Mehanizam reakcije taloženja razlikuje se od reakcije. Reakcija precipitacije (imunološka metoda)
Sastoji se od interakcije topljivog antigena s protutijelom, nakon čega slijedi taloženje fino zrnatog taloga (taloga).
Reakcija taloženja omogućuje određivanje prisutnosti nepoznatog antigena u ispitivanom materijalu dodavanjem poznatog antitijela ili korištenjem poznatog antigena - nepoznatog antitijela. taloženje ide gore u nedostatku soli. Optimum oborine je u rasponu pH=7,0-7,4.
Mehanizam taloženja blizak je aglutinaciji. Pod utjecajem imunološkog sustava koji je reagirao s antigenom, smanjuje se stupanj njegove disperzije. Serum i antigen moraju biti potpuno prozirni. Prilikom postavljanja precipitacije, u jedno razrjeđenje seruma mogu se dodati različita razrjeđenja antigena ili obrnuto.
Taloženje se bolje bilježi ako se antigen u epruveti postavi na antitijelo. U tom slučaju uočava se pojava taloga u obliku prstena - prstenasta precipitacija. Taloženje prstena provodi se u posebnim epruvetama promjera 2,5-3,5 mm. Za određivanje broja antigena u ispitivanom materijalu ili različitih protutijela u serumu koristi se reakcija taloženja agara: 1% pročišćenog agara ulije se u ili na stakalce. Otopine antigena i antitijela ulijevaju se u različite jažice napravljene u agaru, koje difundiraju jedna prema drugoj, tvoreći linije taloženja. Reakcija precipitacije naširoko se koristi u dijagnozi (vidi Ascolijevu reakciju).
Precipitacija u agaru omogućuje određivanje toksigenosti kultura difterije.
NA forenzičko istraživanje precipitacija služi za utvrđivanje vrsne pripadnosti krvi, organa i tkiva uz pomoć specifičnih taložnih seruma.
Precipitacija - reakcija taloženja kompleksa antigena (precipitinogena) i protutijela (precipitina). Precipitacija je jedan od imunoloških fenomena koji omogućuje određivanje sadržaja protutijela (vidi) u krvnom serumu bolesnih ili cijepljenih ljudi, kao iu krvi imuniziranih životinja. Kada se koriste standardni serumi, reakcija taloženja može se koristiti za titraciju topivih antigena različitog podrijetla (vidi).
U najjednostavnijem obliku postavljanja reakcije taloženja, ispitni serum u nizu višestrukih razrjeđenja dodaje se slojevitošću u niz epruveta s konstantnom količinom antigena. Nakon 30-60 min. inkubacijom na sobnoj temperaturi na granici dviju tekućina formiran je prsten zamućenja – prsten taloženja. Minimalna količina seruma koja daje reakciju precipitacije uzima se kao titar antiseruma. Kada se reakcija poništi sa standardnim antiserumom, moguće je procijeniti relativnu koncentraciju antigena u različitim biološkim tekućinama.
Rezultati titracije antitijela i antigena prema navedenoj metodi nemaju apsolutni kvantitativni izraz. Da bi kvantificirali sadržaj protutijela, razvili su Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) i dr. kvantitativna metoda taložna reakcija, koja se temelji na detekciji tzv. zone ekvivalencije. Kada se količine antigena primjerene dobi pomiješaju s konstantnim volumenima antiseruma, količina nastalog taloga se u početku povećava, a zatim opet smanjuje zbog povećanja topljivosti kompleksa antigen-antitijelo u višku antigena. Ako odredimo sadržaj protutijela u supernatantu u svim epruvetama, tada se pokazuje da u srednjim epruvetama niza ili čak u jednoj epruveti nema protutijela u supernatantu; ujedno se ovdje stvara najveći talog. Budući da je u zoni ekvivalencije cijeli antigen uveden u smjesu reaktanata također uključen u talog, nakon oduzimanja precipitata proteina antigena od količine proteina, dobiva se točna vrijednost sadržaja antitijela u određenom volumenu ispitivanog seruma. Sadržaj bjelančevina u talogu nakon temeljitog ispiranja ohlađenom fiziološkom otopinom određuje se dušikom ili nekom kolorimetrijskom metodom.
Pri ocjeni vrijednosti reakcije taloženja kao dijagnostička metoda mora se uzeti u obzir da u imunološkim serumima mogu biti prisutna antitijela koja nemaju svojstva precipitina i stoga ne stvaraju precipitat u interakciji s antigenom. Tu spadaju prvenstveno nepotpuna antitijela, kao i neka druga antitijela koja pripadaju skupini gama-A globulina.
Sposobnost antiseruma da precipitira antigen može biti oslabljena zagrijavanjem na 65-70 °, obradom s organskim otapalima, redukcijom u kiselom mediju [Isliker (N. Isliker), A.Ya. Kuhlberg]. Fenomen taloženja s antiserumom, koji svjesno sadrži precipitine, moguć je samo pri određenoj temperaturi, koncentraciji soli i vodikovih iona. Reakcija taloženja se odvija najbrže pri 25-37°. Neizostavan uvjet za nastanak taloga je prisutnost natrijevog klorida u izotoničnoj koncentraciji (0,85% otopina NaCl). Kad se koncentracija NaCl poveća na 15%, djelomično se otapaju precipitati formirani od antigena polisaharidne prirode, koji se mogu koristiti za ekstrakciju čistih protutijela. Reakcija taloženja s antigenima proteinske prirode odvija se jednakom brzinom i potpunošću u 0,85% i 15% otopine NaCl. Optimalna koncentracija vodikovih iona za stvaranje taloga odgovara pH vrijednostima od 5,0 do 9,0.
U laboratorijskoj praksi koriste se različite modifikacije reakcije taloženja. Konkretno, reakcija termoprecipitacije se koristi za otkrivanje bakterijskih antigena. antraks, botulizam itd., koji nisu podložni toplinskoj denaturaciji (koktoantigeni). Ova se reakcija razlikuje od reakcije taloženja prstena samo po tome što se filtrat kuhanog ispitnog materijala koristi kao antigen (vidi Reakciju A).
Pri analizi složene mješavine antigena pomoću reakcije taloženja nemoguće je karakterizirati svojstva pojedinih komponenti smjese. Da biste riješili ovaj problem, pribjegnite metodama taloženja u agaru i imunoelektroforezi. Metoda taloženja u agaru u najčešćoj modifikaciji Ouchterlonyja (O. Ouchterlony) temelji se na činjenici da antigen i antiserum, difundirajući jedan prema drugom u tankom sloju agara, pri susretu tvore liniju taloženja. Po broju takvih linija može se suditi o broju komponenti sadržanih u danoj mješavini antigena. Ouhgerlonu metoda omogućuje usporedbu različitih antigenskih smjesa i određivanje stupnja srodnosti komponenata prisutnih u njima. Pri analizi složene antigene smjese koja sadrži tvari s istim brzinama difuzije u agaru, velika pomoć može donijeti metoda imunoelektroforeze. Mješavina antigena prethodno se odvaja u električnom polju u agar ploči, nakon čega se razvija pojedinačne komponente antiserum. Antiserum se unosi u jarak napravljen u agaru paralelno s linijom po kojoj su se kretali antigeni tijekom elektroforeze. Svaki od antigena daje individualni luk precipitacije s antiserumom. Imunoelektroforeza se široko koristi za analizu patološke abnormalnosti u serumskim proteinima, kao i u imunološkoj analizi tkivnih i bakterijskih antigena.
