Mechanizm reakcji strącania różni się od reakcji. Reakcja opadowa (metoda immunologiczna)

Polega na interakcji rozpuszczalnego antygenu z przeciwciałem, a następnie wytrąceniu drobnoziarnistego osadu (osad).

Reakcja wytrącania pozwala określić obecność nieznanego antygenu w badanym materiale poprzez dodanie znanego przeciwciała lub użycie znanego antygenu – nieznanego przeciwciała. opad atmosferyczny idzie gorzej w przypadku braku soli. Optimum strącania mieści się w zakresie pH=7,0-7,4.

Mechanizm wytrącania jest zbliżony do aglutynacji. Pod wpływem układu odpornościowego, który zareagował z antygenem, zmniejsza się stopień jego rozproszenia. Surowica i antygen muszą być całkowicie przezroczyste. Podczas przygotowywania precypitacji do jednego rozcieńczenia surowicy można dodać różne rozcieńczenia antygenu lub odwrotnie.

Opady są rejestrowane lepiej, jeśli antygen nakłada się w probówce na przeciwciało. W tym przypadku obserwuje się pojawienie się osadu w postaci pierścienia - wytrącanie pierścienia. Wytrącanie pierścieniowe odbywa się w specjalnych probówkach o średnicy 2,5-3,5 mm. W celu określenia liczby antygenów w materiale testowym lub różnych przeciwciał w surowicy stosuje się reakcję precypitacji agaru: 1% sklarowanego agaru wlewa się do lub na szkiełka. Roztwory antygenu i przeciwciała wlewa się do różnych studzienek wykonanych w agarze, które dyfundują do siebie, tworząc linie precypitacji. Reakcja strącania jest szeroko stosowana w diagnostyce (patrz reakcja Ascoli).

Strącanie w agarze pozwala na określenie toksygenności kultur błonicy.

W badania kryminalistyczne opady służą do ustalenia przynależności gatunkowej krwi, narządów i tkanek za pomocą specyficznych strącających surowic.

Opady - reakcja wytrącania kompleksu antygenu (precypitynogenu) i przeciwciał (precypityny). Opady atmosferyczne to jedno ze zjawisk immunologicznych, które umożliwia określenie zawartości przeciwciał (patrz) w surowicy krwi osób chorych lub zaszczepionych, a także we krwi uodpornionych zwierząt. W przypadku stosowania standardowych surowic, reakcję precypitacji można wykorzystać do miareczkowania rozpuszczalnych antygenów różnego pochodzenia (patrz).

W najprostszej formie wywołania reakcji precypitacji, surowicę testową w serii wielokrotnych rozcieńczeń dodaje się warstwami do serii probówek ze stałą ilością antygenu. Po 30-60 min. inkubacja w temperaturze pokojowej na granicy dwóch cieczy utworzyła pierścień zmętnienia - wytrącanie pierścieniowe. Jako miano surowicy przyjmuje się minimalną ilość surowicy, która powoduje reakcję wytrącania. Gdy reakcja zostanie odwrócona za pomocą standardowej surowicy odpornościowej, możliwe jest oszacowanie względnego stężenia antygenu w różnych płynach biologicznych.

Wyniki miareczkowania przeciwciał i antygenów w oparciu o powyższą metodę nie mają bezwzględnej ekspresji ilościowej. W celu ilościowego określenia zawartości przeciwciał Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) i inni opracowali Metoda ilościowa reakcja strącania, która opiera się na detekcji tzw. strefy równoważności. Gdy odpowiednie dla wieku ilości antygenu zmiesza się ze stałymi objętościami surowicy odpornościowej, ilość utworzonego osadu początkowo wzrasta, a następnie ponownie spada ze względu na wzrost rozpuszczalności kompleksu antygen-przeciwciało w nadmiarze antygenu. Jeżeli określimy zawartość przeciwciał w supernatancie we wszystkich probówkach, to okaże się, że w środkowych probówkach rzędu lub nawet w pojedynczej probówce w supernatancie nie ma przeciwciał; jednocześnie tworzy się tu największy osad. Ponieważ w strefie równoważności cały antygen wprowadzony do mieszaniny reagentów jest również zaangażowany w osad, po odjęciu osadu białka antygenowego od ilości białka uzyskuje się dokładną wartość zawartości przeciwciał w danej objętości badanej surowicy . Zawartość białka w osadzie po dokładnym przemyciu schłodzoną solą fizjologiczną oznacza się azotem lub jakąś metodą kolorymetryczną.

Przy ocenie wartości reakcji wytrącania jako metoda diagnostyczna należy wziąć pod uwagę, że przeciwciała, które nie mają właściwości precypityn, a zatem nie tworzą osadu podczas interakcji z antygenem, mogą być obecne w surowicach odpornościowych. Należą do nich przede wszystkim niekompletne przeciwciała, a także niektóre inne przeciwciała należące do grupy globulin gamma-A.

Zdolność surowicy odpornościowej do wytrącania antygenu może być osłabiona przez ogrzewanie do 65-70 °, traktowanie rozpuszczalnikami organicznymi, redukcję w środowisku kwaśnym [Isliker (N. Isliker), A.Ya. Kuhlberga]. Zjawisko wytrącania antysurowicą, świadomie zawierającą precypityny, jest możliwe tylko przy określonej temperaturze, stężeniu soli i jonów wodorowych. Reakcja strącania przebiega najszybciej w temperaturze 25-37°. Niezbędnym warunkiem powstania osadu jest obecność chlorku sodu w stężeniach izotonicznych (0,85% roztwór NaCl). Gdy stężenie NaCl wzrośnie do 15%, osady utworzone przez antygen o charakterze polisacharydowym częściowo się rozpuszczają, co można wykorzystać do ekstrakcji czystych przeciwciał. Reakcja precypitacji z antygenami o charakterze białkowym przebiega z taką samą szybkością i kompletnością zarówno w 0,85%, jak i 15% Roztwory NaCl. Optymalne stężenie jonów wodorowych do tworzenia osadu odpowiada wartościom pH od 5,0 do 9,0.

W praktyce laboratoryjnej stosuje się różne modyfikacje reakcji strącania. W szczególności reakcję termoprecypitacji stosuje się do wykrywania antygenów bakteryjnych. wąglik, zatrucie jadem kiełbasianym itp., nie podlegające denaturacji termicznej (koktoantygeny). Ta reakcja różni się od reakcji strącania pierścienia tylko tym, że jako antygen stosuje się filtrat gotowanego materiału testowego (patrz Reakcja A).

Analizując złożoną mieszaninę antygenów za pomocą reakcji strącania nie można scharakteryzować właściwości poszczególnych składników mieszaniny. Aby rozwiązać ten problem, skorzystaj z metod precypitacji w agarze i immunoelektroforezy. Metoda precypitacji w agarze w najczęstszej modyfikacji Ouchterlony (O. Ouchterlony) opiera się na fakcie, że antygen i antysurowica dyfundując do siebie w cienkiej warstwie agaru tworzą linię precypitacji w momencie spotkania. Na podstawie liczby takich linii można ocenić liczbę składników zawartych w danej mieszaninie antygenów. Metoda Ouhgerlonu umożliwia porównanie różnych mieszanin antygenowych i określenie stopnia pokrewieństwa występujących w nich składników. Analizując złożoną mieszaninę antygenową zawierającą substancje o takich samych szybkościach dyfuzji w agarze, świetna pomoc może przynieść metodę immunoelektroforezy. Mieszanina antygenów jest wstępnie rozdzielana w polu elektrycznym na płytce agarowej, po czym jest rozwijana Poszczególne komponenty antysurowica. Antysurowicę wprowadza się do rowu wykonanego w agarze równolegle do linii, wzdłuż której poruszały się antygeny podczas elektroforezy. Każdy z antygenów daje indywidualny łuk precypitacyjny z antysurowicą. Immunoelektroforeza jest szeroko stosowana do analizy nieprawidłowości patologiczne w białkach surowicy, a także w analizie immunologicznej antygenów tkankowych i bakteryjnych.

