Ελμινθολογικές μέθοδοι. Έλεγχος για εντεροβίαση και ταενίαση

Για την ανίχνευση θραυσμάτων ελμινθών, τα κόπρανα εξετάζονται με γυμνό μάτι, στη συνέχεια αναμιγνύονται με νερό και εξετάζονται σε μικρές μερίδες σε ένα πιάτο Petri σε σκούρο φόντο. Όλα τα ύποπτα σωματίδια τοποθετούνται σε μια γυάλινη διαφάνεια σε μια σταγόνα νερού και εξετάζονται κάτω από ένα μεγεθυντικό φακό. Μπορείτε να τοποθετήσετε μια ημερήσια μερίδα σε έναν κύλινδρο με προσθήκη 5-10 φορές μεγαλύτερη ποσότητα νερού. Μετά την ανάδευση, το δοχείο αφήνεται μέχρι να κατακαθίσουν τελείως τα αιωρούμενα σωματίδια. Επιφανειακό στρώμαΤα υγρά στραγγίζονται και χύνεται καθαρό νερό. Το πλυμένο ίζημα εξετάζεται σε μικρές μερίδες με γυμνό μάτι ή κάτω από μεγεθυντικό φακό. Για την ανίχνευση αυγών χρησιμοποιούνται μικροσκοπικές μέθοδοι εξέτασης.

Μητρική μέθοδος επιχρίσματος. Δεν ένας μεγάλος αριθμός απόπεριττώματα από διαφορετικούς τόπουςΤο τμήμα δοκιμής αλέθεται σε γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50%, ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου ή νερό. Το μείγμα καλύπτεται με καλυπτρίδα και παρατηρείται κάτω από μικροσκόπιο.

Πλωτή μέθοδος Fulleborn. Ένα μέρος των κοπράνων αναμιγνύεται με 20 μέρη κορεσμένου διαλύματος χλωριούχου νατρίου ( ειδικό βάρος 1.18), προστίθεται σε μικρές μερίδες. Τα μεγάλα σωματίδια που επιπλέουν στην επιφάνεια αφαιρούνται αμέσως και το μείγμα αφήνεται για 45 λεπτά. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, τα αυγά ελμινθών, με χαμηλότερο ειδικό βάρος από το διάλυμα χλωριούχου νατρίου, επιπλέουν στην επιφάνεια. Το επιφανειακό φιλμ αφαιρείται με συρμάτινο βρόχο διαμέτρου περίπου 1 cm και μεταφέρεται σε γυάλινη πλάκα για εξέταση στο μικροσκόπιο.

μέθοδος Kalantaryan. Η αποτελεσματικότητα της μεθόδου επίπλευσης αυξάνεται κατά την αντικατάσταση του χλωριούχου νατρίου με ένα κορεσμένο διάλυμα νιτρικού νατρίου. Σε αυτή την περίπτωση, το μείγμα διατηρείται για 10-15 λεπτά.

Η επιφανειακή μεμβράνη που σχηματίζεται μετά την καθίζηση ενός μείγματος περιττωμάτων με διάλυμα χλωριούχου νατρίου ή νιτρικού νατρίου μπορεί επίσης να αφαιρεθεί με μια γυάλινη πλάκα. Για το σκοπό αυτό, ένα βάζο γεμάτο μέχρι το χείλος με μείγμα περιττωμάτων και διάλυμα αλατιού καλύπτεται με μια γυάλινη πλάκα έτσι ώστε η κάτω επιφάνειά του να έρθει σε επαφή με το υγρό. Μετά την καθίζηση, το γυαλί αφαιρείται και, γυρίζοντας γρήγορα προς τα πάνω με την επιφάνεια στην οποία βρίσκεται το φιλμ, εξετάζεται στο μικροσκόπιο.

Ξύσιμο των σπειροειδών πτυχών (για τον εντοπισμό αυγών σκουληκιών και ογκόσφαιρων ταινία βοοειδών) κάντε το πρωί πριν πάτε στην τουαλέτα. Χρησιμοποιώντας μια ξύλινη σπάτουλα εμποτισμένη με νερό ή διάλυμα γλυκερίνης 50%, ξύστε γύρω από τον πρωκτό. Το προκύπτον υλικό μεταφέρεται σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα σε μια σταγόνα νερού ή διάλυμα γλυκερίνης 50% και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Η σπάτουλα μπορεί να αντικατασταθεί με μια βρεγμένη μπατονέτα, η οποία χρησιμοποιείται για να σκουπίσει την περιπρωκτική περιοχή και στη συνέχεια ξεπλύνετε καλά με νερό. Το νερό φυγοκεντρείται και το ίζημα εξετάζεται με μικροσκόπιο.

Μέθοδος Behrmann (για αναγνώριση προνυμφών). Ένα μεταλλικό πλέγμα με 5-6 g περιττωμάτων που εφαρμόζονται σε αυτό στερεώνεται σε μια γυάλινη χοάνη που εισάγεται σε ένα τρίποδο. Ένας ελαστικός σωλήνας με σφιγκτήρα τοποθετείται στο κάτω άκρο της χοάνης. Το χωνί γεμίζει με νερό που έχει θερμανθεί στους 50°, έτσι ώστε Κάτω μέροςτο πλέγμα που περιείχε τα κόπρανα ήρθε σε επαφή με το νερό. Οι προνύμφες κινούνται ενεργά στο νερό και συσσωρεύονται στο κάτω μέρος του ελαστικού σωλήνα. Μετά από 4 ώρες, το υγρό στραγγίζεται σε φυγοκεντρικούς σωλήνες, φυγοκεντρείται και το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

Ανάλυση πτυέλων, ρινικής βλέννας και κολπική έκκρισηγια την αναγνώριση αυγών του πνευμονικού trematode paragonimus, προνύμφες στρογγυλού σκώληκα και αγκυλόστομου, αυγών σκουληκιών και θραυσμάτων εχινόκοκκου κύστης. Το τμήμα της βλέννας (εκκένωσης) που εξετάζεται επαλείφεται σε γυαλί και παρατηρείται μακροσκοπικά σε ασπρόμαυρο φόντο και στη συνέχεια κάτω από μικροσκόπιο. Μπορείτε να προσθέσετε ένα διάλυμα αντιφορμίνης 25% στο υλικό δοκιμής, να ανακινήσετε καλά και να αφήσετε για 1-1,5 ώρα για να διαλυθεί η βλέννα. Το μίγμα φυγοκεντρείται και το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

Ανάλυση του δωδεκαδακτυλικού και του γαστρικού υγρού για την ανίχνευση αυγών ηπατικών ραβδώσεων, αγκυλόστομων και προνυμφών Strongyloides. Και τα τρία μέρη του περιεχομένου του δωδεκαδακτύλου που λαμβάνονται με φυγοκεντρούνται και το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Ερευνούν και αυτοί.

Έρευνα ιστών. Για να αναγνωριστούν οι προνύμφες Trichinella, κομμάτια μυών που έχουν υποβληθεί σε βιοψία χωρίζονται προσεκτικά σε ίνες, συμπιέζονται ανάμεσα σε γυαλιά συμπιεστή (χοντρά γυαλιά με βίδες) και εξετάζονται σε μικροσκόπιο με σκοτεινό φως. Για τον εντοπισμό των κυστικέρων, οι μύες ανατέμνονται με βελόνες ανατομής, το απομονωμένο κυστίδιο καθαρίζεται από τον περιβάλλοντα ιστό, συμπιέζεται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες και εξετάζεται με μεγεθυντικό φακό.

Εξέταση αίματος (για την ανίχνευση προνυμφών filaria). Εξετάστε την κρεμασμένη σταγόνα σε γυαλί καλύμματος με βαζελίνη. Μπορείτε να αναμίξετε 0,3 ml αίματος με 10πλάσια ποσότητα διαλύματος 3%. Το μίγμα φυγοκεντρείται και το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Για εμπλουτισμό φαρμάκων σε 1 ml φλεβικό αίμαπροσθέστε 3 ml διαλύματος φορμαλίνης 2% ή 5πλάσια ποσότητα υγρού που αποτελείται από 95 ml διαλύματος φορμαλίνης 5%, 5 ml οξικό οξύκαι 2 ml πυκνού διαλύματος αλκοόλης αιματοξυλίνης. Το μίγμα φυγοκεντρείται, το ίζημα πλένεται με απεσταγμένο νερό και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Για διαφοροποίηση ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΟΙ ΤΥΠΟΙΤα filariae εξετάζονται με επιχρίσματα που χρωματίζονται με τη μέθοδο Giemsa-Romanovsky.

Μέθοδοι ανοσολογική διάγνωση. Χρησιμοποιούνται επίσης αλλεργικές διαγνωστικές εξετάσεις (βλ.) με τον αντίστοιχο τύπο ελμινθίου (συγκόλληση, στερέωση συμπληρώματος).

Ελμινθολογικές μέθοδοιέρευνα. Ρύζι. Αυγά ελμινθίου. 1-10 - αυγά στρογγυλά σκουλήκια(νηματώδεις): 1 - 3 - στρογγυλοί σκώληκες (1 - γονιμοποιημένο αυγό, 2 - γονιμοποιημένο αυγό χωρίς λεύκωμα, 3 - μη γονιμοποιημένο αυγό). 4 - στρογγυλά σκουλήκια γάτας. 5 - σαρκοφάγα στρογγυλά σκουλήκια. 5 - pinworms? 7 - whipworm? 8 - tominx; 9 - αγκυλόστομος? 10 - trichostrongylid. 11-15 - αυγά ταινίας(κεστόδες): 11 - ταινία βοοειδών. 12 - νάνος ταινία? 13 - ταινία αρουραίων? 14 - ταινία κολοκύθας? 15 φαρδιά ταινία. 16 - 24 - αυγά φουσκωτών (τρεματωδών): 16 - τρεματώδη (σχιστοσώματα) Ιαπωνικά. 17 - τρεματώδη (σχιστοσώματα) ούρα - σεξουαλική. 18 - τρηματώδεις (σχιστοσώματα) Munson; 19 - τρεματώδη (παρογώνυμα) πνευμονικά. 20 - trematodes (opisthorchis) Siberian (αιλουροειδές). 21 - trematodes (clonorchis) chinensis; 22 - εντερικοί τρηματώδεις (metagonimus); 23 - τρηματώδεις (fasciolas) του ήπατος. 24 - λογχοειδή τρεματώδη (δικροκήλιο).