Forenzička oborina. Precipitacija se koristi u sudskoj medicini za određivanje vrste krvi, dijelova organa i tkiva. U nizu istražnih slučajeva potrebno je utvrditi vrstu krvi koja se nalazi na oruđima zločina, odjeći počinitelja ili žrtve itd. Za reakciju precipitacije koriste se precipitacijski serumi dobiveni imunizacijom kunića, pijetlova i koza. s proteinima raznih životinja koriste se. Obično se pripremaju serumi koji talože ljudske, konjske, mačje, pileće, svinjske, pseće, goveda. Moraju imati titar najmanje 1:10 000 i biti dovoljno specifični. Ekstrakti se pripremaju iz proučavanog mjesta ili kore krvi za fiziološka otopina, koji se zatim testiraju taloženim serumima. Smatra se da je vrsta proteina utvrđena ako jedan od taloženih seruma tvori talog s ekstraktom ispitivane krvi uz odgovarajuću kontrolnu reakciju. Reakcija taloženja također može odrediti vrstu proteina u ljudskim ili životinjskim tkivima i organima. Obično se reakcija taloženja provodi u epruvetama s konusnim krajem. Po primitku zamućenih ekstrakata provodi se reakcija taloženja u agaru prema Ouchterlonu.
Reakcija taloženja (RP) je taloženje topljivog antigena pod djelovanjem antitijela u prisutnosti elektrolita. Vidljivi učinak reakcije (fenomen taloženja) - zamućenost (stvaranje mutnog prstena ili sedimenta - talog).
RP se koristi za otkrivanje nepoznatog antigena u nizu zaraznih bolesti: s antraksom, tularemijom, meningitisom, boginjama. U sudskoj medicini služi za određivanje vrste krvi, sperme; u sanitarnim i higijenskim istraživanjima - utvrditi krivotvorinu prehrambeni proizvodi. RP je vrlo različit. visoka osjetljivost i omogućuje otkrivanje antigena u razrjeđenju od 1: 1.000.000 i 1: 10.000.000.
Komponente reakcije taloženja.
1. Antigen (precipitinogen) - to je antigen molekularne prirode, koji je u fino dispergiranom (topljivom) stanju. Precipitinogeni su različiti tkivni lizati ili ekstrakti itd. Precipitinogen se od aglutinogena razlikuje po veličini čestica antigena. Aglutinogen Ima veličine ćelija(to nisu uništene cijele stanice), već dimenzije precipitinogen razmjerno s molekularna veličina(to su bjelančevine i njihovi kompleksi s ugljikohidratima ili lipidima). Otopina precipitinogena transparentan.
2. Antitijela (precipitini) nalaze se u ljudskom serumu ili u imunodijagnostičkim precipitirajućim serumima koji sadrže poznata antitijela.
3. elektrolit- izotonična otopina natrijeva klorida.
Dobivanje precipitinogena.
Dobiva se mljevenjem materijala i ekstrahiranjem proteinskih antigena iz njega kuhanjem ili drugim metodama.
Primjeri precipitinogena: lizati ili ekstrakti razna tijela i tkiva, strani krvni serum (serum je riješenje, prije svega, razne proteini), filtrati bujonskih kultura mikroba, solni ekstrakti mikroba, autolizati itd.
Dobivanje taloženih seruma.
Dobiva se hiperimunizacijom kunića odgovarajućim precipitinogenima. Takvi serumi sadrže antitijela na one precipitinogene kojima su kunići imunizirani.
Primjeri taloženih seruma: taloženje serum protiv antraksa (sadrži antitijela na antigene antraksa), precipitirajući antimeningokokni serum(sadrži antitijela protiv antigena uzročnika meningitisa) itd.
Titar precipitirajući serum je najveće razrjeđenje precipitinogena pri kojem serum još daje reakciju precipitacije.
Načini postavljanja RP.
1. Prstenasta reakcija taloženja - provodi se u posebnim cijevima za taloženje (promjer - 0,4-0,5 cm, visina - 7-8 cm). U epruvetu se doda 0,2 - 0,3 ml taloženog seruma i ista količina precipitinogena pažljivo se slojevito nanese duž stijenke dugim vrhom Pasteurove pipete. Zatim se pažljivo iz vodoravnog položaja cijevi postavljaju okomito.
Obračunavanje rezultata reakcije provodi se pojavom bijelog prstena na granici antigen-antitijelo. S pozitivnom reakcijom opaža se takav prsten. U tom slučaju antigen odgovara antitijelu i dolazi do njihovog vezanja.
Ako se kao precipitinogen koriste prokuhani i filtrirani vodeni ekstrakti organa i tkiva, tada se reakcija naziva reakcija termoring precipitation (na primjer, kod dijagnosticiranja antraksa).
2. Reakcija taloženja u gelu - provodi se u Petrijevim zdjelicama ili na predmetnim stakalcima, gdje se stavlja sloj agar gela. Kada se gel skrutne, u njemu se izrezuju jažice u koje se stavljaju antigeni ili antitijela, ili oboje. razlikovati 2 metode RP u gelu:
a) metoda jednostavna (radijalna) imunodifuzija: u jažicu se stavi jedna od komponenti imunološke reakcije (antigen ili antitijelo), a druga se komponenta pomiješa s agarom; na pozitivan rezultat (antigen odgovara antitijelu) oko jažice se stvara taložni prsten ;
b) metoda dvostruka imunodifuzija: i antitijelo i antigen se stave u odvojene jažice, difundiraju u agar gelu jedno prema drugome; s pozitivnim rezultatom gdje se susreću antitijela i antigeni oborinske linije .
Primjer RP u gelu je Ouchterlonyjeva reakcija dvostruke imunodifuzije u dijagnostici difterije
Imunoelektroforeza - to je metoda koja kombinira metodu elektroforeze i reakciju taloženja. Mješavina antigena (na primjer, serumskih proteina) odvaja se u gelu pomoću elektroforeze. Zatim se radi pronalaska i određivanja željenog proteina (nepoznatog antigena) koristi dijagnostički precipitirajući serum koji sadrži antitijela na taj protein (poznato antitijelo). Da biste to učinili, dijagnostički serum se uvodi u utor paralelno s proteinima. Ako među proteinima postoji onaj koji odgovara antitijelu u serumu, onda se oko njega formiraju oborinske linije.
reakcija taloženja- RP (od lat. praeci-pito- precipitat,) je stvaranje i taloženje kompleksa topljivog molekularnog antigena s protutijelima u obliku zamućenja tzv. talog. Nastaje miješanjem antigena i antitijela u ekvivalentnim količinama; višak jednog od njih smanjuje razinu obrazovanja imunološki kompleks. Za razliku od reakcije aglutinacije, antigen za reakciju taloženja su topljivi spojevi čija se veličina čestica približava veličini molekula. To mogu biti proteini, kompleksi proteina s ugljikohidratima i lipidima, bakterijski ekstrakti, različiti disati ili filtrati mikrobnih bujonskih kultura. Protutijela uključena u reakciju taloženja nazivaju se precipitini. Rezultirajući fini kompleks antigen-protutijelo detektira se određenim metodama određivanja stupnja reakcije taloženja.
