Diagnosticum vi a antigénny erytrocyt. Diagnosticum salmonela erytrocytov o
Osvedčenie o evidencii č. RZN 2016/3905 zo dňa 04.04.2016
Účel
Reagenčná súprava „Diagnosticum erythrocyte Salmonella Vi-antigenic for RPHA“ (SED-Vi) je určená na detekciu protilátok proti Vi-antigénu pôvodcu brušného týfusu v ľudských krvných sérach pasívnym hemaglutinačným testom (RPHA).
Nastaviť charakteristiku
Princíp fungovania
V prítomnosti protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu sa pozoruje hemaglutinácia kuracích erytrocytov senzibilizovaných Vi-antigénom, čo vedie k vytvoreniu „dáždnika“ usadených erytrocytov na dne jamiek doštičky v tvare U. . Pri absencii protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu tvoria usadené erytrocyty „bod“.
Nastavte zloženie
| Názov činidla | Popis | Množstvo v súprave |
|---|---|---|
| Diagnosticum erytrocyt Salmonella Vi-antigénny, suchý 6% (SED) | Formalizované kuracie erytrocyty senzibilizované antigénom S. typhi Vi. Suchá hygroskopická hmota hnedej farby. Po rozpustení - suspenzia červeno-hnedej farby. | 1 injekčná liekovka, od 0,6 ml |
| Diagnostické sérum salmonely adsorbované, Vi receptor, suché (riedené 1:20, (K+)) | Salmonella adsorbované králičie sérum, Vi receptor, zriedené 1:20. Suchá hygroskopická porézna hmota bielej farby. Po rozpustení je to číra žltkastá alebo bezfarebná kvapalina. | 1 injekčná liekovka, od 0,3 ml |
| Rozpúšťadlo vzoriek (RID) | Číra modrofialová kvapalina. | 1 injekčná liekovka, 10 ml |
| Fosfátový tlmivý roztok (PBS) | Priehľadná bezfarebná kvapalina. | 1 injekčná liekovka, 10 ml |
| Jednorazová polymérová platňa na imunologické reakcie | Jednorazová polymérová platňa pre imunologické reakcie vyrobená z transparentného bezfarebného polystyrénu. | 1 PC. |
Diagnostické charakteristiky
Diagnosticum by sa malo aglutinovať v RPHA s diagnostickým sérom adsorbovaným na salmonelu, Vi receptor, suché (pri riedení 1:20), na titer uvedený na štítku séra. Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra zdravých ľudí by sa mala považovať za zriedenie séra nie vyššie ako 1:20. Čas analýzy je 3040 minút. Súprava je určená na štúdium 42 krvných sér pri skríningovej možnosti alebo 10 krvných sér pri možnosti titrácie.
Preventívne opatrenia
Súprava je určená len na diagnostické použitie in vitro. Látky obsiahnuté v komponentoch súpravy sú inaktivované a bezpečné. Pri práci so súpravou je potrebné dodržiavať SP 1.3.2322-08 a SanPiN 2.1.7.2790-10.
Dodatočné vybavenie a materiály
Vybavenie, materiály, riešenia:
- 1-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5-40 µl; 40 - 200 ul; 200 - 1000 ul a 1000 - 5000 ul;
- 8- alebo 12-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5-40 µl a 40-200 µl;
- destilovaná voda (GOST 6709-72).
Analyzované vzorky
Študované vzorky krvného séra sa uchovávajú pri teplote 2 až 8 °C maximálne 3 dni od momentu odberu krvi. Je povolené skladovať srvátku v zmrazenom stave pri teplote nepresahujúcej mínus 18 ° C najviac 1 rok. Pred použitím sa vzorky rozmrazia pri teplote 16 až 25 °C a premiešajú sa pretrepaním. Opätovné zmrazenie nie je povolené. Vzorky s rastom baktérií a hemolýzou by sa nemali používať. Pred nastavením reakcie sa testovacie séra zahrievajú na 56 °C počas 30 minút.
