Što je biološki mikroskop? Istraživački rad na temu: „Što je mikroskop? Skenirajući mikroskop sa sondom
U članku se govori o tome što je mikroskop, za što je potreban, koje vrste postoje i povijest njegovog stvaranja.
Drevna vremena
U povijesti čovječanstva uvijek je bilo onih koji nisu bili zadovoljni biblijskim opisom ustrojstva svijeta, koji su htjeli sami razumjeti prirodu stvari i njihovu bit. Ili koga nije zavela sudbina običnog seljaka ili ribara, poput istog Lomonosova.
Najviše široku upotrebu razne discipline primile su tijekom renesanse, kada su ljudi počeli shvaćati važnost proučavanja svijeta oko sebe i drugih stvari. U tome su im posebno pomogli razni optički uređaji, - teleskopi i mikroskopi. Dakle, što je mikroskop? Tko ga je stvorio i gdje se ovaj uređaj koristi u naše vrijeme?
Definicija
Prvo, pogledajmo samu službenu definiciju. Prema njemu, mikroskop je uređaj za dobivanje uvećanih slika ili njihove strukture. Razlikuje se od istog teleskopa po tome što je potreban za proučavanje malih i obližnjih objekata, a ne dalekih svemirskih udaljenosti. Ime autora ovog izuma nije pouzdano poznato, ali povijest sadrži reference na nekoliko ljudi koji su ga prvi koristili i dizajnirali. Prema njima, 1590. godine stanoviti Nizozemac po imenu John Lippershey predstavio je svoj izum široj javnosti. Njegovo se autorstvo također pripisuje Zacharyju Jansenu. A 1624. godine, poznati Galileo Galilei također je dizajnirao sličan uređaj.
Shvatili smo što je mikroskop, no kako je utjecao na znanost? Gotovo isti kao njegov "rođak" teleskop. Iako primitivan, ovaj je uređaj omogućio prevladavanje nesavršenosti ljudskog oka i pogled u mikrosvijet. Uz njegovu pomoć kasnije su napravljena mnoga otkrića u području biologije, entomologije, botanike i drugih znanosti.
Sada je jasno što je mikroskop, ali gdje se još koriste?
Znanost
Biologija, fizika, kemija - sva ta područja znanosti ponekad zahtijevaju pogled u samu bit stvari koje naše oko ili obično povećalo ne mogu vidjeti. Teško je zamisliti suvremenu medicinu bez ovih uređaja: uz njihovu pomoć dolazi se do otkrića, utvrđuju vrste bolesti i infekcija, a nedavno je čak moguće “fotografirati” lanac ljudske DNK.
U fizici je sve nešto drugačije, posebno u onim područjima koja se bave proučavanjem elementarnih čestica i drugih malih objekata. Tu je laboratorijski mikroskop nešto drugačiji od uobičajenih, a obični malo pomažu, odavno su ih zamijenili elektronički i najnoviji sondirajući. Potonji omogućuju ne samo postizanje impresivnog povećanja, već čak i registraciju pojedinačnih atoma i molekula.
To također uključuje forenzičku znanost kojoj su ovi uređaji potrebni za identifikaciju dokaza, detaljne usporedbe otisaka prstiju i tako dalje.
Istraživači također ne mogu bez mikroskopa. drevni svijet, kao što su paleontolozi i arheolozi. Potrebni su im za detaljno proučavanje ostataka biljaka, kostiju životinja i ljudi te umjetnih proizvoda prošlih razdoblja. I usput, snažan laboratorijski mikroskop možete slobodno kupiti za vlastitu upotrebu. Istina, ne može ih svatko priuštiti. Pogledajmo detaljnije vrste ovih uređaja.
Vrste
Prva, glavna i najstarija je optička svjetlost. Slični uređaji još uvijek su dostupni na bilo kojem školskom satu biologije. Sastoji se od seta leća s podesivim razmakom i zrcala za osvjetljavanje objekta. Ponekad se zamjenjuje neovisnim izvorom svjetlosti. Bit ovakvog mikroskopa je promjena valne duljine vidljivog optičkog spektra.
Drugi je elektronički. Mnogo je kompliciranije. Ako razgovaramo jednostavnim jezikom, tada je valna duljina vidljive svjetlosti 390 do 750 nm. A ako je objekt, na primjer, manja stanica virusa ili drugog živog organizma, tada će se svjetlost jednostavno saviti oko njega i neće se moći normalno reflektirati. A takav uređaj zaobilazi takva ograničenja: pomoću magnetskog polja čini svjetlosne valove "tanjima", zbog čega se mogu vidjeti i najsitniji objekti. To je osobito istinito u znanosti kao što je biologija. Ova vrsta mikroskopa je mnogo bolja od optičkih svjetlosnih mikroskopa.
I treći je tip sondiranja. Pojednostavljeno rečeno, radi se o uređaju u kojemu se sondom “ispipa” površina određenog uzorka i na temelju njezinih pokreta i vibracija sastavlja trodimenzionalna ili rasterska slika.
Mikroskop je uređaj dizajniran za povećanje slike predmeta proučavanja kako bi se vidjeli detalji njihove strukture skriveni golom oku. Uređaj omogućuje povećanje od nekoliko desetaka ili tisuća puta, što omogućuje istraživanja koja se ne mogu postići niti jednom drugom opremom ili uređajem.
Mikroskopi imaju široku primjenu u medicini i laboratorijska istraživanja. Uz njihovu pomoć inicijaliziraju se opasni mikroorganizmi i virusi kako bi se odredila metoda liječenja. Mikroskop je nezamjenjiv i stalno se usavršava. Po prvi put, privid mikroskopa stvorio je 1538. godine talijanski liječnik Girolamo Fracastoro, koji je odlučio ugraditi dva optičke leće, slične onima koje se koriste u naočalama, dalekozorima, teleskopi i povećala. Galileo Galilei, kao i deseci svjetski poznatih znanstvenika, radili su na usavršavanju mikroskopa.
