Precipitačný reakčný mechanizmus reakcie sa líši od reakcie. Precipitačná reakcia (imunologická metóda)
Pozostávajúce z interakcie rozpustného antigénu s protilátkou, po ktorej nasleduje vyzrážanie jemnozrnnej zrazeniny (precipitátu).
Precipitačná reakcia umožňuje určiť prítomnosť neznámeho antigénu v testovanom materiáli pridaním známej protilátky alebo použitím známeho antigénu – neznámej protilátky. zrážok ísť horšie v neprítomnosti solí. Zrážkové optimum je v rozmedzí pH=7,0-7,4.
Mechanizmus zrážania je blízky mechanizmu aglutinácie. Pod vplyvom imunitného systému, ktorý reagoval s antigénom, sa stupeň jeho disperzie znižuje. Sérum a antigén musia byť úplne transparentné. Pri nastavovaní precipitácie sa môžu k jednému riedeniu séra pridať rôzne riedenia antigénu alebo naopak.
Precipitácia je zaznamenaná lepšie, ak je antigén superponovaný v skúmavke na protilátku. V tomto prípade sa pozoruje výskyt zrazeniny vo forme krúžku - zrážanie krúžku. Precipitácia krúžkov sa uskutočňuje v špeciálnych skúmavkách s priemerom 2,5-3,5 mm. Na stanovenie počtu antigénov v testovacom materiáli alebo rôznych protilátok v sére sa používa agarová precipitačná reakcia: 1% vyčírený agar sa naleje na alebo na sklenené podložné sklíčka. Roztoky antigénu a protilátky sa nalejú do rôznych jamiek vyrobených v agare, ktoré difundujú k sebe a vytvárajú precipitačné línie. Precipitačná reakcia je široko používaná v diagnostike (pozri Ascoliho reakcia).
Zrážanie v agare umožňuje určiť toxigenitu kultúr záškrtu.
AT forenzný výskum precipitácia slúži na stanovenie druhovej príslušnosti krvi, orgánov a tkanív pomocou špecifických precipitačných sér.
Precipitácia - reakcia precipitácie komplexu antigénu (precipitinogénu) a protilátok (precipitínu). Precipitácia je jedným z imunologických javov, ktorý umožňuje stanoviť obsah protilátok (pozri) v krvnom sére chorých alebo očkovaných ľudí, ako aj v krvi imunizovaných zvierat. Pri použití štandardných sér sa môže precipitačná reakcia použiť na titráciu rozpustných antigénov rôzneho pôvodu (pozri).
V najjednoduchšej forme nastavenia precipitačnej reakcie sa testovacie sérum v sérii viacnásobných riedení pridá vrstvením do série skúmaviek s konštantným množstvom antigénu. Po 30-60 min. inkubáciou pri izbovej teplote na hranici dvoch kvapalín vznikol prstenec zákalu – prstencová precipitácia. Minimálne množstvo séra, ktoré dáva zrážaciu reakciu, sa považuje za titer antiséra. Keď sa reakcia zvráti pomocou štandardného antiséra, je možné odhadnúť relatívnu koncentráciu antigénu v rôznych biologických tekutinách.
Výsledky titrácie protilátok a antigénov na základe vyššie uvedenej metódy nemajú absolútne kvantitatívne vyjadrenie. Na kvantifikáciu obsahu protilátok vyvinuli Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) a i. kvantitatívna metóda precipitačná reakcia, ktorá je založená na detekcii takzvanej zóny ekvivalencie. Keď sa množstvá antigénu zodpovedajúce veku zmiešajú s konštantnými objemami antiséra, množstvo vytvorenej zrazeniny sa najprv zvýši a potom sa opäť zníži v dôsledku zvýšenia rozpustnosti komplexu antigén-protilátka v nadbytku antigénu. Ak stanovíme obsah protilátok v supernatante vo všetkých skúmavkách, potom sa ukáže, že v stredných skúmavkách v rade alebo dokonca v jednej skúmavke nie sú v supernatante žiadne protilátky; zároveň tu vzniká najväčšia zrazenina. Keďže v zóne ekvivalencie sa na zrazenine podieľa aj celý antigén zavedený do zmesi reaktantov, po odčítaní zrazeniny antigénneho proteínu od množstva proteínu sa získa presná hodnota obsahu protilátky v danom objeme testovacieho séra. Obsah bielkovín v zrazenine po dôkladnom premytí vychladeným fyziologickým roztokom sa stanoví dusíkom alebo nejakou kolorimetrickou metódou.
Pri hodnotení hodnoty zrážacej reakcie ako diagnostická metóda treba vziať do úvahy, že protilátky, ktoré nemajú vlastnosti precipitínov, a preto pri interakcii s antigénom nevytvárajú precipitát, môžu byť prítomné v imunitných sérach. Patria sem predovšetkým nekompletné protilátky, ako aj niektoré ďalšie protilátky patriace do skupiny gama-A globulínov.
Schopnosť antiséra precipitovať antigén môže byť narušená zahriatím na 65-70 °, pôsobením organických rozpúšťadiel, redukciou v kyslom médiu [Isliker (N. Isliker), A.Ya. Kuhlberg]. Fenomén zrážania s antisérom, vedome obsahujúcim precipitíny, je možný len pri určitej teplote, koncentrácii solí a vodíkových iónov. Precipitačná reakcia prebieha najrýchlejšie pri 25-37 °C. Nevyhnutnou podmienkou pre vznik zrazeniny je prítomnosť chloridu sodného v izotonických koncentráciách (0,85 % roztok NaCl). Pri zvýšení koncentrácie NaCl na 15% sa zrazeniny vytvorené antigénom polysacharidovej povahy čiastočne rozpustia, čo je možné použiť na extrakciu čistých protilátok. Precipitačná reakcia s antigénmi proteínovej povahy prebieha rovnakou rýchlosťou a úplnosťou v 0,85 % aj 15 % roztoky NaCl. Optimálna koncentrácia vodíkových iónov pre tvorbu zrazeniny zodpovedá hodnotám pH od 5,0 do 9,0.
V laboratórnej praxi sa používajú rôzne modifikácie zrážacej reakcie. Na detekciu bakteriálnych antigénov sa používa najmä termoprecipitačná reakcia. antrax, botulizmus atď., ktoré nepodliehajú tepelnej denaturácii (koktoantigény). Táto reakcia sa líši od reakcie zrážania kruhu iba tým, že ako antigén sa použije filtrát z vareného testovacieho materiálu (pozri Reakcia A).
Pri analýze komplexnej zmesi antigénov pomocou precipitačnej reakcie nie je možné charakterizovať vlastnosti jednotlivých zložiek zmesi. Na vyriešenie tohto problému sa uchýlite k metódam zrážania na agare a imunoelektroforéze. Metóda precipitácie v agare v najbežnejšej modifikácii Ouchterlony (O. Ouchterlony) je založená na tom, že antigén a antisérum, difundujúce k sebe v tenkej vrstve agaru, vytvárajú pri stretnutí precipitačnú líniu. Podľa počtu takýchto línií je možné posúdiť počet zložiek obsiahnutých v danej zmesi antigénov. Metóda Ouhgerlonu umožňuje porovnávať rôzne antigénne zmesi a určiť stupeň príbuznosti zložiek v nich prítomných. Pri analýze komplexnej antigénnej zmesi obsahujúcej látky s rovnakými rýchlosťami difúzie v agare, skvelá pomoc môže priniesť metóda imunoelektroforézy. Zmes antigénov sa predbežne oddelí v elektrickom poli na agarovej platni, potom sa vyvolá jednotlivé zložky antisérum. Antisérum sa zavedie do priekopy vyrobenej v agare rovnobežne s líniou, po ktorej sa antigény pohybovali počas elektroforézy. Každý z antigénov poskytuje individuálny precipitačný oblúk s antisérom. Na analýzu sa široko používa imunoelektroforéza patologické abnormality v sérových proteínoch, ako aj pri imunologickej analýze tkanivových a bakteriálnych antigénov.