Vykonávanie analýzy
Príprava kontrolného diagnostického séra (K+)
Pripravte pracovný roztok diagnostického séra adsorbovaného na salmonelu, Vi receptor, suchý (riedený 1:20) z 0,3 ml (K+). Na tento účel sa k obsahu liekovky s K+ pridá 0,3 ml roztoku fosfátového pufra (PBS). Zostávajúce množstvo séra sa môže rozdeliť na alikvóty a uchovávať zmrazené pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 6 mesiacov.
Príprava diagnostiky na salmonelu erytrocytov (SED)
Na prípravu pracovného riedenia suspenzie salmonella erythrocyte diagnosticum sa k obsahu liekovky so suchým 6 % SED pridá 0,6 ml destilovanej vody a nechá sa hydratovať 2 hodiny pri teplote 16 až 25 °C. Potom sa k roztoku pridá 2,4 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS). Pracovný roztok sa uchováva pri teplote 2 až 8 °C najviac 1 mesiac. Zmrazovanie nie je povolené.
Stanovenie RPHA počas skríningu krvných sér
Skríningové séra sa zriedia v jamkách platne nasledovne:
- v prvých jamkách tablety sa pripravia predbežné riedenia 1:20, do ktorých sa najskôr pridá 190 μl RIP roztoku, potom 10 μl študovaného séra. Každé sérum sa pridáva samostatnou špičkou a opatrne sa pipetuje (v tomto prípade by sa farba roztoku v jamkách mala po pridaní séra zmeniť z modrofialovej na zelenú);
- v druhých jamkách sa pripravia skríningové riedenia 1:40, najprv sa do nich zavedie 25 ul roztoku PBS a potom 25 ul predriedeného séra a opatrne sa pipetuje.
Pri každom nastavení RPHA je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K +. Na tento účel sa do 8 jamiek dlhého radu pridá 50 ul roztoku PBS. Potom sa do prvej jamky pridá 50 ul pracovného roztoku K+ (1:20), opatrne sa odpipetuje a prenesie do ďalších jamiek, každá po 50 ul, pričom sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:40 do 1:5120. Do ďalších 4 jamiek sa pridá 50 ul roztoku PBS na kontrolu SED na neprítomnosť spontánnej hemaglutinácie.
Do všetkých jamiek tablety so skríningovými riedeniami študovaného séra (okrem prvého obsahujúceho RIP) a kontrol pridajte 25 μl SED. Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 až 40 minút až do úplnej sedimentácie erytrocytov v kontrole.
Stanovenie RPHA počas titrácie študovaného krvného séra
Titrácia študovaného séra a pracovného roztoku K+ sa uskutočňuje v krátkych radoch platne. Ďalší krátky rad sa používa na kontrolu absencie spontánnej hemaglutinácie EDS.
Do prvých jamiek krátkych radov na titráciu testovacieho séra sa pridá 180 μl RIP roztoku. Všetky ostatné jamky sa naplnia 50 ul roztoku PBS.
Do jamiek s RIP roztokom sa pridá 20 μl testovacieho séra (získa sa riedenie 1:10). Každé sérum sa pridá špičkou a opatrne sa odpipetuje (farba roztoku v jamkách by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú). Potom sa 50 μl prenesie z prvých jamiek do ďalších jamiek v radoch, pričom sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:20 do 1:1280. Na konci titrácie sa z posledných jamiek odoberie 50 μl roztokov.
Pri každom nastavení RPHA je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K +. Na tento účel sa do 8 jamiek dlhého radu pridá 50 ul roztoku PBS. Potom sa do prvej jamky pridá 50 ul pracovného roztoku K+ (1:20), opatrne sa odpipetuje a prenesie do ďalších jamiek, každá po 50 ul, pričom sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:40 do 1:5120.
Na kontrolu diagnostiky na absenciu spontánnej hemaglutinácie sa do všetkých jamiek krátkeho radu pridá 50 ul roztoku PBS.