Reakciju taloženja prstena prvi je predložio Ascoli. Koristi se u dijagnostici antraksa, kuge, tularemije, meningitisa. Metoda je jednostavna i pristupačna.
Specifični imuni serum za taloženje ulijeva se u uske epruvete za taloženje i na njega se vrlo pažljivo nanosi antigen. Kao antigen se, primjerice, prilikom dijagnosticiranja antraksa uzimaju komadići kože, vune, kože uginule životinje i sl. Prokuhaju se, tekućina se filtrira i koristi kao antigen. Pojava prstena - precipitata na granici dviju tekućina - ukazuje na prisutnost odgovarajućeg antigena.
Reakcija taloženja u agar gelu, odnosno metoda difuzijske precipitacije, omogućuje detaljno proučavanje sastava složenih u vodi topivih antigenskih smjesa. Za postavljanje reakcije koristi se gel (polutekući ili gušći agar). Svaka komponenta koja čini antigen difundira prema odgovarajućem antitijelu različitom brzinom. Stoga se u njemu nalaze kompleksi raznih antigena i odgovarajućih antitijela različitim područjima gel, gdje se formiraju precipitacijske linije. Svaka od linija odgovara samo jednom kompleksu antigen-antitijelo. Reakcija taloženja obično se postavlja na sobnu temperaturu.
Primljena metoda imunoelektroforeze široku upotrebu u posljednjih godina u proučavanju antigene strukture mikroba. Kompleks antigena stavlja se u jažicu koja se nalazi u središtu agar gela izlivenog na ploču. Zatim, kroz agar gel prolazi električna struja, uslijed čega se različiti antigeni uključeni u kompleks kreću u polje. električna struja ovisno o njihovoj elektroforetskoj pokretljivosti. Nakon završene elektroforeze, specifični imunološki serum se unosi u žljeb koji se nalazi uz rub ploče i stavlja u vlažnu komoru. Na mjestima gdje se formira kompleks antigen-antitijelo pojavljuju se precipitacijske linije.
Reakcije taloženja staviti u epruvetama (reakcija taloženja prstena), u gelovima, hranjivim podlogama itd. Širok primljena distribucija varijante reakcije taloženja u polutekućem gelu agara ili agaroze: dvostruka imunodifuzija po Ouchterlonyju. radijalna imunodifuzija, imunoelektroforeza i tako dalje
Reakcija radijalne imunodifuzije. Imuni serum s rastopljenim agar gelom ravnomjerno se izlije na staklo. Nakon skrućivanja u gelu prave se jažice u koje se stavlja antigen u različitim razrjeđenjima. Antigen, difundirajući u gel, formira s antitijelima prstenaste precipitacijske zone oko jažica (slika 13.7). Promjer precipitacijskog prstena proporcionalan je koncentraciji antigena. Reakcija se koristi za određivanje razine imunoglobulina različitih klasa u krvi, komponenti sustava komplementa itd.
Imunoelektroforeza- kombinacija metode elektroforeze i imunoprecipitacije: smjesa antigena se unosi u jažice gela i elektroforezom razdvaja u gelu. Zatim se, paralelno sa zonama elektroforeze, u utor unosi imunološki serum, čija se antitijela, difuzijom u gel, formiraju na mjestu susreta s antigenom linije taloženja.
Imunološka elektronska mikroskopija- elektronska mikroskopija mikroba, češće virusa, tretiranih odgovarajućim antitijelima. Virusi tretirani imunološkim serumom stvaraju imunološke nakupine (mikroprecipitate). Oko viriona stvara se "vijenac" protutijela, u kontrastu s fosfovolframovom kiselinom ili drugim elektronoptički gustim pripravcima.
123. Reakcija taloženja u gelu za određivanje toksigenosti mikroorganizama, mehanizam, metode postavljanja.
Reakcija taloženja (RP)- ovo je stvaranje i taloženje kompleksa topljivog molekularnog antigena s protutijelima u obliku zamućenja, nazvanog precipitat. Nastaje miješanjem antigena i antitijela u ekvivalentnim količinama; višak jednog od njih smanjuje razinu formiranja imunološkog kompleksa.
Godine 1946. J. Oudin predložio je jednostavnu difuzijsku metodu, prema kojoj je jedna od komponenti reakcije taloženja, obično serum, u gelu, a druga - antigen - naslagana je na prvu u obliku riješenje.
Antigen, difundirajući u gel, stvara u njemu bijele precipitacijske linije s antitijelima, koja su jasno vidljiva pod bočnim osvjetljenjem. Godine 1948. J. Ouchterlonu razvio je još jednostavniju i praktičniju metodu dvodimenzionalne kontra difuzije, koja omogućuje izravnu usporedbu različitih antigena i seruma. Ova je metoda također vrlo vrijedna u proučavanju unakrsnih reakcija.
Za postavljanje reakcije po Ouchterlonu koristi se 1% agar pripremljen u fiziološkoj otopini, koji se ulije u Petrijeve zdjelice u sloju od 0,5 cm po obodu na udaljenosti 1-2 cm od središta. Dijagnostički taloženi serum ulijeva se u središnju jažicu, a otopina homolognih i s njime uspoređenih antigena ulijeva se u periferne jažice. Rezultati se bilježe nakon 24, 48 i 72 sata inkubacije na sobnoj temperaturi.
Protutijela i antigeni difundiraju jedni prema drugima, au područjima gdje se stvaraju njihove ekvivalentne koncentracije stvaraju se lučne precipitacijske trake. Ako se taložne trake koje dolaze iz dvije susjedne jažice spoje, to ukazuje na prisutnost nekoliko antigenskih komponenti u ispitnoj tekućini. Protudifuzijska reakcija prema Ouchterlohnu često se koristi za određivanje toksigenosti bakterija, kao što je difterija.
Daljnji razvoj metode precipitacije gelom je imunoelektroforeza. Ovaj izraz odnosi se na metodu koja kombinira elektroforetsko odvajanje mješavine antigena i Ouchterlohnovu protudifuziju na istoj ploči agar gela. Taloženi serum se zatim izlije u utor izrezan u gelu paralelno sa smjerom elektroforetskog odvajanja.
Precipitacijske linije koje nastaju kao rezultat reakcije imaju oblik lukova izduženih u smjeru elektroforetskog kretanja frakcija antigena. Imunoelektroforeza omogućuje određivanje sastava složenih smjesa topljivih antigena koje sadrže do 30 komponenti, te je stoga vrijedna dijagnostička metoda.
Reakcija taloženja(RP) naziva se taloženje iz otopine Ag (precipitinogena) kada je izloženo imunološkom serumu (precipitinu) i elektrolitu.
Pomoću RP se antigen može detektirati u razrjeđenjima od 1:100.000 pa čak i 1:1.000.000, tj. u tako malim količinama da se kemijski ne mogu detektirati.
Precipitinogeni su ultramikroskopske čestice proteina-PS prirodni: ekstrakti iz mikrona, organa i TC, pat materijala; produkti raspadanja bakterijske stanice, njihovi lizati, filtrati. Precipitinogeni su termički stabilni, stoga se za njihovo dobivanje materijal podvrgava vrenju.
