Hamis negatív teszt – közvetett Coombs-teszt. Coombs-teszt: közvetlen és közvetett

- antiglobulin teszt, amelynek célja az Rh-faktorral szembeni hiányos vörösvértest-ellenes antitestek azonosítása Rh-negatív vérben - egy specifikus fehérje, amely az Rh-pozitív vér eritrocitáinak felszínén található. Két típusa van ezt a tesztet: direkt – antitestek kimutatása a vörösvértestek felszínén, indirekt – antitestek kimutatása vérszérumban. Közvetlen vizsgálatot végeznek a vérbetegségek diagnosztizálásában és kezelésének monitorozásában: hemolitikus anémia, hemolitikus betegségújszülöttek és mások. Közvetett tesztet végeznek a donor és a recipiens vérének összeegyeztethetőségének felmérésére transzfúzió során, valamint az Rh-konfliktus jelenlétének és kockázatának meghatározására a terhesség tervezése és kezelése során. A Coombs-teszt anyaga az oxigénmentesített vér, a vizsgálatot az agglutinációs reakción alapuló módszerekkel végezzük. Általában mindkét teszt ad negatív eredmény. Az elemzés egy napon belül befejeződik. Összesen 87 olyan címet találtak Moszkvában, ahol ezt az elemzést el lehetett végezni.

- antiglobulin teszt, amelynek célja az Rh-faktorral szembeni hiányos vörösvértest-ellenes antitestek azonosítása Rh-negatív vérben - egy specifikus fehérje, amely az Rh-pozitív vér eritrocitáinak felszínén található. Ennek a tesztnek két típusa van: közvetlen - antitestek kimutatása a vörösvértestek felszínén, közvetett - antitestek kimutatása a vérszérumban. Közvetlen vizsgálatot végeznek a vérbetegségek diagnosztizálásában és kezelésében: hemolitikus anémia, újszülöttek hemolitikus betegsége és mások. Közvetett tesztet végeznek a donor és a recipiens vérének összeegyeztethetőségének felmérésére transzfúzió során, valamint az Rh-konfliktus jelenlétének és kockázatának meghatározására a terhesség tervezése és kezelése során. A Coombs-teszt anyaga vénás vér, a vizsgálatot az agglutinációs reakción alapuló módszerekkel végzik. Általában mindkét teszt negatív eredményt ad. Az elemzés egy napon belül befejeződik.

Coombs teszt – klinikai vizsgálat Rh-negatív vér, amelynek célja az Rh-faktor elleni antitestek kimutatása. A tesztet az Rh-konfliktus és a hemolitikus reakciók kialakulásának kockázatának azonosítására használják. Minden emberben a vörösvértestek felülete bizonyos antigéneket vagy agglutinogéneket - vegyületeket tartalmaz. eltérő természetű, amelynek megléte vagy hiánya alapján ítélik meg a vércsoportot és az Rh-faktort. Sokféle antigén létezik, beleértve orvosi gyakorlat legnagyobb gyakorlati jelentősége a vércsoportot meghatározó A és B agglutinogént, valamint az Rh faktort meghatározó D agglutinogént tartalmaznak. Nál nél pozitív Rh faktor A D-antigéneket az eritrociták külső membránján észlelik, de nem, ha negatívak.

A Coombs-teszt, amelyet antiglobulin tesztnek is neveznek, az Rh-faktor rendszerrel szembeni hiányos vörösvértest-ellenanyagok kimutatására irányul a vérben. Rh faktor elleni antitestek - specifikus immunglobulinok, amelyek az Rh-negatív vérben keletkeznek, amikor a D agglutinogént tartalmazó eritrociták bejutnak. Ez akkor fordulhat elő, ha egy magzat és egy terhes nő vére keveredik, előzetes vércsoport-meghatározás nélkül végzett vérátömlesztés során. A Coombs-teszt két változatban létezik - közvetlen és közvetett. Közvetlen Coombs-teszt végrehajtásakor a vörösvértestek felületéhez kötődő antitesteket észlelik. A vizsgálatot a hemolitikus reakció okának meghatározására használják. A közvetett Coombs-teszt célja az eritrocita elleni antitestek kimutatása a vérplazmában. Meg kell határozni a vér kompatibilitását a donor és a recipiens vagy az anya és a magzat között, és segít megelőzni az Rh-konfliktus kialakulását és a vörösvértestek későbbi hemolízisét.

A Coombs-teszt mindkét változatához a vért vénából veszik. Az elemzést antiglobulin szérum felhasználásával végzett agglutinációval végezzük. A vizsgálat eredményeit a hematológiában használják fel a hemolitikus reakciók okainak azonosítására, a sebészetben és az újraélesztésben vérátömlesztéskor, a szülészetben és a nőgyógyászatban az Rh-negatív vérű nők terhességének megfigyelésére.

Javallatok

A közvetlen Coombs-teszt, amely a vörösvértestek felületéhez kötődő antitesteket detektálja, hemolitikus reakciókra (a vörösvértestek pusztulása) írják elő. különböző eredetű. A vizsgálat javallott primer autoimmun hemolitikus anémia, transzfúzió utáni hemolitikus anémia, újszülöttek hemolitikus betegsége, autoimmun, daganatos vagy fertőző betegségek által okozott vörösvértest-hemolízis, valamint szedés esetén. gyógyszerek például kinidin, metildopa, prokainamid. Az indirekt Coombs-teszt, amely meghatározza az antitesteket a vérplazmában, az Rh-konfliktus kialakulásának megelőzésére szolgál. Vérátömlesztésre készülő betegeknek, valamint terhes nőknek javasolt negatív Rh faktor feltéve, hogy leendő apa a gyermek pozitív Rh-faktorral rendelkezik.

