प्रतिक्रिया की वर्षा प्रतिक्रिया तंत्र प्रतिक्रिया से अलग है। वर्षा प्रतिक्रिया (इम्यूनोलॉजिकल विधि)

एक एंटीबॉडी के साथ एक घुलनशील प्रतिजन की बातचीत में शामिल है, इसके बाद एक महीन दाने वाले अवक्षेप (अवक्षेप) की वर्षा होती है।

वर्षा प्रतिक्रिया आपको एक ज्ञात एंटीबॉडी जोड़कर या एक ज्ञात एंटीजन - एक अज्ञात एंटीबॉडी का उपयोग करके परीक्षण सामग्री में अज्ञात एंटीजन की उपस्थिति निर्धारित करने की अनुमति देती है। वर्षण बदतर हो रहा हैलवण के अभाव में। इष्टतम वर्षा पीएच = 7.0-7.4 की सीमा में है।

अवक्षेपण की क्रियाविधि एग्लूटीनेशन के समान होती है। प्रतिजन के साथ प्रतिक्रिया करने वाली प्रतिरक्षा प्रणाली के प्रभाव में, इसके फैलाव की डिग्री कम हो जाती है। सीरम और एंटीजन पूरी तरह से पारदर्शी होने चाहिए। वर्षा की स्थापना करते समय, एंटीजन के विभिन्न कमजोर पड़ने को एक सीरम कमजोर पड़ने में जोड़ा जा सकता है, या इसके विपरीत।

यदि प्रतिजन को प्रतिरक्षी पर परखनली में आरोपित कर दिया जाए तो वर्षा को बेहतर तरीके से दर्ज किया जाता है। इस मामले में, वलय के रूप में अवक्षेप की उपस्थिति देखी जाती है - वलय वर्षा। 2.5-3.5 मिमी के व्यास के साथ विशेष टेस्ट ट्यूबों में रिंग वर्षा की जाती है। सीरम में परीक्षण सामग्री या विभिन्न एंटीबॉडी में एंटीजन की संख्या निर्धारित करने के लिए, अगर वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है: 1% स्पष्ट अगर को कांच की स्लाइड में या पर डाला जाता है। अगर में बने विभिन्न कुओं में एंटीजन और एंटीबॉडी के घोल डाले जाते हैं, जो एक दूसरे की ओर फैलते हैं, जिससे वर्षा रेखाएं बनती हैं। निदान में वर्षा प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है (एस्कोली प्रतिक्रिया देखें)।

अगर में वर्षा डिप्थीरिया संस्कृतियों की विषाक्तता को निर्धारित करने की अनुमति देती है।

पर फोरेंसिक अनुसंधानवर्षा विशिष्ट अवक्षेपण सीरा की सहायता से रक्त, अंगों और ऊतकों की प्रजातियों की संबद्धता को स्थापित करने का कार्य करती है।

वर्षा - प्रतिजन (प्रिसिपिटिनोजेन) और एंटीबॉडी (प्रीसिपिटिन) के एक परिसर की वर्षा की प्रतिक्रिया। वर्षा एक प्रतिरक्षाविज्ञानी घटना है जो बीमार या टीकाकृत लोगों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी (देखें) की सामग्री के साथ-साथ प्रतिरक्षित जानवरों के रक्त में निर्धारित करना संभव बनाती है। मानक सीरा का उपयोग करते समय, वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग विभिन्न मूल के घुलनशील प्रतिजनों को अनुमापन करने के लिए किया जा सकता है (देखें)।

वर्षा की प्रतिक्रिया को स्थापित करने के सबसे सरल रूप में, कई कमजोर पड़ने की श्रृंखला में परीक्षण सीरम को एंटीजन की निरंतर मात्रा के साथ टेस्ट ट्यूब की एक श्रृंखला में लेयर करके जोड़ा जाता है। 30-60 मिनट के बाद। दो तरल पदार्थों की सीमा पर कमरे के तापमान पर ऊष्मायन ने मैलापन का एक वलय बनाया - वलय वर्षा। सीरम की न्यूनतम मात्रा जो वर्षा प्रतिक्रिया देती है उसे एंटीसेरम टिटर के रूप में लिया जाता है। जब प्रतिक्रिया को एक मानक एंटीसेरम के साथ उलट दिया जाता है, तो विभिन्न जैविक तरल पदार्थों में एंटीजन की सापेक्ष एकाग्रता का अनुमान लगाना संभव है।

उपरोक्त विधि के आधार पर एंटीबॉडी और एंटीजन के अनुमापन के परिणामों में पूर्ण मात्रात्मक अभिव्यक्ति नहीं होती है। एंटीबॉडी की मात्रा को निर्धारित करने के लिए, हीडलबर्गर, कबाट (एम। हीडलबर्गर, ई। कबाट) और अन्य विकसित हुए। मात्रात्मक पद्धतिवर्षा प्रतिक्रिया, जो तथाकथित तुल्यता क्षेत्र का पता लगाने पर आधारित है। जब एंटीजन की आयु-उपयुक्त मात्रा को एंटीसेरम की निरंतर मात्रा के साथ मिलाया जाता है, तो शुरू में बनने वाले अवक्षेप की मात्रा बढ़ जाती है और फिर अतिरिक्त एंटीजन में एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की घुलनशीलता में वृद्धि के कारण फिर से घट जाती है। यदि हम सभी टेस्ट ट्यूबों में सतह पर तैरनेवाला में एंटीबॉडी की सामग्री का निर्धारण करते हैं, तो यह पता चलता है कि एक पंक्ति के मध्य टेस्ट ट्यूब में या यहां तक ​​कि एक टेस्ट ट्यूब में भी सतह पर तैरनेवाला में कोई एंटीबॉडी नहीं हैं; वहीं, यहां सबसे बड़ा अवक्षेप बनता है। चूंकि तुल्यता क्षेत्र में अभिकारकों के मिश्रण में पेश किया गया संपूर्ण प्रतिजन भी अवक्षेप में शामिल होता है, प्रोटीन की मात्रा से प्रतिजन प्रोटीन अवक्षेप को घटाने के बाद, परीक्षण सीरम की दी गई मात्रा में प्रतिरक्षी सामग्री का सटीक मान प्राप्त किया जाता है। ठंडा खारा से अच्छी तरह धोने के बाद अवक्षेप की प्रोटीन सामग्री नाइट्रोजन या किसी वर्णमिति विधि द्वारा निर्धारित की जाती है।

वर्षा प्रतिक्रिया के मूल्य का मूल्यांकन करते समय निदान विधियह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि एंटीबॉडी जिनमें प्रीसिपिटिन के गुण नहीं होते हैं और इसलिए, एंटीजन के साथ बातचीत करते समय एक अवक्षेप नहीं बनाते हैं, प्रतिरक्षा सेरा में मौजूद हो सकते हैं। इनमें मुख्य रूप से अपूर्ण एंटीबॉडी, साथ ही गामा-ए ग्लोब्युलिन के समूह से संबंधित कुछ अन्य एंटीबॉडी शामिल हैं।

प्रतिजन को अवक्षेपित करने के लिए एंटीसेरम की क्षमता 65-70 ° तक गर्म करके, कार्बनिक सॉल्वैंट्स के साथ उपचार, एक अम्लीय माध्यम में कमी [Isliker (N. Isliker), A.Ya। कुहलबर्ग]। एंटीसेरम के साथ वर्षा की घटना, जानबूझकर प्रीसिपिटिन युक्त, एक निश्चित तापमान, लवण और हाइड्रोजन आयनों की एकाग्रता पर ही संभव है। वर्षा की प्रतिक्रिया 25-37 डिग्री पर सबसे तेजी से आगे बढ़ती है। अवक्षेप के निर्माण के लिए एक अनिवार्य शर्त आइसोटोनिक सांद्रता (0.85% NaCl समाधान) में सोडियम क्लोराइड की उपस्थिति है। जब NaCl की सांद्रता 15% तक बढ़ जाती है, तो पॉलीसेकेराइड प्रकृति के प्रतिजन द्वारा निर्मित अवक्षेप आंशिक रूप से घुल जाते हैं, जिसका उपयोग शुद्ध एंटीबॉडी निकालने के लिए किया जा सकता है। एक प्रोटीन प्रकृति के प्रतिजनों के साथ अवक्षेपण प्रतिक्रिया 0.85% और 15% दोनों में समान दर और पूर्णता से आगे बढ़ती है NaCl समाधान. एक अवक्षेप के निर्माण के लिए हाइड्रोजन आयनों की इष्टतम सांद्रता पीएच मान से 5.0 से 9.0 तक मेल खाती है।

प्रयोगशाला अभ्यास में, वर्षा प्रतिक्रिया के विभिन्न संशोधनों का उपयोग किया जाता है। विशेष रूप से, थर्मोप्रेजर्वेशन प्रतिक्रिया का उपयोग जीवाणु प्रतिजनों का पता लगाने के लिए किया जाता है। बिसहरिया, बोटुलिज़्म, आदि, थर्मल विकृतीकरण (कोक्टोएंटिजेन्स) के अधीन नहीं हैं। यह अभिक्रिया वलय अवक्षेपण अभिक्रिया से केवल इस मायने में भिन्न है कि उबली हुई परीक्षण सामग्री के निस्यंद का उपयोग प्रतिजन के रूप में किया जाता है (प्रतिक्रिया A देखें)।

वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग करके एंटीजन के एक जटिल मिश्रण का विश्लेषण करते समय, मिश्रण के व्यक्तिगत घटकों के गुणों को चिह्नित करना असंभव है। इस समस्या को हल करने के लिए, अगर और इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस में वर्षा के तरीकों का सहारा लें। Ouchterlony (O. Ouchterlony) के सबसे आम संशोधन में अगर में वर्षा की विधि इस तथ्य पर आधारित है कि एंटीजन और एंटीसेरम, अगर की एक पतली परत में एक दूसरे की ओर फैलते हैं, तो वे मिलने पर एक वर्षा रेखा बनाते हैं। ऐसी रेखाओं की संख्या से, प्रतिजनों के दिए गए मिश्रण में निहित घटकों की संख्या का अंदाजा लगाया जा सकता है। Ouhgerlonu विधि विभिन्न एंटीजेनिक मिश्रणों की तुलना करना और उनमें मौजूद घटकों की संबंधितता की डिग्री निर्धारित करना संभव बनाती है। अगर में समान प्रसार दर वाले पदार्थों वाले जटिल एंटीजेनिक मिश्रण का विश्लेषण करते हैं, बड़ी मददइम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस की विधि ला सकते हैं। प्रतिजनों के मिश्रण को एक आगर प्लेट में विद्युत क्षेत्र में प्रारंभिक रूप से अलग किया जाता है, जिसके बाद इसे विकसित किया जाता है अलग - अलग घटकएंटीसेरम एंटीसेरम को लाइन के समानांतर अगर में बनाई गई खाई में पेश किया जाता है जिसके साथ एंटीजन वैद्युतकणसंचलन के दौरान चले गए। प्रत्येक एंटीजन एंटीसेरम के साथ एक व्यक्तिगत वर्षा चाप देता है। इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस का व्यापक रूप से विश्लेषण के लिए उपयोग किया जाता है रोग संबंधी असामान्यताएंसीरम प्रोटीन में, साथ ही ऊतक और जीवाणु प्रतिजनों के प्रतिरक्षाविज्ञानी विश्लेषण में।

फोरेंसिक वर्षा. वर्षा का उपयोग फोरेंसिक चिकित्सा में रक्त की प्रजातियों, अंगों के भागों और ऊतकों को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। कई खोजी मामलों में, अपराध के उपकरणों पर पाए जाने वाले रक्त के प्रकार, अपराधी या पीड़ित के कपड़े आदि को स्थापित करना आवश्यक है। वर्षा प्रतिक्रिया के लिए, खरगोशों, मुर्गों और बकरियों का टीकाकरण करके प्राप्त अवक्षेपण सीरा विभिन्न जानवरों के प्रोटीन के साथ प्रयोग किया जाता है। सीरम आमतौर पर तैयार किए जाते हैं जो मानव, घोड़े, बिल्ली, चिकन, सुअर, कुत्ते, पशु. उनके पास कम से कम 1:10,000 का अनुमापांक होना चाहिए और पर्याप्त रूप से विशिष्ट होना चाहिए। अध्ययन किए गए स्थान या रक्त की परत से अर्क तैयार किया जाता है शारीरिक खारा, जिन्हें तब अवक्षेपित सीरा के साथ परीक्षण किया जाता है। प्रोटीन के प्रकार को स्थापित माना जाता है यदि एक अवक्षेपण सीरा एक उपयुक्त नियंत्रण प्रतिक्रिया के साथ परीक्षण रक्त से निकालने के साथ एक अवक्षेप बनाता है। वर्षा की प्रतिक्रिया मानव या पशु ऊतकों और अंगों में प्रोटीन के प्रकार को भी निर्धारित कर सकती है। आमतौर पर, शंकु के आकार के अंत के साथ टेस्ट ट्यूब में वर्षा प्रतिक्रिया की जाती है। बादल के अर्क प्राप्त होने पर, ऑचटरलॉन के अनुसार अगर में वर्षा की प्रतिक्रिया की जाती है।

वर्षा प्रतिक्रिया (आरपी) एक इलेक्ट्रोलाइट की उपस्थिति में एंटीबॉडी की कार्रवाई के तहत घुलनशील एंटीजन की वर्षा है। दृश्य प्रतिक्रिया प्रभाव (वर्षा घटना) - गंदगी (बादल वलय या तलछट का बनना - अवक्षेपण)।

कई संक्रामक रोगों में अज्ञात प्रतिजन का पता लगाने के लिए RP का उपयोग किया जाता है: एंथ्रेक्स, टुलारेमिया, मेनिन्जाइटिस, चेचक के साथ. फोरेंसिक चिकित्सा में, इसका उपयोग रक्त, शुक्राणु की प्रजातियों को निर्धारित करने के लिए किया जाता है; स्वच्छता और स्वच्छ अनुसंधान में - मिथ्याकरण स्थापित करने के लिए खाद्य उत्पाद. आरपी बहुत अलग है। उच्च संवेदनशीलऔर आपको 1: 1,000,000 और 1: 10,000,000 के कमजोर पड़ने पर एंटीजन का पता लगाने की अनुमति देता है।

वर्षा प्रतिक्रिया के घटक।

1. एंटीजन (precipitinogen) -यह एक एंटीजन है आणविक प्रकृति, जो बारीक छितरी हुई (घुलनशील) अवस्था में है। Precipitinogens विभिन्न ऊतक lysates या अर्क, आदि हैं। Precipitinogen एंटीजन कणों के आकार में agglutinogen से भिन्न होता है। एग्लूटीनोजेनयह है सेल आकार(ये पूरी कोशिकाओं को नष्ट नहीं कर रहे हैं), लेकिन आयाम प्रीसिपिटिनोजेनइसके अनुरूप आणविक आकार(ये प्रोटीन और कार्बोहाइड्रेट या लिपिड के साथ उनके कॉम्प्लेक्स हैं)। प्रीसिपिटिनोजेन घोल पारदर्शी।

2. एंटीबॉडी (अवक्षेप)मानव सीरम में या प्रतिरक्षा निदान अवक्षेपण सीरा में पाए जाते हैं जिनमें ज्ञात एंटीबॉडी होते हैं।

3. इलेक्ट्रोलाइट- आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल।

प्रीसिपिटिनोजेन प्राप्त करना.

यह सामग्री को पीसकर और उसमें से प्रोटीन एंटीजन को उबालकर या अन्य तरीकों से निकालकर प्राप्त किया जाता है।

प्रीसिपिटिनोजेन्स के उदाहरण: lysates या अर्क विभिन्न निकायऔर ऊतक, विदेशी रक्त सीरम (सीरम is .) समाधान, सबसे पहले, विभिन्न प्रोटीन),रोगाणुओं के शोरबा संस्कृतियों के छानना, रोगाणुओं के नमक के अर्क, ऑटोलिसेट्स आदि।

अवक्षेपण सीरा प्राप्त करना।

उपयुक्त प्रीसिपिटिनोजेन्स के साथ खरगोशों के हाइपरइम्यूनाइजेशन द्वारा प्राप्त किया गया। इस तरह के सीरा में उन प्रीसिपिटिनोजेन्स के प्रति एंटीबॉडी होते हैं जिनके साथ खरगोशों को प्रतिरक्षित किया गया था।

अवक्षेपण सेरा के उदाहरण: वेग से गिराना एंथ्रेक्स सीरम (एंथ्रेक्स एंटीजन के लिए एंटीबॉडी होते हैं), एंटीमेनिंगोकोकल सीरम उपजी(मेनिन्जाइटिस के प्रेरक एजेंट के एंटीजन के खिलाफ एंटीबॉडी होते हैं), आदि।

अनुमापांकप्रीसिपिटेटिंग सीरम, प्रीसिपिटिनोजेन का उच्चतम तनुकरण है जिस पर सीरम अभी भी अवक्षेपण प्रतिक्रिया देता है।

आरपी सेट करने के तरीके।

1. वलय अवक्षेपण अभिक्रिया -विशेष अवक्षेपण ट्यूबों (व्यास - 0.4-0.5 सेमी, ऊंचाई - 7-8 सेमी) में किया जाता है। 0.2 - 0.3 मिलीलीटर अवक्षेपण सीरम को परखनली में मिलाया जाता है और समान मात्रा में प्रीसिपिटिनोजेन को एक पाश्चर पिपेट की लंबी नाक के साथ दीवार के साथ सावधानी से स्तरित किया जाता है। फिर, एक क्षैतिज स्थिति से सावधानीपूर्वक, ट्यूबों को लंबवत रखा जाता है।

प्रतिक्रिया परिणामों के लिए लेखांकन एंटीजन-एंटीबॉडी की सीमा पर एक सफेद अंगूठी की उपस्थिति से किया जाता है। सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ ऐसी अंगूठी देखी जाती है। इस मामले में, एंटीजन एंटीबॉडी से मेल खाता है और उनका बंधन होता है।

यदि अंगों और ऊतकों के उबले और फ़िल्टर किए गए जलीय अर्क को प्रीसिपिटिनोजेन के रूप में उपयोग किया जाता है, तो प्रतिक्रिया को प्रतिक्रिया कहा जाता है थर्मोरिंग वर्षा (उदाहरण के लिए, एंथ्रेक्स का निदान करते समय)।

2. जेल में वर्षा की प्रतिक्रिया -पेट्री डिश में या कांच की स्लाइड पर किया जाता है, जहां अगर जेल की एक परत रखी जाती है। जब जेल जम जाता है, तो उसमें कुओं को काट दिया जाता है, जिसमें एंटीजन या एंटीबॉडी, या दोनों रखे जाते हैं। अंतर करना 2 तरीकेजेल में आरपी:

एक विधी सरल (रेडियल) इम्यूनोडिफ्यूजन: प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (एंटीजन या एंटीबॉडी) के घटकों में से एक को कुएं में रखा जाता है, और दूसरे घटक को अगर के साथ मिलाया जाता है; पर एक सकारात्मक परिणाम (एंटीजन एक एंटीबॉडी से मेल खाती है) कुएं के चारों ओर बनता है अवक्षेपित वलय ;

बी) विधि डबल इम्यूनोडिफ्यूजन: एंटीबॉडी और एंटीजन दोनों को अलग-अलग कुओं में रखा जाता है, वे अगर जेल में एक दूसरे की ओर फैलते हैं; सकारात्मक परिणाम के साथ जहां एंटीबॉडी और एंटीजन मिलते हैं वर्षा की रेखाएं .

एक जेल में आरपी का एक उदाहरण Ouchterlony डबल इम्यूनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया है डिप्थीरिया के निदान में

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस -यह एक ऐसी विधि है जो वैद्युतकणसंचलन विधि और वर्षा प्रतिक्रिया को जोड़ती है। एंटीजन का मिश्रण (उदाहरण के लिए, सीरम प्रोटीन) वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके जेल में अलग किया जाता है। फिर, वांछित प्रोटीन (अज्ञात एंटीजन) को खोजने और निर्धारित करने के लिए, एक नैदानिक ​​अवक्षेपण सीरम का उपयोग किया जाता है, जिसमें इस प्रोटीन (ज्ञात एंटीबॉडी) के एंटीबॉडी होते हैं। ऐसा करने के लिए, डायग्नोस्टिक सीरम को प्रोटीन के समानांतर खांचे में पेश किया जाता है। यदि प्रोटीन में से एक है जो सीरम में एंटीबॉडी से मेल खाता है, तो इसके चारों ओर बनते हैं वर्षा की रेखाएं.