Uređaj
Postoje mnoge vrste mikroskopa koji se razlikuju po dizajnu. Većina modela dijeli sličan dizajn, ali s manjim tehničkim značajkama.
U velikoj većini slučajeva mikroskopi se sastoje od postolja na kojem su fiksirana 4 glavna elementa:
- Leće.
- Okular.
- Sustav rasvjete.
- Predmetna tablica.
Leće
Leća je složen optički sustav koji se sastoji od staklenih leća koje idu jedna za drugom. Leće su izrađene u obliku cijevi unutar kojih se može učvrstiti do 14 leća. Svaki od njih povećava sliku, uzimajući je s površine ispred stojeća leća. Dakle, ako netko poveća predmet 2 puta, sljedeći će povećati ovu projekciju još više, i tako sve dok se objekt ne prikaže na površini posljednje leće.
Svaka leća ima vlastitu udaljenost fokusa. U tom smislu, oni su čvrsto fiksirani u cijevi. Ako se bilo koji od njih pomakne bliže ili dalje, nećete moći dobiti jasno povećanje slike. Ovisno o karakteristikama leće, duljina cijevi u kojoj je leća zatvorena može varirati. Zapravo, što je veći, to će slika biti više uvećana.
Okular
Okular mikroskopa također se sastoji od leća. Dizajniran je tako da operater koji radi s mikroskopom može staviti oko na njega i vidjeti uvećanu sliku na leći. Okular ima dvije leće. Prvo se nalazi bliže oku i naziva se okularno, a drugo polje. Uz pomoć potonjeg, slika uvećana lećom podešava se za ispravnu projekciju na mrežnicu ljudskog oka. To je potrebno kako bi se prilagodbom uklonili nedostaci vizualne percepcije, budući da svaka osoba fokusira na različitu udaljenost. Terenska leća omogućuje prilagodbu mikroskopa ovoj značajki.
Sustav rasvjete
Da biste promatrali predmet koji se proučava, potrebno ga je osvijetliti, jer leća blokira prirodno svjetlo. Kao rezultat toga, gledajući kroz okular uvijek možete vidjeti samo crnu ili sivu sliku. Sustav rasvjete razvijen je posebno za tu svrhu. Može se izraditi u obliku lampe, LED ili drugog izvora svjetlosti. Najviše jednostavni modeli svjetlosne zrake primaju iz vanjskog izvora. Upućeni su da predmet proučavaju pomoću ogledala.
Predmetna tablica
Posljednji važan i najlakši dio mikroskopa je postolje. Objektiv je usmjeren na njega, jer je na njemu fiksiran predmet koji se proučava. Stol ima ravnu površinu, što vam omogućuje da popravite predmet bez straha da će se pomaknuti. Čak i najmanji pomak objekta istraživanja pod povećanjem bit će ogroman, tako da pronalaženje izvorne točke koja je ponovno ispitivana neće biti lako.
Vrste mikroskopa
Tijekom ogromne povijesti postojanja ovog uređaja razvijeno je nekoliko mikroskopa koji se značajno razlikuju u principima rada.
Među najčešće korištenim i traženim vrstama ove opreme su sljedeće vrste:
- Optički.
- Elektronička.
- Sonde za skeniranje.
- X-zraka.
Optički
Optički mikroskop je najjeftiniji i najjednostavniji uređaj. Ova oprema vam omogućuje povećanje slike 2000 puta. Ovo je prilično velik pokazatelj koji vam omogućuje proučavanje strukture stanica, površine tkiva, pronalaženje nedostataka u umjetno stvorenim objektima itd. Vrijedno je napomenuti da za postizanje takvog veliko povećanje uređaj mora biti vrlo kvalitetan, pa je skup. Velika većina optičkih mikroskopa napravljena je puno jednostavnije i ima relativno malo povećanje. Obrazovne vrste mikroskopa predstavljene su optičkim. To je zbog njihove niže cijene, kao i ne previsokog faktora povećanja.
Tipično, optički mikroskop ima nekoliko leća koje su postavljene na pomično postolje. Svaki od njih ima svoj stupanj povećanja. Tijekom pregleda predmeta možete pomaknuti leću u radni položaj i proučavati ga uz određeno povećanje. Ako želite još više približiti sliku, samo trebate prijeći na leću s još većim povećanjem. Ovi uređaji nemaju ultraprecizno podešavanje. Na primjer, ako trebate samo malo povećati sliku, prebacivanjem na drugu leću možete je zumirati desetke puta, što će biti pretjerano i neće vam omogućiti da ispravno percipirate uvećanu sliku i izbjegnete nepotrebno pojedinosti.
Elektronski mikroskop
Elektronički je napredniji dizajn. Omogućuje povećanje slike od najmanje 20.000 puta. Maksimalno povećanje takvog uređaja moguće je 10 6 puta. Posebnost ove opreme je da umjesto snopa svjetlosti poput optičkih, šalju snop elektrona. Slika se dobiva korištenjem posebnih magnetskih leća koje reagiraju na kretanje elektrona u stupcu instrumenta. Smjer snopa se podešava pomoću . Ovi uređaji pojavili su se 1931. Početkom 2000-ih počeli su se kombinirati računalna oprema i elektronski mikroskopi, što je značajno povećalo faktor povećanja, raspon podešavanja i omogućilo snimanje rezultirajuće slike.
Elektronički uređaji, uza sve svoje prednosti, skuplji su i zahtijevaju posebne uvjete rada. Za dobivanje kvalitetne, jasne slike potrebno je da predmet proučavanja bude u vakuumu. To je zato što molekule zraka raspršuju elektrone, utječući na jasnoću slike i sprječavajući precizna podešavanja. U tom smislu, ova oprema se koristi u laboratorijskim uvjetima. Drugi važan uvjet za korištenje elektronskih mikroskopa je odsutnost vanjskih magnetskih polja. Zbog toga laboratoriji u kojima se koriste imaju vrlo debele izolirane zidove ili se nalaze u podzemnim bunkerima.
Takva se oprema koristi u medicini, biologiji, kao iu raznim industrijama.