Az Rh-kompatibilitás meghatározásához a Coombs-tesztet nem írják elő Rh-pozitív vérű betegeknek. Ezekben az esetekben már antigének vannak a vörösvértestek felszínén, az antitestek termelődését nem válthatja ki vérátömlesztés, vagy magzati vér bejutása a terhes nő vérkeringésébe. Ezenkívül a vizsgálat nem javasolt terhes nők számára, ha mindkét szülő negatív Rh-faktorral rendelkezik - ez egy öröklött recesszív tulajdonság. Az ilyen párokban egy gyereknek mindig van Rh negatív vér, immunológiai konfliktus az anyával lehetetlen. Nál nél hemolitikus patológiák Az antiglobulin tesztet nem használják a terápia sikerének ellenőrzésére, mivel az eredmények nem tükrözik a vörösvértestek pusztulási folyamatának aktivitását.

A Coombs-teszt korlátja a kutatási eljárás összetettsége – a megszerzése megbízható eredményeket be kell tartani a hőmérsékleti és időbeli feltételeket, a reagensek és a bioanyagok elkészítésére vonatkozó szabályokat. A Coombs-teszt előnyei közé tartozik az nagy érzékenység. Hemolitikus anémia esetén ennek a tesztnek az eredménye pozitív marad, még akkor is, ha a hemoglobin, bilirubin és retikulocita szint normalizálódik.

Felkészülés az elemzésre és az anyaggyűjtésre

A Coombs-teszt elvégzéséhez használt anyag vénás vér. Speciális követelmények Nincs idő a vérvételre és a beteg felkészítésére. Mint minden vizsgálatnál, evés után legalább 4 órás szünetet kell tartani, és az utolsó 30 percben abbahagyni a dohányzást. a fizikai aktivitás, kerülje el érzelmi stressz. Érdemes előre megbeszélni kezelőorvosával a gyógyszerek szedésének abbahagyásának szükségességét – egyes gyógyszerek torzíthatják a Coombs-teszt eredményeit. A vért fecskendővel veszik ulnaris véna, ritkábban vénából tovább hátoldal ecsetek Néhány órán belül az anyagot a laboratóriumba szállítják.

Közvetlen Coombs-teszt végrehajtásakor antiglobulin szérumot adnak a páciens vérszérumához. Egy idő után a keveréket megvizsgálják az agglutinátok jelenlétére - ezek akkor képződnek, ha antitestek vannak a vörösvértesteken. Ha az eredmény pozitív, akkor meghatározzuk az agglutináló titert. A közvetett Coombs-teszt abból áll több szakasz. Először is, a szérumban jelenlévő antitesteket az injektált vörösvértesteken rögzítik az inkubáció során. Ezután antiglobulin szérumot adunk a mintához, majd bizonyos idő elteltével meghatározzuk az agglutinátok jelenlétét és titerét. Az elemzési időszak 1 nap.

Normális eredmények

Általában a közvetlen Coombs-teszt eredménye negatív (-). Ez azt jelenti, hogy a vérben nincsenek vörösvértestekhez kapcsolódó antitestek, és nem okozhatnak hemolízist. Normális eredmény Az indirekt Coombs-teszt is negatív (-), vagyis nincs Rh-faktor elleni antitest a vérplazmában. A recipiens vérátömlesztésére való felkészüléskor ez a donor vérével való kompatibilitást jelenti, a terhesség monitorozásánál pedig az anya Rh-érzékenységének hiányát, az immunológiai konfliktus kialakulásának alacsony kockázatát. Fiziológiai tényezők, mint például a táplálkozási szokások ill a fizikai aktivitás, nem befolyásolhatja a teszt eredményét. Ezért, ha az eredmény pozitív, orvosi konzultációra van szükség.

Az elemzés diagnosztikai értéke

A pozitív Coombs-teszt eredményét minőségileg (+)-tól (++++-ig), vagy mennyiségileg 1:16 és 1:256 közötti titerekkel fejezik ki. A vörösvértesteken és a vérszérumban lévő antitestek koncentrációjának meghatározását mindkét mintatípusban elvégezzük. Ha a közvetlen Coombs-teszt pozitív, akkor a vörösvértestek külső membránján antitesteket mutatnak ki, amelyek ezeknek a vérsejteknek a pusztulásához vezetnek. Oka lehet előzetes tipizálás nélküli vérátömlesztés - transzfúzió utáni hemolitikus reakció, valamint újszülött erythroblastosisa, gyógyszerhasználat miatti hemolitikus reakció, primer vagy másodlagos autoimmun hemolitikus anémia. A vörösvértestek másodlagos pusztulását okozhatja szisztémás lupus erythematosus, Evans-szindróma, Waldenström makroglobulinémia, paroxizmális hideg hemoglobinuria, krónikus limfocitás leukémia, limfóma, fertőző mononucleosis, szifilisz, mycoplasma pneumonia.

Az indirekt Coombs-teszt pozitív eredménye az Rh-faktor elleni antitestek jelenlétét jelzi a plazmában. A gyakorlatban ez azt jelenti, hogy Rh-szenzibilizáció történt, és fennáll a lehetőség Rh-konfliktus kialakulására a donorvér terhesség alatti infúziója után. A terhességi szövődmények megelőzése érdekében a pozitív Coombs-teszt eredményes nőket egy speciális nyilvántartásba helyezik.

Rendellenességek kezelése

A Coombs-teszt izoszerológiai vizsgálatokra vonatkozik. Eredményei lehetővé teszik a hemolitikus reakció azonosítását, valamint a donor és a recipiens, az anya és a magzat vérének kompatibilitásának meghatározását az Rh-konfliktus kialakulásának megelőzése érdekében. Ha a vizsgálat eredménye pozitív, akkor tanácsot kell kérnie kezelőorvosától - szülész-nőgyógyásztól, hematológustól, sebésztől.

Antitestek, az eritrociták felszínén található, lehet statikus vagy szabad állapotban ben vérplazma. Az antitestek állapotától függően közvetlen vagy közvetett Coombs-reakciót hajtanak végre. Ha okkal feltételezhető, hogy antitestek rögzülnek a vörösvértestek felületén, közvetlen Coombs-tesztet kell végezni. Ebben az esetben a teszt egy szakaszban történik - hozzáadásban antiglobulin szérum. Ha hiányos antitestek vannak jelen a vörösvértestek felületén, agglutináció vörös vérsejtek

Közvetett reakció

A közvetett Coombs-reakció 2 szakaszban megy végbe. Először mesterségesen kell végrehajtania túlérzékenységet vörös vérsejtek Ennek érdekében a vörösvértesteket és a vizsgált vérszérumot inkubálják, aminek hatására az antitestek a vörösvértestek felületén fixálódnak. Ezt követően a Coombs-teszt második szakaszát hajtják végre - antiglobulin szérum hozzáadása.