शीघ्र प्रतिक्रिया- आरपी (सेअव्य. प्रीसी-पिटो- अवक्षेप,) एक घुलनशील आणविक प्रतिजन के एक परिसर का निर्माण और अवक्षेपण है, जिसमें मैलापन के रूप में एंटीबॉडी होते हैं, जिसे कहा जाता है अवक्षेपण।यह प्रतिजन और प्रतिरक्षी को समान मात्रा में मिलाने से बनता है; उनमें से एक की अधिकता शिक्षा के स्तर को कम करती है प्रतिरक्षा परिसर. एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के विपरीत, वर्षा प्रतिक्रिया के लिए प्रतिजन घुलनशील यौगिक होते हैं, जिनमें से कणों का आकार अणुओं के आकार तक पहुंचता है। ये प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट और लिपिड के साथ प्रोटीन के कॉम्प्लेक्स, बैक्टीरियल अर्क, विभिन्न डिसेट्स या माइक्रोबियल ब्रोथ कल्चर के फिल्टर हो सकते हैं। वर्षा प्रतिक्रिया में शामिल एंटीबॉडी को प्रीसिपिटिन कहा जाता है। परिणामी ठीक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का पता वर्षा प्रतिक्रिया के मंचन के कुछ तरीकों से लगाया जाता है।
वलय अवक्षेपण अभिक्रिया सबसे पहले एस्कोली द्वारा प्रस्तावित की गई थी। इसका उपयोग एंथ्रेक्स, प्लेग, टुलारेमिया, मेनिन्जाइटिस के निदान में किया जाता है। विधि सरल और सुलभ है।
एक विशिष्ट प्रतिरक्षा अवक्षेपण सीरम को संकीर्ण अवक्षेपण नलियों में डाला जाता है और प्रतिजन को बहुत सावधानी से उस पर स्तरित किया जाता है। एक प्रतिजन के रूप में, उदाहरण के लिए, एंथ्रेक्स का निदान करते समय, त्वचा के टुकड़े, ऊन, गिरे हुए जानवर की खाल आदि को लिया जाता है। उन्हें उबाला जाता है, तरल को फ़िल्टर किया जाता है और प्रतिजन के रूप में उपयोग किया जाता है। एक वलय की उपस्थिति - दो तरल पदार्थों की सीमा पर एक अवक्षेप - संबंधित प्रतिजन की उपस्थिति को इंगित करता है।
अगर जेल वर्षा प्रतिक्रिया, या प्रसार वर्षा विधि, जटिल पानी में घुलनशील एंटीजेनिक मिश्रण की संरचना का विस्तार से अध्ययन करना संभव बनाती है। प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, एक जेल (अर्ध-तरल या मोटा अगर) का उपयोग किया जाता है। एंटीजन बनाने वाला प्रत्येक घटक एक अलग दर पर संबंधित एंटीबॉडी की ओर फैलता है। इसलिए, विभिन्न एंटीजन और संबंधित एंटीबॉडी के परिसरों में स्थित हैं विभिन्न क्षेत्रोंजेल, जहां वर्षा रेखाएं बनती हैं। प्रत्येक पंक्ति केवल एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से मेल खाती है। वर्षा की प्रतिक्रिया आमतौर पर कमरे के तापमान पर निर्धारित की जाती है।
प्राप्त इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस की विधि व्यापक उपयोगमें पिछले साल कारोगाणुओं की प्रतिजनी संरचना के अध्ययन में। एंटीजन कॉम्प्लेक्स को कुएं में रखा जाता है, जो कि अगर जेल के केंद्र में स्थित होता है, जिसे प्लेट पर डाला जाता है। फिर, अगर जेल के माध्यम से एक विद्युत प्रवाह पारित किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप परिसर में शामिल विभिन्न एंटीजन क्षेत्र में चले जाते हैं। विद्युत प्रवाहउनकी इलेक्ट्रोफोरेटिक गतिशीलता पर निर्भर करता है। वैद्युतकणसंचलन पूरा होने के बाद, एक विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम को प्लेट के किनारे स्थित खाई में पेश किया जाता है और एक नम कक्ष में रखा जाता है। उन जगहों पर जहां एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है, वर्षा रेखाएं दिखाई देती हैं।

वर्षा प्रतिक्रियाएं रखनाटेस्ट ट्यूब में (रिंग वर्षा प्रतिक्रिया),जैल, पोषक तत्व मीडिया, आदि में। चौड़ा वितरण प्राप्तअगर या agarose के अर्ध-तरल जेल में वर्षा प्रतिक्रिया की किस्में: औचर्लोनी के अनुसार डबल इम्यूनोडिफ्यूजन। रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिसऔर आदि

रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया. पिघला हुआ अगर जेल के साथ प्रतिरक्षा सीरम समान रूप से कांच पर डाला जाता है। जेल में जमने के बाद कुएं बनाए जाते हैं जिनमें एंटीजन को विभिन्न तनुकरणों में रखा जाता है। एंटीजन, जेल में फैलता है, एंटीबॉडी के साथ कुओं के चारों ओर वर्षा क्षेत्र बनाता है (चित्र। 13.7)। अवक्षेपण वलय का व्यास प्रतिजन सांद्रता के समानुपाती होता है। प्रतिक्रिया का उपयोग विभिन्न वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन के रक्त स्तर, पूरक प्रणाली के घटकों आदि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस- वैद्युतकणसंचलन और इम्युनोप्रेरीगेशन की विधि का एक संयोजन: एंटीजन के मिश्रण को जेल के कुओं में पेश किया जाता है और वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके जेल में अलग किया जाता है। फिर, वैद्युतकणसंचलन क्षेत्रों के समानांतर, एक प्रतिरक्षा सीरम को खांचे में पेश किया जाता है, जिसके एंटीबॉडी, जेल में फैलते हुए, वर्षा रेखा के प्रतिजन के साथ बैठक बिंदु पर बनते हैं।

इम्यून इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी- रोगाणुओं की इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, अधिक बार वायरस, उपयुक्त एंटीबॉडी के साथ इलाज किया जाता है। प्रतिरक्षा सीरम के साथ इलाज किए गए वायरस प्रतिरक्षा समुच्चय (माइक्रोप्रिसिपिटेट्स) बनाते हैं। विषाणुओं के चारों ओर, एंटीबॉडी का एक "कोरोला" बनता है, जो फॉस्फोटुंगस्टिक एसिड या अन्य इलेक्ट्रॉन-ऑप्टिकल घने तैयारी के विपरीत होता है।

123. सूक्ष्मजीवों, तंत्र, सेटिंग के तरीकों की विषाक्तता को निर्धारित करने के लिए जेल में वर्षा प्रतिक्रिया।

वर्षा प्रतिक्रिया (आरपी)- यह टर्बिडिटी के रूप में एंटीबॉडी के साथ घुलनशील आणविक प्रतिजन के एक परिसर का निर्माण और वर्षा है, जिसे अवक्षेप कहा जाता है। यह प्रतिजन और प्रतिरक्षी को समान मात्रा में मिलाने से बनता है; उनमें से एक की अधिकता प्रतिरक्षा परिसर के गठन के स्तर को कम कर देती है।

1946 में, जे। ओडिन ने सरल प्रसार विधि का प्रस्ताव रखा, जिसके अनुसार वर्षा प्रतिक्रिया के घटकों में से एक, आमतौर पर सीरम, जेल में होता है, और दूसरा - एंटीजन - के रूप में पहले एक पर स्तरित होता है समाधान।

एंटीजन, जेल में फैलता है, इसमें एंटीबॉडी के साथ सफेद वर्षा रेखाएं बनाता है, जो साइड रोशनी के तहत स्पष्ट रूप से दिखाई देती हैं। 1948 में, जे. ओचटरलोनू ने द्वि-आयामी काउंटर प्रसार का एक और भी सरल और अधिक सुविधाजनक तरीका विकसित किया, जो विभिन्न एंटीजन और सीरा की प्रत्यक्ष तुलना की अनुमति देता है। क्रॉस प्रतिक्रियाओं के अध्ययन में यह विधि भी बहुत मूल्यवान है।

Ouchterlon के अनुसार प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, शारीरिक खारा में तैयार 1% अगर का उपयोग किया जाता है, जिसे केंद्र से 1-2 सेमी की दूरी पर परिधि के चारों ओर 0.5 सेमी की परत के साथ पेट्री डिश में डाला जाता है। डायग्नोस्टिक अवक्षेपण सीरम को केंद्रीय कुएं में डाला जाता है, और इसकी तुलना में समरूप और एंटीजन का एक घोल परिधीय कुओं में डाला जाता है। परिणाम कमरे के तापमान पर 24, 48 और 72 घंटों के ऊष्मायन के बाद दर्ज किए जाते हैं।

एंटीबॉडी और एंटीजन एक दूसरे की ओर फैलते हैं, और उन क्षेत्रों में जहां उनके समकक्ष सांद्रता बनाई जाती है, चापाकार वर्षा बैंड बनते हैं। यदि दो निकटवर्ती कुओं से आने वाले अवक्षेपण बैंड आपस में मिल जाते हैं, तो यह परीक्षण द्रव में कई एंटीजेनिक घटकों की उपस्थिति को इंगित करता है। Ouchterlohn के अनुसार काउंटर प्रसार प्रतिक्रिया अक्सर डिप्थीरिया जैसे बैक्टीरिया की विषाक्तता को निर्धारित करने के लिए उपयोग की जाती है।

जेल वर्षा विधि का एक और विकास इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस है। यह शब्द एक ऐसी विधि को संदर्भित करता है जो एंटीजन के मिश्रण के इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण को जोड़ती है और एक ही अगर जेल प्लेट पर ऑउचरलोहन काउंटर डिफ्यूजन को जोड़ती है। फिर अवक्षेपण सीरम को वैद्युतकणसंचलन पृथक्करण की दिशा के समानांतर जेल में कटे हुए खांचे में डाला जाता है।

प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप बनने वाली वर्षा रेखाओं में प्रतिजन अंशों के वैद्युतकणसंचलन आंदोलन की दिशा में लम्बी चापों का रूप होता है। इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस घुलनशील एंटीजन के जटिल मिश्रण की संरचना को निर्धारित करना संभव बनाता है जिसमें 30 घटक होते हैं, और इसलिए यह एक मूल्यवान निदान पद्धति है।