Skeniranje sonda mikroskop s
Skenirajući mikroskop sa sondom omogućuje vam dobivanje slike s predmeta ispitivanjem pomoću posebne sonde. Rezultat je trodimenzionalna slika s točnim podacima o karakteristikama objekata. Ova oprema ima visoku rezoluciju. Ovo je relativno nova oprema koja je nastala prije nekoliko desetljeća. Umjesto leće, ovi uređaji imaju sondu i sustav za njeno pomicanje. Slika dobivena iz njega se registrira složenim sustavom i snima, nakon čega se stvara topografska slika uvećanih objekata. Sonda je opremljena osjetljivim senzorima koji reagiraju na kretanje elektrona. Postoje i sonde koje djeluju optički povećavajući ih zbog ugradnje leća.
Sonde se često koriste za dobivanje podataka o površini objekata sa složenim reljefom. Često se spuštaju u cijevi, rupe i male tunele. Jedini uvjet je da promjer sonde odgovara promjeru predmeta koji se proučava.
Za ovu metodu tipična je značajna pogreška mjerenja, jer je rezultirajuću 3D sliku teško dešifrirati. Postoje mnogi detalji koje računalo iskrivi tijekom obrade. Početni podaci obrađuju se matematički pomoću specijaliziranog softvera.
rendgenski mikroskopi
Rendgenski mikroskop pripada laboratorijska oprema, koristi se za proučavanje objekata čije su dimenzije usporedive s valnom duljinom x-zraka. Učinkovitost povećanja ovog uređaja je između optičkih i elektroničkih uređaja. X-zrake se šalju na predmet koji se proučava, nakon čega osjetljivi senzori reagiraju na njihovu refrakciju. Kao rezultat toga, stvara se slika površine predmeta koji se proučava. Zbog činjenice da X-zrake mogu proći kroz površinu predmeta, takva oprema omogućuje ne samo dobivanje podataka o strukturi predmeta, već i njegov kemijski sastav.
Za procjenu kvalitete tankih premaza obično se koristi rendgenska oprema. Koristi se u biologiji i botanici, kao i za analizu praškastih smjesa i metala.
Ljudsko oko je dizajnirano na način da ne može jasno vidjeti predmet i njegove detalje ako su njegove dimenzije manje od 0,1 mm. Ali u prirodi postoje različiti mikroorganizmi, stanice biljnih i životinjskih tkiva i mnogi drugi objekti, čije su veličine mnogo manje. Da bi vidio, promatrao i proučavao takve objekte, osoba koristi poseban optički uređaj tzv mikroskop, koji vam omogućuje da povećate sliku objekata nevidljivih ljudskom oku mnogo stotina puta. Sam naziv uređaja, koji se sastoji od dvije grčke riječi: mali i izgledam, govori o njegovoj namjeni. Dakle, optički mikroskop može povećati sliku predmeta 2000 puta. Ako je predmet koji se proučava, na primjer virus, premalen i optički mikroskop nije dovoljan da ga poveća, moderna znanost koristi elektronski mikroskop, koji vam omogućuje povećanje promatranog objekta za 20 000-40 000 puta.
Izum mikroskopa prvenstveno je povezan s razvojem optike. Moć povećanja zakrivljenih površina bila je poznata još 300. pr. e. Euklid i Ptolomej (127-151), no ta se optička svojstva u to vrijeme nisu koristila. Tek 1285. godine prve naočale izumio je Talijan Salvinio degli Arleati. Postoje podaci da je prvi uređaj tipa mikroskopa stvorio Z. Jansen u Nizozemskoj oko 1590. godine. Uzimanje dva konveksne leće, montirao ih je unutar jedne cijevi, koristeći cijev koja se uvlači kako bi postigao fokusiranje na predmet koji se proučava. Uređaj je omogućio deseterostruko povećanje predmeta, što je bilo pravo postignuće na području mikroskopije. Jansen je izradio nekoliko ovih mikroskopa, značajno poboljšavajući svaki sljedeći uređaj.
Godine 1646. objavljen je esej A. Kirchera u kojem je opisao izum stoljeća - jednostavan mikroskop, nazvan "staklo od buha". Povećalo je bilo umetnuto u bakrenu podlogu na koju je bila postavljena pozornica. Predmet koji se proučava postavljen je na stol, ispod kojeg se nalazila konkavna odn ravno ogledalo, koji je reflektirao sunčeve zrake na objekt i obasjavao ga odozdo. Povećalo se pomicalo pomoću vijka sve dok slika predmeta nije postala jasna.
Složeni mikroskopi, stvoreni od dvije leće, pojavili su se početkom 17. stoljeća. Mnoge činjenice govore da je izumitelj složenog mikroskopa Nizozemac K. Drebel, koji je u službi engleskog kralja Jamesa I. Drebelov mikroskop imao je dva stakla, jedno (leća) okrenuto prema predmetu koji se proučava, drugo (okular) okrenuto prema oku promatrača. Godine 1633. engleski fizičar R. Hooke poboljšao je Drebelov mikroskop, dodavši mu treću leću, nazvanu kolektivna. Ovaj je mikroskop postao vrlo popularan; većina mikroskopa s kraja 17. i ranog 18. stoljeća napravljena je prema njegovom dizajnu. Proučavajući tanke dijelove životinjskog i biljnog tkiva pod mikroskopom, Hooke je otkrio stanična struktura organizmi.