Forenzné zrážky. Precipitácia sa používa v súdnom lekárstve na určenie druhu krvi, častí orgánov a tkanív. V mnohých vyšetrovacích prípadoch je potrebné zistiť typ krvi, ktorý sa nachádza na nástrojoch trestného činu, na oblečení páchateľa alebo obete, atď. s bielkovinami z rôznych zvierat. Zvyčajne sa pripravujú séra, ktoré vyzrážajú človeka, koňa, mačky, sliepky, prasa, psa, dobytka. Musia mať titer aspoň 1:10 000 a musia byť dostatočne špecifické. Zo študovaného miesta alebo kôry krvi sa pripravujú extrakty fyziologický roztok, ktoré sa potom testujú s precipitačnými sérami. Typ proteínu sa považuje za stanovený, ak jedno z precipitujúcich sér vytvorí precipitát s extraktom z testovanej krvi s vhodnou kontrolnou reakciou. Precipitačná reakcia môže tiež určiť typ proteínu v ľudských alebo zvieracích tkanivách a orgánoch. Typicky sa zrážacia reakcia uskutočňuje v skúmavkách s kužeľovitým koncom. Po prijatí zakalených extraktov sa precipitačná reakcia uskutoční v agare podľa Ouchterlona.
Precipitačná reakcia (RP) je precipitácia rozpustného antigénu pôsobením protilátok v prítomnosti elektrolytu. Viditeľný reakčný efekt (precipitačný jav) - zákal (tvorba zakaleného prstenca alebo sedimentu - zrazenina).
RP sa používa na detekciu neznámeho antigénu pri mnohých infekčných ochoreniach: s antraxom, tularémiou, meningitídou, kiahňami. V súdnom lekárstve sa používa na určenie druhu krvi, spermií; v sanitárnom a hygienickom výskume - zistiť falšovanie produkty na jedenie. RP je veľmi odlišný. vysoká citlivosť a umožňuje detekovať antigén v riedení 1: 1 000 000 a 1: 10 000 000.
Zložky precipitačnej reakcie.
1. Antigén (precipitinogén) - je to antigén molekulárnej povahy, ktorý je v jemne dispergovanom (rozpustnom) stave. Precipitinogény sú rôzne tkanivové lyzáty alebo extrakty atď. Precipitinogén sa líši od aglutinogénu veľkosťou častíc antigénu. Aglutinogén Má veľkosti buniek(nie sú to zničené celé bunky), ale rozmery precipitinogénúmerne s molekulová veľkosť(ide o bielkoviny a ich komplexy so sacharidmi alebo lipidmi). Roztok precipitinogénu transparentný.
2. Protilátky (precipitíny) sa nachádzajú v ľudskom sére alebo v imunodiagnostických precipitačných sérach, ktoré obsahujú známe protilátky.
3. Elektrolyt- izotonický roztok chloridu sodného.
Získanie precipitinogénu.
Získava sa mletím materiálu a extrakciou proteínových antigénov z neho varom alebo inými metódami.
Príklady precipitinogénov: lyzáty alebo extrakty rôzne telá a tkanivách, cudzie krvné sérum (sérum je Riešenie, v prvom rade rôzne proteíny), filtráty bujónových kultúr mikróbov, soľné extrakty mikróbov, autolyzáty atď.
Získanie precipitujúcich sér.
Získané hyperimunizáciou králikov vhodnými precipitinogénmi. Takéto séra obsahujú protilátky proti tým precipitinogénom, ktorými boli králiky imunizované.
Príklady precipitujúcich sér: zrážanie antraxové sérum (obsahuje protilátky proti antraxovým antigénom), precipitujúce antimeningokokové sérum(obsahuje protilátky proti antigénom pôvodcu meningitídy) atď.
Titer precipitačné sérum je najvyššie riedenie precipitinogénu, pri ktorom sérum ešte poskytuje precipitačnú reakciu.
Spôsoby nastavenia RP.
1. Reakcia zrážania kruhu - vykonávané v špeciálnych zrážacích trubiciach (priemer - 0,4-0,5 cm, výška - 7-8 cm). Do skúmavky sa pridá 0,2 - 0,3 ml precipitačného séra a pozdĺž steny sa dlhým nosom Pasteurovej pipety opatrne navrství rovnaké množstvo precipitinogénu. Potom, opatrne z horizontálnej polohy, sú rúrky umiestnené vertikálne.
Účtovanie výsledkov reakcií sa uskutoční objavením sa bieleho prstenca na hranici antigén-protilátka. S pozitívnou reakciou takýto krúžok sa pozoruje. V tomto prípade antigén zodpovedá protilátke a dochádza k ich väzbe.
Ak sa ako precipitinogén použijú uvarené a prefiltrované vodné extrakty orgánov a tkanív, potom sa reakcia nazýva reakcia termoringové zrážky (napríklad pri diagnostike antraxu).
2. Zrážacia reakcia v géli - uskutočnené v Petriho miskách alebo na podložných sklíčkach, kde sa umiestni vrstva agarového gélu. Keď gél stuhne, vyrežú sa v ňom jamky, do ktorých sa umiestnia antigény alebo protilátky, prípadne oboje. Rozlišovať 2 metódy RP v géli:
a) metóda jednoduchá (radiálna) imunodifúzia: jedna zo zložiek imunitnej reakcie (antigén alebo protilátka) sa umiestni do jamky a druhá zložka sa zmieša s agarom; pri pozitívny výsledok (antigén zodpovedá protilátke) sa vytvorí okolo jamky precipitačný kruh ;
b) metóda dvojitá imunodifúzia: protilátka aj antigén sú umiestnené v oddelených jamkách, difundujú v agarovom géli k sebe; s pozitívnym výsledkom kde sa stretávajú protilátky a antigény zrážkové čiary .
Príklad RP v géli je Ouchterlonyho dvojitá imunodifúzna reakcia pri diagnostike záškrtu
Imunoelektroforéza - je to metóda, ktorá kombinuje metódu elektroforézy a precipitačnej reakcie. Zmes antigénov (napríklad sérových proteínov) sa v géli oddelí elektroforézou. Potom sa na nájdenie a stanovenie požadovaného proteínu (neznámy antigén) použije diagnostické precipitačné sérum, ktoré obsahuje protilátky proti tomuto proteínu (známa protilátka). Na tento účel sa do drážky paralelne s proteínmi zavedie diagnostické sérum. Ak medzi proteínmi existuje jeden, ktorý zodpovedá protilátke v sére, potom sa tvorí okolo nej zrážkové čiary.
zrážacia reakcia- RP (od lat. praeci-pito- precipitát,) je tvorba a precipitácia komplexu rozpustného molekulového antigénu s protilátkami vo forme zákalu, tzv. zrazenina. Vzniká zmiešaním antigénov a protilátok v ekvivalentných množstvách; prebytok jedného z nich znižuje úroveň vzdelania imunitný komplex. Na rozdiel od aglutinačnej reakcie sú antigénom pre precipitačnú reakciu rozpustné zlúčeniny, ktorých veľkosť častíc sa blíži veľkosti molekúl. Môžu to byť proteíny, komplexy proteínov so sacharidmi a lipidmi, bakteriálne extrakty, rôzne disáty alebo filtráty mikrobiálnych bujónových kultúr. Protilátky zapojené do precipitačnej reakcie sa nazývajú precipitíny. Výsledný jemný komplex antigén-protilátka sa deteguje určitými metódami stupňovania precipitačnej reakcie.
