Аналіз на сифіліс ІФА – розшифровка аналізу. Норма та відхилення

У зв'язку з розвитком клітинних технологій, молекулярної біології, генетики, фізики, хімії та інших високотехнологічних дисциплін у повсякденну практику впроваджуються нові високоточні і високотехнологічні методи. Дані міждисциплінарні тенденції торкаються і області медичних знань, і суміжні галузі біологічних, біохімічних проблем. За останні десять років набув широкого поширення та впровадження у масову практику метод клінічної лабораторної діагностики під назвою імуноферментний аналіз.

Взагалі технології імунологічних ферментативних і радіологічних реакцій широко використовувалися у типуванні клітин, культур клітин, різних тканин початку 80-х XX століття. Однак ці методи були дуже трудомісткими, не уніфікованими, не стандартизованими, що виключало їх використання в лікувально-діагностичних цілях у масовому порядку. Такими методами користувалися лише вузькі, наукомісткі та високоспеціалізовані лабораторії.

Однак з розвитком техніки, мікротехніки, виробництва різних біополімерних матеріалів стало можливим проводити готові набори імуноферментної діагностики, якими матимуть змогу користуватися лабораторії лікувально-профілактичних установ широкого профілю. ІФА широко використовується для діагностики всіляких інфекцій (хламідіоз, сифіліс, цитомегаловірус, токсоплазмоз, герпес і т.д.), як гострих, так і хронічних, а також прихованих форм, які протікають без клінічних симптомів. Також цей метод застосовують для контролю над хронікою захворюваннями. Постараймося розібратися, що це за метод, і які принципи лежать у його основі?

Компоненти імуноферментного аналізу – імунна реакція та ферментативна реакція

Імуноферментний аналіз, як видно з назви, складається з двох різних компонентів – імунної реакції та ферментативної реакції. Імунна реакція здійснює зв'язування біологічних молекул, елементів клітини або мікроорганізму, які власне і намагаються виявити, а ферментна реакція дозволяє побачити та виміряти результат імунологічної реакції. Тобто імунна реакція – це частина комплексної методики, яка власне виявляє потрібний мікроб. А ферментна реакція – це частина комплексної методики, яка дозволяє перевести результат імунної реакції у форму, видиму оком, і доступну для вимірювання рутинними хімічними методиками. Виходячи з такої структури методу імуноферментного аналізу, розберемо обидві його частини окремо.

Імунна реакція, що це? Що таке антитіло, антиген?

Що таке імунна реакція? Що таке антиген?
Насамперед розберемо, що таке імунні реакції. Імунні реакції- Це специфічні реакції зв'язування антигену з антитілом з утворенням імунного комплексу. Що це означає? На поверхні кожної клітини будь-якого організму є спеціальні структури, які називаються антигени. Антигени в цілому – це молекули, які несуть інформацію про клітину (подібно до інформації на бейджі у людини, де вказуються основні дані цієї людини).

Індивідуальні та видові антигени – що це? Навіщо ці антигени потрібні?

Є антигени індивідуальні, тобто властиві лише цьому конкретному організму. Ці індивідуальні антигени різні у всіх людей є схожі один на одного, але все одно відрізняються. Двох однакових копій індивідуальних антигенів у природі не існує!

Другий основний тип антигенів – це видові антигени, тобто властиві якомусь конкретному виду живих істот. Наприклад, у людини присутній свій видовий антиген, загальний всім людей, у мишей є свій мишачий видовий антиген тощо. На поверхні кожної клітини обов'язково присутні видовий та індивідуальний антиген.

Видовий антиген використовують клітини імунної системи для розпізнавання «свій – чужий».

Як відбувається впізнавання антигену?

Імунна клітина зв'язується з підозрілою клітиною та проводить упізнання саме за індивідуальним антигеном. У пам'яті імунної клітини «записано», як виглядає «свій антиген». Отже, якщо антиген підозрілої клітини збігається з описом «свій антиген», отже, ця клітина власного організму і небезпеки не становить. Тоді імунна клітина «відв'язується» і йде. А якщо антиген не збігається з описом «свій», тоді імунна клітина ідентифікує цю клітину як «чужий», а отже, потенційно небезпечний для всього організму. І тут імунна клітина не «відв'язується», а починає знищувати небезпечний об'єкт. Точність такого імунологічного впізнавання вражає 99,97%. Помилок практично не буває!

