Çökelme reaksiyon mekanizması reaksiyondan farklıdır. Yağış reaksiyonu (immünolojik yöntem)
Çözünür bir antijenin bir antikorla etkileşiminden ve ardından ince taneli bir çökeltinin (çökelti) oluşmasından oluşur.
Çökeltme reaksiyonu, bilinen bir antikorun eklenmesi veya bilinmeyen bir antikorun belirlenmesi için bilinen bir antijenin kullanılması yoluyla test materyalinde bilinmeyen bir antijenin varlığının belirlenmesini mümkün kılar. Yağış daha da kötüleşiyor tuzların yokluğunda. Optimum yağış pH=7,0-7,4 aralığındadır.
Çöktürme mekanizması aglütinasyon mekanizmasına yakındır. Antijenle reaksiyona giren bağışıklık sisteminin etkisi altında dağılım derecesi azalır. Serumun ve antijenin tamamen şeffaf olması gerekir. Çöktürme işlemi gerçekleştirirken, serumun bir seyreltmesine farklı antijen seyreltmeleri ekleyebilirsiniz veya bunun tersi de geçerlidir.
Antijen bir test tüpünde antikorun üstüne yerleştirilirse çökelme daha iyi kaydedilir. Bu durumda, bir halka şeklinde çökeltinin görünümü gözlenir - halka çökelmesi. Halka çökeltme 2,5-3,5 mm çapında özel tüplerde gerçekleştirilir. Test materyalindeki antijenlerin veya serumdaki farklı antikorların sayısını belirlemek için agar çökeltme reaksiyonu kullanılır: %1 berraklaştırılmış agar, cam slaytların içine veya üzerine dökülür. Antijen ve antikor çözeltileri, agarda açılan, birbirlerine doğru yayılan ve çökelme çizgileri oluşturan farklı kuyucuklara dökülür. Çökelme reaksiyonu teşhiste yaygın olarak kullanılmaktadır (bkz. Ascoli reaksiyonu).
Agarda çökeltme, difteri kültürlerinin toksijenitesini belirlemeyi mümkün kılar.
İÇİNDE adli araştırmaçökeltme, spesifik çökeltici serumlar kullanılarak kan, organ ve doku türlerinin belirlenmesine hizmet eder.
Çökelme, bir antijen (presipitinojen) ve antikor (presipitin) kompleksinin çökelmesi reaksiyonudur. Yağış, hasta veya aşılanmış kişilerin kan serumundaki ve ayrıca aşılanmış hayvanların kanındaki antikorların içeriğini (bkz.) belirlemeyi mümkün kılan immünolojik olaylardan biridir. Standart serum kullanıldığında çökeltme reaksiyonu, farklı kökenlerden çözünebilir antijenleri titre etmek için kullanılabilir (bkz.).
Çökeltme reaksiyonunu ayarlamanın en basit biçiminde, test serumu, bir dizi çoklu seyreltme serisinde sabit miktarda antijen içeren bir dizi test tüpüne katmanlar halinde eklenerek eklenir. 30-60 dakika sonra. oda sıcaklığında inkübasyon, iki sıvının arayüzünde bir bulanıklık halkası oluşur - halka çökelmesi. Antiserumun titresi olarak çökelme reaksiyonu veren minimum serum miktarı alınır. Standart bir antiserumla ters reaksiyonu gerçekleştirerek çeşitli biyolojik sıvılardaki antijenin bağıl konsantrasyonunu tahmin etmek mümkündür.
Antikorların ve antijenlerin yukarıdaki yönteme göre titrasyonunun sonuçları mutlak bir niceliksel ifadeye sahip değildir. Antikor içeriğini ölçmek için Heidelberger, Kabat (M. Heidelberger, E. Kabat) ve diğerleri şunları geliştirdi: nicel yöntem Eşdeğerlik bölgesinin tespitine dayanan çökelme reaksiyonu. Yaşa özgü miktarlarda antijenin sabit hacimlerde antiserumla karıştırılması sırasında, antijen-antikor kompleksinin fazla antijen içindeki çözünürlüğünün artması nedeniyle oluşan çökelti miktarı başlangıçta artar ve daha sonra tekrar azalır. Tüm test tüplerindeki süpernatandaki antikor içeriğini belirlersek, sıranın orta test tüplerinde veya hatta tek test tüpünde süpernatanda antikor bulunmadığı ortaya çıkacaktır; aynı zamanda en büyük çökelti de burada oluşuyor. Eşdeğerlik bölgesinde, reaksiyona giren maddelerin karışımına dahil edilen antijenin tamamı çökeltiye de dahil olduğundan, antijen proteinini çökelti proteini miktarından çıkardıktan sonra, belirli bir test serumu hacmindeki antikor içeriğinin tam değeri elde edilir. . Soğutulmuş tuzlu su çözeltisiyle iyice yıkandıktan sonra çökeltinin protein içeriği nitrojen veya bazı kolorimetrik yöntemlerle belirlenir.
