Diagnoza laboratorike e helminthiazave. Metoda për izolimin e një kulture të pastër të Leishmania të marrë nga gërvishtja e indeve patologjike

Metodat e thjeshta

metodë makroskopike. Gjatë ekzaminimit të feces, mund të zbulohen helmintet, kokat e tyre, segmentet, fragmentet e strobilit, të cilat dalin vetë ose pas deworming. Kjo metodë rekomandohet veçanërisht për zbulimin e enterobiazës, taeniazës dhe taeniarinkozës.

Pjesë të vogla të feçeve përzihen me ujë në një banjë të sheshtë ose në një enë Petri dhe, duke parë ndriçim i mirë në një sfond të errët, duke përdorur një xham zmadhues nëse është e nevojshme, hiqni helminthët dhe të gjitha formacionet e dyshimta të bardha me piskatore ose një pipetë. Materiali i mbledhur transferohet në një filxhan tjetër me ujë ose në një rrëshqitje qelqi në një pikë glicerinë të holluar ose zgjidhje izotonike të klorurit të natriumit për studime të mëtejshme.

Në metodën e zbutjes, e gjithë pjesa testuese e feçeve duhet të përzihet me ujë në një cilindër qelqi dhe më pas të kullohet me kujdes. shtresa e sipërme ujë. Kjo përsëritet disa herë. Kur lëngu bëhet transparent, ai kullohet dhe precipitati shikohet në pjesë të vogla në një banjë qelqi ose enë Petri, siç tregohet më sipër.

Metodat mikroskopike janë metoda kryesore e ekzaminimit të feçeve për të zbuluar vezët ose larvat e helminthit. Metoda të ndryshme kërkimore janë përshkruar më poshtë. Për të rritur besueshmërinë e ekzaminimit, analizat mund të përsëriten disa herë në ditë ose me një interval prej 1-3 ditësh.

Metoda e njollosjes amtare. Smearja amtare është më e zakonshme dhe teknikisht metodë e disponueshme studime fekale. Në një njollë amtare, mund të gjenden vezë dhe larva të helminthëve të të gjitha llojeve. Megjithatë, me një numër të vogël vezësh në feces, ato nuk gjenden gjithmonë. Prandaj, studimi i feces vetëm me ndihmën e një njollosje amtare nuk është i plotë dhe duhet të plotësohet me metoda pasurimi. Efikasiteti i ekzaminimit të njollosjes amtare përmirësohet dukshëm kur shikohen katër preparate të përgatitura nga një kampion fekal në dy rrëshqitës xhami pa rrëshqitje mbuluese, gjë që lejon të ekzaminohet një total prej përafërsisht të njëjtë të feces si me metodën Kato (shih më poshtë).

Një sasi e vogël (madhësia e një koke shkrepëse) feçesh të trazuara lyhet hollë me një shkop druri në sipërfaqen e një rrëshqitjeje qelqi në një pikë solucion glicerine 50%. Zakonisht në një gotë përgatiten dy njolla. Njolla shikohet nën një mikroskop me zmadhim të ulët (ob. 8, app. 7). Në raste të dyshimta, mbulohet me një rrëshqitje mbulese dhe ekzaminohet me zmadhim të madh (ob. 40).

Për të përgatitur një njollë të madhe amtare, 200-300 mg feçe (madhësia e një bizele të madhe) bluhen në një gotë 6x9 cm në 15-20 pika të një tretësire ujore 50% të glicerinës. Shikuar nën një mikroskop stereoskopik dylbi (vëll. 4, përafërsisht 12,5 ose vëll. 2, përafërsisht 17) në dritën e transmetuar pa rrëshqitje të mbulesës. Në raste të dyshimta, mund ta përktheni lentet në një zmadhim më të lartë. Në njolla të tilla, vezët e mëdha të helminthit me ngjyrë janë qartë të dukshme, dhe vezët transparente të shiritit pigme janë disi më keq. Kjo metodë nuk është e përshtatshme për zbulimin e vezëve të vogla. Në të njëjtën kohë, një vëllim i madh i materialit të studiuar dhe një fushë e madhe shikimi me një thellësi të madhe fushe sigurojnë një efikasitet të konsiderueshëm të këtij modifikimi në krahasim me një njollë konvencionale vendase.

Smear i trashë celofani (metoda Kato) është më efektiv se ekzaminimi i lyerjes amtare, por gjithashtu duhet të kombinohet me metoda pasurimi. Vezët e të gjitha llojeve të helminthëve zbulohen, megjithatë, për të zbuluar vezët e shiritit pigme (vezë transparente) ose opisthorchis (vezë të vogla), laboratori duhet të jetë veçanërisht i kujdesshëm që të mos i humbasë ato (Fig. 21).

Metoda bazohet në zbulimin e vezëve të helminthit në një njollë të trashë feçesh, të pastruar me glicerinë dhe të lyer me të gjelbër malakit. Celofani hidrofilik pritet paraprakisht në pjata 20 x 40 mm dhe zhytet në një përzierje Kato (6 ml tretësirë ​​ujore 3% të malakitit jeshil, 500 ml glicerinë, 500 ml tretësirë ​​fenoli 6%). 3-5 ml përzierje mjaftojnë për 100 pjata, të cilat janë gati për përdorim në ditë dhe mund të ruhen në të njëjtën përzierje në një enë të mbyllur mirë në temperaturën e dhomës për 6 muaj. Në mungesë të malakitit jeshil (rekomandohet për të zvogëluar lodhjen e syve të asistentit të laboratorit) dhe fenolit (dezinfektues), mund të përdoret vetëm një zgjidhje ujore 50% e glicerinës, efektiviteti i studimit nuk zvogëlohet.

Oriz. 20. Mënyra e përgatitjes së njollosjes së trashë të feçeve me celofan sipas Katos

100 mg jashtëqitje aplikohet në një rrëshqitje qelqi, e mbuluar me një pjatë celofani të trajtuar si më sipër dhe shtypet me një tapë gome në mënyrë që jashtëqitja të mos përhapet nga poshtë celofanit. Mikroskopi me zmadhim të ulët ose të lartë të mikroskopit kryhet jo më vonë se 1 orë (në mot të nxehtë - 30-40 minuta) pas përgatitjes së njollosjes. Arsyeja e patejdukshmërisë së preparatit mund të jetë një shtresë e trashë feçesh, përpunimi i dobët i pllakës në përzierjen Kato, koha e pamjaftueshme e ekspozimit të preparatit nën celofan. Pastrimi i zgjatur me glicerinë dhe tharja e tepërt e preparatit e bëjnë gjithashtu të vështirë zbulimin e vezëve.

Metoda e përdredhjes sipas S.S. Shulman. Metoda u propozua për zbulimin e larvave të helminthit në feces, kryesisht Strongyloid. Ekzaminohen vetëm feçet e sapoekskretuara, 2-3 g prej të cilave transferohen në një kavanoz qelqi, trazohen me një shufër qelqi me lëvizje rrethore me 3-5 herë sasinë e kripës, pa prekur muret e enës. Vezët dhe larvat e helminthëve grumbullohen në qendër. Pas përzierjes, pika në fund të shkopit transferohet shpejt në një rrëshqitës xhami, të mbuluar me një mbulesë dhe të ekzaminohet nën një mikroskop.

metodat e pasurimit. Metodat e pasurimit bazohen në ndryshimin e peshës specifike të vezëve dhe tretësirës së kripës së përdorur, gjë që bën të mundur zbulimin e një sasie të vogël të tyre. Nëse graviteti specifik i vezëve është më i madh se pesha specifike e lëngut, atëherë vezët përqendrohen në sediment, i cili ekzaminohet me mikroskop. Kjo metodë e sedimentimit përdoret për vezët trematode. Me një peshë specifike më të lartë të tretësirës, ​​vezët notojnë në sipërfaqen e lëngut, dhe më pas filmi ekzaminohet. Këto janë metoda të flotacionit (lundrues), ato janë më efektive për zbulimin e vezëve të krimbit të gjilpërës, krimbit të kamxhikut dhe shiritit pigme.

metodat e flotacionit. Metoda Fulleborn bazohet në lundrimin e vezëve të helminthit në një tretësirë ​​të ngopur të klorurit të natriumit, i cili ka një dendësi relative të lartë (1.2), gjë që bën të mundur zbulimin e vezëve me një numër të vogël të tyre. Metoda është më efektive sesa studimi i një njollosje amtare, megjithëse është më e vështirë. Përparësitë e metodës janë liria dhe disponueshmëria. Rekomandohet kombinimi i studimit të njollës amtare dhe metodës Fülleborn.

Një tretësirë ​​e ngopur përgatitet duke tretur 400 g klorur natriumi në 1 litër ujë ndërsa zien. Dendësia relative e tretësirës është 1,18-1,22. Tretësira ruhet në një shishe të mbyllur. Për analizë, 2-3 g feçe vendosen në një kavanoz me vëllim 30-50 ml dhe, ndërsa trazohen me një shkop, një zgjidhje e ngopur e klorurit të natriumit i shtohet pothuajse sipër. Një rrip letre largon shpejt grimcat e mëdha lundruese. Pas 45-60 min. duke u vendosur me një lak teli, hiqni filmin sipërfaqësor dhe transferojeni në një rrëshqitës xhami në një pikë prej 50% zgjidhje ujore gliceroli. Në vend që të hiqni filmin me një lak, mund të shtoni tretësirën në kavanoz në majë, mbulojeni me një rrëshqitje xhami, në sipërfaqen e së cilës ngjiten vezët lundruese. Janë duke u përgatitur disa përgatitje. Për më tepër, 2-4 preparate shihen nga sedimenti, duke e marrë atë me një pipetë me sy në 2 rrëshqitës xhami. Përveç filmit sipërfaqësor, është gjithashtu e nevojshme të ekzaminohet sedimenti, pasi vezët e trematodave, taeniideve, vezëve të pafertilizuara të ascaris nuk notojnë në këtë zgjidhje. Vezët e një numri helminthësh nuk notojnë menjëherë në tretësirën e kripur. Pra, nëse numri maksimal i vezëve të shiritit pigme noton pas 15-20 minutash, atëherë ascaris - pas 1,5-2 orësh, krimbi i kamxhikut - pas 2-3 orësh.

Kështu, avantazhet e kësaj metode përfshijnë koston e lirë dhe disponueshmërinë e saj, disavantazhet janë nevoja për të parë preparatet në filmin dhe sedimentin sipërfaqësor, si dhe kohëzgjatjen e vendosjes.

Metoda e E. V. Kalantaryan është gjithashtu një metodë pasurimi, por është më efikase dhe më e thjeshtë se metoda Fülleborn. Përdoret një zgjidhje e ngopur e nitratit të natriumit me një densitet relativ prej 1.38. Prandaj, vezët e shumicës së helminthëve notojnë lart dhe gjenden në filmin sipërfaqësor; ekzaminimi i sedimentit nuk kërkohet.

Për të përgatitur një tretësirë ​​të ngopur të nitratit të natriumit, 1 kg kripë nitrat natriumi (nitrat natriumi) shpërndahet në 1 litër ujë dhe zihet derisa të tretet plotësisht dhe të formohet një film në sipërfaqe. Pa filtrim, hidheni në një shishe të thatë. Në mungesë të nitratit të natriumit, ai mund të zëvendësohet me nitrat amonit (nitrat amonit), duke tretur 1.7 kg për 1 litër ujë. Dendësia relative e tretësirës që rezulton është 1.3, e cila pakëson efikasitetin në krahasim me tretësirën e nitratit të natriumit.

Përparësitë e metodës: vezët e shumicës së helminthëve dalin shpejt dhe gjenden në filmin sipërfaqësor, gjë që eliminon nevojën për të studiuar sedimentin. Disavantazhet e metodës janë mungesa e nitratit të natriumit, si dhe fakti që vezët trematode, onkosferat taeniide nuk notojnë dhe mbeten në sediment. Duhet të kihet parasysh se me ekspozimin e zgjatur (më shumë se 1-2 orë) të feces në një zgjidhje, vezët e disa helminthëve fillojnë të bymehen dhe vendosen, duke u zhdukur nga filmi sipërfaqësor.

metodat e sedimentimit

Metoda e P. P. Goryachev bazohet në parimin e vendosjes së vezëve. Ngjyrosja në këtë rast është e lehtë, pa papastërti të trashë, gjë që lehtëson zbulimin e vezëve të vogla të trematodave (opisthorkia, etj.). Pesha specifike e vezëve të opisthorch është e lartë, kështu që ato nuk notojnë në solucione të kripura.

70-100 ml tretësirë ​​të ngopur të klorurit të natriumit derdhen në një cilindër me diametër 2-3 cm. Më vete, përzieni tërësisht 0,5 g feçe në 20-25 ml ujë dhe filtroni me kujdes përmes një hinke me dy shtresa garzë në një cilindër mbi kripë, duke shmangur përzierjen (në mënyrë që të formohen dy shtresa të përcaktuara qartë). Pas 2-3 orësh, shtresa e sipërme me feçe thithet me pipetë dhe tretësira e mbetur e kripur lihet të qëndrojë për 12-20 orë ose centrifugohet. Precipitati hidhet me pipetë në një rrëshqitje qelqi, të mbuluar me një mbulesë dhe me mikroskop.

Metoda e Goryachev u propozua për zbulimin e vezëve të opistorkut dhe rezultoi të ishte më efektive se ekzaminimi i njollosjes vendase dhe metoda Fülleborn. Aktualisht, për diagnostikimin e opisthorkiazës (klonorkiazës), rekomandohen metodat e Kato dhe Kalantaryan si mjaft efektive dhe teknikisht më të thjeshta.