Що таке антитіло, імунний комплекс?
А що є антитіло?

Антитіло – це особлива молекула, розташована лежить на поверхні імунної клітини. Саме антитіло зв'язується з антигенами підозрілої клітини. Далі антитіло передає інформацію всередину клітини, де відбувається впізнання, і отримує зворотний сигнал двох видів "свій" або "чужий". При сигналі "свій" антитіло руйнує зв'язок з антигеном і відпускає клітину.

Що таке імунний комплекс?
За сигналу «чужий» ситуація розгортається інакше. Антитіло не розриває зв'язок із антигеном, а навпаки, посилаючи специфічні сигнали, викликає «підкріплення». Біологічно це означає, що інші антитіла, що знаходяться в іншій частині клітини, починають переміщатися до ділянки, звідки йде сигнал небезпеки, а також утворюють зв'язок між собою та спійманим антигеном. Зрештою, антиген виявляється, оточений з усіх боків і міцно прив'язаний. Такий комплекс антиген + антитіло називається імунний комплекс. З цього моменту починається утилізація антигену. Але зараз подробиці процесу нейтралізації антигену нас не цікавлять.

Види антитіл (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Антитіла – це білкові структури, які, відповідно, мають хімічну назву, яка використовується як синонім слова антитіла. Отже, антитіла = імуноглобуліни.

Існують 5 типів імуноглобулінів (Ig), які пов'язуються з різними видами антигенів у різних місцях людського організму (наприклад, на шкірі, на слизових, у крові тощо). Тобто антитіла мають розподіл праці. Ці імуноглобуліни називаються літерами латинського алфавіту – A, M, G, D, E та позначаються таким чином – IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

У діагностиці використовують лише один вид антитіл, який найбільш специфічний щодо мікроба, що визначається. Тобто зв'язування даного виду антитіл із визначальним антигеном відбувається завжди. Найчастіше застосовуються IgG та IgM.

Саме цей принцип імунної реакції (унікальна точність і специфічність впізнавання обумовленого біологічного об'єкта) лежить в основі імуноферментного аналізу. У силу високої точності антитіл у впізнанні антигенів, точність всього методу імуноферментного аналізу виявляється також найвищою.

Ферментативна реакція

Яка реакція – ферментативна? Що таке спорідненість, субстрат та продукт реакції?
Перейдемо до розгляду ферментативної реакції у роботі методу імуноферментного аналізу.

Що таке ферментативна реакція?

Ферментативна реакція - це хімічна реакція, при якій одна речовина під дією ферменту перетворюється на іншу. Речовина, на яку діє фермент, називається субстратом. А речовина, яка виходить внаслідок дії ферменту, називається продуктом реакції. Причому особливість ферментативної реакції така, що певний фермент діє лише певний субстрат. Така властивість ферменту впізнавати «свій» субстрат називається спорідненістю.

Таким чином, кожен фермент проводить тільки одну, специфічну йому реакцію. Ферментів у біологічному світі відомо безліч, так само як і ферментативних реакцій. В імуноферментній діагностиці використовується лише кілька ферментативних реакцій – не більше 10. При цьому вибирали такі ферментативні реакції, продуктом яких є забарвлені речовини. Чому ж продукти ферментативної реакції мають бути забарвленими? Тому що для обчислення концентрації речовини за пофарбованим розчином існує простий хімічний метод. колориметрія.

Метод колориметрії – суть та принцип

Колориметріязастосовує вимірювання щільності фарбування розчину, а за густиною фарбування обчислюють концентрацію речовини. При цьому спеціальний прилад – колориметр вимірює щільність фарбування розчину. У колориметрії можливі два варіанти залежності щільності забарвлення від концентрації речовини - це прямо пропорційна залежність або обернено пропорційна залежність. При прямо пропорційній залежності, чим вища концентрація речовини, тим інтенсивніша щільність забарвлення розчину. При обернено пропорційній залежності, чим вище концентрація речовини, тим нижче щільність забарвлення розчину. Технічно це відбувається так: береться кілька розчинів із відомою концентрацією речовини, вимірюється щільність цих розчинів, будується графік залежності концентрації від щільності забарвлення ( калібрувальний графік).