U RP-u se koriste tekuća prozirna Ag.
Precipitirajući serumi obično se dobivaju hiperimunizacijom kunića u ciklusima od nekoliko mjeseci, uvođenjem bakterijskih suspenzija, filtrata bujonske kulture, autolizata, ekstrakata soli mikroorganizama i proteina sirutke.
Inscenirao RP Ascoli. U usku epruvetu s malom količinom nerazrijeđenog taloženog seruma, držeći je u nagnutom položaju, pipetom se polagano naslaga isti volumen Ag uz stijenku.
Kako se dvije tekućine ne bi miješale, epruveta se pažljivo postavi okomito. Uz pozitivnu reakciju u epruveti, nakon 5-10 minuta pojavljuje se sivkasto-bijeli prsten na granici između seruma i ispitivanog ekstrakta. Reakcija je nužno popraćena kontrolama seruma i antigena.
Ascolijeva reakcija koristi se za identifikaciju antraksa, tularemije, kuge Ag.
Također je našao primjenu u sudskoj medicini za određivanje vrste proteina, posebice krvnih mrlja, u sanitarnoj praksi u otkrivanju krivotvorina mesa, ribe, proizvodi od brašna, nečistoće u mlijeku. Nedostatak ovog RP je nestabilnost taloga (prstena) koji nestaje već pri laganom mućkanju. Štoviše, ne može se koristiti za određivanje kvantitativni sastav Ag sudjeluje u stvaranju taloga.
Ouchterlonyjeva reakcija taloženja. Reakcija se stavlja na Petrijeve zdjelice u jažice agar gela.
Kao gel se koristi dobro isprani prozirni agar. Ag i serum se unose u agar gel tako da su jažice koje ih sadrže na određenoj udaljenosti. Difuzijom jedno prema drugom i međusobnom povezivanjem, antitijelo i antigen za 24-48 sati stvaraju imunološki kompleks u obliku bijele trake.
U prisutnosti kompleksnog precipitinogena pojavljuje se nekoliko traka. Istodobno se trake serološki srodnih antigena spajaju, a trake heterogenih presijecaju, što omogućuje određivanje pojedinosti antigenske strukture ispitivanih tvari.
Naširoko se koristi za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih virusima i bakterijama koje proizvode egzotoksine.
3.Reakcija neizravne hemaglutinacije (RNGA). Koristi se za detekciju polisaharida, proteina, ekstrakata bakterija, mikoplazme, rikecija i virusa, čiji se imunološki kompleksi s aglutininima ne mogu vidjeti u konvencionalnom klasičnom RA, ili za detekciju antitijela u serumu bolesnika na te visoko dispergirane tvari i najsitnije mikroorganizme. .
RNGA za serodijagnostiku zaraznih bolesti. Pomoću RNHA za detekciju antitijela u serumu bolesnika priprema se dijagnostika antigena eritrocita.
reakcija taloženja.
Da bi se to postiglo, eritrociti se tretiraju 15 minuta otopinom tanina u razrjeđenju od 1:20 000 do 1:200 000, što im daje stabilnost i povećava njihov adsorpcijski kapacitet. Zatim se pomiješaju s poznatim antigenom i inkubiraju 2 sata na temperaturi od 37 ° C. Eritrociti osjetljivi na antigen isperu se 2-3 puta izotoničnom otopinom natrijevog klorida i dodaju serumu, razrijede i izliju u jažice ploče.
Kao kontrola služe suspenzije intaktnih i antigenom opterećenih eritrocita koje se dodaju serumima, daju očito pozitivne i negativne reakcije.
Rezultati reakcije uzimaju se u obzir 2 sata nakon inkubacije u termostatu i ocjenjuju se plusevima: "++++" - eritrociti prekrivaju jažicu u obliku kišobrana s nazubljeni rubovi; "-" - nakupljanje eritrocita u obliku "gumbića"
Povezane informacije:
Pretraživanje stranice:
Prstenasta reakcija taloženja
Reakcija prianjanja prstena jedna je od najjednostavnijih serološke metode. Izvodi se u uskim taložnim cijevima. Prvo se bistra otopina antigena uzeta u nekoliko razrjeđenja (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) ravnomjerno ulije u sve epruvete.
Veza antigena i antitijela događa se na granici kontakta reagensa. Kao rezultat ove interakcije, u pozitivnim slučajevima (kada antigen odgovara antitijelu), nakon nekog vremena nastaje talog u obliku opalescentnog prstena.
Pronađena reakcija široka primjena u medicinska praksa za otkrivanje antigena antraksa u vuni, koži, mesu životinja (Ascolijeva reakcija); otkriti druge uzročnike zaraznih bolesti u patološkom materijalu dobivenom od bolesnika ili u predmetima vanjsko okruženje, kao i u sudsko-medicinski pregled odrediti vrstu proteina, posebno proteina krvi ili drugih bioloških tekućina.
Ouchterlonijeva imunodifuzija
Reakcija taloženja može se izvesti na agar gelu.
Metoda se temelji na činjenici da čestice antigena i antitijela, zbog svoje različite veličine, difundiraju u gelu različitim brzinama i, kao rezultat toga, pomiču se na različite udaljenosti. To omogućuje razdvajanje pojedinačnih sustava antigena kada su u smjesi, a time i proučavanje antigene strukture bakterija i složenih proteina, seruma i životinjskih tkiva.
Vizualni i učinkovita metoda taloženje gela predložio je Ouchterlony.
Na Petrijevim zdjelicama s agarom prave se male jažice, izrezane na određenoj udaljenosti jedna od druge. U jedan od njih ulijeva se antigen, u drugi serum. Komponente reakcije difundiraju u gelu jedna prema drugoj i formiraju vidljivu liniju taloženja gdje se antigeni susreću s optimalnom koncentracijom antitijela specifičnih za njih. Budući da reagensi koncentrično difundiraju iz jažica, višestruki testovi se mogu izvesti postavljanjem više jažica s različitim antigenima (ili različitim razrjeđenjima istog antigena) oko jažice s antitijelima.
Ouchterlonyjeva reakcija omogućuje izvođenje zaključka o prirodi antigena iz poznatog seruma i, obrnuto, iz poznatog antigena određuje se priroda protutijela.
Prednost metode je u tome što omogućuje usporedbu antigenskih komponenti složenih smjesa i procjenu njihove sličnosti ili razlika. Za usporedbu sličnosti antigena priprema se agar s jažicama: u jednu se ulije antiserum, a u druge antigeni koji se uspoređuju. Ako su antigeni različiti, onda su precipitacijske trake nejednako smještene.
Imunoelektroforeza
Posljednjih godina za fine imunološke studije koristi se metoda imunoelektroforeze. Metodu je prvi opisao P.
Grabar i K. A. Williams 1953. Kombinacija je agar gel elektroforeze na staklenim pločama s imunodifuzijom. Na početku se provodi elektroforetska separacija antigena, koji je često mješavina proteina ili drugih molekula. Da bi se to postiglo, antigen se unosi u jažicu unaprijed izrezanu u agaru, a ploča s agarom se neko vrijeme stavlja u zonu istosmjerne električne struje.
zbog različita brzina kretanje molekula je razdvajanje antigena na sastavne dijelove. Nakon toga se taloženi imunološki serum unosi u žlijeb izrezan u smjeru paralelnom s protokom struje.