Opady sądowe. Opady wykorzystywane są w medycynie sądowej do oznaczania gatunków krwi, części narządów i tkanek. W wielu sprawach śledczych wymagane jest ustalenie rodzaju krwi znalezionej na narzędziach przestępstwa, ubraniu sprawcy lub ofiary itp. W przypadku reakcji strącania, wytrącania surowic uzyskanych przez immunizację królików, kogutów i kóz z białkami różnych zwierząt. Serum są zwykle przygotowywane, aby wytrącić człowieka, konia, kota, kurczaka, świnię, psa, bydło. Muszą mieć miano co najmniej 1:10 000 i być wystarczająco szczegółowe. Ekstrakty są przygotowywane z badanego miejsca lub skorupy krwi dla Sól fizjologiczna, które są następnie testowane z wytrącającymi się surowicami. Uznaje się, że rodzaj białka został ustalony, jeśli jedna z wytrącających się surowic tworzy osad z ekstraktem z badanej krwi z odpowiednią reakcją kontrolną. Reakcja strącania może również określić rodzaj białka w tkankach i narządach ludzkich lub zwierzęcych. Zazwyczaj reakcję strącania prowadzi się w probówkach o stożkowatym końcu. Po otrzymaniu mętnych ekstraktów reakcję strącania prowadzi się w agarze według Ouchterlona.

Reakcja precypitacji (RP) to precypitacja rozpuszczalnego antygenu pod działaniem przeciwciał w obecności elektrolitu. Widoczny efekt reakcji (zjawisko opadów) - mętność (tworzenie mętnego pierścienia lub osadu - Osad).

RP służy do wykrywania nieznanego antygenu w wielu chorobach zakaźnych: z wąglikiem, tularemią, zapaleniem opon mózgowych, ospą small. W medycynie sądowej służy do określenia gatunku krwi, nasienia; w badaniach sanitarno-higienicznych - w celu ustalenia fałszerstw produkty żywieniowe. RP jest zupełnie inny. wysoka czułość i pozwala wykryć antygen w rozcieńczeniu 1: 1 000 000 i 1: 10 000 000.

Składniki reakcji strącania.

1. Antygen (precypitynogen) - to jest antygen natura molekularna, który jest w stanie drobno zdyspergowanym (rozpuszczalnym). Precypitynogeny to różne lizaty lub ekstrakty tkankowe itp. Precypitynogen różni się od aglutynogenu wielkością cząstek antygenu. Aglutynogen To ma rozmiary komórek(to nie są zniszczone całe komórki), ale wymiary wytrącanie współmierne wielkość cząsteczki(są to białka i ich kompleksy z węglowodanami lub lipidami). Roztwór precypitogenu przezroczysty.

2. Przeciwciała (precypityny) znajdują się w ludzkiej surowicy lub w immunodiagnostycznych wytrącających surowicach, które zawierają znane przeciwciała.

3. Elektrolit- izotoniczny roztwór chlorku sodu.

Uzyskanie precypitogenu.

Uzyskuje się go poprzez zmielenie materiału i ekstrakcję z niego antygenów białkowych przez gotowanie lub innymi metodami.

Przykłady precypitogenów: lizaty lub ekstrakty różne ciała i tkanki, obca surowica krwi (surowica jest rozwiązanie, przede wszystkim różne białka), filtraty kultur bulionowych drobnoustrojów, ekstrakty solne drobnoustrojów, autolizaty itp.

Uzyskanie strącających surowic.

Otrzymywany przez hiperimmunizację królików odpowiednimi precypitynogenami. Takie surowice zawierają przeciwciała przeciwko tym precypitynogenom, którymi immunizowano króliki.

Przykłady strącania sera: strącać surowica wąglikowa (zawiera przeciwciała przeciwko antygenom wąglika), wytrącanie surowicy przeciw meningokokom(zawiera przeciwciała przeciwko antygenom czynnika wywołującego zapalenie opon mózgowych) itp.

miano wytrącająca surowica jest największym rozcieńczeniem precypitynogenu, przy którym surowica nadal daje reakcję wytrącania.

Sposoby ustawienia RP.

1. Reakcja strącania pierścieniowego - przeprowadzana w specjalnych rurkach strącających (średnica - 0,4-0,5 cm, wysokość - 7-8 cm). Do probówki dodaje się 0,2 - 0,3 ml wytrącającej się surowicy i taką samą ilość precypitynogenu ostrożnie nakłada się wzdłuż ścianki długim nosem pipety Pasteura. Następnie, ostrożnie z pozycji poziomej, rurki umieszcza się pionowo.

Rozliczanie wyników reakcji przeprowadzane przez pojawienie się białego pierścienia na granicy antygen-przeciwciało. Z pozytywną reakcją taki pierścień jest obserwowany. W tym przypadku antygen odpowiada przeciwciału i następuje ich wiązanie.

Jeśli jako precypitogen stosuje się gotowane i przefiltrowane wodne ekstrakty narządów i tkanek, reakcja jest nazywana reakcją opady termotermiczne (na przykład podczas diagnozowania wąglika).

2. Reakcja wytrącania w żelu - przeprowadza się na szalkach Petriego lub na szkiełkach, na których umieszcza się warstwę żelu agarowego. Gdy żel krzepnie, wycina się w nim dołki, w których umieszcza się antygeny lub przeciwciała, lub oba. Wyróżnić 2 metody RP w żelu:

metoda prosta (promieniowa) immunodyfuzja: jeden ze składników reakcji immunologicznej (antygen lub przeciwciało) umieszcza się w studzience, a drugi składnik miesza się z agarem; w pozytywny wynik (antygen odpowiada przeciwciału) wokół dołka tworzy się pierścień osadu ;

b) metoda podwójna immunodyfuzja: zarówno przeciwciało, jak i antygen są umieszczone w oddzielnych studzienkach, dyfundują w żelu agarowym ku sobie; z wynikiem pozytywnym gdzie spotykają się przeciwciała i antygeny linie opadowe .

Przykład RP w żelu to reakcja podwójnej immunodyfuzji Ouchterlony'ego w diagnostyce błonicy

Immunoelektroforeza - jest to metoda łącząca metodę elektroforezy i reakcję strącania. Mieszanina antygenów (na przykład białek surowicy) jest rozdzielana w żelu za pomocą elektroforezy. Następnie w celu odnalezienia i określenia pożądanego białka (nieznanego antygenu) stosuje się diagnostyczną surowicę wytrącającą, która zawiera przeciwciała przeciwko temu białku (znane przeciwciało). W tym celu do rowka równolegle do białek wprowadza się surowicę diagnostyczną. Jeśli wśród białek jest takie, które odpowiada przeciwciału w surowicy, to wokół niego powstaje linie opadowe.