Μια αποτελεσματική και βολική μέθοδος ελμινθολογικής έρευνας είναι μελέτη παχύρρευστου κατά Κάτω, η ουσία του οποίου είναι η ανίχνευση αυγών ελμινθών σε ένα παχύ επίχρισμα κοπράνων, καθαρισμένο με γλυκερίνη και βαμμένο με πράσινο μαλαχίτη. Σύνθεση μείγματος Kato - 6 ml 3% υδατικό διάλυμαπράσινο μαλαχίτη, 500 ml γλυκερίνη, 500 ml διάλυμα φαινόλης 6%. Το διάλυμα είναι σταθερό και μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία δωματίου. Για την παρασκευή των παρασκευασμάτων, κομμάτια περιττωμάτων σε μέγεθος μπιζελιού εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα, καλύπτονται με μια μεμβράνη υδρόφιλου σελοφάν που διατηρείται στο μείγμα Kato για 24 ώρες και πιέζονται πάνω στο ποτήρι για να ομοιόμορφη κατανομήυλικό. Τα επιχρίσματα που καθαρίζονται για 40-60 λεπτά εξετάζονται σε μικροσκόπιο. Τα ανιχνευμένα ωάρια ελμινθών μετρώνται και μορφολογικά χαρακτηριστικάκαθορίσει το είδος τους. Η μέθοδος σάς επιτρέπει να αναγνωρίσετε αυγά στρογγυλών σκουληκιών, μαστιγίων, κεστωδών, τρεματωδών και, σε μικρότερο βαθμό, αγκυλόστομων και νάνων ταινίας.

Επίσης χρησιμοποιείται ευρέως μεθόδους εμπλουτισμού. Η αρχή των μεθόδων επίπλευσης είναι η εναιώρηση των κοπράνων σε αλατούχο διάλυμα, το οποίο έχει μεγαλύτερη σχετική πυκνότητα σε σύγκριση με τα αυγά ελμινθών, με αποτέλεσμα να επιπλέουν στην επιφάνεια. Τα περιεχόμενα της επιφανειακής μεμβράνης εξετάζονται σε μικροσκόπιο. Ως μίγματα εμπλουτισμού χρησιμοποιούνται τα ακόλουθα διαλύματα: επιτραπέζιο αλάτι - 400 g σε 1 λίτρο νερού (σχετική πυκνότητα σύμφωνα με το Fulleborn -1,18). νιτρικό νάτριο - 1 kg σε 1 λίτρο νερού (σχετική πυκνότητα σύμφωνα με το "Kalantaryan-1.38), νιτρικό νάτριο - 900 g και νιτρικό κάλιο - 400 g σε 1 λίτρο νερού (σχετική πυκνότητα σύμφωνα με Brudastov και Krasnos-1,48). τα διαλύματα βράζονται και ψύχονται.
Για έρευνα, προσθέστε 5-10 γραμμάρια περιττωμάτων σε ένα ποτήρι ή πήλινο ποτήρι, προσθέστε 100-200 ml σε αυτό αλατούχο διάλυμακαι ανακατεύουμε καλά. Στη συνέχεια αφαιρούνται τα επιπλέοντα μεγάλα σωματίδια με μια ξύλινη σπάτουλα ή μια σέσουλα από χαρτί ή χαρτόνι και αμέσως εφαρμόζεται μια ευρεία πλάκα στην επιφανειακή μεμβράνη έτσι ώστε το αλατούχο διάλυμα και η αντικειμενοφόρος πλάκα να έρχονται σε πλήρη επαφή. Αφού αφήσετε το μείγμα να καθίσει για 30-40 λεπτά, αφαιρείται η αντικειμενοφόρος πλάκα, τοποθετείται στο μικροσκόπιο με το φιλμ στραμμένο προς τα επάνω και εξετάζεται προσεκτικά ολόκληρη η επιφάνεια. Για να αποφύγετε το στέγνωμα, μπορείτε να προσθέσετε 2-3 σταγόνες από ένα διάλυμα γλυκερίνης 50%. Το επιφανειακό φιλμ μπορεί επίσης να αφαιρεθεί με συρμάτινο βρόχο. Η αποτελεσματικότητα των μεθόδων επίπλευσης αυξάνεται καθώς αυξάνεται η σχετική πυκνότητα των διαλυμάτων άλμης. Χρησιμοποιώντας αυτές τις μεθόδους, είναι δυνατός ο εντοπισμός αυγών νηματωδών, κεστωδών και τρεματωδών.

Για την ανίχνευση αυγών στα κόπρανα, χρησιμοποιείται η μέθοδος καθίζησης Krasilnikov. Τα κόπρανα αναμιγνύονται με διάλυμα απορρυπαντικού 1% ( σκόνη πλυσίματος“Lotus” κ.λπ.) σε αναλογία 1:10 μέχρι να σχηματιστεί ανάρτηση. Υπό την επίδραση του απορρυπαντικού διαλύονται διάφορα συστατικά των περιττωμάτων (πρωτεΐνες, λίπη, στοιχεία ιστού). Μετά από 30 λεπτά, τα περιεχόμενα του σωλήνα ανακινούνται για 1-2 λεπτά και στη συνέχεια φυγοκεντρούνται για 5 λεπτά. Τα παρασκευάσματα παρασκευάζονται από το ίζημα και εξετάζονται σε μικροσκόπιο.
ΣΕ συνθήκες πεδίου, καθώς και κατά τις μαζικές εξετάσεις του πληθυσμού για προσβολή από ελμινθικά, βολεύει η χρήση της μεθόδου του παχύρρευστου επιχρίσματος Κάτω. ΣΕ συνθήκες νοσηλείαςΚατά την εξέταση ασθενών, είναι προτιμότερο να χρησιμοποιούνται οι πιο αποτελεσματικές μέθοδοι επίπλευσης. Όταν χρησιμοποιείτε αυτές τις μεθόδους κατά τη διάρκεια της μικροσκοπίας, συνιστάται να μετράτε τα αυγά που βρίσκονται στο παρασκεύασμα. Εάν το δείγμα ή ο όγκος που λαμβάνεται για τη μελέτη των κοπράνων είναι τυποποιημένος (για παράδειγμα, 1 κουταλάκι του γλυκού ή κουταλιά της σούπας) και ένας σταθερός ομοιόμορφος όγκος αλατούχων διαλυμάτων, μπορεί κανείς να κρίνει χονδρικά την ένταση των εισβολών. Αυτή η ποσοτική λογιστική μπορεί να είναι χρήσιμη για την αιτιολόγηση της συνταγογραφούμενης θεραπείας και την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της αποπαρασίτωσης. Επιπλέον, άλλες πιο ακριβείς ποσοτικές μέθοδοι, ιδίως η μέθοδος Stoll, μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τον προσδιορισμό της έντασης της μόλυνσης.

Για τη διάγνωση της τενιαρύγνωσης και της εντεροβίασηςΧρησιμοποιείται η μέθοδος μελέτης των περιπρωκτικών-ορθικών ξύσεων. Χρησιμοποιώντας μια ξύλινη σπάτουλα εμποτισμένη σε διάλυμα γλυκερίνης 50%, ξύστε τις περιπρωκτικές πτυχές το πρωί πριν την αφόδευση στην περιφέρεια πρωκτόςΚαι κατώτερα τμήματαπρωκτός. Το προκύπτον υλικό, καθαρισμένο από μια σπάτουλα με την άκρη ενός γυαλιού κάλυψης, τοποθετείται σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50%, καλύπτεται με γυαλί κάλυψης και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Μπορείτε επίσης να εξετάσετε μια λωρίδα ταινίας κυτταρίνης, η οποία πιέζεται πρώτα με την κολλητική πλευρά στις περιρινικές πτυχές, στη συνέχεια τοποθετείται σε γυάλινη πλάκα και εξετάζεται μικροσκοπικά.

Ανίχνευση προνυμφών νηματωδών στα κόπρανα με τη μέθοδο Berman. Η μέθοδος βασίζεται στη θερμοτροπική ιδιότητα των προνυμφών. Για έρευνα, πάρτε 1 κουταλιά της σούπας περιττώματα και τοποθετήστε το σε ένα μεταλλικό πλέγμα ή ένα πλέγμα από πολλά στρώματα γάζας σε ένα συρμάτινο πλαίσιο. Το πλέγμα εγκαθίσταται σε ένα χωνί τοποθετημένο σε τρίποδο. Ένας ελαστικός σωλήνας με σφιγκτήρα είναι προσαρτημένος στη χοάνη. Έχοντας σηκώσει το πλέγμα, το χωνί γεμίζει με νερό (θερμοκρασία +40°...+50°C) ώστε το κάτω μέρος του πλέγματος να βυθιστεί σε νερό. Οι προνύμφες από τα κόπρανα μεταναστεύουν ενεργά σε ζεστό νερόκαι, καθιζάνοντας, συσσωρεύονται στο κάτω μέρος της χοάνης. Μετά από 2-4 ώρες, ο σφιγκτήρας ανοίγει, το νερό αποστραγγίζεται σε σωλήνα φυγοκέντρησης και φυγοκεντρείται για 2-3 λεπτά. Στη συνέχεια το υπερκείμενο υγρό στραγγίζεται, το ίζημα μεταφέρεται σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα και εξετάζεται στο μικροσκόπιο, όπου βρίσκονται κινητές προνύμφες του αιτιολογικού παράγοντα της ισχυροειδίασης.

Η μέθοδος Harada και Το Mori καθιστά δυνατή τη διάκριση μεταξύ των προνυμφών αγκυλόστομου και νέκτορα. Οι προνύμφες αγκυλόστομων καλλιεργούνται σε διηθητικό χαρτί. Για το σκοπό αυτό, 0,5 g φρέσκων περιττωμάτων, που λαμβάνονται από τον ασθενή το αργότερο 1 ώρα μετά την αφόδευση, εφαρμόζονται σε λωρίδες διηθητικού χαρτιού διαστάσεων 12Χ1,5 cm, αφήνοντας και τα δύο άκρα της ταινίας καθαρά. Το ένα άκρο της ταινίας βυθίζεται σε δοκιμαστικό σωλήνα, το ένα τέταρτο του οποίου είναι γεμάτο με νερό και το άλλο σφίγγεται με πώμα. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες τοποθετούνται σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία +26... + 28°C. Οι προνύμφες που αναπτύσσονται από τα αυγά κατεβαίνουν μέσω του διηθητικού χαρτιού και κατακάθονται στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα. Μετά από 5-6 ημέρες, η λωρίδα χαρτιού αφαιρείται και το υγρό που παραμένει στον δοκιμαστικό σωλήνα εξετάζεται με μεγεθυντικό φακό ή φυγοκεντρείται. Το ίζημα που σχηματίζεται κατά τη φυγοκέντρηση εξετάζεται σε μικροσκόπιο φωτός. Όταν χρησιμοποιούνται τετραεδρικά γυάλινα βάζα (μέγεθος 15xxx7 cm) αντί για δοκιμαστικούς σωλήνες, με 4 λωρίδες χαρτιού προσαρτημένες στα τοιχώματα, η αποτελεσματικότητα των αναλύσεων αυξάνεται (G.M. Maruashvili et al., 1966).