A 1673.-1677 nizozemski prirodoslovac A. Levenguk je pomoću mikroskopa otkrio dosad nepoznat golemi svijet mikroorganizama. Tijekom godina, Leeuwenhoek je napravio oko 400 jednostavnih mikroskopa, koji su bili male bikonveksne leće, neke od njih manje od 1 mm u promjeru, izrađene od staklene kugle. Sama lopta je brušena na jednostavnom stroju za mljevenje. Jedan od tih mikroskopa, koji daje povećanje od 300x, čuva se u Utrechtu u sveučilišnom muzeju. Istražujući sve što mu je zapelo za oko, Leeuwenhoek je nizao velika otkrića jedno za drugim. Inače, tvorac teleskopa Galileo, usavršavajući teleskop koji je stvorio, otkrio je 1610. godine da kada se izvuče, značajno povećava male predmete. Mijenjajući razmak između okulara i leće, Galileo je tubus koristio kao svojevrsni mikroskop. Danas je nemoguće zamisliti ljudsku znanstvenu djelatnost bez upotrebe mikroskopa. Pronađen mikroskop najširu primjenu u biološkim, medicinskim, geološkim i laboratorijima za znanost o materijalima.
Koristi se za dobivanje velikih povećanja tijekom promatranja male predmete. Povećana slika predmeta u mikroskopu dobiva se pomoću optičkog sustava koji se sastoji od dvije kratkofokusne leće – objektiva i okulara. Leća će proizvesti istinski obrnuto uvećanu sliku objekta. Tu međusliku oko promatra kroz okular, čije je djelovanje slično lupi. Okular je postavljen tako da je međuslika u njegovoj žarišnoj ravnini; u ovom slučaju, zrake iz svake točke objekta šire se nakon okulara u paralelnom snopu. Instrument dizajniran za dobivanje uvećanih slika i mjerenje objekata ili strukturnih detalja koji su nevidljivi ili teško vidljivi. golim okom, koji se koristi za višestruko povećanje predmetnih objekata. Uz pomoć ovih instrumenata utvrđuje se veličina, oblik i struktura najsitnijih čestica. Mikroskop– nezamjenjiva optička oprema za područja kao što su medicina, biologija, botanika, elektronika i geologija, budući da se na rezultatima istraživanja temelje znanstvena otkrića, postavljaju točne dijagnoze i razvijaju novi lijekovi.
Povijest stvaranja mikroskopa
Prvi mikroskop, koje je izumilo čovječanstvo, bili su optički, a prvog izumitelja nije tako lako identificirati i imenovati. Najranije informacije o mikroskopu datiraju iz 1590. godine. Nešto kasnije, 1624. god godine Galileo Galileo predstavlja svoj spoj mikroskop, koji je izvorno nazvao "occhiolino". Godinu dana kasnije njegov prijatelj na Akademiji Giovanni Faber predložio je termin za novi izum mikroskop.
Vrste mikroskopa
Ovisno o potrebnoj razlučivosti mikročestica tvari koje se razmatraju, mikroskopi se dijele na:
Ljudsko oko je prirodni optički sustav kojeg karakterizira određena rezolucija, odnosno najmanja udaljenost između elemenata promatranog objekta (percipiranih kao točke ili linije), na kojoj se oni još mogu međusobno razlikovati. Za normalno oko, prilikom udaljavanja od predmeta tzv. najbolja udaljenost vida (D = 250 mm), prosječna normalna razlučivost je 0,176 mm. Veličine mikroorganizama, većina biljnih i životinjskih stanica, mali kristali, detalji mikrostrukture metala i legura itd. su znatno manji od ove vrijednosti. Sve do sredine 20. stoljeća radilo se samo s vidljivim optičkim zračenjem, u rasponu od 400-700 nm, kao i s bliskim ultraljubičastim (fluorescentni mikroskop). Optički mikroskop nije mogao pružiti rezoluciju manju od poluciklusa referentnog vala zračenja (raspon valne duljine 0,2-0,7 µm ili 200-700 nm). Tako, optički mikroskop sposoban razlikovati strukture s razmakom točaka do ~0,20 μm, tako da je maksimalno povećanje koje se moglo postići bilo ~2000x.
omogućuje vam dobivanje 2 slike objekta, gledano pod blagim kutom, što pruža trodimenzionalnu percepciju; ovo je optički uređaj za višestruko povećanje predmeta koji se razmatra, koji ima poseban binokularni dodatak koji vam omogućuje proučavanje objekta koristeći oba oka. To je njegova pogodnost i prednost u odnosu na konvencionalne mikroskope. Iz tog razloga binokularni mikroskop najčešće se koristi u stručnim laboratorijima, medicinskim ustanovama i visokoškolskim ustanovama obrazovne ustanove. Ostale prednosti ovog uređaja uključuju visoku kvalitetu slike i kontrast, mehanizme grubog i finog podešavanja. Binokularni mikroskop radi na istom principu kao i konvencionalni monokularni mikroskopi: predmet proučavanja postavlja se ispod leće, gdje se na njega usmjerava umjetni svjetlosni tok. koristi se za biokemijske, patološke, citološke, hematološke, urološke, dermatološke, biološke i opće kliničke studije. Sveukupno povećanje(objektiv * okular) optički mikroskopi s binokularnim nastavkom obično su veći od onih odgovarajućih monokularnih mikroskopa.
Stereomikroskop
Stereomikroskop, kao i druge vrste optički mikroskopi, omogućuju vam rad u propuštenoj i reflektiranoj svjetlosti. Obično imaju izmjenjive okulare za binokularni nastavak i jednu nezamjenjivu leću (postoje i modeli s izmjenjivim lećama). Većina stereomikroskopi pruža znatno manje povećanje od modernog optičkog mikroskopa, ali ima znatno veću žarišnu duljinu, što omogućuje promatranje velikih objekata. Osim toga, za razliku od konvencionalnih optičkih mikroskopa, koji obično daju obrnutu sliku, optički sustav stereomikroskop ne "okreće" sliku. To im omogućuje široku upotrebu za seciranje mikroskopskih objekata ručno ili pomoću mikromanipulatora. Dalekozori se najčešće koriste za proučavanje površinskih nehomogenosti čvrstih, neprozirnih tijela, kao što su stijene, metali i tkanine; u mikrokirurgiji itd.