Reakcja wytrącania- RP (odłac. praeci-pito- osad), to tworzenie i wytrącanie kompleksu rozpuszczalnego antygenu molekularnego z przeciwciałami w postaci zmętnienia, zwanego Osad. Powstaje przez zmieszanie antygenów i przeciwciał w równoważnych ilościach; nadmiar jednego z nich obniża poziom wykształcenia kompleks immunologiczny. W przeciwieństwie do reakcji aglutynacji, antygenem reakcji strącania są związki rozpuszczalne, których wielkość cząstek zbliża się do wielkości cząsteczek. Mogą to być białka, kompleksy białek z węglowodanami i lipidami, ekstrakty bakteryjne, różne dysaty lub filtraty kultur bulionowych drobnoustrojów. Przeciwciała biorące udział w reakcji strącania nazywane są precypitynami. Powstały drobny kompleks antygen-przeciwciało jest wykrywany pewnymi metodami określania stadium reakcji precypitacji.
Reakcja strącania pierścieniowego została po raz pierwszy zaproponowana przez Ascoli. Znajduje zastosowanie w diagnostyce wąglika, dżumy, tularemii, zapalenia opon mózgowych. Metoda jest prosta i przystępna.
Do wąskich probówek wytrącających wlewa się swoistą immunoprecypitującą surowicę i bardzo ostrożnie nakłada się na nią antygen. Jako antygen, na przykład w diagnostyce wąglika, pobiera się kawałki skóry, wełny, skóry upadłego zwierzęcia itp. Są gotowane, płyn jest filtrowany i używany jako antygen. Pojawienie się pierścienia - osadu na granicy dwóch cieczy - wskazuje na obecność odpowiedniego antygenu.
Reakcja precypitacji w żelu agarowym, czyli metoda precypitacji dyfuzyjnej, umożliwia szczegółowe badanie składu złożonych, rozpuszczalnych w wodzie mieszanin antygenowych. Do przygotowania reakcji stosuje się żel (agar półpłynny lub gęstszy). Każdy składnik tworzący antygen dyfunduje w kierunku odpowiedniego przeciwciała z różną szybkością. Dlatego kompleksy różnych antygenów i odpowiadające im przeciwciała znajdują się w różne obszaryżel, w którym tworzą się linie wytrącania. Każda z linii odpowiada tylko jednemu kompleksowi antygen-przeciwciało. Reakcję strącania zwykle przeprowadza się w temperaturze pokojowej.
Otrzymana metoda immunoelektroforezy szerokie zastosowanie w ostatnie lata w badaniu struktury antygenowej drobnoustrojów. Kompleks antygenów umieszcza się w studzience, która znajduje się w środku żelu agarowego, wylewanego na płytkę. Następnie przez żel agarowy przepływa prąd elektryczny, w wyniku którego różne antygeny zawarte w kompleksie przemieszczają się w pole. prąd elektryczny w zależności od ich ruchliwości elektroforetycznej. Po zakończeniu elektroforezy do rowka znajdującego się wzdłuż krawędzi płytki wprowadzana jest specyficzna surowica odpornościowa i umieszczana jest w wilgotnej komorze. W miejscach powstawania kompleksu antygen-przeciwciało pojawiają się linie precypitacji.

Reakcje opadowe położyć w probówkach (reakcja strącania pierścienia), w żelach, pożywkach itp. Szeroki otrzymana dystrybucja odmiany reakcji strącania w półpłynnym żelu agaru lub agarozy: podwójna immunodyfuzja według Ouchterlony'ego. promieniowa immunodyfuzja, immunoelektroforeza itd

Promieniowa reakcja immunodyfuzji. Serum odpornościowe ze stopionym żelem agarowym równomiernie wylewa się na szkło. Po zestaleniu się w żelu wykonuje się dołki, w których umieszcza się antygen w różnych rozcieńczeniach. Antygen, dyfundując do żelu, tworzy z przeciwciałami strefy precypitacji wokół studzienek (ryc. 13.7). Średnica pierścienia strącającego jest proporcjonalna do stężenia antygenu. Reakcja służy do określenia poziomu immunoglobulin różnych klas we krwi, składników układu dopełniacza itp.

Immunoelektroforeza- połączenie metody elektroforezy i immunoprecypitacji: mieszanina antygenów jest wprowadzana do studzienek żelu i rozdzielana w żelu za pomocą elektroforezy. Następnie równolegle do stref elektroforezy do rowka wprowadza się surowicę immunologiczną, której przeciwciała, dyfundując do żelu, tworzą się w miejscu spotkania z antygenem linii precypitacji.

Immunologiczna mikroskopia elektronowa- mikroskopia elektronowa drobnoustrojów, częściej wirusów, leczonych odpowiednimi przeciwciałami. Wirusy traktowane surowicą odpornościową tworzą agregaty immunologiczne (mikroprecypitaty). Wokół wirionów tworzy się „korona” przeciwciał, skontrastowana z kwasem fosforowolframowym lub innymi preparatami o dużej gęstości elektronowej.

123. Reakcja strącania w żelu w celu określenia toksygenności drobnoustrojów, mechanizm, metody wiązania.

Reakcja wytrącania (RP)- jest to tworzenie i wytrącanie kompleksu rozpuszczalnego antygenu molekularnego z przeciwciałami w postaci zmętnienia, zwanego osadem. Powstaje przez zmieszanie antygenów i przeciwciał w równoważnych ilościach; nadmiar jednego z nich obniża poziom tworzenia kompleksu immunologicznego.

W 1946 r. J. Oudin zaproponował prostą metodę dyfuzji, zgodnie z którą jeden ze składników reakcji strącania, zwykle surowica, znajduje się w żelu, a drugi – antygen – jest nakładany na pierwszy w postaci rozwiązanie.

Antygen, dyfundując do żelu, tworzy w nim białe linie precypitacji z przeciwciałami, które są wyraźnie widoczne przy bocznym oświetleniu. W 1948 J. Ouchterlonu opracował jeszcze prostszą i wygodniejszą metodę dwuwymiarowej kontrdyfuzji, która pozwala na bezpośrednie porównanie różnych antygenów i surowic. Ta metoda jest również bardzo cenna w badaniu reakcji krzyżowych.

Do przeprowadzenia reakcji według Ouchterlona stosuje się 1% agar przygotowany w soli fizjologicznej, który rozlewa się na szalki Petriego warstwą 0,5 cm wokół obwodu w odległości 1-2 cm od środka. Do centralnej studzienki wlewa się diagnostyczną wytrącającą się surowicę, a do obwodowych studzienek wlewa się porównywany z nią roztwór homologii i antygenów. Wyniki są rejestrowane po 24, 48 i 72 godzinach inkubacji w temperaturze pokojowej.

Przeciwciała i antygeny dyfundują do siebie, aw obszarach, w których powstają ich równoważne stężenia, tworzą się łukowate pasma precypitacji. Jeżeli prążki precypitacji pochodzące z dwóch sąsiednich dołków łączą się, wskazuje to na obecność kilku składników antygenowych w płynie testowym. Reakcja przeciwdyfuzji według Ouchterlohna jest często wykorzystywana do określania toksygenności bakterii, takich jak błonica.

Dalszym rozwinięciem metody precypitacji żelowej jest immunoelektroforeza. Termin ten odnosi się do metody, która łączy rozdzielanie elektroforetyczne mieszaniny antygenów i przeciwdyfuzję Ouchterlohna na tej samej płytce z żelem agarowym. Wytrącającą się surowicę wlewa się następnie do rowka wyciętego w żelu równolegle do kierunku rozdziału elektroforetycznego.

Powstające w wyniku reakcji linie precypitacyjne mają postać łuków wydłużonych w kierunku ruchu elektroforetycznego frakcji antygenu. Immunoelektroforeza umożliwia określenie składu złożonych mieszanin rozpuszczalnych antygenów zawierających do 30 składników, jest zatem cenną metodą diagnostyczną.

Reakcja wytrącania(RP) nazywa się wytrącaniem z roztworu Ag (precypitynogen), gdy jest on wystawiony na działanie surowicy odpornościowej (precypityna) i elektrolitu.

Za pomocą RP antygen można wykryć w rozcieńczeniach 1:100 000, a nawet 1:1 000 000, czyli w tak małych ilościach, których nie można wykryć chemicznie.

Precypitynogeny to ultramikroskopowe cząsteczki naturalnego białka-PS: ekstrakty z mikronów, narządów i TC, materiał pat; produkty rozpadu komórki bakteryjnej, ich lizaty, filtraty. Precypitynogeny są stabilne termicznie, dlatego w celu ich uzyskania materiał poddaje się gotowaniu.

W RP stosuje się płynne przezroczyste Ags.