Metoda Krasilnikov. Nën veprimin e surfaktantëve që janë pjesë e detergjenteve (detergjentëve), vezët e helminthit lirohen nga feces dhe përqendrohen në sediment.

Një zgjidhje 1% e pluhurit larës Lotus përgatitet paraprakisht. Për ta bërë këtë, 10 g pluhur shpërndahen në 1 litër ujë rubineti. Në mungesë të "Lotus" ju mund të përdorni të tjera pluhurat larës, por secili prej tyre duhet të merret aq sa do të tretet pa formuar një precipitat në 1 litër ujë rubineti. 20-30 ml tretësirë ​​detergjenti hidhet në një enë qelqi me kapacitet 30-50 ml, aty vendoset një pjesë e vogël e jashtëqitjes dhe përzihet mirë. Raporti i feces dhe tretësirës duhet të jetë afërsisht 1:20. Feçet duhet të jenë në tretësirë ​​për të paktën një ditë. Gjatë kësaj kohe, një sediment prej 2-3 shtresash formohet në fund. Shtresa e poshtme përbëhet nga grimca të rënda të trashë, vezët e helminthit mblidhen në shtresën e mesme, shtresa e sipërme është thekon të bardhë-gri. Më pas me një pipetë mblidhen 2-3 pika lëngu nga shtresa e mesme dhe kalohen në një rrëshqitës xhami. Në një gotë përgatiten 2 preparate, të mbuluara me mbulesë dhe të mikroskopuar.

Metoda Krasilnikov ju lejon të zbuloni vezët e të gjitha llojeve të helminthëve të ekskretuara me feces.

Metoda e sedimentimit eter-formalinë dhe metoda e sedimentimit kimik për efikasitet të lartë kërkojnë shumë kohë, sidomos gjatë ekzaminimeve masive, në këtë drejtim është më e leverdishme të përdoret metoda eter-acetike. Ai lejon që pas përpunimit shtesë të sedimentit me reagentë kimikë, praktikisht të përftohen në të vetëm vezët e helminthit, gjë që lehtëson identifikimin e vezëve të vogla trematode. Kjo metodë doli të jetë universale, duke zbuluar vezët e të gjitha helminthëve të zorrëve, cistat e protozoarëve të zorrëve, mund të përdoret gjithashtu për të përcaktuar intensitetin e pushtimit.

Hidhni 7 ml tretësirë ​​10% në tuba të graduar centrifuge. acid acetik dhe shtoni 1 g feçe në shenjën 8 ml. Feçet përzihen tërësisht me një shkop derisa të formohet një përzierje homogjene dhe më pas filtrohet përmes dy shtresave të garzës në një tub tjetër centrifuge (në mënyrë që tubi i ri i tretësirës së filtruar të ketë përsëri 8 ml, nëse më pak, atëherë mund ta shpëlani shtesë. hinka me fashë me tretësirë ​​10% të acidit acetik, përmes të cilit filtrohej tretësira fekale). Në këtë tub shtoni 2 ml eter (deri në pikën 10 ml), mbyllni dhe tundeni fort për 30 sekonda. Përzierja centrifugohet në 3000 rpm për 1 minutë (ose 2 minuta në 1500 rpm). Shtresa mpiksëse (në formë tape në pjesën e sipërme të tubit) ndahet nga muret e tubit me një shkop dhe kullohet me kujdes së bashku me supernatantin. Precipitati (zakonisht i vogël, i pangjyrë) aplikohet në rrëshqitjet e qelqit me një pipetë, të mbuluar me një mbulesë dhe me mikroskop.

Më të thjeshtat ndahen në 4 klasa:

Kur encistohet, mikroorganizmi merr një formë të rrumbullakosur dhe mbulohet me një guaskë mbrojtëse. Në formën e një kisti, protozoarët bëhen më pak të ndjeshëm ndaj faktorëve të pafavorshëm mjedisor.

Hulumtimi mund të përfshijë:

Shënim:Ka shumë lloje të diagnostifikimit, ne do të shqyrtojmë ato lloje që janë më të zakonshmet në praktikën laboratorike klinike.

Llojet private të diagnostifikimit

Në secilin rast specifik, asistenti i laboratorit ka për detyrë të gjejë një patogjen specifik, ndonjëherë të tjerët gjenden së bashku me atë kryesor.

Ekzistojnë 6 lloje të këtij mikroorganizmi të aftë për të jetuar në zorrën e njeriut. Rëndësi klinike ka vetëm ameba e dizenterisë, e cila shfaqet në formë vegjetative dhe në formën e kisteve.

Për më tepër, përdoren metoda imunologjike:

• imunofluoreshencë indirekte;
• aglutinimi indirekt (PHA);
• imunodifuzion radial.

Shënim: metodat serologjike janë joinformative dhe përdoren vetëm si shtesë e atyre kryesore në raste të dyshimta.

Diagnoza e ciliare (ciliates)

Forma patogjene e mikroorganizmave të kësaj gjinie është balantidia. Ky është një mikrob që shkakton balantidiasis - një sëmundje e shoqëruar nga një proces ulceroz i zorrës së trashë. Agjenti shkaktar gjendet në një njollë amtare në formën e një forme vegjetative dhe një kist. Materiali për njollosjen (feçet dhe mukozën) merret gjatë ekzaminimit të sigmoidoskopisë dhe mbillet në media speciale.

Diagnostifikimi i flagjelatave (leishmania, giardia, tripanozomet, trikomonadat)

Leishmania, trypanosoma, giardia, trichomonads janë të rrezikshme për njerëzit.

Leishmania- mikrobet duke shkaktuar leishmaniozë, ekzaminohen në strishat e gjakut, materialet palca e eshtrave, gërvishtjet nga infiltratet e lëkurës. Në disa raste, në diagnozën e Leishmania, përdoret mbjellja në mjedise ushqyese.

Tripanosomet- Agjentët shkaktarë të sëmundjes së gjumit (tripanosomiaza Amerikane/Afrikane, ose sëmundja Chagas).

Varianti afrikan përcaktohet në periudhën fillestare në studimin e gjakut periferik. Mikrobet patologjike gjatë përparimit të sëmundjes gjenden në materialin e shpimeve të nyjeve limfatike, në faza të avancuara - në lëngun cerebrospinal.

Për të diagnostikuar tripanozomet në rast të dyshimit të sëmundjes Chagas, materiali i provës ekzaminohet nën një mikroskop me zmadhim të ulët. Në këtë rast, njollat ​​dhe një pikë e trashë janë para-njollosur.

Trichomonas(intestinale, orale) zbulohen me mikroskop të materialeve të marra nga mukozat e prekura.

Identifikimi i sporozoanëve (plazmodiumi i malaries, agjenti shkaktar i kokcidozës, etj.)

Lloji më i zakonshëm dhe i rrezikshëm për njerëzit është plazmodiumi i malaries, i cili ka 4 lloje kryesore të patogjenit: agjentin shkaktar të malaries tre-ditore, malaries katër-ditore, malaries tropikale dhe malaries ovale.

Zhvillimi seksual i Plasmodiumit (sporogoni) zhvillohet te mushkonjat Anopheles. Aseksual (skizogonia e indeve dhe eritrociteve) - në indet e mëlçisë dhe eritrocitet e njeriut. Këto veçori cikli i jetes duhet të merret parasysh në diagnostikimin e plazmodiumit të malaries.

Pra, në gjakun e një pacienti të sapo sëmurë mund të gjenden qeliza germinale të ciklit sporogoni. Por në kulmin e sulmeve të malaries, skizontet shfaqen në numër të madh në gjak.

Për më tepër, në faza të ndryshme të etheve malariale, shfaqen forma të ndryshme të plazmodiumit:

• gjatë periudhës së të ftohtit, gjaku mbushet me merozoite, një lloj skizonti;
• në lartësinë e temperaturës, trofozoitët në formë unaze grumbullohen në eritrocite;
• ulja e temperaturës karakterizohet nga mbizotërimi i trofozoitëve amoeboid;
• gjatë periudhave të gjendjes normale, gjaku përmban forma të rritura të skizonteve.

Studimi i agjentit shkaktar të malaries (plazmodiumi i malaries) kryhet në një njollë dhe në një pikë të trashë.

Shënim:diagnoza e malaries në studimin e njollave dhe pikave të trasha të gjakut ndonjëherë është e gabuar. Trombocitet e gjakut në disa raste mund të klasifikohen gabimisht si patogjen i malaries. Gjithashtu, fragmente të leukociteve dhe qelizave të tjera ndonjëherë simulojnë plazmodiumin.

Metodat themelore të kërkimit për protozoarët

Le të hedhim një vështrim të shkurtër në metodat më të zakonshme të kërkimit për praninë e protozoarëve.

Diagnoza e protozoarëve duke përdorur një njollë amtare dhe një njollë të lyer me tretësirën e Lugol (në feces)

Ilaçi përgatitet nga një emulsion i feces në një zgjidhje izotonike. Dy pika të klorurit të natriumit dhe tretësirës së Lugolit aplikohen në një rrëshqitje xhami. Materiali i provës u shtohet të dyja kompozimeve me një shkop druri dhe pasi mbulohet me xham, shikohet me rezolucione të ndryshme të mikroskopit.

Sipas shenjave të caktuara, protozoarët e gjetur janë të regjistruar. Për saktësi, nga një material përgatiten 2-3 preparate. Në raste të dyshimta, analiza përsëritet disa herë gjatë 2-3 javëve.

Metoda mund të zbulojë format vegjetative dhe cistike:

• lamblia;
• balantidia;
• ameba dizenterie.

Së bashku me format patogjene përcaktohen edhe protozoarët jopatogjenë. Transportuesit e shëndetshëm kanë gjithashtu forma luminale dhe cistike.

E rëndësishme:kërkimet për të shmangur pasaktësitë dhe gabimet duhet të kryhen në mënyrë të përsëritur.

Rezultati i diagnozës së protozoarit me metodën e një njollosje amtare dhe të njollosur duhet të përmbajë një përshkrim të formës së patogjenit (të tejdukshëm, kist, ind).

Kërkesat e kërkimit:

• materiali i marrë për analizë (feçet e lëngshme) ekzaminohet jo më vonë se 30 minuta pas defekimit;
• feçet e formuara duhet të diagnostikohen brenda 2 orëve pas defekimit;
• materiali nuk duhet të përmbajë papastërti (dezinfektues, ujë, urinë);
• vetëm shkopinj druri përdoren për të punuar me materialin, ato prej qelqi nuk janë të përshtatshme për shkak të rrëshqitjes së mukusit;
• Shkopinjtë duhet të digjen menjëherë pas përdorimit.

Metoda e konservimit (ekzaminimi i feçeve) në diagnostikimin e protozoarëve

Studimi kryhet duke fiksuar protozoarët me një konservues. Dallimi midis kësaj metode dhe asaj të mëparshme është se konservantët ju lejojnë të ruani ilaçin për një periudhë të gjatë.

Konservues të përdorur:

• Barrow. Përmban përbërës konservues: 0,7 ml klorur natriumi, 5 ml formalinë, 12,5 ml alkool 96%, 2 g fenol dhe 100 ml ujë të distiluar. Përbërja e ngjyrosjes: 0.01% tretësirë ​​e tioninës (azure).
• Zgjidhja e Safarliev. Përbërja: 1,65 g sulfat zinku, 10 ml formalinë, 2,5 g fenol kristalor, 5 ml acid acetik, 0,2 g blu metilen, 100 ml ujë. Ky konservues përdoret në rastet kur materiali duhet të ruhet për më shumë se një muaj.

Shishet e zbrazëta mbushen me një ruajtës, materiali transferohet në to, në përmasa 3: 1, pastaj, nëse është e nevojshme, shtohet një bojë. Vlerësimi i rezultateve kryhet në studimin e 2-3 barnave.

Metoda e pasurimit të formalinës me eter (analizë për praninë e protozoarëve në feces)

Kjo metodë diagnostike ju lejon të veçoni dhe përqendroni kistet protozoare. Për analizë nevojiten përbërësit e mëposhtëm: formalinë (10 ml), 0,85 g tretësirë ​​izotonike, ujë të distiluar, eter sulfurik, zgjidhje Lugol.

Një përzierje e biomaterialeve me lëngjet e listuara përzihet dhe centrifugohet. Precipitati i përftuar në fund të tubit lyhet me tretësirën e Lugolit dhe ekzaminohet për praninë e cisteve dhe formave vegjetative.

Metoda e zbulimit të leishmanisë (njollosja e palcës së eshtrave)

Për diagnozën e leishmaniozës përdoren reagentë: një përzierje e Nikiforov (eter sulfurik dhe etanol), tampon fosfat, Azur-eozin sipas Romanovsky.

Substanca e palcës së eshtrave vendoset me shumë kujdes në një rrëshqitës xhami pas përgatitjes speciale. Përdoret një mikroskop me një sistem zhytjeje.

Në periudhën akute të sëmundjes, një numër i madh i Leishmania gjendet në pikën.

Shënim:Ndonjehere qelizat e gjakut mund të ngjajë me leishmaninë e përpunuar, ndaj është shumë e rëndësishme që laboranti të jetë i vëmendshëm dhe të ketë përvojë të mjaftueshme për vetëekzaminim.

Metoda për zbulimin e leishmanisë në një njollë nga një infiltrate e lëkurës

Reagentët e kërkuar janë të ngjashëm me analizën e mëparshme.

Materiali i provës është marrë nga përmbajtja ekzistuese e tuberkulozit ose ulçerozës. Skrapi me dyshimin për leishmaniozë bëhet me shumë kujdes me bisturi, pa gjak. Më pas preparati përgatitet në gotë. Për saktësinë e rezultateve të marra, ekzaminohen njëkohësisht disa përgatitje.