Reakciu zrážania kruhu prvýkrát navrhol Ascoli. Používa sa pri diagnostike antraxu, moru, tularémie, meningitídy. Metóda je jednoduchá a prístupná.
Do úzkych precipitačných skúmaviek sa naleje špecifické imunoprecipitačné sérum a veľmi opatrne sa naň navrství antigén. Ako antigén sa napríklad pri diagnostike antraxu odoberajú kúsky kože, vlny, koží uhynutých zvierat a pod.. Uvaria sa, tekutina sa prefiltruje a použije sa ako antigén. Výskyt krúžku - zrazeniny na hranici dvoch kvapalín - indikuje prítomnosť zodpovedajúceho antigénu.
Agarová gélová precipitačná reakcia, alebo metóda difúznej precipitácie, umožňuje detailne študovať zloženie komplexných vo vode rozpustných antigénnych zmesí. Na nastavenie reakcie sa používa gél (polotekutý alebo hustejší agar). Každá zložka, ktorá tvorí antigén, difunduje k zodpovedajúcej protilátke inou rýchlosťou. Preto sa v nich nachádzajú komplexy rôznych antigénov a zodpovedajúcich protilátok rôznych oblastiach gél, kde sa tvoria precipitačné čiary. Každá z línií zodpovedá len jednému komplexu antigén-protilátka. Precipitačná reakcia sa zvyčajne uskutočňuje pri teplote miestnosti.
Prijatá metóda imunoelektroforézy široké využitie v posledné roky pri štúdiu antigénnej štruktúry mikróbov. Komplex antigénov sa umiestni do jamky, ktorá sa nachádza v strede agarového gélu, naleje sa na platňu. Potom cez agarový gél prechádza elektrický prúd, v dôsledku čoho sa rôzne antigény obsiahnuté v komplexe presúvajú do poľa. elektrický prúd v závislosti od ich elektroforetickej pohyblivosti. Po dokončení elektroforézy sa do výkopu umiestneného pozdĺž okraja platne zavedie špecifické imunitné sérum a umiestni sa do vlhkej komory. V miestach, kde sa tvorí komplex antigén-protilátka, vznikajú precipitačné čiary.
Zrážacie reakcie dať v skúmavkách (reakcia zrážania prstenca), v géloch, živných médiách a pod prijatá distribúcia druhy zrážacích reakcií v polotekutom géli agaru alebo agarózy: dvojitá imunodifúzia podľa Ouchterlonyho. radiálna imunodifúzia, imunoelektroforéza atď
Radiálna imunodifúzna reakcia. Imunitné sérum s roztaveným agarovým gélom sa rovnomerne naleje na pohár. Po stuhnutí v géli sa urobia jamky, do ktorých sa vloží antigén v rôznych riedeniach. Antigén difundujúci do gélu vytvára s protilátkami kruhové precipitačné zóny okolo jamiek (obr. 13.7). Priemer precipitačného prstenca je úmerný koncentrácii antigénu. Reakcia sa používa na stanovenie krvných hladín imunoglobulínov rôznych tried, zložiek komplementového systému atď.
Imunoelektroforéza- kombinácia metódy elektroforézy a imunoprecipitácie: zmes antigénov sa zavedie do jamiek gélu a separuje sa v géli pomocou elektroforézy. Potom sa paralelne so zónami elektroforézy zavedie do drážky imúnne sérum, ktorého protilátky sa difundujú do gélu a tvoria sa v mieste stretnutia s antigénom precipitačnej línie.
Imunitná elektrónová mikroskopia- elektrónová mikroskopia mikróbov, častejšie vírusov, ošetrených vhodnými protilátkami. Vírusy ošetrené imunitným sérom tvoria imunitné agregáty (mikroprecipitáty). Okolo viriónov sa vytvára „korola“ protilátok, na rozdiel od kyseliny fosfowolfrámovej alebo iných elektrónovo-opticky hustých prípravkov.
123. Zrážacia reakcia v géli na stanovenie toxigenity mikroorganizmov, mechanizmus, spôsoby tuhnutia.
Precipitačná reakcia (RP)- ide o tvorbu a precipitáciu komplexu rozpustného molekulového antigénu s protilátkami vo forme zákalu, nazývaného zrazenina. Vzniká zmiešaním antigénov a protilátok v ekvivalentných množstvách; nadbytok jedného z nich znižuje úroveň tvorby imunitného komplexu.
V roku 1946 J. Oudin navrhol jednoduchú difúznu metódu, podľa ktorej jedna zo zložiek precipitačnej reakcie, zvyčajne sérum, je v géli a druhá - antigén - je navrstvená na prvú vo forme Riešenie.
Antigén difundujúci do gélu v ňom vytvára biele precipitačné čiary s protilátkami, ktoré sú dobre viditeľné pri bočnom osvetlení. V roku 1948 J. Ouchterlonu vyvinul ešte jednoduchšiu a pohodlnejšiu metódu dvojrozmernej protidifúzie, ktorá umožňuje priame porovnanie rôznych antigénov a sér. Táto metóda je tiež veľmi cenná pri štúdiu krížových reakcií.
Na nastavenie reakcie podľa Ouchterlona sa používa 1% agar pripravený vo fyziologickom roztoku, ktorý sa naleje do Petriho misiek s vrstvou 0,5 cm po obvode vo vzdialenosti 1-2 cm od stredu. Do centrálnej jamky sa naleje diagnostické precipitačné sérum a do periférnych jamiek sa naleje roztok homológov a s ním porovnávaných antigénov. Výsledky sa zaznamenávajú po 24, 48 a 72 hodinách inkubácie pri teplote miestnosti.
Protilátky a antigény k sebe difundujú a v oblastiach, kde sa vytvárajú ich ekvivalentné koncentrácie, vznikajú oblúkovité precipitačné pásy. Ak sa precipitačné pásy pochádzajúce z dvoch susedných jamiek spoja, znamená to prítomnosť niekoľkých antigénnych zložiek v testovacej tekutine. Protidifúzna reakcia podľa Ouchterlohna sa často používa na stanovenie toxigenity baktérií, ako je diftéria.
Ďalším vývojom metódy gélovej precipitácie je imunoelektroforéza. Tento termín sa vzťahuje na metódu, ktorá kombinuje elektroforetickú separáciu zmesi antigénov a Ouchterlohnovu protidifúziu na tej istej agarovej gélovej platni. Vyzrážané sérum sa potom naleje do drážky vyrezanej v géli rovnobežne so smerom elektroforetickej separácie.
Precipitačné čiary vytvorené ako výsledok reakcie majú tvar oblúkov predĺžených v smere elektroforetického pohybu frakcií antigénu. Imunoelektroforéza umožňuje určiť zloženie komplexných zmesí rozpustných antigénov obsahujúcich až 30 zložiek, a preto je cennou diagnostickou metódou.
Zrážacia reakcia(RP) sa nazýva precipitácia z roztoku Ag (precipitinogén), keď je vystavený imunitnému séru (precipitínu) a elektrolytu.
Pomocou RP je možné antigén detegovať v riedeniach 1 : 100 000 a dokonca 1 : 1 000 000, teda v tak malých množstvách, ktoré sa nedajú dokázať chemicky.