शीघ्र प्रतिक्रिया(RP) को Ag (precipitinogen) के घोल से अवक्षेपण कहा जाता है जब यह प्रतिरक्षा सीरम (precipitin) और इलेक्ट्रोलाइट के संपर्क में आता है।

आरपी के माध्यम से, एक एंटीजन का पता 1:100,000 और यहां तक ​​कि 1:1,000,000 के तनुकरणों में लगाया जा सकता है, यानी इतनी कम मात्रा में कि रासायनिक रूप से पता नहीं लगाया जा सकता है।

Precipitinogens प्रोटीन-PS प्राकृतिक के अल्ट्रामाइक्रोस्कोपिक कण हैं: माइक्रोन, अंगों और टीसी, पैट सामग्री से अर्क; एक जीवाणु कोशिका के क्षय उत्पाद, उनके लाइसेट्स, छानना। Precipitinogens ऊष्मीय रूप से स्थिर होते हैं, इसलिए, उन्हें प्राप्त करने के लिए, सामग्री को उबाला जाता है।

RP में, तरल पारदर्शी Ag का उपयोग किया जाता है।

प्रीसिपिटेटिंग सीरा आमतौर पर कई महीनों के चक्रों में खरगोशों के हाइपरइम्यूनाइजेशन द्वारा प्राप्त किया जाता है, उन्हें बैक्टीरिया के निलंबन, शोरबा कल्चर फिल्ट्रेट्स, ऑटोलिसेट्स, सूक्ष्मजीवों के नमक के अर्क और मट्ठा प्रोटीन के साथ पेश किया जाता है।

आरपी एस्कोली द्वारा मंचित।एक संकीर्ण टेस्ट ट्यूब में एक छोटी मात्रा में undiluted अवक्षेपण सीरम के साथ, इसे एक झुकी हुई स्थिति में रखते हुए, Ag की समान मात्रा को एक पिपेट के साथ दीवार के साथ धीरे-धीरे स्तरित किया जाता है।

दो तरल पदार्थों को न मिलाने के लिए, परखनली को सावधानी से लंबवत रखा जाता है। टेस्ट ट्यूब में सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, सीरम और अध्ययन किए गए अर्क के बीच की सीमा पर 5-10 मिनट के बाद एक भूरा-सफेद अंगूठी दिखाई देती है। प्रतिक्रिया आवश्यक रूप से सीरम और एंटीजन नियंत्रण के साथ होती है।

एस्कोली प्रतिक्रिया का उपयोग एंथ्रेक्स, टुलारेमिया, प्लेग एजी की पहचान के लिए किया जाता है।

मांस, मछली के मिथ्याकरण का पता लगाने में स्वच्छता अभ्यास में प्रोटीन की प्रजातियों, विशेष रूप से खून के धब्बे के निर्धारण के लिए फोरेंसिक दवा में भी आवेदन मिला है। आटा उत्पाद, दूध में अशुद्धियाँ। इस आरपी का नुकसान अवक्षेप (रिंग) की अस्थिरता है, जो मामूली झटकों के साथ भी गायब हो जाता है। इसके अलावा, इसका उपयोग यह निर्धारित करने के लिए नहीं किया जा सकता है मात्रात्मक संरचनाएजी अवक्षेप के निर्माण में शामिल है।

ओचर्लोनी वर्षा प्रतिक्रिया।अगर जेल के कुओं में पेट्री डिश पर प्रतिक्रिया डाली जाती है।

अच्छी तरह से धोए गए पारदर्शी अगर का उपयोग जेल के रूप में किया जाता है। एजी और सीरम को अगर जेल में डाला जाता है ताकि उनमें से कुएं एक निश्चित दूरी पर हों। एक-दूसरे के प्रति विसरण और एक-दूसरे से जुड़कर एंटीबॉडी और एंटीजन 24-48 घंटों में एक सफेद बैंड के रूप में एक प्रतिरक्षा परिसर बनाते हैं।

एक जटिल प्रीसिपिटिनोजेन की उपस्थिति में, कई बैंड दिखाई देते हैं। उसी समय, सीरोलॉजिकल रूप से संबंधित एंटीजन के बैंड एक साथ विलीन हो जाते हैं, और विषम लोगों के बैंड प्रतिच्छेद करते हैं, जिससे अध्ययन के तहत पदार्थों की एंटीजेनिक संरचना का विवरण निर्धारित करना संभव हो जाता है।

यह एक्सोटॉक्सिन उत्पन्न करने वाले वायरस और बैक्टीरिया के कारण होने वाली बीमारियों के निदान के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

3.अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म (RNGA) की प्रतिक्रिया।इसका उपयोग पॉलीसेकेराइड, प्रोटीन, बैक्टीरिया के अर्क, माइकोप्लाज्मा, रिकेट्सिया और वायरस का पता लगाने के लिए किया जाता है, जिनके एग्लूटीनिन के साथ प्रतिरक्षा परिसरों को पारंपरिक शास्त्रीय आरए में नहीं देखा जा सकता है, या रोगियों के सीरा में इन अत्यधिक बिखरे हुए पदार्थों और सबसे छोटे सूक्ष्मजीवों का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। .

संक्रामक रोगों के सेरोडायग्नोसिस के लिए आरएनजीए।रोगियों के सीरा में एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए RNHA का उपयोग करते हुए, एरिथ्रोसाइट एंटीजन डायग्नोस्टिक्स तैयार किए जाते हैं।

शीघ्र प्रतिक्रिया।

ऐसा करने के लिए, एरिथ्रोसाइट्स को 1:20,000–1:200,000 के तनुकरण पर टैनिन समाधान के साथ 15 मिनट के लिए उपचारित किया जाता है, जो उन्हें स्थिरता देता है और उनकी सोखने की क्षमता को बढ़ाता है। फिर उन्हें एक ज्ञात एंटीजन के साथ मिलाया जाता है और 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 2 घंटे के लिए ऊष्मायन किया जाता है। एंटीजन-संवेदी एरिथ्रोसाइट्स को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ 2-3 बार धोया जाता है और सीरम में जोड़ा जाता है, पतला होता है और कुओं में डाला जाता है। पैनल।

बरकरार और एंटीजन-लोडेड एरिथ्रोसाइट्स के निलंबन, जो सीरा में जोड़े जाते हैं, स्पष्ट रूप से सकारात्मक और नकारात्मक प्रतिक्रियाएं देते हैं, नियंत्रण के रूप में कार्य करते हैं।

थर्मोस्टैट में ऊष्मायन के 2 घंटे बाद प्रतिक्रिया के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है और प्लसस के साथ मूल्यांकन किया जाता है: "++++" - एरिथ्रोसाइट्स एक छतरी के रूप में कुएं को कवर करते हैं दांतेदार किनारे; "-" - "बटन" के रूप में लाल रक्त कोशिकाओं का संचय

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रिंग वर्षा प्रतिक्रिया

रिंग आसंजन प्रतिक्रिया सबसे सरल में से एक है सीरोलॉजिकल तरीके. यह संकीर्ण अवक्षेपण नलियों में किया जाता है। सबसे पहले, कई तनुकरणों (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) में लिए गए प्रतिजन का एक स्पष्ट समाधान सभी परखनलियों में समान रूप से डाला जाता है।

अभिकर्मकों के संपर्क की सीमा पर एंटीजन और एंटीबॉडी का कनेक्शन होता है। इस बातचीत के परिणामस्वरूप, सकारात्मक मामलों में (जब एंटीजन एंटीबॉडी से मेल खाता है), थोड़ी देर के बाद, एक अवक्षेप एक ओपेलेसेंट रिंग के रूप में बनता है।

प्रतिक्रिया मिली विस्तृत आवेदनमें मेडिकल अभ्यास करनाऊन, खाल, जानवरों के मांस (एस्कोली प्रतिक्रिया) में एंथ्रेक्स एंटीजन का पता लगाने के लिए; रोगियों या वस्तुओं से प्राप्त रोग संबंधी सामग्री में संक्रामक रोगों के अन्य रोगजनकों का पता लगाने के लिए बाहरी वातावरण, साथ ही इसमें फोरेंसिक चिकित्सा परीक्षाएक प्रोटीन की प्रजातियों का निर्धारण करने के लिए, विशेष रूप से, एक रक्त प्रोटीन या अन्य जैविक तरल पदार्थ।

ऑचटरलोनी इम्यूनोडिफ्यूजन

एक अग्र जेल पर वर्षा की प्रतिक्रिया की जा सकती है।

विधि इस तथ्य पर आधारित है कि एंटीजन और एंटीबॉडी के कण, उनके विभिन्न आकारों के कारण, जेल में अलग-अलग गति से फैलते हैं और परिणामस्वरूप, अलग-अलग दूरी पर चले जाते हैं। यह एंटीजन की अलग-अलग प्रणालियों को अलग करना संभव बनाता है जब वे मिश्रण में होते हैं, और इसलिए, बैक्टीरिया और जटिल प्रोटीन, सीरा और पशु ऊतकों की एंटीजेनिक संरचना का अध्ययन करना संभव बनाता है।

दृश्य और प्रभावी तरीकाओचर्लोनी द्वारा जेल वर्षा का सुझाव दिया गया था।

पेट्री डिश पर आगर के साथ छोटे-छोटे कुएं बनाए जाते हैं, जिन्हें एक दूसरे से कुछ दूरी पर काटा जाता है। उनमें से एक में एंटीजन डाला जाता है, दूसरे में सीरम। प्रतिक्रिया के घटक जेल में एक दूसरे की ओर फैलते हैं और वर्षा की एक दृश्य रेखा बनाते हैं जहां एंटीजन इसके लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के इष्टतम सांद्रता के साथ मिलते हैं। क्योंकि रिएजेंट कुओं से बाहर एकाग्र रूप से फैलते हैं, एक एंटीबॉडी कुएं के आसपास विभिन्न एंटीजन (या एक ही एंटीजन के अलग-अलग कमजोर पड़ने) के साथ कई कुओं को रखकर कई परख किए जा सकते हैं।

Ouchterlony प्रतिक्रिया एक ज्ञात सीरम से प्रतिजन की प्रकृति के बारे में निष्कर्ष निकालना संभव बनाती है और, इसके विपरीत, एक ज्ञात प्रतिजन से, एंटीबॉडी की प्रकृति निर्धारित की जाती है।

विधि का लाभ यह है कि यह जटिल मिश्रणों के प्रतिजनी घटकों की तुलना करने और उनकी समानता या अंतर का न्याय करने की अनुमति देता है। एंटीजन की समानता की तुलना करने के लिए, कुओं के साथ एक अगर तैयार किया जाता है: एंटीसेरम एक में डाला जाता है, और एंटीजन की तुलना दूसरों में की जाती है। यदि प्रतिजन भिन्न हैं, तो अवक्षेपण बैंड असमान रूप से स्थित होते हैं।

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस

हाल के वर्षों में, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस की विधि का उपयोग ठीक प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययनों के लिए किया गया है। विधि का वर्णन सबसे पहले पी.