Csapadék reakció - Az RP (a latin praecipilo szóból precipitate) az oldható molekuláris antigén komplexének kialakulása és kicsapódása antitestekkel felhősség formájában, ún. kicsapódik. Antigének és antitestek egyenértékű mennyiségben történő összekeverésével jön létre, ezek egyikének feleslege csökkenti az immunkomplex képződésének szintjét. A kicsapási reakciót kémcsövekben (gyűrűs precipitációs reakció), gélekben, táptalajokban stb. hajtják végre. A kicsapási reakció változatai félfolyékony agarban vagy agaróz gélben, kettős immundiffúzióval Ouchterlony, radiap immunodiffúzió, immunoektroforezis satöbbi.

Gyűrűs kicsapódási reakció. A reakciót keskeny kicsapócsövekben hajtják végre: egy oldható antigént rétegeznek az immunszérumra. Az antigén és az antitestek optimális aránya esetén e két oldat határán átlátszatlan réteg képződik. csapadékgyűrű. Ha a reakcióban főtt és szűrt szövetkivonatokat használnak antigénként, akkor ezt a reakciót nevezik első hőkicsapási reakciónak (az a reakció, amelyben lépfene haptént mutatnak ki).
Ouchterlony kettős immundiffúziós reakció. A reakció beállításához olvasztott agar gélt vékonyrétegüveglapra öntjük és megszilárdulás után lyukakat vágunk ki rajta. Az antigének és az immunszérumok külön kerülnek a gél üregeibe, amelyek egymás felé diffundálnak. A találkozási ponton egyenlő arányban fehér csík formájában csapadékot képeznek. Többkomponensű rendszerekben az antigéneket és antitesteket tartalmazó lyukak között több csapadékvonal jelenik meg; azonos AG-kban a csapadékvonalak egyesülnek; nem azonos AG-kban metszik egymást.
Radiális immundiffúziós reakció. Az olvadt agargéllel készült immunszérumot egyenletesen az üvegre öntjük. A gélben való megszilárdulás után lyukakat készítünk, amelyekbe az antigént különféle hígításokban helyezzük. Az antigén a gélbe diffundálva gyűrűs kicsapódási zónákat képez a lyukak körül az antitestekkel. A kicsapógyűrű átmérője arányos az antigénkoncentrációval. A reakciót különböző osztályú immunglobulinok, a komplementrendszer komponenseinek stb. meghatározására használják a vérszérumban.
Immunelektroforézis- az elektroforézis és az immunprecipitáció módszerének kombinációja: a gél üregeibe antigének keverékét vezetjük be, és a gélben elektroforézissel elválasztjuk, majd az elektroforézis zónáival párhuzamos horonyba immunszérumot adunk, amelynek antitestei bediffundálnak. a gélt, és kicsapódási vonalakat képeznek az antigénnel való „találkozás” helyén.
Flokkulációs reakció(Ramon szerint) (a latin f1oecus - gyapjú pelyhek) - opálosodás vagy pelyhesedés (immunprecipitáció) megjelenése a kémcsőben a reakció során toxin - antitoxin vagy toxoid - antitoxin. Az antitoxikus szérum vagy toxoid aktivitásának meghatározására szolgál.

HLA gépelés- a humán fő hisztokompatibilitási komplex vizsgálata - HLA komplex. Ez a formáció magában foglalja a 6. kromoszómán lévő gének egy régióját, amelyek különböző immunválaszokban részt vevő HLA antigéneket kódolnak.

Feladatok a HLA gépelés nagyon eltérő lehet - biológiai azonosítás (a HLA típus a szülői génekkel együtt öröklődik), a hajlam meghatározása különféle betegségek, donorok kiválasztása szervátültetésre – ez magában foglalja a donor és a recipiens szövetek HLA-tipizálásának eredményeinek összehasonlítását. HLA-tipizálás segítségével megállapítható, hogy a házastársak mennyire hasonlóak vagy különbözőek a hisztokompatibilitási antigének tekintetében a meddőségi esetek diagnosztizálása érdekében.

A HLA tipizálás azt sugallja HLA polimorfizmus elemzésés két módszerrel - szerológiai és molekuláris genetikai - hajtják végre. A HLA tipizálás klasszikus szerológiai módszere mikrolimfocitotoxikus teszten alapul, a molekuláris módszer PCR-t (polimeráz láncreakció) alkalmaz.

Szerológiai HLA gépelés izolált sejtpopulációkon végezzük. A fő hisztokompatibilitási komplex antigéneket főként limfociták hordozzák. Ezért a T-limfociták szuszpenzióját használják az I. osztályú antigének fő hordozóiként, és a B-limfociták szuszpenzióját a HLA II. osztályú antigének meghatározására. A szükséges sejtpopulációk teljes vérből történő izolálásához centrifugálást vagy immunmágneses elválasztást alkalmaznak. Úgy gondolják, hogy az első módszer hamis pozitív adatokhoz vezethet, mivel ez egyes sejtek elpusztulásához vezet. A második módszert specifikusabbnak ismerik el - a sejtek több mint 95%-a életképes marad.

De a limfocitotoxikus teszt elvégzésének alapja HLA gépelés egy specifikus szérum, amely a HLA I. és II. osztályú antigének különböző allélváltozatai ellen antitesteket tartalmaz. A szerológiai teszt meghatározhatja a HLA típusát annak vizsgálatával, hogy mely szérumok reagálnak a limfocitákra és melyek nem.