Μέθοδοι εξέτασης για σχιστοσωμίαση . Εξέταση κοπράνων - ένα μέρος των κοπράνων αναμιγνύεται με 250 ml νερού, φιλτράρεται μέσω 3 στρώσεων γάζας σε ένα κωνικό δοχείο, το οποίο γεμίζει μέχρι την κορυφή με νερό. Μετά από 30 λεπτά, το υγρό στρώμα στραγγίζεται και ένα φρέσκο ​​μέρος νερού προστίθεται στο ίζημα. Το ίζημα πλένεται έως ότου ληφθεί ένα διαυγές υπερκείμενο και εξετάζεται υπό μικροσκόπιο.

Μέθοδος λαρβοσκόπησης - 20-25 g περιττωμάτων τοποθετούνται σε μια φιάλη Erlenmeyer με ένα γυάλινο σωλήνα συγκολλημένο στο πλάι, στραμμένο προς τα πάνω και πλένονται νερό βρύσης. Στη συνέχεια, η φιάλη καλύπτεται με σκούρο χαρτί, αφήνοντας ένα συγκολλημένο γυάλινο σωλήνα στο φως σε θερμοκρασία +25...+30°C. Τα εκκολαφθέντα miracidia συγκεντρώνονται στον μηνίσκο στον πλευρικό σωλήνα, όπου φαίνονται με μεγεθυντικό φακό ή με γυμνό μάτι. Εξέταση ούρων - 100 ml ούρων που συλλέγονται μεταξύ 10 π.μ. και 2 μ.μ., ή μια ημερήσια δόση, καθιζάνουν και στη συνέχεια φυγοκεντρούνται στις 1500 rpm. Το προκύπτον ίζημα εφαρμόζεται* σε μια γυάλινη πλάκα και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Ο ΠΟΥ συνιστά μια μέθοδο φιλτραρίσματος ολόκληρου του δείγματος ούρων. Μετά τη διήθηση, τα φίλτρα υποβάλλονται σε επεξεργασία με φορμαλδεΰδη ή θερμαίνονται (για να σκοτωθούν τα αυγά) και στη συνέχεια υγραίνονται με ένα υδατικό διάλυμα νινυδρίνης. Σε αποξηραμένα παρασκευάσματα, τα έμβρυα αυγών αποκτούν μωβ χρώμα.

Εφαρμογή ανοσολογικών Οι μέθοδοι έρευνας για τη διάγνωση της σχιστοσωμίασης σχετίζονται με δυσκολίες, καθώς τα ενήλικα σχιστοσωμάτια και τα αυγά τους περιέχουν μεγάλο αριθμό αντιγόνων που προκαλούν ανοσολογικές αντιδράσεις, τα οποία δεν είναι ειδικά για τα είδη (D. Bradley, 1979).

Στη χώρα μας για σταδιοποίηση ανοσολογικών αντιδράσεων για ελμινθίαση παράγεται ολόκληρη γραμμήτυπικά διαγνωστικά. Πρακτική χρήσηέχουν αλλεργίες δερματικό τεστγια εχινοκοκκίαση και κυψελιδική, RLA με αντιγόνο εχινόκοκκου, RSC στο κρύο, αντίδραση κατακρήμνισης στο κρύο σε διάφορες τροποποιήσεις (κατακρήμνιση δακτυλίου, κατακρήμνιση σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή τριχοειδή αγγεία, που τοποθετούνται με αντιγόνα τριχίνωσης, κυστεκέρκωσης και ημικροασκαρίασης). Τα τυπικά διαγνωστικά κιτ για την εκτέλεση των προαναφερθέντων ορολογικών αντιδράσεων παράγονται από επιχειρήσεις που παράγουν βακτηριακά σκευάσματα. Ο κατασκευαστής περιλαμβάνει με τα διαγνωστικά κιτ που παράγονται αναλυτικές οδηγίεςσχετικά με τους κανόνες αποθήκευσης, τη διάρκεια ζωής του φαρμάκου και οδηγίες για τη χρήση των σχετικών αντιγόνων με την τεχνική της σταδιοποίησης της αντίδρασης.

ΣΕ τα τελευταία χρόνιαΟ κατάλογος των ορολογικών αντιδράσεων που χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση της ελμινθίασης έχει διευρυνθεί σημαντικά. Για τους σκοπούς αυτούς, χρησιμοποιούνται οι ακόλουθες αντιδράσεις: RIGA, έμμεσος ανοσοφθορισμός (RIF), ανοσοδιάχυση σε πήκτωμα (RID), αντιανοσοηλεκτροφόρηση (CIEF), CEMA. Αυτές οι αντιδράσεις μπορούν να χρησιμοποιηθούν για ασκαρίαση, τοξοκαρίαση, τριχίνωση, αγκυλόστομα, φιλαρίαση, εχινόκοκκωση και κυψελιδική, οπισθορχίαση, σχιστοσωμίαση, παραγονιμίαση. Ωστόσο, για τις αντιδράσεις αυτές στη χώρα μας δεν εκδίδονται τυπικές διαγνωστικές εξετάσεις και δεν ρυθμίζεται η τεχνική για τη διάγνωσή τους. Μεμονωμένα εργαστήρια, κυρίως επιστημονικά, παρασκευάζουν ανεξάρτητα συγκεκριμένα αντιγόνα και τα χρησιμοποιούν σε διάφορες τροποποιήσεις. Η περιγραφή αυτών των μεθόδων παρουσιάζεται ευρέως στη βιβλιογραφία και δεν είναι αυστηρά ενοποιημένη. Η ερμηνεία των δεδομένων ανοσολογικής ανάλυσης θα πρέπει να βασίζεται στη μελέτη της δυναμικής της ανοσολογικής απόκρισης, λαμβάνοντας υπόψη το επίπεδο ειδικότητας και ευαισθησίας κάθε χρησιμοποιούμενης μεθόδου. ορολογική αντίδραση. Ως εκ τούτου, κατά τη διάγνωση, καθώς και κατά τη διάρκεια οροεπιδημιολογικών ερευνών του πληθυσμού, συνιστάται η χρήση πολλών από τις πιο ευαίσθητες αντιδράσεις. Από αυτή την άποψη, οι αντιδράσεις των VIEF και REMA, που διαφέρουν, έχουν αποδειχθεί καλά υψηλή ευαισθησίακαι αρκετά υψηλή ειδικότητα (P. Ambroise-Thomas, 1978· I. E. Ballad, 1979· G. M. Negreanu, 1980· A. M. Ponomareva, 1981· A. Ya. Lysenko, 1978, κ.λπ.). Η αποτελεσματικότητα του REMA έχει δοκιμαστεί για αμοιβάδα, λεϊσμανίαση, τρυπανοσωμίαση και τοξοπλάσμωση (G. A. Ermolin, 1980).

Κεφάλαιο III. Διάγνωση ελμινθίασης και μέθοδοι ελμινθολογικής έρευνας

Είναι απαραίτητο να εξετάζονται για ελμινθίαση όλοι οι ασθενείς που υποβάλλουν αίτηση ιατρική φροντίδα, και ιδιαίτερα ασθενείς που απευθύνονται σε παιδίατρο, θεραπευτή και νευρολόγο με παράπονα για παρενέργειες γαστρεντερικός σωλήνας, νευρικό σύστημακαι με αναιμία. Εάν ο γιατρός δεν είναι πάντα σε θέση να χρησιμοποιήσει εργαστηριακές μεθόδους έρευνας, τότε κάθε ιατρικός εργαζόμενος που παρέχει φροντίδα σε εξωτερικά ιατρεία ή νοσοκομείο απαιτείται να πάρει συνέντευξη από τον ασθενή σχετικά με την απομόνωση ελμινθών.

Εάν υπάρχουν κλινικές ενδείξεις που δίνονται στα σχετικά κεφάλαια, η διάγνωση θα πρέπει να διευκρινιστεί χρησιμοποιώντας εργαστηριακές μεθόδουςμελέτες για την ελμινθίαση.

Λόγω της επικράτησης εντερικές ελμινθίεςμέγιστος πρακτική σημασίακάνει εξέταση κοπράνων.

Μέθοδοι για τον έλεγχο των κοπράνων για ελμινθίαση

Τα κόπρανα παραδίδονται στο εργαστήριο σε ένα καθαρό γυάλινο δοχείο (περίπου ένα τέταρτο φλιτζάνι σκαμνί που λαμβάνονται από διαφορετικά σημεία σε μια μερίδα). Κατά τη διάρκεια μιας εξέτασης ρουτίνας, επιτρέπεται η παράδοση κοπράνων στο εργαστήριο σε σπιρτόκουτα ή κουτιά νάρθηκα.

Για τον έλεγχο της αποπαρασίτωσης, ολόκληρο το τμήμα των περιττωμάτων που συλλέγονται μετά τη χορήγηση χορηγείται (όπως συνταγογραφείται από τον γιατρό). ανθελμινθικόκαι καθαρτικό (σε μεγάλα κλειστά γυάλινα βάζα, κουβάδες).

Η μικροσκοπική εξέταση των κοπράνων είναι βασική στη διάγνωση των εντερικών ελμινθιών. θα πρέπει πάντα να προηγείται μια γενική μακροσκοπική εξέταση των κοπράνων για την ανίχνευση τμημάτων μεγάλων κεστωδών, σκουληκιών καρφιών, στρογγυλών σκουληκιών κ.λπ.

Τα κόπρανα πρέπει να είναι φρέσκα ή κονσερβοποιημένα (σε διάλυμα φορμαλδεΰδης 5%), καθώς το στέγνωμα αλλάζει δραματικά τη δομή των αυγών. Επιπλέον, όταν τα κόπρανα στέκονται, γρήγορη ανάπτυξηαυγά ορισμένων ελμινθών (για παράδειγμα, αγκυλόστομα), γεγονός που δυσχεραίνει τη διάγνωση.

Σύμφωνα με τις οδηγίες του Υπουργείου Υγείας της ΕΣΣΔ, είναι απαραίτητο να εξετάζονται τα κόπρανα ταυτόχρονα χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Fulleborn και το εγγενές επίχρισμα.