Specifičnost metalografskih istraživanja leži u potrebi promatranja površinske strukture neprozirnih tijela. Zato metalografski mikroskop izgrađeni su prema shemi reflektirane svjetlosti, gdje se na strani leće nalazi poseban iluminator. Sustav prizmi i zrcala usmjerava svjetlost na objekt, zatim se svjetlost reflektira od neprozirnog predmeta i šalje natrag u leću. Moderno ravno metalografski mikroskop karakterizira velika udaljenost između površine pozornice i leća te veliki okomiti hod pozornice, što vam omogućuje rad s velikim uzorcima. Maksimalna udaljenost može doseći desetke centimetara. Ali obično se u znanosti o materijalima koristi invertni mikroskop, budući da nema ograničenja na veličinu uzorka (samo težinu) i ne zahtijeva paralelnost potporne i radne površine uzorka (u ovom slučaju one se podudaraju).
Na temelju principa rada polarizacijski mikroskop uključuje dobivanje slike predmeta koji se proučava kada je ozračen polariziranim zrakama, koje se pak moraju dobiti iz običnog svjetla pomoću posebnog uređaja - polarizatora. U biti, kada polarizirana svjetlost prolazi kroz tvar ili se reflektira od nje, ravnina polarizacije svjetlosti se mijenja, što rezultira sekundarnim polarizacijski filter pojavljuje se kao prekomjerno tamnjenje. Ili daju specifične reakcije poput dvoloma u mastima. dizajniran za promatranje, fotografiranje i video projekciju objekata u polariziranom svjetlu, kao i istraživanja metodama žarišnog skrininga i faznog kontrasta. koristi se za proučavanje širokog spektra svojstava i fenomena koji su obično nedostupni konvencionalnom optičkom mikroskopu. Opremljen beskrajnom optikom s profesionalnim softverom.
Princip rada fluorescentni mikroskopi temelji se na svojstvima fluorescentnog zračenja. Mikroskop koristi se za ispitivanje prozirnih i neprozirnih predmeta. Luminescentno zračenje različito se reflektira od različitih površina i materijala, što omogućuje njegovu uspješnu primjenu u imunokemijskim, imunološkim, imunomorfološkim i imunogenetičkim studijama. Zahvaljujući njihovim jedinstvenim mogućnostima, fluorescentni mikroskop naširoko se koriste u farmaceutici, veterini i proizvodnji usjeva, a osim toga iu biotehnološkoj industriji. Također je praktički neophodan za rad forenzičkih centara i sanitarno-epidemioloških ustanova.
služi za točno mjerenje kutnih i linearnih dimenzija predmeta. Koristi se u laboratorijskoj praksi, tehnologiji i strojarstvu. Korištenjem univerzalnog mjernog mikroskopa mjerenja se provode metodom projekcije, kao i metodom aksijalnog presjeka. Univerzalni mjerni mikroskop lako je automatizirati zahvaljujući značajke dizajna. Najviše jednostavno rješenje je ugradnja kvazi-apsolutnog linearnog senzora pomaka, koji uvelike pojednostavljuje proces najčešće provođenih (na UIM) mjerenja. Suvremena uporaba univerzalnog mjernog mikroskopa nužno podrazumijeva prisutnost barem digitalnog uređaja za očitavanje. Unatoč pojavi novih progresivnih mjernih instrumenata, univerzalni mjerni mikroskop prilično je široko korišten u mjernim laboratorijima zbog svoje svestranosti, jednostavnosti mjerenja i mogućnosti jednostavne automatizacije procesa mjerenja.
Elektronski mikroskop omogućuje dobivanje slika objekata s maksimalnim povećanjem do 1.000.000 puta, zahvaljujući upotrebi, za razliku od optičkog mikroskopa, elektronske zrake s energijama od 200 V ÷ 400 keV ili više umjesto svjetlosni tok (primjerice transmisijski elektronski mikroskop visoke rezolucije s akcelerirajućim naponom od 1 MV) . Rezolucija elektronski mikroskop 1000÷10000 puta veća od rezolucije svjetlosnog mikroskopa i za najbolje moderne instrumente može biti manja od jednog angstrema. Za dobivanje slike elektronski mikroskop koristi posebne magnetske leće koje pomoću magnetskog polja kontroliraju kretanje elektrona u stupcu instrumenta. Elektroničku sliku tvore električni i magnetska polja približno isto kao i svjetlo – s optičkim lećama.
Skenirajući mikroskop sa sondom
Ovo je klasa mikroskopa za dobivanje slike površine i njezinih lokalnih karakteristika. Proces snimanja temelji se na skeniranju površine sondom. U opći slučaj omogućuje dobivanje trodimenzionalne slike površine (topografije) visoke rezolucije. u svom modernom obliku, koji su izumili Gerd Karl Binnig i Heinrich Rohrer 1981. Posebnost SPM-a je prisutnost: sonde, sustava za pomicanje sonde u odnosu na uzorak duž 2. (X-Y) ili 3. (X-Y-Z) koordinate, sustava za snimanje. Sustav za snimanje bilježi vrijednost funkcije koja ovisi o udaljenosti sonde od uzorka. Obično se snimljena vrijednost obrađuje sustavom negativne povratne sprege koji kontrolira položaj uzorka ili sonde duž jedne od koordinata (Z). Kao sustav povratne sprege najčešće se koristi PID regulator.
Glavne vrste skenirajući mikroskopi sa sondom:
Skenirajući mikroskop atomske sile
Skenirajući tunelski mikroskop
Optički mikroskop bliskog polja
rendgenski mikroskop
- uređaj za proučavanje vrlo malih objekata čije su dimenzije usporedive s valnom duljinom x-zraka. Na temelju korištenja elektromagnetska radijacija s valnom duljinom od 0,01 do 1 nanometar. po rezoluciji je između elektronskih i optičkih mikroskopa. Teorijska rezolucija rendgenski mikroskop doseže 2-20 nanometara, što je za red veličine veće od razlučivosti optičkog mikroskopa (do 150 nanometara). Trenutno postoje rendgenski mikroskop s rezolucijom od oko 5 nanometara.
Rendgenski mikroskop je:
Projekcijski rendgenski mikroskop.