Ha reakció lép fel a sejtek és a szérum között, az eredmény egy antigén-antitest komplex képződése a sejt felszínén. A komplementet tartalmazó oldat hozzáadása után a sejt lízise és elpusztulása következik be. A szerológiai HLA tipizálási tesztet fluoreszcens mikroszkóppal értékelik a pozitív (piros fluoreszcencia) és negatív (zöld fluoreszcencia) reakciók értékelésére, vagy fáziskontraszt mikroszkóppal a magfestődés értékelésére. elhalt sejtek. A HLA-tipizálás eredményét a reagált szérumok és az antigének keresztreagáló csoportjainak specifitásának, valamint a citotoxicitási reakció intenzitásának figyelembevételével határozzák meg.

A szerológiai hátrányok HLA gépelés keresztreakciók jelenléte, gyenge antitest-affinitás vagy HLA-antigének alacsony expressziója, fehérjetermékek hiánya számos HLA-génben.

Modernebb, molekuláris módszerek HLA gépelés már szabványosított szintetikus mintákat használnak, amelyek nem a leukociták felszínén lévő antigénekkel, hanem DNS-sel reagálnak, és közvetlenül jelzik, hogy mely antigének vannak jelen a mintában. A molekuláris módszerekhez nincs szükség élő fehérvérsejtekre, bármilyen emberi sejt tanulmányozható, és néhány mikroliter vér elegendő a működéshez, vagy korlátozódhat a szájnyálkahártya lekaparására.

Molekuláris genetika HLA gépelés PCR módszert alkalmaz, melynek első lépéseként tiszta genomiális DNS-t nyernek (teljes vérből, leukocita szuszpenzióból, szövetekből).

A DNS-mintát ezután lemásolják – in vitro amplifikálják egy specifikus HLA-lókuszra specifikus primerek (rövid egyszálú DNS) használatával. Az egyes primerpárok végeinek szigorúan komplementereknek kell lenniük az adott allélnak megfelelő egyedi szekvenciával, különben nem történik amplifikáció.

PCR után, ismételt másolás során kiderül nagyszámú DNS-fragmensek, amelyek vizuálisan értékelhetők. Ehhez a reakcióelegyeket elektrolízisnek vagy hibridizációnak vetik alá, és egy program vagy táblázat segítségével meghatározzák, hogy történt-e specifikus amplifikáció. A HLA tipizálás eredményét átfogó jelentés formájában mutatjuk be gén- és allélszinten. A felhasznált minták szabványosítása miatt molekuláris HLA gépelés pontosabban szerológiai. Ezen kívül több információt (több új DNS allélt) és egyebeket ad magas szint részletezése, mivel nemcsak az antigének azonosítását teszi lehetővé, hanem magukat az allélokat is, amelyek meghatározzák, hogy melyik antigén van jelen a sejten.

Immun lízis reakció. A reakció a specifikus antitestek azon képességén alapul, hogy immunkomplexeket képeznek a sejtekkel, beleértve a vörösvértesteket és a baktériumokat, ami a komplementrendszer aktiválásához vezet a klasszikus útvonal és a sejtlízis mentén. Az immunlízis reakciók közül leggyakrabban a hemolízis reakciót, a bakteriolízis reakciót ritkán alkalmazzák (főleg a kolera és a koleraszerű vibriók differenciálódásában).

Hemolízis reakció. A komplement jelenlétében az antitestekkel való reakció hatására a vörösvértestek zavaros szuszpenziója élénkvörös színűvé válik. tiszta folyadék- „lakkvér” a hemoglobin felszabadulása miatt. A diagnosztikus komplementkötési reakció (FFR) felállításakor a hemolízis reakciót indikátorként használják: a szabad komplement jelenlétének vagy hiányának (fixációjának) tesztelésére.

Helyi hemolízis reakció a gélben(Erne reakció) a hemolízis reakció egyik változata. Lehetővé teszi az antitestképző sejtek számának meghatározását. Az antitesteket - hemolizineket - szekretáló sejtek számát a hemolízis plakkok száma határozza meg, amelyek vörösvértesteket, a vizsgált limfoid szövet sejtszuszpenzióját és komplementjét tartalmazó agargélen jelennek meg.

Immunfluoreszcens módszer

(RIF, immunfluoreszcens reakció) egy módszer specifikus Ag-k (Ab-k) kimutatására fluorokrómhoz konjugált Abs-ek (Ags) használatával. Nagy érzékenységgel és specifitással rendelkezik. Fertőzések expressz diagnosztizálására használják. betegségek (a kórokozó azonosítása a kutatási anyagban), valamint a leukociták Ab és felszíni receptorainak, markereinek meghatározására (immunfenotipizálás) és egyéb sejtek. Közvetlen I. m. fluorokrómmal konjugált specifikus Abs-t tartalmazó szövetmetszet vagy kóros anyagból vagy mikrobiális kéregből készült kenet feldolgozása; a készítményt mossuk, hogy megszabadítsuk a kötetlen Abs-től, és fluoreszcens mikroszkóp alatt vizsgáljuk. Pozitív esetekben izzó fény jelenik meg a tárgy perifériáján. immunkomplex. A szabályozás a nem specifikus lumineszcencia kizárása érdekében szükséges. Nál nél közvetett. Őket. az első szakaszban egy szövetmetszetet vagy kenetet nem fluoreszcens specifikus szerrel kezelnek, a másodikban - az első szakaszban használt állat -globulinjai elleni lumineszcens szerrel. Pozitív esetben egy világító komplexum keletkezik, amely Ar, At to és At ellen At (szendvics módszer) alkotja. A sejtek fenotipizálása során a fluoreszcens mikroszkóp mellett a RIF-et is figyelembe veszik. lézeres sejtválogató .

Áramlási citometria- a sejt paramétereinek, sejtszervecskéi és a benne lejátszódó folyamatok optikai mérésének módszere.

A technika magában foglalja a lézersugárból származó fény szóródásának detektálását, amikor egy sejt folyadékáramban áthalad rajta, és a fény diszperziós foka lehetővé teszi, hogy képet kapjunk a sejt méretéről és szerkezetéről. Ezenkívül az elemzés figyelembe veszi azon kémiai vegyületek fluoreszcenciájának szintjét, amelyek a sejt részét képezik (autofluoreszcencia), vagy amelyeket az áramlási citometria előtt adnak a mintához.