1953 में ग्रैबर और के.ए. विलियम्स। यह इम्यूनोडिफ्यूजन के साथ कांच की प्लेटों पर अगर जेल वैद्युतकणसंचलन का एक संयोजन है। शुरुआत में, एंटीजन का एक इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण किया जाता है, जो अक्सर प्रोटीन या अन्य अणुओं का मिश्रण होता है। ऐसा करने के लिए, एंटीजन को अग्र में पहले से एक अच्छी तरह से काटकर पेश किया जाता है, और अगर प्लेट को कुछ समय के लिए प्रत्यक्ष विद्युत प्रवाह के क्षेत्र में रखा जाता है।

की वजह से अलग गतिअणुओं की गति प्रतिजन को उसके घटक भागों में अलग करना है। उसके बाद, अवक्षेपित प्रतिरक्षा सीरम को वर्तमान प्रवाह के समानांतर दिशा में कटे हुए खांचे में पेश किया जाता है।

एंटीजन और एंटीसेरम जेल में एक दूसरे की ओर फैलते हैं।

वर्षण

प्रत्येक प्रतिजन एक चाप के रूप में वर्षा का एक क्षेत्र देता है जिसके अनुरूप एंटीबॉडी होते हैं। इन रेखाओं की संख्या, स्थिति और आकार से मूल प्रतिजन मिश्रण की संरचना का अंदाजा लगाया जा सकता है।

फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया

1924 में रेमन द्वारा विधि प्रस्तावित की गई थी।

यह इस तथ्य पर आधारित है कि कुछ शर्तों के तहत एंटीटॉक्सिक सीरम के साथ विष का मिश्रण मैलापन और वर्षा देता है। इस मामले में, प्रतिक्रिया पहले उन टेस्ट ट्यूबों में होती है जहां एंटीटॉक्सिन की मात्रा उस खुराक से मेल खाती है जो इस मात्रा को पूरी तरह से निष्क्रिय कर देती है।

इसलिए, यदि विष की ताकत ज्ञात हो, तो अज्ञात परीक्षण सीरम में एंटीटॉक्सिन की मात्रा निर्धारित की जा सकती है। ऐसा करने के लिए, परीक्षण सीरम के कई तनुकरण तैयार किए जाते हैं, प्रत्येक तनुकरण में समान मात्रा में एक ज्ञात विष मिलाया जाता है, जिसके बाद यह देखा जाता है कि कौन सी परखनली पहले प्रवाहित होगी (समाधान की मैलापन)। प्रारंभिक flocculation निर्धारित करें। फिर गणना की जाती है।

उदाहरण के लिए, परीक्षण सीरम में एंटी-डिप्थीरिया एंटीबॉडी की एकाग्रता को निर्धारित करना आवश्यक है। प्रतिक्रिया डिप्थीरिया विष का उपयोग करती है जिसमें प्रति 1 मिलीलीटर 50 एलएफ होता है (एलएफ विष की न्यूनतम मात्रा है जिसे एंटीसेरम की 1 एंटीटॉक्सिक यूनिट (एयू) द्वारा बेअसर किया जाता है।

मान लें कि प्रारंभिक फ्लोक्यूलेशन एक टेस्ट ट्यूब में नोट किया गया है जिसमें इस सीरम के 0.2 मिलीलीटर और ज्ञात विष के 2 मिलीलीटर 100 एलएफ (50 एलएफ x 2) की गतिविधि के साथ हैं।

तो 0.2 मिली सीरम ने इस टॉक्सिन को बेअसर कर दिया। इसलिए, 0.2 मिलीलीटर सीरम में 100 एयू होता है, और इस सीरम के 1 मिलीलीटर में, एंटीबॉडी की एकाग्रता 500 एयू (100 एयू x 5) से मेल खाती है।

इसी तरह की विधि से, फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया का उपयोग विपरीत उद्देश्य के लिए किया जा सकता है - विषाक्त पदार्थों के प्रतिरक्षण गुणों को निर्धारित करने के लिए।

इसके लिए एक मानक एंटीटॉक्सिक सीरम की आवश्यकता होती है।

निराकरण प्रतिक्रिया

परीक्षण सामग्री में जीवाणु विषाक्त पदार्थों को निर्धारित करने के लिए खाद्य जीवाणु विषाक्तता के निदान में प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है। इसके अलावा, इसे सामग्री के लिए बाहरी वातावरण की कुछ वस्तुओं के अध्ययन में लगाया जा सकता है रोगजनक जीवाणुविषाक्त पदार्थों का उत्पादन, उदाहरण के लिए, टिटनेस या गैस गैंग्रीन के रोगजनकों की उपस्थिति के लिए मिट्टी की जांच करते समय।

यह ज्ञात है कि होमोलॉगस एंटीटॉक्सिक सीरम के साथ मिश्रित विष अपना नहीं दिखाता है विषाक्त क्रियाक्योंकि विष निष्प्रभावी हो जाता है। एक एंटीटॉक्सिन के साथ एक विष की बातचीत की प्रतिक्रिया, एक नियम के रूप में, सख्ती से विशिष्ट है, इसलिए, विष के प्रकार को निर्धारित करने के लिए एक तटस्थता प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, प्रत्येक प्रकार के लिए विशिष्ट नैदानिक ​​सीरा होना आवश्यक है। और विष का प्रकार। यदि परीक्षण सामग्री में कई विषाक्त पदार्थों के मौजूद होने की उम्मीद है, तो एक साथ 2-3 एंटीटॉक्सिक सीरा और अधिक के मिश्रण का उपयोग किया जा सकता है।

न्यूट्रलाइजेशन प्रतिक्रिया आपको रोगजनक विष के प्रकार और प्रकार को निर्धारित करने की अनुमति देती है।

परीक्षण सामग्री खाद्य उत्पादों का एक छानना हो सकता है जो कथित तौर पर विषाक्तता का कारण बनता है, उन व्यंजनों से धुलाई जहां ये उत्पाद स्थित थे, आदि।

कथित विष का प्रारंभिक निष्प्रभावीकरण किया जाता है। ऐसा करने के लिए, एक एंटीटॉक्सिक डायग्नोस्टिक सीरम (इसमें वांछित विष के प्रति एंटीबॉडी होते हैं) परीक्षण सामग्री (प्रायोगिक टेस्ट ट्यूब) के साथ टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है; शारीरिक लवण की समान मात्रा को एक अन्य परखनली (नियंत्रण) में मिलाया जाता है।

एक छोटे से ऊष्मायन के बाद, टेस्ट ट्यूब की सामग्री को सफेद चूहों (प्रयोगात्मक और नियंत्रण) के दो समूहों में पेश किया जाता है।

नियंत्रण जानवरों की मृत्यु के तुरंत बाद न्यूट्रलाइजेशन प्रतिक्रिया के परिणामों को ध्यान में रखा जाता है। इस मामले में, प्राप्त हुए जानवरों के जीवित रहने का तथ्य एंटीटॉक्सिक सीरमपरीक्षण सामग्री के साथ, इंजेक्शन सीरम के अनुरूप, इसमें एक विष की उपस्थिति को इंगित करता है।

न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन का लाभ प्राप्त परिणामों की उच्च विश्वसनीयता है।

हालांकि, इसकी संवेदनशीलता और प्रतिक्रिया प्राप्त करने की गति में, यह कुछ अन्य शोध विधियों से कम है।

लसीका प्रतिक्रियाएं

लिसिस प्रतिक्रियाओं को आमतौर पर पूरक की उपस्थिति में इस एंटीजन के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की कार्रवाई के तहत कॉर्पसकुलर एंटीजन का विघटन कहा जाता है।

से प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाबैक्टीरिया और अन्य कणिका प्रतिजनों के लसीका की घटना के आधार पर, मुख्य रूप से बैक्टीरियोलिसिस और हेमोलिसिस प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया जाता है।

बैक्टीरियोलिसिस प्रतिक्रिया

प्रतिक्रिया इन विट्रो और विवो दोनों में होती है। उत्तरार्द्ध को V.I की प्रतिक्रिया के रूप में जाना जाता है। इसेव - फ़िफ़र।

इन वैज्ञानिकों ने दिखाया है कि यदि गिनी सूअरहैजा प्रतिजन के साथ पूर्व-प्रतिरक्षित, फिर विब्रियो हैजा की अत्यधिक विषाणु संस्कृति के उदर गुहा में इसके बाद के परिचय से जानवरों का संक्रमण नहीं होता है, क्योंकि पेट की गुहाविशिष्ट एंटीबॉडी के प्रभाव में रोगज़नक़ को भंग कर दिया जाता है।

बाद मे मै।

I. Mechnikov ने साबित किया कि प्रतिरक्षा सीरम के प्रभाव में हैजा विब्रियो का एक समान विघटन एक टेस्ट ट्यूब में होता है, अगर ताजा सीरम, पूरक का एक स्रोत, मुख्य घटकों में जोड़ा जाता है। पूरक की उपस्थिति में विशिष्ट एंटीबॉडी की क्रिया के तहत बैक्टीरिया के विघटन को बैक्टीरियोलिसिस प्रतिक्रिया कहा जाता है।

बैक्टीरियोलिसिस प्रतिक्रिया की स्थापना करते समय, परीक्षण सीरम के 10 गुना कमजोर पड़ने की एक श्रृंखला पहले तैयार की जाती है। फिर, प्रत्येक परखनली में माइक्रोबियल सस्पेंशन की समान मात्रा (1-2 बूंद) डाली जाती है। मिश्रण में पूरक जोड़ा जाता है। 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन के बाद, व्यवहार्य बैक्टीरिया की उपस्थिति या अनुपस्थिति का निर्धारण करने के लिए मिश्रण को प्रत्येक ट्यूब से पोषक माध्यम पर टीका लगाया जाता है।