Projekcijski rendgenski mikroskop je komora u kojoj su izvor zračenja i uređaj za snimanje smješteni na suprotnim krajevima. Za dobivanje jasne slike potrebno je da kutni otvor izvora bude što manji. Sve donedavno mikroskopi ove vrste nisu koristili dodatne optičke uređaje. Glavni način za postizanje maksimalnog povećanja je postavljanje objekta što je moguće bliže izvoru X-zraka. Da biste to učinili, fokus cijevi se nalazi izravno na prozoru rendgenske cijevi ili na vrhu anodne igle postavljene blizu prozora cijevi. U U zadnje vrijeme Razvijaju se mikroskopi koji koriste Fresnelove ploče za fokusiranje slika. Takvi mikroskopi imaju rezoluciju do 30 nanometara.
Reflektivni rendgenski mikroskop.
Ova vrsta mikroskopa koristi tehnike za postizanje maksimalnog povećanja, zbog čega linearna rezolucija projekcijskog rendgenskog mikroskopa doseže 0,1-0,5 mikrona. Kao leće koriste sustav zrcala. Slike stvorene reflektirajućim rendgenskim mikroskopima, čak i uz točan profil njihovih zrcala, iskrivljene su raznim aberacijama optičkih sustava: astigmatizam, koma. Zakrivljeni monokristali također se koriste za fokusiranje rendgenskog zračenja. Ali u isto vrijeme, na kvalitetu slike utječu strukturne nesavršenosti monokristala, kao i konačna vrijednost Braggovih difrakcijskih kutova. Reflektivni rendgenski mikroskop nema široku primjenu zbog tehničkih poteškoća u njegovoj proizvodnji i radu.
Diferencijalni interferencijsko-kontrastni mikroskop omogućuje vam određivanje optičke gustoće predmeta koji se proučava na temelju interferencijskog principa i na taj način vidite detalje koji su nedostupni oku. Relativno složen optički sustav omogućuje stvaranje crno-bijele slike uzorka na sivoj pozadini. Ova je slika slična onoj dobivenoj mikroskopom s faznim kontrastom, ali joj nedostaje difrakcijski halo. U diferencijalnom interferencijskom kontrastnom ikroskopu, polarizirana zraka iz izvora svjetlosti podijeljena je u dvije zrake koje putuju kroz uzorak duž različitih optičkih putanja. Duljine tih optičkih putova (tj. umnožak indeksa loma i geometrijske duljine puta) su različite. Naknadno, te grede ometaju pri spajanju. To vam omogućuje stvaranje trodimenzionalne reljefne slike koja odgovara promjenama optičke gustoće uzorka, naglašavajući linije i granice. Ova slika nije točna topografska slika.
Iz povijesti mikroskopa
U priči "Mikroskop" Vasilija Šukšina, seoski stolar Andrej Erin kupio je svoj životni san - mikroskop - uz plaću koju je "zadržala" njegova žena i postavio si je kao cilj pronaći način da eliminira sve mikrobe na zemlji, budući da je iskreno vjerovao da bi bez njih osoba mogla živjeti više od stotinu i pedeset godina. I samo ga je nesretan nesporazum spriječio u ovom plemenitom cilju. Za ljude mnogih profesija, mikroskop je neophodna oprema, bez koje je jednostavno nemoguće provesti mnoge studije i tehnološke operacije. Pa u “kućnim” uvjetima ovaj optički uređaj omogućuje svakome da proširi granice svojih mogućnosti gledajući u “mikrokozmos” i istražujući njegove stanovnike.
Prvi mikroskop nije dizajnirao profesionalni znanstvenik, već "amater", trgovac tekstilom po imenu Anthony Van Leeuwenhoek, koji je živio u Nizozemskoj u 17. stoljeću. Upravo je taj radoznali samouk prvi kroz spravu koju je sam izradio pogledao u kap vode i ugledao tisuće sićušnih bića koje je nazvao latinskom riječju animalculus ("životinjice"). Tijekom svog života Leeuwenhoek je uspio opisati više od dvjesto vrsta “životinjica”, a proučavajući tanke dijelove mesa, voća i povrća otkrio je staničnu strukturu živog tkiva. Za zasluge u znanosti Leeuwenhoek je 1680. izabran za punopravnog člana kraljevsko društvo, a nešto kasnije postao je akademik Francuske akademije znanosti.
Leeuwenhoekovi mikroskopi, kojih je tijekom života osobno izradio više od tri stotine, bili su male sferične leće veličine zrna graška umetnute u okvir. Mikroskopi su imali postolje, čiji se položaj u odnosu na leću mogao podešavati pomoću vijka, ali ti optički instrumenti nisu imali stalak ili tronožac - morali su se držati u rukama. Sa stajališta današnje optike, uređaj koji se zove “Leeuwenhoekov mikroskop” nije mikroskop, već vrlo jako povećalo, budući da se njegov optički dio sastoji od samo jedne leće.
Tijekom vremena, dizajn mikroskopa značajno je evoluirao, pojavile su se nove vrste mikroskopa, a metode istraživanja su poboljšane. Međutim, rad s amaterskim mikroskopom do danas obećava mnoga zanimljiva otkrića za odrasle i djecu.
Uređaj za mikroskop
Mikroskop je optički instrument namijenjen pregledu uvećanih slika mikroobjekata koji su nevidljivi golim okom.
Glavni dijelovi svjetlosni mikroskop(Sl. 1) su leća i okular zatvoreni u cilindričnom tijelu – tubusu. Većina modela dizajnirana za biološka istraživanja, opremljeni su s tri leće s različitim žarišnim duljinama i rotirajućim mehanizmom dizajniranim za njihovu brzu promjenu - kupolom, često zvanom kupolom. Tubus se nalazi na vrhu masivnog stativa, koji uključuje držač tubusa. Neposredno ispod leće (ili kupole s nekoliko leća) nalazi se pozornica na kojoj su montirani dijapozitivi s uzorcima koji se proučavaju. Oštrina se podešava pomoću vijka za grubo i fino podešavanje, koji vam omogućuje promjenu položaja pozornice u odnosu na leću.