Do všetkých jamiek (okrem prvých jamiek každého radu pre študované séra obsahujúce RIP) pridajte 25 µl SED. Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút až do úplnej sedimentácie erytrocytov v kontrole.
Účtovanie a interpretácia výsledkov
Účtovanie výsledkov pri skríningu krvných sér
Účtovanie výsledkov sa vykonáva na podmienenej stupnici štyroch krížikov. Sérový titer je jeho riedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu najmenej 3 (+++) kríženiami.
- ++++ (4+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený "dáždnik", jeho okraje odpadávajú;
- +++ (3+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený "dáždnik", jeho okraje sú rovné;
- ++ (2+) - spolu s aglutinovanými erytrocytmi je na dne otvoru sediment vo forme malého "prstence" neaglutinovaných erytrocytov;
- + (1+) - väčšina erytrocytov nie je aglutinovaná a usadzuje sa vo forme malého "krúžku";
- (-) - neaglutinované erytrocyty tvoria „bod“ na dne jamky.
Za pozitívny výsledok sa považuje hemaglutinácia erytrocytov zaťažených Vi-antigénom aspoň 3 kríženiami (+++).
Kontrolou kvality diagnostika sú 4 jamky kontrolného radu, do ktorých bol pridaný len roztok PBS a SED. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa počas re-stagingu objaví hemaglutinácia, potom sa liek nepoužíva.
Séra s negatívnym výsledkom by sa mali považovať za neobsahujúce protilátky proti antigénu Vi s diagnostickým titrom 1:40 a nižším.
Séra, ktoré dávajú pozitívny výsledok pri riedení 1:40, by sa mali znovu vyšetriť vo variante s titráciou séra, aby sa stanovil jeho titer.
Zohľadnenie výsledkov pri titrácii krvných sér
Sérový titer je jeho riedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu najmenej 3 (+++) kríženiami.
Kontrolou kvality diagnostika sú jamky radu na kontrolu SED. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa počas re-stagingu objaví hemaglutinácia, potom sa liek nepoužíva.
Sada reagencií Diagnosticum Salmonella VI-antigenic je určená na detekciu špecifických protilátok proti V-antigénu Salmonella týfusu v ľudskom krvnom sére v reakcii pasívnej hemaglutinácie (RPHA).
VLASTNOSTI SÚPRAVY
2.1. Princíp metódy.
Aktívnou zložkou Diagnosticum Salmonella VI-antigén je V-antigén fixovaný na povrchu erytrocytov. Pri interakcii so sérami obsahujúcimi protilátky proti antigénu Vee sa pozoruje fenomén aglutinácie erytrocytov.
2.2. ZLOŽENIE SÚPRAVY
| Činidlá | Množstvo |
| Diagnosticum erytrocytárna Salmonella V-antigénna kvapalina- predstavuje 1% suspenziu formalinizovaných a senzibilizovaných Vi-antigénom Salmonella týfusových ovčích erytrocytov vo fosfátovom tlmivom roztoku (pH 7,2 + 0,2; koncentrácia 0,06 mol/l). Homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; pri usadzovaní sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant | 1 fľaša - 3 ml |
| Diagnostický sérový receptor salmonely adsorbovaný Vee suchý — homogénna hmota od bielej s hnedastým nádychom až po béžovú | 1 fľaša - od 0,1 ml |
| 1 % suspenzia formalizovaných, nesenzibilizovaných ovčích erytrocytov- homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; pri usadzovaní sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant | 1 injekčná liekovka - |
| Roztok na riedenie séra a nastavenie RPHA - 0,9 % roztok chloridu sodného je číra, bezfarebná kvapalina, pH 6,5 až 7,5 | 2 fľaštičky - každá po 8 ml |
| Doska s okrúhlym dnom na jednorazové imunologické reakcie — pozostáva z 8 radov, z ktorých každý obsahuje 12 otvorov s priehľadným, bezfarebným, okrúhlym dnom | 1 PC |
ANALYTICKÉ A DIAGNOSTICKÉ CHARAKTERISTIKY.
