodłącznie związane z fagami cechy biologiczne charakterystyczne dla wirusów.
Morfologia fagów:
Fagi różnią się kształtem - nitkowate, kuliste, sześcienne, fagi z głową i ogonem (przypominają plemnik).
Rozmiary są małe, średnie i duże.
Najbardziej złożone są duże fagi, składające się z głowy i ogona. Głowa ma kształt dwudziestościanu. Głowę łączy się z procesem za pomocą kołnierza i parasola. Wewnątrz wyrostka znajduje się wydrążony cylindryczny pręt, który łączy się z głową; na zewnątrz wyrostek ma zdolną do kurczenia się osłonkę białkową; wyrostek ogonowy kończy się sześciokątną płytką podstawną z krótkimi kolcami, z której wychodzą nitkowate struktury włókniste . Płytka i kolce zawierają lizozym. W procesie tym występuje 6 kosmków, które zapewniają ścisłe przyleganie faga do komórki bakteryjnej. Mogą występować fagi z niekurczliwą osłonką, fagi z krótkimi wyrostkami, fagi z analogicznym wyrostkiem i fagi bez wyrostka.
Odporność na fagi: fagi tolerują temperatury 50-60°C. Są odporne na zamarzanie i giną w temperaturze 70°C. Nie mają na nie wpływu trucizny takie jak cyjanek, fluor, a także chloroform i fenol. Fagi są dobrze zachowane w szczelnie zamkniętych ampułkach, ale mogą zostać zniszczone przez gotowanie, wystawienie na działanie kwasów lub promieniowanie UV.
Mechanizm oddziaływania fagów z komórką drobnoustroju:
Na podstawie ich interakcji rozróżnia się fagi zjadliwe i umiarkowane.
Zjadliwe fagi - wnikają do komórki bakteryjnej, rozmnażają się i powodują lizę bakterii.
Fagi z wyrostkiem i kurczącą się otoczką mają szereg cech:
Fagi te adsorbowane są na powierzchni komórki bakteryjnej za pomocą włókienek procesowych w obecności odpowiednich receptorów. Następnie aktywowany jest enzym ATPaza, co prowadzi do obkurczenia osłonki wyrostka ogoniastego i wprowadzenia do komórki wydrążonego pręta. W procesie przebijania ścian komórkowych bierze udział enzym lizozym.
DNA faga przechodzi przez pusty trzonek wyrostka robaczkowego i jest wstrzykiwany do komórki. Kapsyd i proces pozostają na powierzchni komórki. Następnie białko faga i kwas nukleinowy są odtwarzane wewnątrz komórki. Następny etap polega na składaniu i tworzeniu dojrzałych cząstek fagów. Ostatni etap: liza komórki i uwolnienie z niej cząstek dojrzałych fagów. Liza może zachodzić zarówno od wewnątrz – ściana komórkowa pęka i do środka wychodzą dojrzałe fagi otoczenie zewnętrzne a z zewnątrz - fagi robią w ścianie komórkowej wiele dziur, przez które wypływa zawartość komórki; przy takiej lizie fag się nie rozmnaża.
Umiarkowane fagi nie powodują lizy wszystkich komórek w populacji, wchodzą w symbiozę z niektórymi komórkami, w wyniku czego DNA faga integruje się z chromosomem komórkowym. W tym przypadku genom faga nazywany jest profagiem.
Profag staje się częścią chromosomu komórki i podczas reprodukcji replikuje się synchronicznie z genomem komórki, nie powodując jej lizy i jest przekazywany potomstwu.
Zjawisko symbiozy komórki drobnoustroju z profagiem nazywa się lizogenią.
A kultura bakterii zawierająca profaga jest lizogenna, nazwa ta odzwierciedla zdolność profaga spontanicznie lub pod wpływem czynników środowisko przedostają się do cytoplazmy i zachowują się jak zjadliwy fag, który lizuje bakterie. Przechodząc do postaci zjadliwej, fag umiarkowany może przechwycić część chromosomu komórki bakteryjnej i po lizie przenieść ją do innej.
Fagi dzielą się ze względu na spektrum działania:
1. Bakterie wielowartościowe - ulegają lizie (fag Salmonelli lizuje tylko Salmonellę).
2. Gatunki (monofagi) - powodują lizę bakterii tylko jednego gatunku.
3. Typowo specyficzny – selektywnie lizuje poszczególne warianty bakterii w obrębie gatunku (patogen Staphylococcus – 33 zestawy).