Precipitinogény sú ultramikroskopické častice prírodného proteínu-PS: extrakty z mikrónov, orgánov a TC, materiál pat; produkty rozpadu bakteriálnej bunky, ich lyzáty, filtráty. Precipitinogény sú tepelne stabilné, preto na ich získanie sa materiál podrobí varu.
V RP sa používajú tekuté transparentné Ag.
Precipitačné séra sa zvyčajne získavajú hyperimunizáciou králikov v niekoľkomesačných cykloch, pričom sa do nich zavádzajú bakteriálne suspenzie, kultivačné filtráty, autolyzáty, soľné extrakty mikroorganizmov a srvátkové proteíny.
Inscenoval RP Ascoli. V úzkej skúmavke s malým množstvom nezriedeného precipitujúceho séra, držiac ju v naklonenej polohe, sa pozdĺž steny pomocou pipety pomaly navrství rovnaký objem Ag.
Aby sa obe kvapaliny nezmiešali, skúmavka sa opatrne umiestni zvisle. Pri pozitívnej reakcii v skúmavke sa po 5–10 minútach na hranici medzi sérom a študovaným extraktom objaví sivobiely krúžok. Reakcia je nevyhnutne sprevádzaná kontrolami séra a antigénu.
Ascoliho reakcia sa používa na identifikáciu antraxu, tularémie, moru Ag.
Našiel uplatnenie aj v súdnom lekárstve na určovanie druhov bielkovín, najmä krvných škvŕn, v sanitárnej praxi pri odhaľovaní falšovania mäsa, rýb, výrobky z múky, nečistoty v mlieku. Nevýhodou tohto RP je nestabilita zrazeniny (prstenec), ktorá zmizne aj pri miernom zatrasení. Navyše sa nedá použiť na určenie kvantitatívne zloženie Ag sa podieľa na tvorbe zrazeniny.
Ouchterlonyho zrážacia reakcia. Reakcia sa nanesie na Petriho misky v jamkách agarového gélu.
Ako gél sa používa dobre premytý transparentný agar. Ag a sérum sa zavedú do agarového gélu tak, aby jamky, ktoré ich obsahujú, boli v určitej vzdialenosti. Difúziou smerom k sebe a prepojením sa protilátka a antigén za 24-48 hodín vytvoria imunitný komplex vo forme bieleho pásu.
V prítomnosti komplexného precipitinogénu sa objavuje niekoľko pásov. Zároveň sa pásy sérologicky príbuzných antigénov navzájom spájajú a pásy heterogénnych sa pretínajú, čo umožňuje určiť detaily antigénnej štruktúry skúmaných látok.
Je široko používaný na diagnostiku chorôb spôsobených vírusmi a baktériami, ktoré produkujú exotoxíny.
3.Reakcia nepriamej hemaglutinácie (RNGA). Používa sa na detekciu polysacharidov, proteínov, extraktov baktérií, mykoplazmy, rickettsie a vírusov, ktorých imunitné komplexy s aglutinínmi nie je možné vidieť pri klasickej klasickej RA, alebo na detekciu protilátok v sére pacientov proti týmto vysoko disperzným látkam a najmenším mikroorganizmom. .
RNGA na sérodiagnostiku infekčných chorôb. Pomocou RNHA na detekciu protilátok v sére pacientov sa pripravuje diagnostika antigénu erytrocytov.
zrážacia reakcia.
Za týmto účelom sa erytrocyty ošetria 15 minút tanínovým roztokom v zriedení 1:20 000 – 1:200 000, čo im dáva stabilitu a zvyšuje ich adsorpčnú kapacitu. Potom sa zmiešajú so známym antigénom a inkubujú sa 2 hodiny pri teplote 37 °C. panelov.
Suspenzie intaktných a antigénom nabitých erytrocytov, ktoré sa pridávajú do séra, poskytujú zjavne pozitívne a negatívne reakcie, slúžia ako kontrola.
Výsledky reakcie sa berú do úvahy 2 hodiny po inkubácii v termostate a vyhodnotia sa plusmi: "++++" - erytrocyty pokrývajú jamku vo forme dáždnika s zubaté okraje; "-" - akumulácia erytrocytov vo forme "tlačidla"
Súvisiace informácie:
Vyhľadávanie na stránke:
Reakcia zrážania kruhu
Krúžková adhézna reakcia je jednou z najjednoduchších sérologické metódy. Vykonáva sa v úzkych zrážacích trubiciach. Najprv sa do všetkých skúmaviek rovnomerne naleje číry roztok antigénu v niekoľkých riedeniach (1:2; 1:4; 1:8; 1:16).
K spojeniu antigénov a protilátok dochádza na hranici kontaktu činidiel. V dôsledku tejto interakcie sa v pozitívnych prípadoch (keď antigén zodpovedá protilátke) po chvíli vytvorí zrazenina vo forme opalescentného prstenca.
Reakcia nájdená široké uplatnenie v lekárska prax na detekciu antraxového antigénu vo vlne, kožiach, mäse zvierat (Ascoliho reakcia); na detekciu iných patogénov infekčných chorôb v patologickom materiáli získanom od pacientov alebo v predmetoch vonkajšie prostredie, ako aj v súdnolekárske vyšetrenie na určenie druhu proteínu, najmä krvného proteínu alebo iných biologických tekutín.
Ouchterlonyho imunodifúzia
Precipitačná reakcia sa môže uskutočniť na agarovom géli.
Metóda je založená na skutočnosti, že častice antigénov a protilátok v dôsledku svojej rôznej veľkosti difundujú v géli rôznou rýchlosťou a v dôsledku toho sa pohybujú na rôzne vzdialenosti. To umožňuje oddeliť jednotlivé systémy antigénov, keď sú v zmesi, a teda umožňuje študovať antigénnu štruktúru baktérií a komplexných proteínov, sér a živočíšnych tkanív.
Vizuálne a efektívna metóda gélovú precipitáciu navrhol Ouchterlony.
Malé jamky sa robia na Petriho miskách s agarom, vyrezaným v určitej vzdialenosti od seba. Do jedného z nich sa naleje antigén, do iných sérum. Zložky reakcie difundujú v géli k sebe a vytvárajú viditeľnú líniu precipitácie, kde sa antigény stretávajú s optimálnymi koncentráciami protilátok pre ne špecifických. Pretože činidlá difundujú koncentricky z jamiek, je možné vykonať viacero testov umiestnením viacerých jamiek s rôznymi antigénmi (alebo rôznymi riedeniami toho istého antigénu) okolo jamky s protilátkou.
Ouchterlonyho reakcia umožňuje vyvodiť záver o povahe antigénu zo známeho séra a naopak, zo známeho antigénu sa zisťuje povaha protilátok.
Výhodou metódy je, že umožňuje porovnávať antigénne zložky komplexných zmesí a posúdiť ich zhodu alebo rozdiely. Na porovnanie zhody antigénov sa pripraví agar s jamkami: do jednej sa naleje antisérum a do ostatných sa nalejú porovnávané antigény. Ak sú antigény odlišné, potom sú precipitačné pásy umiestnené nerovnomerne.
Imunoelektroforéza
V posledných rokoch sa metóda imunoelektroforézy používa na jemné imunologické štúdie. Túto metódu prvýkrát opísal P.