Εγγενές επίχρισμα

Εγγενές επίχρισμα: ένα μικρό κομμάτι περιττωμάτων (περίπου στο μέγεθος ενός μπιζελιού), που λαμβάνεται με ένα σπίρτο, γυαλί ή ξύλινο ραβδί από διαφορετικά σημεία στο παρεχόμενο τμήμα, αλέθεται καλά σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50% ή σε αλατούχο διάλυμα ή σε νερό. Καλύψτε με μια καλυπτρίδα, πιέζοντας ελαφρά την τελευταία (με μια βελόνα ανατομής). Το επίχρισμα πρέπει να είναι λεπτό, διαφανές και ομοιόμορφο. Χρησιμοποιείται μόνο ως προσθήκη σε άλλες μεθόδους που παρέχουν εμπλουτισμό του φαρμάκου. Τουλάχιστον δύο φάρμακα πρέπει να επανεξεταστούν.

Προκειμένου να ανιχνευθούν οι προνύμφες ελμινθών (καθώς και τα αυγά τους), γίνεται ένα εγγενές επίχρισμα ως εξής (σύμφωνα με τον Shulman): 2-3 g περιττωμάτων αναμειγνύονται επιμελώς «στρίβοντας» μια γυάλινη ράβδο σε ένα γαλάκτωμα με πέντε διπλώστε την ποσότητα καθαρού νερού ή φυσιολογικού ορού. Κατά τη διάρκεια της ανάδευσης, οι προνύμφες συσσωρεύονται κοντά στη γυάλινη ράβδο, οπότε αμέσως μετά το τέλος της ανάδευσης, μια σταγόνα του γαλακτώματος μεταφέρεται γρήγορα με μια γυάλινη ράβδο σε μια γυάλινη πλάκα, καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται. Ο S. D. Lyubchenko (1936) απέδειξε ότι η μέθοδος στρίψιμο είναι πιο αποτελεσματική από τη μέθοδο του επιχρίσματος, ειδικά όσον αφορά τα αυγά στρογγυλών σκουληκιών. Με βάση το έργο του S. D. Lyubchenko, θεωρούμε σκόπιμο να αντικατασταθεί η μέθοδος επίχρισης με τη μέθοδο συστροφής.

Μέθοδος Fulleborn

Μέθοδος Fulleborn: 5-10 g περιττωμάτων που λαμβάνονται από διαφορετικά σημεία τοποθετούνται σε βάζο χωρητικότητας 50-100 ml και τρίβονται καλά με ένα γυαλί ή ξύλινο ραβδί σε κορεσμένο διάλυμα επιτραπέζιο αλάτι(400 g αυτού του άλατος διαλύονται σε 1 λίτρο νερού, θερμαίνονται μέχρι βρασμού και διηθείται μέσω ενός στρώματος βαμβακιού ή γάζας· το διάλυμα χρησιμοποιείται κρύο: ειδικό βάρος 1.2). Το διάλυμα προστίθεται σταδιακά μέχρι να ληφθεί ένα ομοιόμορφο εναιώρημα και η συνολική ποσότητα του διαλύματος που προστίθεται πρέπει να είναι περίπου 20 φορές περισσότερη ποσότηταπεριττώματα. Για την ανάμειξη των κοπράνων, ο Fulleborn συνέστησε τη χρήση ποτηριών τσαγιού, αλλά είναι πιο βολικό να προετοιμάσετε ένα εναιώρημα σε βάζα αλοιφής χωρητικότητας 50-100 ml, χρησιμοποιώντας δύο βάζα για κάθε ανάλυση (ή σε φλιτζάνια χωρητικότητας 100 ml).

Αμέσως μετά την προετοιμασία του εναιωρήματος, τα μεγάλα σωματίδια που έχουν επιπλεύσει στην επιφάνεια αφαιρούνται από την επιφάνεια με μια σπάτουλα, μια μεταλλική σέσουλα ή ένα κομμάτι καθαρό χαρτί ( φυτικοί σχηματισμοί, παραμένει άπεπτη τροφή κ.λπ.), μετά το μείγμα αφήνεται να σταθεί για 1-1,5 ώρα. Μετά από αυτό το χρονικό διάστημα, ολόκληρη η μεμβράνη αφαιρείται από την επιφάνεια του μείγματος αγγίζοντας ένα σύρμα ή βρόχο πλατίνας (επίπεδο) με διάμετρο όχι μεγαλύτερη από 1 cm, λυγισμένο σε ορθή γωνία. Η μεμβράνη ανακινείται σε γυάλινη διαφάνεια και καλύπτεται με καλυπτρίδα. Τοποθετήστε 3-4 σταγόνες κάτω από κάθε καλυπτρίδα (18x18 mm). Συνολικά θα πρέπει να παρασκευαστούν τουλάχιστον 4 σκευάσματα (ένα ποτήρι κάλυψης για κάθε παρασκεύασμα). Ο βρόχος θερμαίνεται σε φωτιά και πλένεται με νερό μετά από κάθε ανάλυση.

Χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Fulleborn, τα αυγά όλων των νηματωδών (με εξαίρεση τα μη γονιμοποιημένα αυγά στρογγυλών σκουληκιών) και τα αυγά της ταινίας νάνων εντοπίζονται γρήγορα και εύκολα.

Η μέθοδος Berman χρησιμοποιείται για την εξέταση κοπράνων για προνύμφες ελμινθών (για ισχυροειδίαση). Αυτή η μέθοδος έχει ως εξής: 5 g περιττωμάτων σε ένα μεταλλικό πλέγμα (ένα φίλτρο γάλακτος είναι βολικό για το σκοπό αυτό) τοποθετούνται σε μια γυάλινη χοάνη προσαρτημένη σε ένα τρίποδο. Ένας ελαστικός σωλήνας με σφιγκτήρα τοποθετείται στο κάτω άκρο της χοάνης.

Το πλέγμα με τα κόπρανα ανασηκώνεται και το νερό που έχει θερμανθεί στους 50° περίπου χύνεται στη χοάνη έτσι ώστε το κάτω μέρος του πλέγματος με τα κόπρανα να βυθιστεί σε νερό. Οι προνύμφες κινούνται ενεργά στο νερό και συσσωρεύονται στο κάτω μέρος του ελαστικού σωλήνα. Μετά από 2-4 ώρες, ο σφιγκτήρας ανοίγει και το υγρό αποστραγγίζεται σε έναν ή δύο φυγοκεντρικούς σωλήνες.

Μετά από φυγοκέντρηση για 1-2 λεπτά πάνω μέροςτο υγρό στραγγίζεται γρήγορα και το ίζημα τοποθετείται σε σταγόνες σε γυάλινες πλάκες και εξετάζεται κάτω από καλυπτρίδες ή απλώνεται λεπτό στρώμασε 2-3 μεγάλα ποτήρια και μετά εξετάστε χωρίς καλυμμένα γυαλιά.

Η μέθοδος Berman χρησιμοποιείται επίσης για τον έλεγχο του εδάφους για την παρουσία προνυμφών αγκυλόστομων.

Μέθοδος Stoll

Η μέθοδος Stoll χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της έντασης της εισβολής. Ένα μη φυσιολογικό διάλυμα καυστικής σόδας χύνεται σε μια ειδική γυάλινη φιάλη μέχρι το σημάδι των 56 cm 3 και στη συνέχεια προστίθενται περιττώματα έως ότου η στάθμη του υγρού φτάσει τα 60 cm 3, δηλαδή τα 4 cm 3. Μετά από ανακίνηση με γυάλινες χάντρες, 0,075 ml του μείγματος λαμβάνονται για εξέταση και εξετάζονται κάτω από μία ή δύο συνηθισμένες καλυπτρίδες. Η προκύπτουσα ποσότητα πολλαπλασιάζεται επί 200 για να ληφθεί ο αριθμός των αυγών που περιέχονται σε 1 cm 3 περιττωμάτων.

Μελέτη του περιεχομένου του δωδεκαδακτύλου

Ο χυμός του δωδεκαδακτύλου και η χολή της ουροδόχου κύστης, που λαμβάνονται με τον συνήθη τρόπο με τη χρήση ανίχνευσης (και της χολής της ουροδόχου κύστης και μετά από ένα αντανακλαστικό από τη χοληδόχο κύστη), αναμιγνύονται επιμελώς με ίσο όγκο αιθυλαιθέρας; Το μείγμα φυγοκεντρείται και στη συνέχεια το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Εκτός από το ίζημα, εξέταση με μικροσκόπιοΟι νιφάδες που επιπλέουν στο υγρό, που μπορεί να περιέχουν αυγά ελμινθών, είναι απαραίτητα εκτεθειμένες. Κατά τη δοκιμή του γαστρικού υγρού και του εμετού για αυγά ελμινθών, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε την ίδια τεχνική.

Θα πρέπει να πραγματοποιείται εξέταση του χυμού του δωδεκαδακτύλου και του περιεχομένου του στομάχου εάν υπάρχει υποψία ελμινθικές ασθένειεςήπαρ, χοληδόχος κύστη (οπισθορχίαση, φασκιολίαση, δικροκηλίωση) και δωδεκαδάκτυλο(στρινγκυλοειδίαση).

Εξέταση πτυέλων

Τα πτύελα αλέθονται σε γυάλινη πλάκα, καλύπτονται σφιχτά με άλλη γυάλινη πλάκα και εξετάζονται με γυμνό μάτι σε ανοιχτό και μαύρο φόντο, καθώς και κάτω από μεγεθυντικό φακό στο μεταδιδόμενο φως. Μεμονωμένα κομμάτια πτυέλων («σκουριασμένες» συσσωρεύσεις, υπολείμματα ιστού κ.λπ.) εφαρμόζονται σε ένα λεπτό στρώμα σε μια γυάλινη πλάκα, καλύπτονται σφιχτά με καλυπτρίδα και εξετάζονται σε χαμηλή υψηλή μεγέθυνσημικροσκόπιο

α) Για τη διάγνωση της δερματικής κυστικέρκωσης, υποδερμικός ιστόςή μυός, εξετάζεται πρώτα με γυμνό μάτι ένα άσηπτα αποκομμένο κομμάτι του σχετικού ιστού. Οι περιοχές του ιστού απομακρύνονται χρησιμοποιώντας βελόνες ανατομής για να αποκαλυφθούν ορατές με γυμνό μάτικυστίδιο - κυστικέρκος (φωτογραφία Α); το μήκος του είναι 6-20 mm, το πλάτος 5-10 mm. Όταν ανιχνεύεται ένα κυστίδιο ύποπτο για κυστικέρκο, συνθλίβεται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες και εξετάζεται στο μικροσκόπιο. Ο κυστικέρκος (Cistycercus cellulosae) προσδιορίζεται από την παρουσία ενός σκόλεξ με τέσσερα κορόιδα και ένα στεφάνι από αγκίστρια (φωτογραφία Β).