Në prani të një sëmundjeje, midis makrofagëve, fibroblasteve dhe qelizave limfoide të pranishme në materialin e testimit, përcaktohet edhe Leishmania.

Metoda për izolimin e një kulture të pastër të Leishmania të marrë nga gërvishtja e indeve patologjike

Me këtë metodë të diagnostikimit, gërvishtjet më të thjeshta të indeve vendosen në një speciale medium ushqyes, në të cilën ndodh riprodhimi aktiv i Leishmania.

Para marrjes së kruarjes, lëkura trajtohet me kujdes me alkool, më pas bëhet një prerje në tuberkuloz, nga fundi i së cilës hiqet përmbajtja dhe vendoset në një provëz me mediumin. Materiali merret disa herë, pas së cilës vendoset në epruveta të ndryshme. Më pas, në një termostat në një temperaturë prej 22-24 gradë, bëhet kultivimi. Rezultatet vlerësohen nën një mikroskop. Kjo metodë përdoret kur metodat e tjera, më të lira dhe më të shpejta të diagnostikimit të protozoarëve janë joefektive.

Ju mund të shihni se si testet për praninë e protozoarëve deshifrohen në praktikë nga një pikë gjaku duke shikuar një përmbledhje video:

Lotin Alexander, kolumnist mjekësor

Metodat hulumtim helmintologjik e ndarë në të drejtpërdrejtë dhe të tërthortë. Metodat e drejtpërdrejta: zbulimi i vetë helminthëve, fragmentet e tyre, vezët, larvat në feces, urinë, sekretimin duodenal, pështymë, mukozën e hundës dhe vaginale, përmbajtjen e hapësirave subunguale, copa të indeve të biopsuara. Metodat indirekte: zbulimi ndryshimet dytësore që lindin në trupin e njeriut si rezultat i aktivitetit jetësor të parazitit, reaksioneve serologjike, kërkime të përgjithshme gjaku, urina. Metodat më të zakonshme për ekzaminimin e feçeve janë helmintoovoskopike dhe protozooskopike. Gjatë diagnostikimit, është e pamundur të identifikohen me asnjë metodë vezët ose larvat e të gjitha llojeve të helminthëve që jetojnë në sistemi i tretjes person. Kështu, kur përdoret metoda e flotacionit, vezët trematodë dhe, në disa raste, vezët e krimbave të pafertilizuara nuk notojnë në filmin sipërfaqësor (për shkak të gravitetit të lartë specifik). Në feçe, është shumë e rrallë të gjesh vezë të krimbave, onkosfera teniide, të cilat zbulohen me metoda të veçanta kërkimore: gërvishtje nga palosjet perianale për krimbat e gjilpërave dhe teniidet, metodat e sedimentimit për trematodat (vezë opistorku, etj.). Prandaj, për një ekzaminim të synuar të pacientit për helminthiazat, mjeku në referim duhet të tregojë se cilat helminthëve duhet t'i kushtohet vëmendja kryesore (diagnoza), e cila do t'i lejojë asistentit të laboratorit të zgjedhë teknikën e duhur për identifikimin e këtij lloji helminth. Feçet e marra nga vende te ndryshme feçet në një sasi prej të paktën 50 gram (lugë çaji) në një enë qelqi të pastër duhet të dërgohen në laborator jo më vonë se një ditë pas defekimit dhe të ekzaminohen në ditën e pranimit. Nëse është e nevojshme, ruani feçet deri në diten tjeter vendoset në vend të ftohtë (0-4°C) ose mbushet me një nga konservantët. Para studimit, feçet përzihen me një shkop në mënyrë që vezët e helminthit të shpërndahen në mënyrë të barabartë në masë totale. Nëse në preparat gjenden ndonjë vezë helminti, shikimi nuk ndërpritet, sepse. mund të jetë pushtim i dyfishtë ose i trefishtë. Monitorimi i efektivitetit të trajtimit të helminthiasis kryhet duke ekzaminuar feces për vezë helminth në 2-3 javë ose 2-3 muaj pas trajtimit, në varësi të helminthit të zbuluar. Metodat makroskopike përdoren për të zbuluar helminthë të tëra seksualisht të pjekur ose fragmente të tyre në feces me sy të lirë ose me një xham zmadhues me dorë. Shpesh në sipërfaqen e feçeve pas defekimit, mund të shihni krimba që zvarriten në mënyrë aktive; ekskretohet me feces krimb të rrumbullakët; ndonjëherë vetë njerëzit vërejnë shkarkimin e helminthëve. Në pacientët me diphyllobothriasis mund të bien në sy fragmentet e strobilusit të shiritit (në formën e "petëve"), dhe tek ata të infektuar me teniide (krimb derri ose gjedhi), segmente helminthësh (në formën e "prerjeve të bardha" ) shpesh lënë feces (në formën e "prerjeve të bardha") ose ato zvarriten në mënyrë aktive nga anusi. Metoda makroskopike është ajo kryesore për diagnozën diferenciale të teniadozës dhe teniarhinkozës (në kombinim me një studim). Nga metodat e veçanta makroskopike, përdoret metoda e larjes sekuenciale të feçeve. Feçet përzihen në ujë për të marrë një pezullim uniform, pas së cilës, nën ndriçim të mirë, ato ekzaminohen me kujdes në pjesë të vogla të veçanta në kuveta fotografike të zeza ose në një sfond të errët në enët Petri. Me piskatore ose një gjilpërë disektuese, të gjitha grimcat e dyshimta të bardha, formacionet e mëdha të dyshimta për fragmente helminte hiqen dhe ekzaminohen nën një xham zmadhues midis dy rrëshqitjeve të qelqit. Helmintet e vogla ose kokat e cestodave ekzaminohen nën një xham zmadhues në një pikë glicerinë ose nën një mikroskop. Kur përdoret kjo metodë për diagnostikimin e segmenteve të mishit të derrit, shiritit të gjedhit, shiritit të gjerë, segmentet e lara vendosen midis dy gotave dhe, duke parë dritën nën një xham zmadhues ose një mikroskop me zmadhim të ulët, përcaktojnë speciet nga struktura e mitra (në një segment të pjekur shirit derri 8-12 degë anësore largohen nga trungu qendror, dhe në shiritin e gjedhit 18-32, më shpesh 28-32, në një shirit të gjerë, segmentet janë më të gjera dhe mitra është në qendër në formën e një "rozete" ). Nëse mitra është dobët e dukshme, atëherë së pari mund të mbahet për ca kohë në një zgjidhje glicerine 50%, pas së cilës edhe trungjet e shkreta të mitrës janë qartë të dukshme. Gjatë përcaktimit të këtyre cestodave nga struktura e kokave të shkëputura, ato vendosen me kujdes me një qafë në një pikë gliceroli midis rrëshqitjeve të qelqit (ose mbulohen me një mbulesë) dhe, pa shtrydhur, ekzaminohen nën një mikroskop me zmadhim të ulët.

Metodat mikroskopike ndahen në të thjeshta, komplekse dhe të veçanta.

Metodat e thjeshta përfshijnë njollosjen amtare, lyerjen amtare me tretësirën e Lugolit, njollosjen e trashë nën celofan sipas Kato, përdredhjen (sipas Shulman) dhe skrapimin perianal.

Metodat komplekse janë më efikase dhe bazohen në përqendrimin e vezëve në preparate. Ato përfshijnë para-trajtimin e feçeve me reagentë të lëngshëm, si rezultat i të cilave vezët e helminthit ose precipitojnë ose notojnë në sipërfaqen e lëngut.

TE metoda komplekse Metodat e pasurimit përfshijnë:

a) flotacioni (kur graviteti specifik i vezëve është më i vogël se pesha specifike e tretësirës së kripur dhe vezët notojnë në filmin sipërfaqësor);

b) sedimentimi (kur pesha specifike e vezëve është më e madhe se pesha specifike e tretësirave të kripës dhe vezët vendosen në sediment).

Metoda të veçanta për zbulimin e vezëve dhe larvave të helminthëve, kisteve dhe formave vegjetative të protozoarëve janë metodat e skrapimit, flotimit, sedimentimit, larvoskopisë, protozooskopisë, studimi i tëmthit dhe metodat e ngjyrosjes së njollave të feçeve, pështymës etj.

Marrja e mostrave dhe konservimi

Për kërkime, feçet merren nga vende të ndryshme në porcione prej 50 g dhe dërgohen në laborator në një enë të pastër qelqi ose plastike me kapak të ngushtë. Ekzaminohen jashtëqitjet e freskëta (jo më shumë se një ditë e vjetër), dhe në disa raste (në studimin për strongjiloidiasis) menjëherë pas defekimit. Janë propozuar një numër konservues për feçet që përmbajnë vezë helminte: tretësirë ​​4-10% formalinë, e cila duhet të nxehet në t° 50-60° për të parandaluar zhvillimin e vezëve të krimbave të gremisit; një përzierje prej 0,2% tretësirë ​​ujore të nitratit të natriumit (1900 ml), tretësirës së Lugolit (5 g jod, 10 g jodur kaliumi, 250 ml ujë), formalinës (300 ml) dhe glicerinë (25 ml), në të cilën helminth vezët ruhen 6-8 muaj; një përzierje e glicerinës (5 ml), formalinës (5 ml) dhe ujit (100 ml); zgjidhje të detergjenteve 1-1,5% "Lotus", "Extra", "Barf", "Tide", etj. (në një raport peshe të feçeve dhe tretësirës së detergjentit 1: 5); një përzierje e mertiolatit 1: 1000 (200 ml), formalinës (25 ml), glicerinë (5 ml), ujit të distiluar (250 ml) me shtimin e 0,6 ml tretësirë ​​Lugol (bazuar në 1 g feces për 10 ml përzierje).

Për diagnozën e helminthiazave përdoren metoda makro dhe mikrohelmintoskopike për ekzaminimin e feces.

Studimet e makrohelmintoskopisë

Mënyra e zgjidhjes

Pjesa ditore e feçeve përzihet tërësisht me 5-10 herë sasia e ujit, derdhet në cilindra prej xhami të lartë (kavanoza, kova) dhe lihet derisa grimcat e pezulluara të vendosen plotësisht. Shtresa e sipërme me re kullohet me kujdes dhe sipër shtohet ujë i pastër (përsëriteni disa herë derisa uji mbi sediment të bëhet transparent). Pasi të keni kulluar shtresën e sipërme, transferojeni precipitatin në një kuvetë ose enë Petri dhe shikoni atë (në një sfond të errët) nën një xham zmadhues ose me sy të lirë.

Metoda e shqyrtimit

Feçet e përziera me ujë vendosen në sitën e sipërme të pajisjes, e përbërë nga një sistem sitash me vrima me diametër në rënie, pajisja lidhet me rrjetin e ujësjellësit dhe, duke hapur rubinetin e ujit, lahet dhe lëngu që rrjedh. derdhet në kanalizim. Helmintet e mëdha mbeten në sitën e sipërme, ndërsa ato më të voglat qëndrojnë në ato të poshtme. Sitat kthehen dhe, pasi kanë larë përmbajtjen në kuveta të errëta, ato shikohen me sy të lirë ose nën një xham zmadhues.

Studimet e mikrohelmintoskopisë

Ajo kryhet me qëllim zbulimin e vezëve (metodat helminto-ovoskopike - ngjyra. Fig. 1) ose larvat e helminthit (metodat helminto-larvoskopike).

Metodat helmintoovoskopike

Metoda cilësore pa pasurim

njollosje amtare. Një sasi e vogël feçesh triturohet në një rrëshqitës xhami në një pikë solucion gliceroli 50% ose ujë të zier. Grimcat e mëdha hiqen me kujdes, përzierja mbulohet me një mbulesë dhe ekzaminohet nën mikroskop (shihen dy njolla). Është më i përshtatshëm dhe më i lehtë për të përgatitur njolla të gjata midis dy rrëshqitjeve të xhamit. Smear-i vendas përdoret vetëm krahas metodave të pasurimit, pasi nuk është mjaft efektiv, veçanërisht me pushtime të dobëta.

Lyhet e trashë me celofan sipas Katos(K. Kato, 1954) është shumë metodë efektive kërkimore. Copat e celofanit hidrofil (4x2 cm në madhësi) ngjyhen për 24 orë në një përzierje gliceroli (50 ml), tretësirë ​​6% fenol (500 ml) dhe tretësirë ​​ujore 3% (6 ml) malakiti jeshil (kjo e fundit është opsionale. ). NE RREGULL. 100 mg feçe lyhen në një rrëshqitës xhami dhe, mbulohen me një copë celofan të lagësht, shtypen me një tapë gome nr. 5. Ilaçi ekzaminohet pas 30-60 minutash, kur thahet pak dhe pastrohet, si rezultat i së cilës vezët e helminthit zbulohen lehtësisht nën një mikroskop me zmadhim të ulët.

Metodat cilësore me pasurim (metodat lundruese dhe të vendosura)

Të parat bazohen në përdorimin e solucioneve të ngopura të kimikateve të ndryshme. substanca në të cilat vezët notojnë për shkak të ndryshimit në peshën specifike.