3.1. Diagnosticum by sa malo aglutinovať v RPHA so sérom diagnostického receptora B adsorbovaného na Salmonella suché v riedení aspoň 1:160.
Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra zdravých ľudí by sa mala považovať za zriedenie séra nie vyššie ako 1:20.
3.2. Čas analýzy je 2 hodiny.
3.3. Sada je určená pre 8 definícií.
PREVENTÍVNE OPATRENIA
Pri práci so súpravou by ste mali dodržiavať „Pravidlá pre dizajn, bezpečnostné opatrenia, priemyselnú sanitáciu, protiepidemický režim a osobnú hygienu pri práci v laboratóriách (oddeleniach, oddeleniach) hygienických a epidemiologických zariadení systému ministerstva Zdravie ZSSR (M., 1981).
Analyzované séra, ako aj činidlá, ktoré sú s nimi v kontakte, by sa mali považovať za potenciálne infekčné, schopné dlhodobého skladovania alebo prenosu HIV, vírusu hepatitídy alebo akéhokoľvek iného pôvodcu vírusovej infekcie – treba s nimi zaobchádzať opatrne :
- pracovať v gumených rukaviciach;
- pri pipetovaní je potrebné používať automatické pipety;
- na konci práce by sa analyzované séra a reagencie, ktoré sú s nimi v kontakte, nástroje, mali ošetriť dezinfekčným roztokom
- Utrite zariadenie pred a po práci 70% etylalkoholom.
Analyzované séra sa musia inaktivovať pri 56 °C počas 30 minút.
Diagnostické suché inaktivované sérum Vee adsorbovaného na salmonelu, ktoré je súčasťou súpravy.
Objektívne výsledky analýzy sú zaručené za nasledujúcich podmienok:
- skladovanie všetkých činidiel súpravy by sa malo vykonávať pri teplote 2 až 8 0 С;
- nepoužívajte reagencie po expirácii;
- nepoužívajte činidlá zo súpravy, ak nie sú na obale príslušne označené;
- pre RPHA používajte reagencie len v tejto súprave.
2. diagnostika
4.od zničených mikróbov (izolácia špecifického Ag)
Diagnostika HBs erytrocytov
2. diagnostika
4.suspenzia er.oviec ošetrených tanínom a vyzrážaných a\g HBs
5. Na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Diagnostika gp120
2. diagnostika
4.oddeľte a\g excit. HIV
5. Na detekciu HIV
Diagnostika tetanových erytrocytov
2. diagnostika
4.suspenzia er.ovca lieceneho taninom s a\g excitaciou tetanu
5. na detekciu špecifických protilátok v krvnom sére (proti tetanovej excitácii
Antigén kardiolipín pre mikroprecipitáciu
2. diagnostika
4.extrakcia lipidových frakcií zo srdca zdravého býka
5. Na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Ultrasonifikovaný treponémový antigén
2. diagnostika
4.z mŕtvych ex. syfilis
5. Na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Diagnostika korpuskulárnej tularémie
2. diagnostika
4.jednotlivých častíc patogénu
5. Na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Diagnostika úplavice
2. diagnostika
4. suspenzia zo zabitých m \ o
5. Na zistenie špecifických protilátok v sére pacienta
Diagnostika erytrocytov od Shigella Sonne
2. diagnostika
4. suspenzia er.oviec, ošetrená tonínom
5. Na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Diagnostika zo salmonely typhimurium
2. diagnostika
4.z mŕtvych ex. salmonela
5. Na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Séra
Antigangrénne konské sérum 5000 IU
2.sérum
4. z krvného séra hyperimm.koní s excitačným plynom gangréna toxoid
6.parenterálne, po teste globulínom 1:100
normálny ľudský imunoglobulín
2.sérum
4. z darcovského krvného séra
5.form-e prejsť. špecifické zakúpené umenia. imm
6. parenterálne
precipitujúce antraxové sérum
2.sérum
4. z krvného séra hyperimunizovaných zvierat a\g excit.sib. vredy
6.zrážacia reakcia (RP)
Botulínové sérum typu - A 400 IU
2.sérum
5. na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli
6.neutralizačná reakcia (RN)
Antraxový globulín
2.sérum
4. z krvného séra hyperimunizovaných zvierat a\g dráždivé vredy
5.form-e prejsť. špecifické zakúpené umenia. imm
6. parenterálne
Hemolytické sérum
2.sérum
4. zo séra hyperimunizovaných zvierat s erytrocytmi zvierat iného druhu
5. na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli
Cholerové aglutinačné sérum Ogawa
2.sérum
4. z krvného séra hyperimunizovaných zvierat
5. na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli
Sérum svetelnej tularémie
2.sérum
4. z krvného séra hyperimunizovaných zvierat a\g excitabilný tulár.