Çökelme reaksiyonunun değeri değerlendirilirken teşhis yöntemi Bağışıklık serumlarının, çökelti özelliklerine sahip olmayan ve dolayısıyla antijen ile etkileşime girdiğinde çökelti oluşturmayan antikorlar içerebileceğini hesaba katmak gerekir. Bunlar öncelikle eksik antikorların yanı sıra gama A-globülin grubuna ait diğer bazı antikorları içerir.
Antiserumun antijeni çökeltme yeteneği, 65-70°'ye ısıtılması, organik çözücülerle işlenmesi, asidik ortamda indirgenmesiyle bozulabilir [İzliker (N. İşliker), A.Ya. Kullberg]. Çökelti içerdiği bilinen antiserumla çökelme olgusu yalnızca belirli bir sıcaklıkta, tuz konsantrasyonunda ve hidrojen iyonlarında mümkündür. Çökelme reaksiyonu en hızlı şekilde 25-37°'de gerçekleşir. Bir çökelti oluşumu için vazgeçilmez bir koşul, izotonik konsantrasyonlarda sodyum klorürün (% 0,85 NaCl çözeltisi) varlığıdır. NaCl konsantrasyonu %15'e yükseltildiğinde, polisakarit niteliğindeki antijenin oluşturduğu çökeltiler kısmen çözülür ve bunlar, saf antikorların ekstraksiyonu için kullanılabilir. Protein antijenleri ile çökelme reaksiyonu hem %0,85 hem de %15'te aynı hız ve tamlıkla gerçekleşir. NaCl çözümleri. Bir çökelti oluşumu için optimum hidrojen iyonu konsantrasyonu, 5,0 ila 9,0 arasındaki pH değerlerine karşılık gelir.
Laboratuar uygulamalarında çöktürme reaksiyonunun çeşitli modifikasyonları kullanılmaktadır. Özellikle, termopresipitasyon reaksiyonu bakteriyel antijenleri tespit etmek için kullanılır. şarbon, botulizm vb., termal denatürasyona (kokotoantijenler) tabi değildir. Bu reaksiyon, halka çökeltme reaksiyonundan yalnızca, kaynatılmış test malzemesinin filtratının antijen olarak kullanılması bakımından farklılık gösterir (bkz. Reaksiyon nedir).
Çökelme reaksiyonunu kullanarak karmaşık bir antijen karışımını analiz ederken, karışımın tek tek bileşenlerinin özelliklerini karakterize etmek imkansızdır. Bu sorunu çözmek için agarda çökeltme ve immünelektroforez yöntemlerine başvuruyorlar. O. Ouchterlony'nin en yaygın modifikasyonundaki agar çöktürme yöntemi, ince bir agar tabakası içinde birbirine doğru yayılan antijen ve antiserumun karşılaştıklarında çökelme çizgileri oluşturması esasına dayanır. Bu tür çizgilerin sayısına göre, belirli bir antijen karışımında bulunan bileşenlerin sayısı değerlendirilebilir. Ouhgerlonu yöntemi, farklı antijenik karışımları karşılaştırmanıza ve bunlarda bulunan bileşenlerin akrabalık derecesini belirlemenize olanak tanır. Agarda aynı difüzyon hızlarına sahip maddeleri içeren karmaşık bir antijenik karışımı analiz ederken, büyük yardımİmmunelektroforez yöntemini getirebilir. Antijen karışımı ilk olarak bir agar plakasındaki elektrik alanında ayrıştırılır ve ardından geliştirilir. bireysel bileşenler antiserum. Antiserum, elektroforez sırasında antijenlerin hareket ettiği çizgiye paralel olarak agarda açılan bir hendeğe eklenir. Her antijen, antiserumlu ayrı bir çökelme arkı üretir. İmmünoelektroforez analiz için yaygın olarak kullanılır patolojik anormallikler serum proteinlerinde ve ayrıca doku ve bakteriyel antijenlerin immünolojik analizinde.