Metoda Kofoid-Barber(Ch.A. Kofoid, M. A. Barber) modifikuar nga Fulleborn (F. Fulleborn, 1920). NE RREGULL. 5 g feçe në një kavanoz të gjatë dhe të ngushtë (vëllimi 100 ml) përzihen me një shkop druri në 100 ml tretësirë ​​të ngopur. kripë tryezë, ud. pesha to-rogo 1,18 (400 gr kripe treten ne momentin e zierjes ne 1 l uje). Grimcat e mëdha që kanë dalë në sipërfaqe hiqen shpejt me një shkop ose një copë letre. Pasi të vendoset përzierja për 45-90 min. një lak teli (0,8-1 cm në diametër) heq të gjithë filmin sipërfaqësor, e transferon atë në një rrëshqitje xhami. Gjatë testimit të vezëve të krimbit të grespit, përzierja lihet të qëndrojë për 10-15 minuta. Ju mund ta hiqni filmin drejtpërdrejt me një rrëshqitje xhami, e cila mbulon kavanozin në mënyrë që të vijë në kontakt me lëngun (një zgjidhje e ngopur e kripës shtohet në skajet e kavanozit). Pas vendosjes, rrëshqitja hiqet, kthehet shpejt dhe ekzaminohet nën një mikroskop (pa një rrëshqitje mbuluese) një film me vezë helminth që ngjiten në të. Kjo metodë zbulon mirë vezët e të gjitha nematodave dhe krimbit pigme. Vezë të rënda trematode; shumica e cestodëve dhe krimbave të rrumbullakët të pafertilizuar notojnë dobët, kështu që edhe sedimenti ekzaminohet. Për ta bërë këtë, pas heqjes së filmit, lëngu nga kavanozi kullohet shpejt dhe merren disa pika nga sedimenti me një lak ose pipetë, transferohen në një rrëshqitje xhami, shtohet një pikë glicerinë për sqarim dhe ekzaminohen nën mikroskop.

Metoda E. V. Kalantaryan(1938) Është një modifikim më efikas i metodës Fülleborn. Në të, tretësira e klorurit të natriumit zëvendësohet nga një zgjidhje e ngopur e nitratit të natriumit, sp. pesha to-rogo 1.39 (një vëllim nitrat natriumi tretet në një vëllim të barabartë uji gjatë zierjes), filmi hiqet pas 20-30 minutash.

Aplikohen edhe metodat e Faustit (E. S. Faust, 1939), Brudastov et al. (1970) dhe të tjerë.

Për depozitimin e vezëve të helminthit, përdoret një kimikat. substanca që shpërndajnë yndyrnat dhe proteinat në feces.

Metoda e Telemann (W. Telemann, 1908) e modifikuar nga Miyagawa (Y. Miyagawa, 1913). NE RREGULL. 5 g feçe grihen në një llaç ose kavanoz, duke shtuar 5 ml eter etil dhe tretësirë ​​50% të acidit klorhidrik; përzierja filtrohet përmes një sitë teli ose flokësh në një provëz dhe centrifugohet. Në epruvetën formohen tre shtresa: në krye - eter me yndyrë të tretur, poshtë - acid klorhidrik me substanca proteinike të tretura, në sediment - pjesë të pazgjidhshme të feçeve dhe vezëve të helminthit. Shtresat e sipërme kullohen dhe uji i shtohet sedimentit dhe centrifugohet. Disa pika të precipitatit transferohen në një rrëshqitës xhami dhe ekzaminohen nën një mikroskop. Kjo metodë mund të zbulojë vezët e të gjitha llojeve të helminthëve, por ato ndonjëherë deformohen.

Metoda Ritchie (L. S. Kitchie, 1948). Për të shpërndarë yndyrnat dhe proteinat, përdoren formalina dhe eteri.

Për depozitimin e vezëve të helminthit, mund të përdoren detergjentë të ndryshëm. Jashtë vendit është përhapur metoda e filtrimit në pajisjet speciale Bell, e cila përdoret për të studiuar jo vetëm feçet, por edhe urinën, gjakun etj.

Ka një sërë metodash që kombinojnë parimet e flotacionit dhe vendosjes së vezëve. Ndër to dallohen metodat e Lane (C. A. Lane), Rivas (D. Rivas), Gorkina, Darling (S. T. Darling). Një nga këto metoda flotacion-sedimentimi, si dhe metoda e shkarkimeve të njëpasnjëshme, u propozua nga N.V. Demidov (1963, 1965) për testimin e fashioliazës dhe dikroceliozës.

Metodat sasiore

Metoda Stoll(N. R. Stoll, 1926). Në një epruvetë ose balonë të gjerë të shkallëzuar (me dy shenja: 56 dhe 60 ml), tretësira decinomale e hidroksidit të natriumit derdhet deri në pikën e parë, shtohen jashtëqitjet derisa niveli i lëngut të arrijë pikën e dytë, përzihet tërësisht me një shufër qelqi dhe , duke vendosur 10 rruaza qelqi ose guralecë të vegjël, mbyllni dhe tundni për 1 min. Shpejt, në mënyrë që suspensioni të mos vendoset, 0,075 ml përzierje (0,005 g feçe) mblidhet me një pipetë të graduar, transferohet në një rrëshqitës xhami me një rrjetë të aplikuar mbi të, e mbuluar me një rrëshqitje mbuluese dhe vezët e helminthit në preparatet numërohen nën mikroskop; duke shumëzuar numrin që rezulton me 200, merrni numrin e vezëve në 1 g feces. Për një rezultat më të saktë, vezët numërohen në dy ose më shumë preparate dhe merret një mesatare. Metoda Stoll është e pandjeshme ndaj pushtimeve të dobëta. Prandaj, rekomandohet të numëroni numrin e vezëve në përgatitjet e përgatitura metoda të ndryshme flotacion ose sedimentim, që i nënshtrohet përdorimit të vazhdueshëm të një kampioni të barabartë feçesh dhe enësh me të njëjtin vëllim. Përdoret gjithashtu një njollë e trashë Kato.

Metoda e kastorit(R. C. Beaver, 1950). Përgatitet një njollë standarde, dendësia e së cilës përcaktohet duke përdorur një elektrofotometër, dhe më pas të gjitha vezët e helminthit numërohen në të.

Metodat helmintolarvoskopike

Metoda Bermann(G. Baermann, 1917). 5-10 g feçe të sapoekskretuara vendosen në një rrjetë metalike në një gyp qelqi, në skajin e ngushtë të së cilës vendoset një tub gome me një kapëse. Për të shmangur kontaminimin e sedimentit me grimca fekale, rekomandohet vendosja (në rrjetë) e letrës ose shtimi i qymyrit të kafshëve ose miell misri në feces. Hinka mbushet me ujë të ngrohtë (t ° 45-50 °) derisa të bjerë në kontakt me feces. Për shkak të termotropisë, larvat lëvizin në mënyrë aktive në ujë të ngrohtë dhe gradualisht grumbullohen në pjesën e poshtme të hinkës, sipër kapëses. Pas 3-4 orësh hapet kapëse, lëngu ulet në 1-2 epruveta, centrifugohet për 2-3 minuta, kullohet shtresa e sipërme dhe precipitati ekzaminohet në një rrëshqitës xhami nën mikroskop.

Metoda për zbulimin e shistozomeve miracidia. Feçet lahen në errësirë ​​në 8-10°, sedimenti mbahet për 45 minuta. në dritë të ndritshme në t ° 28 °, më pas hidheni në një balonë të errët me një tub në anë. Miracidet janë të përqendruara në një tub anësor transparent nga ku mund të zgjidhen.

Metodat e Fülleborn-it dhe të tjerëve përdoren gjithashtu për të zbuluar larvat e krimbit të gjirit.

Metodat për studimin e sekrecioneve të tjera, si dhe indeve dhe organeve

NE RREGULL. 100 ml urinë testuese qëndrojnë për 30 minuta. në një cilindër dhe, pasi të keni hequr shtresën e sipërme, derdhni 10-15 ml sediment në një provëz, centrifugoni me 1500 rpm për 1-2 minuta; shqyrtohet sedimenti. Këshillohet që të mblidhet e gjithë pjesa ditore e urinës.

Shistozomiaza urogjenitale diagnostikohet duke identifikuar miracidia. Një pjesë e urinës së freskët centrifugohet për 5 minuta, sedimenti derdhet në një balonë me ngjyrë të zezë, një tub qelqi transparent ngjitet në pjesën e sipërme të prerjes. Uji shtohet në një raport 1:5, 1:10 dhe vendoset për 2 orë në një termostat në t ° 25-30 °. Miracidet që dalin nga vezët janë të dukshme përmes një tubi transparent me sy të lirë në formën e pikave që lëvizin me shpejtësi. Në hron, forma e skistozomiazës tek pacientët ndahet në fund të urinimit të gjakut, por vezët në urinë gjenden rrallë, prandaj rekomandohet të bëhet një biopsi e fshikëzës.

Ekzaminimi i pështymës. Pështyma mund të përmbajë vezë paragonimus, shistozome, tominks, larva nematodash migratore, fragmente të fshikëzës ekinokoke. E gjithë pjesa e shpërndarë e pështymës ekzaminohet me kujdes me sy të lirë ose nën një xham zmadhues, zgjidhen dhe ekzaminohen të gjitha mbetjet e dukshme të indit, grupimet me ngjyrë ndryshku, etj.; pastaj shikoni të gjithë pjesën me goditje. Pështymë purulente derdhni një sasi të barabartë prej 0,5% tretësirë ​​alkali kaustike, centrifugoni dhe ekzaminoni precipitatin.

Me disa helminthiaza në pështymë, ka ndryshime karakteristike. Me paragonimiazë, për shembull, në sputum, mund të gjenden grupe vezësh në formë gunga të verdhë, si dhe një sasi e madhe mukusi, leukocitesh, eritrocitesh, qeliza alveolare, spiralet e Kurschmann-it, fibra elastike, kristalet Charcot-Leiden. Zbulohen gjithashtu kristale romboide karakteristike me skaje të theksuara. Disponueshmëria një numër i madh eozinofilet mundësojnë diferencimin e paragonimiazës nga tuberkulozi.

Ekzaminimi i përmbajtjes së absceseve dhe pikave. NË sekrecionet purulente absceset, si dhe në tumoret dhe cistat e hequra gjatë operacionit, mund të gjeni helminthë, fragmente të tyre, larva dhe vezë (ekinokoku, alveokok, sparganum, cysticercus, dirofilaria, krimbat e rrumbullakët, toksokara, paragonimus, etj.). Teknika e hulumtimit është e zakonshme; në disa raste, seksionet histologjike përgatiten nga indet tumorale. Përmbajtja purulente mund të përpunohet me metodën Telemann; lëngu i pastër ekzaminohet në të njëjtën mënyrë si përmbajtja duodenale duke shtuar eter sulfurik. Lëngu ekinokokal centrifugohet dhe sedimenti ekzaminohet për praninë e skolekseve dhe grepave; preparatet lyhen me karbolfuksin sipas Ziehl-Nelsen.

Studimi i gjakut. Mikrofilariet dhe larvat e nematodave migratore gjenden në gjak. Një pikë gjaku merret nga gishti ose nga llapa e veshit dhe ekzaminohet i freskët ose bëhen preparate prej tij.

Një pikë gjaku vendoset në një rrëshqitës xhami me një katror vazelinë të aplikuar dhe shtypur lehtë me një rrëshqitës mbulese. Nën një mikroskop, mikrofilariet shihen duke lëvizur midis qelizave të gjakut. Gjaku mund të vendoset midis dy shtresave të shiritit ngjitës celuloz; mikrofilariet mbeten të lëvizshme për 6 orë; në një preparat plotësisht të tharë, ato mund të dallohen me mikroskop brenda 30 ditëve. Speciet e mikrofilarisë mund të identifikohen vetëm në njolla me njolla ose pika të trasha. Preparatet e përgatitura thahen, hemolizohen dhe ngjyrosen sipas Romanovsky - Giemsa, Wright, Ziehl-Nelsen, Leishman, Papanicolaou (shih metodën e ngjyrosjes Wright, metodën Romanovsky-Giemsa, metodën Ziehl-Nelsen). Pasi ka gjetur mikrofilarie në një pikë gjaku të njollosur sipas Romanovsky-Giemsa, preparati lyhet gjithashtu me hematoksilinën e Hansen; pas 15-60 min. larë 2 min. në ujë të rrjedhshëm. Preparati i rilyer diferencohet në tretësirë ​​të acidit klorhidrik 0,2%; kapaku i mikrofilarieve kthehet në vjollcë të zbehtë dhe substanca bërthamore e trupit kthehet në vjollcë të errët.

Për pushtimet e dobëta, është e nevojshme të ekzaminohen 2-10 akullnajat me një antikoagulant (për shembull, me një zgjidhje 5% citrat natriumi) duke përdorur një nga metodat e mëposhtme.

Metoda e Knott (J. Knott, 1939), modifikuar nga Markell dhe Foge (E. K. Markell, M. Voge, 1965). 2 ml gjak përzihet në një tub centrifuge me 10 kuti me acid acetik 1%, centrifugohet për 2 minuta. në 1500 rpm; shtresa sipërfaqësore i kulluar, precipitati shpërndahet në disa rrëshqitës xhami dhe ekzaminohet në mikroskop. Përgatitjet mund të njollosen sipas Romanovsky-Giemsa ose metodave të tjera.

Metoda e filtrimit me zile (D. R. Bell, 1967). Në një aparat të përbërë nga një gyp çeliku inox me një vrimë drejtkëndëshe dhe filtra membranë të së njëjtës formë, me përmasa 19 x 42 mm, me një madhësi pore prej 0,8 deri në 5 μm, gjaku filtrohet në epruveta, i hemolizuar në një përzierje prej 1 ml detergjent Tipol dhe 9 ml fiziol, tretësirë ​​(për të shpejtuar filtrimin, aparati lidhet me një pompë vakum). Filtri fiksohet në ujë të distiluar të vluar dhe ngjyroset sipas Romanovsky-Giemsa ose hematoksilinës së nxehtë Ehrlich. Filtri me ngjyrë thahet në një tharëse ose në alkool izopropil (rradhazi në 3 gota), pastrohet në gotë me vaj zhytjeje dhe ekzaminohet nën një mbulesë. Përgatitjet e lyera ruhen për disa javë. Metoda Bell është më efektive për numërimin sasior të mikrofilarieve në gjak.