Grabar a K. A. Williams v roku 1953. Ide o kombináciu agarovej gélovej elektroforézy na sklenených platniach s imunodifúziou. Na začiatku sa uskutoční elektroforetická separácia antigénu, ktorý je často zmesou proteínu alebo iných molekúl. Za týmto účelom sa antigén zavedie do vopred vyrezanej jamky v agare a agarová platňa sa umiestni na určitý čas do zóny jednosmerného elektrického prúdu.
kvôli iná rýchlosť pohyb molekúl je separácia antigénu na jeho zložky. Potom sa precipitujúce imunitné sérum zavedie do drážky vyrezanej v smere rovnobežnom s prúdom prúdu.
Antigén a antisérum difundujú v géli smerom k sebe.
zrážok
Každý antigén poskytuje zónu zrážania vo forme oblúka s protilátkami, ktoré mu zodpovedajú. Počet, poloha a tvar týchto čiar dávajú predstavu o zložení pôvodnej zmesi antigénov.
flokulačná reakcia
Metódu navrhol Ramon v roku 1924.
Je založená na skutočnosti, že zmes toxínu s antitoxickým sérom za určitých podmienok spôsobuje zákal a zrážanie. V tomto prípade k reakcii dôjde skôr v tých skúmavkách, kde množstvo antitoxínu zodpovedá dávke, ktorá toto množstvo toxínu úplne neutralizuje.
Preto, ak je známa sila toxínu, potom je možné určiť množstvo antitoxínu v neznámom testovacom sére. Na tento účel sa pripraví niekoľko riedení testovacieho séra, do každého riedenia sa pridajú rovnaké množstvá známeho toxínu a potom sa pozoruje, ktorá zo skúmaviek bude flokulovať (zákal roztoku) ako prvý. Stanovte počiatočnú flokuláciu. Potom sa vykoná výpočet.
Napríklad je potrebné stanoviť koncentráciu protilátok proti záškrtu v testovacom sére. Reakcia využíva difterický toxín obsahujúci 50 Lf na 1 ml (Lf je minimálne množstvo toxínu, ktoré je neutralizované 1 antitoxickou jednotkou (AU) antiséra.
Predpokladajme, že počiatočná flokulácia je zaznamenaná v skúmavke obsahujúcej 0,2 ml tohto séra a 2 ml známeho toxínu s aktivitou 100 Lf (50 Lf x 2).
Takže 0,2 ml séra neutralizovalo tento toxín. Preto 0,2 ml séra obsahuje 100 AU a v 1 ml tohto séra zodpovedá koncentrácia protilátok 500 AU (100 AU x 5).
Podobnou metódou možno vločkovaciu reakciu použiť na opačný účel – na stanovenie imunizačných vlastností toxoidov.
To si vyžaduje štandardné antitoxické sérum.
Neutralizačná reakcia
Reakcia sa používa pri diagnostike otravy baktériami z potravín na stanovenie bakteriálnych toxínov v testovanom materiáli. Okrem toho môže byť vložený do štúdia niektorých objektov vonkajšieho prostredia pre obsah patogénne baktérie produkujúce toxíny, napríklad pri skúmaní pôdy na prítomnosť patogénov tetanu alebo plynovej gangrény.
Je známe, že toxín zmiešaný s homologickým antitoxickým sérom nepreukazuje svoje toxické pôsobenie ako je toxín neutralizovaný. Reakcia interakcie toxínu s antitoxínom je spravidla prísne špecifická, preto na nastavenie neutralizačnej reakcie na určenie typu toxínu je potrebné mať diagnostické séra špecifické pre každý typ a typ toxínu. Ak sa očakáva prítomnosť niekoľkých toxínov v testovanom materiáli, môže sa súčasne použiť zmes 2-3 antitoxických sér a viac.
Neutralizačná reakcia umožňuje určiť typ a typ patogénneho toxínu.
Testovaným materiálom môže byť filtrát potravinárskych výrobkov, ktoré údajne spôsobili otravu, umývanie riadu, kde sa tieto výrobky nachádzali atď.
Vykoná sa predbežná neutralizácia údajného toxínu. Na tento účel sa do skúmavky s testovacím materiálom (experimentálna skúmavka) pridá antitoxické diagnostické sérum (obsahuje protilátky proti požadovanému toxínu); rovnaký objem fyziologického roztoku sa pridá do ďalšej skúmavky (kontrola).
Po krátkej inkubácii sa obsah skúmaviek vloží do dvoch skupín bielych myší (experimentálnej a kontrolnej).
Výsledky neutralizačnej reakcie sa berú do úvahy bezprostredne po smrti kontrolných zvierat. V tomto prípade ide o skutočnosť prežitia zvierat, ktoré dostali antitoxické sérum spolu s testovaným materiálom indikuje prítomnosť toxínu v ňom, čo zodpovedá injikovanému séru.
Výhodou neutralizačnej reakcie je vysoká spoľahlivosť získaných výsledkov.
Vo svojej citlivosti a rýchlosti získania odpovede je však horší ako niektoré iné výskumné metódy.
Reakcie lýzy
Lyzné reakcie sa zvyčajne nazývajú rozpúšťanie korpuskulárnych antigénov pôsobením protilátok špecifických pre tento antigén v prítomnosti komplementu.
Od imunitné reakcie na základe fenoménu lýzy baktérií a iných korpuskulárnych antigénov sa využívajú najmä bakteriolýzne a hemolytické reakcie.
bakteriolytická reakcia
Reakcia prebieha in vitro aj in vivo. Posledná uvedená je známa ako reakcia V.I. Isajev - Pfeiffer.
Títo vedci dokázali, že ak morčatá preimunizované cholerovými antigénmi, potom jeho následné zavedenie do brušnej dutiny vysoko virulentnej kultúry vibrio cholerae nespôsobuje infekciu zvierat, keďže v r. brušná dutina patogén sa rozpustí pod vplyvom špecifických protilátok.
Neskôr ja.
I. Mechnikov dokázal, že k podobnému rozpusteniu cholery vibrio vplyvom imunitného séra dochádza v skúmavke, ak sa k hlavným zložkám pridá čerstvé sérum, zdroj komplementu. Rozpustenie baktérií pôsobením špecifických protilátok v prítomnosti komplementu sa nazýva bakteriolýza.
Pri nastavení bakteriolýzy sa najskôr pripraví séria 10-násobných riedení testovacieho séra. Potom sa do každej skúmavky pridá rovnaké množstvo (1-2 kvapky) mikrobiálnej suspenzie. Do zmesi sa pridá komplement. Po inkubácii pri 37 °C sa zmes naočkuje z každej skúmavky do živného média, aby sa určila prítomnosť alebo neprítomnosť životaschopných baktérií.
Reakcia sa môže použiť na detekciu protilátok pomocou známeho mikroorganizmu alebo na určenie typu mikróbov pomocou diagnostického imunitného séra.
AT praktická práca bakteriológovia túto reakciu využívajú len zriedka, hlavne na odlíšenie cholery a cholery podobných vibriónov.
Reakcia hemolýzy
Mechanizmus hemolýzy je podobný ako pri bakteriolýze.
Erytrocyty použité v reakcii sú antigén. Zdrojom protilátok je antierytrocytové sérum (napr. ak sa v reakcii použijú ovčie erytrocyty, potom sa potrebné sérum so špecifickými antierytrocytovými protilátkami získa z králikov imunizovaných ovčími erytrocytmi).
Krvné sérum morčiat sa najčastejšie používa ako doplnok pri lyzačných reakciách, pretože obsahuje podstatne viac komplementu ako v sérach iných zvierat.
V prípadoch, keď protilátky v prítomnosti komplementu ničia erytrocyty, uvoľňuje sa z nich hemoglobín a reakčná zmes zo zakalenej suspenzie erytrocytov sa mení na priehľadnú červenú kvapalinu (laková krv).
