A kész közeg színe és átlátszósága. Az urán láncreakciója és az érzések láncreakciója

119. Pandi és Nonne reakciói - Apelt

A Pandi-reakció végrehajtásához reagensként egy felülúszót, átlátszó folyadékot használnak, amelyet 100 g folyékony karbolsav 1000 ml desztillált vízzel történő erőteljes összerázásával kapunk. Az üledék megszerzéséhez és tiszta folyadék(reagens), ezt a keveréket először termosztátba helyezzük 3-4 órára, majd szobahőmérsékleten tartjuk 2-3 napig.

Sötét papírra helyezünk egy óraüveget vagy tárgyüveget, és 2-3 csepp reagenst csepegtetünk rá, majd 1 csepp gerincvelői folyadék. Ha a csepp zavarossá válik, vagy a szélén fonalszerű zavarosság jelenik meg, a reakció pozitívnak tekinthető.

A Nonne-Apelt reakció végrehajtásához tiszta kémcsövekre, telített ammónium-szulfát oldatra, desztillált vízre és sötét papírra van szüksége. Telített ammónium-szulfát oldatot készítünk a következő módon: 0,5 g vegytiszta semleges ammónium-szulfátot 1000 ml-es lombikba helyezünk, majd 100 ml 95 °C-ra melegített desztillált vizet öntünk rá, rázzuk, amíg a só teljesen fel nem oldódik, és néhány napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 2-3 nap elteltével az oldatot szűrjük és meghatározzuk a pH-t. A reakciónak semlegesnek kell lennie.

A kapott oldatból 0,5-1 ml-t kémcsőbe öntünk, és a kémcső fala mentén óvatosan adagolunk ugyanennyi liquort. 3 perc elteltével értékelje az eredményt. A fehéres gyűrű megjelenése pozitív reakciót jelez. Ezután a kémcső tartalmát összerázzuk, desztillált vizet tartalmazó kémcsővel összehasonlítva meghatározzuk a zavarosság mértékét. A reakció eredményeit fekete papír hátterében értékeljük.

120. Bordet – Zhangou reakció

Értékes diagnosztikai teszt, ha észlelik krónikus gonorrhoea krónikus betegségben szenvedők körében gyulladásos betegségek urogenitális rendszer. A szakirodalom szerint mikor helyes használat Ez a módszer az olyan gonorrhoeás esetek akár 80%-át is kimutatja, amelyeket bakterioszkópos vagy bakteriológiai módszerekkel nem észleltek.

A Bordet-Zhang reakció nyoma lehet egy korábbi betegség vagy egy gonovaccin diagnosztikai (immunbiológiai provokációs módszer) és terápiás (a húgyúti rendszer krónikus gyulladásos folyamatainak kezelése nőknél Bakseev szerint) nyoma. célja. Ezért a végrehajtás előtt gondosan össze kell gyűjteni az anamnézist,

A reakció álpozitív lehet, ha tejet adnak be gyógyászati ​​célokra pirogén.

Következésképpen a pozitív Bordet-Giangu reakció nem szolgál vitathatatlan bizonyítékként a jelenlétre gonococcus fertőzés, akárcsak a negatív, nem lehet bizonyíték a gonorrhoea hiányára. azonban pozitív eredményeket hosszú időn keresztül az orvosnak arra kell összpontosítania, hogy megtalálja a gonokokkusz fertőzés forrását a szervezetben.

Antigénként egy elölt gonokokkusz tenyészetet használnak, amely 1 ml-ben 3-4 milliárd mikrobatestet tartalmaz. A gonococcus antigént formaldehid oldattal konzerváljuk, és 1-5 ml-es ampullákba öntjük. A bontatlan ampullák 6 hónapig használhatók, a felbontott ampullák steril tubusban, hűtőszekrényben 3-5 °C-on 2-3 napig tárolhatók.

A Bordet-Giangu komplement rögzítési reakciót a Wasserman reakcióhoz hasonlóan hajtjuk végre (lásd 121. sz.). A Gonococcus antigént izotóniás nátrium-klorid oldattal hígítjuk az ampulla címkéjén feltüntetett titer szerint. A reakciót leggyakrabban 2,5 ml térfogatban hajtják végre, ezért 0,5 ml hígított, 1:5 arányú tesztszérumhoz 0,5 ml hígított antigént adunk minden csőbe. A maradék 1,5 ml 1 ml hemolitikus rendszer és 0,5 ml komplement.

A reakció akkor tekinthető pozitívnak, ha ben kifejezve van változó mértékben a hemolízis késése a vizsgált szérumban. Kontrollban (vérszérum egészséges emberek) teljes hemolízis figyelhető meg.

121. Wasserman reakció

A szifiliszben szenvedő betegek vérszéruma reagineket és antitesteket tartalmaz. A reaginoknak megvan az a tulajdonságuk, hogy kardiolipin antigénnel kombinálódnak. A Treponema pallidum elleni specifikus antitestek specifikus antigénekkel kombinálódnak. A kapott antigén-antitest komplexeket a reakcióhoz hozzáadott komplement felszívja. Az indikáció hemolitikus rendszer (birka vörösvértestek + hemolitikus szérum) bevezetésével történik.