Praktyczne użycie:
Preparaty fagowe stosowane są w leczeniu i zapobieganiu infekcjom oraz ich diagnostyce. Działanie fagów opiera się na ich ścisłej specyficzności, do otrzymania preparatu fagowego wykorzystuje się szczepy przemysłowe i odpowiadające im hodowle bakteryjne.
Formy uwalniania: płynne, suche, tabletki, aerozole, czopki. Wprowadzane są do organizmu drogą pozajelitową, dojelitową i miejscową. Stosowany w celach terapeutycznych i profilaktycznych w różne choroby(czerwonka, cholera, różne choroby ropno-zapalne).
Diagnostyka fagowa: zasada diagnostyczna opiera się na wspólnej hodowli kultur testowych ze znanymi i nieznanymi fagami; wynik uważa się za pozytywny, jeśli nastąpi liza komórki bakteryjnej. Lizę można zaobserwować w cieczy i ciałach stałych pożywki. Na pożywkach płynnych następuje klarowanie zawiesiny bakteryjnej, a na pożywkach gęstych tworzą się obszary pozbawione wzrostu.
Typowanie fagowe: określenie wariantu typu gatunku przy użyciu zestawu typów fagów. Wytwarzane są fagi duru brzusznego, fagi do diagnozowania cholery, fagi salmonelli i fagi czerwonki. Typowanie fagowe jest niezbędne przy przeprowadzaniu analizy epidemiologicznej choroby oraz w celu ustalenia źródła i dróg transmisji. Wykrywając faga, ocenia się zawartość odpowiednich mikroorganizmów.
Ze względu na ich destrukcyjny (lityczny) wpływ na bakterie, fagi można stosować w celach terapeutycznych i profilaktycznych w przypadku różnych chorób (czerwonka, cholera, różne choroby ropno-zapalne itp.). Zestawy standardowych fagów, w tym międzynarodowych, służą do typowania fagowego patogenów szeregu chorób (cholera, dur brzuszny, salmonelloza, błonica, gronkowce i inne choroby). Stosowane są także bakteriofagi Inżynieria genetyczna Jako wektory przenoszące fragmenty DNA możliwy jest także naturalny transfer genów pomiędzy bakteriami poprzez określone fagi (transdukcja). Z reguły takim pacjentom przepisuje się antybiotyki. Jednak ze względu na to, że stale mutujące bakterie stają się oporne na antybiotyki, ich skuteczność jest ograniczona. ostatnie lata osłabiony. Uwagę badaczy przykuły bakteriofagi – wirusy pożerające bakterie. W przeciwieństwie do antybiotyków, które niszczą zarówno szkodliwe, jak i zdrowa mikroflora organizmu, bakteriofagi działają selektywnie, jedynie oddziałują bakterie chorobotwórcze. Jak działają bakteriofagi w organizmie? Wnikają tylko do niektórych komórek i wchodzą w interakcję z ich DNA, tworząc efekt lizogenny lub lityczny. Działając na drobnoustroje typu litycznego, bakteriofagi niszczą je, co pozwala na szybkie namnażanie się. Typ lizogenny reprezentuje przenikanie genomu faga do genomu bakteryjnego, ich syntezę i dalsze przejście z jednego pokolenia na drugie. Informacje o bakteriofagach pojawiły się ponad sto lat temu, kiedy zaczęto je stosować w leczeniu gronkowców. Obecnie są szeroko stosowane w profilaktyce i leczeniu infekcji jelitowych, gronkowcowych, paciorkowcowych, duru brzusznego i wielu innych. Nowoczesna medycyna poszukuje metod wykorzystujących nie żywe bakteriofagi, ale enzymy działające na bakterie chorobotwórcze poprzez lizę. Można je stosować w postaci aerozolu do nosa lub jamy ustnej, pasty do zębów, pożywienia, dodatki do żywności. Skuteczność stosowania bakteriofagów polega na braku przeciwwskazań i powikłań, kompatybilności z innymi lekami, aktywny wpływ dla drobnoustrojów opornych na antybiotyki. Ze względu na te właściwości bakteriofagi są oceniane jako leki przyszłości udana walka z infekcjami.