Táto reakcia sa nazýva hemolýza. V laboratórnej praxi sa používa ako indikátor adsorpcie komplementu pri reakcii fixácie komplementu.
Súvisiace informácie:
Vyhľadávanie na stránke:
Plán prednášok: Predmet a stručná história vývoja mikrobiológie. Všeobecné vlastnosti mikroorganizmov a ich postavenie v prírode. zrážacia reakcia
Veterinárna mikrobiológia a jej úlohy
mir.zavantag.com > Biológia > Prednáška
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
RA prvýkrát vyvinul M. Gruber v roku 1896. Podstatou reakcie je interakcia protilátky s antigénom, výsledkom čoho je zlepenie (aglutinácia) mikróbov s tvorbou vločiek, hrudiek viditeľných voľným okom. RA sa široko používa na sérologickej diagnózy veľa bakteriálne infekcie(brucelóza, sopľavka, salmonelóza, kolibacilóza a pod.) a na sérologickú identifikáciu druhov a typov izolovaných mikroorganizmov. Existuje niekoľko metód nastavenia RA: skúmavka (objemová), kvapkacia (doštičková), kvapka krvi, prstencová reakcia s mliekom, hemaglutinačná reakcia a jej varianty (RHGA, RNHA), Coombsov antiglobulínový test atď. ^ – namiesto séra sa odoberá krv. Nastavte reakciu dosky. Diagnostikujte pullorózu kurčiat a moriek, mykoplazmózu kurčiat. Coombsova reakcia umožňuje detekciu neúplných protilátok. Posledne menované sú monovalentné, a preto inhibujú tvorbu aglutinátu. Metóda je založená na použití antiglobulínového séra, ktoré slúži ako medzičlánok na pripojenie neúplných protilátok fixovaných na korpuskulárne antigény (erytrocyty, baktérie). ^ - nevzťahuje sa na sérologické a diagnosticky presné reakcie, umožňuje však zistiť antigén - hemaglutinín a stanoviť hemaglutinačné vlastnosti (schopnosť aglutinovať červené krvinky) u niektorých baktérií a mykoplazmov. RNGA- v posledných rokoch zaujala jedno z popredných miest v sérodynamike. Jeho podstata spočíva v tom, že proteínové molekuly antigénu príslušného patogénu alebo protilátky sú vopred adsorbované na erytrocytoch ovce alebo iného zvieraťa ošetreného tanínom. Potom uveďte reakciu zmiešaním senzibilizovaných erytrocytov s krvnými sérami chorých zvierat alebo v druhom prípade so študovaným antigénom. V prítomnosti séra spec. Protilátky proti tomuto antigénu (alebo naopak) dochádza k aglutinácii erytrocytov – reakcia je pozitívna. V roku 1897 navrhol R. Kraus. Precipitácia je jav pozorovaný počas interakcie protilátky-precipitíny a antigén-precipitinogén. Podstatou reakcie je zmena disperzity koloidov antigénu a ich precipitácia pod vplyvom špecifických protilátok v imunitnom sére. RP možno umiestniť do skúmaviek v kvapalnom médiu (krúžková precipitačná reakcia) alebo do agarového gélu (lamelárny RDP). Prstencovú precipitačnú reakciu prvýkrát navrhol Ascoli (1910), najčastejšie sa používa na diagnostiku antraxu. Pri dirigovaní veterinárna odbornosť RP je metóda na zisťovanie falšovania mäsa, múky a iných výrobkov. Zvláštny význam táto reakcia má súdnolekárske vyšetrenie pri určovaní typu krvi. Použitie precipitačnej reakcie v kvapalnom médiu však neumožňuje charakterizovať heterogenitu antigénov, t.j. počet a koncentrácia antigénov v prípravku. Túto informáciu možno získať umiestnením RP do gélu (zvyčajne agaru). Pri rýchlosti pohybu rôzne antigény liečiva difundujú odlišne a vytvárajú precipitáty v hrúbke priehľadného gélu v mieste, kde sa stretávajú s homológnou protilátkou. Lokalizácia a koncentrácia precipitínových línií bude charakteristická pre každú zložku antigénneho prípravku, čo slúži ako kritérium jeho kvality. Zriedením prípravku je možné charakterizovať relatívny obsah antigénov v ňom. Bolo vyvinutých niekoľko metód nastavenia RDP: metóda priamej jednorozmernej difúzie podľa Udena (1946), metóda jednoduchej radiálnej imunodifúzie podľa Manciniho (1963), metóda dvojitej difúzie do agarového gélu podľa Ouchterlonyho (1948). ), atď. ^
(PH) na modeli tetanové toxíny a antitoxíny. Podstata RN spočíva v schopnosti homológnych protilátok imunitného séra potlačiť (neutralizovať) infekčné vlastnosti pôvodcu ochorenia alebo jeho metabolických produktov. Na stanovenie výsledku reakcie so zmesou antigén-protilátka infikujte laboratórne zvieratá, CC, EC. Pozitívnym indikátorom pH je absencia smrti biologických testovacích systémov. AT bakteriálna prax RN sa používa pri diagnostike anaeróbnej enterotoxémie, botulizmu atď. RN sa vykonáva za účelom detekcie a titrácie toxínov, toxoidov alebo antitoxínov. Používa sa na detekciu protilátok v krvnom sére a na detekciu antigénu v testovanom materiáli (na brucelózu, sopľavku, rickettsiózu, tuberkulózu atď.). Táto reakcia patrí k nepriamej dvojsystémovej reakcii. Má 5 komponentov:
Komponenty 3,4,5 tvoria systém indikátorov. Ak si antigén a protilátka testovacieho séra navzájom zodpovedajú ďalší vzniká imunitný komplex antigén-protilátka, ktorý viaže a extrahuje komplement z prostredia, kde prebieha reakcia. Pri absencii protilátok zodpovedajúcich antigénu v testovanom sére sa špecifikovaný komplex nevytvorí – komplement zostáva voľný. Keďže ide o neviditeľné procesy, na vyriešenie otázky, čo sa stalo s komplementom, sa do skúmavky ako indikátor zavádzajú zložky hemolytického systému - hemolytické sérum + erytrocyty. Ak je komplement naviazaný v bakteriologickom systéme, nedôjde k hemolýze erytrocytov, výsledok je pozitívny – sérum obsahuje protilátky. Prítomnosť hemolýzy slúži ako indikátor prítomnosti voľného komplementu v bakteriologickom systéme, čo je možné len pri absencii protilátok v testovacom sére – výsledok je negatívny. RSC postupuje za prísnych kvantitatívne pomery komponentov. To sa dosiahne ich predbežnou titráciou (komplement a hemolytické sérum sa titrujú v deň reakcie; mikrobiálny antigén - raz za 2-3 mesiace). Titrácia je stanovenie najmenšieho množstva jednej alebo druhej zložky v reakcii na uskutočnenie reakcie, nadbytok alebo nedostatok je skreslením výsledkov. RDSC je variant CSC, ale líši sa tým, že prvá fáza reakcie prebieha 16-18 hodín v chlade (40C), čo zvyšuje citlivosť v dôsledku dlhšej adsorpcie komplementu komplexom antigén-protilátka. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Podobný:
| Definícia "environmentálnej mikrobiológie" Všeobecná mikrobiológia, štúdium vzťahu mikroorganizmov medzi sebou, s objektmi vonkajšieho prostredia a makroorganizmami |
Najvšeobecnejšie a najzákladnejšie pojmy odzrkadľujúce podstatné, ... Filozofia je veda, ktorá najviac študuje všeobecné ustanovenia o človeku, prírode a poznaní |
||
| Plán Predmet a metóda disciplíny "Medzinárodné ekonomické vzťahy" ... Predmet a metóda disciplíny "Medzinárodné ekonomické vzťahy" a história vývoja medzinárodných ekonomických vzťahov |
Otázky ku skúške z kurzu "právna psychológia" Pre študentov ... Pojem právnej psychológie. Predmet, úlohy a dejiny vývoja právnej psychológie |
||
| 1. Predmet a metóda dejín politických a právnych doktrín > Predmet ... Je to spôsobené tým, že v rámci tejto právnej disciplíny sa skúma a pokrýva špecifický predmet - história vzniku ... |
1.