A reakció végrehajtásához szüksége van:

a) izotóniás nátrium-klorid oldat;

b) ultrahangos treponemális (hűtőszekrényben +4 °C-on tárolva) és kardiolipin (szobahőmérsékleten tárolva) antigének;

c) komplement, amely 5-10 egészséges tengerimalac szívpunkciójából nyert vérszérum. Hűtőben 2 hónapig tárolható, feltéve
befőzés 4%-os oldattal bórsavés 5%-os nátrium-szulfát-oldat;

d) hemolizin - különböző titerű birka eritrocitákkal immunizált hemolitikus nyúlvérszérum (hűtőszekrényben, 4 °C-on tárolva);

e) szúrással nyert juh vörösvértestek nyaki véna. A vért egy steril edénybe gyűjtjük üveggolyókkal (keveréshez), 15 percig rázzuk. A fibrinrögöket steril gézen történő szűréssel választjuk el. A defibrált vér legfeljebb 5 napig tárolható a hűtőszekrényben.

Néha hosszabb ideig kell tárolni a birkavért, ezért azt speciális tartósítószerrel (6 g glükóz, 4,5 g bórsav, 100 ml izotóniás nátrium-klorid oldat) tartósítják, amelyet vízfürdőben forralnak fel. Napi 20 perc 3 napig 100 ml defibrinált birkavérhez 15 ml tartósítószer szükséges. Az így tartósított defibrált vért hűtőszekrényben tárolják.

A fő kísérletet több szakasz előzi meg.

Egy beteg ulnaris véna vegyünk 5-10 ml vért és dolgozzuk fel a szérumot. Gyermekeknél vért lehet venni a temporális vénából vagy a sarok bemetszésével. A szúrás steril eszközökkel, fecskendővel és tűvel történik.
izotóniás nátrium-klorid oldattal előmosva.

A kutatáshoz szükséges vért éhgyomorra veszik; 3-4 nappal a vizsgálat előtt a betegnek tilos a fogyasztása kábítószerek, digitalis készítmények, szedj alkoholt.

A vizsgálatot nem szabad olyan betegeknél elvégezni, akik emelkedett hőmérséklet test, sérülés, műtét, érzéstelenítés, friss fertőző betegségek után, nőknél menstruáció alatt, terhes nőknél (a terhesség utolsó 10 napjában), vajúdó nőknél (a születés utáni első 10 napban), valamint újszülötteknél ( az élet első 10 napjában).

A steril csőben kapott vért termosztátba helyezzük 37 °C hőmérsékleten 15-30 percre. A keletkezett vérrögöt steril üvegrúddal elválasztjuk a kémcső falától, és egy napra hűtőszekrénybe tesszük. Az elválasztott átlátszó szérumot (a vérrög felett) Pasteur pipettával leszívják gumicső segítségével, vagy óvatosan egy másik steril csőbe öntik, és 30 percig 56 °C-os vízfürdőben inaktiválják. A kísérlethez így elkészített szérum hűtőszekrényben akár 5-6 napig is eltartható.

Az antigéneket a címkén feltüntetett módszerrel és titerrel hígítjuk.

Készítsen hemolitikus rendszert. Ehhez a reakcióhoz szükséges mennyiségű defibrinált birkavért vagy vörösvértesteket centrifugálják, a plazmát óvatosan elválasztják, és az üledéket 5-6 térfogatnyi izotóniás nátrium-klorid oldattal addig mossák, amíg a felülúszó folyadék teljesen színtelenné válik. Az üledékből 3%-os vörösvértest-szuszpenziót készítenek izotóniás nátrium-klorid-oldatban háromszoros titerrel.

A hemolitikus szérum oldatát és a juh eritrociták szuszpenzióját gyorsan összekeverjük, és 30 percre termosztátba helyezzük.

A száraz komplementet izotóniás nátrium-klorid-oldattal hígítjuk 1:10 arányban, normál inaktivált humán szérumot - 1:5.

A komplementet 30 csőben titráljuk, 3 sorban 10 csöves állványba helyezve. Két sorban két antigén jelenlétében titrálják, a harmadikban - izotóniás nátrium-klorid oldattal. Öt cső kontrollcső: kettő a megfelelő két antigénhez és egy-egy a komplement, a hemolitikus szérum és az izotóniás nátrium-klorid-oldat hemotoxicitási ellenőrzéséhez; töltse ki őket az alábbiak szerint:

A kémcsöveket 45 percre termosztátba helyezzük, majd ellenőrizzük. Egyik kémcsőben sem lehet hemolízis.

Az 1:10 hígítású komplementet az állvány 1. sorában lévő 10 csőbe öntjük a következő adagokban: 0,1, 0,16, 0,2, 0,24, 0,3, 0,36, 0,4, 0,44, 0,5 és 0,55 ml. Adjon izotóniás nátrium-klorid oldatot legfeljebb 1 ml-ig minden kémcső tartalmához, és alaposan keverje össze. Minden kémcsőből 0,25 ml keveréket viszünk át a 2. és 3. sor megfelelő kémcsövébe. A kémcsövekkel ellátott állványt felrázzuk, 0,5 ml hemolitikus rendszert adunk a 3. kémcsősorhoz, újra összerázzuk és 45 percre 37 °C-os termosztátba helyezzük. Normál emberi vérszérumot, izotóniás nátrium-klorid-oldattal 1:5 arányban hígítva, mind a 30 kémcsőbe öntjük, mindegyik 0,25 ml-es.