Kako bi uzorak koji se proučava imao dovoljnu svjetlinu za udobno promatranje, mikroskopi su opremljeni s još dvije optičke jedinice (slika 2) - iluminatorom i kondenzatorom. Iluminator stvara struju svjetlosti koja osvjetljava lijek koji se proučava. Kod klasičnih svjetlosnih mikroskopa, dizajn iluminatora (ugrađenog ili vanjskog) uključuje niskonaponsku žarulju s debelom žarnom niti, sabirnom lećom i dijafragmom koja mijenja promjer svjetlosne točke na uzorku. Kondenzor, koji je sabirna leća, dizajniran je za fokusiranje zraka iluminatora na uzorak. Kondenzator ima i iris dijafragmu (polje i otvor blende), kojom se podešava intenzitet svjetla.
Pri radu s objektima koji propuštaju svjetlost (tekućine, tanki dijelovi biljaka i sl.), oni se osvjetljavaju propuštenom svjetlošću - iluminator i kondenzator nalaze se ispod pozornice predmeta. Neprozirne uzorke potrebno je osvijetliti s prednje strane. Da biste to učinili, iluminator se postavlja iznad pozornice objekta, a njegove zrake se usmjeravaju na objekt kroz leću pomoću prozirnog zrcala.
Iluminator može biti pasivan, aktivan (svjetiljka) ili se sastoji od oba elementa. Najjednostavniji mikroskopi nemaju lampe za osvjetljavanje uzoraka. Ispod stola imaju dvosmjerno ogledalo, čija je jedna strana ravna, a druga konkavna. Na dnevnom svjetlu, ako se mikroskop postavi blizu prozora, možete dobiti prilično dobro osvjetljenje korištenjem konkavnog zrcala. Ako se mikroskop nalazi u tamnoj prostoriji, za osvjetljavanje se koristi ravno zrcalo i vanjski iluminator.
Povećanje mikroskopa jednako je umnošku povećanja objektiva i okulara. S povećanjem okulara jednakim 10 i povećanjem objektiva jednakim 40 ukupni koeficijent povećanje je 400. Tipično, pribor za istraživački mikroskop uključuje objektive s povećanjem od 4 do 100. Tipičan set mikroskopskih leća za amaterska i obrazovna istraživanja (x 4, x10 i x 40) pruža povećanje od 40 do 400.
Razlučivost je još jedna važna karakteristika mikroskopa, koja određuje njegovu kvalitetu i jasnoću slike koju stvara. Što je veća razlučivost, to se više finih detalja može vidjeti pri velikom povećanju. U vezi s rezolucijom govore o "korisnom" i "beskorisnom" povećanju. "Korisno" je maksimalno povećanje pri kojem se dobivaju maksimalni detalji slike. Daljnje povećanje ("beskorisno") nije podržano rezolucijom mikroskopa i ne otkriva nove detalje, ali može negativno utjecati na jasnoću i kontrast slike. Dakle, granica korisnog povećanja svjetlosnog mikroskopa nije ograničena općim faktorom povećanja objektiva i okulara - može se učiniti koliko god se želi - već kvalitetom optičkih komponenti mikroskopa, tj. rezolucija.
Mikroskop se sastoji od tri glavna funkcionalna dijela:
1. Dio rasvjete
Dizajniran za stvaranje svjetlosnog toka koji vam omogućuje osvjetljavanje objekta na takav način da sljedeći dijelovi mikroskopa obavljaju svoje funkcije s iznimnom preciznošću. Osvjetljujući dio mikroskopa propuštene svjetlosti nalazi se iza predmeta ispod leće kod direktnih mikroskopa i ispred predmeta iznad leće kod invertnih mikroskopa.
Rasvjetni dio uključuje izvor svjetlosti (svjetiljku i električno napajanje) i optičko-mehanički sustav (kolektor, kondenzator, polje i otvor blende podesive/iris dijafragme).
2. Reprodukcijski dio
Dizajniran za reprodukciju objekta u ravnini slike s kvalitetom slike i povećanjem potrebnim za istraživanje (tj. za izradu slike koja će reproducirati objekt što je točnije moguće i sa svim detaljima uz razlučivost, povećanje, kontrast i reprodukciju boja koja odgovara optika mikroskopa).
Dio za reprodukciju pruža prvi stupanj povećanja i nalazi se iza objekta u ravnini slike mikroskopa. Reprodukcijski dio uključuje leću i srednji optički sustav.
Moderni mikroskopi najnovije generacije temelje se na sustavima optičkih leća korigiranih za beskonačnost.
To dodatno zahtijeva korištenje tzv. sustava cijevi, koji paralelne zrake svjetlosti koje izlaze iz leće “skupljaju” u ravnini slike mikroskopa.
3. Dio vizualizacije
Dizajniran za dobivanje stvarne slike predmeta na mrežnici oka, fotografskom filmu ili ploči, na ekranu televizijskog ili računalnog monitora uz dodatno povećanje (drugi stupanj povećanja).
Vizualizacijski dio nalazi se između slikovne ravnine leće i očiju promatrača (kamera, foto aparat).
Dio za snimanje uključuje monokularnu, binokularnu ili trinokularnu glavu za snimanje sa sustavom za promatranje (okulari koji rade poput povećala).
Dodatno, ovaj dio uključuje dodatne sustave povećanja (velikoprodaja/sustavi za promjenu povećanja); projekcijski dodaci, uključujući dodatke za raspravu za dva ili više promatrača; aparati za crtanje; sustavi za analizu slika i dokumentiranje s pripadajućim elementima podudaranja (foto kanal).
Osnovne metode rada s mikroskopom
Metoda svijetlog polja propuštene svjetlosti. Pogodno za proučavanje prozirnih objekata s nehomogenim inkluzijama (tanki rezovi biljnih i životinjskih tkiva, protozojski mikroorganizmi u tekućinama, tanke polirane ploče nekih minerala). Iluminator i kondenzator nalaze se ispod pozornice. Slika nastaje tako što svjetlost prolazi kroz prozirni medij i apsorbiraju je gušće inkluzije. Za povećanje kontrasta slike često se koriste boje čija je koncentracija veća što je gustoća površine uzorka veća.