Φωτογραφία.Α - κυστικέρκοι με σκολέξ στραμμένο προς τα έξω. Β - Κεφάλι χοιρινής ταινίας.

β) Για τη διάγνωση της τριχίνωσης, ένα κομμάτι μυός που έχει αφαιρεθεί άσηπτα (δικέφαλος ή γαστροκνήμιος) συνθλίβεται προσεκτικά σε διάλυμα γλυκερίνης 50% στις καλύτερες ίνες χρησιμοποιώντας βελόνες ανατομής. Οι θρυμματισμένοι μύες συμπιέζονται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες και εξετάζονται κάτω από ένα μικροσκόπιο χαμηλής ισχύος σε ένα σκοτεινό οπτικό πεδίο. Συνιστάται ο έλεγχος των μυών για τριχίνωση όχι νωρίτερα από την 8η ημέρα της νόσου. Οι προνύμφες Trichinella βρίσκονται στους μύες σε κουλουριασμένη θέση: είναι κλεισμένες σε κάψουλες σε σχήμα λεμονιού.

Φωτογραφία. A - Προνύμφες Trichinella στους μύες. Β — Ασβεστοποιημένες κάψουλες Trichinella.

ακτινογραφία

Τις περισσότερες φορές, η ακτινοσκόπηση χρησιμοποιείται για τη διάγνωση της εχινόκοκκωσης και, σπανιότερα, της κυστικέρκωσης. Οι κυστικέρηδες ανιχνεύονται με ακτινοσκόπηση μόνο μετά από ασβεστοποίηση (σε περιπτώσεις μακροχρόνια ασθένεια). Τα τελευταία χρόνια, η ακτινοσκόπηση έχει επίσης χρησιμοποιηθεί για τη διάγνωση της ασκαρίασης τόσο στο πρώιμο στάδιο της προνύμφης όσο και, εν μέρει, στο εντερικό στάδιο.

Κατά τη διάρκεια της περιόδου μετανάστευσης του στρογγυλού σκώληκα (και του αγκυλόστομου) ανιχνεύονται ασταθείς, μερικές φορές πολλαπλές φλεγμονώδεις εστίες στους πνεύμονες. Ταυτόχρονα, στο αίμα εμφανίζεται σημαντική ηωσινοφιλία.

Τα σεξουαλικά ώριμα στρογγυλά σκουλήκια είναι σαφώς ορατά στην ακτινοσκόπηση των εντέρων των προσβεβλημένων ατόμων. Αυτή η μέθοδος, παρά την πολυπλοκότητα και τη δυσκινησία της, θα πρέπει να χρησιμοποιείται ως πρόσθετη μέθοδος για τη διάγνωση της ασκαρίασης σε περιπτώσεις με αρνητική σκατολογική ανάλυση. Σύμφωνα με τον E. S. Geselevich, από τους 180 ασθενείς με ασκαρίαση που εντοπίστηκαν με ακτινοσκόπηση, οι 54 δεν είχαν ωάρια ασκαρίδας στα κόπρανα τους (βλ.).

Ελμινθολογικές μέθοδοι έρευνας. Οι μέθοδοι για τη διάγνωση των ελμινθικών λοιμώξεων χωρίζονται σε άμεσες, με βάση την άμεση ανίχνευση των ίδιων των ελμινθών ή των θραυσμάτων τους, καθώς και των προνυμφών και των αυγών ελμινθών (μέθοδοι για την εξέταση περιττωμάτων, ούρων, χολής και δωδεκαδακτύλου, πτυέλων, αίματος και ιστών, υλικό που λαμβάνονται με απόξεση από την περιπρωκτική περιοχή και τους υπογλώσσιους χώρους), και έμμεσα, με τη βοήθεια των οποίων αποκαλύπτονται δευτερογενείς αλλαγές, που προκύπτει στο ανθρώπινο σώμα ως αποτέλεσμα της ζωτικής δραστηριότητας των ελμινθών (μελέτες της μορφολογικής σύνθεσης του αίματος, ανοσολογικές μεθόδουςδιαγνωστικές ελμινθίασης, ακτινολογικές εξετάσεις κ.λπ.). Από τις άμεσες μεθόδους, οι πιο συνηθισμένες είναι οι σκατολογικές, οι οποίες χωρίζονται σε μακρο- και μικροελμινθοσκοπικές. Σε ορισμένες περιπτώσεις, χρησιμοποιούνται ειδικές μέθοδοι.

Μακροελμιτοσκοπικές μέθοδοι έρευναςπου στοχεύει στην αναζήτηση ελμινθών ή θραυσμάτων τους (scolex, τμήματα, τμήματα του strobila των κεστωδών). Χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση εκείνων των ελμινθίασης στις οποίες τα αυγά δεν απεκκρίνονται στα περιττώματα του ασθενούς ή απεκκρίνονται σε μικρές ποσότητες και όχι πάντα (για παράδειγμα, με εντεροβίαση, εντοπίζονται σκουλήκια στα κόπρανα, με ταενίαση - τμήματα).

Για την ανίχνευση σκουληκιών ή τμημάτων κεστοδών στα κόπρανα, τα κόπρανα εξετάζονται με γυμνό μάτι. Για διαφορική διάγνωσηΤαενίαση, συνιστάται η προβολή περιττωμάτων αραιωμένων με νερό σε ξεχωριστές μικρές μερίδες σε μαύρες φωτογραφικές κυψέλες ή σε πιάτα Petri σε σκούρο φόντο. Μεγάλοι σχηματισμοί ύποπτοι για θραύσματα ελμινθών εξετάζονται κάτω από μεγεθυντικό φακό ανάμεσα σε δύο διαφάνειες. Αν σύμφωνα με κλινικές ενδείξειςπροτείνουν την ανίχνευση μικρών ελμίνθων ή κεφαλών κεστόδων μετά τη θεραπεία, στη συνέχεια τα ύποπτα σωματίδια εξετάζονται κάτω από μεγεθυντικό φακό σε μια σταγόνα γλυκερίνης και, εάν είναι απαραίτητο, κάτω από μικροσκόπιο.

Μικροελμινθοσκοπικές μέθοδοι έρευνας(ποιοτικά) στοχεύουν στον εντοπισμό αυγών και προνυμφών ελμινθών. Χρησιμοποιείται η μέθοδος παχιάς επάλειψης με πλάκα κάλυψης σελοφάν κατά Kato. Το μείγμα Κάτω αποτελείται από 6 ml 3% υδατικό διάλυμα πράσινου μαλαχίτη, 500 mlγλυκερίνη και 500 mlΔιάλυμα φαινόλης 6%. Πιάτα Κάτο (το υδρόφιλο σελοφάν κόβεται σε κομμάτια διαστάσεων 20΄40 mm) βυθισμένο για 24 ηστο μείγμα Κάτω έτσι ώστε να είναι γειτονικά το ένα με το άλλο (3-5 mlΚάτω διάλυμα ανά 100 πλάκες). 100 mgΤα κόπρανα εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα, καλύπτονται με μια πλάκα κάλυψης σελοφάν σύμφωνα με το Kato και πιέζονται προς τα κάτω έτσι ώστε τα κόπρανα να αλείφονται στη γυάλινη πλάκα εντός των ορίων της πλάκας σελοφάν. Το επίχρισμα αφήνεται σε θερμοκρασία δωματίου για να ελαφρύνει κατά 40-50 min,και στη συνέχεια εξετάστηκε στο μικροσκόπιο. Στη ζεστή εποχή, για να μην στεγνώσει το παρασκεύασμα, τοποθετήστε ένα υγρό σφουγγάρι στο πιάτο του παρασκευασμένου σκευάσματος.

Για την πλήρη ανίχνευση ελμίνθων όλων των τύπων, πρέπει να χρησιμοποιείται η μέθοδος παχύρρευστης επίχρισης Kato με πλάκα κάλυψης σελοφάν σε συνδυασμό με μία από τις μεθόδους εμπλουτισμού. Οι πιο συνηθισμένες από αυτές είναι η μέθοδος Kalantaryan και η μέθοδος Fulleborn.

Μέθοδος Kalantaryan: σε φιάλες με πλατύ στόμα με όγκο 100 mlανακατεύουμε καλά με μια γυάλινη ράβδο 5 σολκόπρανα, προσθέτοντας σταδιακά κορεσμένο διάλυμα νιτρικού νατρίου (1 κιλόνιτρικό νάτριο ανά 1 μεγάλονερό όταν βράζει) μέχρι την άκρη του ποτηριού. Τα μεγάλα σωματίδια που επιπλέουν στην επιφάνεια αφαιρούνται με μια σέσουλα χαρτιού. Μια γυάλινη αντικειμενοφόρος πλάκα εφαρμόζεται στην επιφάνεια του αλατούχου διαλύματος (το αλατούχο διάλυμα προστίθεται μέχρι το μείγμα να έρθει σε πλήρη επαφή με τη γυάλινη πλάκα). Στο 20-30 ελάχη αντικειμενοφόρος πλάκα αφαιρείται και το φιλμ εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Ελλείψει αυτού του αλατιού, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε ένα κορεσμένο διάλυμα επιτραπέζιου αλατιού σύμφωνα με το Fholleborn (400 σολαλάτι σε 1 μεγάλοβραστό νερό).

Λόγω του γεγονότος ότι αυγά με μεγάλο ειδικό βάρος (μη γονιμοποιημένα αυγά στρογγυλών σκουληκιών, αυγά τρεματωδών και μεγάλων κεστωδών) δεν επιπλέουν, εκτός από την εξέταση του επιφανειακού στρώματος του υγρού, κατά τη χρήση της μεθόδου Fulleborn, είναι απαραίτητο να εξεταστεί 2-4 παρασκευάσματα από το ίζημα στο μικροσκόπιο.

Ειδικές εργαστηριακές μέθοδοι για τον έλεγχο διαφόρων ελμινθιών.

7.7. Μέθοδοι για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας αυγών και προνυμφών ελμινθών

Η βιωσιμότητα των αυγών ελμινθών καθορίζεται από εμφάνιση, με χρώση με ζωτικά χρώματα, καλλιέργεια σε βέλτιστες συνθήκεςκαι τη δημιουργία βιολογικού δείγματος.