Az I. antigént (treponemális ultrahang), izotóniás nátrium-klorid-oldattal titerrel hígítva, 0,25 ml-t adunk az 1. sor 10 kémcsőjéhez; antigén II (kardiolipin ugyanabban a hígításban és azonos mennyiségben) - a 2. sor 10 csövében. A 3. sor 10 kémcsőébe 0,25 ml izotóniás nátrium-klorid oldatot öntünk, a maradék 0,25 ml-t kiöntjük. Termosztátban történő inkubálás után 20 csőbe (1. és 2. sor) 0,5 ml hemolitikus rendszert adunk, összerázzuk, majd 45 percre visszahelyezzük a termosztátba.

45 perc elteltével meghatározzuk a komplement munkadózisát, azaz a titerét 15-20%-os növekedéssel.

Ezt tekintik komplementtiternek minimális mennyiség, ami a juh vörösvértesteinek teljes hemolízisét okozza antigén és normál emberi vérszérum jelenlétében.

A fő kísérlet az, hogy minden egyes vizsgálati inaktivált szérumot, izotóniás nátrium-klorid oldattal 1:5 arányban hígítva, 0,25 ml-re öntjük három kémcsőbe. Adjunk 0,25 ml antigén I-t az első kémcsőbe, 0,25 ml antigén II-t a másodikba, és 0,25 ml izotóniás nátrium-klorid-oldatot a harmadikba (kontroll). 0,25 ml munkadózisra hígított komplementet szintén minden kémcsőbe adunk. Minden kémcsövet 45 percre termosztátba helyezünk, majd 0,5 ml hemolitikus rendszert adunk hozzá, összerázzuk és 45-50 percre termosztátba helyezzük. A kísérlet eredményét a teljes hemolízis kezdete után rögzítjük a kontrollcsövekben.

A reakció eredményeit pozitívumként értékeljük: a hemolízis teljes késése (erősen pozitív reakció) ++++, szignifikáns (pozitív reakció) +++, részleges (gyengén pozitív reakció) ++, jelentéktelen (kétes reakció) - ±, nem késik a hemolízis (negatív reakció) - .

Nál nél mennyiségi módszer A Wasserman-reakció végrehajtásához a kísérletet csökkenő térfogatú izotóniás nátrium-klorid-oldattal hígított szérummal végezzük.

A Wasserman-reakció főkísérletének vázlata

A Wasserman-reakció klinikai jelentőségét nehéz túlbecsülni. A kezelés előtt minden betegen elvégzik, de különleges jelentése nála van látens szifilisz, vereség belső szervekés idegrendszer.

A Wasserman-reakció eredményei jellemzik a nyújtott kezelés minőségét, ami alapot ad a kezelt betegek nyilvántartásból való meghatározott időn belüli törlésére.

Primer szifiliszben a Wasserman-reakció általában a fertőzés pillanatától számított 6. hét végén pozitív; másodlagos friss szifilisz esetén az esetek közel 100% -ában pozitív, másodlagos visszatérő szifilisz esetén - 98-100% -ban; harmadlagos aktív - 85%-ban; harmadlagos rejtett - az esetek 60% -ában.

A Wasserman reakciót kétszer hajtják végre minden terhes nőnél, szomatikus, ideges, mentális és bőrbetegségek, valamint az elrendelt populációk. Ugyanakkor kritikusan kell kezelni a pozitív és gyengén pozitív reakcióeredményeket, mivel előfordulhatnak terhesség végén és szülés után, pajzsmirigy-túlműködés, malária, lepra, szuvasodás esetén. rosszindulatú daganat, fertőző betegségek, kollagenózis stb.. Ezért ha van klinikai megnyilvánulásai Mindenekelőtt a betegségeiket kell figyelembe venni, a bakterioszkópiai adatokkal együtt.

Ugyanakkor vannak olyan tényezők, amelyek torzíthatják a Wasserman-reakció kapott eredményeinek valódi természetét: rosszul mosott laboratóriumi üvegedények (sav- és lúgnyomok a kémcsövekben), a kutatásra vett vér hosszú távú tárolása, fogyasztása. zsírok és alkohol a betegek által a vizsgálat előtt, menstruáció stb.

Minden esetben célszerű a beteg átfogó vizsgálatát elvégezni, beleértve a Wasserman-reakción kívül RIBT-t is (lásd 122, 123, 124) stb.

122. Sachs-Vitebsky reakció (citokolikus)

A szifilisz kimutatására használják. A páciens vérszérumának antigénnel való keverésekor csapadék képződésén alapul.