Далі вимірюють щільність забарвлення розчину, концентрацію якого з'ясовують, і за калібрувальним графіком знаходять значення концентрації, що відповідає рівню виміряної щільності забарвлення розчину. відбувається автоматично.

В імуноферментному аналізі найчастіше застосовуються такі ферменти: пероксидаза, лужна фосфатаза, авідін.

Як же поєднуються імунологічна та ферментативна реакція в імуноферментному аналізі? Зараз ми перейдемо до розгляду власне імуноферментного аналізу. Які етапи він включає та що відбувається при протіканні цих реакцій? Імуноферментний аналіз буває прямий та непрямий.

Прямий імуноферментний аналіз – етапи проведення

У прямому імуноферментному аналізі використовують антитіла до антигену, що виявляється, з'єднані зі специфічною міткою. Ця специфічна мітка є субстрат ферментативної реакції.

Прикріплення антигенів до поверхні лунки та з'єднання антигену з антитілом

Як відбувається прямий імуноферментний аналіз? Береться біологічний матеріал (кров, зіскрібки зі слизових, мазки) і поміщається у спеціальні лунки. Біологічний матеріал залишають у лунках на 15-30 хвилин, щоб антигени могли приклеїтись до поверхні лунок. Далі в ці лунки додають антитіла до антигену, що виявляється. Це означає, що виявляючи антигени, наприклад сифілісу, додаються антитіла проти антигенів сифілісу. Ці антитіла отримують промисловим способом, а лабораторії купують вже готові набори. Дану суміш досліджуваного матеріалу та антитіл залишають на деякий час (від 30 хвилин до 4-5 годин), щоб антитіла змогли знайти і зв'язатися зі «своїм» антигеном. пробі антигенів, тим більше антитіл зв'яжеться з ними.

Видалення «зайвих» антитіл

Як було зазначено, антитіла до того ж пов'язані зі специфічною міткою. Оскільки антитіла додаються надлишком, то не всі вони зв'яжуться з антигенами, а якщо антигену взагалі немає в пробі, то, відповідно, жодне антитіло не зв'яжеться з шуканим антигеном. Щоб прибрати «зайві» антитіла, вміст з лунок просто виливають. У результаті всі «зайві» антитіла забираються, а залишаються ті, які зв'язалися з антигенами, оскільки антигени «приклеєні» до поверхні лунок. Лунки кілька разів обполіскують спеціальним розчином, який дозволяє вимити всі зайві антитіла.

Далі починається другий етап – ферментативна реакція. У промиті лунки додають розчин із ферментом і залишають на 30-60 хвилин. Даний фермент має спорідненість до речовини (специфічної мітки), з якою пов'язані антитіла. Фермент проводить реакцію, внаслідок якої ця специфічна мітка (субстрат) перетворюється на забарвлену речовину (продукт). Потім методом колориметрії знаходять концентрацію цієї забарвленої речовини. Оскільки ця специфічна мітка пов'язана з антитілами, значить, концентрація забарвленого продукту реакції дорівнює концентрації антитіл. А концентрація антитіл дорівнює концентрації антигенів. Таким чином, в результаті проведеного аналізу ми отримуємо відповідь, яка концентрація мікроба або гормону, що виявляється.

Саме так відбувається прямий імуноферментний аналіз. Однак сьогодні частіше використовують непрямий імуноферментний аналіз, оскільки чутливість та точність непрямого вища, ніж прямого. Отже, перейдемо до непрямого імуноферментного аналізу.

Непрямий імуноферментний аналіз – етапи проведення

У непрямому імуноферментному аналізі два етапи. При проведенні першого етапу використовують немічені антитіла до антигенів, а в другому етапі застосовують мічені антитіла до перших немічених антитіл. Тобто, виходить не пряме зв'язування антитіла з антигеном, а подвійний контроль: зв'язування антитіл з антигеном, після чого зв'язування других антитіл з комплексом антитіло + антиген. Як правило, антитіла для першого етапу – мишачі, а для другого – козячі.