5. na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli
Imunoglobulín proti ľudskej kliešťovej encefalitíde
2.sérum
4. z darcovského krvného séra
5.form-e prejsť. špecifické zakúpené umenia. imm
6. parenterálne
ESNO diagnostické sérum
2.sérum
4. z krvného séra hyperimunizovaných zvierat s ESNO vírusmi
5. na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli
Ľudský imunoglobulín proti hepatitíde B
2.sérum
4. z krvného séra darcu očkovaného proti hepatitíde B
5.form-e prejsť. špecifické zakúpené umenia. imm
6. parenterálne
Antiglobulínové sérum označené peroxidázou
2.sérum
4. z krvného séra hyperimunizovaných zvierat
5. na zistenie špecifického antigénu v testovacom materiáli (HIV)
Imunoglobulín proti besnote
2.sérum
4. z darcovského krvného séra
5.form-e prejsť. špecifické zakúpené umenia. imm
Osvedčenie o evidencii č. RZN 2016/3905 zo dňa 04.04.2016
Účel
Reagenčná súprava „Diagnosticum erythrocyte Salmonella Vi-antigenic for RPHA“ (SED-Vi) je určená na detekciu protilátok proti Vi-antigénu pôvodcu brušného týfusu v ľudských krvných sérach pasívnym hemaglutinačným testom (RPHA).
Nastaviť charakteristiku
Princíp fungovania
V prítomnosti protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu sa pozoruje hemaglutinácia kuracích erytrocytov senzibilizovaných Vi-antigénom, čo vedie k vytvoreniu „dáždnika“ usadených erytrocytov na dne jamiek doštičky v tvare U. . Pri absencii protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu tvoria usadené erytrocyty „bod“.
Nastavte zloženie
| Názov činidla | Popis | Množstvo v súprave |
|---|---|---|
| Diagnosticum erytrocyt Salmonella Vi-antigénny, suchý 6% (SED) | Formalizované kuracie erytrocyty senzibilizované antigénom S. typhi Vi. Suchá hygroskopická hmota hnedej farby. Po rozpustení - suspenzia červeno-hnedej farby. | 1 injekčná liekovka, od 0,6 ml |
| Diagnostické sérum salmonely adsorbované, Vi receptor, suché (riedené 1:20, (K+)) | Salmonella adsorbované králičie sérum, Vi receptor, zriedené 1:20. Suchá hygroskopická porézna hmota bielej farby. Po rozpustení je to číra žltkastá alebo bezfarebná kvapalina. | 1 injekčná liekovka, od 0,3 ml |
| Rozpúšťadlo vzoriek (RID) | Číra modrofialová kvapalina. | 1 injekčná liekovka, 10 ml |
| Fosfátový tlmivý roztok (PBS) | Priehľadná bezfarebná kvapalina. | 1 injekčná liekovka, 10 ml |
| Jednorazová polymérová platňa na imunologické reakcie | Jednorazová polymérová platňa pre imunologické reakcie vyrobená z transparentného bezfarebného polystyrénu. | 1 PC. |
Diagnostické charakteristiky
Diagnosticum by sa malo aglutinovať v RPHA s diagnostickým sérom adsorbovaným na salmonelu, Vi receptor, suché (pri riedení 1:20), na titer uvedený na štítku séra. Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra zdravých ľudí by sa mala považovať za zriedenie séra nie vyššie ako 1:20. Čas analýzy je 3040 minút. Súprava je určená na štúdium 42 krvných sér pri skríningovej možnosti alebo 10 krvných sér pri možnosti titrácie.