Az antigén elkészítéséhez több szarvasmarha szív izmait megtisztítják az inaktól, a fasciától és a zsírtól, húsdarálóban megőrlik, és 15 napig 5-szörös térfogatú 96%-os etil-alkohollal extrahálják, napi 20 perces rázás mellett. A kapott kivonatot porcelánpohárban vízfürdőben vákuumban bepároljuk. A maradékhoz (fényes sárga lipoidtömeg) forró 96%-os etil-alkoholt adunk az izomkivonáshoz használt térfogat 1/3-ában.

A kivonatot 3 napig szobahőmérsékleten tartjuk, szűrjük (in hideg víz) és adjunk hozzá 0,3-0,6%-os kristályos koleszterin oldatot, a pozitív és negatív szérummal végzett titrálás eredményétől függően. Tárolja a citokól antigént szobahőmérsékleten lezárt ampullákban vagy dugós csövekben.

Módszertan. 1 ml citokól antigént gyorsan hozzáadunk 2 ml izotóniás nátrium-klorid oldathoz, és 15 percig szobahőmérsékleten hagyjuk, amíg pelyhek nem jelennek meg. Adjunk 0,1 ml antigén emulziót 0,2 ml inaktivált szérumhoz egy kémcsőbe, rázzuk 3 percig, hagyjuk állni 30 percig, majd adjunk hozzá 1 ml izotóniás nátrium-klorid oldatot.

Adjon 1,2 ml izotóniás nátrium-klorid oldatot és 0,1 ml antigén emulziót az antigént tartalmazó kontrollcsőbe. A kontrollban nem lehetnek pelyhek. A reakció eredményeit vizuálisan vagy nagyítóval figyelembe veszik, és a kihulló pelyhek számától függően pluszjelekkel (++++, +++, ++) jelöljük. Ha a reakció negatív, akkor nincsenek pelyhek, de a cső tartalma enyhén opálossá válhat.

1931-ben P. Sachs és E. Witebsky javasolta ennek a technikának a módosítását, amely abból áll, hogy az antigént két fázisban hígítják: adjunk 2 rész izotóniás nátrium-klorid-oldatot az antigén 1 részéhez, tartsuk szobahőmérsékleten 5 percig és adjunk hozzá további 9 rész izotóniás nátrium-klorid oldatot. Az antigén 2%-os nátrium-klorid oldattal történő hígítása is javasolt, ami a szerzők szerint növeli a reakció érzékenységét. A reakció mennyiségi módosítása szérumhígítással is lehetséges (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 stb.).

A reakció meglehetősen érzékeny, kevés időt vesz igénybe (kb. 1 óra), és az eredmény azonnal leolvasható.

123. A Treponema pallidum immobilizációs reakciója (RIBT)

Egy reakció segítségével a szifiliszben szenvedő betegek vérszérumában kimutatják a Treponema pallidumot immobilizáló antitesteket és komplementet.

Primer szifiliszben a RIBT túlnyomórészt negatív, másodlagos - pozitív az esetek 92-96% -ában, harmadlagos - 92-100%, idegrendszeri és veleszületett szifiliszben - az esetek 86-89% -ában.

A RIBT pozitív eredményeit sarcoidban, erythematosisban, cukorbetegségben, rosszindulatú daganatokban, vírusos hepatitisz, májcirrhosis, malária, lepra, fertőző mononukleózis, egyes forró országok betegségei (pinta, yaws stb.).

Az antigén halvány treponema szuszpenziója, amelyet szifilisszel fertőzött nyúl heréiből vettek úgy, hogy a herékbe 0,75-1 ml halvány treponema szuszpenziót juttatnak izotóniás nátrium-klorid oldatban (látómezőnként 50 állat).

A herékből származó anyagot az állat fertőzése után 6-8 nappal kell venni. Az antigén bevétele előtt a nyulat vérzéssel elpusztítják (szívpunkció vagy nyaki ütőér). A hereszövetet összetörjük és egészséges nyúl vérszérumával megtöltjük, izotóniás nátrium-klorid oldattal hígítjuk, -30 percig rázatjuk, majd 10 percig centrifugáljuk (1000 fordulat/perc). A felülúszó folyadékot mikroszkóppal megvizsgáljuk. Minden látómezőben legalább 10-15 Treponema pallidumnak kell lennie.

Kiegészítés készül a szokásos módon tengerimalacok véréből.

A RIBT elvégzéséhez szükséges: 1,2 ml 0,2%-os zselatin oldat, 2,8 ml 5%-os albumin oldat, 1,6 ml Treponema pallidum szuszpenzió; A környezet pH-ja 7,2. Ehhez a keverékhez 0,15 ml komplementet (koktélt) adunk. Ezzel párhuzamosan két tesztet végeznek: aktív (kísérleti) és reaktív (kontroll) komplementerekkel.

A melangeurokat az „1”-es jelzésig megtöltjük a tesztszérummal, majd a „2”-es jelzésig koktéllal, és steril gumigyűrűvel lezárjuk.

Ugyanakkor hasonló reakciót hajtanak végre nyilvánvalóan pozitív és nyilvánvalóan negatív szérummal.