Фіксація антигенів на поверхні лунки та зв'язування антигену з неміченим антитілом
Як і прямого імуноферментного аналізу проводиться забір біологічного матеріалу – кров, зіскрібки, мазки. Досліджуваний біологічний матеріал вносять у лунки та залишають на 15-30 хвилин для приклеювання антигенів до поверхні лунок. Потім лунки вносять немічені антитіла до антигенів і залишають на проміжок часу (1-5 годин), щоб антитіла зв'язалися зі «своїми» антигенами і утворили імунний комплекс ( перший етап). Після чого видаляють «зайві» антитіла, що не зв'язалися, шляхом виливання вмісту лунок. Виробляють промивання спеціальним розчином для повного видалення всіх антитіл, що не зв'язалися.

Зв'язування міченого антитіла із комплексом антиген + немічене антитіло
Після чого беруть другі антитіла - мічені, додають у лунки і знову залишають на деякий час - 15-30 хвилин ( другий етап). За цей час мічені антитіла зв'язуються з першими – не міченими та утворюють комплекс – антитіло + антитіло + антиген. Однак і мічені, і не мічені антитіла вносяться в лунки надміру. Тому потрібно знову видалити "зайві", вже мічені антитіла, які не зв'язалися з неміченими антитілами. Для цього повторюють процедуру виливання вмісту лунок та промивання спеціальним розчином.

Ферментативна реакція – утворення забарвленої сполуки
Після цього вносять фермент, який здійснює реакцію перетворення «мітки» на забарвлену речовину. Забарвлення розвивається протягом 5-30 хвилин. Потім проводять колориметрію та обчислюють концентрацію забарвленої речовини. Оскільки концентрація забарвленої речовини дорівнює концентрації мічених антитіл, а концентрація мічених дорівнює концентрації немічених антитіл, яка, у свою чергу, дорівнює концентрації антигену. Таким чином, отримуємо концентрацію антигену, що виявляється.
Такий подвійний контроль у вигляді використання двох видів антитіл дозволив підвищити чутливість та специфічність методу імуноферментного аналізу. Незважаючи на подовження часу проведення аналізу та включення додаткових етапів, ці втрати компенсуються точністю результату. Саме тому нині переважна більшість методик імуноферментного аналізу – це непрямий імуноферментний аналіз.

Які захворювання виявляють методом імуноферментної діагностики?

Перейдемо до розгляду того, які захворювання та які біологічно активні речовини виявляються методом імуноферментного аналізу. Речовини, що виявляються методом імуноферментного аналізу, представлені у таблиці.

Гормони та маркери захворювань щитовидної залози	Тиреопероксидаза (ТПО)
	Тиреоглобулін (ТГ)
	Тиреотропний гормон (ТТГ)
	Тироксин (Т4)
	Трийодтиронін (Т3)
	Вільний тироксин (Т4)
	Вільний трийодтиронін (Т3)
Діагностика репродуктивної функції	Лютеїнізуючий гормон (ЛГ)
	Фолікулостимулюючий гормон (ФСГ)
	Пролактін
	Прогестерон
	Естрадіол
	Тестостерон
	Кортизол
	Стероїд зв'язуючий глобулін (ССГ)
	Альфафетопротеїн (АФП)
Онкомаркери	Хоріонічний гонадотропін (ХГ)
	Простатспецифічний антиген (ПСА)
	СА – 125
	СА – 19.9
	CYFRA – 21-1
	М - 12 (СА - 15.3)
	MUC – 1 (M – 22)
	MUC1 (M – 20)
	Альвеомуцин
	К – ланцюг
	L – ланцюг
	Фактор некрозу пухлин (ФНПα)
	γ – інтерферон
	Раково-ембріональний антиген (РЕА)
Діагностика інфекційних захворювань

ІФА - це сучасне лабораторне дослідження, в ході якого ведеться пошук специфічних антитіл у крові (або антигенів) до конкретних захворювань з метою виявлення не тільки етіології, а й стадії хвороби.