Adli yağış. Yağış, adli tıpta kanın türünü, organ ve doku kısımlarını belirlemek için kullanılır. Bir dizi soruşturma vakasında, suç aletlerinde, suçlunun veya mağdurun kıyafetlerinde vb. bulunan kan türünün belirlenmesi gerekir. Çökelme reaksiyonu için, tavşanların aşılanmasıyla elde edilen çökeltici serumlar kullanılır. horozlar, keçiler ve çeşitli hayvanlardan elde edilen proteinler. Tipik olarak insan, at, kedi, tavuk, domuz, köpek, sığır. En az 1:10.000 titreye sahip olmalı ve oldukça spesifik olmalıdırlar. İncelenen kan lekesi veya kabuğundan ekstraktlar hazırlanır. tuzlu su çözeltisi, bunlar daha sonra çökeltici serumlarla test edilir. Çöken serumlardan birinin, ilgili kontrol reaksiyonuyla test kanından alınan bir ekstraktla bir çökelti oluşturması durumunda, protein tipinin belirlenmiş olduğu kabul edilir. Çökelme reaksiyonu aynı zamanda insan veya hayvan doku ve organlarındaki protein tipini de belirleyebilir. Tipik olarak çökeltme reaksiyonu, koni şeklinde bir ucu olan test tüplerinde gerçekleştirilir. Bulanık ekstraktlar elde edildiğinde çökeltme reaksiyonu Ouchterlohn agarda gerçekleştirilir.
Çökelme reaksiyonu (RP), bir elektrolit varlığında antikorların etkisi altında çözünür bir antijenin çökeltilmesidir. Görünür reaksiyon etkisi (yağış fenomeni) – bulanıklık (bulanık bir halka veya çökeltinin oluşması - çökelti).
RP, bir dizi bulaşıcı hastalıkta bilinmeyen bir antijeni tespit etmek için kullanılır: Şarbon, tularemi, menenjit, çiçek hastalığı için. Adli tıpta kan ve sperm türlerinin belirlenmesinde kullanılır; sıhhi ve hijyenik çalışmalarda - tahrifat oluşturmak gıda ürünleri. RP çok farklı yüksek hassasiyet ve 1:1.000.000 ve 1:10.000.000 dilüsyonlarında antijeni tespit etmenize olanak sağlar.
Çökelme reaksiyonunun bileşenleri.
1. Antijen (çöktürmeojen) - bu bir antijen moleküler doğa ince bir şekilde dağılmış (çözünür) bir durumdadır. Presipitinojenler çeşitli lizatlar veya doku ekstraktları vb.'dir. Presipitinojen, antijen parçacıklarının boyutunda aglütinojenden farklıdır. Aglütinojen sahip olmak hücre boyutları(bunlar hücrelerin tamamını yok etmez), ancak boyutları çökeltici ile orantılı moleküler boyutlar(bunlar proteinler ve bunların karbonhidrat veya lipitlerle olan kompleksleridir). Çöktürücü çözelti şeffaf.
2. Antikorlar (çökeltiler) insan kan serumunda veya bilinen antikorları içeren immün tanısal çökeltici serumlarda bulunur.
3. Elektrolit– izotonik sodyum klorür çözeltisi.
Çöktürücü maddenin elde edilmesi.
Malzemenin öğütülmesi ve protein antijenlerinin kaynatılarak veya başka yöntemlerle çıkarılmasıyla elde edilir.
Çökelti oluşturucu örnekleri: lizatlar veya ekstraktlar çeşitli organlar ve dokular, yabancı kan serumu (serum çözüm her şeyden önce çeşitli proteinler), mikropların et suyu kültürlerinin filtreleri, mikropların tuz ekstraktları, otolizatlar vb.
Çökeltici serumların hazırlanması.
Tavşanların uygun presipitinojenlerle hiperimmünizasyonuyla elde edilir. Bu tür serumlar, tavşanların bağışıklandığı çökeltici maddelere karşı antikorlar içerir.
Serum çökeltme örnekleri: çökeltici şarbon serumu (şarbon antijenlerine karşı antikorlar içerir), antimeningokok serumunun çökeltilmesi(menenjitin etken maddesinin antijenlerine karşı antikorlar içerir), vb.
Titreçökeltici serum - bu, serumun hala çökelme reaksiyonu verdiği en yüksek çökelti maddesi seyreltmesidir.
RP kurma yöntemleri.