7.7.1. Προσδιορισμός της βιωσιμότητας αυγών ή προνυμφών ελμινθών από την εμφάνιση

Τα αυγά ελμινθίου μικροσκοπούνται πρώτα σε χαμηλή και μετά σε υψηλή μεγέθυνση. Σε παραμορφωμένα και νεκρά αυγά ελμινθών, το κέλυφος είναι σχισμένο ή λυγισμένο προς τα μέσα, το πλάσμα είναι θολό και χαλαρό. Τα τεμαχισμένα αυγά έχουν μπάλες σύνθλιψης (βλαστομερή) άνισου μεγέθους, ακανόνιστο σχήμα, συχνά μετατοπίζεται σε έναν πόλο. Μερικές φορές υπάρχουν μη φυσιολογικά ωάρια που, παρά τις εξωτερικές παραμορφώσεις, αναπτύσσονται φυσιολογικά. Στις ζωντανές προνύμφες στρογγυλών σκουληκιών, η λεπτή κοκκοποίηση είναι παρούσα μόνο στο μεσαίο μέρος του σώματος· καθώς πεθαίνουν, εξαπλώνεται σε όλο το σώμα, εμφανίζονται μεγάλα γυαλιστερά υαλώδη κενοτόπια, οι λεγόμενες «χορδές από μαργαριτάρια».

Για να προσδιορίσετε τη βιωσιμότητα των ώριμων αυγών στρογγυλών σκουληκιών, μαστιγίων και σκουληκιών, θα πρέπει να καλέσετε ενεργητικές κινήσειςπρονύμφες θερμαίνοντας ελαφρά το παρασκεύασμα (σε θερμοκρασία που δεν υπερβαίνει τους 37 °C). Είναι πιο βολικό να παρατηρήσετε τη βιωσιμότητα των προνυμφών του στρογγυλού σκουληκιού και του μαστιγίου αφού απομονωθούν από το κέλυφος του αυγού πιέζοντας το γυαλί του καλύμματος του παρασκευάσματος με βελόνα ή τσιμπιδάκια ανατομής.

Στις επεμβατικές προνύμφες στρογγυλών σκουληκιών, μια θήκη συχνά φαίνεται να ξεφλουδίζει στο άκρο της κεφαλής, και σε προνύμφες μαστιγίου που έχουν ολοκληρώσει την ανάπτυξη στο αυγό, ένα στυλεό βρίσκεται σε αυτό το μέρος σε υψηλή μεγέθυνση. Στις νεκρές προνύμφες ελμινθών, ανεξάρτητα από τη θέση τους (στο αυγό ή έξω από αυτό), παρατηρείται σήψη του σώματος. Σε αυτή την περίπτωση, η εσωτερική δομή της προνύμφης γίνεται μπλοκαρισμένη ή κοκκώδης και το σώμα γίνεται θολό και αδιαφανές. Τα κενοτόπια βρίσκονται στο σώμα και τα σπασίματα στην επιδερμίδα.

Η βιωσιμότητα των ογκόσφαιρων taeniid (βοοειδή, χοιρινή ταινία κ.λπ.) καθορίζεται από την κίνηση των εμβρύων όταν εκτίθενται σε αυτά πεπτικά ένζυμα. Τα αυγά τοποθετούνται σε γυαλί ρολογιού με γαστρικό χυμό του σκύλου ή τεχνητό χυμό δωδεκαδακτύλου. Η σύνθεση του τελευταίου: παγκρεατίνη - 0,5 g, διττανθρακικό νάτριο - 0,09 g, απεσταγμένο νερό - 5 ml. Τα ποτήρια ρολογιού με αυγά τοποθετούνται σε θερμοστάτη στους 36 - 38 ° C για 4 ώρες. Σε αυτή την περίπτωση, τα ζωντανά έμβρυα απελευθερώνονται από τις μεμβράνες τους. Τα κελύφη των ζωντανών ογκόσφαιρων επίσης διαλύονται σε οξινισμένη πεψίνη και μέσα αλκαλικό διάλυμαθρυψίνη μετά από 6 - 8 ώρες σε θερμοστάτη στους 38 ° C.

Εάν τοποθετήσετε αυγά teniid σε διάλυμα θειούχου νατρίου 1% ή διάλυμα υποχλωριούχου νατρίου 20% ή σε διάλυμα χλωρίου νερού 1% στους 36 - 38 ° C, ώριμα και ζωντανά έμβρυα απελευθερώνονται από τις μεμβράνες και δεν αλλαγή κατά τη διάρκεια 1 ημέρας. Τα ανώριμα και νεκρά ογκόσφαιρα συρρικνώνονται ή διογκώνονται και μεγεθύνονται απότομα και στη συνέχεια «διαλύονται» μέσα σε 10 λεπτά έως 2 ώρες. Τα ζωντανά έμβρυα taeniid κινούνται επίσης ενεργά σε ένα μείγμα διαλύματος χλωριούχου νατρίου 1%, διαλύματος διττανθρακικού νατρίου 0,5% και χολής στους 36 - 38 °C.

Η βιωσιμότητα του Adolescaria fascioli που συλλέγεται σε φυτά και άλλα αντικείμενα υδάτινων σωμάτων ελέγχεται εξετάζοντάς τα σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα σε φυσιολογικό διάλυμα κάτω από μικροσκόπιο με στάδιο θέρμανσης. Όταν οι προνύμφες των τρηματωδών θερμαίνονται, αρχίζουν να κινούνται.

Για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των αυγών νάνου ταινίας, η απλούστερη μέθοδος είναι η N.S. Ionina: στα ζωντανά αυγά, το διάμεσο ζεύγος των εμβρυϊκών αγκίστρων είναι είτε παράλληλο με τα πλάγια, είτε τα τελευταία σχηματίζουν γωνία με τη διάμεσο στη βάση μικρότερη από 45°. Στα νεκρά αυγά, τα πλευρικά ζεύγη σχηματίζουν γωνία με το διάμεσο ζεύγος στη βάση μεγαλύτερη από 45° ή τα άγκιστρα είναι τυχαία διασκορπισμένα (η ζευγαρωμένη διάταξη τους χάνεται). Μερικές φορές το έμβρυο συρρικνώνεται και σχηματίζονται κόκκοι. Μια πιο ακριβής μέθοδος βασίζεται στην εμφάνιση των κινήσεων της ογκόσφαιρας κατά τη διάρκεια μιας απότομης αλλαγής της θερμοκρασίας: από 5 - 10 ° σε 38 - 40 ° C.

Ο προσδιορισμός της βιωσιμότητας των ανώριμων αυγών νηματωδών θα πρέπει να μελετηθεί σε έναν υγρό θάλαμο (πιάτα Petri), τοποθετώντας τα αυγά στρογγυλών σκουληκιών σε διάλυμα φορμαλδεΰδης 3% παρασκευασμένο σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε θερμοκρασία 24 - 30 ° C, αυγά μαστιγίου σε Διάλυμα 3%. του υδροχλωρικού οξέοςσε θερμοκρασία 30 - 35 ° C. αυγά σκώληκα σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε θερμοκρασία 37 °C. Τα πιάτα Petri πρέπει να ανοίγουν 1 - 2 φορές την εβδομάδα για καλύτερο αερισμό και το φίλτρο χαρτιού πρέπει να ξαναβρέχεται καθαρό νερό.

Οι παρατηρήσεις της ανάπτυξης αυγών ελμινθών πραγματοποιούνται τουλάχιστον 2 φορές την εβδομάδα. Η απουσία σημείων ανάπτυξης εντός 2 - 3 μηνών υποδηλώνει τη μη βιωσιμότητά τους. Τα σημάδια της ανάπτυξης των αυγών ελμινθών είναι πρώτα τα στάδια σύνθλιψης, διαιρώντας το περιεχόμενο του αυγού σε ξεχωριστά βλαστομερή. Τις πρώτες ημέρες, αναπτύσσονται έως και 16 βλαστομερή, τα οποία περνούν στο δεύτερο στάδιο - μόρουλας κ.λπ.

Τα αυγά αγκυλόστομων καλλιεργούνται σε γυάλινο κύλινδρο (50 cm ύψος και 7 cm διάμετρος) κλειστό με πώμα. Ένα μείγμα από ίσους όγκουςαποστειρωμένη άμμος, ξυλάνθρακαςκαι περιττώματα με αυγά αγκυλόστομων, αραιωμένα με νερό σε ημι-υγρή σύσταση, χύνονται προσεκτικά στον πυθμένα του κυλίνδρου χρησιμοποιώντας ένα γυάλινο σωλήνα. Κατά τη διάρκεια 1 - 2 ημερών εγκατάστασής τους στο σκοτάδι σε θερμοκρασία 25 - 30 ° C, οι ραβδιώδεις προνύμφες εκκολάπτονται από τα αυγά και μετά από 5 - 7 ημέρες γίνονται νηματώδεις: οι προνύμφες σέρνονται στα τοιχώματα του κυλίνδρου, όπου βρίσκονται ορατή ακόμη και με γυμνό μάτι.

Τα αυγά των τρεματωδών που αναπτύσσονται φυσικά στο νερό, για παράδειγμα οπίσθορχη, διφυλλοβόθριδες, φάσιολα και άλλα, τοποθετούνται σε ποτήρι ρολογιού, πιάτο Petri ή άλλο δοχείο και χύνεται ένα μικρό στρώμα συνηθισμένου νερού. Κατά την καλλιέργεια των αυγών Fasciola, θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι αναπτύσσονται πιο γρήγορα στο σκοτάδι, ενώ σε ζωντανά αυγά σε θερμοκρασία 22 - 24 ° C, το miracidium σχηματίζεται σε 9 - 12 ημέρες. Κατά τη μικροσκόπηση των αναπτυσσόμενων αυγών τρηματωδών, οι κινήσεις του miracidium είναι καθαρά ορατές. Το Miracidium fasciola αναδύεται από το κέλυφος του αυγού μόνο στο φως.

Μέθοδος Fulleborn. Οι προνύμφες των αγκυλόστομων και των ισχυροειδών καλλιεργούνται σε άγαρ σε τρυβλίο Petri με ζωικό κάρβουνο. Αφού διατηρηθούν σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 25 - 30 ° C για 5 - 6 ώρες, οι προνύμφες σέρνονται στο άγαρ, αφήνοντας πίσω τους μια διαδρομή βακτηρίων.