1. пошук специфічних антитіл до будь-якого інфекційного захворювання;
2. пошук антигенів будь-яких інфекційних захворювань;
3. дослідження гормонального статусу пацієнта;
4. обстеження щодо наявності аутоімунних захворювань.

Як і в будь-якого методу лабораторної діагностики ІФА має свої переваги та недоліки. До переваг методу належать:

1. висока специфічність та чутливість методу (понад 90%);
2. можливість визначення захворювання та відстеження динаміки процесу, тобто порівняння кількості антитіл у різних часових проміжках;
3. доступність та швидкість даного дослідження;
4. не інвазивний спосіб забору матеріалу не дослідження;

Недоліком методу є той факт, що в ході аналізу вдається виявити не самого збудника захворювання, а імунну відповідь на нього (антитіла).

Суть методу ІФА

Вирізняють кілька різновидів ІФА: прямий, непрямий, метод блокування, конкурентний. Однак на практиці найчастіше використовують гетерогенний твердофазний імунний аналіз або ELISA.

Основу імуноферментного аналізу становить імунна реакція антигену та антитіла з утворенням імунного комплексу, внаслідок чого відбувається зміна ферментативної активності специфічних міток на поверхні антитіл.

По суті, цей процес можна поділити на кілька етапів:

1. на поверхні лунок планшета тест-системи знаходиться очищений антиген певного збудника. При додаванні сироватки крові тварини відбувається специфічна реакція між цим антигеном та шуканим антитілом;
2. далі, в лунку додається спеціальний хромоген (кон'югат, мічений пероксидазою). Відбувається ферментативна реакція, результатом якої є утворення забарвленої речовини у лунці планшета. Інтенсивність забарвлення його залежить від кількості імуноглобулінів, що містяться в сироватці тварини (антитіл);
3. далі відбувається оцінка результату. За допомогою багатоканального спектрофотометра відбувається порівняння оптичної щільності досліджуваного матеріалу з оптичною щільністю контрольних проб та математична обробка результатів. Кількість антитіл у пацієнта залежить від висоти оптичної щільності даної лунки.

Потрібно пам'ятати: для кожної тест-системи розробляються індивідуальні показники для обліку результатів, показники норми та патології (референтні значення). Це необхідно враховувати в оцінці результатів кожного конкретного дослідження.

Некоректно інтерпретувати результати однієї лабораторії щодо «референтних значень» іншої лабораторії. Також некоректно порівнювати результати різних лабораторій між собою.

Оцінюючи результатів на конкретні інфекції має значення клас виявлених антитіл та його кількість. Від цього залежить як питання етіології інфекції, а й передбачувана стадія захворювання (гостра, хронічна), і навіть наявність активної інфекції (гострої чи загострення хронічної) на даний момент обстеження.

Якими є приблизні терміни появи антитіл?

Найранішими антитілами є IgM. Виявити їх можна за 1-3 тижні після можливого інфікування, що характеризує гостру фазу інфекційного процесу. Друга ситуація появи антитіл IgM – загострення хронічного процесу. IgM циркулюють в середньому близько 3 місяців, потім їх кількість поступово зникає. Однак у деяких пацієнтів слідові кількості IgM можуть виявлятися протягом 1-2 років з моменту інфікування.

З 4-го тижня після інфікування починають з'являтися антитіла IgG. При більшості інфекцій титр їх поступово збільшується з максимумом у різні терміни (в середньому через 1,5-2 місяці), далі титр залишається на невисокому рівні і вказує на імунітет. За деяких захворювань рівень IgG не буває високим.

Варіанти виявлення антитіл

• Ізольоване виявлення антитіл IgM передбачає наявність первинного інфікування.
• Одночасне виявлення у крові IgM та IgG характерне для первинного інфікування у попередні 2-3 місяці, а також при загостренні хронічного захворювання.
• Виявлення ізольовано IgG може вказувати як на імунітет до захворювання, так і на хронічну інфекцію. У другій ситуації має значення кількість антитіл (титр), і зміна цього титру в динаміці. Зазвичай дослідження проводять з інтервалом 2-4-6 тижнів.

Аналіз ІФА є сучасною методикою лабораторної діагностики значної кількості різноманітних захворювань. Абревіатура розшифровується як імуноферментний аналіз. Суть методики полягає у визначенні титру (активності) антитіл.