A melangeurokat megszámozzuk és 18-20 órára 35 °C-os termosztátba helyezzük, majd páronként kivesszük a termosztátból (kísérlet - kontroll) és a tartalmat a megfelelő kémcsövekbe öntik. 2 cseppet csepegtetünk egy tárgylemezre: a bal oldalon a kísérlet, a jobb oldalon a kontroll, fedjük le fedőüveggel és mikroszkóppal sötét látómezőben.

Először a kontroll eredményeket tanulmányozzuk: meghatározzuk a mozgékony és mozdulatlan Treponema pallidum százalékos arányát. Számítási képlet: X = (A - B)/A * 100, ahol A a mobil pallidum treponema száma a kontrollban; B - a mobil treponemes pallidum száma a kísérletben.

Példa: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.

RIBT eredmények értékelése: 20% alatt - negatív. 21-30% - kétséges, 31-50% - gyengén pozitív, 50% felett - pozitív.

Antigén, komplement és segéd, indikátor vagy hemolitikus rendszer - hemolitikus szérum és birka eritrociták.

Ha az első rendszerben specifikus antigén + antitest komplex képződik, akkor a komplement adszorbeálódik (egyesül ezzel a komplexszel), és a második rendszerben nem megy végbe hemolízis.

A reakcióhoz szükséges:

1. Tesztszérum, amelyet a páciens ulnaris vénájának punkciójával vett vérből nyernek. A véralvadás után a szérumot külön csőbe szívjuk, és 30 percig 56 °C-on vízfürdőben inaktiváljuk.

2. Antigén - elölt gonococcusok szuszpenziója.

3. A juh vörösvértesteit sterilen gyűjtött defibrinált vérből nyerik. Háromszori centrifugálással mossuk új adag sóoldattal. A reakcióhoz 3%-os vörösvértest-szuszpenziót használnak.

4. A hemolitikus szérumot előzetesen készítik elő nyulakat juh vörösvértestekkel történő immunizálásával. Használat előtt a szérumot titráljuk.

5. Komplement - friss tengerimalac szérum. A tengerimalac szívéből fecskendővel szívják ki a vért, majd alvadás után a szérumot leválasztják. A kísérlet előtt a komplement munkadózisát titráljuk. Ehhez vegye be a komplement 1:10 arányú alaphígítását, és öntse 0,1 és 0,5 közötti kémcsövekbe, majd az egyes kémcsövek térfogatát sóoldattal 1,5 ml-re állítsa be.

Ezzel egyidejűleg hemolitikus rendszert készítenek - hármas titerrel hígítva, hemolitikus szérum + 3% birka eritrociták szuszpenziója. Mindkét összetevő különböző térfogatú, és 30 percig termosztátban tartjuk (a keverék érzékenyítése), majd a keveréket 1 ml-rel kémcsövekbe töltjük, és 30 percre termosztátba helyezzük. 2 kémcső szolgál kontrollként:

1. 1 ml hemolitikus rendszer + 1,5 ml fiziológiás oldat;

2. 0,5 ml komplement 1:10 + 0,5 ml vörösvérsejt szuszpenzió + 1,5 ml fiziológiás oldat.

A komplement titer az a minimális mennyiség, amelynél a hemolízis még mindig előfordul. A reakció felállításához vegyen be egy munkadózist a komplementből, a titerhez képest 20-25%-kal megnövelve, azaz általában annyi komplementmennyiséget, amely az utolsó előtti hemolízises kémcsőben van. A komplement dózisának emelése azért szükséges, mert a reakcióban a komplement aktivitását a reakció egyéb összetevői (antigén, szérum) némileg elnyomhatják.
43) RSK Wasserman

A szifilisz diagnosztizálására, az antitestek kimutatására, valamint a hatékonyság meghatározására szolgál specifikus terápia. A Bordet-Gengou komplementkötési reakció elvén alapul. Jelentős különbség a Wasserman-reakció között az antigén nem specifikussága: lipoid kivonatok a normál szervekállatokat

A Wasserman-reakció végrehajtásához szükséges a páciens széruma, diagnosztikája, keresztreagáló 1-es, 2-es antigénjei, komplementje, hemolitikus széruma, juh vörösvérsejtjei, sóoldat.

Diagnosticum No. 1 - specifikus, treponemális.

Diagnosticum No. 2 - nem specifikus, kardiolipin antigén, amelyek nagy tisztaságú szarvasmarha szívkivonatok állandó kémiai összetételű lipoidokkal. Lipoidok, szerző: kémiai összetétel közel állnak a Treponema pallidum lipoidjaihoz, ezért bár nem specifikusak, de rögzítik a spirocheta elleni antitesteket.

Ezeket az antigéneket központilag állítják elő, és hígítva használjuk fel a reakcióban a címkén feltüntetett titer szerint.

A fő kísérlettel egyidejűleg 2 kontrollt helyezünk el: nyilvánvalóan negatív és nyilvánvalóan pozitív szérummal.