Antigen i antiserum difundiraju u gelu jedan prema drugom.
taloženje
Svaki antigen daje zonu taloženja u obliku luka s antitijelima koja mu odgovaraju. Broj, položaj i oblik ovih linija daju ideju o sastavu izvorne mješavine antigena.
reakcija flokulacije
Metodu je predložio Ramon 1924.
Temelji se na činjenici da mješavina toksina s antitoksičnim serumom pod određenim uvjetima daje zamućenje i taloženje. U tom slučaju reakcija se javlja ranije u onim epruvetama gdje količina antitoksina odgovara dozi koja potpuno neutralizira tu količinu toksina.
Stoga, ako je jakost toksina poznata, tada se može odrediti količina antitoksina u nepoznatom ispitivanom serumu. Za to se pripremi nekoliko razrjeđenja ispitnog seruma, u svako razrjeđenje dodaju se iste količine poznatog toksina, nakon čega se promatra koja će epruveta prva flokulirati (zamućenje otopine). Odredite početnu flokulaciju. Zatim se vrši izračun.
Na primjer, potrebno je odrediti koncentraciju protutijela protiv difterije u ispitivanom serumu. U reakciji se koristi toksin difterije koji sadrži 50 Lf po 1 ml (Lf je minimalna količina toksina koju neutralizira 1 antitoksična jedinica (AU) antiseruma.
Pretpostavimo da je početna flokulacija zabilježena u epruveti koja sadrži 0,2 ml ovog seruma i 2 ml poznatog toksina s aktivnošću od 100 Lf (50 Lf x 2).
Dakle, 0,2 ml seruma neutraliziralo je ovaj toksin. Dakle, 0,2 ml seruma sadrži 100 AJ, au 1 ml ovog seruma koncentracija antitijela odgovara 500 AJ (100 AJ x 5).
Sličnom metodom, reakcija flokulacije može se koristiti u suprotnu svrhu - za određivanje imunizirajućih svojstava toksoida.
Za to je potreban standardni antitoksični serum.
Reakcija neutralizacije
Reakcija se koristi u dijagnostici bakterijskog trovanja hranom za određivanje bakterijskih toksina u ispitivanom materijalu. Osim toga, može se staviti u proučavanje nekih objekata vanjskog okruženja za sadržaj patogene bakterije stvaranje toksina, na primjer, prilikom ispitivanja tla na prisutnost uzročnika tetanusa ili plinske gangrene.
Poznato je da toksin pomiješan s homolognim antitoksičnim serumom ne pokazuje svoje toksično djelovanje jer se toksin neutralizira. Reakcija interakcije toksina s antitoksinom u pravilu je strogo specifična, stoga je za postavljanje reakcije neutralizacije za određivanje tipa toksina potrebno imati dijagnostičke serume specifične za svaki tip. i vrsta toksina. Mješavina 2-3 antitoksična seruma i više može se koristiti istovremeno ako se očekuje da će u ispitivanom materijalu biti prisutno nekoliko toksina.
Reakcija neutralizacije omogućuje određivanje vrste i vrste toksina patogena.
Ispitni materijal može biti filtrat prehrambenih proizvoda za koje se sumnja da su uzrokovali trovanje, ispiranje posuđa u kojem su se ti proizvodi nalazili i sl.
Provodi se preliminarna neutralizacija navodnog toksina. Za to se u epruvetu s ispitivanim materijalom (pokusna epruveta) dodaje antitoksični dijagnostički serum (sadrži antitijela na željeni toksin); u drugu epruvetu (kontrola) doda se jednak volumen fiziološke otopine.
Nakon kratke inkubacije, sadržaj epruveta se unosi u dvije skupine bijelih miševa (pokusnu i kontrolnu).
Rezultati reakcije neutralizacije uzimaju se u obzir odmah nakon smrti kontrolnih životinja. U ovom slučaju, činjenica preživljavanja primljenih životinja antitoksični serum zajedno s ispitivanim materijalom ukazuje na prisutnost toksina u njemu, koji odgovara ubrizganom serumu.
Prednost reakcije neutralizacije je visoka pouzdanost dobivenih rezultata.
Međutim, u svojoj osjetljivosti i brzini dobivanja odgovora, inferioran je nekim drugim metodama istraživanja.
Reakcije lize
Reakcije lize obično se nazivaju otapanje korpuskularnih antigena pod djelovanjem antitijela specifičnih za ovaj antigen u prisutnosti komplementa.
Iz imunološke reakcije na temelju fenomena lize bakterija i drugih korpuskularnih antigena koriste se uglavnom reakcije bakteriolize i hemolize.
reakcija bakteriolize
Reakcija se odvija i in vitro i in vivo. Potonji je poznat kao reakcija V.I. Isajev - Pfeiffer.
Ovi su znanstvenici pokazali da ako zamorci prethodno imuniziran antigenima kolere, tada njegovo naknadno unošenje u trbušnu šupljinu visoko virulentne kulture vibrio cholerae ne uzrokuje infekciju životinja, jer u trbušne šupljine uzročnik se otapa pod utjecajem specifičnih antitijela.
Kasnije sam.
I. Mečnikov je dokazao da se slično otapanje vibrija kolere pod utjecajem imunološkog seruma događa u epruveti, ako se glavnim komponentama doda svježi serum, izvor komplementa. Otapanje bakterija pod djelovanjem specifičnih protutijela u prisutnosti komplementa naziva se reakcija bakteriolize.
Prilikom postavljanja reakcije bakteriolize najprije se priprema niz deseterostrukih razrjeđenja ispitnog seruma. Zatim se u svaku epruvetu doda ista količina (1-2 kapi) mikrobne suspenzije. U smjesu se dodaje komplement. Nakon inkubacije na 37 °C, smjesa se inokulira iz svake epruvete na hranjivi medij kako bi se utvrdila prisutnost ili odsutnost živih bakterija.
Reakcija se može koristiti za otkrivanje protutijela pomoću poznatog mikroorganizma ili za određivanje vrste mikroba pomoću dijagnostičkog imunološkog seruma.
NA praktični rad bakteriolozi rijetko koriste ovu reakciju, uglavnom za diferencijaciju kolere i koleri sličnih vibrija.
Reakcija hemolize
Mehanizam hemolize sličan je bakteriolizi.
Eritrociti koji se koriste u reakciji su antigen. Izvor protutijela je antieritrocitni serum (npr. ako se u reakciji koriste ovčji eritrociti, tada se potreban serum sa specifičnim antieritrocitnim protutijelima dobiva od kunića imuniziranih ovčjim eritrocitima).
Krvni serum zamorca najčešće se koristi kao komplement u reakcijama lize, budući da sadrži znatno više komplementa nego u serumima drugih životinja.
U onim slučajevima kada protutijela u prisutnosti komplementa uništavaju eritrocite, iz njih se oslobađa hemoglobin, a reakcijska smjesa iz mutne suspenzije eritrocita pretvara se u prozirnu crvenu tekućinu (lakirana krv).