Preventívne opatrenia
Súprava je určená len na diagnostické použitie in vitro. Látky obsiahnuté v komponentoch súpravy sú inaktivované a bezpečné. Pri práci so súpravou je potrebné dodržiavať SP 1.3.2322-08 a SanPiN 2.1.7.2790-10.
Dodatočné vybavenie a materiály
Vybavenie, materiály, riešenia:
- 1-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5-40 µl; 40 - 200 ul; 200 - 1000 ul a 1000 - 5000 ul;
- 8- alebo 12-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5-40 µl a 40-200 µl;
- destilovaná voda (GOST 6709-72).
Analyzované vzorky
Študované vzorky krvného séra sa uchovávajú pri teplote 2 až 8 °C maximálne 3 dni od momentu odberu krvi. Je povolené skladovať srvátku v zmrazenom stave pri teplote nepresahujúcej mínus 18 ° C najviac 1 rok. Pred použitím sa vzorky rozmrazia pri teplote 16 až 25 °C a premiešajú sa pretrepaním. Opätovné zmrazenie nie je povolené. Vzorky s rastom baktérií a hemolýzou by sa nemali používať. Pred nastavením reakcie sa testovacie séra zahrievajú na 56 °C počas 30 minút.
Vykonávanie analýzy
Príprava kontrolného diagnostického séra (K+)
Pripravte pracovný roztok diagnostického séra adsorbovaného na salmonelu, Vi receptor, suchý (riedený 1:20) z 0,3 ml (K+). Na tento účel sa k obsahu liekovky s K+ pridá 0,3 ml roztoku fosfátového pufra (PBS). Zostávajúce množstvo séra sa môže rozdeliť na alikvóty a uchovávať zmrazené pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 6 mesiacov.
Príprava diagnostiky na salmonelu erytrocytov (SED)
Na prípravu pracovného riedenia suspenzie salmonella erythrocyte diagnosticum sa k obsahu liekovky so suchým 6 % SED pridá 0,6 ml destilovanej vody a nechá sa hydratovať 2 hodiny pri teplote 16 až 25 °C. Potom sa k roztoku pridá 2,4 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS). Pracovný roztok sa uchováva pri teplote 2 až 8 °C najviac 1 mesiac. Zmrazovanie nie je povolené.
Stanovenie RPHA počas skríningu krvných sér
Skríningové séra sa zriedia v jamkách platne nasledovne:
- v prvých jamkách tablety sa pripravia predbežné riedenia 1:20, do ktorých sa najskôr pridá 190 μl RIP roztoku, potom 10 μl študovaného séra. Každé sérum sa pridáva samostatnou špičkou a opatrne sa pipetuje (v tomto prípade by sa farba roztoku v jamkách mala po pridaní séra zmeniť z modrofialovej na zelenú);
- v druhých jamkách sa pripravia skríningové riedenia 1:40, najprv sa do nich zavedie 25 ul roztoku PBS a potom 25 ul predriedeného séra a opatrne sa pipetuje.
Pri každom nastavení RPHA je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K +. Na tento účel sa do 8 jamiek dlhého radu pridá 50 ul roztoku PBS. Potom sa do prvej jamky pridá 50 ul pracovného roztoku K+ (1:20), opatrne sa odpipetuje a prenesie do ďalších jamiek, každá po 50 ul, pričom sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:40 do 1:5120. Do ďalších 4 jamiek sa pridá 50 ul roztoku PBS na kontrolu SED na neprítomnosť spontánnej hemaglutinácie.