Dejiny filozofie ako vedy. Jeho predmet a metóda |
||
| Ministerstvo školstva a vedy Kazašskej republiky Aliancia študentov… Tento predpis o republikovej súťaži „Žiak roka 2011“ (ďalej len súťaž) určuje jej ciele a zámery, účastníkov ... |
Definícia pojmov "mikrobiológia" a "mikroorganizmus" … |
||
| Otázky na prípravu na test z disciplíny "konfliktológia" Konfliktológia ako veda: predmet, ciele, ciele, aktuálne problémy, význam na súčasné štádium rozvoj spoločnosti |
O krajskú súťaž videoklipov "k-roly-k!" Všeobecné ustanovenia Tieto pravidlá určujú ciele, ciele, zásady súťaže, postup pri jej organizácii a priebehu, postup pri účasti a určenie ... |
Pridajte tlačidlo na svoju stránku:
školské materiály
www.mir.zavantag.com
zrážacia reakcia
Precipitácia a aglutinácia sú dosť podobné reakcie, ktoré sa líšia hlavne na základe fyzikálne vlastnosti AG.
V prvom prípade je prezentovaný v rozpustnej, v druhej - v korpuskulárnych formách. RP je založený na tvorbe zrazeniny počas reakcie AG-AT. RP je vysoko špecifický a citlivý.
Reakčné zložky:
1. rozpustný antigén alebo haptén (precipitogén);
2. AT - precipitíny (imunitné precipitačné sérum; získané imunizáciou králikov vhodnými roztokmi antigénov);
zrážacia reakcia
izotonický roztok chloridu sodného alebo agarový gél.
Spôsoby nastavenia RP:
1) RP v riešeniach - r.
vyzrážanie prstencov;
2) RP v géli.
Kruhová precipitačná reakcia sa vloží do úzkych precipitačných skúmaviek, do ktorých sa nalejú zrážacie séra.
Potom nalejte roztok precipitinogénu. Pri pozitívnej reakcii sa na rozhraní zložiek objaví zakalený precipitačný prstenec.Príkladom tohto spôsobu nastavenia RP je Ascoliho termoprecipitačná reakcia, ktorá sa používa na detekciu termostabilného hapténu patogénu antraxu, extrahovaného z orgánov zvierat, koža a vlna extrakciou počas varu. Jedna z odrôd RP v géli (Ouchterlonyho reakcia) umožňuje určiť toxikogenicitu difterický bacil s antitoxickým sérom.
V Petriho miske s živné médium umiestnite prúžok filtračného papiera impregnovaného antitoxickým difterickým sérom a naočkujte študované kultúry vo forme ťahov kolmo na prúžok papiera. Inkubované pri 37 PS počas dňa. V prítomnosti toxigénnej kultúry sa v mieste interakcie toxínu s antitoxínom vytvárajú precipitačné línie Precipitačná reakcia v géli sa nazýva imunodifúzia.
Často forézou v géli - imunoelektroforézou. Princíp metódy: študovaný antigén sa frakcionuje elektroforeticky. získané frakcie sa analyzujú metódou dvojitej difúzie s použitím antiséra.
Ascoliho reakcia sa používa na diagnostiku antraxu, aby sa zistil antigén antraxových bacilov. Na nastavenie precipitačnej reakcie musíte mať: precipitinogén - haptén B.
Antrachis (extrakt z tkaniva), precipitín (sérum precipitujúce antrax) a fyziologický roztok.
Príprava termoprecipitinogénu.
1. Nalejte 10 ml fyziologického roztoku do banky obsahujúcej 1 g rozdrvenej kože alebo 1 ml kultúry B. anthracis.
2. Vložte banku do vriaceho kúpeľa na 30-45 minút.
3. Prefiltrujte cez azbest. Filtrát by mal byť úplne číry. Na zrážaciu reakciu sa filtrát zriedi 100-krát alebo viac.
Nastavenie reakcie zrážania kruhu.
1) 0,3 ml celého precipitačného séra alebo zriedeného v pomere 1:5, 1:10 sa naleje do skúmavky na zrážanie.
2) Pozdĺž steny skúmavky sa opatrne navrství precipitinogén Reakcia sa považuje za pozitívnu, ak sa na hranici dvoch kvapalín najneskôr do 5-15 minút vytvorí zakalený kruh vyzrážaného proteínu.
Pri nastavovaní zrážacej reakcie sa používajú nasledujúce ovládacie prvky:
a) antigén a fyziologický roztok;
b) špecifické sérum a fyzikálne.
c) antigén a nešpecifické sérum.
Vo všetkých kontrolných skúmavkách by nemal byť zákal.Na zrážaciu reakciu sa používajú špeciálne zrážacie skúmavky vysoké 40-60 mm a priemer 4-5 mm, zrážanie v úzkych skúmavkách prebieha oveľa rýchlejšie a prejavuje sa zreteľnejšie ako v bežných skúmavkách , sú dôkladne umyté a vysušené, takže ich sklo je úplne priehľadné a suché.
Pri precipitačnej reakcii sa vyzráža špecifický imunitný komplex pozostávajúci z rozpustného antigénu (lyzát, extrakt, haptén) a špecifickej protilátky v prítomnosti elektrolytov.
Zakalený prstenec alebo zrazenina vytvorená v dôsledku tejto reakcie sa nazýva zrazenina. Táto reakcia sa od aglutinačnej reakcie líši najmä veľkosťou častíc antigénu.
Precipitačná reakcia sa zvyčajne používa na stanovenie antigénu pri diagnostike množstva infekcií (antrax, meningitída atď.); v súdnom lekárstve - určiť druh krvi, spermií atď.; v sanitárnych a hygienických štúdiách - pri zisťovaní falšovania výrobkov; s jeho pomocou určiť fylogenetický vzťah zvierat a rastlín. Pre reakciu potrebujete:
1. Protilátky (precipitíny) - imunitné sérum s vysokým titrom protilátok (nie nižším ako 1:100 000). Titer precipitujúceho séra je určený najvyšším zriedením antigénu, s ktorým reaguje. Sérum sa zvyčajne používa neriedené alebo zriedené 1:5 -1:10.
2. Antigén - rozpustené látky proteínovej alebo lipoidnej polysacharidovej povahy (kompletné antigény a haptény).
3. Izotonický roztok.
Hlavné metódy na uskutočnenie precipitačnej reakcie sú: kruhová precipitačná reakcia a precipitačná reakcia na agare (géli).
Pozor! Všetky zložky zapojené do zrážacej reakcie musia byť úplne transparentné.