A fluoreszcens monoklonális antitestekkel vagy fluoreszcens festékekkel előre megjelölt sejtszuszpenzió belép az áramlási cellán áthaladó folyadékáramba. A feltételeket úgy választják ki, hogy a sejtek egymás után sorakoznak fel az ún. a sugár hidrodinamikus fókuszálása a sugárban. Abban a pillanatban, amikor egy cella keresztezi a lézersugarat, a detektorok rögzítik:

fényszórás kis szögben (1° és 10° között) ( ezt a jellemzőt sejtméret meghatározására használják).

fényszórás 90°-os szögben (lehetővé teszi a sejtmag/citoplazma arány, valamint a sejtek heterogenitásának és szemcsésségének megítélését).

fluoreszcencia intenzitása több fluoreszcencia csatornán keresztül (2-től 18-20-ig) - lehetővé teszi a sejtszuszpenzió szubpopulációs összetételének meghatározását stb.

Vigyen fel 1 nagy csepp O(I), A(II), B(III) szérumot egy tányérra vagy tárgylemezre pipettákkal (különböző!). Az idő feljegyzése után használjon tiszta üvegrudat vagy egy tárgylemez tiszta sarkát, hogy a szérumcseppeket vércseppekkel keverje össze. A meghatározás 5 percig tart, a lemezt felrázzuk, majd minden cseppkeverékhez adjunk 1 csepp sóoldatot, és értékeljük az eredményeket. Jobb, ha a szérum 2 különböző sorozatban érkezik. A vércsoport-eredményeknek meg kell egyeznie mindkét szérumtételben.

Az izohemagglutinációs eredmények értékelése:

izohemagglutináció. Ha a reakció pozitív, akkor a keverékben apró, vörös ragadós vörösvértestszemcsék jelennek meg. A szemek nagyobb szemcsékké, az utóbbiak pedig pelyhekké egyesülnek. A szérum szinte elszíneződött;

ha a reakció negatív, az elegy 5 percig egyenletes színű marad rózsaszín színés nem találnak szemeket;

Ha 3 O(I), A(II), B(III) csoportba tartozó szérummal dolgozunk, 4 reakciókombináció lehetséges:

1. ha mind a 3 szérum negatív reakciót adott, vagyis a keverék egyenletesen rózsaszínű - ez az O(I) vércsoport;

   ha csak az A(II) csoport széruma adott negatív reakciót, az O(I) és B(III) szérum pedig pozitív reakciót, azaz szemek jelentek meg - ez az A(II) vércsoport;

   A B(II) csoport széruma negatív, az O(I) és A(II) csoport széruma pedig pozitív reakciót adott - ez a B(III) vércsoport.

mind a 3 szérum pozitív reakciót adott - a vizsgált vér AB(IV) csoport volt. Ebben az esetben vizsgálatot végeznek az AB(IV) csoportú szérummal.

Jegyzet! A vizsgált vércseppeknek 5-10-szer kisebbnek kell lenniük, mint a szérum cseppjei.

Isohemagglutinációs hibák.

Az agglutináció végrehajtásának elmulasztása ott, ahol kellene, és agglutináció jelenléte ott, ahol nem kellene. Ennek oka lehet a gyenge szérumtiter és a gyenge vörösvérsejt-agglutináció.

Agglutináció jelenléte ott, ahol nem kellene- Ez pszeudoagglutináció, amikor a vörösvértestek halmazai „érmeoszlopokat” alkotnak. A tányér felrázása vagy sóoldat hozzáadása elpusztítja őket.

Panagglutináció, amikor a szérum összetapaszt minden vörösvérsejtet, beleértve a saját vércsoportjába tartozókat is. Az 5. percre az agglutináció jelei eltűnnek.

Létezik az úgynevezett hideg panagglutináció is, amikor a vörösvértestek összetapadnak a helyiség alacsony (15 °C alatti) levegőhőmérsékletének köszönhetően.

Mindezekben az esetekben vagy ismételt reakciót hajtanak végre, vagy szabványos vörösvértesteket használnak.

Az Rh vér meghatározása

Az Rh-státusz meghatározására, azaz az Rh-rendszer antigének jelenlétének vagy hiányának kimutatására az emberek vérében, standard anti-Rh-szérumokat (reagenseket) használnak, amelyek eltérő specifitásúak, azaz amelyek e rendszer különböző antigénjei ellen antitesteket tartalmaznak. Az Rh 0 (D) antigén meghatározásához leggyakrabban anti-Rhesus szérumot használnak 10%-os zselatin oldat hozzáadásával, vagy 33%-os poliglucin oldattal előzetesen elkészített standard anti-Rhesus reagenst. A pontosabb kutatási eredmények eléréséhez, valamint más szerológiai rendszerek antigénjeinek azonosításához a Coombs-tesztet alkalmazzák (nagyon érzékeny a transzfundált vér kompatibilitásának meghatározására is). A kutatáshoz natív vért vagy valamilyen tartósítószerrel készített vért használnak. Ebben az esetben a vért tízszeres térfogatú izotóniás nátrium-klorid oldattal kell lemosni a tartósítószerről. Az Rh állapot meghatározásakor- Rh 0 (D) két különböző sorozatból származó szérum vagy anti-Rhesus reagens mintát kell használni, és ezzel egyidejűleg Rh-pozitív (Rh +) és Rh-negatív (Rh -) vérből nyert standard vörösvértesteket. egyéneket kell használni az ellenőrzéshez. Más izoantigének meghatározásakor megfelelően kell használni azokat a kontroll vörösvértesteket, amelyek tartalmazzák vagy hiányozzák azt az antigént, amely ellen a standard szérumban lévő antitestek irányulnak.

A részleges hő-agglutininek az antitestek leggyakoribb típusai, amelyek autoimmun hemolitikus anémia kialakulását okozhatják. Ezek az antitestek az IgG-hez, ritkán az IgM-hez, az IgA-hoz tartoznak.