Surowice strącające uzyskuje się zwykle przez hiperimmunizację królików w cyklach kilkumiesięcznych, wprowadzając do nich zawiesiny bakteryjne, filtraty z hodowli bulionowej, autolizaty, ekstrakty solne mikroorganizmów i białka serwatkowe.

Wystawione przez RP Ascoli. W wąskiej probówce z niewielką ilością nierozcieńczonej wytrącającej się surowicy, trzymając ją pochyloną, ta sama objętość Ag nakładana jest powoli pipetą wzdłuż ścianki.

Aby nie zmieszać obu płynów, probówkę umieszcza się ostrożnie pionowo. Przy dodatniej reakcji w probówce po 5–10 minutach pojawia się szarobiały pierścień na granicy surowicy i badanego ekstraktu. Reakcji koniecznie towarzyszy kontrola surowicy i antygenu.

Reakcja Ascoli służy do identyfikacji wąglika, tularemii, dżumy Ag.

Znalazł również zastosowanie w medycynie sądowej do oznaczania gatunku białka, w szczególności plam krwi, w praktyce sanitarnej w wykrywaniu fałszerstw mięsa, ryb, produkty mączne, zanieczyszczenia w mleku. Wadą tego RP jest niestabilność osadu (pierścienia), który zanika nawet przy lekkim wstrząsaniu. Co więcej, nie można go wykorzystać do określenia skład ilościowy Ag zaangażowane w tworzenie osadu.

Reakcja strącania Ouchterlony'ego. Reakcję umieszcza się na szalkach Petriego w zagłębieniach żelu agarowego.

Jako żel stosuje się dobrze wypłukany przezroczysty agar. Ag i surowica są wprowadzane do żelu agarowego tak, aby dołki zawierające je znajdowały się w pewnej odległości. Dyfuzja do siebie i łącząc się ze sobą, przeciwciało i antygen tworzą kompleks immunologiczny w postaci białego paska w ciągu 24-48 godzin.

W obecności złożonego precypitynogenu pojawia się kilka pasm. W tym przypadku prążki antygenów pokrewnych serologicznie łączą się ze sobą, a prążki heterogenicznych krzyżują się, co umożliwia określenie szczegółów struktury antygenowej badanych substancji.

Jest szeroko stosowany do diagnozowania chorób wywoływanych przez wirusy i bakterie wytwarzające egzotoksyny.

3.Reakcja hemaglutynacji pośredniej (RNGA). Służy do wykrywania polisacharydów, białek, ekstraktów bakterii, mykoplazm, riketsji i wirusów, których kompleksy immunologiczne z aglutyninami nie są widoczne w konwencjonalnym klasycznym RZS lub do wykrywania przeciwciał w surowicach pacjentów wobec tych silnie rozproszonych substancji i najmniejszych drobnoustrojów .

RNGA do serodiagnostyki chorób zakaźnych. Wykorzystując RNHA do wykrywania przeciwciał w surowicach pacjentów, przygotowuje się diagnostykę antygenu erytrocytów.

Reakcja wytrącania.

W tym celu erytrocyty traktuje się przez 15 minut roztworem garbników w rozcieńczeniu 1:20 000–1: 200 000, co zapewnia im stabilność i zwiększa ich zdolność adsorpcji. Następnie miesza się je ze znanym antygenem i inkubuje przez 2 godziny w temperaturze 37 ° C. Uwrażliwione na antygen erytrocyty przemywa się 2-3 razy izotonicznym roztworem chlorku sodu i dodaje do surowicy, rozcieńcza i wlewa do studzienek panele.

Jako kontrolę służą zawiesiny nienaruszonych i obciążonych antygenem erytrocytów, które dodaje się do surowic, dając oczywiście dodatnie i ujemne reakcje.

Wyniki reakcji są brane pod uwagę 2 godziny po inkubacji w termostacie i oceniane z plusami: „++++” - erytrocyty pokrywają dołek w postaci parasola poszarpane krawędzie; „-” – nagromadzenie erytrocytów w postaci „guzika”

Powiązana informacja:

Wyszukiwanie w witrynie:

Reakcja strącania pierścienia

Reakcja adhezji pierścienia jest jedną z najprostszych metody serologiczne. Wykonywany jest w wąskich rurkach wytrącających. Najpierw do wszystkich probówek równomiernie wlewa się klarowny roztwór antygenu pobrany w kilku rozcieńczeniach (1:2; 1:4; 1:8; 1:16).

Połączenie antygenów i przeciwciał następuje na granicy kontaktu odczynników. W wyniku tej interakcji, w przypadkach pozytywnych (gdy antygen odpowiada przeciwciału), po chwili tworzy się osad w postaci opalizującego pierścienia.

Znaleziono reakcję szerokie zastosowanie w praktyka medyczna wykrywanie antygenu wąglika w wełnie, skórach, mięsie zwierząt (reakcja Ascoli); do wykrywania innych patogenów chorób zakaźnych w materiale patologicznym uzyskanym od pacjentów lub w obiektach otoczenie zewnętrzne, a także in kryminalistyczne badanie lekarskie do określenia gatunku białka, w szczególności białka krwi lub innych płynów biologicznych.

Immunodyfuzja Ouchterlony'ego

Reakcję wytrącania można przeprowadzić na żelu agarowym.

Metoda opiera się na fakcie, że cząsteczki antygenów i przeciwciał, ze względu na różne rozmiary, dyfundują w żelu z różną prędkością i w efekcie przemieszczają się na różne odległości. Umożliwia to oddzielenie poszczególnych układów antygenów, gdy są one w mieszaninie, a tym samym umożliwia badanie struktury antygenowej bakterii oraz złożonych białek, surowic i tkanek zwierzęcych.

Wizualne i skuteczna metoda Wytrącanie żelowe zasugerował Ouchterlony.

Małe dołki wykonuje się na szalkach Petriego z agarem wyciętym w pewnej odległości od siebie. Do jednego wlewa się antygen, do innych surowicę. Składniki reakcji dyfundują w żelu ku sobie i tworzą widoczną linię precypitacji, gdzie antygeny spotykają się z optymalnymi stężeniami przeciwciał swoistych dla antygenu. Ponieważ odczynniki dyfundują koncentrycznie z dołków, można przeprowadzić wiele testów, umieszczając kilka dołków z różnymi antygenami (lub różnymi rozcieńczeniami tego samego antygenu) wokół dołka z przeciwciałem.

Reakcja Ouchterlony'ego umożliwia wyciągnięcie wniosków na temat charakteru antygenu ze znanej surowicy i odwrotnie, ze znanego antygenu określa się charakter przeciwciał.

Zaletą metody jest to, że umożliwia porównanie składników antygenowych złożonych mieszanin i ocenę ich podobieństwa lub różnic. Aby porównać wspólne antygeny, przygotowuje się agar ze studzienkami: do jednego wlewa się antysurowicę, a porównywane antygeny wlewa się do pozostałych. Jeśli antygeny są różne, to prążki precypitacji są rozmieszczone nierównomiernie.

Immunoelektroforeza

W ostatnich latach do precyzyjnych badań immunologicznych wykorzystywana jest metoda immunoelektroforezy. Metoda została po raz pierwszy opisana przez P.

Grabar i K. A. Williams w 1953. Jest to połączenie elektroforezy w żelu agarowym na płytkach szklanych z immunodyfuzją. Na początku przeprowadza się rozdział elektroforetyczny antygenu, który często jest mieszaniną białka lub innych cząsteczek. Aby to zrobić, antygen wprowadza się do zagłębienia wcześniej wyciętego w agarze, a płytkę agarową umieszcza się na pewien czas w strefie stałego prądu elektrycznego.

z powodu inna prędkość ruch cząsteczek polega na rozdzieleniu antygenu na jego części składowe. Następnie wytrącająca się surowica odpornościowa jest wprowadzana do rowka wyciętego w kierunku równoległym do przepływu prądu.