Do najważniejszych zalet terapii fagowej należą: wysoka czułość patogenną mikroflorę dla bakteriofaga, możliwość początkowego stosowania małych dawek bakteriofaga, kompatybilność ze wszystkimi rodzajami tradycyjnej terapii przeciwbakteryjnej, brak przeciwwskazań do profilaktyki fagowej i terapii fagowej. Ustalono, że w przyrodzie nie ma mikroorganizmów całkowicie odpornych na bakteriofaga. Ważne jest, aby rozmnażanie się bakteriofaga było możliwe tylko w obecności wrażliwych na niego bakterii. Po śmierci ostatniej komórki drobnoustroju w ognisku zmiany zakaźnej następuje jej zatrzymanie aktywna praca i jest usuwany z organizmu bez śladu.
Ze względu na obserwowany spadek działanie terapeutyczne stosuje się antybiotyki, preparaty bakteriofagowe praktyka kliniczna jako alternatywa dla antybiotyków i w połączeniu z nimi. Preparaty bakteriofagowe nie ustępują lekom przeciwbakteryjnym pod względem skuteczności, stymulują lokalne czynniki specyficzne i odporność nieswoista i nie powodują niepożądanych reakcji toksycznych ani alergicznych. Bakteriofagi są przepisywane doustnie, a także służą do nawadniania ran, do wprowadzania do drenowanych jam - jamy brzusznej, opłucnej, zatok, ucha środkowego, ropni, ran, macicy, pęcherza moczowego. Po podaniu doustnym i w aerozolu, a także na powierzchni błon śluzowych, bakteriofagi przenikają do krwi i limfy i są wydalane przez nerki, odkażając drogi moczowe.
Obecnie wzrosło zainteresowanie terapią fagową w chirurgii, urologii, okulistyce i traumatologii.
Preparaty lecznicze i profilaktyczne bakteriofagów składają się z poliklonalnych zjadliwych bakteriofagów o szerokim spektrum działania, aktywnych wobec bakterii opornych na antybiotyki. Produkowane są w postaci płynnej, w tabletkach kwasoodpornych, w postaci czopków, maści i mazideł.
Preparaty bakteriofagowe są sterylnym filtratem fagolizatów bakteryjnych, przepisywane są doustnie, miejscowo w celu irygacji ran i błon śluzowych, wprowadzenia do jam macicy, pęcherza moczowego, ucha, Zatoki przynosowe a także w jamach drenażowych – jamy brzusznej, opłucnej, a także w jamie ropni po usunięciu wysięku.
Bakteriofagi są w stanie szybko przedostać się do krwi i limfy oraz są wydalane przez nerki z moczem. Jak wykazały nasze badania, po spożyciu 30 ml bakteriofaga cząsteczki faga wykrywane są w moczu już po 2 godzinach, a ich maksymalne stężenie w moczu osiągane jest po 6-8 godzinach od spożycia.
Aktywność lecznicza i profilaktyczna bakteriofagów wobec patogenów chorób ropno-septycznych i jelitowych jest dość wysoka - od 72% do 90%, w tym wobec szczepów pochodzenia szpitalnego, charakteryzujących się wieloraką opornością na antybiotyki. Zgodność preparatów bakteriofagów ze współczesną strukturą atiologiczną patogenów osiąga się poprzez ich ciągłą adaptację do krążących szczepów w wyniku odnawiania ras fagów i produkcyjnych stempli bakteryjnych. Ta cecha odróżnia fagi od innych środki przeciwdrobnoustrojowe- antybiotyki, eubiotyki lub szczepionki, w przypadku których szczepy produkcyjne lub szczepy produkcyjne lub substancja syntetyzowana nie podlegają żadnym modyfikacjom. Taka plastyczność preparatów bakteriofagowych zapewnia kontynuację pierwotnej oporności fagowej patogenów.
Zalety leków bakteriofagowych
Do zalet leków bakteriofagowych należy wąska specyfika działania, która w odróżnieniu od antybiotyków nie powoduje hamowania prawidłowej mikroflory. Udowodniono stymulujący wpływ bakteriofaga gronkowcowego na bifidobakterie - istotnym składnikiem mikrobiocenoza jelitowa. Zastosowanie bakteriofagów w leczeniu choroba zakaźna stymuluje czynniki odporności swoistej i nieswoistej, co jest szczególnie skuteczne w leczeniu chorób przewlekłych choroby zapalne na tle warunków immunosupresyjnych, nosicielstwo bakterii.