1. Halka çökeltme reaksiyonu –özel çökeltme tüplerinde gerçekleştirilir (çap - 0,4-0,5 cm, yükseklik - 7-8 cm). Test tüpüne 0,2 - 0,3 ml çökeltici serum eklenir ve aynı miktarda çökeltici, bir Pasteur pipetinin uzun ağzıyla duvar boyunca dikkatlice katmanlar halinde yayılır. Daha sonra test tüplerini yatay konumdan dikey olarak dikkatlice yerleştirin.
Reaksiyon sonuçlarının muhasebeleştirilmesi antijen-antikor arayüzünde beyaz bir halkanın ortaya çıkmasıyla gerçekleştirilir. Tepki olumlu ise böyle bir halkanın oluşumu gözlenir. Bu durumda antijen antikorla eşleşir ve bağlanır.
Organ ve dokuların kaynatılıp süzülmüş sulu ekstraktlarının çökeltici olarak kullanılması durumunda reaksiyona reaksiyon denir. termoring yağış (örneğin, şarbonun teşhisinde).
2. Jelde çökelme reaksiyonu – Petri kaplarında veya bir agar jel tabakasının yerleştirildiği cam slaytlarda gerçekleştirilir. Jel sertleştikçe antijenlerin veya antikorların veya her ikisinin yerleştirileceği kuyucuklar açılır. Ayırt etmek 2 yöntem Jeldeki RP:
a) yöntem basit (radyal) immünodifüzyon: İmmün reaksiyonun bileşenlerinden biri (antijen veya antikor) kuyucuğa yerleştirilir ve diğer bileşen agar ile karıştırılır; en olumlu sonuç (antijen antikora karşılık gelir) a çökelti halkası ;
b) yöntem çift immün difüzyon: hem antikor hem de antijen ayrı kuyucuklara yerleştirilir, agar jelinde birbirlerine doğru yayılırlar; sonuç olumlu ise Antikorların ve antijenin buluştuğu yer yağış hatları .
Jeldeki RP örneği Ouchterlony çift immünodifüzyon reaksiyonudur difteri tanısı koyarken
İmmünoelektroforez – Bu, elektroforez yöntemini ve çökeltme reaksiyonunu birleştiren bir yöntemdir. Bir antijen karışımı (örneğin serum proteinleri), elektroforez kullanılarak bir jel içerisinde ayrılır. Daha sonra ilgilenilen proteini (bilinmeyen antijen) bulmak ve tanımlamak için, bu proteine karşı antikorlar (bilinen antikor) içeren tanısal çökeltici bir serum kullanılır. Bunu yapmak için, teşhis serumu proteinlere paralel oluğa sokulur. Proteinler arasında serumda bulunan antikora karşılık gelen bir tane varsa, o zaman yağış hatları.
Yağış reaksiyonu- RP (dan enlem. praecipito- çökelti) - bu, bulanıklık formundaki antikorlarla çözünebilir bir moleküler antijen kompleksinin oluşumu ve çökeltilmesidir. çökelti. Antijenlerin ve antikorların eşdeğer miktarlarda karıştırılmasıyla oluşur; bunlardan birinin fazlası eğitim seviyesini düşürür bağışıklık kompleksi. Aglütinasyon reaksiyonunun aksine, çökelme reaksiyonunun antijeni, parçacıkların boyutu moleküllerin boyutuna yaklaşan çözünür bileşiklerdir. Bunlar proteinler, karbonhidrat ve lipit içeren protein kompleksleri, bakteri ekstraktları, mikropların et suyu kültürlerinin çeşitli disatları veya filtratları olabilir. Çökelme reaksiyonunda yer alan antikorlara çökeltiler denir. Ortaya çıkan ince bir şekilde dağılmış antijen-antikor kompleksi, çökelme reaksiyonunun aşamalandırılmasına yönelik belirli yöntemler kullanılarak tespit edilir.
Halka çökeltme reaksiyonu ilk olarak Ascoli tarafından önerildi. Şarbon, veba, tularemi ve menenjit tanısında kullanılır. Yöntem basit ve erişilebilirdir.
Spesifik immün çökeltici serum dar çökeltme tüplerine dökülür ve antijen çok dikkatli bir şekilde bunun üzerine yerleştirilir. Örneğin şarbonun teşhisinde antijen olarak deri parçaları, yün, ölü hayvan derisi vb. alınır. Bunlar kaynatılır, sıvı süzülür ve antijen olarak kullanılır. İki sıvının sınırında bir halkanın - çökeltinin - ortaya çıkması, karşılık gelen antijenin varlığını gösterir.