Metoda svijetlog polja u reflektiranoj svjetlosti. Koristi se za proučavanje neprozirnih predmeta (metala, ruda, minerala), kao i predmeta s kojih je nemoguće ili nepoželjno uzeti uzorke za pripremu prozirnih mikroslijedova (nakit, umjetnička djela, itd.) Osvjetljenje dolazi odozgo, obično kroz leća, koja u ovom slučaju ima i ulogu kondenzora.
Metode kosog osvjetljenja i tamnog polja Metode proučavanja uzoraka s vrlo niskim kontrastom, na primjer, gotovo prozirne žive stanice. Propuštena svjetlost nanosi se na uzorak ne odozdo, već malo sa strane, zbog čega postaju vidljive sjene koje tvore guste inkluzije (metoda kosog osvjetljenja). Pomicanjem kondenzora na način da njegova izravna svjetlost uopće ne pada na objektiv (uzorak je osvijetljen samo kosim zrakama na svjetlu) može se u okularu mikroskopa promatrati bijeli objekt na crnoj pozadini (tamno polje metoda). Obje su metode prikladne samo za mikroskope čiji dizajn omogućuje pomicanje kondenzatora u odnosu na optičku os mikroskopa.
Vrste modernih mikroskopa
Osim svjetlosnih mikroskopa, postoje i elektronski i atomski mikroskopi koji se uglavnom koriste za znanstvena istraživanja. Konvencionalni transmisijski elektronski mikroskop sličan je svjetlosnom mikroskopu, osim što se objekt ne obasjava svjetlosnim tokom, već snopom elektrona koje stvara posebna elektronska reflektorka. Rezultirajuća slika projicira se na fluorescentni zaslon pomoću sustava leća. Povećanje prijenosnog elektronskog mikroskopa može doseći milijun, međutim, za mikroskope atomske sile to nije granica. Upravo atomskim mikroskopima, sposobnim za provođenje istraživanja na molekularnoj, pa čak i atomskoj razini, dugujemo mnoga najnovija dostignuća u poljima genetski inženjering, medicina, fizika čvrsta, biologije i drugih znanosti.
Svjetlosni mikroskopi također dolaze u različitim varijantama i mogu se klasificirati prema nekoliko kriterija, na primjer, broju optičkih jedinica (monokularni/binokularni ili stereo) ili vrsti osvjetljenja (polarizirajuće i fluorescentno, interferencijsko i faznokontrastno). Za amatersku praksu prikladan je jednostavan monokularni svjetlosni mikroskop s maksimalnim povećanjem od 400x. Složeniji uređaji se međusobno razlikuju po izvedbi iluminatora i kondenzatora, posebni su i koriste se u užim područjima znanosti. Posebna su vrsta stereo mikroskopi koji su neophodni za mikrokirurške operacije i proizvodnju mikroelektroničkih komponenti, a nezaobilazni su i u genetičkom inženjerstvu.
I. P. Kulibin bavio se proizvodnjom optičkih instrumenata u Nižnjem Novgorodu prije odlaska u Sankt Peterburg 1769. godine. Tu je 1764.-1766. samostalno konstruirao reflektirajući teleskop Gregoryjevog sustava, mikroskop i električni stroj na temelju uzoraka engleskih instrumenata donesenih u Nižnji Novgorod trgovac Izvolsky. Sam Kulibin je napisao o ovom djelu: "Onda je počeo gledati različita iskustva Kako polirati stakla teleskopa, oko kojih sam se posebno trudio i kroz to sam pronašao poliranje. Na temelju tog izuma izradio sam dvije cijevi za gledanje tri aršina duge i jedan osrednji mikroskop, sastavljen od pet stakala... Slučajno sam dobio na ispitivanje teleskop s metalnim zrcalima proizveden u Engleskoj, koji je, rastavivši i staklo i zrcala, postao je tražiti zapaljive točke prema suncu i uzeti mjeru udaljenu od tih zrcala i stakala do zapaljivih točaka. Mjeru po kojoj bi se moglo znati koje će konkavnosti i konveksnosti za staklo i zrcala trebati napraviti u bakrenim kalupima za okretanje zrcala i stakala na pijesku i s tim sam napravio crtež cijelog teleskopa... Zatim sam počeo izvoditi pokuse o tome kako staviti metal u proporcije; a kad im je tvrdoća i bjelina počela sličiti, onda sam od toga izlio zrcala po uzorku, počeo ih brusiti u pijesku na ocrtanim i već napravljenim konveksnim oblicima, i počeo raditi pokuse na tim tokarenim zrcalima, na koji sam način mogao pronaći, dobili su isto čisto poliranje, koje je trajalo neko vrijeme. Na kraju sam isprobao jedno ulašteno ogledalo na bakrenom kalupu, trljajući ga spaljenim kositrom i uljem za drvo. I tako je s tim iskustvom, od mnogo napravljenih ogledala, jedno veliko ogledalo i jedno gadno malo izašlo u proporciji..." |
Stroj za brušenje i poliranje optičkih leća. |
U "Mišljenju o krivocrtnim zrcalima" Kulibin uspoređuje relativnu složenost obrade sfernih i asferičnih zrcala. Detaljno ispituje proces izrade konkavnog zrcala, od brušenja diska do poliranja, uključujući. Recept za legure za izradu metalnih zrcala, metode taljenja i recept za kremeno staklo privukli su Kulibinovu pozornost. U svom radu izumitelj se oslanja na iskustvo i tradiciju koju su sakupili zaposlenici najstarije akademske radionice (optička radionica osnovana 1726.), gdje je od vremena Lomonosova uspostavljena proizvodnja mnogih optičkih instrumenata i gdje je najiskusniji i najvještiji optički mehaničari radili su, primjerice, obitelj Belyaev. Književnost |