Antygen i antysurowica dyfundują w żelu ku sobie.

opad atmosferyczny

Każdy antygen daje strefę wytrącania w postaci łuku z odpowiadającymi mu przeciwciałami. Liczba, położenie i kształt tych linii dają wyobrażenie o składzie oryginalnej mieszaniny antygenów.

reakcja flokulacji

Metoda została zaproponowana przez Ramona w 1924 roku.

Polega na tym, że mieszanina toksyny z antytoksyczną surowicą w określonych warunkach powoduje zmętnienie i wytrącenie. W tym przypadku reakcja zachodzi wcześniej w tych probówkach, w których ilość antytoksyny odpowiada dawce całkowicie neutralizującej tę ilość toksyny.

Dlatego, jeśli znana jest siła toksyny, można określić ilość antytoksyny w nieznanej surowicy testowej. W tym celu przygotowuje się kilka rozcieńczeń surowicy testowej, do każdego rozcieńczenia dodaje się takie same ilości znanej toksyny, po czym obserwuje się, która z probówek najpierw ulegnie flokulacji (zmętnienie roztworu). Określ początkową flokulację. Następnie dokonuje się obliczenia.

Na przykład wymagane jest oznaczenie stężenia przeciwciał przeciw błonicy w badanej surowicy. W reakcji wykorzystuje się toksynę błoniczą zawierającą 50 Lf na 1 ml (Lf to minimalna ilość toksyny, która jest neutralizowana przez 1 jednostkę antytoksyczną (AU) surowicy odpornościowej.

Załóżmy, że początkową flokulację zanotowano w probówce zawierającej 0,2 ml tej surowicy i 2 ml znanej toksyny o aktywności 100 Lf (50 Lf x 2).

Tak więc 0,2 ml surowicy zneutralizowało tę toksynę. Dlatego 0,2 ml surowicy zawiera 100 AU, a w 1 ml tej surowicy stężenie przeciwciał odpowiada 500 AU (100 AU x 5).

W podobny sposób reakcję flokulacji można wykorzystać w odwrotnym celu – do określenia właściwości uodporniających toksoidów.

Wymaga to standardowej surowicy antytoksycznej.

Reakcja neutralizacji

Reakcja jest wykorzystywana w diagnostyce zatruć bakteriami pokarmowymi w celu określenia toksyn bakteryjnych w badanym materiale. Ponadto można go umieścić w badaniu niektórych obiektów środowiska zewnętrznego dla treści bakterie chorobotwórcze wytwarzanie toksyn, na przykład podczas badania gleby pod kątem obecności patogenów tężca lub zgorzeli gazowej.

Wiadomo, że toksyna zmieszana z homologiczną surowicą antytoksyczną nie wykazuje swojej działanie toksyczne ponieważ toksyna jest neutralizowana. Reakcja oddziaływania toksyny z antytoksyną z reguły jest ściśle specyficzna, dlatego w celu wywołania reakcji neutralizacji w celu określenia rodzaju toksyny konieczne jest posiadanie surowic diagnostycznych specyficznych dla każdego typu i rodzaj toksyny. Mieszanina 2-3 surowic antytoksycznych i więcej może być użyta jednocześnie, jeśli przewiduje się obecność kilku toksyn w badanym materiale.

Reakcja neutralizacji pozwala określić rodzaj i rodzaj toksyny patogenu.

Materiałem do badań może być filtrat produktów spożywczych, które rzekomo spowodowały zatrucie, popłuczyny z naczyń, w których te produkty się znajdowały itp.

Przeprowadzana jest wstępna neutralizacja domniemanej toksyny. W tym celu do probówki z materiałem testowym (probówka doświadczalna) dodaje się antytoksyczną surowicę diagnostyczną (zawiera przeciwciała przeciwko pożądanej toksynie); równą objętość soli fizjologicznej dodaje się do innej probówki (kontrola).

Po krótkiej inkubacji zawartość probówek wprowadza się do dwóch grup myszy białych (doświadczalnej i kontrolnej).

Wyniki reakcji neutralizacji są brane pod uwagę bezpośrednio po śmierci zwierząt kontrolnych. W tym przypadku fakt przeżycia zwierząt, które otrzymały surowica antytoksyczna wraz z badanym materiałem wskazuje na obecność w nim toksyny odpowiadającej wstrzykniętej surowicy.

Zaletą reakcji neutralizacji jest wysoka wiarygodność otrzymanych wyników.

Jednak pod względem czułości i szybkości uzyskiwania odpowiedzi ustępuje niektórym innym metodom badawczym.

Reakcje lizy

Reakcje lizy są zwykle nazywane rozpuszczaniem antygenów korpuskularnych pod działaniem przeciwciał specyficznych dla tego antygenu w obecności dopełniacza.

Z reakcje immunologiczne w oparciu o zjawisko lizy bakterii i innych antygenów korpuskularnych stosuje się głównie reakcje bakteriolizy i hemolizy.

reakcja bakteriolizy

Reakcja zachodzi zarówno in vitro, jak i in vivo. Ta ostatnia znana jest jako reakcja V.I. Isajew - Pfeiffer.

Ci naukowcy wykazali, że jeśli świnki morskie wstępnie immunizowane antygenami cholery, a następnie ich późniejsze wprowadzenie do jamy brzusznej wysoce zjadliwej kultury vibrio cholerae nie powoduje zakażenia zwierząt, ponieważ w Jama brzuszna patogen rozpuszcza się pod wpływem specyficznych przeciwciał.

Później ja.

I. Miecznikow udowodnił, że podobne rozpuszczanie cholery vibrio pod wpływem surowicy odpornościowej zachodzi w probówce, jeśli do głównych składników dodaje się świeżą surowicę, źródło dopełniacza. Rozpuszczanie się bakterii pod wpływem specyficznych przeciwciał w obecności dopełniacza nazywa się reakcją bakteriolizy.

Podczas przygotowania reakcji bakteriolizy najpierw przygotowuje się serię 10-krotnych rozcieńczeń surowicy testowej. Następnie do każdej probówki dodaje się taką samą ilość (1-2 krople) zawiesiny drobnoustrojów. Do mieszaniny dodaje się dopełniacz. Po inkubacji w 37°C, mieszaniną z każdej probówki zaszczepia się pożywkę w celu określenia obecności lub nieobecności żywych bakterii.

Reakcja może być wykorzystana do wykrywania przeciwciał przy użyciu znanego drobnoustroju lub do określenia rodzaju drobnoustrojów przy użyciu diagnostycznej surowicy odpornościowej.

W praktyczna praca bakteriolodzy rzadko stosują tę reakcję, głównie do różnicowania cholery i wibracji choleropodobnych.

Reakcja hemolizy

Mechanizm hemolizy jest podobny do bakteriolizy.

Erytrocyty użyte w reakcji to antygen. Źródłem przeciwciał jest surowica antyerytrocytowa (na przykład, jeśli w reakcji stosuje się erytrocyty owiec, wówczas niezbędną surowicę ze specyficznymi przeciwciałami anty-erytrocytowymi uzyskuje się od królików immunizowanych erytrocytami owiec).

Surowica krwi świnki morskiej jest najczęściej stosowana jako dopełniacz w reakcjach lizy, ponieważ zawiera znacznie więcej dopełniacza niż w surowicach innych zwierząt.

W tych przypadkach, gdy przeciwciała w obecności dopełniacza niszczą erytrocyty, uwalniana jest z nich hemoglobina, a mieszanina reagująca z mętnej zawiesiny erytrocytów zamienia się w przezroczystą czerwoną ciecz (krew lakieru).

Ta reakcja nazywana jest hemolizą. W praktyce laboratoryjnej jest stosowany jako wskaźnik adsorpcji dopełniacza w reakcji wiązania dopełniacza.