Reakcia zrážania kruhu. 0,2 - 0,3 ml (5-6 kvapiek) séra sa pridá do skúmavky na zrážanie pomocou Pasteurovej pipety (sérum by nemalo padať na steny skúmavky). Antigén sa opatrne navrství na sérum v rovnakom objeme a naleje ho tenkou Pasteurovou pipetou pozdĺž steny skúmavky. Skúmavka sa udržiava v naklonenej polohe. Pri správnom vrstvení by sa mala dosiahnuť jasná hranica medzi sérom a antigénom. Opatrne, aby sa kvapalina nezmiešala, umiestnite skúmavku na statív. Pri pozitívnom výsledku reakcie sa na hranici antigénu a protilátky vytvorí zakalený „prstenec“ - zrazenina.
Precipitačná reakcia v agare(gél). Zvláštnosťou reakcie je, že k interakcii antigénu a protilátky dochádza v hustom médiu, t.j. gél. Výsledná zrazenina poskytuje zakalený pás v hrúbke média. Neprítomnosť pásu indikuje nesúlad medzi reakčnými zložkami. Táto reakcia sa široko používa v biomedicínskom výskume, najmä pri štúdiu tvorby toxínov v pôvodcovi záškrtu.
Lytická reakcia (imunitná cytolýza)
imunitná lýza- ide o rozpúšťanie buniek pod vplyvom protilátok s povinnou účasťou komplementu. Pre reakciu potrebujete:
1. Antigén mikróby, erytrocyty alebo iné bunky.
2. Protilátka(lyzín) - imunitné sérum, zriedkavo sérum pacienta. Bakteriolytické sérum obsahuje protilátky, ktoré sa podieľajú na lýze baktérií; hemolytické - hemolyzíny, ktoré prispievajú k lýze červených krviniek; na lýzu spirochét sú potrebné spirochetolizíny, bunky - itolizíny atď.
3. Doplniť. Najviac sa dopĺňa v sére morčiat. Toto sérum (zmes viacerých zvierat) sa zvyčajne používa ako doplnok.
4. Izotonický roztok.
zrážacia reakcia.
| Názov parametra | Význam |
| Predmet článku: | zrážacia reakcia. |
| Rubrika (tematická kategória) | Vzdelávanie |
Precipitačná reakcia (RP) - ϶ᴛᴏ precipitácia rozpustného antigénu pôsobením protilátok v prítomnosti elektrolytu. Viditeľný reakčný efekt (precipitačný jav) - zákal (tvorba zakaleného prstenca alebo sedimentu - zrazenina).
RP sa používa na detekciu neznámeho antigénu v mnohých infekčné choroby: s antraxom, tularémiou, meningitídou, kiahňami. V súdnom lekárstve sa používa na určenie druhu krvi, semena; v sanitárnom a hygienickom výskume - stanoviť falšovanie potravinárskych výrobkov. RP je veľmi citlivý a dokáže detekovať antigén v riedeniach 1:1 000 000 a 1:10 000 000.
Zložky precipitačnej reakcie.
1. Antigén (precipitinogén) - ide o antigén molekulárnej povahy, ktorý je v jemne rozptýlenom (rozpustnom) stave. Precipitinogény - ϶ᴛᴏ rôzne lyzáty alebo tkanivové extrakty atď.
Hostené na ref.rf
Precipitinogén sa líši od aglutinogénu veľkosťou častíc antigénu. Aglutinogén Má veľkosti buniek(nie sú to zničené celé bunky), ale rozmery precipitinogénúmerne s molekulová veľkosť(ide o bielkoviny a ich komplexy so sacharidmi alebo lipidmi). Roztok precipitinogénu transparentný.
2. Protilátky (precipitíny) sa nachádzajú v ľudskom sére alebo v imunodiagnostických precipitačných sérach, ktoré obsahujú známe protilátky.
3. Elektrolyt- izotonický roztok chloridu sodného.
Získanie precipitinogénu.
Získava sa mletím materiálu a extrakciou proteínových antigénov z neho varom alebo inými metódami.
Príklady precipitinogénov: lyzáty alebo extrakty rôznych orgánov a tkanív, cudzie krvné sérum (sérum je Riešenie, v prvom rade rôzne proteíny), filtráty bujónových kultúr mikróbov, soľné extrakty mikróbov, autolyzáty atď.
Získanie precipitujúcich sér.
Získané hyperimunizáciou králikov vhodnými precipitinogénmi. Takéto séra obsahujú protilátky proti tým precipitinogénom, ktorými boli králiky imunizované.
Príklady precipitujúcich sér: precipitujúce antraxové sérum(obsahuje protilátky proti antraxovým antigénom), precipitujúce antimeningokokové sérum(obsahuje protilátky proti antigénom pôvodcu meningitídy) atď.
Titer precipitačné sérum - ϶ᴛᴏ najvyššie riedenie precipitinogénu, pri ktorom sérum ešte dáva precipitačnú reakciu.
Spôsoby nastavenia RP.
1. Reakcia zrážania kruhu - vykonávané v špeciálnych zrážacích trubiciach (priemer - 0,4-0,5 cm, výška - 7-8 cm). Do skúmavky sa pridá 0,2 - 0,3 ml precipitačného séra a pozdĺž steny sa dlhým nosom Pasteurovej pipety opatrne navrství rovnaké množstvo precipitinogénu. Ďalej opatrne horizontálna poloha rúrky sú umiestnené vertikálne.
Účtovanie výsledkov reakcií sa uskutoční objavením sa bieleho prstenca na hranici antigén-protilátka. S pozitívnou reakciou takýto krúžok sa pozoruje. V tomto prípade antigén zodpovedá protilátke a dochádza k ich väzbe.
Ak sa uvarí a prefiltruje vodné extrakty orgánov a tkanív, potom sa reakcia zvyčajne nazýva reakcia termoringové zrážky (napríklad pri diagnostike antraxu).
2. Gélová precipitačná reakcia - uskutočnené v Petriho miskách alebo na podložných sklíčkach, kde sa umiestni vrstva agarového gélu. Keď gél stuhne, vyrežú sa v ňom jamky, do ktorých sa umiestnia antigény alebo protilátky, prípadne oboje. Rozlišovať 2 metódy RP v géli:
a) metóda jednoduchá (radiálna) imunodifúzia: jedna zo zložiek imunitnej reakcie (antigén alebo protilátka) sa umiestni do jamky a druhá zložka sa zmieša s agarom; s pozitívnym výsledkom (antigén zodpovedá protilátke) sa vytvorí okolo jamky precipitačný kruh ;
b) metóda dvojitá imunodifúzia: protilátka aj antigén sú umiestnené v oddelených jamkách, difundujú v agarovom géli k sebe; s pozitívnym výsledkom kde sa stretávajú protilátky a antigény zrážkové čiary.
Príklad RP v géli je Ouchterlonyho dvojitá imunodifúzna reakcia pri diagnostike záškrtu
Imunoelektroforéza - je to metóda, ktorá kombinuje metódu elektroforézy a precipitačnej reakcie. Zmes antigénov (napríklad proteíny krvného séra) sa separuje v géli pomocou elektroforézy. Potom sa na nájdenie a stanovenie požadovaného proteínu (neznámy antigén) použije diagnostické precipitačné sérum, ktoré obsahuje protilátky proti tomuto proteínu (známa protilátka). Na tento účel sa do drážky paralelne s proteínmi zavedie diagnostické sérum. Ak medzi proteínmi existuje jeden, ktorý zodpovedá protilátke v sére, potom sa tvorí okolo nej zrážkové čiary.
zrážacia reakcia. - pojem a druhy. Klasifikácia a vlastnosti kategórie "Reakcia zrážok." 2017, 2018.