A fő kísérlet beállítása

Először az inaktivált és hígított 1:5 arányú tesztszérumot öntjük 4 kémcsőbe. Ezután 2 kémcsőbe (1., 2. sz.) öntjük az antigéneket, a 3. kémcsőbe pedig fiziológiás oldatot öntünk. Ezt követően minden csőbe egy munkadózis komplementet adunk. Az összetevők összekeverése után a kémcsövekkel ellátott állványt 37 °C-os termosztátba helyezzük 30 percre. Termosztátban tartás után a hemolitikus rendszert hozzáadjuk az összes kémcsőhöz. A csöveket ismét termosztátba helyezzük 2 órára, majd szobahőmérsékleten hagyjuk. Másnap feljegyzik az eredményt.A reakció intenzitásának mértékét négy plusz (++++), három (+++), kettő (++) és egy (+) - az intenzitástól függően a folyadék színétől és az alján lévő vörösvérsejt üledék méretétől. A teljes hemolízist (-) mínusz jelzi. Ha éles eltérés van a különböző antigénekkel kapott eredmények között, a kísérletet megismételjük egy új vérrészlettel.
44) RIT-r. A Treponema pallidum immobilizálása.

Ezt a reakciót az alábbi módon alkalmazzuk diagnosztikai célokraés az elismerésért hamis pozitív eredmények standard szerológiai reakciók, különösen a látens szifilisz esetében.

A RIBT az, hogy immobilizinek jelenlétében a szifiliszben szenvedő betegek szérumában és az aktív komplementben a treponema pallidums elveszíti mozgékonyságát.

A RIBT steril dobozokba kerül. A reakció magában foglalja a tesztszérumot, a komplementet és az antigént.

A RIBT-ben az antigén egy nyúlheréből származó halvány treponema szuszpenziója korai időpontok(7-8 nappal a fertőzés után) szifilitikus orchitis. Egy speciális szuszpenziós közeg legalább egy napig megőrzi a Treponema pallidum életképességét. A RIBT-ben a kiegészítést használják tengerimalacok. A RIBT anaerob körülmények között fordul elő. Az összetevőket tartalmazó kémcsöveket mikroanaerosztátba helyezzük, ahonnan a légköri levegőés gázkeveréket fecskendezünk be (95 rész nitrogén és 5 rész szén-dioxid). A kémcsövekkel ellátott mikroanaerosztátot termosztátba (35°C) helyezzük 18-20 órára.

A reakció megfogalmazásával párhuzamosan kontroll vizsgálatok korábbi tapasztalatokból vett pozitív és negatív vérszérummal.

Az RIBT eredményeit a csöveknek a termosztátról való eltávolítása után értékeljük (azaz 18-20 óra kísérlet után). Pasteur pipettával a kémcső tartalmából egy cseppet egy tárgylemezre csepegtetünk, amelyet fedőüveggel lefedünk, és sötétterű mikroszkóppal megvizsgáljuk (40. objektív, 10. okulár). Ha a Treponema pallidum legfeljebb 20% -a immobilizálva van, a reakció negatívnak minősül, 21-30% - kétséges, 31-50% gyengén pozitív, 51-100% - pozitív. A Treponema pallidum immobilizációjának százalékos arányát egy speciális táblázat segítségével határozzuk meg.

45) Opson-fagocita reakció

Mechanizmus: a mikrobiális sejtek fokozott fagocitózisa az antitestek, az immunszérum és a komplement baráti hatásának hatására.

A reakció összetevői:

1) antigén - napi mikrobatenyészet;

3) komplement - friss tengerimalac szérum;

4) fagociták - leukocita szuszpenzió.

Az opszoninok olyan antitestek, amelyek a normál és az immunszérumban találhatók, és felkészítik a mikrobákat a fagocitózisra.

A reakciót speciális kémcsövekben hajtják végre t = 37° percen. Ezután minden kémcsőből kenetet készítünk, 100 fagocitát megszámolunk, és meghatározzuk a fagocitált mikrokontrollok számát.

Opsonic index = fagocita index. normál szérum szérum/fagocita indexe

Minél magasabb a vizsgált szérum opszonikus indexe (>1-nek kell lennie), és ennélfogva annál magasabb! brucellózis).

Opszoninok – a leukociták fagocita aktivitását serkentő antitestek – meghatározására használják, azaz. fertőzések, például brucellózis szerodiagnózisa.

A fagocitózis erősödése az aktív centrumokkal rendelkező opszoninok (Rav-fragmens) bakteriális determinánsokhoz, majd a Pc-fragmensek segítségével a fagociták Pc-receptoraihoz való kapcsolódása miatt következik be. A normál szérum kis mennyiségű opszonint tartalmaz, amelyek komplement jelenlétében fejtik ki hatásukat. Az immunszérumban több opszonin található, és aktivitásuk kevésbé függ a komplementtől.

Alkatrészek:

Teszt szérum

Normál szérum

Napi mikrobatenyésztés (pl. staphylococcus)

Fagociták - a neutrofilek szuszpenziója

Inkubáljuk 37 °C-on 30 percig. Minden kémcsőből kenetet készítünk, Romanovsky-Giemsa szerint megfestjük, és mikroszkóp alatt megszámoljuk a mikrobák számát 100 vagy több neugrofilben, azaz. határozza meg a fagocita indikátort.

Fagocita indikátor - az egy neutrofil által elnyelt mikrobák száma.

Opsonic index - az immunrendszer (teszt) szérum fagocitikus indikátora / normál szérum fagocitikus indikátora.