Ova reakcija se naziva hemoliza. U laboratorijskoj praksi koristi se kao pokazatelj adsorpcije komplementa u reakciji vezanja komplementa.
Povezane informacije:
Pretraživanje stranice:
Plan predavanja: Predmet i kratka povijest razvoja mikrobiologije. Opća svojstva mikroorganizama i njihov položaj u prirodi. reakcija taloženja
Veterinarska mikrobiologija i njezine zadaće
mir.zavantag.com > Biologija > Predavanje
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
RA je prvi razvio M. Gruber 1896. godine. Suština reakcije je interakcija antitijela s antigenom, što rezultira lijepljenjem (aglutinacijom) mikroba uz stvaranje pahuljica, grudica vidljivih golim okom. RA se široko koristi za serološka dijagnoza puno bakterijske infekcije(bruceloza, sakagija, salmoneloza, kolibaciloza i dr.) te za serološku identifikaciju vrsta i tipova izoliranih mikroorganizama. Postoji nekoliko metoda za postavljanje RA: epruveta (volumetrijska), drip (ploča), krvna kap, prstenasta reakcija s mlijekom, reakcija hemaglutinacije i njezine varijante (RHGA, RNHA), Coombsov antiglobulinski test itd. ^ – umjesto seruma uzima se krv. Postavite reakciju ploče. Dijagnosticirati pulorozu pilića i purana, mikoplazmozu pilića. Coombsova reakcija omogućuje otkrivanje nepotpunih protutijela. Potonji su monovalentni, pa stoga inhibiraju stvaranje aglutinata. Metoda se temelji na upotrebi antiglobulinskog seruma, koji služi kao posrednik za povezivanje nepotpunih antitijela fiksiranih na korpuskularne antigene (eritrociti, bakterije). ^ - ne odnosi se na serološke i dijagnostički točne reakcije, ali vam omogućuje otkrivanje antigena - hemaglutinina i uspostavljanje hemaglutinirajućih svojstava (sposobnost aglutinacije crvenih krvnih stanica) u nekim bakterijama i mikoplazmama. RNGA- posljednjih godina zauzima jedno od vodećih mjesta u serodinamici. Njegova bit leži u činjenici da se proteinske molekule antigena odgovarajućeg patogena ili protutijela prethodno adsorbiraju na eritrocite ovce ili druge životinje tretirane taninom. Zatim stavite reakciju miješanjem senzibiliziranih eritrocita s krvnim serumima bolesnih životinja ili u drugom slučaju s antigenom koji se proučava. U prisustvu spec. seruma. Protutijela na ovaj antigen (ili obrnuto) dolazi do aglutinacije eritrocita – reakcija je pozitivna. Predložio R. Kraus 1897. godine. Precipitacija je pojava koja se opaža tijekom interakcije antitijela-precipitina i antigena-precipitinogena. Suština reakcije je promjena disperznosti koloida antigena i njihova taloženja pod utjecajem specifičnih antitijela u imunološkom serumu. RP se može staviti u epruvete u tekući medij (reakcija prstenaste precipitacije) ili u agar gel (lamelarni RDP). Reakciju prstenaste precipitacije prvi je predložio Ascoli (1910.), ona se najčešće koristi za dijagnozu antraksa. Prilikom dirigiranja veterinarsko vještačenje RP je metoda za utvrđivanje krivotvorenja mesa, brašna i drugih proizvoda. Posebno značenje ovu reakciju ima sudskomedicinsko vještačenje u određivanju krvne grupe. Upotreba reakcije taloženja u tekućem mediju, međutim, ne dopušta karakterizaciju heterogenosti antigena, tj. broj i koncentracija antigena u preparatu. Ove informacije se mogu dobiti stavljanjem RP u gel (obično agar). Imajući brzinu kretanja, različiti antigeni lijeka različito difundiraju, stvarajući precipitate u debljini prozirnog gela na mjestu gdje se susreću s homolognim antitijelom. Lokalizacija i koncentracija precipitinskih linija bit će karakteristična za svaku komponentu antigenskog pripravka, što služi kao kriterij njegove kvalitete. Razrjeđivanjem pripravka moguće je karakterizirati relativni sadržaj antigena u njemu. Razvijeno je nekoliko metoda za postavljanje RDP-a: metoda izravne jednodimenzionalne difuzije po Udenu (1946.), metoda jednostavne radijalne imunodifuzije po Manciniju (1963.), metoda dvostruke difuzije u agar gel po Ouchterlonyju (1948.). ), itd. ^
(RN) na modelu toksini tetanusa i antitoksini. Bit RN leži u sposobnosti homolognih antitijela imunološkog seruma da suzbiju (neutraliziraju) infektivna svojstva uzročnika bolesti ili njegovih metaboličkih produkata. Za utvrđivanje rezultata reakcije smjesom antigen-antitijelo zaraziti laboratorijske životinje, CC, EC. Pozitivan pH indikator je odsutnost smrti bioloških testnih sustava. NA bakterijska praksa RN se koristi u dijagnostici anaerobne enterotoksemije, botulizma itd. RN se provodi u svrhu detekcije i titracije toksina, toksoida ili antitoksina. Koristi se za dokazivanje antitijela u krvnom serumu i za dokazivanje antigena u ispitivanom materijalu (na brucelozu, sakagiju, rikeciozu, tuberkulozu itd.). Ova reakcija pripada neizravnoj dvosistemskoj reakciji. Ima 5 komponenti:
Komponente 3,4,5 čine sustav indikatora. Ako antigen i antitijelo ispitivanog seruma odgovaraju jedno drugom drugi, nastaje imunološki kompleks antigen-antitijelo, koji veže i izvlači komplement iz okoline u kojoj se odvija reakcija. U nedostatku antitijela koja odgovaraju antigenu u ispitivanom serumu, navedeni kompleks se ne formira - komplement ostaje slobodan. Budući da su to nevidljivi procesi, za rješavanje pitanja što se dogodilo s komplementom, u epruvetu se kao indikator unose komponente hemolitičkog sustava - hemolitički serum + eritrociti. Ako je komplement vezan u bakteriološkom sustavu, neće doći do hemolize eritrocita, nalaz je pozitivan – serum sadrži protutijela. Prisutnost hemolize služi kao pokazatelj prisutnosti slobodnog komplementa u bakteriološkom sustavu, što je moguće samo u odsutnosti protutijela u ispitivanom serumu - rezultat je negativan. RSC postupa strogo kvantitativni odnosi komponente. To se postiže njihovom preliminarnom titracijom (komplement i hemolitički serum titriraju se na dan reakcije; mikrobni antigen - jednom unutar 2-3 mjeseca). Titracija je određivanje najmanje količine jedne ili druge komponente u reakciji za izvođenje reakcije, višak ili manjak je iskrivljenje rezultata. RDSC je varijanta CSC, ali se razlikuje po tome što prva faza reakcije traje 16-18 sati na hladnom (40C), što povećava osjetljivost zbog dulje adsorpcije komplementa kompleksom antigen-antitijelo. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Sličan:
| Definicija "mikrobiologije okoliša" Opća mikrobiologija, koja proučava odnos mikroorganizama među sobom, s objektima vanjske sredine i makroorganizmom |
Najopćenitiji i temeljni pojmovi koji odražavaju bitne, ... Filozofija je znanost koja najviše proučava opće odredbe o čovjeku, prirodi i znanju |
||
| Plan Predmet i metoda discipline "Međunarodni ekonomski odnosi" ... Predmet i metoda discipline "Međunarodni ekonomski odnosi" i povijest razvoja međunarodnih ekonomskih odnosa |
Pitanja za ispit na kolegiju "pravna psihologija" Za studente ... Pojam pravne psihologije. Predmet, zadaci i povijest razvoja pravne psihologije |
||
| 1. Predmet i metoda povijesti političkih i pravnih nauka > Predmet ... To je zbog činjenice da se u okviru ove pravne discipline istražuje i obrađuje specifična tema - povijest nastanka ... |
1.