Do všetkých jamiek tablety so skríningovými riedeniami študovaného séra (okrem prvého obsahujúceho RIP) a kontrol pridajte 25 μl SED. Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 až 40 minút až do úplnej sedimentácie erytrocytov v kontrole.
Stanovenie RPHA počas titrácie študovaného krvného séra
Titrácia študovaného séra a pracovného roztoku K+ sa uskutočňuje v krátkych radoch platne. Ďalší krátky rad sa používa na kontrolu absencie spontánnej hemaglutinácie EDS.
Do prvých jamiek krátkych radov na titráciu testovacieho séra sa pridá 180 μl RIP roztoku. Všetky ostatné jamky sa naplnia 50 ul roztoku PBS.
Do jamiek s RIP roztokom sa pridá 20 μl testovacieho séra (získa sa riedenie 1:10). Každé sérum sa pridá špičkou a opatrne sa odpipetuje (farba roztoku v jamkách by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú). Potom sa 50 μl prenesie z prvých jamiek do ďalších jamiek v radoch, pričom sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:20 do 1:1280. Na konci titrácie sa z posledných jamiek odoberie 50 μl roztokov.
Pri každom nastavení RPHA je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K +. Na tento účel sa do 8 jamiek dlhého radu pridá 50 ul roztoku PBS. Potom sa do prvej jamky pridá 50 ul pracovného roztoku K+ (1:20), opatrne sa odpipetuje a prenesie do ďalších jamiek, každá po 50 ul, pričom sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:40 do 1:5120.
Na kontrolu diagnostiky na absenciu spontánnej hemaglutinácie sa do všetkých jamiek krátkeho radu pridá 50 ul roztoku PBS.
Do všetkých jamiek (okrem prvých jamiek každého radu pre študované séra obsahujúce RIP) pridajte 25 µl SED. Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút až do úplnej sedimentácie erytrocytov v kontrole.
Účtovanie a interpretácia výsledkov
Účtovanie výsledkov pri skríningu krvných sér
Účtovanie výsledkov sa vykonáva na podmienenej stupnici štyroch krížikov. Sérový titer je jeho riedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu najmenej 3 (+++) kríženiami.
- ++++ (4+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený "dáždnik", jeho okraje odpadávajú;
- +++ (3+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený "dáždnik", jeho okraje sú rovné;
- ++ (2+) - spolu s aglutinovanými erytrocytmi je na dne otvoru sediment vo forme malého "prstence" neaglutinovaných erytrocytov;
- + (1+) - väčšina erytrocytov nie je aglutinovaná a usadzuje sa vo forme malého "krúžku";
- (-) - neaglutinované erytrocyty tvoria „bod“ na dne jamky.
Za pozitívny výsledok sa považuje hemaglutinácia erytrocytov zaťažených Vi-antigénom aspoň 3 kríženiami (+++).
Kontrolou kvality diagnostika sú 4 jamky kontrolného radu, do ktorých bol pridaný len roztok PBS a SED. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa počas re-stagingu objaví hemaglutinácia, potom sa liek nepoužíva.
Séra s negatívnym výsledkom by sa mali považovať za neobsahujúce protilátky proti antigénu Vi s diagnostickým titrom 1:40 a nižším.
Séra, ktoré dávajú pozitívny výsledok pri riedení 1:40, by sa mali znovu vyšetriť vo variante s titráciou séra, aby sa stanovil jeho titer.
Zohľadnenie výsledkov pri titrácii krvných sér
Sérový titer je jeho riedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu najmenej 3 (+++) kríženiami.
Kontrolou kvality diagnostika sú jamky radu na kontrolu SED. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa počas re-stagingu objaví hemaglutinácia, potom sa liek nepoužíva.
Sada reagencií Diagnosticum Salmonella VI-antigenic je určená na detekciu špecifických protilátok proti V-antigénu Salmonella týfusu v ľudskom krvnom sére v reakcii pasívnej hemaglutinácie (RPHA).