Agar jel çökeltme reaksiyonu veya difüzyon çökeltme yöntemi, karmaşık suda çözünür antijenik karışımların bileşiminin ayrıntılı olarak incelenmesini mümkün kılar. Reaksiyonu ayarlamak için bir jel (yarı sıvı veya daha kalın agar) kullanın. Antijeni oluşturan her bileşen, karşılık gelen antikora doğru farklı hızlarda yayılır. Bu nedenle çeşitli antijenlerin ve bunlara karşılık gelen antikorların kompleksleri farklı alanlarçökelme çizgilerinin oluştuğu jel. Her çizgi yalnızca bir antijen-antikor kompleksine karşılık gelir. Çöktürme reaksiyonu genellikle oda sıcaklığında gerçekleştirilir.
İmmünoelektroforez yöntemi elde edildi yaygın V son yıllar mikropların antijenik yapısını incelerken. Antijen kompleksi, bir plaka üzerine dökülen agar jelinin ortasında bulunan bir kuyucuğa yerleştirilir. Daha sonra agar jelinden bir elektrik akımı geçirilerek komplekste yer alan çeşitli antijenlerin alana doğru hareket etmesi sağlanır. elektrik akımı elektroforetik hareketliliklerine bağlıdır. Elektroforez tamamlandıktan sonra plakanın kenarı boyunca yer alan bir çukura spesifik immün serum eklenir ve nemli bir odaya yerleştirilir. Antijen-antikor kompleksinin oluştuğu bölgelerde yağış çizgileri belirir.
Yağış reaksiyonları koymak test tüplerinde (halka çökelme reaksiyonu), jellerde, besin ortamlarında vb. Geniş alınan dağıtım yarı sıvı agar veya agaroz jelde çökelme reaksiyonu türleri: Ouchterlony'ye göre çift immünodifüzyon. radyal immünodifüzyon, immünelektroforez vesaire.
Radyal immünodifüzyon reaksiyonu. Eritilmiş agar jeli içeren bağışıklık serumu camın üzerine eşit şekilde dökülür. Jel içinde katılaştıktan sonra, antijenin çeşitli seyreltmelerle yerleştirildiği oyuklar açılır. Jelin içine yayılan antijen, antikorlarla birlikte kuyucukların etrafında halka şeklinde çökelme bölgeleri oluşturur (Şekil 13.7). Çöktürme halkasının çapı antijen konsantrasyonuyla orantılıdır. Reaksiyon, kandaki çeşitli sınıflardaki immünoglobulinlerin, kompleman sisteminin bileşenlerinin vb. içeriğini belirlemek için kullanılır.
İmmünoelektroforez- elektroforez ve immünopresipitasyonun bir kombinasyonu: jelin oyuklarına bir antijen karışımı verilir ve elektroforez kullanılarak jelde ayrılır. Daha sonra, immün serumu, elektroforez bölgelerine paralel oluğa sokulur; buradaki antikorlar, jel içine dağılarak, antijen ile temas noktasında bir çökelme çizgisi oluşturur.
Bağışıklık elektron mikroskobu- uygun antikorlarla tedavi edilen mikropların, çoğunlukla virüslerin elektron mikroskobu. İmmün serumla tedavi edilen virüsler, immün agregatlar (mikropresipitatlar) oluşturur. Fosfotungstik asit veya diğer elektron-optik olarak yoğun preparasyonların aksine, viryonların çevresinde antikorlardan oluşan bir "taç" oluşur.
123. Mikroorganizmaların toksijenitesini, mekanizmasını, formülasyon yöntemlerini belirlemek için bir jelde çökelme reaksiyonu.
Yağış reaksiyonu (RP)- bu, çökelti adı verilen bulanıklık formundaki antikorlarla çözünebilir bir moleküler antijen kompleksinin oluşumu ve çökelmesidir. Antijenlerin ve antikorların eşdeğer miktarlarda karıştırılmasıyla oluşur; bunlardan birinin fazlalığı, bağışıklık kompleksi oluşumunun seviyesini azaltır.
1946'da J. Oudin, çökeltme reaksiyonunun bileşenlerinden birinin, genellikle serumun bir jel içinde olduğu ve diğerinin - antijenin - birincisinin üzerine bir çözelti şeklinde katmanlandığı basit difüzyon yöntemini önerdi. .