Povijest filozofije kao znanosti. Njegov predmet i metoda |
||
| Savez studenata Ministarstva obrazovanja i znanosti Republike Kazahstan… Ovim pravilnikom o republičkom natjecanju „Učenik godine-2011.“ (u daljnjem tekstu: natjecanje) utvrđuju se njegovi ciljevi i zadaci, sudionici ... |
Definicija pojmova "mikrobiologija" i "mikroorganizam" … |
||
| Pitanja za pripremu za test iz discipline "konfliktologija" Konfliktologija kao znanost: predmet, ciljevi, ciljevi, aktualni problemi, značaj na sadašnja faza razvoj društva |
O regionalnom natjecanju video spotova "k-roly-k!" Opće odredbe Ovim Pravilnikom utvrđuju se ciljevi, ciljevi, načela Natječaja, postupak njegove organizacije i provedbe, postupak sudjelovanja i određivanja... |
Dodajte gumb na svoju stranicu:
školski materijal
www.mir.zavantag.com
reakcija taloženja
Precipitacija i aglutinacija prilično su slične reakcije koje se razlikuju uglavnom na temelju fizička svojstva AG.
U prvom slučaju, prikazan je u topivim, u drugom - u korpuskularnim oblicima. RP se temelji na stvaranju taloga tijekom AG-AT reakcije. RP je vrlo specifičan i osjetljiv.
Sastojci reakcije:
1. topljivi antigen ili hapten (precipitigen);
2. AT - precipitini (imunoprecipitirajući serum; dobiva se imunizacijom kunića odgovarajućim otopinama antigena);
reakcija taloženja
izotonična otopina natrijeva klorida ili agar gel.
Metode postavljanja RP:
1) RP u otopinama - r.
prstenasta oborina;
2) RP u gelu.
Prstenasta precipitacijska reakcija stavlja se u uske precipitacijske epruvete u koje se ulijevaju taložni serumi.
Zatim uliti otopinu precipitinogena. Uz pozitivnu reakciju na granici sastojaka pojavljuje se mutni taložni prsten.Primjer ove metode postavljanja RP je Ascolijeva termoprecipitacijska reakcija, koja se koristi za detekciju termostabilnog haptena uzročnika antraksa, ekstrahiranog iz životinjskih organa, kože i vune ekstrakcijom tijekom vrenja Jedna od varijanti RP u gelu (Ouchterlonyjeva reakcija) omogućuje određivanje toksigenosti bacil difterije s antitoksičnim serumom.
U Petrijevoj zdjelici sa hranjivi medij staviti traku filter papira impregniranu antitoksičnim serumom protiv difterije i inokulirati proučavanim kulturama u obliku poteza okomito na traku papira. Inkubirana na 37 PS tijekom dana. U prisutnosti toksigene kulture na mjestu interakcije toksina s antitoksinom stvaraju se precipitacijske linije.Reakcija taloženja u gelu naziva se imunodifuzija.
Često forezom u gelu – imunoelektroforezom. Princip metode: ispitivani antigen se frakcionira elektroforetski. dobivene frakcije se analiziraju metodom dvostruke difuzije pomoću antiseruma.
Ascolijeva reakcija koristi se za dijagnosticiranje antraksa kako bi se otkrio antigen bacila antraksa. Za postavljanje reakcije taloženja potrebno je imati: precipitinogen - hapten B.
Antrachis (ekstrakt tkiva), precipitin (serum za taloženje antraksa) i fiziološka otopina.
Priprema termoprecipitinogena.
1. Ulijte 10 ml fiziološke otopine u tikvicu koja sadrži 1 g zdrobljene kožice ili 1 ml kulture B. anthracis.
2. Stavite tikvicu u kipuću kupelj 30-45 minuta.
3. Filtrirajte kroz azbest. Filtrat treba biti potpuno bistar. Za reakciju taloženja, filtrat se razrijedi 100 puta ili više.
Postavljanje prstenaste reakcije taloženja.
1) 0,3 ml cijelog seruma za taloženje ili razrijeđenog 1:5, 1:10 ulije se u epruvetu za taloženje.
2) Precipitinogen se pažljivo nanosi duž stijenke epruvete. Reakcija se smatra pozitivnom ako se mutni prsten istaloženog proteina formira na granici dviju tekućina najkasnije 5-15 minuta.
Pri postavljanju reakcije taloženja koriste se sljedeće kontrole:
a) antigen i fiziološka otopina;
b) specifični serum i fizikalni.
c) antigen i nespecifični serum.
U svim kontrolnim epruvetama ne bi trebalo biti zamućenja. Za reakciju taloženja koriste se posebne taložne epruvete visine 40-60 mm i promjera 4-5 mm, taloženje u uskim epruvetama događa se mnogo brže i očituje se jasnije nego u običnim epruvetama , temeljito se operu i osuše, tako da im staklo bude potpuno prozirno i suho.
U reakciji taloženja taloži se specifični imunološki kompleks koji se sastoji od topljivog antigena (lizat, ekstrakt, hapten) i specifičnog protutijela u prisutnosti elektrolita.
Mutni prsten ili talog nastao kao rezultat ove reakcije naziva se talog. Ova se reakcija razlikuje od reakcije aglutinacije uglavnom po veličini čestica antigena.
Reakcija precipitacije obično se koristi za određivanje antigena u dijagnostici niza infekcija (antraks, meningitis itd.); u sudskoj medicini - za određivanje vrste krvi, sperme itd.; u sanitarnim i higijenskim studijama - pri utvrđivanju krivotvorenja proizvoda; uz njegovu pomoć odrediti filogenetski odnos životinja i biljaka. Za reakciju vam je potrebno:
1. Antitijela (precipitini) - imunološki serum s visokim titrom antitijela (ne nižim od 1:100 000). Titar taloženog seruma određen je najvećim razrjeđenjem antigena s kojim reagira. Serum se obično koristi nerazrijeđen ili razrijeđen 1:5 -1:10.
2. Antigen - otopljene tvari proteinske ili lipoidne polisaharidne prirode (potpuni antigeni i hapteni).
3. Izotonična otopina.
Glavne metode za provođenje reakcije taloženja su: prstenasta reakcija taloženja i reakcija taloženja u agaru (gelu).
Pažnja! Sve komponente uključene u reakciju taloženja moraju biti potpuno prozirne.