VLASTNOSTI SÚPRAVY
2.1. Princíp metódy.
Aktívnou zložkou Diagnosticum Salmonella VI-antigén je V-antigén fixovaný na povrchu erytrocytov. Pri interakcii so sérami obsahujúcimi protilátky proti antigénu Vee sa pozoruje fenomén aglutinácie erytrocytov.
2.2. ZLOŽENIE SÚPRAVY
| Činidlá | Množstvo |
| Diagnosticum erytrocytárna Salmonella V-antigénna kvapalina- predstavuje 1% suspenziu formalinizovaných a senzibilizovaných Vi-antigénom Salmonella týfusových ovčích erytrocytov vo fosfátovom tlmivom roztoku (pH 7,2 + 0,2; koncentrácia 0,06 mol/l). Homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; pri usadzovaní sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant | 1 fľaša - 6 ml |
| Diagnostický sérový receptor salmonely adsorbovaný Vee suchý — homogénna hmota od bielej s hnedastým nádychom až po béžovú | 1 fľaša - od 0,1 ml |
| 1 % suspenzia formalizovaných, nesenzibilizovaných ovčích erytrocytov- homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; pri usadzovaní sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant | 1 injekčná liekovka - |
| Roztok na riedenie séra a nastavenie RPHA - 0,9 % roztok chloridu sodného je číra, bezfarebná kvapalina, pH 6,5 až 7,5 | 2 fľaštičky - každá po 8 ml |
| Doska s okrúhlym dnom na jednorazové imunologické reakcie — pozostáva z 8 radov, z ktorých každý obsahuje 12 otvorov s priehľadným, bezfarebným, okrúhlym dnom | 1 PC |
ANALYTICKÉ A DIAGNOSTICKÉ CHARAKTERISTIKY.
3.1. Diagnosticum by sa malo aglutinovať v RPHA so sérom diagnostického receptora B adsorbovaného na Salmonella suché v riedení aspoň 1:160.
Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra zdravých ľudí by sa mala považovať za zriedenie séra nie vyššie ako 1:20.
3.2. Čas analýzy je 2 hodiny.
3.3. Sada je určená pre 8 definícií.
PREVENTÍVNE OPATRENIA
Pri práci so súpravou by ste mali dodržiavať „Pravidlá pre dizajn, bezpečnostné opatrenia, priemyselnú sanitáciu, protiepidemický režim a osobnú hygienu pri práci v laboratóriách (oddeleniach, oddeleniach) hygienických a epidemiologických zariadení systému ministerstva Zdravie ZSSR (M., 1981).
Analyzované séra, ako aj činidlá, ktoré sú s nimi v kontakte, by sa mali považovať za potenciálne infekčné, schopné dlhodobého skladovania alebo prenosu HIV, vírusu hepatitídy alebo akéhokoľvek iného pôvodcu vírusovej infekcie – treba s nimi zaobchádzať opatrne :
- pracovať v gumených rukaviciach;
- pri pipetovaní je potrebné používať automatické pipety;
- na konci práce by sa analyzované séra a reagencie, ktoré sú s nimi v kontakte, nástroje, mali ošetriť dezinfekčným roztokom
- Utrite zariadenie pred a po práci 70% etylalkoholom.
Analyzované séra sa musia inaktivovať pri 56 °C počas 30 minút.
Diagnostické suché inaktivované sérum Vee adsorbovaného na salmonelu, ktoré je súčasťou súpravy.
Objektívne výsledky analýzy sú zaručené za nasledujúcich podmienok:
- skladovanie všetkých činidiel súpravy by sa malo vykonávať pri teplote 2 až 8 0 С;
- nepoužívajte reagencie po expirácii;
- nepoužívajte činidlá zo súpravy, ak nie sú na obale príslušne označené;
- pre RPHA používajte reagencie len v tejto súprave.
Vi-Diagnosticum
Diagnosticum Vee
Vi-antigénny