Përdoret edhe metoda me polividonin Goldsmid.

Hulumtimi i lëkurës. Në lëkurë mund të gjenden mikrofilarie të larvave oncho-kishë dhe helminth të kafshëve, duke shkaktuar forma e lëkurës migruesit e larvave(cm.). Seksionet e lëkurës ose materiali i marrë nga skarifikimi merren në kofshë, viç, mollaqe ose në nivelin e muskulit deltoid. Një pjesë e epidermës në formë koni ngrihet me një kunj entomologjike dhe, pritet me brisk, ekzaminohet në gotë në një pikë tretësirë ​​fizioli. Në rezultat negativ një preparat i freskët riekzaminohet pas 10 minutash; larvat zakonisht lokalizohen përgjatë skajeve të preparatit. Materiali i marrë mund të mbahet në 2 ml fiziol, tretësirë ​​brenda 1-2 orësh. dhe ekzaminoni sedimentin. Rekomandohet marrja e 5 seksioneve të lëkurës nga pacienti.

Është e mundur të përgatiten preparate nga gjaku dhe lëngu i indeve të lëshuara pas një ngjeshjeje të fortë të seksioneve. Pikat ngjyrosen sipas hematoksilinës së Mayer, Romanovsky-Giemsa ose Delafield.

Metoda standarde për përcaktimin sasior të pushtimit. Zona e biopsisë së diametrit të lëkurës. 3-5 mm dhe me peshë të paktën 1-4 mg, peshohen, priten në copa të vogla dhe numërohen larvat në mikroskop në fiziol. zgjidhje në një rrëshqitje xhami; 1-4 larva në fushën e shikimit janë shënuar me një shenjë +, 5-9 larva - me një shenjë ++, 10-19 - me një shenjë +++, 20 ose më shumë - me një shenjë + + + +. Kontabiliteti sasior është më i përshtatshëm për t'u kryer në përgatitjet me njolla.

Test për trikinozë, cisticerkozë dhe shistozomiazë

Identifikimi i larvave të Trichinella

metoda e kompresimit. Një copë dykrenare ose muskul i viçit(afër tendinit), i marrë në mënyrë kirurgjikale me asepsë, ndahet me gjilpëra disekuese në fije të holla të veçanta, të shtrydhura midis dy rrëshqitjeve të qelqit në një pikë glicerinë në mënyrë që preparati të jetë i hollë dhe transparent. Larvat e trikinelës janë qartë të dukshme nën një mikroskop me një fushë shikimi të errësuar. Hulumtimi i disa pjesëve të muskujve në kompresoriumet e përdorura në veterinar-san është efektiv. praktikë, veçanërisht në trikineloskopët specialë.

Metoda e tretjes Bechman(G. W. Bachman, 1928). 1 dhe muskujt e shtypur derdhen me 60 ml lëng gastrik artificial (0,5 g pepsinë; 0,7 ml acid klorhidrik të koncentruar; 100 ml ujë) dhe inkubohen për 18 orë. në një termostat në t° 37°; shtresa e sipërme e lëngut kullohet, ujë i ngrohtë i shtohet precipitatit (t ° 37-45 °) dhe derdhet në aparatin Bermann. Një orë më vonë, lëngu ulet në një provëz, centrifugohet dhe sedimenti ekzaminohet. Nëse larvat janë të mbyllura në kapsula të kalcifikuara, ato paraprakisht dekalcifikohen në një zgjidhje të acidit klorhidrik, azotit ose sulfurik.

bioassay. Pjesët e muskujve të studiuar u ushqehen minjve ose minjve të bardhë. Pas 2-3 ditësh, Trichinella e pjekur seksualisht mund të gjendet në përmbajtjen duodenale, dhe pas 2-3 javësh, larva në muskujt e diafragmës dhe gjuhës.

Seksionet histologjike. Pjesët e muskujve janë fiksuar në Bouin's, Zenker's ose lëngje të tjera; në mënyrën e zakonshme seksionet përgatiten në një mikrotome dhe ngjyrosen me hematoksilinën e Delafield.

Identifikimi i cisticerkeve

Ekzaminohet me sy të lirë një pjesë e muskujve të ekstirpuar, ind lidhor, etj., izolohet me kujdes një cisticerk - një vezikulë e bardhë e tejdukshme me përmasa 1-2 cm, e grimcuar midis dy rrëshqitjeve qelqi në një pikë glicerinë dhe ekzaminohet nën mikroskop. Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e cisticerkave të izoluara nga indet, ato mbahen në një tretësirë ​​50% të biliare për fiziol. tretësirë ​​në një termostat në t° 37°; pas 10-60 min. koka e një cisticerku të qëndrueshëm kthehet nga jashtë. Cisticerkët e kalcifikuar paraprakisht dekalcohen me një tretësirë ​​4% të acidit nitrik për një orë.

Zbulimi i vezëve shistosome

Në hron, format e shistosomatozës, kur formimi i granulomave pengon lëshimin e vezëve nga indet në lumenin e zorrëve ose në traktin urinar, përdoret një biopsi e mukozës së rektumit, e cila kryhet me një lugë të veçantë duke përdorur rektoskop. zgjedhja e një vendi me një lezion të dukshëm. Pjesa e biopsisë shtypet midis dy rrëshqitjeve të qelqit dhe ekzaminohet nën një mikroskop. Nëse rezultati është negativ, copat pastrohen në një tretësirë ​​4% të alkalit kaustik dhe prej tyre përgatitet gistol. feta. Një biopsi e mukozës së jejunumit kryhet nga goja dhe materiali që rezulton ekzaminohet me metodën e kompresimit ose gistol, prej tij përgatiten seksione. Në disa raste të shistozomiazës urogjenitale, diagnoza mund të bëhet vetëm në bazë të një biopsie endovezike. Me formën hepatolienale të shistozomiazës, kryhet një biopsi punksionale e mëlçisë; gistol, nga materiali i përftuar përgatiten seksione dhe ekzaminohen me mikroskop fluoreshent. Një mikroskop fluoreshent me një fushë të errët përdorimi dhe për ekzaminimin e indeve të mëlçisë për vezë skistozome. Kur shistozomet prekin traktin gjenital femëror, shkarkimi mblidhet duke përdorur një pasqyrë vaginale ose copa të mukozës së qafës së mitrës merren me një lugë të mprehtë; materiali i marrë ekzaminohet me mikroskop në xhami në një tretësirë ​​fiziol.

Hulumtimi mbi enterobiazën dhe teniidozën

Skrapi perianal (rekomandohet të bëhet në mbrëmje, 1 - 1,5 orë pasi pacienti ka shkuar në shtrat, ose në mëngjes para tualetit). Me një shkrepës të prerë në mënyrë të pjerrët dhe të lagur në një pikë lëngu (fiziol, tretësirë, ujë të zier ose tretësirë ​​2% sode bikarbonate), të aplikuar në një rrëshqitës xhami, a e bëj me kujdes? kruarje nga mukoza e anusit dhe palosjet rreth tij (nga qendra jashtë). Mukoza e mbledhur në fund të ndeshjes gërvishtet me skajin e rrëshqitjes së kapakut në një pikë lëngu në rrëshqitës dhe, e mbuluar me të njëjtën rrëshqitje mbuluese, ekzaminohet. Gjatë ekzaminimeve masive, kur kruahen në institucione të fëmijëve ose në institucione të tjera, shkrepsa e përdorur vendoset në një pikë lëngu në një rrëshqitje, pasi thahen, pikat mbulohen me një rrëshqitje tjetër dhe dërgohen në laborator, mbështillen me letër dhe fiksohen me një brez elastik. Për studimin e mukusit rektal, përdoret një pajisje e veçantë - një tub Shakhmatov ose Ziemann, me të cilin merret mukusi nga rektumi dhe njollat ​​ekzaminohen nën një mikroskop.

Metoda e shtupë pambuku. Pacientëve u jepet një epruvetë me një shtupë pambuku në një gotë ose shkop druri në shtëpi; në mëngjes pacienti fshin palosjet perianale me një shtupë të lagur ujë të zier dhe vendoseni në një provëz me një sasi të vogël uji. Në laborator, tamponët shpëlahen në të njëjtin tub me një pjesë të re të ujit dhe sedimenti ekzaminohet pas centrifugimit.

Metoda celofani e Hall-it (M. C. Hall, 1937). Një copë celofani katror është përforcuar me një brez gome në një shufër xhami. Skrarja bëhet me celofan të thatë dhe vendoset në një provëz. Në laborator, celofani zhvendoset pak nga shkopi dhe, pasi ka prerë majën e tij me gërshërë, drejtohet në një rrëshqitje xhami; laget me një solucion decinormal hidroksid natriumi, mbulohet me një mbulesë dhe ekzaminohet në mikroskop.

Metoda e shiritit celuloz të Grahamit (C. F. Graham, 1941). Një rrip shiriti celuloze shtypet me anën e tij ngjitëse në palosjet perianale të lëndës, pastaj me të njëjtën anë në rrëshqitje dhe ekzaminohet pa një rrëshqitje mbuluese; mund të shtoni një pikë toluen. VV Kaledin (1972) propozoi të përdoreshin për këto qëllime disqe celuloid të prerë nga filmi i larë me rreze x dhe të lagur me glicerinë; disqet ekzaminohen në një rrëshqitje xhami në një pikë zam silikat. Metoda e shiritit celuloz mund të përdoret gjithashtu për të ekzaminuar të brendshmet e fëmijëve.

Scraping subungual. Skajet e gozhdës, shtrati i thonjve, hapësirat nënunguale lagen me një zgjidhje 0,5-1% të alkalit kaustik dhe fshihen me shtupë pambuku të lagur. Tamponët vendosen në tuba centrifuge me të njëjtën tretësirë, centrifugohen dhe ekzaminohet sedimenti.

Metodat e kërkimit të objekteve mjedisi mbi vezët dhe larvat e helminthëve (studime sanitare dhe helmintologjike)

Kërkimi kryhet për të përcaktuar shkallën e kontaminimit të objekteve me vezë dhe larva të helminthëve mjedisi i jashtëm. Të dhënat e marra përdorin për një vlerësim një dinjitet. gjendjen e institucioneve dhe ndërmarrjeve dhe efektivitetin e masave të vazhdueshme për të luftuar helminthiazën.

Gjatë studimit të shkallës së kontaminimit të objekteve të ndryshme mjedisore me vezë dhe larva të helminthit dhe vlerësimit të rolit të tyre në epidemiologjinë e helminthiazës, është e rëndësishme të përcaktohet jo vetëm numri i vezëve të gjetura, por edhe qëndrueshmëria dhe invaziviteti i tyre, të cilat përcaktohen: ) nga pamja, nën një mikroskop; b) ngjyrosje me ngjyra të ndryshme, përfshirë ato lumineshente; si rregull, vezët dhe larvat e gjalla nuk njollosen; c) kultivimi në kushte optimale deri në fazën invazive; d) infeksioni i kafshëve laboratorike (bioassay).

Studime për ujërat e zeza. Për një studim përdoren 10-25 litra ujë (lumenj, dete, pellgje, pishina, gypa uji) dhe 1-2-5 litra ujëra të zeza.

Metoda 3. G. Vasilkova (1941). Uji ose ujërat e zeza filtrohen përmes ultrafiltrave të membranës në një aparat Goldman, i cili përbëhet nga një gyp qelqi ose metali me filtra të lidhur me një unazë grykë në një balonë Bunsen. Për të përshpejtuar procesin e filtrimit, një pompë vakum është e lidhur me aparatin. Pas filtrimit, filtrat e membranës ekzaminohen nën një mikroskop, pasi pastrohen me një zgjidhje gliceroli 50%. sedimenti i grumbulluar pastrohet dhe shikohet veçmas në formën e njollave. Përdoren pajisje filtrimi dhe dizajne të tjera.

Metoda e G. Sh. Gudzhabidze dhe G. A. Yudin (1963) për studimin e lëngjeve të ujërave të zeza. 1 litër lëng vendoset për 2 orë në një cilindër Lisenko; sedimenti që rezulton (5-9 ml) trajtohet si në studimin e tokës (shih më poshtë).

Metoda N. A. Romanenko (1967). Në 1 litër lëng mbetjesh të vendosur në një cilindër qelqi me kapacitet 1200-1500 ml, shtoni 0,4-0,6 g sulfat alumini ose klorur ferrik (për efekt koagulimi, i cili përshpejton procesin e sedimentimit të grimcave të pezulluara) dhe më pas. 40 minuta. përzierja centrifugohet për 3 minuta. në 1000 rpm; shtresa e sipërme kullohet dhe për të tretur thekonat, shtoni 1-2 ml tretësirë ​​3% të acidit klorhidrik, pastaj 150 ml tretësirë ​​të ngopur të nitratit të natriumit. Sedimenti ekzaminohet si dheu.

Hulumtimi i tokës

Ndotja e tokës me vezët e helminthit përcaktohet për të identifikuar vatrat e helminthiazave dhe për të vlerësuar efektivitetin e rehabilitimit të tyre.