Praca eksperymentalna i długoterminowa obserwacje kliniczne Udowodniono niemożność przenoszenia plazmidów opornych na antybiotyki i toksyczności przez leki terapeutyczne i profilaktyczne bakteriofagów, ponieważ są one poliklonalnymi kompleksami zjadliwych bakteriofagów.
W Rosji, krajach WNP, Polsce, Francji i Hiszpanii bakteriofagi znajdują szerokie zastosowanie w medycynie i weterynarii. Skumulowane wspaniałe doświadczenie zastosowanie bakteriofagów w leczeniu infekcji jelitowych: wysoka skuteczność kliniczna terapii fagowej w leczeniu ostrych i przewlekła czerwonka, salmonellozy, któremu towarzyszy odkażanie nosicieli. Wysoką skuteczność epidemiologiczną profilaktycznego stosowania bakteriofagów czerwonki, duru brzusznego i salmonelli wykazano w kontrolowanych eksperymentach epidemiologicznych przeprowadzonych w placówkach przedszkolnych i przedsiębiorstw przemysłowych stwierdzono spadek częstości występowania o 3-6 razy. Zastosowanie bakteriofagów wykazało dobre rezultaty w leczeniu chorób wywołanych przez bakterie oportunistyczne, dysbiozie, zmiany ropne skóra, narządy laryngologiczne, układ mięśniowo-szkieletowy, układ moczowo-płciowy, układu krążenia i oddechowego, w tym u noworodków i dzieci w pierwszym roku życia.
Istotnym warunkiem zapewniającym skuteczność leczenia preparatami fagowymi jest pewna wrażliwość fagowa patogenu.
Widać wieloletnie doświadczenie terapii fagowej w Instytucie Urologii; W wyniku adaptacji bakteriofagów komercyjnych do szczepów szpitalnych krążących w poradni urologicznej NPO „Biophage” czułość fagów szczepów wzrosła o 15% i kształtowała się na poziomie lub wyższym od wrażliwości na najnowocześniejsze zagraniczne antybiotyki. W tle długotrwałe użytkowanie bakteriofagi w szpitalu wśród szczepy szpitalne nie zaobserwowano rozwoju oporności fagów, natomiast oporność na antybiotyki spadła. Skuteczność kliniczną terapii fagowej zaobserwowano w 92% przypadków, często przewyższającą wyniki antybiotykoterapii. Brak przeciwwskazań i powikłań przy stosowaniu preparatów bakteriofagowych, możliwość ich stosowania w połączeniu z innymi leki, w tym z antybiotykami, aktywność wobec szczepów opornych na antybiotyki i adaptacja bakteriofagów do współczesne patogeny- wszystko to pozwala nam ocenić preparaty bakteriofagowe jako wysoce skuteczny i obiecujący środek doraźnego leczenia infekcji ropno-septycznych i jelitowych. Jednak fagi, czyli „naturalni sanitariusze”, mogą znaleźć zastosowanie nie tylko w leczeniu, ale także w profilaktyce chorób zakaźnych. Można je przepisywać kobietom w ciąży, karmiącym piersią i dzieciom w każdym wieku, w tym wcześniakom. Głównym warunkiem ich pomyślnego zastosowania jest przetestowanie wyizolowanej kultury pod kątem wrażliwości na odpowiedniego faga. Zaobserwowano niesamowity wzór: w przeciwieństwie do antybiotyków wrażliwość szczepów klinicznych mikroorganizmów na bakteriofagi jest stabilna i ma tendencję do wzrostu, co można wytłumaczyć wzbogaceniem preparaty medyczne nowe rasy fagów. Oprócz zastosowań medycznych bakteriofagi są szeroko stosowane w weterynarii; Bakteriofag gronkowcowy jest szczególnie skuteczny w leczeniu zapalenia sutka u krów. Preparaty bakteriofagowe są przepisywane doustnie na choroby narządy wewnętrzne lub lokalnie, bezpośrednio do zmiany chorobowej. Działanie faga pojawia się w ciągu 2-4 godzin od jego podania (co jest szczególnie istotne w warunkach intensywnej terapii). Bakteriofagi przenikają do krwi, limfy i są wydalane przez nerki, odkażając drogi moczowe.