Powiązana informacja:

Wyszukiwanie w witrynie:

Plan wykładu: Przedmiot i krótka historia rozwoju mikrobiologii. Ogólne właściwości drobnoustrojów i ich miejsce w przyrodzie.

Reakcja wytrącania

Mikrobiologia weterynaryjna i jej zadania

mir.zavantag.com > Biologia > Wykład

1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15

^ RA został po raz pierwszy opracowany przez M. Grubera w 1896 roku. Istotą reakcji jest oddziaływanie przeciwciała z antygenem, w wyniku którego dochodzi do sklejania (aglutynacji) drobnoustrojów z utworzeniem płatków, grudek widocznych gołym okiem. RA jest szeroko stosowany do diagnostyka serologiczna wiele infekcje bakteryjne(bruceloza, nosacizna, salmonelloza, kolibakterioza itp.) oraz do serologicznej identyfikacji gatunków i typów izolowanych mikroorganizmów. Istnieje kilka metod przygotowania RZS: probówka (wolumetryczna), kroplówka (płytka), kropla krwi, reakcja pierścieniowa z mlekiem, reakcja hemaglutynacji i jej warianty (RHGA, RNHA), test antyglobulinowy Coombsa itp. ^ – zamiast surowicy pobierana jest krew. Ustaw reakcję płytki. Diagnozować pullorozę kur i indyków, mykoplazmozę kurcząt. Reakcja Coombsa umożliwia wykrycie niekompletnych przeciwciał. Te ostatnie są jednowartościowe i dlatego hamują tworzenie aglutynianu. Metoda opiera się na zastosowaniu surowicy antyglobulinowej, która służy jako pośrednik do łączenia niekompletnych przeciwciał utrwalonych na antygenach korpuskularnych (erytrocyty, bakterie). ^ - nie dotyczy odczynów serologicznych i diagnostycznie dokładnych, pozwala jednak na wykrycie antygenu - hemaglutyniny i ustalenie właściwości hemaglutynujących (zdolność do aglutynacji czerwonych krwinek) u niektórych bakterii i mykoplazm. RNG- w ostatnich latach zajmuje jedno z czołowych miejsc w serodynamice. Jego istota polega na tym, że cząsteczki białka antygenu odpowiedniego patogenu lub przeciwciała są wstępnie adsorbowane na erytrocytach owcy lub innego zwierzęcia traktowanego taniną. Następnie umieścić reakcję mieszając uczulone erytrocyty z surowicami krwi chorych zwierząt lub w drugim przypadku z badanym antygenem. W obecności spec. surowicy. Występuje aglutynacja erytrocytów przeciwciał przeciwko temu antygenowi (lub odwrotnie) - reakcja jest pozytywna. Zaproponowany przez R. Krausa w 1897 r. Wytrącanie jest zjawiskiem obserwowanym podczas interakcji przeciwciał-precypityn i antygenu-precypitynogenu. Istotą reakcji jest zmiana dyspersji koloidów antygenu i ich wytrącanie pod wpływem swoistych przeciwciał w surowicy odpornościowej. RP można umieścić w probówkach w płynnej pożywce (reakcja precypitacji pierścieniowej) lub w żelu agarowym (lamelarny RDP). Reakcja pierścieniowo-precypitacyjna została po raz pierwszy zaproponowana przez Ascoli (1910), jest ona najszerzej stosowana do diagnozowania wąglika. Podczas prowadzenia ekspertyza weterynaryjna RP to metoda określania fałszowania mięsa, mąki i innych produktów. Specjalne znaczenie ta reakcja ma sądowe badanie lekarskie w celu określenia rodzaju krwi. Zastosowanie reakcji precypitacji w środowisku płynnym nie pozwala jednak na scharakteryzowanie niejednorodności antygenów, tj. liczba i stężenie antygenów w preparacie. Informacje te można uzyskać umieszczając RP w żelu (zwykle agarze). Mając prędkość ruchu, różne antygeny leku dyfundują w różny sposób, tworząc osady w grubości przezroczystego żelu w miejscu, w którym spotykają się z przeciwciałem homologicznym. Lokalizacja i koncentracja linii precypityn będzie charakterystyczna dla każdego składnika preparatu antygenowego, co stanowi kryterium jego jakości. Poprzez rozcieńczenie preparatu można scharakteryzować względną zawartość zawartych w nim antygenów. Opracowano kilka metod ustalania RDP: metodę bezpośredniej jednowymiarowej dyfuzji według Udena (1946), metodę prostej immunodyfuzji promieniowej według Manciniego (1963), metodę podwójnej dyfuzji w żelu agarowym według Ouchterlony (1948) ) itp. ^ (PH) Reakcja została po raz pierwszy zademonstrowana przez Behringa i Kitazato w 1890 roku. na modelu toksyny tężcowe i antytoksyny. Istota RN polega na zdolności homologicznych przeciwciał surowicy odpornościowej do tłumienia (neutralizowania) zakaźnych właściwości czynnika wywołującego chorobę lub jej produktów przemiany materii. Aby ustalić wynik reakcji z mieszaniną antygen-przeciwciało zakażaj zwierzęta laboratoryjne, CC, EC. Dodatnim wskaźnikiem pH jest brak śmierci biologicznych systemów testowych. W praktyka bakteryjna RN jest stosowany w diagnostyce beztlenowej enterotoksemii, zatrucia jadem kiełbasianym itp. RN jest przeprowadzany w celu wykrycia i miareczkowania toksyn, toksoidów lub antytoksyn. ^ (RSK) Opracowany przez Bordeta i Zhangu (1901) na podstawie dwóch zjawisk: bakteriolizy i hemolizy. Służy do wykrywania przeciwciał w surowicy krwi oraz do wykrywania antygenu w badanym materiale (w przypadku brucelozy, nosacizny, riketsjozy, gruźlicy itp.). Ta reakcja należy do pośredniej reakcji dwuukładowej. Składa się z 5 elementów: Antygen. Testuj surowicę. Komplement. Serum hemolityczne. Erytrocyty owiec. Komponenty 3,4,5 tworzą system wskaźników. Jeśli antygen i przeciwciało surowicy testowej odpowiadają sobie w innym powstaje kompleks immunologiczny antygen-przeciwciało, który wiąże się i ekstrahuje dopełniacz ze środowiska, w którym zachodzi reakcja. W przypadku braku przeciwciał odpowiadających antygenowi w surowicy testowej, określony kompleks nie powstaje - dopełniacz pozostaje wolny. Ponieważ są to procesy niewidoczne, aby rozwiązać kwestię tego, co stało się z dopełniaczem, jako wskaźnik wprowadza się do probówki składniki układu hemolitycznego - surowicę hemolityczną + erytrocyty. Jeśli dopełniacz zwiąże się w układzie bakteriologicznym, nie nastąpi hemoliza erytrocytów, wynik jest pozytywny – surowica zawiera przeciwciała. Obecność hemolizy służy jako wskaźnik obecności wolnego dopełniacza w układzie bakteriologicznym, co jest możliwe tylko przy braku przeciwciał w surowicy testowej - wynik jest ujemny. RSC działa pod ścisłą zasadą wskaźniki ilościowe składniki. Osiąga się to przez ich wstępne miareczkowanie (dopełniacz i surowica hemolityczna są miareczkowane w dniu reakcji; antygen drobnoustrojowy - raz w ciągu 2-3 miesięcy). Miareczkowanie to określenie najmniejszej ilości jednego lub drugiego składnika w reakcji w celu przeprowadzenia reakcji, nadmiar lub niedobór jest zniekształceniem wyników. RDSC jest odmianą CSC, ale różni się tym, że pierwsza faza reakcji przebiega 16-18 godzin w zimnie (40C), co zwiększa czułość ze względu na dłuższą adsorpcję dopełniacza przez kompleks antygen-przeciwciało.