Jelin içine yayılan antijen, içinde antikorlarla birlikte yan ışık altında açıkça görülebilen beyaz çökelme çizgileri oluşturur. 1948'de J. Ouchterlonyu, farklı antijenlerin ve serumların doğrudan karşılaştırılmasına olanak tanıyan, iki boyutlu karşı difüzyonun daha basit ve daha kullanışlı bir yöntemini geliştirdi. Bu yöntem aynı zamanda çapraz reaksiyonların incelenmesinde de çok değerlidir.
Ouchterlon reaksiyonunu oluşturmak için, fizyolojik solüsyonda hazırlanmış% 1 agar kullanın ve Petri kaplarına 0,5 cm'lik bir tabaka ile dökün. Sertleştikten sonra agar plakasında 5-6 mm çapında delikler kesilir - bir tane. yemeğin ortasında, 4-5 - çevre boyunca merkezden 1-2 cm mesafede. Tanısal çökeltici serum merkezi kuyucuğa dökülür ve homolog ve karşılaştırılabilir antijenlerden oluşan bir çözelti periferik kuyucuklara dökülür. Sonuçlar oda sıcaklığında 24, 48 ve 72 saatlik inkübasyonun ardından kaydedilir.
Antikorlar ve antijenler birbirlerine doğru yayılır ve eşdeğer konsantrasyonların oluştuğu bölgelerde kavisli çökelme bantları oluşur. İki bitişik kuyucuktan gelen çökelme bantları birleşirse bu, test sıvısında birçok antijenik bileşenin varlığını gösterir. Ouchterlohn karşı difüzyon reaksiyonu genellikle difteri gibi bakterilerin toksijenitesini belirlemek için kullanılır.
Jel çöktürme yönteminin daha da geliştirilmiş hali immünelektroforezdir. Bu terim, bir antijen karışımının elektroforetik ayrımını ve aynı agar jel plakası üzerinde Ouchterlon karşı difüzyonunu birleştiren bir yöntemi ifade eder. Çöken serum, elektroforetik ayırma yönüne paralel olarak jelde kesilmiş bir oluğa dökülür.
Reaksiyon sonucu oluşan çökelme çizgileri, antijen fraksiyonlarının elektroforetik hareketi yönünde uzayan yaylar biçimindedir. İmmünoelektroforez, 30'a kadar bileşen içeren çözünür antijenlerin karmaşık karışımlarının bileşiminin belirlenmesini mümkün kılar ve bu nedenle değerli bir teşhis yöntemidir.
Yağış reaksiyonu(RP), immün serum (presipitin) ve elektrolite maruz kaldığında Ag (presipitinojen) çözeltisinden çökelme olarak adlandırılır.
RP kullanarak, 1:100.000 ve hatta 1:1.000.000 seyreltmelerdeki antijeni, yani kimyasal olarak tespit edilemeyecek kadar küçük miktarlarda tespit etmek mümkündür.
Presipitinojenler, protein-PS niteliğindeki ultramikroskopik parçacıklardır: mikroorganizmalardan, organlardan ve dokulardan elde edilen ekstraktlar, pat materyali; bakteriyel hücre parçalanma ürünleri, bunların lizatları, filtratları. Çöktürücü maddeler ısıya dayanıklıdır, dolayısıyla bunları elde etmek için malzeme kaynatılır.
RP sıvı şeffaf Ag kullanır.
Çökeltici serumlar genellikle tavşanların birkaç ay boyunca döngüler halinde hiperimmünizasyonuyla elde edilir, onlara bakteriyel süspansiyonlar, et suyu kültürlerinin filtreleri, otolizatlar, mikroorganizmaların tuz ekstraktları ve peynir altı suyu proteinleri enjekte edilir.
Yapımcılığını RP Ascoli'nin üstleniyor. Az miktarda seyreltilmemiş çökeltici serum içeren dar bir test tüpünde, onu eğimli bir konumda tutarak, aynı hacimdeki Ag bir pipetle duvar boyunca yavaşça katmanlanır.
İki sıvının karışmasını önlemek için test tüpü dikkatlice dikey olarak yerleştirilir. Bir test tüpünde reaksiyon pozitifse, 5-10 dakika sonra serum ile incelenen ekstrakt arasındaki sınırda grimsi beyaz bir halka belirir. Reaksiyona mutlaka serum ve antijen kontrolleri eşlik eder.