प्रतिक्रिया का उपयोग किसी ज्ञात सूक्ष्मजीव का उपयोग करके एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए या नैदानिक ​​​​प्रतिरक्षा सीरम का उपयोग करके रोगाणुओं के प्रकार को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है।

पर व्यावहारिक कार्यबैक्टीरियोलॉजिस्ट शायद ही कभी इस प्रतिक्रिया का उपयोग करते हैं, मुख्य रूप से हैजा और हैजा जैसे कंपन के भेदभाव के लिए।

हेमोलिसिस प्रतिक्रिया

हेमोलिसिस का तंत्र बैक्टीरियोलिसिस के समान है।

प्रतिक्रिया में प्रयुक्त एरिथ्रोसाइट्स एंटीजन हैं। एंटीबॉडी का स्रोत एंटी-एरिथ्रोसाइट सीरम है (उदाहरण के लिए, यदि प्रतिक्रिया में भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है, तो विशिष्ट एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी के साथ आवश्यक सीरम भेड़ एरिथ्रोसाइट्स से प्रतिरक्षित खरगोशों से प्राप्त किया जाता है)।

गिनी पिग रक्त सीरम का उपयोग अक्सर लसीका प्रतिक्रियाओं में पूरक के रूप में किया जाता है, क्योंकि इसमें अन्य जानवरों के सीरा की तुलना में काफी अधिक पूरक होता है।

उन मामलों में जब पूरक की उपस्थिति में एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट्स को नष्ट कर देते हैं, उनमें से हीमोग्लोबिन निकलता है, और एरिथ्रोसाइट्स के बादल निलंबन से प्रतिक्रिया करने वाला मिश्रण एक पारदर्शी लाल तरल (लाह रक्त) में बदल जाता है।

इस प्रतिक्रिया को हेमोलिसिस कहा जाता है। प्रयोगशाला अभ्यास में, इसका उपयोग पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया में पूरक सोखना के संकेतक के रूप में किया जाता है।

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पशु चिकित्सा सूक्ष्म जीव विज्ञान और उसके कार्य

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^ RA को पहली बार 1896 में M. Gruber द्वारा विकसित किया गया था। प्रतिक्रिया का सार प्रतिजन के साथ एंटीबॉडी की बातचीत है, जिसके परिणामस्वरूप गुच्छे के गठन के साथ रोगाणुओं का ग्लूइंग (एग्लूटिनेशन) होता है, नग्न आंखों को दिखाई देने वाली गांठ। आरए का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है सीरोलॉजिकल निदानबहुत सा जीवाण्विक संक्रमण(ब्रुसेलोसिस, ग्लैंडर्स, साल्मोनेलोसिस, कोलीबैसिलोसिस, आदि) और प्रजातियों और पृथक सूक्ष्मजीवों के प्रकारों की सीरोलॉजिकल पहचान के लिए। आरए सेट करने की कई विधियाँ हैं: टेस्ट-ट्यूब (वॉल्यूमेट्रिक), ड्रिप (प्लेट), ब्लड-ड्रॉप, दूध के साथ रिंग रिएक्शन, हेमग्ग्लूटिनेशन रिएक्शन और इसके वेरिएंट (आरएचजीए, आरएनएएचए), कॉम्ब्स का एंटीग्लोबुलिन टेस्ट, आदि। ^ - सीरम की जगह खून लिया जाता है। प्लेट प्रतिक्रिया सेट करें। मुर्गियों और टर्की के पुलोरोसिस, मुर्गियों के माइकोप्लाज्मोसिस का निदान करें। कॉम्ब्स प्रतिक्रियाअपूर्ण एंटीबॉडी का पता लगाने की अनुमति देता है। उत्तरार्द्ध मोनोवैलेंट हैं, और इसलिए वे एग्लूटीनेट के गठन को रोकते हैं। विधि एंटीग्लोबुलिन सीरम के उपयोग पर आधारित है, जो कॉर्पस्क्यूलर एंटीजन (एरिथ्रोसाइट्स, बैक्टीरिया) पर तय अपूर्ण एंटीबॉडी के कनेक्शन के लिए मध्यस्थ के रूप में कार्य करता है। ^ - यह सीरोलॉजिकल और डायग्नोस्टिक रूप से सटीक प्रतिक्रियाओं पर लागू नहीं होता है, हालांकि, यह आपको एंटीजन - हेमाग्लगुटिनिन का पता लगाने और कुछ बैक्टीरिया और मायकोप्लाज्मा में हेमग्लगुटिनेटिंग गुण (लाल रक्त कोशिकाओं को एग्लूटीनेट करने की क्षमता) स्थापित करने की अनुमति देता है। आरएनजीए- हाल के वर्षों में सेरोडायनामिक्स में अग्रणी स्थानों में से एक ले लिया है। इसका सार इस तथ्य में निहित है कि संबंधित रोगज़नक़ या एंटीबॉडी के प्रतिजन के प्रोटीन अणु भेड़ या टैनिन के साथ इलाज किए गए अन्य जानवरों के एरिथ्रोसाइट्स पर पूर्व-अवशोषित होते हैं। फिर संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स को बीमार जानवरों के रक्त सीरा के साथ मिलाकर या दूसरे मामले में अध्ययन के तहत प्रतिजन के साथ प्रतिक्रिया दें। सीरम कल्पना की उपस्थिति में। इस एंटीजन (या इसके विपरीत) एरिथ्रोसाइट एग्लूटिनेशन के एंटीबॉडी होते हैं - प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है। 1897 में आर. क्रॉस द्वारा प्रस्तावित। वर्षा एंटीबॉडी-अवक्षेपण और प्रतिजन-अवक्षेपण की परस्पर क्रिया के दौरान देखी गई घटना है। प्रतिक्रिया का सार प्रतिरक्षा सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी के प्रभाव में एंटीजन के कोलाइड्स के फैलाव और उनकी वर्षा को बदलना है। आरपी को टेस्ट ट्यूब में तरल माध्यम (रिंग वर्षा प्रतिक्रिया) या अगर जेल (लैमेलर आरडीपी) में रखा जा सकता है। रिंग-वर्षा प्रतिक्रिया पहली बार एस्कोली (1910) द्वारा प्रस्तावित की गई थी, यह एंथ्रेक्स के निदान के लिए सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाती है। संचालन करते समय पशु चिकित्सा विशेषज्ञताआरपी मांस, आटा और अन्य उत्पादों के मिथ्याकरण को निर्धारित करने की एक विधि है। विशेष अर्थइस प्रतिक्रिया में रक्त के प्रकार का निर्धारण करने के लिए एक फोरेंसिक चिकित्सा परीक्षा होती है। एक तरल माध्यम में वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग, हालांकि, एंटीजन की विविधता को चिह्नित करने की अनुमति नहीं देता है, अर्थात। तैयारी में एंटीजन की संख्या और एकाग्रता। यह जानकारी आरपी को जेल (आमतौर पर अगर) में रखकर प्राप्त की जा सकती है। गति की गति होने पर, दवा के विभिन्न एंटीजन अलग-अलग फैलते हैं, पारदर्शी जेल की मोटाई में उस स्थान पर अवक्षेप बनाते हैं जहां वे समरूप एंटीबॉडी से मिलते हैं। प्रीसिपिटिन लाइनों का स्थानीयकरण और एकाग्रता एंटीजेनिक तैयारी के प्रत्येक घटक के लिए विशेषता होगी, जो इसकी गुणवत्ता के लिए एक मानदंड के रूप में कार्य करता है। तैयारी को पतला करके, इसमें एंटीजन की सापेक्ष सामग्री को चिह्नित करना संभव है। आरडीपी की स्थापना के लिए कई तरीके विकसित किए गए हैं: उडेन (1946) के अनुसार प्रत्यक्ष एक-आयामी प्रसार की विधि, मैनसिनी (1963) के अनुसार सरल रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन की विधि, औचटरलोनी (1948) के अनुसार अगर जेल में दोहरे प्रसार की विधि। ), आदि। ^ (पीएच) प्रतिक्रिया पहली बार 1890 में बेहरिंग और किताजातो द्वारा प्रदर्शित की गई थी। मॉडल पर टिटनेस विषाक्त पदार्थऔर एंटीटॉक्सिन। आरएन का सार रोग या उसके चयापचय उत्पादों के प्रेरक एजेंट के संक्रामक गुणों को दबाने (बेअसर) करने के लिए प्रतिरक्षा सीरम के समरूप एंटीबॉडी की क्षमता में निहित है। प्रतिजन-एंटीबॉडी संक्रमित प्रयोगशाला पशुओं, सीसी, ईसी के मिश्रण के साथ प्रतिक्रिया के परिणाम को स्थापित करने के लिए। एक सकारात्मक पीएच संकेतक जैविक परीक्षण प्रणालियों की मृत्यु की अनुपस्थिति है। पर जीवाणु अभ्यास RN का उपयोग अवायवीय एंटरोटॉक्सिमिया, बोटुलिज़्म, आदि के निदान में किया जाता है। RN को विषाक्त पदार्थों, टॉक्सोइड्स या एंटीटॉक्सिन का पता लगाने और उनका अनुमापन करने के लिए किया जाता है। ^ (आरएसके) दो घटनाओं के आधार पर बोर्डेट और झांगु (1901) द्वारा विकसित: बैक्टीरियोलिसिस और हेमोलिसिस। रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाने और परीक्षण सामग्री (ब्रुसेलोसिस, ग्रंथियों, रिकेट्सियोसिस, तपेदिक, आदि के लिए) में एंटीजन का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। यह प्रतिक्रिया अप्रत्यक्ष दो-प्रणाली प्रतिक्रिया से संबंधित है। इसमें 5 घटक हैं: प्रतिजन। टेस्ट सीरम। पूरक। हेमोलिटिक सीरम। भेड़ एरिथ्रोसाइट्स। घटक 3,4,5 संकेतक प्रणाली बनाते हैं। यदि परीक्षण सीरम के प्रतिजन और एंटीबॉडी एक दूसरे के अनुरूप हों दूसरा, एक एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिरक्षा परिसर उत्पन्न होता है, जो उस वातावरण से पूरक होता है जहां प्रतिक्रिया होती है। परीक्षण सीरम में एंटीजन के अनुरूप एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में, निर्दिष्ट परिसर नहीं बनता है - पूरक मुक्त रहता है। चूंकि ये अदृश्य प्रक्रियाएं हैं, इस सवाल को हल करने के लिए कि पूरक के साथ क्या हुआ, हेमोलिटिक प्रणाली के घटकों को एक संकेतक के रूप में टेस्ट ट्यूब में पेश किया जाता है - हेमोलिटिक सीरम + एरिथ्रोसाइट्स। यदि पूरक बैक्टीरियोलॉजिकल सिस्टम में बाध्य है, तो एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होगा, परिणाम सकारात्मक है - सीरम में एंटीबॉडी होते हैं। हेमोलिसिस की उपस्थिति बैक्टीरियोलॉजिकल सिस्टम में मुक्त पूरक की उपस्थिति के संकेतक के रूप में कार्य करती है, जो केवल परीक्षण सीरम में एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में संभव है - परिणाम नकारात्मक है। आरएससी सख्ती के तहत आगे बढ़ता है मात्रात्मक अनुपातअवयव। यह उनके प्रारंभिक अनुमापन द्वारा प्राप्त किया जाता है (पूरक और हेमोलिटिक सीरम को प्रतिक्रिया के दिन शीर्षक दिया जाता है; माइक्रोबियल एंटीजन - 2-3 महीने के भीतर एक बार)। अनुमापन प्रतिक्रिया को अंजाम देने के लिए प्रतिक्रिया में एक या दूसरे घटक की सबसे छोटी मात्रा का निर्धारण है, अधिकता या कमी परिणामों की विकृति है। आरडीएससी सीएससी का एक प्रकार है, लेकिन इसमें भिन्नता है कि प्रतिक्रिया का पहला चरण ठंड (40 सी) में 16-18 घंटे के लिए आगे बढ़ता है, जो एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स द्वारा लंबे समय तक पूरक सोखने के कारण संवेदनशीलता बढ़ाता है।