Zatem bakteriofagi wykorzystują:
W weterynarii dla:
profilaktyka i leczenie choroby bakteryjne ptaki i zwierzęta;
leczenie chorób ropno-zapalnych błon śluzowych oczu i jamy ustnej;
zapobieganie powikłaniom ropno-zapalnym w oparzeniach, ranach, interwencjach chirurgicznych;
W inżynierii genetycznej:
do transdukcji - naturalna transmisja geny między bakteriami;
jako wektory przenoszące skrawki DNA;
przy użyciu fagów możliwe jest zaprojektowanie ukierunkowanych zmian w genomie DNA gospodarza;
W branży spożywczej:
gotowe do spożycia produkty mięsne i drobiowe są już masowo przetwarzane za pomocą środków zawierających fagi;
bakteriofagi znajdują zastosowanie w produkcji produktów spożywczych z mięsa, drobiu, serów, produktów roślinnych itp.;
CM. ZAKHARENKO, dr, profesor nadzwyczajny, Wojskowy Akademia Medyczna ich. CM. Kirowa w Petersburgu
Bakteriofagi to unikalne mikroorganizmy, na bazie których stworzono grupę leków leczniczych i profilaktycznych o szczególnych właściwościach i właściwościach. Ich podstawowe działania są naturalne mechanizmy fizjologiczne interakcje między fagami i bakteriami pozwalają przewidzieć nieskończoną różnorodność zarówno samych bakteriofagów, jak i możliwe sposoby ich zastosowania. W miarę poszerzania się kolekcji bakteriofagów niewątpliwie pojawią się nowe docelowe patogeny, a zakres chorób, w leczeniu których fagi można stosować zarówno w monoterapii, jak i w ramach złożonych schematów leczenia, będzie się poszerzał.
Tak, użyj poliwalentny pyobakteriofag Sekstafag w leczeniu zakażonej martwicy trzustki (Perm State Medical Academy im. Akademika E.A. Wagnera) umożliwił szybsze przywrócenie podstawowych parametrów homeostazy oraz funkcji narządów i układów u pacjentów. Nastąpiło także znaczne zmniejszenie ich liczby powikłania pooperacyjne I zgony: w grupie chorych leczonych standardowo śmiertelność wyniosła 100%, natomiast w grupie otrzymującej BF 16,6%.
Ze względu na nieszkodliwość i reaktogenność leków BF, ich stosowanie w praktyka pediatryczna, w tym u noworodków. Interesujące są doświadczenia regionalnej szkoły dziecięcej w Niżnym Nowogrodzie szpital kliniczny, gdzie w okresie powikłań sytuacji epidemiologicznej, oprócz zwyczajowych środków przeciwepidemicznych, stosowano zarówno BF – Intesti-bacteriophage, jak i BF Pseucfomonas aeruginosa. Wykazano 11-krotny spadek częstości występowania zakażeń szpitalnych o etiologii Pseudomonas wysoka wydajność zastosowanie BF. Leki BF można przepisywać w leczeniu dysbiozy i zaburzeń układ trawienny oraz zapobiegania kolonizacji błon śluzowych przewodu pokarmowego przez bakterie oportunistyczne. Wieloskładnikowe preparaty BF idealnie nadają się do natychmiastowego łagodzenia pierwszych objawów zaburzeń żołądkowo-jelitowych.
Do tej pory przedsiębiorstwo planowało cała linia priorytetowe obszary rozwoju i produkcji bakteriofagów terapeutycznych i profilaktycznych, które wpisują się w nowo pojawiające się trendy światowe. Tworzone i wprowadzane są nowe preparaty: opracowano BF przeciwko ząbkowaniu i enterobakteriom, trwają prace nad stworzeniem preparatu fagowego przeciwko Helicobacter pylori.