Ascoli reaksiyonu şarbon, tularemi ve veba Ag'yi tanımlamak için kullanılır.
Aynı zamanda adli tıpta protein tipini, özellikle kan lekelerini belirlemek için, sıhhi uygulamalarda et, balık, un ürünleri, sütteki yabancı maddeler. Bu RP'nin dezavantajı çökeltinin (halka) kararsızlığıdır ve bu durum hafif sallamayla bile kaybolur. Ayrıca belirlemek için kullanılamaz. niceliksel bileşimÇökeltinin oluşumunda rol oynayan Ag'ler.
Ouchterlony çökelme reaksiyonu. Reaksiyon, bir agar jelinin oyuklarındaki Petri kapları üzerinde gerçekleştirilir.
Jel olarak iyi yıkanmış şeffaf agar kullanılır. Ag ve serum, onları içeren kuyucukların belirli bir mesafede olması için agar jeline eklenir. Antikor ve antijen birbirlerine doğru yayılıp birbirleriyle birleşerek 24-48 saat sonra beyaz şerit şeklinde bir bağışıklık kompleksi oluşturur.
Kompleks bir presipitinojenin varlığında birkaç bant ortaya çıkar. Bu durumda, serolojik olarak ilişkili antijenlerin bantları bir araya gelir ve farklı olanların bantları kesişir, bu da incelenen maddelerin antijenik yapısının ayrıntılarının belirlenmesini mümkün kılar.
Ekzotoksin üreten virüs ve bakterilerin neden olduğu hastalıkların teşhisinde yaygın olarak kullanılır.
3.Dolaylı hemaglutinasyon reaksiyonu (IRHA). Klasik klasik RA'da aglütininlerle immün kompleksleri görülemeyen polisakkaritleri, proteinleri, bakteri ekstraktlarını, mikoplazmaları, riketsiyaları ve virüsleri tespit etmek veya hasta serumunda yüksek oranda dağılmış bu maddelere ve küçük mikroorganizmalara karşı antikorları tespit etmek için kullanılır.
Bulaşıcı hastalıkların serodiyagnozu için RNGA. Hasta serumlarındaki antikorları tespit etmek için RNGA kullanılarak ERİTROSİT ANTİJEN TEŞHİSLERİ hazırlanır.
Yağış reaksiyonu.
Bunu yapmak için, kırmızı kan hücreleri 15 dakika boyunca 1:20.000-1:200.000 oranında seyreltilmiş bir tanen çözeltisiyle işlenir, bu onlara stabilite kazandırır ve adsorpsiyon kapasitesini artırır. Daha sonra bilinen bir antijen ile karıştırılarak 37°C sıcaklıkta 2 saat inkübe edilir. Antijenle duyarlı hale getirilen kırmızı kan hücreleri izotonik sodyum klorür solüsyonu ile 2-3 kez yıkanır ve seruma eklenir, seyreltilir ve kuyucuklara dökülür. panellerden.
Kontrol, açıkça pozitif ve negatif reaksiyonlar veren serumlara eklenen, sağlam ve antijen yüklü eritrositlerin bir süspansiyonudur.
Reaksiyon sonuçları, bir termostatta inkübasyondan 2 saat sonra dikkate alınır ve artılarla değerlendirilir: “++++” - kırmızı kan hücreleri, kuyuyu bir şemsiye şeklinde kaplar. pürüzlü kenarlar; “-” – kırmızı kan hücrelerinin “düğme” şeklinde birikmesi
İlgili bilgiler:
Sitede ara:
Halka yağış reaksiyonu
Halka birleştirme reaksiyonu en basit reaksiyonlardan biridir. serolojik yöntemler. Dar çöktürme tüplerinde gerçekleştirilir. İlk olarak, çeşitli seyreltmelerde (1:2; 1:4; 1:8; 1:16) alınan şeffaf bir antijen çözeltisi, tüm test tüplerine eşit şekilde dökülür.
Antijenlerin ve antikorların kombinasyonu, reaktiflerin temas sınırında meydana gelir. Bu etkileşimin bir sonucu olarak, pozitif durumlarda (antijen antikorla eşleştiğinde), bir süre sonra yanardöner bir halka şeklinde bir çökelti oluşur.
Tepki bulundu geniş uygulama V tıbbi uygulama hayvanların yününde, derisinde ve etinde şarbon antijeninin saptanması (Ascoli reaksiyonu); hastalardan veya nesnelerden elde edilen patolojik materyalde bulaşıcı hastalıkların diğer patojenlerinin tespiti için dış çevre, ayrıca adli tıp muayenesi proteinin türünü, özellikle kan proteinini veya diğer biyolojik sıvıları belirlemek için.