Μέθοδος Harada και Mori. Προσθέστε 7 ml απεσταγμένου νερού σε δοκιμαστικούς σωλήνες τοποθετημένους σε σχάρα. Χρησιμοποιώντας ένα ξύλινο ραβδί, πάρτε 0,5 g περιττωμάτων και κάντε ένα επίχρισμα σε διηθητικό χαρτί (15 x 150 mm) 5 cm από το αριστερό άκρο (αυτή η λειτουργία πραγματοποιείται σε ένα φύλλο χαρτιού για την προστασία της επιφάνειας του πάγκου του εργαστηρίου). Στη συνέχεια, η λωρίδα με το επίχρισμα εισάγεται στον δοκιμαστικό σωλήνα, έτσι ώστε το αριστερό άκρο χωρίς το επίχρισμα να φτάσει στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα. Καλύψτε το πάνω άκρο με ένα κομμάτι σελοφάν και τυλίξτε το σφιχτά με μια ελαστική ταινία. Στον δοκιμαστικό σωλήνα αναγράφεται ο αριθμός και το επώνυμο του εξεταζόμενου. Σε αυτή την κατάσταση, τα σωληνάρια αποθηκεύονται για 8 - 10 ημέρες σε θερμοκρασία 28 °C. Για να μελετήσετε τις προνύμφες, αφαιρέστε το κάλυμμα από σελοφάν και αφαιρέστε μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού με τσιμπιδάκια. Θα πρέπει να δίνεται προσοχή όταν το κάνετε αυτό, καθώς μικροί αριθμοί μολυσματικών προνυμφών μπορεί να μετακινηθούν στο επάνω άκρο του διηθητικού χαρτιού ή στο πλάι του σωλήνα και να διεισδύσουν κάτω από την επιφάνεια του σελοφάν.

Οι δοκιμαστικοί σωλήνες τοποθετούνται σε θερμό μπάνιοσε θερμοκρασία 50 ° C για 15 λεπτά, μετά τα οποία τα περιεχόμενά τους ανακινούνται και χύνονται γρήγορα σε δοκιμαστικό σωλήνα 15 ml για να καθιζάνουν οι προνύμφες. Μετά τη φυγοκέντρηση, το υπερκείμενο αφαιρείται και το ίζημα μεταφέρεται σε γυάλινη πλάκα, καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται μικροσκοπικά υπό χαμηλή μεγέθυνση.

Για διαφορική διάγνωσηνηματώδεις προνύμφες, πρέπει να χρησιμοποιήσετε τα δεδομένα στον Πίνακα 3.

Πίνακας 3

ΔΙΑΦΟΡΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΗ ΦΙΛΑΡΙΟΕΙΔΩΝ ΠΡΟΝΥΜΦΩΝ A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, TRICHOStrONGYLUS SP.

Προνύμφες	Διαστάσεις	Χαρακτηριστικά σημάδια
A. duodenale	Μήκος σώματος περίπου 660 μm, μήκος θήκης - 720 nm	Η ραβδώσεις του καλύμματος είναι λιγότερο έντονη, η στοματική προεξοχή είναι λιγότερο αισθητή, το πρόσθιο άκρο του σώματος (αλλά όχι το καπάκι) είναι αμβλύ, η διάμετρος του εντερικού σωλήνα είναι μικρότερη από τον οισοφαγικό βολβό, το ουραίο άκρο είναι αμβλύ
N. americanus	Μήκος σώματος περίπου 590 μικρά, μήκος θήκης - 660 nm	Το καπάκι είναι αισθητά ραβδωτό, ειδικά στο ουραίο μέρος του σώματος, η στοματική απόφυση φαίνεται σκούρα, το πρόσθιο άκρο του σώματος (αλλά όχι το καπάκι) είναι στρογγυλεμένο σαν στενό άκρο αυγό κότας, το πρόσθιο τμήμα του εντερικού σωλήνα έχει την ίδια διάμετρο με τον οισοφαγικό βολβό, το ουραίο άκρο είναι έντονα μυτερό
S. stercoralis	Μήκος σώματος περίπου 500 μικρά	Η προνύμφη είναι χωρίς θήκη, ο οισοφάγος έχει περίπου το μισό μήκος του σώματος, η ουρά είναι αμβλεία ή διακλαδισμένη
Trichostrongylus sp.	Μήκος σώματος περίπου 750 μm	Ο αυλός του εντέρου δεν είναι ίσιος, αλλά ζιγκ-ζαγκ, το άκρο της ουράς είναι στρογγυλεμένο και έχει σχήμα κουμπιού

7.7.2. Μέθοδοι χρώσης αυγών και προνυμφών ελμινθών

Οι νεκροί ιστοί στις περισσότερες περιπτώσεις αντιλαμβάνονται τα χρώματα πιο γρήγορα από τους ζωντανούς. Αυτά τα χαρακτηριστικά χρησιμοποιούνται στην ελμινθολογία για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών και των προνυμφών ελμινθών. Ωστόσο, σε ορισμένες περιπτώσεις, ορισμένα χρώματα γίνονται καλύτερα αντιληπτά από τους ζωντανούς ιστούς παρά από τους νεκρούς.

Για τη διάκριση μεταξύ ζωντανών και νεκρών αυγών και προνυμφών, χρησιμοποιούνται οι ακόλουθες βαφές και μέθοδοι.

Το μπλε του μεθυλενίου της λευκοβάσης χρησιμοποιείται συχνά για τη χρώση ζωντανών και νεκρών ιστών. Ζωντανό κύτταροή ο ιστός ανάγει το μπλε του μεθυλενίου σε άχρωμη λευκοβάση, ο νεκρός ιστός δεν έχει αυτή την ικανότητα, οπότε αποκτά χρώμα.

Το κριτήριο για την κατάσταση ενός αυγού είναι ο χρωματισμός του εμβρύου, αλλά όχι το κέλυφος. Αυτή η ικανότητα συνδέεται με τις συνθήκες κάτω από τις οποίες πεθαίνει το αυγό. Σε περιπτώσεις που η ινώδης μεμβράνη σε ένα νεκρό ωάριο δεν χάνει τις ημιπερατές της ιδιότητες, δεν θα αφήσει τις χρωστικές να περάσουν και επομένως το νεκρό έμβρυο δεν θα λερωθεί. Ένα έγχρωμο έμβρυο δείχνει πάντα το θάνατο του αυγού.

Για να χρωματίσετε τα αυγά των στρογγυλών σκουληκιών, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μπλε του μεθυλενίου σε διάλυμα γαλακτικού οξέος με καυστικό αλκάλιο (0,05 g μπλε του μεθυλενίου, 0,5 g υδροξειδίου του νατρίου, 15 ml γαλακτικού οξέος). Τα ζωντανά αυγά δεν αντιλαμβάνονται το χρώμα. είναι ζωγραφισμένα Μπλε χρώμαέμβρυα νεκρών ωαρίων. Η χρώση των προνυμφών στρογγυλών σκουληκιών με ένα βασικό διάλυμα μπλε χρώματος μπριγιαντκρεσυλίου σε συγκέντρωση 1:10000 πραγματοποιείται ως εξής: μια σταγόνα υγρού με αυγά στρογγυλών σκουληκιών και μια σταγόνα του βασικού διαλύματος βαφής εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα. Το παρασκεύασμα καλύπτεται με καλυπτρίδα, η οποία πιέζεται σφιχτά στην αντικειμενοφόρο πλάκα ενώ χτυπά ελαφρά με μια βελόνα ανατομής. Ο αριθμός των αναδυόμενων προνυμφών και ο βαθμός χρώσης τους παρατηρούνται με μικροσκόπιο. μετά από την οποία το ίδιο φάρμακο εξετάζεται ξανά μετά από 2 - 3 ώρες. Μόνο μη παραμορφωμένες προνύμφες που δεν έχουν χρωματιστεί για 2 ώρες θεωρούνται ζωντανές. Οι νεκρές προνύμφες είτε δεν αναδύονται από τα αυγά, είτε χρωματίζονται όταν σπάσει το κέλυφος (μερικώς ή πλήρως).

Κατά τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών στρογγυλών σκουληκιών πτηνών, είναι δυνατό να λεκιαστούν τα παρασκευάσματα με 5% διάλυμα αλκοόλης Yoda. Όταν εφαρμόζεται στο παρασκεύασμα, τα μικρόβια των νεκρών αυγών Ascaridia εμφανίζονται μέσα σε 1 - 3 δευτερόλεπτα. είναι βαμμένα πορτοκαλί.

Τα νεκρά αυγά οπίσθορχης και οι ογκόσφαιρες ταινίας βοοειδών χρωματίζονται με ένα διάλυμα κυανού τολουιδίνης (1:1000) και οι νεκρές ογκόσφαιρες ταινίας βοοειδών με διάλυμα λαμπρό μπλε κρεζυλίου (1:10000). Ταυτόχρονα, τα έμβρυα και το κέλυφος τόσο των νεκρών όσο και των ζωντανών αυγών αποκτούν χρώμα. Επομένως, μετά τη χρώση, τα αυγά και οι ογκόσφαιρες πλένονται καθαρό νερόκαι επιπλέον τα βάφουμε με σαφρανίνη (αραιωμένο 1:10000 σε αλκοόλη 10 °C). Το αλκοόλ αφαιρεί το χρώμα από τα κοχύλια και η σαφρανίνη το κάνει κόκκινο. Ως αποτέλεσμα, τα ζωντανά αυγά γίνονται κόκκινα. Τα αυγά με νεκρά έμβρυα γίνονται μπλε, αλλά το κέλυφος παραμένει κόκκινο. Τα νεκρά έμβρυα βοοειδών ταινιών ογκόσφαιρων γρήγορα, μέσα σε λίγα λεπτά, γίνονται έντονο κόκκινο ή ροζ χρώμασαφρανίνη ή blue brilliant cresyl blue σε αραίωση 1:4000, ή indigo carmine σε αραίωση 1:1000 - 1:2000. Τα ζωντανά έμβρυα δεν αλλάζουν υπό την επίδραση αυτών των χρωμάτων ακόμη και μετά από 2 - 7 ώρες.

Για να προσδιορίσετε τη βιωσιμότητα των αυγών της ταινίας νάνου, συνιστάται η χρήση των ακόλουθων χρωμάτων:

1. Brilliantcreasyl blue (1:8000) - μετά από 1 ώρα, η ογκόσφαιρα των νεκρών αυγών αποκτά ιδιαίτερα έντονο χρώμα, το οποίο ξεχωρίζει έντονα στο χλωμό ή άχρωμο φόντο του υπόλοιπου αυγού.

2. Σαφρανίνη (1:8000 όταν εκτίθεται για 2 ώρες και 1:5000 για 3 - 5 ώρες).