Jak wynika z raportu zastępcy kierownika wydziału nauki i nauki, tylko jednym producentem tych leków jest NPO Microgen innowacyjny rozwój Alla Lobastova produkuje ponad 2 miliony opakowań rocznie. Niestety, poglądy wielu lekarzy na temat bakteriofagów są dalekie od obiektywności. Niewiele osób wie, że bakteriofagi aktywne wobec tego samego patogenu mogą należeć do różnych rodzin, mieć różne cykle życiowe itp. Na przykład bakteriofagi P. aeruginosa należą do rodzin Myoviridae, Podoviridae, Siphoviridae i mają działanie lityczne koło życia lub umiarkowane. Różne szczepy tego samego patogenu mogą mieć różną wrażliwość na bakteriofagi. Większość specjalistów wie (słyszała, ktoś stosował) o istnieniu płynu i tabletek postać dawkowania leki lecznicze i profilaktyczne bakteriofagów. Jednak ich zakres jest znacznie szerszy, co można uznać za absolutną zaletę, szczególnie w połączeniu z różnorodną drogą podawania (podawanie doustne, podawanie w lewatywach, aplikacje, irygacja ran i błon śluzowych, podawanie do jam ran itp.). ). DO oczywiste zalety Bakteriofagi są tradycyjnie klasyfikowane jako konkretny efekt do dość ograniczonej populacji bakterii, ograniczonego w czasie istnienia (do zaniku docelowej populacji mikroorganizmów), braku takich skutki uboczne jako toksyczne i reakcje alergiczne, reakcje dysbiotyczne itp. Leki te można stosować na różne sposoby grupy wiekowe i podczas ciąży. Same bakteriofagi nie są znaczącymi alergenami. Przypadki nietolerancji leków bakteriofagowych są najczęściej związane z reakcją na składniki pożywki. Wszyscy główni producenci tej grupy leków dążą do maksymalnej jakości stosowanych składników, co zmniejsza prawdopodobieństwo wystąpienia takich reakcji. W kontekście rosnącej oporności na antybiotyki niektórzy autorzy proponują uznanie bakteriofagów za najlepszą alternatywę dla antybiotyków. Leki lecznicze i profilaktyczne bakteriofagów to koktajl specjalnie dobranych kombinacji (kompleks poliklonalnych wysoce zjadliwych wirusy bakteryjne, specjalnie wyselekcjonowane przeciwko najczęstszym grupom patogenów infekcje bakteryjne) na podstawie kolekcji fagów producenta. Oddziały FSUE NPO Microgen w Ufie, Permie i Niżny Nowogród – nowoczesne centra produkcją takich leków. Możliwość tworzenia niestandardowych mikroorganizmy chorobotwórcze Leki lecznicze i profilaktyczne z bakteriofagami to kolejna ważna zaleta tej grupy leków. Rosnąca oporność bakterii na leki przeciwdrobnoustrojowe oraz częsta polietiologia współczesnych chorób zakaźnych wymagają skojarzonej antybiotykoterapii (dwa, trzy, a czasami więcej leków przeciwdrobnoustrojowych). Do wyboru wydajny schemat antybiotykoterapia, oprócz rzeczywistej wrażliwości bakterii na lek, należy wziąć pod uwagę wystarczające duża liczba czynniki. Terapia fagowa ma również pod tym względem pewne zalety. Z jednej strony zastosowaniu kombinacji bakteriofagów nie towarzyszy ich wzajemne oddziaływanie i nie prowadzi do zmiany schematów ich stosowania. W ramach istniejącego zestawu bakteriofagów terapeutycznych istnieje szereg dobrze sprawdzonych kombinacji – bakteriofag koliproteański, poliwalentny pyobakteriofag, intesti-bakteriofag. Z drugiej strony bakterii nie ma wspólne mechanizmy oporności na antybiotyki i fagi, dlatego można je stosować zarówno w sytuacji, gdy patogen jest oporny na któryś z leków, jak i w kombinacji „antybiotyk + bakteriofag”. Ta kombinacja jest szczególnie skuteczna w niszczeniu biofilmów drobnoustrojów. Eksperyment przekonująco to pokazuje łączne zastosowanie antagoniści żelaza i bakteriofagi mogą zakłócać tworzenie biofilmów Klebsiella pneumoniae. Jednocześnie następuje zarówno znaczne zmniejszenie wielkości populacji drobnoustrojów, jak i zmniejszenie liczby „młodych” komórek. Jeszcze jeden ważna cecha Działanie bakteriofagów jest takim zjawiskiem jak indukcja apoptozy. Niektóre