Методика ІФА на сьогоднішній день набирає значної популярності. Вона застосовується у клінічній медицині для діагностики різної патології, а також в експериментальних дослідженнях, які потребують точного визначення концентрації різних сполук у досліджуваних середовищах.

Принцип методики ІФА

Імуноферментний аналіз є імунологічною реакцією. Вона заснована на додаванні специфічних антитіл
або антигенів у досліджуване середовище (найчастіше досліджувана кров) з подальшим ферментативним визначенням концентрації комплексів, що утворилися антиген-антитіло. По концентрації комплексу можна будувати висновки про рівні чи активності обумовленого сполуки у досліджуваному середовищі.

Визначення концентрації комплексів антиген-антитіло зазвичай здійснюється за допомогою спеціальної апаратури хроматографічним методом.

Показання до проведення

ІФА аналіз проводиться за різними показаннями, основними з них у клінічній медицині є:

• Діагностика інфекційної патології з переважно статевим шляхом передачі (ІПСШ), до яких належать хламідіоз, мікоплазмоз, уреаплазмоз, трихомоніаз, при цьому виявляються специфічні антитіла до збудника інфекції.
• Діагностика інфекційних захворювань різної локалізації для визначення стадії патологічного процесу, насамперед у процесі діагностики парентеральних вірусних гепатитів та ВІЛ.
• Визначення концентрації гормонів для діагностики різної патології органів ендокринної системи (заліза внутрішньої секреції).
• Визначення різних сполук для діагностики причин інтоксикації організму при отруєннях, укусах комах або змій.

За цих медичних показань виконується аналіз крові ІФА. Також ця методика активно застосовується в експериментальній медицині під час проведення різних клінічних досліджень під час розробки нових лікарських засобів, вакцин для імунопрофілактики.

Як проводиться дослідження

Аналіз крові методом ІФА проводиться за умов спеціалізованої лабораторії. Попередньо для його проведення забирається венозна кров, зазвичай з ліктьової вени в об'ємі 5-10 мл, яка потім вирушає до лабораторії. В середньому результат аналізу можна отримати вже наступного дня, що є важливим моментом для якнайшвидшого призначення лікування після встановлення діагнозу захворювання.

Як підготуватися до ІФА

Для отримання достовірних результатів дослідження методом імуноферментного аналізу слід дотримуватись кількох нескладних підготовчих рекомендацій, до яких належать:

• За день до здачі аналізу слід відмовитися від вживання жирних продуктів харчування (м'ясо, копченості) та алкоголю.
• Матеріал для дослідження необхідно здавати вранці натще.
• У день дослідження бажано уникати фізичних та психоемоційних навантажень.
• Перед дослідженням слід постаратися не курити.

Більшість отриманих хибнопозитивних результатів імуноферментного аналізу крові буває внаслідок неправильного виконання підготовчих рекомендацій. Це в більшості випадків пов'язане з вживанням жирних продуктів харчування, які призводять до збільшення концентрації тригліцеридів (жири) в плазмі крові, які знижують специфічність проведеного ІФА.

Розшифровка результатів

Аналіз крові на антитіла за допомогою ІФА має 2 модифікації – якісне та кількісне визначення. При
якісне визначення антитіл результат може бути позитивним (антитіла виявлено, що вказує на можливу наявність патологічного процесу, викликаного збудником інфекції) або негативним (антитіл немає, що свідчить про відсутність інфекційного процесу).

Відсутність антитіл який завжди є стовідсотковим показником відсутності інфекційного процесу. Це з тим, що після зараження антитіла утворюються не відразу, а протягом певного періоду часу (мінімум близько 2-х тижнів). Тому для підтвердження відсутності інфекції проведення ІФА може повторюватись через деякий час.