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शीघ्र प्रतिक्रिया

वर्षा और एग्लूटिनेशन काफी समान प्रतिक्रियाएं हैं जो मुख्य रूप से के आधार पर भिन्न होती हैं भौतिक गुणएजी.

पहले मामले में, इसे घुलनशील रूप में प्रस्तुत किया जाता है, दूसरे में - कणिका रूपों में। आरपी एजी-एटी प्रतिक्रिया के दौरान एक अवक्षेप के गठन पर आधारित है। आरपी अत्यधिक विशिष्ट और संवेदनशील है।

प्रतिक्रिया सामग्री:

1. घुलनशील प्रतिजन या हैप्टेन (precipitogen);

2. एटी - प्रीसिपिटिन (प्रतिरक्षा अवक्षेपण सीरम; एंटीजन के उपयुक्त समाधान के साथ खरगोशों के टीकाकरण द्वारा प्राप्त);

शीघ्र प्रतिक्रिया

आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान या अगर जेल।

आरपी सेटिंग के तरीके:

1) समाधान में आरपी - आर।

वलय वर्षा;

2) जेल में आरपी।

वलय अवक्षेपण अभिक्रिया को संकीर्ण अवक्षेपण नलियों में डाला जाता है जिसमें अवक्षेपण सीरा डाला जाता है।

फिर प्रीसिपिटिनोजेन का घोल डालें। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, सामग्री के इंटरफेस पर एक बादल वर्षा की अंगूठी दिखाई देती है। आरपी स्थापित करने की इस पद्धति का एक उदाहरण एस्कोली थर्मोप्रेजर्वेशन प्रतिक्रिया है, जिसका उपयोग जानवरों के अंगों से निकाले गए एंथ्रेक्स रोगज़नक़ के थर्मोस्टेबल हैप्टेन का पता लगाने के लिए किया जाता है, उबलने के दौरान निष्कर्षण द्वारा त्वचा, और ऊन। जेल में आरपी की किस्मों में से एक (ओचटरलोनी प्रतिक्रिया) आपको विषाक्तता निर्धारित करने की अनुमति देती है डिप्थीरिया बेसिलसएंटीटॉक्सिक सीरम के साथ।

पेट्री डिश में पोषक माध्यमएंटीटॉक्सिक डिप्थीरिया सीरम के साथ लगाए गए फिल्टर पेपर की एक पट्टी रखें और अध्ययन की गई संस्कृतियों के साथ कागज की पट्टी के लंबवत स्ट्रोक के रूप में टीका लगाएं। दिन के दौरान 37 पीएस पर इनक्यूबेट किया गया। एक टॉक्सिजेनिक संस्कृति की उपस्थिति में, एंटीटॉक्सिन के साथ विष की बातचीत के स्थल पर वर्षा रेखाएं बनती हैं। जेल में वर्षा प्रतिक्रिया को इम्यूनोडिफ्यूजन कहा जाता है।

अक्सर जेल में फोरेसिस द्वारा - इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस। विधि सिद्धांत: अध्ययन किए गए प्रतिजन को इलेक्ट्रोफोरेटिक रूप से विभाजित किया जाता है। प्राप्त अंशों का विश्लेषण एंटीसेरम का उपयोग करके दोहरे प्रसार की विधि द्वारा किया जाता है।

एस्कोली प्रतिक्रिया का उपयोग एंथ्रेक्स के निदान के लिए किया जाता है ताकि एंथ्रेक्स बेसिली के प्रतिजन का पता लगाया जा सके। एक वर्षा प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, आपके पास होना चाहिए: प्रीसिपिटिनोजेन - हैप्टेन बी।

एंट्राचिस (ऊतक निकालने), प्रीसिपिटिन (एंथ्रेक्स प्रीसिपिटेटिंग सीरम), और खारा।

थर्मोप्रिसिपिटिनोजेन की तैयारी।

1. शारीरिक खारा के 10 मिलीलीटर को कुचल त्वचा के 1 ग्राम या बी एन्थ्रेसीस संस्कृति के 1 मिलीलीटर युक्त फ्लास्क में डालें।

2. फ्लास्क को उबलते स्नान में 30-45 मिनट के लिए रखें।

3. अभ्रक के माध्यम से फ़िल्टर करें। छानना पूरी तरह से साफ होना चाहिए। वर्षा की प्रतिक्रिया के लिए, छानना 100 गुना या अधिक पतला होता है।

रिंग वर्षा प्रतिक्रिया की स्थापना।

1) पूरे अवक्षेपण सीरम का 0.3 मिली या पतला 1:5, 1:10 वर्षा नली में डाला जाता है।

2) ट्यूब की दीवार के साथ एक प्रीसिपिटिनोजेन को सावधानी से स्तरित किया जाता है। प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है यदि दो तरल पदार्थों की सीमा पर 5-15 मिनट के बाद में अवक्षेपित प्रोटीन का एक बादल का छल्ला बनता है।

वर्षा प्रतिक्रिया की स्थापना करते समय, निम्नलिखित नियंत्रणों का उपयोग किया जाता है:

क) प्रतिजन और खारा समाधान;

बी) विशिष्ट सीरम और भौतिक।

सी) एंटीजन और गैर-विशिष्ट सीरम।

सभी नियंत्रण ट्यूबों में कोई मैलापन नहीं होना चाहिए। वर्षा प्रतिक्रिया के लिए, विशेष वर्षा ट्यूब 40-60 मिमी ऊंची और 4-5 मिमी व्यास का उपयोग किया जाता है, संकीर्ण ट्यूबों में वर्षा बहुत तेजी से होती है और सामान्य टेस्ट ट्यूबों की तुलना में अधिक स्पष्ट रूप से प्रकट होती है , उन्हें अच्छी तरह से धोया और सुखाया जाता है, ताकि उनका गिलास पूरी तरह से पारदर्शी और सूखा हो।

वर्षा की प्रतिक्रिया में, एक विशिष्ट प्रतिरक्षा परिसर अवक्षेपित होता है, जिसमें घुलनशील एंटीजन (लाइसेट, अर्क, हैप्टेन) और इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एक विशिष्ट एंटीबॉडी होता है।

इस अभिक्रिया के परिणामस्वरूप बने मेघमय वलय या अवक्षेप कहलाते हैं तलछट. यह प्रतिक्रिया मुख्य रूप से एंटीजन कणों के आकार में एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया से भिन्न होती है।

वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग आमतौर पर कई संक्रमणों (एंथ्रेक्स, मेनिन्जाइटिस, आदि) के निदान में एंटीजन को निर्धारित करने के लिए किया जाता है; फोरेंसिक चिकित्सा में - रक्त, शुक्राणु आदि की प्रजातियों का निर्धारण करने के लिए; स्वच्छता और स्वच्छ अध्ययन में - उत्पादों के मिथ्याकरण की स्थापना करते समय; इसकी सहायता से जन्तुओं और पौधों के फाईलोजेनेटिक संबंध को निर्धारित करते हैं। प्रतिक्रिया के लिए आपको चाहिए:

1. एंटीबॉडी (प्रीसिपिटिन) - एंटीबॉडी के उच्च अनुमापांक के साथ प्रतिरक्षा सीरम (1:100,000 से कम नहीं)। अवक्षेपण सीरम का अनुमापांक उस प्रतिजन के उच्चतम तनुकरण से निर्धारित होता है जिसके साथ वह प्रतिक्रिया करता है। सीरम आमतौर पर undiluted या पतला प्रयोग किया जाता है 1:5 -1:10.