szczepy E. coli posiadają geny powodujące śmierć komórki po wprowadzeniu do niej bakteriofaga T4. Zatem w odpowiedzi na ekspresję późnych genów faga T4, gen lit (kodujący proteazę niszczącą czynnik elongacji EF-Tu, niezbędny do syntezy białek), blokuje syntezę wszystkich białek komórkowych. Gen prrC koduje nukleazę rozszczepiającą tRNA lizyny. Nukleaza jest aktywowana przez produkt genu stp faga T4. W komórkach zakażonych fagiem T4 geny rex (należące do genomu faga i ulegające ekspresji w komórkach lizogennych) powodują tworzenie kanałów jonowych, co prowadzi do utraty niezbędnych do życia jonów przez komórki, a w konsekwencji do śmierci. Sam fag T4 może zapobiegać śmierci komórki poprzez zamykanie kanałów swoimi białkami, produktami genów rII. Jeśli bakterie rozwiną oporność na antybiotyk, należy szukać nowych możliwości modyfikacji aktywnej cząsteczki lub zasadniczo nowych substancji. Niestety, w ostatnich latach tempo wprowadzania nowych antybiotyków znacznie spadło. Sytuacja z bakteriofagami jest zasadniczo inna. Kolekcje dużych producentów obejmują dziesiątki gotowych szczepów bakteriofagów i są stale uzupełniane o nowe aktywne fagi. Dzięki bieżącemu monitorowaniu wrażliwości izolowanych patogenów na bakteriofagi producenci dostosowują składy fagów dostarczane do regionów. Dzięki przystosowanym bakteriofagom możliwa jest eliminacja ognisk zakażeń szpitalnych wywołanych przez szczepy antybiotykooporne. 
Na doustnie bakteriofagi szybko docierają do miejsca zakażenia: po podaniu doustnym przez pacjentów z chorobami ropno-zapalnymi, w ciągu godziny fagi dostają się do krwi, po 1–1,5 godzinach są wykrywane w wysięku oskrzelowo-płucnym i na powierzchni ran oparzeniowych, po 2 godzinach - z moczu, a także z płynu mózgowo-rdzeniowego pacjentów z urazami mózgu.
Tym samym bakteriofagi są wyjątkowymi mikroorganizmami, na bazie których stworzono grupę leków leczniczych i profilaktycznych o szczególnych właściwościach i właściwościach. Naturalne fizjologiczne mechanizmy interakcji fagów i bakterii pozwalają przewidzieć nieskończoną różnorodność zarówno samych bakteriofagów, jak i możliwych sposobów ich wykorzystania. W miarę poszerzania się kolekcji bakteriofagów niewątpliwie pojawią się nowe docelowe patogeny, a zakres chorób, w leczeniu których fagi można stosować zarówno w monoterapii, jak i w ramach złożonych schematów leczenia, będzie się poszerzał. Współczesne spojrzenie na przyszłe losy fagoterapii powinno opierać się zarówno na dużej specyfice ich działania, jak i na konieczności ścisłego przestrzegania wszystkich zasad terapii fagowej. Przeciwstawienie bakteriofagów jakimkolwiek sposobom terapii etiotropowej jest błędne.
Praktyczne zastosowanie fagów. Bakteriofagi wykorzystywane są w diagnostyce laboratoryjnej zakażeń do wewnątrzgatunkowej identyfikacji bakterii, czyli określenia fagowaru (fagotypu). W tym celu stosuje się metodę typowania fagowego, opartą na ścisłej specyfice działania fagów: krople różnych fagów specyficznych dla typu diagnostycznego nanosi się na płytkę z gęstą pożywką obsianą „trawnikiem” czystej kultury patogenu. Faga bakterii określa się na podstawie rodzaju faga, który spowodował jej lizę (utworzenie sterylnej plamki, „płytki” lub „kolonii ujemnej”, faga). Do identyfikacji źródła i dróg szerzenia się zakażenia (oznaczanie epidemiologiczne) wykorzystuje się technikę fagotypowania. Izolacja bakterii tego samego fagowara od różnych pacjentów wskazuje na wspólne źródło ich infekcji.
Fagi są również stosowane w leczeniu i zapobieganiu wielu infekcjom bakteryjnym. Wytwarzają dur brzuszny, salmonellę, czerwonkę, pseudomonas, fagi gronkowcowe, paciorkowcowe i leki kombinowane(coliproteus, pyobakteriofagi itp.). Bakteriofagi przepisywane są według wskazań doustnie, pozajelitowo lub miejscowo w postaci płynu, tabletek, czopków lub aerozoli.