Metoda 3. G. Vasilkova dhe V. A. Gefter (1948). 12,5 g tokë përzihen në epruveta (100 ml) prej çeliku inox ose bronzi me 20 ml tretësirë ​​alkali kaustike 5%, duke shtuar 10 rruaza qelqi ose guralecë të vegjël. Tubat mbyllen me tapa gome dhe tunden për 20 minuta. në shaker ose me dorë. Pas heqjes së prizave, epruvetat centrifugohen për 3-5 minuta, lëngu sipërfaqësor kullohet, në sediment shtohet 60-80 ml tretësirë ​​e ngopur e nitratit të natriumit dhe pasi të jetë përzier plotësisht, centrifugohet përsëri për 3-5. minuta. Në këtë sipërfaqe, filmi me vezë lundruese hiqet duke prekur sipërfaqen e përzierjes me një lak kompleks (5-6 sythe të lidhura në një shufër të përbashkët), dhe transferohet në një gotë me ujë; të përziera me të njëjtën tretësirë, të centrifuguar; e gjithë procedura përsëritet të paktën 3 herë. Përmbajtja e xhamit, ku është transferuar filmi, hollohet me ujë dhe filtrohet përmes filtrave të membranës, të cilët ekzaminohen nën mikroskop në një pikë glicerinë.

Metoda 3. G. Vasilkova dhe V. A. Gefter i modifikuar nga A. A. Namitokov (1961) ndryshon nga metoda kryesore në atë që në vend që të studiohen përgatitjet e filmit, përdoret gjysma e përmbajtjes së tubit (çdo herë duke shtuar një pjesë të re të një solucioni të ngopur të natriumit nitrat), filtrohen dhe ekzaminohen filtrat.

N. A. Romanenko (1968) rekomandon ekzaminimin e mostrave të tokës dhe llumit të ujërave të zeza për vezët e helminthit duke përdorur aparatin e propozuar nga G. Sh. Gudzhabidze. 50 g tokë përzihen mirë për 1 min. në 150 ml ujë në tuba centrifuge (kapaciteti 250 ml) me tehe të posaçme, të cilat drejtohen nga një motor elektrik. Përzierja centrifugohet për 3 minuta. në 1000 rpm, uji kullohet dhe, duke shtuar 150 ml tretësirë ​​të ngopur të nitratit të natriumit, përzihet dhe centrifugohet përsëri për 3 minuta. Në një stendë vendosen epruvetat me mostra, shtohet tretësira e nitratit të natriumit derisa të formohet një menisk konveks, mbulohet me rrëshqitës xhami (10 x 6 cm) dhe lihet mënjanë për 10-15 minuta, pastaj gotat hiqen dhe ekzaminohen; procedura përsëritet të paktën 4 herë.

Hulumtimi mbi larvat e helminthëve sipas metodës së Bermann (1917). 200-400 g tokë vendosen në një copë garzë mbi një rrjetë metalike (me një diametër vrime 1-2 mm) të vendosur në pjesën e gjerë të një hinke xhami të fiksuar në trekëmbësh. Një tub gome me një kapëse shtrihet mbi skajin e ngushtë të hinkës. Hinka është e mbushur me ujë të ngrohtë (t ° 50 °) në mënyrë që pjesa e poshtme e rrjetës me dheun të vijë në kontakt me ujin. Për shkak të termotropisë, larvat zvarriten në mënyrë aktive në ujë të ngrohtë dhe, duke u vendosur, grumbullohen në pjesën e poshtme të tubit të gomës sipër kapëses. Pas 3-4 orësh, 50 ml përmbajtje lëshohen nga hinka në një provëz, centrifugohet dhe sedimenti ekzaminohet.

Hulumtimi i perimeve, frutave dhe manave

Hetoni kryesisht perimet, manaferrat dhe frutat, të ngrëna pa trajtimit të ngrohjes. Metoda 3. G. Vasilkova (1948). 5-10 copa perime ose fruta (afërsisht 0,5 kg) ose 100-200 g zarzavate (marule, qepë të njoma) hidhen për disa orë me ujë në kavanoza qelqi me grykë të gjerë me tapa të bluar dhe tunden për 10-20 minuta. . në shaker ose me dorë. Uji kullohet, objektet e provës shpëlahen uje i paster dhe i gjithë uji i larjes filtrohet në aparatin Goldman; filtrat ekzaminohen duke pastruar me glicerinë. Ju mund t'i ngjyrosni filtrat me tretësirë ​​25% të Lugol në glicerinë; ndërsa vezët e helminthit janë njollosur në Ngjyra kafe dhe janë lehtësisht të dallueshme midis kokrrave të niseshtës së lyer Ngjyra blu. Sedimentet e mëdha trajtohen si toka.

Studimi i tamponëve nga sendet shtëpiake dhe duart. Një furçë ngjitëse (ose një shtupë pambuku e mbështjellë me një copë pëlhure najloni) e zhytur në një tretësirë ​​2% të bikarbonatit të sodës kryhet vazhdimisht mbi objektin ose duart që ekzaminohen, pas së cilës shpëlahet në të njëjtën tretësirë ​​të derdhur në provëz. Në laborator, furçat dhe tamponët shpëlahen me ujë të pastër; i gjithë uji i larjes centrifugohet dhe sedimenti ekzaminohet.

Metoda V. A. Gefter (1960). Është më efikase të mblidhet pluhuri nga pajisjet e buta me një fshesë me korrent të lidhur me një hinkë, e cila përbëhet nga 2 pjesë të shkëputshme: një filtër membrane vendoset në sipërfaqen e pjesës së poshtme të mbuluar me një rrjetë metalike ose plastike dhe forcohet duke vendosur. pjesa e sipërme hinka. Hinka e montuar është ngjitur në zorrën e fshesës me korrent me një tub gome. Pluhuri mblidhet nga objekti për 3 minuta, pas së cilës filtri hiqet dhe zëvendësohet me një të ri. Në laborator, filtrat shikohen nën një mikroskop, pasi janë pastruar me glicerinë. Nëse shtresa e pluhurit në filtër është e madhe, ajo gërvishtet dhe shihet si njollë ose trajtohet si dhe.

Metodat e diagnostikimit imunologjik

Mundësia e përdorimit imunol. Metodat për diagnostikimin e helminthiazave janë për shkak të aftësisë së helminthëve për të prodhuar antigjene aktive që ndikojnë në qelizat imunokompetente të strehuesit dhe stimulojnë prodhimin e antitrupave. Metodat më efektive imunodiagnostike për helminthiazat e zorrëve, kur sekretet dhe sekretet e helminthëve me aktivitet antigjenik, hyjnë drejtpërdrejt në gjakun e bujtësit. Imunol, reaksionet përdoren për diagnostikimin e askariazës, trikinozës, filariazës, skistosomatozës, ekinokokozës dhe alveokokozës, cisticerkozës, paragonimiazës, kompleksit të simptomave larva migrans- (toksokariaza, angiostrongyloza), etj. Aplikoni serol të ndryshëm, reaksione, fiksime, analiza. , antitrupat fluoreshente ) dhe testet e alergjisë intradermale. Antigjenet përgatiten nga larvat dhe helminthët e pjekur duke përdorur ekstrakte të kripura të homogjenateve të indeve të freskëta të ngrira ose të liofilizuara, si dhe lëngje të ndryshme biologjikisht aktive (lëng nga flluskat ekinokokale, lëngu kavitar ascaris, etj.). Për shkak të faktit se helmintet kanë një strukturë antigjenike shumë komplekse dhe në mozaikun e tyre antigjenik ka përbërës dhe përcaktues individualë që reagojnë në mënyrë të kryqëzuar me lloje të tjera helmintesh, bakteresh dhe antigjenesh strehuese, po zhvillohen metoda për pastrimin e tyre nga përbërës jospecifik. Bëhet fraksionimi metoda të ndryshme: filtrim xhel në kolona me Sephadex, kromatografi jon-shkëmbyese në DEAE-Sephadex, trajtim me acide etj. Antigjenet fraksionale zakonisht kanë një specifikë më të lartë se ekstraktet e plota, ndërsa aktiviteti i tyre është afërsisht i njëjtë. Metodat imunodiagnostike gjejnë gjithçka aplikim më të madh. Reaksionet përdoren jo vetëm për zbulimin më të plotë dhe të hershëm të pacientëve, por edhe për studimin e vatrave dhe studimin e epidemiologjisë së helmintiazave.

Reaksionet serologjike. Reagimi i mikroprecipitimit në larvat e gjalla përdoret për të diagnostikuar nematodat - faza paraimagjinale e ascariasis, ankilostomidozës, trikinozës. Reagimi bëhet pozitiv 5-10 ditë pas infektimit (ascariasis, ankilostomidosis) dhe vazhdon për 90-100 ditë. Antigjeni është larva e nematodës së gjallë të izoluar nga indet e kafshëve laboratorike të infektuara eksperimentalisht. Larvat e përzgjedhura lahen tërësisht nga proteinat strehuese me fiziol steril, tretësirë ​​dhe ujë të distiluar dhe 10-15 kopje secila. vendoset me një pipetë Pasteur në një rrëshqitje qelqi sterile me një pus. Aplikoni 2-3 pika të serumit të testit, mbulojeni me një kapak steril, vendoseni në një dhomë të lagësht (enë Petri të veshur me letër filtri të lagur) dhe inkuboni për 24-48 orë. në një termostat në t° 37°. Me një reagim pozitiv nën një zmadhim të ulët të mikroskopit, ato janë të dukshme rreth gojës dhe vrimat anale larva të bardha gri, masa pak opaleshente të precipitateve të formës sferike ose zigzag. Efikasiteti i reagimit arrin 85-95%.

Reaksioni i precipitimit unazor u zhvillua nga V. P. Pashuk (1957) për diagnozën e trikinozës. Reagimi bëhet pozitiv në javën e 2-3 të sëmundjes. Efikasiteti i tij arrin 80-90%. Antigjeni është një ekstrakt pluhur nga larvat e thara në 35° i izoluar nga muskujt e kafshëve të infektuara. Në epruvetat diam. 0,5 cm hidhni 0,1 ml të çdo hollimi të antigjenit dhe shtroni me kujdes mbi të (ose uleni deri në fund) një sasi të barabartë të serumit të testimit në mënyrë që lëngjet të mos përzihen. Tubat mbahen për 30 minuta. në një termostat në t ° 37 °, dhe më pas 30-60 min. në temperaturën e dhomës. Me një reagim pozitiv, në kufirin e kontaktit midis antigjenit dhe serumit shfaqet një unazë delikate e bardhë, e cila shpërbëhet lehtësisht kur tronditet.

Reaksioni i precipitimit në xhel sipas Ouchterlony (O. Ouchterlony, 1949) në mikromodifikimin e A. I. Gusev dhe V. S. Tsvetkov u propozua nga I. A. Ginovker, E. A. Zabozlaeva, A. V. Doronin (1970) për diagnostikimin e fazave të hershme ophorchise. Sipas të dhënave paraprake, efikasiteti i tij është 87%. Antigjeni është një ekstrakt i një homogjenati opisthorchis të sapo ngrirë të pjekur seksualisht të izoluar nga mëlçia e maceve.

Reagimi i hemaglutinimit indirekt (shih) me një diagnosticum - një pezullim i eritrociteve të dashit të formalizuar dhe të tanizuar të sensibilizuar nga lëngu ekinokokal - u zhvillua

LN Stepankovskaya (1972) për diagnozën e ekinokokozës dhe alveokokozës.

RNHA me një diagnozë të eritrociteve të formalizuara të deleve të sensibilizuara me një ekstrakt të një homogjenati të cisticerkut të ngrirë të freskët të shiritit të derrit u propozua nga L. M. Konovalova (1973) për diagnozën e cisticerkozës së trurit; është efektiv në 85% të rasteve.

RNHA me ascaris diagnosticum propozohet për diagnostikimin e fazës paraimagjinale të askariazës.

Reaksioni i fiksimit të komplementit (shih) vendoset sipas metodës së zakonshme dhe përdoret për të diagnostikuar trikinozën dhe cisticerkozën.

Metoda e antitrupave luminescent (metodë indirekte). Kjo metodë me homogjenat të thatë të çyndosur të cisticerëve të shiritit të derrit si antigjen, të fiksuar në një rrëshqitje xhami, u zhvillua nga JI. M. Konovalova (1973) për diagnozën e cisticerkozës njerëzore. I njëjti reagim me gistol, seksione të larvave të Trichinella si një antigjen u zhvillua për diagnozën e trikinozës.

E. S. Leykina, V. A. Gefter.

Kur vezët e helminthit gjenden në objekte të ndryshme mjedisore (tokë, ujë, perime, etj.), është gjithmonë e nevojshme të përcaktohet qëndrueshmëria e tyre nga pamja, njollosja me ngjyra vitale, kultivimi në kushte optimale dhe vendosja e një kampioni biologjik, d.m.th.

Ushqimi i kafshëve laboratorike.

Përcaktimi i qëndrueshmërisë së vezëve ose larvave të helminthëve në pamje. Vezët e helminthit mikroskopohen fillimisht me zmadhim të ulët, pastaj me zmadhim të lartë. Në vezët e deformuara dhe të vdekura të helminthëve, guaska është e grisur ose e përkulur nga brenda, plazma është e turbullt, e liruar. Në vezët e segmentuara, topat e ndarjes (blastomeret) janë të pabarabarta në madhësi, në formë të çrregullt dhe shpesh zhvendosen në një pol. Ndonjëherë ka vezë jonormale, të cilat, duke pasur deformime të jashtme, zhvillohen normalisht. Në larvat e gjalla të ascarideve, grimca e imët është e pranishme vetëm në pjesën e mesme të trupit, pasi ato vdesin, grimca përhapet në të gjithë trupin, shfaqen vakuola të mëdha hialine me shkëlqim - të ashtuquajturat vargje perlash.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të pjekura të ascarids, whipworms, pinworms, lëvizjet aktive të larvave duhet të shkaktohen nga ngrohja e lehtë e përgatitjes (në një temperaturë jo më të madhe se 37 ° C). Është më i përshtatshëm për të vëzhguar qëndrueshmërinë e larvave të ascaris dhe krimbit të kamxhikut pasi ato janë izoluar nga lëvozhga e vezës duke shtypur xhamin e kapakut të preparatit me një gjilpërë disekuese ose piskatore.