Prstenasta reakcija taloženja. U epruvetu za taloženje doda se 0,2 - 0,3 ml (5-6 kapi) seruma pomoću Pasteurove pipete (serum ne smije pasti na stijenke epruvete). Antigen se pažljivo nanosi na serum u istom volumenu, izlijevajući ga tankom Pasteur-ovom pipetom uz stijenku epruvete. Epruveta se drži u nagnutom položaju. Pravilnim raslojavanjem treba dobiti jasnu granicu između seruma i antigena. Pažljivo, da ne dođe do miješanja tekućine, epruvetu postavite u stativ. S pozitivnim rezultatom reakcije, na granici antigena i antitijela nastaje mutni "prsten" - talog.
Reakcija taloženja u agaru(gel). Osobitost reakcije je u tome što se interakcija antigena i antitijela događa u gustom mediju, tj. gel. Rezultirajući talog daje mutnu traku u debljini medija. Odsutnost trake ukazuje na neusklađenost između komponenti reakcije. Ova reakcija ima široku primjenu u biomedicinskim istraživanjima, posebice u proučavanju stvaranja toksina u uzročniku difterije.
Reakcija lize (imunološka citoliza)
imunološka liza- ovo je otapanje stanica pod utjecajem protutijela uz obvezno sudjelovanje komplementa. Za reakciju vam je potrebno:
1. Antigen mikroba, eritrocita ili drugih stanica.
2. Antitijelo(lysine) - imunološki serum, rjeđe serum bolesnika. Bakteriolitički serum sadrži protutijela koja sudjeluju u razgradnji bakterija; hemolitički - hemolizini koji doprinose razgradnji crvenih krvnih stanica; za lizu spiroheta potrebni su spirohetolizini, stanice - itolizini i dr.
3. Upotpuniti, dopuna. Najviše komplementa u serumu zamoraca. Ovaj serum (mješavina nekoliko životinja) obično se koristi kao nadopuna.
4. Izotonična otopina.
reakcija taloženja.
| Naziv parametra | Značenje |
| Naslov članka: | reakcija taloženja. |
| Rubrika (tematska kategorija) | Obrazovanje |
Reakcija taloženja (RP) - ϶ᴛᴏ taloženje topljivog antigena pod djelovanjem antitijela u prisutnosti elektrolita. Vidljivi učinak reakcije (fenomen taloženja) - zamućenost (stvaranje mutnog prstena ili sedimenta - talog).
RP se koristi za otkrivanje nepoznatog antigena u nizu zarazne bolesti: s antraksom, tularemijom, meningitisom, boginjama. U sudskoj medicini služi za određivanje vrste krvi, sjemena; u sanitarnim i higijenskim istraživanjima - utvrditi krivotvorenje prehrambenih proizvoda. RP je vrlo osjetljiv i može otkriti antigen u razrjeđenjima od 1:1 000 000 i 1:10 000 000.
Komponente reakcije taloženja.
1. Antigen (precipitinogen) - to je antigen molekularne prirode, koji je u fino dispergiranom (topivom) stanju. Precipitinogeni - ϶ᴛᴏ različiti lizati ili ekstrakti tkiva, itd.
Domaćin na ref.rf
Precipitinogen se razlikuje od aglutinogena po veličini čestica antigena. Aglutinogen Ima veličine ćelija(to nisu uništene cijele stanice), već dimenzije precipitinogen razmjerno s molekularna veličina(to su bjelančevine i njihovi kompleksi s ugljikohidratima ili lipidima). Otopina precipitinogena transparentan.
2. Antitijela (precipitini) nalaze se u ljudskom serumu ili u imunodijagnostičkim precipitirajućim serumima koji sadrže poznata antitijela.
3. elektrolit- izotonična otopina natrijeva klorida.
Dobivanje precipitinogena.
Dobiva se mljevenjem materijala i ekstrahiranjem proteinskih antigena iz njega kuhanjem ili drugim metodama.
Primjeri precipitinogena: lizati ili ekstrakti raznih organa i tkiva, strani krvni serum (serum je riješenje, prije svega, razne proteini), filtrati bujonskih kultura mikroba, solni ekstrakti mikroba, autolizati itd.
Dobivanje taloženih seruma.
Dobiva se hiperimunizacijom kunića odgovarajućim precipitinogenima. Takvi serumi sadrže antitijela na one precipitinogene kojima su kunići imunizirani.
Primjeri taloženih seruma: taloženje seruma antraksa(sadrži antitijela na antigene antraksa), precipitirajući antimeningokokni serum(sadrži antitijela protiv antigena uzročnika meningitisa) itd.
Titar precipitirajući serum - ϶ᴛᴏ najveće razrjeđenje precipitinogena, pri kojem serum još daje reakciju precipitacije.
Načini postavljanja RP.
1. Prstenasta reakcija taloženja - provodi se u posebnim cijevima za taloženje (promjer - 0,4-0,5 cm, visina - 7-8 cm). U epruvetu se doda 0,2 - 0,3 ml taloženog seruma i ista količina precipitinogena pažljivo se slojevito nanese duž stijenke dugim vrhom Pasteurove pipete. Dalje, pažljivo horizontalni položaj cijevi su postavljene okomito.
Obračunavanje rezultata reakcije provodi se pojavom bijelog prstena na granici antigen-antitijelo. S pozitivnom reakcijom opaža se takav prsten. U tom slučaju antigen odgovara antitijelu i dolazi do njihovog vezanja.
Ako se prokuha i procijedi vodeni ekstrakti organa i tkiva, tada se reakcija obično naziva reakcija termoring precipitation (na primjer, u dijagnozi antraksa).
2. Reakcija taloženja gela - provodi se u Petrijevim zdjelicama ili na predmetnim stakalcima, gdje se stavlja sloj agar gela. Kada se gel skrutne, u njemu se izrezuju jažice u koje se stavljaju antigeni ili antitijela, ili oboje. razlikovati 2 metode RP u gelu:
a) metoda jednostavna (radijalna) imunodifuzija: u jažicu se stavi jedna od komponenti imunološke reakcije (antigen ili antitijelo), a druga se komponenta pomiješa s agarom; s pozitivnim rezultatom (antigen odgovara antitijelu) oko jažice se stvara taložni prsten ;
b) metoda dvostruka imunodifuzija: i antitijelo i antigen se stave u odvojene jažice, difundiraju u agar gelu jedno prema drugome; s pozitivnim rezultatom gdje se susreću antitijela i antigeni oborinske linije.
Primjer RP u gelu je Ouchterlonyjeva reakcija dvostruke imunodifuzije u dijagnostici difterije
Imunoelektroforeza - to je metoda koja kombinira metodu elektroforeze i reakciju taloženja. Mješavina antigena (na primjer, proteini krvnog seruma) odvaja se u gel elektroforezom. Zatim se radi pronalaska i određivanja željenog proteina (nepoznatog antigena) koristi dijagnostički precipitirajući serum koji sadrži antitijela na taj protein (poznato antitijelo). Da biste to učinili, dijagnostički serum se uvodi u utor paralelno s proteinima. Ako među proteinima postoji onaj koji odgovara antitijelu u serumu, onda se oko njega formiraju oborinske linije.
reakcija taloženja. - pojam i vrste. Klasifikacija i značajke kategorije "Reakcija oborine." 2017., 2018. godine.