3. Διάλυμα 50% πυρογαλικού οξέος σε αραίωση 1:2 ​​- όταν εκτίθεται για 1 ώρα σε θερμοκρασία 29 - 30 ° C (όσο χαμηλότερη είναι η θερμοκρασία, τόσο μεγαλύτερη είναι η διαδικασία βαφής).

7.7.3. Μέθοδος φωταύγειας για τη μελέτη αυγών και προνυμφών ελμινθών

Το μικροσκόπιο φθορισμού καθιστά δυνατή τη διάκριση μεταξύ ζωντανών και νεκρών αντικειμένων χωρίς να καταστρέφεται το αυγό. Δεν χρησιμοποιείται για φθορισμό υπεριώδεις ακτίνεςκαι το μπλε-ιώδες τμήμα του ορατού φωτός, με συμβατικό μικροσκόπιο και γυάλινες πλάκες. προστέθηκε στο φωτιστικό OI-18 ειδικό σετέγχρωμα φίλτρα.

Ζωντανά και νεκρά αυγά στρογγυλών σκουληκιών, σκουληκιών καρφιών, νάνων ταινίας, βοοειδών ταινίας, φαρδιών σκουληκιών και άλλων ελμινθών φθορίζουν διαφορετικά. Το φαινόμενο αυτό παρατηρείται τόσο κατά τη διάρκεια της πρωτογενούς φωταύγειας χωρίς τη χρήση χρωστικών όσο και όταν χρωματίζεται με φθοριόχρωμα (ακριδίνη πορτοκαλί, κορυφωσφίνη, πριμουλίνη, αουρολίνη, θειική βερλερίνη, τρυπαφλαβίνη, ριβανόλη, ακριίνη κ.λπ.).

Τα άχρωμα, ζωντανά, μη τεμαχισμένα αυγά στρογγυλών σκουληκιών λάμπουν έντονο πράσινο με κιτρινωπή απόχρωση. στα νεκρά αυγά το κέλυφος ακτινοβολεί πράσινο φωςπολύ πιο φωτεινό από το σκούρο πράσινο εμβρυϊκό μέρος. Στα αυγά στρογγυλών σκουληκιών με προνύμφη, εμφανίζεται μόνο το κέλυφος και στα νεκρά αυγά, τόσο το κέλυφος όσο και η προνύμφη είναι ανοιχτό κίτρινο.

Ζωντανά αυγά καρφιών και νάνων ταινιών χωρίς χρωματισμό και χωρίς τμήματα εκπέμπουν ένα πρασινωπό-κίτρινο φως· το κέλυφος των νεκρών αυγών φωτίζει έντονα στο φόντο μιας σκούρας πράσινης εμβρυϊκής μάζας.

Με δευτερεύουσα φωταύγεια (όταν χρωματίζεται με πορτοκαλί ακριδίνης σε αραίωση 1:10.000 και 1:50.000 από 30 λεπτά έως 2 ώρες), το κέλυφος των ζωντανών και νεκρών νηματωδών, τρεματωδών και κεστωδών φωτίζει διαφορετικά.

Τα κελύφη των ζωντανών και των νεκρών αυγών στρογγυλών σκουληκιών, τοξόκαρας, σκουλήκια καρφίτσας, νάνων ταινίας, ταινίας αρουραίων, ταινίας ταύρου και ταινίας έχουν χρώμα πορτοκαλοκόκκινο. Τα έμβρυα ζωντανών αυγών στρογγυλών σκουληκιών, toxascaris, ταινίας αρουραίου, πλατιών σκώληκες και ογκόσφαιρων βοοειδών ταινίας φθορίζουν θαμπό σκούρο πράσινο ή γκρι-πράσινο χρώμα. Τα νεκρά εμβρυϊκά αυγά αυτών των ελμινθών εκπέμπουν ένα «φλεγόμενο» πορτοκαλοκόκκινο χρώμα. Οι ζωντανές προνύμφες του pinworm και της toxocara (ελεύθερα τα κελύφη των αυγών) εκπέμπουν ένα θαμπό γκριζοπράσινο φως· όταν πεθαίνουν, το χρώμα αλλάζει από το άκρο του κεφαλιού σε ένα «φλεγόμενο» ανοιχτό πράσινο, μετά σε κίτρινο, πορτοκαλί και τέλος έντονο πορτοκαλί.

Όταν χρωματίζονται με φθορόχρωμα - coryphosphylum, primulin, νεκρά αυγά στρογγυλών σκουληκιών και whipworms παρουσιάζουν μια λάμψη από λιλά-κίτρινο έως χαλκό-κόκκινο. Τα βιώσιμα αυγά δεν φωτίζουν, αλλά είναι χρωματισμένα σκούρο πράσινο χρώμα.

Τα ζωντανά αυγά των τρεματωδών (paragonimus και clonorchis) δεν φωτίζουν όταν χρωματίζονται με πορτοκαλί ακριδίνης, αλλά τα νεκρά αυγά παράγουν ένα κιτρινοπράσινο χρώμα.

Η μέθοδος φωταύγειας μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των προνυμφών ελμινθών. Έτσι, οι προνύμφες του στρογγυλικού και του rhabditatus φθοριοποιούνται με ένα διάλυμα πορτοκαλί ακριδίνης (1:2000) λάμπουν: ζωντανές - πράσινες (με απόχρωση), νεκρές - με έντονο πορτοκαλί φως.

Τα ζωντανά miracidia που αναδύονται από το κέλυφος εκπέμπουν ένα αμυδρό γαλαζωπό φως με μια ελάχιστα αισθητή ανοιχτό κίτρινη στεφάνη από βλεφαρίδες, αλλά 10 - 15 λεπτά μετά το θάνατο εμφανίζονται με ένα έντονο "φλεγόμενο" ανοιχτό πράσινο και στη συνέχεια πορτοκαλοκόκκινο φως.

7.7.4. Μέθοδος βιολογικού δείγματος

Για παράδειγμα, για να προσδιορίσετε τη βιωσιμότητα των αυγών των ασκαριδών (σκουλήκι χοίρου, ανθρώπινος στρογγυλός σκώληκας, Toxocara, Toxascaris κ.λπ.) ανά ζώο (ινδικά χοιρίδια, ποντίκια) χρειάζεστε τουλάχιστον 100 - 300 αυγά με ανεπτυγμένες προνύμφες. Τα αυγά Ascaris σε ένα ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου διοχετεύονται με πιπέτα μέσω του στόματος ενός ποντικιού ή ενός ινδικού χοιριδίου. Μετά από 6-7 ημέρες, το ζώο σφάζεται, το συκώτι και οι πνεύμονές του ανοίγονται και εξετάζονται χωριστά για την παρουσία προνυμφών ασκαριδικού. Για να γίνει αυτό, το συκώτι και οι πνεύμονες κόβονται σε μικρά κομμάτια με ψαλίδι και εξετάζονται με τη μέθοδο Berman ή Supryaga (ενότητα 6.1.2).

Εάν τα ζώα είχαν μολυνθεί με ζωντανά επεμβατικά αυγά, τότε μετά την αυτοψία, μεταναστευτικές προνύμφες ασκαριδών βρίσκονται στο ήπαρ και τους πνεύμονες.

Σε περίπτωση μόλυνσης, τα αυγά Fasciola στα κόπρανα των εργαστηριακών ζώων μπορούν να ανιχνευθούν σε κουνέλια μετά από 2 μήνες, σε ινδικά χοιρίδια- μετά από 50 ημέρες, σε ποντίκια - μετά από 35 - 40 ημέρες.

Για να λάβετε πιο γρήγορα μια απάντηση, τα πειραματόζωα ανοίγουν μετά από 20 - 30 ημέρες και το ήπαρ εξετάζεται για την παρουσία νεαρών φασόλιων.

Για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των αυγών της ταινίας νάνου, συνιστάται επίσης να τα ταΐζετε σε λευκά ποντίκια που δεν είχαν μολυνθεί προηγουμένως, ακολουθούμενο από άνοιγμα των ζώων μετά από 92-96 ώρες και αναγνώριση κυστικεροειδών στις εντερικές λάχνες ή κεστόδων στον εντερικό αυλό.

Για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών της οπίσθορχης, συνιστάται μια μέθοδος (German S.M., Baer S.A., 1984), που βασίζεται στη φυσικοχημική ενεργοποίηση του αδένα εκκόλαψης miracidium και στη διέγερση κινητική δραστηριότηταπρονύμφες, που οδηγεί στο άνοιγμα του πώματος του αυγού και στην ενεργό απελευθέρωση του miracidium υπό πειραματικές συνθήκες.

Το εναιώρημα των αυγών οπίσθορχης σε νερό προψύχεται στους 10 - 12 °C (όλες οι επόμενες εργασίες πραγματοποιούνται σε θερμοκρασία δωματίου 19 - 20 °C). 1 σταγόνα εναιωρήματος που περιέχει 100 - 150 αυγά προστίθεται σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης. Ο δοκιμαστικός σωλήνας τοποθετείται σε βάση για 5 - 10 λεπτά. Σε αυτό το διάστημα, όλα τα αυγά καταφέρνουν να βυθιστούν στον πάτο. Στη συνέχεια, η περίσσεια νερού αναρροφάται προσεκτικά με μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού και προστίθενται 2 σταγόνες ειδικού μέσου στον δοκιμαστικό σωλήνα. Το μέσο παρασκευάζεται σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl 0,005 Μ. ένα διάλυμα αιθανόλης 12 - 13% και μια χρωστική (φουξίνη, σαφρανίνη, ηωσίνη, μπλε του μεθυλενίου, κ.λπ.) προστίθενται στο ρυθμιστικό διάλυμα. Ο δοκιμαστικός σωλήνας ανακινείται, το περιεχόμενό του μεταφέρεται με πιπέτα σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα και αφήνεται για 10 λεπτά, ανακινώντας ελαφρά. Στη συνέχεια, προσθέστε 2 σταγόνες από το καθορισμένο μέσο. Το παρασκεύασμα είναι έτοιμο για μικροσκόπηση κάτω από ένα συμβατικό μικροσκόπιο φωτός σε μεγέθυνση 20x.

Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, το καπάκι των βιώσιμων προνυμφών ανοίγει και το miracidium εξέρχεται ενεργά στο καθορισμένο περιβάλλον. Χάρη στην παρουσία αιθανόλης σε αυτό, ακινητοποιούνται μετά από 2 - 5 λεπτά και μετά βάφονται με βαφή. Μπορούν εύκολα να εντοπιστούν και να μετρηθούν με μικροσκόπιο.