7 8 9 10 11 12 13 14 15

Podobny:

	Definicja „mikrobiologii środowiskowej” Mikrobiologia ogólna, badająca relacje mikroorganizmów między sobą, z obiektami środowiska zewnętrznego i makroorganizmem		Najbardziej ogólne i podstawowe koncepcje odzwierciedlające zasadnicze, ... Filozofia to nauka, która studiuje najwięcej Postanowienia ogólne o człowieku, naturze i wiedzy
	Plan Przedmiot i metoda dyscypliny „Międzynarodowe stosunki gospodarcze”... Przedmiot i metoda dyscypliny „Międzynarodowe Stosunki Gospodarcze” a historia rozwoju Międzynarodowych Stosunków Gospodarczych		Pytania do egzaminu z kursu „psychologia prawna” Dla studentów ... Pojęcie psychologii prawa. Przedmiot, zadania i historia rozwoju psychologii prawa
	1. Przedmiot i metoda historii doktryn politycznych i prawnych > Przedmiot ... Wynika to z faktu, że w ramach tej dyscypliny prawnej badany i omawiany jest konkretny temat - historia powstania ...		1. Historia filozofii jako nauki. Jego przedmiot i metoda Jej przedmiotem są najogólniejsze prawa, zasady, sposoby i formy bytu, stosunek człowieka do otaczającego go świata i do samego siebie….
	Ministerstwo Edukacji i Nauki Republiki Kazachstanu Związek Studentów… Niniejszy regulamin republikańskiego konkursu „Student Roku 2011” (zwany dalej konkursem) określa jego cele i zadania, uczestnicy ...		Definicja pojęć „mikrobiologia” i „mikroorganizm” …
	Pytania dotyczące przygotowania do testu z dyscypliny „konfliktologia” Konfliktologia jako nauka: przedmiot, cele, zadania, aktualne problemy, znaczenie obecny etap rozwój społeczeństwa		O regionalnym konkursie teledysków „k-roly-k!” Postanowienia ogólne Niniejszy Regulamin określa cele, zadania, zasady Konkursu, tryb jego organizacji i przebiegu, tryb udziału i rozstrzygnięcia…

Dodaj przycisk do swojej witryny:
materiały szkolne
www.mir.zavantag.com

Reakcja wytrącania

Opady i aglutynacja są dość podobnymi reakcjami, które różnią się głównie na podstawie właściwości fizyczne AG.

W pierwszym przypadku występuje w postaci rozpuszczalnej, w drugim - w formach korpuskularnych. RP opiera się na tworzeniu osadu podczas reakcji AG-AT. RP jest bardzo specyficzny i wrażliwy.

Składniki reakcji:

1. rozpuszczalny antygen lub hapten (precipititogen);

2. AT - precypityny (surowica wytrącająca odporność; uzyskana przez immunizację królików odpowiednimi roztworami antygenów);

Reakcja wytrącania

izotoniczny roztwór chlorku sodu lub żel agarowy.

Metody ustawiania RP:

1) RP w roztworach - r.

wytrącanie pierścieniowe;

2) RP w żelu.

Reakcja strącania pierścieniowego jest umieszczana w wąskich rurkach strącających, do których wlewa się strącające surowice.

Następnie wlej roztwór precypitynogenu. Przy reakcji dodatniej na granicy składników pojawia się mętny pierścień wytrącający.Przykładem tej metody przygotowania RP jest reakcja termoprecypitacji Ascoli, która służy do wykrywania termostabilnego haptenu patogenu wąglika, wyekstrahowanego z narządów zwierzęcych, skóra, wełna przez ekstrakcję podczas gotowania Jedna z odmian RP w żelu (reakcja Ouchterlony'ego) pozwala określić toksyczność pałeczka błonicy z antytoksyczną surowicą.

Na szalce Petriego z pożywka umieścić pasek bibuły filtracyjnej nasączonej antytoksyczną surowicą błonicy i zaszczepić badanymi kulturami w formie pociągnięć prostopadłych do paska papieru. Inkubowana w 37 PS w ciągu dnia. W obecności toksynogennej hodowli w miejscu oddziaływania toksyny z antytoksyną tworzą się linie precypitacji.Reakcja precypitacji w żelu nazywana jest immunodyfuzją.

Często przez forezę w żelu - immunoelektroforeza. Zasada metody: badany antygen jest frakcjonowany elektroforetycznie. otrzymane frakcje analizuje się metodą podwójnej dyfuzji z użyciem antysurowicy.

Reakcja Ascoli służy do diagnozowania wąglika w celu wykrycia antygenu prątków wąglika. Aby ustawić reakcję strącania, musisz mieć: precypitynogen - hapten B.

Antrachis (ekstrakt tkankowy), precypityna (surowica wytrącająca wąglika) i sól fizjologiczna.

Preparat termoprecypitynogenu.

1. Wlać 10 ml soli fizjologicznej do kolby zawierającej 1 g pokruszonej skóry lub 1 ml kultury B. anthracis.

2. Umieść kolbę we wrzącej łaźni na 30-45 minut.

3. Przefiltruj azbest. Filtrat powinien być całkowicie klarowny. W przypadku reakcji strącania przesącz rozcieńcza się 100 razy lub więcej.

Przygotowanie reakcji strącania pierścieniowego.

1) 0,3 ml całej strącającej surowicy lub rozcieńczonej 1:5, 1:10 wlewa się do probówki do strącania.

2) Precypitynogen nakłada się ostrożnie wzdłuż ścianki probówki.Reakcję uważa się za pozytywną, jeśli nie później niż 5-15 minut na granicy dwóch cieczy utworzy się mętny pierścień wytrąconego białka.

Podczas konfigurowania reakcji strącania stosuje się następujące kontrole:

a) roztwór antygenu i soli fizjologicznej;

b) specyficzna surowica i fizyczna.

c) antygen i surowica niespecyficzna.

We wszystkich probówkach kontrolnych nie powinno być zmętnienia Do reakcji strącania stosuje się specjalne rurki strącające o wysokości 40-60 mm i średnicy 4-5 mm, strącanie w wąskich probówkach zachodzi znacznie szybciej i przejawia się wyraźniej niż w zwykłych probówkach są dokładnie myte i suszone, dzięki czemu ich szkło jest całkowicie przezroczyste i suche.

W reakcji precypitacji wytrąca się swoisty kompleks immunologiczny, składający się z rozpuszczalnego antygenu (lizatu, ekstraktu, haptenu) i swoistego przeciwciała w obecności elektrolitów.

Mętny pierścień lub osad powstały w wyniku tej reakcji nazywa się Osad. Ta reakcja różni się od reakcji aglutynacji głównie wielkością cząstek antygenu.

Reakcja wytrącania jest zwykle stosowana do określenia antygenu w diagnostyce wielu infekcji (wąglik, zapalenie opon mózgowych itp.); w medycynie sądowej - w celu określenia gatunku krwi, nasienia itp.; w badaniach sanitarno-higienicznych - przy stwierdzeniu fałszowania produktów; z jego pomocą określić związek filogenetyczny zwierząt i roślin. Do reakcji potrzebujesz:

1. Przeciwciała (precypityny) - surowica immunologiczna o wysokim mianie przeciwciał (nie niższym niż 1:100 000). Miano wytrącającej się surowicy jest określane przez najwyższe rozcieńczenie antygenu, z którym reaguje. Serum jest zwykle używane w postaci nierozcieńczonej lub rozcieńczonej 1:5 -1:10.

2. Antygen - rozpuszczone substancje o charakterze białkowym lub lipidowym polisacharydowym (pełne antygeny i hapteny).

3. Roztwór izotoniczny.

Główne metody prowadzenia reakcji strącania to: reakcja strącania pierścieniowego oraz reakcja strącania w agarze (żelu).

Uwaga! Wszystkie składniki biorące udział w reakcji strącania muszą być całkowicie przezroczyste.