Në larvat invazive të askarideve, shpesh shihet një kapak që është eksfoluar në fund të kokës dhe në larvat e krimbave të kamxhikut që kanë përfunduar zhvillimin në vezë, në këtë vend gjendet një stilet me zmadhim të lartë. Në larvat e ngordhura të helminthëve, pavarësisht vendndodhjes së tyre (në vezë ose jashtë saj), vërehet prishja e trupit. Ku strukturën e brendshme larva bëhet me gunga ose grimcuar, dhe trupi është i turbullt dhe i errët. Vakuolat gjenden në trup, dhe thyerjet gjenden në kutikula.

Qëndrueshmëria e onkosferave teniide (krimbi shirit i gjedhit, i derrit, etj.) përcaktohet nga lëvizja e embrioneve kur ekspozohen ndaj enzimat e tretjes. Vezët vendosen në një gotë ore me lëng stomaku qeni ose lëng artificial duodenal. Përbërja e kësaj të fundit: pankreatinë 0,5 g, bikarbonat natriumi 0,09 g, ujë i distiluar 5 ml. Syzet e orës me vezë vendosen në një termostat në 36-38 ° C për 4 orë. Në këtë rast embrionet e gjalla çlirohen nga lëvozhga. Predhat e onkosferave të gjalla gjithashtu treten në pepsinën e acidifikuar dhe brenda tretësirë ​​alkaline tripsinë pas 6-8 orësh në një termostat në 38 °C.

Nëse vezët teniid vendosen në një tretësirë ​​1% të sulfurit të natriumit, ose në një solucion 20% të hipoklorurit të natriumit, ose në një tretësirë ​​1% të ujit me klor në 36-38 ° C, embrionet e pjekura dhe të gjalla çlirohen nga membranat dhe nuk ndryshohet per 1 dite. Onkosferat e papjekura dhe të vdekura tkurren ose fryhen dhe rriten ndjeshëm, dhe më pas "shpërndahen" brenda 10 minutash - 2 orë. Embrionet e gjalla të teniideve gjithashtu lëvizin në mënyrë aktive në një përzierje prej 1% zgjidhje klorur natriumi, 0.5% tretësirë ​​bikarbonat natriumi dhe biliare në 36- 38 °C.

Qëndrueshmëria e ekinokokut skolex përcaktohet me ngrohje të ulët. Për ta bërë këtë, skolekset ose kapsulat e pjellave të lara në ujë vendosen në një pikë uji në një rrëshqitje xhami me një vrimë, të mbuluar me një mbulesë dhe ekzaminohen nën një mikroskop me një fazë ngrohjeje në një temperaturë prej 38-39 ° C. Nëse nuk ka tavolinë ngrohjeje, përgatitja nxehet duke përdorur çdo burim nxehtësie. Në të njëjtën kohë, skolekset e qëndrueshme lëvizin në mënyrë aktive, duke zvogëluar ose relaksuar thithësit, duke zgjatur dhe shkurtuar proboscis. Nëse vendosni scolex në 0,5-1% tretësirë ​​uji filicilen në temperaturën e dhomës, atëherë të gjitha skolekset e qëndrueshme do të dalin shpejt dhe do të vdesin. Skolekset jo të qëndrueshme nuk dalin.

Qëndrueshmëria e fasciolia adolescariae e mbledhur nga bimët dhe objektet e tjera të trupave ujorë kontrollohet duke i ekzaminuar ato në një rrëshqitje xhami në kripë nën një mikroskop me një fazë ngrohjeje. Kur nxehen, larvat trematode në kist fillojnë të lëvizin.

Qëndrueshmëria e vezëve të shiritit xhuxh përcaktohet nga vendndodhja e grepave në embrion.

Në vezët e gjalla të shiritit pigme, lëvizjet e ngadalta të protoplazmës si lavjerrës dhe zgjatimet dhe zhvendosjet pothuajse të padukshme të skajeve të theksuara të çiftit anësor të grepave ndodhin larg çiftit të mesëm.

Tkurrjet e protoplazmës së embrionit dhe grepave germinale ndihmojnë embrionin të çlirohet fillimisht nga lëvozhga e onkosferës dhe më pas nga lëvozhga e jashtme e vezës.

Në një vezë të gjallë, çifti mesatar dhe palët anësore të grepave janë rregulluar paralelisht; në disa vezë, tehet e çifteve anësore bashkohen dhe vendosen në një kënd më të vogël se 45° në krahasim me çiftin e mesëm të grepave.

Embrioni që po vdes kontraktohet në mënyrë konvulsive dhe i shtyn me ngadalë grepat. Në embrionin e vdekur, lëvizja e grepave ndalet dhe ato janë të rregulluara në mënyrë të çrregullt, ndonjëherë grepa anash palës fqinje shpërndahen në një kënd të drejtë, të mpirë ose akut.

Ndonjëherë vërehen rrudha të embrionit, formimi i grimcave. Një metodë më e saktë bazohet në shfaqjen e lëvizjeve të onkosferës gjatë një ndryshimi të mprehtë të temperaturës: nga 5-10 në 38-40 °C.

Përcaktimi i qëndrueshmërisë së nematodave të papjekura duhet të studiohet në një dhomë të lagësht (enë Petri), duke i vendosur vezët ascaris në një solucion formaline 3% të përgatitur në një zgjidhje izotonike të klorurit të natriumit në një temperaturë prej 24-30 ° C, vezët e krimbave në një 3% zgjidhje të acidit klorhidrik në një temperaturë prej 30-35 ° C, vezët e krimbave në një zgjidhje izotonike të klorurit të natriumit në një temperaturë prej 37 "C. Enët Petri duhet të hapen 1-3 herë në javë për ajrim më të mirë dhe të lagni përsëri letrën filtruese me ujë të pastër.

Vëzhgimet e zhvillimit të vezëve të helminthit kryhen të paktën 2 herë në javë. Mungesa e shenjave të zhvillimit brenda 2-3 muajve tregon jo qëndrueshmërinë e tyre. Shenjat e zhvillimit të vezëve të helminthit janë së pari fazat e shtypjes, ndarja e përmbajtjes së vezës në blastomere të veçanta. Gjatë ditës së parë zhvillohen deri në 16 blastomere, të cilat kalojnë në fazën e dytë - morula etj.

Vezët e krimbit të ngjizjes kultivohen në një cilindër xhami (50 cm i lartë dhe 7 cm në diametër) i mbyllur me tapë. Një përzierje e vëllimeve të barabarta të rërës sterile, qymyr druri dhe feçet me vezët e krimbit të gremisit, të holluara me ujë në një konsistencë gjysmë të lëngshme, derdhen me kujdes në fund të cilindrit duke përdorur një tub qelqi. Gjatë 1-2 ditëve të vendosjes në errësirë ​​në një temperaturë prej 25-30 ° C, larvat rabditoid dalin nga vezët dhe pas 5-7 ditësh ato bëhen tashmë filariforme: larvat zvarriten në muret e cilindrit, ku ato zvarriten. janë të dukshme edhe me sy të lirë. Vezët trematode që zhvillohen natyrshëm në ujë, si opisthorchis, diphyllobotriid, fasciol etj., vendosen në një gotë ore, një enë Petri ose në një enë tjetër, derdhet një shtresë e vogël uji i zakonshëm. Gjatë kultivimit të vezëve fasciola, duhet pasur parasysh se ato zhvillohen më shpejt në errësirë, ndërsa miracidiumi formohet në vezë të gjalla në një temperaturë 22-24 ° C në 9-12 ditë. Kur mikroskopi i zhvillimit të vezëve trematodë, lëvizjet e miracidiumit janë qartë të dukshme. Fasciola miracidium del nga lëvozhgat e vezëve vetëm në dritë. Gjatë kultivimit, uji ndërrohet pas 2-3 ditësh.

Larvat e krimbit të gjirit dhe stringuloidi kultivohen në agar në një enë Petri me qymyr të kafshëve. Pas qëndrimit në një termostat në një temperaturë prej 26-30 ° C për 5-6 ditë, larvat u përhapën mbi agar, duke lënë pas një shteg bakteresh (metoda Fülleborn).

Metoda e Harada dhe Mori (1955). 7 ml ujë të distiluar shtohen në provëza të vendosura në një raft. Merrni 0,5 g feçe me një shkop druri dhe bëni një njollë në letër filtri (15X150 mm) 5 cm nga buza e majtë (ky operacion kryhet në një fletë letre për të mbrojtur sipërfaqen e tavolinës së laboratorit). Pastaj shiriti me njollë futet në tub në mënyrë që skaji i majtë i lirë nga njolla të arrijë në fund të tubit. Fundi i sipërm është i mbuluar me një copë celofan dhe i mbështjellë fort me një brez elastik. Në epruvetë shkruani numrin dhe mbiemrin e subjektit. Në këtë gjendje, epruvetat ruhen për 8-10 ditë në një temperaturë prej 28 °C. Për të studiuar kulturën, hiqni dhe hiqni kapakun e celofanit dhe hiqni një rrip letre filtri me piskatore. Në këtë rast duhet pasur kujdes, pasi një numër i vogël larvash infektive mund të lëvizin në skajin e sipërm të letrës filtruese ose në murin e epruvetës dhe të depërtojnë nën sipërfaqen e celofanit.

Tubat vendosen në një banjë me ujë të nxehtë në 50°C për 15 minuta, pas së cilës përmbajtja tundet dhe derdhet shpejt në një tub 15 ml për të precipituar larvat. Pas centrifugimit, supernatanti hiqet dhe precipitati transferohet në një rrëshqitje qelqi, të mbuluar me një mbulesë dhe të mikroskopuar me zmadhim të ulët.

Për diagnozën diferenciale të larvave filariforme, është e nevojshme të përdoren të dhënat e paraqitura në tabelë. 13.

Metodat për ngjyrosjen e vezëve dhe larvat e helminthëve. Indet e vdekura në shumicën e rasteve i perceptojnë ngjyrat më shpejt se ato të gjalla. Këto karakteristika përdoren në helminthologji për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve dhe larvat e helminthëve. Megjithatë, në disa raste, disa bojëra perceptohen më mirë nga indet e gjalla sesa nga ato të vdekura.

Tabela 13 Diagnoza diferenciale larvat filamentoze të A.duodenale, N.americanus, Strongyloides stercoralis, Trichostrongylus spp.

Për njohjen diferenciale të vezëve dhe larvave të gjalla dhe të ngordhura, përdoren ngjyrat dhe metodat e mëposhtme.

Leukobaza blu metilen përdoret për të njollosur indet e gjalla dhe të vdekura. Një qelizë ose ind i gjallë e redukton blunë e metilenit në një leukobazë të pangjyrë; indi i vdekur nuk e ka këtë aftësi, dhe për këtë arsye fiton një ngjyrë.

Për ngjyrosjen e vezëve Ascaris, mund të përdorni blu metilen në një zgjidhje të acidit laktik me alkali kaustike (blu metilen 0,05 g, sode kaustike 0,5 g, acid laktik 15 ml). Vezët e gjalla nuk e perceptojnë ngjyrën, embrionet e vezëve të ngordhura bëhen blu.

Metoda e ngjyrosjes nuk është e zbatueshme për vezët e papjekura të krimbit të rrumbullakët dhe krimbit të kamxhikut; guaska e pigmentuar është e njollosur, dhe për këtë arsye nuk është e dukshme nëse qeliza germinale brenda vezës është njollosur.

Larvat e Ascaris janë ngjyrosur me një zgjidhje bazë të bojës blu brilliant-cresyl në një përqendrim 1:10 LLC. në mënyrën e mëposhtme: një pikë lëngu me vezë ascaris dhe një pikë e tretësirës kryesore të bojës aplikohen në një rrëshqitje xhami. Preparati mbulohet me një mbulesë, e cila shtypet fort në objekt me një goditje të lehtë me një gjilpërë disektuese. Në mikroskop vërehet numri i larvave të çelura dhe shkalla e ngjyrosjes së tyre, pas së cilës i njëjti preparat ekzaminohet sërish pas 2-3 orësh.Vetëm larvat e padeformuara që nuk janë ngjyrosur për 2 orë konsiderohen të gjalla.Njolla e larvave të ngordhura kur guaska prishet (pjesërisht ose plotësisht).

Tregohet mundësia e ngjyrosjes së preparateve me tretësirë ​​jodi në përcaktimin e qëndrueshmërisë së vezëve të zogjve ascaridia. Në këtë rast, një zgjidhje alkoolike 5% e jodit përdoret si ngjyrues. Kur aplikohet në medikament, embrionet e vezëve të ngordhura ascaride kthehen në portokalli brenda 1-3 sekondave. Vezët e ngordhura të shiritit të gjedhit dhe onkosferat e shiritit të gjedhit ngjyrosen me një tretësirë ​​të toluidinës blu (1:1000), dhe onkosferat e ngordhura të shiritit të gjedhit njollosen me një tretësirë ​​të blusë brilante-kresil (1:10,000). Në të njëjtën kohë, embrionet dhe lëvozhgat e vezëve të ngordhura dhe të gjalla marrin ngjyrë. Prandaj, pas ngjyrosjes, vezët dhe onkosferat lahen uje i paster dhe gjithashtu lyhet me safranin (në një hollim 1:10,000 me një tretësirë ​​alkooli 10%). Alkooli largon ngjyrën nga lëvozhgat dhe safranina u jep atyre një ngjyrë të kuqe. Si rezultat, vezët e gjalla janë njollosur me të kuqe, embrioni i vezëve të ngordhura është blu dhe lëvozhga mbetet e kuqe. Embrionet e ngordhura të onkosferave të shiritit të gjedhit shpejt, brenda pak minutash, ngjyrosen me ngjyrë të kuqe të ndezur ose rozë me safranin ose blu me blu diamanti-kresyl në një hollim 1:4000 ose me karmine indigo në një hollim 1:1000-1: 2000.