COOMBS-TESZT

Coombs-teszt: bevezetés. A Coombs-teszt a hemagglutinációs reakción alapuló laboratóriumi diagnosztikai módszer.

Az autoimmun hemolitikus anémia diagnosztizálásának fő módszere a Coombs-teszt. Azon alapul, hogy az immunglobulinokra (különösen az IgG-re) vagy a komplement komponensekre (különösen az S3-ra) specifikus antitestek képesek agglutinálni az IgG-vel vagy S3-mal bevont eritrocitákat.

Az IgG és C3b kötődését a vörösvértestekhez autoimmun hemolitikus anémiában és gyógyszer-indukálta immunhemolitikus anémiában figyelték meg. Közvetlen Coombs-teszt. A közvetlen Coombs-teszt a vörösvértestek felületén rögzített antitestek vagy komplement komponensek kimutatására szolgál. Ez a következőképpen történik:

Humán immunglobulinok (antiglobulin szérum) vagy komplement (antikomplementer szérum) elleni antitestek előállításához az állatot humán szérummal, immunglobulinokkal vagy humán komplementtel immunizálják. Az állatból nyert szérumot megtisztítják más fehérjék elleni antitestektől.

A páciens vörösvérsejtjeit sóoldattal mossák, hogy teljesen eltávolítsák a szérumot, amely semlegesíti az immunglobulinok és a komplement elleni antitesteket, és hamis negatív eredményt okozhat.

Ha antitestek vagy komplement komponensek rögzülnek a vörösvértestek felületén, az antiglobulin vagy anti-komplement szérum hozzáadása a vörösvértestek agglutinációját okozza.

A közvetlen Coombs-tesztet a következő esetekben használják:

Autoimmun hemolízis.

Újszülöttek hemolitikus betegségei.

Gyógyszer által kiváltott immunhemolitikus anémia.

Hemolitikus transzfúziós reakciók. Közvetett Coombs-teszt. A közvetett Coombs-teszt kimutatja a vörösvértestek elleni antitesteket a szérumban. Ehhez a páciens szérumát 0-s csoportba tartozó donor vörösvértestekkel inkubálják, majd direkt Coombs-tesztet végeznek.

A közvetett Coombs-tesztet a következő esetekben használják:

A donor és a recipiens vér egyéni kompatibilitásának meghatározása.

Alloantitestek kimutatása, beleértve a hemolitikus transzfúziós reakciókat okozó antitesteket.

Felületi eritrocita antigének meghatározása in orvosi genetikaés igazságügyi orvostani.

Egypetéjű ikrek megerősítése csontvelő-transzplantáció során.

A biológiai teszt elvégzéséhez a vért a lehető leggyorsabban (lehetőleg sugárban) kezdik átadni. 25 ml vér transzfúziója után a rendszercsövet egy bilinccsel rögzítjük. Ezután egy 3 perces szünet következik, amely alatt a címzett állapotát figyelik. A biológiai vizsgálat elvégzéséhez háromszor 25 ml vért fecskendeznek be. A vizsgálat végén (az első 75 ml vér transzfúziója után, 25 ml-es részadagokban, 3 perces időközönként) a rendszert be kell állítani szükséges sebesség transzfúzió. Ha egynél több üveg vért ad át egy betegnek, el kell távolítani a tűt a vénából. Ebben az esetben a tűt eltávolítják annak az injekciós üvegnek a kémcsövéből, amelyben a vér kifolyt, és behelyezik a következő injekciós üvegbe. A rendszercső (gumi vagy műanyag) ebben a pillanatban egy bilinccsel van rögzítve. Ha a vérátömlesztés során bármilyen más gyógyszer intravénás beadása szükségessé válik a recipiensnek, ezt úgy kell megtenni, hogy átszúrják a rendszer gumicsövét. A műanyag cső lyukasztása elfogadhatatlan, mivel nem esik le. Minden egyes vérátömlesztés után a beteget ellenőrizni kell, hogy azonosítsák és azonnal megszüntessék lehetséges szövődmények, beleértve allergiás reakciók. 2 órával a vérátömlesztés befejezése után meg kell mérni a testhőmérsékletet. Ha növekszik, a mérést óránként meg kell ismételni a következő 4 órán keresztül. Ugyanilyen fontos a vizeletürítés és a vizelet összetételének monitorozása, amely lehetővé teszi a toxikus transzfúziót követő reakció jelenlétének megállapítását. A vérátömlesztés után fellépő oliguria és anuria, a vérsejtek és a fehérje jelenléte a vizeletben közvetlenül jelzi a transzfúzió utáni hemolízis kialakulását.

Coombs teszt– felülethez kötődő vagy plazmában oldott antitestek kimutatására szolgáló vizsgálat. Az immunizálás és a vörösvértestek elleni antitestek kimutatására szolgál. Második cím antiglobulin teszt. Lehet közvetlen vagy közvetett.

Nál nél közvetlen antiglobulin teszt kimutatja a vörösvértestek felületén rögzített antitesteket. Egyéb autoimmun betegségek gyanúja esetén, gyógyszerek (metildopa, penicillin, kinin) bevétele után végezzük.

A vörösvértesteket in vivo szenzitizálták – az antitestek már szilárdan kötődnek hozzájuk, és az antiglobulin szérum (anti-IgG) hozzáadása hatására az érzékenyített sejtek összetapadnak, ami szabad szemmel is látható.

Közvetett Coombs-teszt kimutatja az anti-eritrocita antitesteket a vérplazmában, ezt vérátömlesztés előtt és közben végzik.

Az anti-eritrocita antitestek az autoantitestek egy fajtája, pl. antitestek a saját szövetei ellen. Autoantitest a kóros reaktivitás során keletkezik immunrendszer például egyes gyógyszerekre nagy dózisok penicillin.

Felületükön a vörösvértestek különféle kémiai szerkezetek(glikolipidek, szacharidok, glikoproteinek és fehérjék), az orvostudományban antigéneknek nevezik. Egy személy a szüleitől örököl egy specifikus antigéntérképet minden egyes vörösvértesten.