Reakcja strącania pierścienia. Do probówki do precypitacji dodaje się 0,2-0,3 ml (5-6 kropli) surowicy za pomocą pipety Pasteura (surowica nie powinna opadać na ścianki probówki). Antygen nakłada się ostrożnie na surowicę w tej samej objętości, wylewając ją cienką pipetą Pasteura wzdłuż ścianki probówki. Probówka trzymana jest w pozycji pochylonej. Przy prawidłowym nakładaniu warstw należy uzyskać wyraźną granicę między surowicą a antygenem. Ostrożnie, aby nie pomieszać płynu, umieść probówkę na statywie. Przy pozytywnym wyniku reakcji na granicy antygenu i przeciwciała powstaje mętny „pierścień” - osad.

Reakcja wytrącania w agarze(żel). Osobliwością reakcji jest to, że oddziaływanie antygenu i przeciwciała zachodzi w gęstym podłożu, tj. in żel. Powstały osad daje mętne pasmo na grubości podłoża. Brak prążka wskazuje na niedopasowanie składników reakcji. Reakcja ta jest szeroko stosowana w badaniach biomedycznych, w szczególności w badaniu powstawania toksyn w czynniku wywołującym błonicę.

Reakcja lizy (cytoliza immunologiczna)

liza immunologiczna- to rozpuszczanie komórek pod wpływem przeciwciał z obowiązkowym udziałem dopełniacza. Do reakcji potrzebujesz:

1. Antygen drobnoustroje, erytrocyty lub inne komórki.

2. Przeciwciało(lizyna) - surowica immunologiczna, rzadko surowica pacjenta. Surowica bakteriolityczna zawiera przeciwciała zaangażowane w lizę bakterii; hemolityczne - hemolizyny, które przyczyniają się do lizy czerwonych krwinek; do lizy krętków potrzebne są spirochetolizyny, komórki - itolizyny itp.

3. Komplement. Najbardziej dopełniacza w surowicy świnek morskich. Ta surowica (mieszanina z kilku zwierząt) jest zwykle stosowana jako uzupełnienie.

4. Roztwór izotoniczny.

Reakcja wytrącania.

Nazwa parametru	Oznaczający
Temat artykułu:	Reakcja wytrącania.
Rubryka (kategoria tematyczna)	Edukacja

Reakcja strącania (RP) - wytrącanie rozpuszczalnego antygenu pod działaniem przeciwciał w obecności elektrolitu. Widoczny efekt reakcji (zjawisko opadów) - mętność (tworzenie mętnego pierścienia lub osadu - Osad).

RP służy do wykrywania nieznanego antygenu w wielu choroba zakaźna: z wąglikiem, tularemią, zapaleniem opon mózgowych, ospą small. W medycynie sądowej służy do określania gatunku krwi, nasienia; w badaniach sanitarno-higienicznych - w celu ustalenia fałszerstw produktów spożywczych. RP jest bardzo czuły i może wykryć antygen w rozcieńczeniach 1:1 000 000 i 1:100 000 000.

Składniki reakcji strącania.

1. Antygen (precypitynogen) - jest to antygen o charakterze molekularnym, który jest w stanie drobno zdyspergowanym (rozpuszczalnym). Precypitynogeny - ϶ᴛᴏ różne lizaty lub ekstrakty tkankowe itp.
Hostowane na ref.rf
Precypitynogen różni się od aglutynogenu wielkością cząstek antygenu. Aglutynogen To ma rozmiary komórek(to nie są zniszczone całe komórki), ale wymiary wytrącanie współmierne wielkość cząsteczki(są to białka i ich kompleksy z węglowodanami lub lipidami). Roztwór precypitogenu przezroczysty.

2. Przeciwciała (precypityny) znajdują się w ludzkiej surowicy lub w immunodiagnostycznych wytrącających surowicach, które zawierają znane przeciwciała.

3. Elektrolit- izotoniczny roztwór chlorku sodu.

Uzyskanie precypitogenu.

Uzyskuje się go poprzez zmielenie materiału i ekstrakcję z niego antygenów białkowych przez gotowanie lub innymi metodami.

Przykłady precypitogenów: lizaty lub wyciągi z różnych narządów i tkanek, surowica obcej krwi (surowica jest rozwiązanie, przede wszystkim różne białka), filtraty kultur bulionowych drobnoustrojów, ekstrakty solne drobnoustrojów, autolizaty itp.

Uzyskanie strącających surowic.

Otrzymywany przez hiperimmunizację królików odpowiednimi precypitynogenami. Takie surowice zawierają przeciwciała przeciwko tym precypitynogenom, którymi immunizowano króliki.

Przykłady strącania sera: wytrącające się serum wąglikowe(zawiera przeciwciała przeciwko antygenom wąglika), wytrącanie surowicy przeciw meningokokom(zawiera przeciwciała przeciwko antygenom czynnika wywołującego zapalenie opon mózgowych) itp.

miano wytrącająca surowica - ϶ᴛᴏ najwyższe rozcieńczenie precypitynogenu, przy którym surowica nadal reaguje na precypitację.

Sposoby ustawienia RP.

1. Reakcja strącania pierścieniowego - przeprowadzana w specjalnych rurkach strącających (średnica - 0,4-0,5 cm, wysokość - 7-8 cm). Do probówki dodaje się 0,2 - 0,3 ml wytrącającej się surowicy i taką samą ilość precypitynogenu ostrożnie nakłada się wzdłuż ścianki długim nosem pipety Pasteura. Następnie ostrożnie pozycja pozioma rury są umieszczone pionowo.

Rozliczanie wyników reakcji przeprowadzane przez pojawienie się białego pierścienia na granicy antygen-przeciwciało. Z pozytywną reakcją taki pierścień jest obserwowany. W tym przypadku antygen odpowiada przeciwciału i następuje ich wiązanie.

Po ugotowaniu i przefiltrowaniu ekstrakty wodne narządów i tkanek, wtedy reakcja jest zwykle nazywana reakcją opady termotermiczne (na przykład w diagnostyce wąglika).

2. Reakcja strącania żelu - przeprowadza się na szalkach Petriego lub na szkiełkach, na których umieszcza się warstwę żelu agarowego. Gdy żel krzepnie, wycina się w nim dołki, w których umieszcza się antygeny lub przeciwciała, lub oba. Wyróżnić 2 metody RP w żelu:

metoda prosta (promieniowa) immunodyfuzja: jeden ze składników reakcji immunologicznej (antygen lub przeciwciało) umieszcza się w studzience, a drugi składnik miesza się z agarem; z wynikiem pozytywnym (antygen odpowiada przeciwciału) wokół dołka tworzy się pierścień osadu ;

b) metoda podwójna immunodyfuzja: zarówno przeciwciało, jak i antygen są umieszczone w oddzielnych studzienkach, dyfundują w żelu agarowym ku sobie; z wynikiem pozytywnym gdzie spotykają się przeciwciała i antygeny linie opadowe.

Przykład RP w żelu to reakcja podwójnej immunodyfuzji Ouchterlony'ego w diagnostyce błonicy

Immunoelektroforeza - jest to metoda łącząca metodę elektroforezy i reakcję strącania. Mieszanina antygenów (na przykład białek surowicy krwi) jest rozdzielana w żelu za pomocą elektroforezy. Następnie w celu odnalezienia i określenia pożądanego białka (nieznanego antygenu) stosuje się diagnostyczną surowicę wytrącającą, która zawiera przeciwciała przeciwko temu białku (znane przeciwciało). W tym celu do rowka równolegle do białek wprowadza się surowicę diagnostyczną. Jeśli wśród białek jest takie, które odpowiada przeciwciału w surowicy, to wokół niego powstaje linie opadowe.

Reakcja wytrącania. - koncepcja i rodzaje. Klasyfikacja i cechy kategorii „Reakcja opadów”. 2017, 2018.