При кількісному ІФА виконується визначення титру (активності) антитіл та їх класів. У більшості випадків для діагностики інфекційних захворювань проводиться визначення антитіл класу IgG (імуноглобуліни G) та IgM (імуноглобуліни М), які утворюються в організмі через різні проміжки часу після інфікування, тому розшифровка результату аналізу може мати декілька значень:

• Підвищення активності IgМ та відсутність IgG – свідчення недавнього інфікування та гострого перебігу інфекційного процесу.
• Підвищення активності IgМ та IgG – загострення інфекційного процесу при його хронічному перебігу та давньому зараженні.
• Висока активність IgG та відсутність IgМ – хронічний перебіг інфекційного процесу на тлі давнього зараження, після якого пройшло більше півроку (час, необхідний для утворення антитіл класу IgG).

У цілому нині розшифровка результатів ІФА кожному за інфекційного процесу має певні особливості. Точніше визначення наявності інфекційного захворювання, і навіть стадії його перебігу проводить лікар.

ІФА сьогодні є методом вибору діагностики більшості інфекційних захворювань. На підставі результатів такого дослідження лікар має можливість встановити точний діагноз та визначити стадію перебігу патологічного процесу для призначення подальшого адекватного та ефективного лікування.

Діагностичні методики сучасності дають можливість за умов лабораторії виявити те чи інше захворювання з допомогою спеціальних аналізів. До таких варто віднести імуноферментний аналіз крові, завдяки якому можна підтвердити попередньо поставлений діагноз.

Імуноферментний аналіз ІФА є одним з найефективніших і сучасних способів, що дозволяють виявити порушення, пов'язані з імунними та гормональними збоями, а також онкологічні процеси. Під час проведення аналізу в крові можна виявити антитіла, що виробляються за наявності інфекції в організмі. Враховуючи цей нюанс, виявити хворобу можна навіть на ранньому етапі її розвитку.

Що лежить в основі методики

В основі результатів ІФА аналізу лежить отримання хімічних реакцій на ферменти, які є особливими розпізнавальними знаками для розпізнавання антитіл. Отже, під час імунохімічних реакцій антитіла починають взаємодіяти з деякими антигенами. Все це дає підстави стверджувати, що помилкові результати при здачі крові на ІФА є мінімальними.

Дослідження дозволяє визначити кількість імунних клітин, їх властивості, а також наявність необхідних антитіл

Позитивним результат вважається тоді, коли виявляється фарбування розчину. Забарвлення сигналізує у тому, що антигени взаємодіють з антитілом. Якщо нічого подібного не відбувається, результат є негативним.

Імуноферментний аналіз крові (ІФА) проводиться для комплексної оцінки захисних функцій організму. У ході проведення дослідження визначається кількість та властивості імунних клітин, присутність необхідних антитіл. ІФА аналіз крові проводиться для діагностики інфекційних, гематологічних, аутоімунних захворювань, первинних та вторинних імунодефіцитів. Розглянемо, що є аналіз крові методом ІФА, і які показання існують щодо даного дослідження.

Що це таке

Аналіз крові методом ІФА є лабораторним методом, за допомогою якого у пробі крові визначають антитіла чи антигени. Дане дослідження використовується виявлення рівня імуноглобулінів, імунологічних комплексів, гормонів.

Показання до аналізу

Для призначення ІФА аналізу крові існують такі показання:

• діагностика інфекцій, що передаються статевим шляхом – уреаплазма, мікоплазма, хламідіоз, трихомонада, сифіліс;
• діагностування вірусних захворювань - цитомегаловірус, герпес, гепатити, Епштейн-Бар вірус;
• визначення рівня гормонів;
• діагностика онкологічних захворювань;
• визначення імунодефіциту;
• діагностування алергій;
• передопераційне комплексне обстеження перед пересадкою органів;
• оцінка ефективності терапії

Принцип методу

Принцип дії методу імуноферментного аналізу ґрунтується на визначенні в крові специфічних білків-антитіл – імуноглобулінів. Імуноглобуліни виробляються імунною системою людини при проникненні в організм антигенів (чужорідних мікроорганізмів). Такі імунні молекули зв'язуються з безліччю інфекційних збудників в організмі та нейтралізують їх.

Імуноглобуліни мають важливу характеристику – специфічність. Завдяки цьому вони можуть зв'язуватися з певним антигеном, утворюючи комплекс антиген-антитіло. Під час проведення ІФА аналізу крові саме цей комплекс визначають якісно та кількісно.