Az antigéneket csoportokba egyesítik, majd a vért több csoportra osztják - az AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy rendszer szerint. Az orvos munkájában a leghíresebb és legjelentősebb az AB0 és az Rh-faktor (Rh).

AB0 rendszer

Az egyén Rh-státuszát ezen antigének jelenléte határozza meg. Az eritrociták különösen fontos antigénje a D antigén. Ha jelen van, akkor arról beszélnek Rh pozitív vér RhD, és ha nincs ott – ó Rh negatív Rhd.

Ha a megfelelő antitest az eritrocita antigénekhez kötődik, az eritrocita elpusztul - hemolízis.

Javallatok

A fő indikáció a közvetlenantiglobulin teszt- hemolitikus vérszegénység gyanúja. Leggyakrabban primer autoimmun hemolitikus vérszegénység, hemolízis reumás, daganatos, fertőző betegségek, gyógyszer okozta hemolízis.

Ha a vérszegénység több nappal vagy hónappal a vérátömlesztés után vagy alatt jelentkezik hosszú távú sárgaság Közvetlen Coombs-tesztet is végeznek az újszülötten.

Közvetettantiglobulin tesztet végeznek vérátömlesztés előtt és Rh-negatív nő terhessége alatt.

Autoimmun hemolitikus anémia

Autoimmun hemolitikus anémia (elsődleges)– klasszikus autoimmun betegség, melynek oka ismeretlen. Az immunrendszeren belüli kölcsönhatás megszakad, ami a saját vörösvértestek idegenként való észleléséhez vezet. A nyirokcsomókban IgG osztályú (t 37°C-on reagál) és/vagy IgM (t 40°C-on) antitestek szintetizálódnak, amelyek az eritrocita felszínéhez kapcsolódva számos enzimet (a komplement rendszer) és „perforálja” az eritrocita falát, ami annak pusztulásához – hemolízishez – vezet.

Az első tüneteket mind a vörösvértestek pusztulása, mind a hemoglobinszint csökkenése okozza. Közöttük:

• fáradtság, általános gyengeség, ingerlékenység
• nehézlégzés
• hasi és mellkasi fájdalom, hányinger
• sötét vizelet színű
• hátfájás
• a bőr és a nyálkahártyák icterikus elszíneződése
• a vörösvértestek számának csökkenése és

Közvetlen pozitív eredmény Coombs tesztek 100%-ban megerősíti az autoimmun hemolitikus anémia diagnózisát, igazolva annak autoimmun eredetét. Ugyanakkor a negatív eredmény nem teszi lehetővé a diagnózis eltávolítását.

Másodlagos hemolitikus anémia

Másodlagos autoimmun hemolitikus vérszegénység és pozitív Coombs-teszt a következő betegségekben fordulhat elő:

• Evans szindróma
• tüdőgyulladás fertőzés

A pozitív antiglobulin teszt ezekre a betegségekre az egyik tünet, és nem a diagnózis kritériuma.

Az újszülött hemolitikus betegsége

Ok újszülöttek hemolitikus betegségei - az anya és a magzat vércsoportjának inkompatibilitása, a legtöbb esetben Rh rendszer szerint, egyedi esetekben - AB0 rendszer szerint kazuisztikusan - egyéb antigének szerint.

Rh-konfliktus akkor alakul ki, ha egy Rh-negatív nő magzata Rh-pozitív vért örököl az apjától.

A betegség csak akkor alakul ki újszülöttben, ha az anyában már kialakultak antitestek a megfelelő antigénekkel szemben, ami azután következik be. korábbi terhességek, abortuszok, transzfúziók összeférhetetlen vér. Az eritrocita membrán antigénjei elleni antitestek szintézisének kiváltásának leggyakoribb oka a szülés (a magzati anyai vérzés). Az első szülés általában komplikációk nélkül megy végbe, de a későbbiek az újszülött hemolitikus betegségével járnak a születést követő első napokban.

Az újszülött hemolitikus betegségének tünetei:

• a bőr sárgasága
• , és a nyálkahártyák
• megnagyobbodott máj és lép
• légzési gondok
• egész test duzzanata
• a központi idegrendszer izgalma és fokozatos depressziója

Anémia vérátömlesztés után

Közvetett Coombs-teszt vérátömlesztés előtt végezzük el a kompatibilitás felmérését, és közvetlen Coombs-tesztet – utána, ha transzfúziót követő hemolízis gyanúja merül fel, pl. olyan tünetek jelenléte esetén, mint a láz, öntözés (lásd alább). Az elemzés célja a transzfúziós vörösvértestek elleni antitestek azonosítása, amelyek a recipiens vörösvérsejtjéhez kötődtek, és a transzfúzió utáni hemolízis okozói, valamint a donor vörösvértestek idő előtti eltávolítása a vérkeringésből. a recipiens (aki a vért kapta).

Tünetek:

• a testhőmérséklet emelkedése
• bőrkiütés
• hátfájás
• piros
• hányinger
• szédülés

Dekódolás

Érdemes emlékeztetni arra, hogy a direkt és indirekt antiglobulin tesztek megfejtésének alapvető szabályai megegyeznek. Az egyetlen különbség az antitestek elhelyezkedése - a vérben vagy a vörösvértesteken.

• Ha a közvetlen Coombs-teszt negatív– ez azt jelenti, hogy az antitest nem „ül rá” a vörösvértestekre, és tovább kell keresni a tünetek okát, és közvetett Coombs-tesztet kell végezni
• Ha pozitív eredmény Coombs-teszt vérátömlesztés, fertőzések, gyógyszerek után észlelve - a pozitivitás legfeljebb 3 hónapig tart (a vörösvértestek élettartama 120 nap - 3 hónap)
• pozitív antiglobulin teszt eredménye autoimmun betegség hónapokig, sőt évekig tart

Norma

• közvetlen Coombs-teszt - negatív
• indirekt Coombs-teszt - negatív

A minőségileg pozitív eredményt a pluszok számában mérjük egytől négyig (+, ++, +++, ++++), mennyiségileg pedig digitális formában - 1:16, 1:256 stb.