Minél magasabb az opsonic index (> 1-nek kell lennie), annál nagyobb az immunitás.

Az opson-fagocita index egy digitális indikátor = a fagociták száma x a fagocitózis értékelése (a felszívódott mikrobák számától függően). A maximális érték -75.

46) RN egereken az exotoxin megállapítására

Ez a reakció egy specifikus antitoxikus szérum azon képességén alapul, hogy semlegesíti az exotoxint.

Az immunszérum antitestek képesek semlegesíteni a mikrobák vagy toxinjaik káros hatását az érzékeny sejtekre és szövetekre, ami a mikrobiális antigének antitestek általi blokkolásával, azaz semlegesítésével jár.

A közömbösítési reakciót (RN) úgy hajtják végre, hogy állatokba vagy érzékeny vizsgálati tárgyakba (sejtkultúra, embriók) antigén-antitest keveréket juttatnak. A mikroorganizmusok vagy antigénjeik, illetve toxinjaik állatokban és vizsgálati tárgyakban károsító hatásának hiányában az immunszérum semlegesítő hatásáról, így az antigén-antitest komplex kölcsönhatásának specifikusságáról beszélnek.

A reakció végrehajtásához a vizsgálati anyagot, amely várhatóan exotoxint tartalmaz, összekeverjük antitoxikus szérum, termosztátban tartva és állatoknak (tengerimalacoknak, egereknek) adják. A kontroll állatokat a vizsgálati anyag szűrletével fecskendezzük be, és nem kezeljük szérummal. Ha az exotoxint antitoxikus szérummal semlegesítik, a kísérleti csoportba tartozó állatok életben maradnak. A kontroll állatok elpusztulnak az exotoxin következtében.

Az exotoxin-semlegesítés reakciója akkor következik be, amikor az antitoxikus szérummal (antitoxin antitestekkel) lép kölcsönhatásba. Az antigén-antitest komplex képződése következtében a toxin elveszti toxikus tulajdonságait.

A semlegesítési reakciót toxinok, toxoidok vagy antitoxinok kimutatására és titrálására hajtják végre.

A toxinokat a folyadék szűrésével nyerik tápközeg vagy olyan vizsgálati anyag, ahol toxikus baktériumok szaporodtak el. Ha 30-45 napig formaldehiddel kezelik 37 °C-on, a toxin toxoiddá alakul, amelyet állatok immunizálására használnak antitoxikus szérum előállítására.

In vivo semlegesítési reakció. A toxin típusának meghatározásához diagnosztikai antitoxikus szérummal keverjük össze, és ezt a keveréket fehér egerekbe fecskendezzük. Ha a toxint antitoxikus szérummal semlegesítik, az egerek nem pusztulnak el.

A semlegesítési reakciót diftériában (Schick-teszt) és skarlátban (Dick-teszt) szenvedő gyermekek antitoxikus immunitásának meghatározására használják. Ehhez bizonyos mennyiségű megfelelő toxint (1/40 DLM) intradermálisan injektálnak az alkar területére. Ha antitoxinok vannak a szervezetben, a toxin semlegesítve lesz, és a reakció negatív lesz. Ha nincs antitoxin a szervezetben, gyulladásos reakció a toxin injekció beadásának helyén.
47) RN (neutralizációs reakció) egerekben a vírus azonosítására kullancs által terjesztett agyvelőgyulladás

A TBE vírus számos laboratóriumi és vadon élő állat számára patogén. Az újszülött és fiatal fehér egerek a legérzékenyebbek. Az agyban történő fertőzést követően intraperitoneálisan, intramuszkulárisan ezeknél az állatoknál agyvelőgyulladás alakul ki, amely az állatok halálával végződik. A haszonállatok közül a kecskék a leginkább fogékonyak a TBE-vírusra, a juhok és tehenek kevésbé, a lovak pedig enyhén fogékonyak. A TBE vírus citopatogén hatással (CPE) rendelkezik, amely citopátiás elváltozásokat okoz sertés embrionális vesesejtek primer és folyamatos tenyészeteiben (PEB és PES), és kifejezett CPE nélkül szaporodik sok másban. sejttenyészetek. A fertőzött egerek agyában és a fertőzött tenyészetek tenyészfolyadékában a TBE vírus és a specifikus vírusantigének felhalmozódása történik: komplement-fixáló, hemagglutináló, precipitáló stb.

TBE vírus hosszú idő alacsony hőmérsékleten tárolható ( optimális üzemmód-60 fok C és az alatt), jól tolerálja a liofilizálást, szárított állapotban sok évig eltartható, de szobahőmérsékleten gyorsan inaktiválódik. Forralva 2 perc alatt elpusztul, forró tejben pedig 60 fokon. C 20 perc alatt meghal.

A formalin, a fenol, az alkohol és más fertőtlenítőszerek, valamint az ultraibolya sugárzás is inaktiváló hatású.

A semlegesítési reakció azon alapul, hogy a specifikus immunszérumok képesek kioltani a vírusok fertőző hatását. Két irányban alkalmazható:

1) izolált vírusok tipizálására;

2) a felépültek szérumában lévő antitestek titrálására.