Розрізняють імуноглобуліни п'яти класів. Але зазвичай визначають три класи – імуноглобуліни A, M, G. Дані антитіла накопичуються в організмі у різний час від моменту інфікування.

• Імуноглобуліни класу М (IgM)з'являються в крові найпершою на п'яту добу від моменту зараження. Вони перебувають у організмі протягом 5–6 тижнів, потім зникають із кровотоку. Антитіла IgM вказують на гострий період захворювання або загострення хвороби за її хронічного перебігу.
• Приблизно через 3-4 тижні від часу зараження в крові з'являються імуноглобуліни. класу G (IgG). Вони можуть існувати в крові людини кілька місяців і навіть років. Згідно з розшифруванням ІФА аналізу крові, якщо у двох пробах крові, взятих послідовно через два тижні, збільшено кількість імуноглобулінів IgG, говорять про поточну інфекцію або реінфекцію – повторне зараження тією ж інфекцією.
• Імуноглобуліни класу А (IgA)можна виявити даним методом дослідження через 2-4 тижні після зараження чи загострення інфекційної хвороби. З них лише 20% циркулює у крові, інші перебувають у секреті слизових оболонок. Антитіла IgA зникають із кровотоку через 2–8 тижнів після знищення інфекційних агентів. Зникнення даних імуноглобулінів означає лікування від інфекції. Якщо після закінчення хвороби визначено присутність у крові антитіл IgA, то захворювання перейшло в хронічну стадію.

Підготовка до аналізу

Для проведення аналізу крові методом ІФА найчастіше використовують кров людини. Але досліджувати також можна вміст склоподібного тіла, спинномозкову рідину, навколоплідні води.

Проба крові для дослідження береться у пацієнта з ліктьової вени. Здавати кров рекомендується натще (з моменту останнього прийому їжі має пройти не менше 12 годин). Необхідно повідомити лікаря, якщо пацієнт приймає лікарські препарати, оскільки деякі можуть змінити результат аналізу. На достовірність результатів дослідження впливає прийом алкоголю та наркотиків.

Розшифровка

У бланку результату даного аналізу вказується позитивний (+) чи негативний (-) результат визначення кожного класу імуноглобулінів.

Розглянемо інтерпретацію можливого розшифрування ІФА аналізу крові.

• Негативний результат IgM, IgG, IgA – відсутність імунітету до інфекції.
• Негативний результат IgM, IgA та позитивний результат IgG – постінфекційний або поствакцинальний імунітет.
• Негативний або позитивний результат IgG, IgA та позитивний результат IgM – гостра інфекція.
• Позитивний результат IgM, IgG, IgA – загострення хронічного інфекційного захворювання.
• Негативний результат IgM та негативний або позитивний результат IgG, IgA – хронічна інфекція.
• Негативний результат IgM не визначаються IgG, IgA – одужання.

Переваги методу

Аналіз крові методом ІФА має багато переваг. Можна виділити основні з них:

• відносно висока точність (чутливість);
• можливість проведення ранньої діагностики;
• можливість відстеження динаміки інфекційного процесу;
• високий рівень уніфікації, що дозволяє проводити масові обстеження;
• невеликий проміжок часу, необхідний отримання результату аналізу;
• зручність у роботі;
• автоматизація всіх етапів аналізу;
• відносно невелика вартість.

Недоліки

Недоліком методу ІФА є те, що іноді він дає хибнонегативні або хибнопозитивні результати. Крім технічних помилок при проведенні дослідження, причиною помилкових результатів може бути ревматоїдний фактор у пацієнта, наявність у нього хронічних хвороб (за яких виробляються антитіла), порушення обміну речовин, прийом деяких лікарських препаратів.

• аскаридоз;
• трихінельоз - аналіз проводять кілька разів, максимальний рівень антитіл визначається на 4-12 тижні після зараження;
• цистицеркоз;
• теніоз;
• фасціолез – антитіла визначаються у гострій стадії захворювання;
• опісторхоз – проводять диференціальну діагностику між хронічною та гострою формою хвороби;
• лямбліоз;
• вісцеральний та шкірний лейшманіоз;
• амебіаз;
• токсоплазмоз.

4.2 4.20 з 5 (5 Голосів)