Igen. Kezelőorvosának feltétlenül tudnia kell, hogy Ön vérátömlesztést kapott, mivel ez befolyásolja a vizsgálati eredmények helyes értelmezését. Amikor valaki mástól (bár sokszor tesztelt) vért kap, mindig fennáll annak a lehetősége, hogy az Ön szervezetében antitestek képződnek a transzfundált vér ellen. Ezek az antitestek biztosítják rossz hatás az egészségi állapotról. A következő vérátömlesztésnél az orvosnak tudnia kell, hogy Ön már kapott transzfúziót, ami azt jelenti, hogy volt idő az antitestek szintézisére. A terhes nők számára ez az információ még relevánsabb.

3. Ha az Rh-faktor nem egyezik az anya és a gyermek között, minden gyermek beteg lesz?

Attól függ, hogy a gyermek Rh pozitív vagy negatív (RhD). Az I., II., III. és IV. vércsoport hordozói lehetnek Rh-pozitívak vagy negatívak. Abban az esetben, ha az anya Rh-negatív, a gyermek pedig Rh-pozitív, már az első terhességgel antitestek képződnek, de csak az első szülés (vagy a terhesség megszakítása) után lesz közvetlen kapcsolat az anya vére és a gyermeke között. a gyermek. Az antitestek hemolitikus hatása csak a második és következő szülés, ami hemolitikus betegséghez vezet az újszülöttben.

Minden negatív Rh-faktorral rendelkező nőt gondosan meg kell vizsgálni a terhesség alatt és a szülés után megelőző kezelés az antitestek megjelenésének és a további szövődmények megelőzésére.

4. Terhesség alatt szükséges-e ismerni a férjem vércsoportját Coombs-teszt elvégzése előtt?

Nemcsak tudni, de ellenőrizni is kell a gyermek biológiai apjának vércsoportját a terhesség alatt.

Adat

• először Cambridge-ben javasolták 1945-ben
• érzékenységi küszöb - legalább 300 fix antitestmolekula egy vörösvérsejtben
• a hemolízist kiváltó antitestek száma - személyenként egyénileg (16-30-300)
• a hemolitikus anémia egyéb laboratóriumi mutatóinak (hemoglobin, bilirubin, retikulociták) dinamikája normalizálódhat, és a Coombs-teszt ugyanazon a szinten marad

A Coombs-tesztet legutóbb módosította: 2018. március 16 Mária Bodyan

Normális esetben a vérben nincsenek vörösvértestek elleni antitestek.

A direkt Coombs-teszt egy antiglobulin teszt (gélben történő agglutináció, amely lehetővé teszi a komplett kétértékű antitestek kimutatását), amely kimutatja az IgG osztályú antitesteket és a komplement C3 komponensét a vörösvértestek felszínén. A közvetlen Coombs-teszttel kimutatott antitestek jellemzően széles specifitással rendelkeznek, amely nem kapcsolódik jól megalapozott antigénhez. A pozitív közvetlen Coombs-teszt egyértelműen azt jelzi, hogy a beteg hemolitikus anémiában szenved, bár nem minden pozitív közvetlen antiglobulin teszttel rendelkező beteg szenved ebben a betegségben. A betegek körülbelül 10%-ánál a vörösvérsejt-membránon lévő antitestek vagy komplement komponensek nem határozhatók meg közvetlen Coombs-teszttel (a teszt negatív), ennek ellenére autoimmun hemolitikus anémiában szenvednek. Az ilyen esetekben az antitestek specifitásának tisztázására elúciós teszteket alkalmaznak. A közvetlen Coombs-teszt, amely csak komplementre pozitív, általában az IgM típusú hideg antitestekre vonatkozik. Ebben az esetben az IgM antitestek nincsenek jelen a vörösvértesteken, amikor bazális hőmérséklet testek. Mivel azonban az IgM antitestek aktívan rögzítik a komplementet, és a komplement a vörösvértesteken marad, az autoimmun hemolitikus anémia (hideg aggutinin betegség) ezen formájával a Coombs-teszt csak a komplementre lesz pozitív.

A direkt Coombs-teszt pozitív a meleg antitestek által okozott autoimmun hemolitikus vérszegénységre, autoimmun gyógyszer okozta vérszegénységre (metildopa szedése esetén a betegek legfeljebb 20%-a pozitív reakciót mutat), gyógyszer-adszorpciós típusú hemolitikus anémia, immunkomplex típusú hemolitikus vérszegénység. vérszegénység (a teszt csak a C3-ra pozitív), a hideg antitestek által okozott autoimmun hemolitikus anémia - hideg agglutinin betegség (a teszt csak C3 esetén pozitív). Paroxizmális hideg hemoglobinuria esetén a közvetlen Coombs-teszt negatív.

Közvetett Coombs-teszt - egy közvetett antiglobulin teszt (a hiányos antitesteket észleli) lehetővé teszi az atipikus antitestek azonosítását a vérben, beleértve az idegen eritrocita antigénekkel szembeni alloantitesteket is. Nevét (közvetett) onnan kapta, hogy 2 szakaszban fordul elő. Kezdetben a beteg nem teljes antitesteket tartalmazó vérszéruma látható megnyilvánulások nélkül kölcsönhatásba lép a hozzáadott corpuscularis Ag diagnosticum-mal. A második szakaszban a hozzáadott antiglobulin szérum kölcsönhatásba lép az antigéneken adszorbeált hiányos antitestekkel, látható csapadék megjelenésével. A homológ (allogén) vörösvértestek transzfúziója vagy a terhesség a leginkább gyakori okok ezen anti-eritrocita antitestek képződése. A pozitív indirekt Coombs-teszt és a negatív direkt teszt kombinációja nem nyújt semmit az autoimmun hemolitikus anémia diagnózisához. A pozitív közvetett Coombs-teszt bizonyos nehézségeket okoz a transzfúzióra szánt vér kiválasztásakor és a konzervált vérrel való kompatibilitás kereszttesztjének elvégzésekor, de nincs más diagnosztikai értéke.