A reakció beállítása:

1. Laboratóriumi állatokon. A vírus jelenlétének kritériumai

laboratóriumi állatok halálát szolgálja. LD50 kiszámítva

A vírusszuszpenzió maximális hígítása, amely

a fertőzött állatok 50%-ának halálát okozta. Mert

A kullancsencephalitis vírus azonosítását végzik

fehér egerek intracerebrális fertőzése.

2. Szövettenyészetekben. Az eredményeket figyelembe veszik

A citopatikus hatás (CPE) szerint

A színváltozáson alapuló színvizsgálati módszer szerint

Hemadszorpcióval.

3. A csirkeembrióban. Az eredményeket a szerint rögzítjük

foltok megjelenése a chorioallantois membrán mentén.

48) RTGA

Ezt a reakciót a virológiai gyakorlatban használják:

A vírus típusának meghatározása (üvegen);

A betegek szérumában történő kimutatáshoz (kibővített).

A hemagglutinációs gátlás indikatív reakciójának felállításakor 1 csepp típusspecifikus immunszérumot csepegtetünk az üvegre, majd 1 csepp vizsgálandó anyagot és 1 csepp 5%-os vörösvérsejt-szuszpenziót.

Az eredmények számítása: a vírus típusát az a szérum határozza meg, amellyel a reakció nem fordult elő, mivel az izolált vírusra specifikus immunszérum elnyomja annak hemagglutináló aktivitását, és a vörösvérsejtek nem agglutinálódnak.
49) RIF

Világító fluorokróm festékeket (fluoriszcein-izotiocianát stb.) használnak jelölésként.

A RIF-nek különféle módosításai vannak. A fertőző betegségek expressz diagnosztikájához a Koons RIF-et használják a mikrobák vagy antigénjeik azonosítására a tesztanyagban.

Koons szerint két RIF-módszer létezik: közvetlen és közvetett.

Közvetlen RIF komponensek:

1) a vizsgált anyag (a nasopharynx által kiürített széklet stb.);

2) jelölt specifikus immunszérum, amely AT-la-t tartalmaz a kívánt antigénhez;

3) izotóniás nátrium-klorid oldat.

A vizsgálati anyagból származó kenetet jelölt antiszérummal kezeljük.

Megtörténik az AG-AT reakció. Lumineszcens mikroszkópos vizsgálat során fluoreszcenciát észlelünk azon a területen, ahol az AG-AT komplexek lokalizálódnak.

A közvetett RIF összetevői:

1) a vizsgált anyag;

2) specifikus antiszérum;

3) antiglobulin szérum (AT-la immunglobulin ellen), fluorikrómmal jelölt;

4) Izotóniás nátrium-klorid oldat.

A tesztanyagból származó kenetet először immunszérummal kezeljük a kívánt antigénnel, majd jelölt antiglobulin szérummal.

A lumineszcens AG-AT komplexeket – a jelölt AT-t fluoreszcens mikroszkóppal detektáljuk.

Az indirekt módszer előnye, hogy nem kell sokféle fluoreszcens specifikus szérumot készíteni, hanem csak egy fluoreszcens antiglobulin szérumot használnak.

Létezik egy 4 komponensű indirekt RIF típus is, amikor kiegészítésként (tengerimalac szérum) kerül beadásra. Pozitív reakcióban AG-AT - jelölt - AT-komplement komplex képződik.

A reakció arra utal szerológiai reakciók jelölt antigének vagy antitestek bevonásával.

Közvetlen és közvetett módszerekkel hajtják végre.

Nál nél közvetlen módszer antigén kimutatása a páciensből származó anyagban. Diagnosztikai fluoreszcens szérumot használnak, amely immunszérumokból izolált és fluorokrómokkal jelölt immunglobulinokat tartalmaz.

A specifikus antigént élénkzöld lumineszcens konglomerátumok formájában mutatják ki, és a készítmény háttere narancsvörös színű.

A közvetlen immunfluoreszcens reakció összetevői:

1) a vizsgált anyag;

2) specifikus lumineszcens szérum;

3) fluoreszcens mikroszkóp.

Az influenza diagnosztizálása során megkülönböztetik a parainfluenza kórokozói és adenovírus fertőzés. A nasopharyngealis tampont fluoreszcens influenzaszérummal vagy influenza immunglobulinnal kezeljük.

„+” eredmény zöld fény formájában 3 óra elteltével érhető el.

Az indirekt módszerrel a specifikus antitesteket detektálják és titrálják. A szérumtiter a maximális hígítás, amelynél a „++” fluoreszcenciát észleljük.

Az indirekt immunfluoreszcens reakció összetevői

Antigén keresése a gyorsdiagnosztika során:

1) vizsgálati anyag (antigén);

2) specifikus szérum;

3) antiglobulin lumineszcens szérum

4) fluoreszcens mikroszkóp.

/ fázisspecifikus

A szérum antitestek adszorbeálódnak az antigénhez.

// nem specifikus fázis

Fluorokrómokkal jelölt antitesteket tartalmazó antiglobulin szérumot használnak. Komplex antigén + antitest (I) + antiglobulin szérum (II) képződik, ami világít.