2. एंटीजन - एक प्रोटीन या लिपोइड पॉलीसेकेराइड प्रकृति (पूर्ण एंटीजन और हैप्टेंस) के भंग पदार्थ।

3. आइसोटोनिक समाधान।

अवक्षेपण अभिक्रिया करने की मुख्य विधियाँ हैं: वलय अवक्षेपण अभिक्रिया और अग्र (जेल) में अवक्षेपण अभिक्रिया।

ध्यान! वर्षा की प्रतिक्रिया में शामिल सभी घटक पूरी तरह से पारदर्शी होने चाहिए।

रिंग वर्षा प्रतिक्रिया। 0.2 - 0.3 मिली (5-6 बूंद) सीरम को पाश्चर पिपेट का उपयोग करके वर्षा ट्यूब में जोड़ा जाता है (सीरम ट्यूब की दीवारों पर नहीं गिरना चाहिए)। प्रतिजन सावधानी से एक ही मात्रा में सीरम पर स्तरित होता है, इसे टेस्ट ट्यूब की दीवार के साथ एक पतली पाश्चर पिपेट के साथ डालना। परखनली को झुकी हुई स्थिति में रखा जाता है। उचित लेयरिंग के साथ, सीरम और एंटीजन के बीच एक स्पष्ट सीमा प्राप्त की जानी चाहिए। सावधानी से, ताकि तरल मिश्रण न हो, टेस्ट ट्यूब को एक तिपाई में रखें। प्रतिक्रिया के सकारात्मक परिणाम के साथ, एंटीजन और एंटीबॉडी की सीमा पर एक बादल "रिंग" बनता है - एक अवक्षेप।

अगर . में वर्षा की प्रतिक्रिया(जेल)।प्रतिक्रिया की ख़ासियत यह है कि प्रतिजन और एंटीबॉडी की परस्पर क्रिया एक घने माध्यम में होती है, अर्थात in जेल।परिणामी अवक्षेप माध्यम की मोटाई में एक बादल बैंड देता है। एक बैंड की अनुपस्थिति प्रतिक्रिया घटकों के बीच एक बेमेल का संकेत देती है। इस प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से जैव चिकित्सा अनुसंधान में उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट में विष निर्माण के अध्ययन में।

Lysis प्रतिक्रिया (प्रतिरक्षा साइटोलिसिस)

प्रतिरक्षा लसीका- यह पूरक की अनिवार्य भागीदारी के साथ एंटीबॉडी के प्रभाव में कोशिकाओं का विघटन है। प्रतिक्रिया के लिए आपको चाहिए:

1. एंटीजनरोगाणुओं, एरिथ्रोसाइट्स या अन्य कोशिकाओं।

2. एंटीबॉडी(लाइसिन) - प्रतिरक्षा सीरम, शायद ही कभी रोगी का सीरम। बैक्टीरियोलाइटिक सीरम में बैक्टीरिया के विश्लेषण में शामिल एंटीबॉडी होते हैं; हेमोलिटिक - हेमोलिसिन जो लाल रक्त कोशिकाओं के विश्लेषण में योगदान करते हैं; स्पाइरोकेट्स के लसीका के लिए, स्पाइरोचेटोलिज़िन, कोशिकाओं - इटोलिज़िन, आदि की आवश्यकता होती है।

3. पूरक।गिनी सूअरों के सीरम में अधिकांश पूरक। यह सीरम (कई जानवरों का मिश्रण) आमतौर पर पूरक के रूप में उपयोग किया जाता है।

4. आइसोटोनिक समाधान.

शीघ्र प्रतिक्रिया।

मापदण्ड नाम	अर्थ
लेख विषय:	शीघ्र प्रतिक्रिया।
रूब्रिक (विषयगत श्रेणी)	शिक्षा

वर्षा प्रतिक्रिया (आरपी) - इलेक्ट्रोलाइट की उपस्थिति में एंटीबॉडी की कार्रवाई के तहत घुलनशील एंटीजन की वर्षा। दृश्य प्रतिक्रिया प्रभाव (वर्षा घटना) - गंदगी (बादल वलय या तलछट का बनना - अवक्षेपण)।

RP का उपयोग अज्ञात एंटीजन का पता लगाने के लिए कई में किया जाता है संक्रामक रोग: एंथ्रेक्स, टुलारेमिया, मेनिन्जाइटिस, चेचक के साथ. फोरेंसिक चिकित्सा में, इसका उपयोग रक्त के प्रकार, वीर्य को निर्धारित करने के लिए किया जाता है; स्वच्छता और स्वच्छ अनुसंधान में - खाद्य उत्पादों के मिथ्याकरण को स्थापित करने के लिए। RP बहुत संवेदनशील है और 1:1,000,000 और 1:10,000,000 के तनुकरण में प्रतिजन का पता लगा सकता है।

वर्षा प्रतिक्रिया के घटक।

1. एंटीजन (precipitinogen) -यह एक आणविक प्रकृति का प्रतिजन है, जो सूक्ष्म रूप से परिक्षिप्त (घुलनशील) अवस्था में होता है। Precipitinogens - विभिन्न lysates या ऊतक के अर्क, आदि।
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एक प्रीसिपिटिनोजेन एंटीजन कणों के आकार में एक एग्लूटीनोजेन से भिन्न होता है। एग्लूटीनोजेनयह है सेल आकार(ये पूरी कोशिकाओं को नष्ट नहीं कर रहे हैं), लेकिन आयाम प्रीसिपिटिनोजेनइसके अनुरूप आणविक आकार(ये प्रोटीन और कार्बोहाइड्रेट या लिपिड के साथ उनके कॉम्प्लेक्स हैं)। प्रीसिपिटिनोजेन घोल पारदर्शी।

2. एंटीबॉडी (अवक्षेप)मानव सीरम में या प्रतिरक्षा निदान अवक्षेपण सीरा में पाए जाते हैं जिनमें ज्ञात एंटीबॉडी होते हैं।

3. इलेक्ट्रोलाइट- आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल।

प्रीसिपिटिनोजेन प्राप्त करना.

यह सामग्री को पीसकर और उसमें से प्रोटीन एंटीजन को उबालकर या अन्य तरीकों से निकालकर प्राप्त किया जाता है।

प्रीसिपिटिनोजेन्स के उदाहरण: विभिन्न अंगों और ऊतकों के lysates या अर्क, विदेशी रक्त सीरम (सीरम is .) समाधान, सबसे पहले, विभिन्न प्रोटीन),रोगाणुओं के शोरबा संस्कृतियों के छानना, रोगाणुओं के नमक के अर्क, ऑटोलिसेट्स आदि।

अवक्षेपण सीरा प्राप्त करना।

उपयुक्त प्रीसिपिटिनोजेन्स के साथ खरगोशों के हाइपरइम्यूनाइजेशन द्वारा प्राप्त किया गया। इस तरह के सीरा में उन प्रीसिपिटिनोजेन्स के प्रति एंटीबॉडी होते हैं जिनके साथ खरगोशों को प्रतिरक्षित किया गया था।

अवक्षेपण सेरा के उदाहरण: अवक्षेपित एंथ्रेक्स सीरम(एंथ्रेक्स एंटीजन के लिए एंटीबॉडी होते हैं), एंटीमेनिंगोकोकल सीरम उपजी(मेनिन्जाइटिस के प्रेरक एजेंट के एंटीजन के खिलाफ एंटीबॉडी होते हैं), आदि।

अनुमापांकअवक्षेपण सीरम - अवक्षेपण का उच्चतम तनुकरण, जिस पर सीरम अभी भी अवक्षेपण प्रतिक्रिया देता है।

आरपी सेट करने के तरीके।

1. वलय अवक्षेपण अभिक्रिया -विशेष अवक्षेपण ट्यूबों (व्यास - 0.4-0.5 सेमी, ऊंचाई - 7-8 सेमी) में किया जाता है। 0.2 - 0.3 मिलीलीटर अवक्षेपण सीरम को परखनली में मिलाया जाता है और समान मात्रा में प्रीसिपिटिनोजेन को एक पाश्चर पिपेट की लंबी नाक के साथ दीवार के साथ सावधानी से स्तरित किया जाता है। अगला, ध्यान से क्षैतिज स्थितिट्यूबों को लंबवत रखा गया है।

प्रतिक्रिया परिणामों के लिए लेखांकनएंटीजन-एंटीबॉडी की सीमा पर एक सफेद अंगूठी की उपस्थिति से किया जाता है। सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ ऐसी अंगूठी देखी जाती है। इस मामले में, एंटीजन एंटीबॉडी से मेल खाता है और उनका बंधन होता है।

अगर उबाल कर छान लिया जाए जलीय अर्कअंगों और ऊतकों, तो प्रतिक्रिया को आमतौर पर प्रतिक्रिया कहा जाता है थर्मोरिंग वर्षा (उदाहरण के लिए, एंथ्रेक्स के निदान में)।

2. जेल अवक्षेपण अभिक्रिया -पेट्री डिश में या कांच की स्लाइड पर किया जाता है, जहां अगर जेल की एक परत रखी जाती है। जब जेल जम जाता है, तो उसमें कुओं को काट दिया जाता है, जिसमें एंटीजन या एंटीबॉडी, या दोनों रखे जाते हैं। अंतर करना 2 तरीकेजेल में आरपी:

एक विधी सरल (रेडियल) इम्यूनोडिफ्यूजन: प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (एंटीजन या एंटीबॉडी) के घटकों में से एक को कुएं में रखा जाता है, और दूसरे घटक को अगर के साथ मिलाया जाता है; सकारात्मक परिणाम के साथ (एंटीजन एक एंटीबॉडी से मेल खाती है) कुएं के चारों ओर बनता है अवक्षेपित वलय ;

बी) विधि डबल इम्यूनोडिफ्यूजन: एंटीबॉडी और एंटीजन दोनों को अलग-अलग कुओं में रखा जाता है, वे अगर जेल में एक दूसरे की ओर फैलते हैं; सकारात्मक परिणाम के साथ जहां एंटीबॉडी और एंटीजन मिलते हैं वर्षा की रेखाएं.

जेल में आरपी का एक उदाहरण Ouchterlony डबल इम्यूनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया है डिप्थीरिया के निदान में

इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस -यह एक ऐसी विधि है जो वैद्युतकणसंचलन विधि और वर्षा प्रतिक्रिया को जोड़ती है। एंटीजन का मिश्रण (उदाहरण के लिए, रक्त सीरम प्रोटीन) वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके एक जेल में अलग किया जाता है। फिर, वांछित प्रोटीन (अज्ञात एंटीजन) को खोजने और निर्धारित करने के लिए, एक नैदानिक ​​अवक्षेपण सीरम का उपयोग किया जाता है, जिसमें इस प्रोटीन (ज्ञात एंटीबॉडी) के एंटीबॉडी होते हैं। ऐसा करने के लिए, डायग्नोस्टिक सीरम को प्रोटीन के समानांतर खांचे में पेश किया जाता है। यदि प्रोटीन में से एक है जो सीरम में एंटीबॉडी से मेल खाता है, तो इसके चारों ओर बनते हैं वर्षा की रेखाएं.

शीघ्र प्रतिक्रिया। - अवधारणा और प्रकार। "वर्षा प्रतिक्रिया" श्रेणी का वर्गीकरण और विशेषताएं। 2017, 2018।