Bakteriofagi są szeroko stosowane w inżynierii genetycznej i biotechnologii jako wektory do produkcji rekombinowanego DNA.
W praktyce stosowane preparaty bakteriofagowe to filtrat hodowli bulionowej odpowiednich drobnoustrojów poddanych lizie przez faga, zawierający żywe cząstki faga, a także rozpuszczone antygeny bakteryjne uwolnione z komórek bakteryjnych podczas ich lizy. Powstały preparat, płynny bakteriofag, powinien wyglądać całkowicie klarowny płyn żółty kolor większą lub mniejszą intensywnością.
Do stosowania w celach terapeutycznych i profilaktycznych fagi można wytwarzać w postaci tabletek z powłoką kwasoodporną. Pelletowany suchy fag jest bardziej stabilny podczas przechowywania i wygodny w użyciu. Jedna tabletka suchego bakteriofaga odpowiada 20-25 ml płynnego preparatu. Okres ważności preparatów suchych i płynnych wynosi 1 rok. Płynny bakteriofag należy przechowywać w temperaturze +2 +10 C, sucho - nie wyższej niż +1 ° C, ale można go przechowywać w lodówce w temperaturach ujemnych.
Bakteriofag podany doustnie pozostaje w organizmie przez 5-7 dni. Z reguły przyjmowaniu bakteriofaga nie towarzyszą żadne reakcje ani powikłania. Nie ma przeciwwskazań do stosowania. Stosowane są w postaci irygacji, płukanek, balsamów, tamponów, zastrzyków, a także podawane do jam brzusznych, opłucnowych, stawowych i stawowych. pęcherz moczowy w zależności od lokalizacji patogenu.
Fagi diagnostyczne produkowane są w postaci płynnej i suchej w ampułkach.Przed rozpoczęciem pracy suchy bakteriofag jest rozcieńczany. Jeżeli na ampułkach wskazane jest miano tr, w reakcji fagolizy (metoda Otto) stosuje się DRT (roboczą dawkę miana) w celu identyfikacji bakterii; jeśli wskazany jest typ faga, wówczas do typowania faga, w celu określenia źródła infekcji.
Wpływ bakteriofaga na kulturę drobnoustrojów w podłożu płynnym i stałym
Metoda Otto (kapiąca kropla)
Grubo zasiej trawnik badanej rośliny. 5-10 minut po wysiewie na osuszoną powierzchnię pożywki nanosi się płynny fag diagnostyczny. Naczynie jest lekko przechylone, tak aby kropla faga rozprzestrzeniła się na powierzchni agaru. Kubek umieszcza się w termostacie na 18-24 godziny. Wyniki obliczane są wg całkowita nieobecność wzrost kultury w miejscu zastosowania kropli faga.
Eksperyment na płynnej pożywce
Badaną kulturę zaszczepia się do dwóch probówek z płynną pożywką. Do jednej probówki („O”) dodaje się bakteriofaga diagnostycznego z pętlą. Po 18-20 godzinach w probówce, do której nie dodano bakteriofaga („K”), obserwuje się silne zmętnienie bulionu – zaszczepiona kultura wyrosła. Bulion w probówce, do której dodano bakteriofaga, pozostał przezroczysty ze względu na lizę kultury pod jego wpływem.
Typowanie fagowe bakterii
Ze względu na spektrum działania wyróżnia się następujące bakteriofagi: bakterie wielowartościowe, ulegające lizie; bakterie jednowartościowe, lizujące pewien typ; typowe, lizujące poszczególne typy (warianty) bakterii.
Na przykład jeden szczep patogennego gronkowca może zostać poddany lizie przez kilka typów fagów, zatem wszystkie typowe fagi (24) i szczepy patogenne gronkowce połączone w 4 grupy.
Metoda typowania fagowego ma bardzo ważne do badań epidemiologicznych, gdyż pozwala na identyfikację źródła i dróg rozprzestrzeniania się patogenów. W tym celu oznacza się fagowar wyizolowany z materiału patologicznego. czysta kultura na stałych pożywkach przy użyciu standardowych fagów diagnostycznych.
Fagowar kultury mikroorganizmu określa się na podstawie typowego faga, który spowodował jego lizę.Izolacja bakterii tego samego fagowara od różnych osobników wskazuje na źródło infekcji.