Embrionet e gjalla nuk ndryshojnë nën ndikimin e këtyre ngjyrave edhe pas 2-7 orësh.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të krimbit pigme, rekomandohet të përdorni bojërat e mëposhtme: 1) blu e shkëlqyeshme kresil (1: 8000) - pas 1 ore, onkosfera e vezëve të ngordhura është veçanërisht e njollosur, e cila dallohet ashpër kundër një zbehje ose sfond i pangjyrë i pjesës tjetër të vezës; 2) safranin: në një hollim 1:8000 kur ekspozohet për 2 orë dhe 1:5000 për 3-5 orë; 3) Zgjidhje 50% e acidit pirogalik në një hollim 1:2 - kur ekspozohet për 1 orë në një temperaturë prej 29-30 ° C (sa më e ulët të jetë temperatura, aq më i gjatë është procesi i ngjyrosjes).

Plerocerkoidet e gjalla të shiritit ngjyrosen shumë mirë me një tretësirë ​​ujore (1:1000) të gojës neutrale për 5-20 minuta. Për të marrë një ngjyrë rozë të qëndrueshme që nuk zhduket brenda 5 ditëve dhe nuk ndikon në lëvizshmërinë e plerocerkoideve, zakonisht mjaftojnë 10 minuta. Shkalla e ngjyrës kontrollohet duke parë larvat në një zgjidhje të pastër izotonike të klorurit të natriumit, për të cilën plerocerkoidet hiqen periodikisht nga boja. Këshillohet të përdorni blu metilen për të njollosur plerocerkoidet e vdekura.

R.E. Chobanov et al. (1986) propozuan një metodë për përcaktimin e qëndrueshmërisë së vezëve dhe larvave të helminthëve duke përdorur pigmentin rubrinë të marrë nga kultivimi i kërpudhave Peniciliium rubrum si ngjyrues. Për ta bërë këtë, përdorni një zgjidhje ujore me ngjyrë 3%.

Procesi i ngjyrosjes së vezëve dhe larvave përfundon pas 1.5 orësh.Vezët e paqëndrueshme të krimbave, gjedhit dhe xhuxh shiritit, ankilostomideve, trikostrongylideve marrin një ngjyrë rozë intensive, larvat e ankilostomideve dhe trikostrongylideve bëhen të kuqe. Një ngjyrë më pak e ndritshme vërehet në vezët e ascaris dhe whipworms, pasi, duke u dalluar nga zorrët, ato tashmë kanë një ngjyrë kafe të errët: vezët dhe larvat e qëndrueshme nuk njollosen.

Metodat fiziko-kimike për stimulimin e çlirimit të miracdia nga vezët trematode. Metodat u zhvilluan nga S.M. German dhe S.A. Beer (1984) për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve opisthorkia dhe dikroceliumi duke i ekspozuar vezët në mjedisin e reagimit. Nëse janë gjallë, del miracidium. Metodat bazohen në aktivizimin fiziko-kimik të gjëndrës së çeljes së miracidiumit dhe stimulimin aktiviteti motorik larvat. Stimulimi arrihet duke ekspozuar vezët trematodë në një mjedis të veçantë reaksioni në kombinim me metoda të njëpasnjëshme - krijimi i një ndryshimi të temperaturës, tharja e një pezullimi të vezëve, ekspozimi ndaj një rryme të dobët të lëngut në pikën e provës, të cilat kontribuojnë në çlirimin masiv të miracidias nga vezët.

Përcaktimi i qëndrueshmërisë së vezëve të opistorkut me metodën e Herman, Birra. Një pezullim i vezëve në ujë (trokitje e lehtë, i vendosur) është ftohur paraprakisht në 10-12 ° C. Të gjitha operacionet e mëvonshme kryhen në temperaturën e dhomës (18-22 °C). Një pikë (rreth 0,05 ml) e një suspensioni që përmban 100-400 vezë shtohet në një tub centrifuge. Provëzat vendosen në një raft për 5-10 minuta për të precipituar vezët. Pastaj shirit i ngushtë Letra filtri thithni me kujdes ujin e tepërt derisa të hiqet plotësisht. 2 pika të mediumit shtohen në epruvetën, tunden, përmbajtja transferohet me një pipetë në një rrëshqitës xhami dhe lihet për 5-10 minuta, duke u tundur paksa (ose vendosur nën tharëse flokësh) për të krijuar rryma të dobëta të lëngshme në rënia e pezullimit në studim. Ky operacion, i cili imiton peristaltikën e zorrëve të një molusku, ju lejon të aktivizoni lëshimin e miracidia. Pas kësaj, 2 pika të tjera të mediumit shtohen në suspension dhe më pas preparati ekzaminohet mikroskopikisht duke përdorur një mikroskop konvencional me dritë (X200). Gjatë kësaj kohe, vezët me miracidia të qëndrueshme duhet të hapin kapakun, ndërsa larva del në mënyrë aktive në mjedis. Për shkak të pranisë së etanolit në të, miracidiumi imobilizohet në 3-5 minuta, dhe më pas ngjyroset me një ngjyrë në medium. Si rezultat, miracidia zbulohen dhe numërohen lehtësisht.

Përgatitja e mjedisit të reaksionit. Mjeti përgatitet në tampon 0.05 M Tris-HCi në kushte optimale të pH prej 8.0-9.5. Etanoli shtohet në tampon deri në 10-13% dhe bojë (safranin, blu metilen dhe të tjera që punojnë brenda intervalit të pH) deri në ngjyrosje e dobët lëng (për shembull, për safranin, përqendrimi i tij përfundimtar do të jetë 1:50,000). Ju mund të përdorni një tampon tjetër që funksionon në intervalin e pH-së alkaline, siç është fosfati 0,05 M (pH 8,5). Prandaj, mediumi përmban 96% etanol - 12 pjesë; bojë (zgjidhje amtare) - 1-10 pjesë; 0,05 M tris-HC! tampon (pH 8,5-9,5) - deri në 100 pjesë. Shembull mesatar: 12 pjesë etanol 96%, 1 pjesë e tretësirës së ngopur të safranit, pjesa tjetër deri në 100 pjesë - 0,05 M Tris-HCl tampon, pH 9,5.

Përcaktimi i qëndrueshmërisë së vezëve të dikroceliumit me metodën e Herman, Beer, Stratan. Një pikë suspensioni që përmban 100-150 vezë trematode vendoset në një tub centrifuge për 1-2 minuta për të vendosur vezët. Lëngu më pas thahet me kujdes me një rrip letre filtri. Shtoni 1-2 pika të mjedisit të reagimit me një pipetë Pasteur dhe inkuboni në një banjë uji në 28-30 °C për 2-3 minuta. Përbërja e mediumit: 6 pjesë butanol, 94 pjesë tretësirë ​​0,4% klorur natriumi ose 0,3% tretësirë ​​e klorurit të kaliumit në ujë të distiluar. Vezët në mjedis transferohen me një pipetë në një rrëshqitje xhami dhe lihen 1,5-2 orë në temperaturën e dhomës (18-22 ° C), ndërsa çdo 25-30 minuta (pasi thahet) shtoni 1-2 pika (0,05 ml) tretësirë ​​e butanolit në ujë të distiluar. Pas kësaj, përgatitja mikroskopohet me zmadhim 100-200 herë. Qëndrueshmëria përcaktohet nga numri i vezëve të hapura me miracidia të lëshuara. Butanoli depërton nëpër poret e lëvozhgës së vezës, arrin në miracidia dhe i aktivizon ato. Inkubimi në një temperaturë të theksuar e përmirëson këtë proces. Butanoli në një përqendrim 3-7% është i dëmshëm për miracidiumin që ka dalë nga veza. Transferimi i një pezullimi vezësh nga një epruvetë në një rrëshqitje qelqi lejon, në kohën kur miracidiumi del (pas 30-40 minutash), të zvogëlojë përqendrimin e butanolit për shkak të avullimit në një nivel të sigurt (1,5-0,5%). Prania e klorurit të natriumit në mjedis në një përqendrim 0,1-0,5% (ose klorur kaliumi në një përqendrim 0,05-0,4%) përcakton aktivitetin e miracidiumit të çliruar. Ndryshe nga vezët e vogla transparente të opisthorch, vezët e dikroceliumit kanë një lëvozhgë me ngjyrë të errët; ato kanë një kapak të dukshëm, i cili hapet pas lëshimit të miracidiumit. Prandaj, qëndrueshmëria e vezëve të dikroceliumit vlerësohet më lehtë duke numëruar vezët që janë hapur, sesa duke njolluar dhe numëruar miracidia.

Metoda lumineshente për studimin e vezëve dhe larvave të helminthëve.

Për herë të parë në praktikën helmintologjike, metodat e mikroskopisë së luminescencës u aplikuan në vitin 1955. U raportua se mikroskopi i lumineshencës bën të mundur diferencimin e objekteve të gjalla dhe të vdekura pa dëmtuar vezën. Për fluoreshencë, nuk u përdorën rrezet UV, por pjesa blu-vjollcë e dritës së dukshme, me një mikroskop konvencional dhe rrëshqitës xhami; në ndriçuesin "OI-18" është aplikuar set special filtra me ngjyra.

U zbulua se vezët e gjalla dhe të ngordhura të ascaris, krimbave pink, shiritave pigme, shiritit të gjedhit, shiritit të gjerë dhe helminthëve të tjerë ndriçojnë ndryshe. Ky fenomen vërehet si gjatë lumineshencës parësore pa përdorur ngjyra, ashtu edhe kur ngjyroset me fluorokrom (akridine portokalli, korifosfine, primulinë, auroline, sulfat berlerin, tripaflavinë, rivanol, kinakrinë, etj.).

Vezët e gjalla të palyera të krimbave të rrumbullakëta, jo të segmentuara, shkëlqejnë jeshile e ndezur me një nuancë të verdhë; në vezët e ngordhura, lëvozhga rrezaton dritë e gjelbër shumë më e ndritshme se germina e gjelbër e errët; në vezët e krimbave të rrumbullakëta me larvë, shfaqet vetëm lëvozhga, ndërsa tek të ngordhurat, lëvozhga dhe larva kanë ngjyrë të verdhë të ndezur.

Vezët e gjalla të papigmentuara dhe të pa segmentuara të krimbave pink dhe shiritave pigme lëshojnë një dritë jeshile-verdhë; në vezët e ngordhura, lëvozhga ndriçon intensivisht në sfondin e një mase embrionale të gjelbër të errët. Me luminescencë dytësore (kur ngjyroset me portokall akridine në një hollim prej 1:10 OOO dhe 1:50 OOO nga 30 minuta në 2 orë), guaska e nematodeve të gjalla dhe të vdekura, trematodeve dhe cestodave ndriçon ndryshe.

Predha e të gjallëve dhe të vdekurve Ascaris lumbricoides, Toxocara leonina, Enterobius vermicularis, Hymenolepis nana, H.fraterna, H. diminuta, T.saginatus, D.latum kthehet në ngjyrë portokalli në të kuqe. Embrionet e gjalla Asc. lumbricoides, T.leonina, H.diminuta, D.latum dhe onkosferat e krimbit të shiritit të gjedhit ndriçojnë në një ngjyrë jeshile të errët ose gri-jeshile të shurdhër. Embrionet e vdekura të këtyre vezëve të helminthit lëshojnë një dritë "të djegur" portokalli-të kuqe. Larvat e gjalla të krimbave dhe toksokarët (lëvozhgat e vezëve) lëshojnë një dritë të shurdhër gri-jeshile, dhe kur ato vdesin, ngjyra ndryshon nga fundi i kokës në një jeshile të lehtë "të djegur", pastaj në të verdhë, portokalli dhe në fund portokalli të ndezur.

Kur ngjyroset me fluorokrom - korifosfilum, primulinë - në vezët e ngordhura të ascarideve dhe krimbave të kamxhikut, vërehet një shkëlqim nga e verdha jargavan në të kuqe bakri. Vezët e qëndrueshme nuk ndriçojnë, por kthehen në jeshile të errët. Vezët e gjalla të trematodeve Paragonimus westermani dhe Clonorchis sinensis nuk shkëlqejnë pas ngjyrosjes me akridine portokalli, ndërsa vezët e ngordhura lëshojnë një dritë jeshile të verdhë.

Metoda e lumineshencës mund të përdoret gjithashtu për të përcaktuar qëndrueshmërinë e larvave të helminthit. Pra, të fluorokromizuar me një zgjidhje të larvave të akridinës portokalli (1:2000) të larvave të strongylate, rhabdita shkëlqejnë: e gjallë - jeshile (me një nuancë), e vdekur - dritë portokalli e ndritshme. Larvat e gjalla të Trichinella nuk shkëlqejnë ose japin një shkëlqim të dobët kur trajtohen për 10 minuta me solucione të izotiocianatit të fluoresceinës, auraminës, etj. Larvat e vdekura të fluorokromizuara (në një përqendrim 1:5000) japin një shkëlqim të shndritshëm.

Miracidet e gjalla që kanë dalë nga guaska lëshojnë një dritë të zbehtë kaltërosh me një kurorë mezi të dukshme të verdhë të qerpikëve, por 10-15 minuta pas vdekjes ato shfaqen si një dritë e ndritshme "e ndezur" jeshile e lehtë, dhe më pas dritë portokalli-kuqe.