Ouchterlony immünodifüzyonu
Çökeltme reaksiyonu bir agar jelinde gerçekleştirilebilir.
Yöntem, farklı boyutlardan dolayı antijen ve antikor parçacıklarının jel içinde farklı hızlarda dağılması ve bunun sonucunda farklı mesafelere hareket etmesi gerçeğine dayanmaktadır. Bu, karışım halinde oldukları durumlarda bireysel antijen sistemlerini ayırmayı mümkün kılar ve dolayısıyla bakterilerin ve kompleks protein maddelerinin, serumların ve hayvan dokularının antijenik yapısının incelenmesini mümkün kılar.
Görsel ve etkili yöntem jelde çökeltme Ouchterlony tarafından önerildi.
Agarlı Petri kaplarına birbirinden belli bir mesafede kesilmiş küçük delikler açılır. Bunlardan birine antijen, diğerlerine serum dökülür. Reaksiyon bileşenleri jel içinde birbirlerine doğru yayılır ve antijenlerin kendisine özgü antikorların optimal konsantrasyonlarını karşıladığı görünür bir çökelme çizgisi oluşturur. Reaktifler kuyucuklardan eşmerkezli olarak yayıldığından, bir antikor kuyucuğu etrafına farklı antijenler (veya aynı antijenin farklı dilüsyonları) içeren birden fazla kuyucuk yerleştirilerek birden fazla analiz gerçekleştirilebilir.
Ouchterlony reaksiyonu, bilinen bir serumdan antijenin doğası hakkında bir sonuç çıkarmayı mümkün kılar ve bunun tersine, bilinen bir antijenden antikorların doğası belirlenir.
Yöntemin avantajı, karmaşık karışımların antijenik bileşenlerinin karşılaştırılmasına ve bunların benzerlikleri veya farklılıklarına karar verilmesine olanak sağlamasıdır. Antijenlerin ortaklığını karşılaştırmak için kuyucuklu agar hazırlayın: birine antiserum dökülür ve karşılaştırılan antijenler diğerine dökülür. Antijenler farklıysa çökelme bantları farklı şekilde yerleştirilir.
İmmünoelektroforez
Son yıllarda immünoelektroforez yöntemi hassas immünolojik çalışmalar için kullanılmıştır. Yöntem ilk olarak P.
Grabar ve K. A. Williams, 1953. Cam plakalar üzerinde agar jel elektroforezinin immün difüzyonla birleşimidir. İlk olarak, genellikle protein veya diğer moleküllerin bir karışımı olan antijenin elektroforetik ayrımı gerçekleştirilir. Bunu yapmak için, antijen agarda önceden kesilmiş bir kuyuya sokulur ve agar plakası bir süre sabit elektrik akımı olan bir bölgeye yerleştirilir.
yüzünden farklı hızlar Moleküllerin hareketi antijenin bileşen parçalarına bölünmesine neden olur. Bundan sonra, çökeltici bağışıklık serumu, akım akışına paralel bir yönde kesilmiş bir oluğa verilir.
Antijen ve antiserum jel içerisinde birbirine doğru yayılır.
Yağış
Her antijen, karşılık gelen antikorlarla birlikte yay şeklinde bir çökelme bölgesine yol açar. Bu çizgilerin sayısı, konumu ve şekli orijinal antijen karışımının bileşimi hakkında fikir verir.
Flokülasyon reaksiyonu
Yöntem 1924'te Ramon tarafından önerildi.
Belirli koşullar altında toksinin antitoksik serumla karışımının bulanıklık ve çökelme vermesi esasına dayanır. Bu durumda, antitoksin miktarının bu toksin miktarını tamamen nötralize eden doza karşılık geldiği test tüplerinde reaksiyon daha erken meydana gelir.
Dolayısıyla toksinin kuvveti biliniyorsa bilinmeyen test serumundaki antitoksin miktarı belirlenebilir. Bunu yapmak için, test serumunun birkaç seyreltisini hazırlayın, her seyreltiye bilinen bir toksinden eşit miktarlarda ekleyin ve ardından test tüplerinden hangisinde topaklaşmanın (çözeltinin bulanıklığı) ilk önce meydana geldiğini gözlemleyin. Başlangıçta flokülasyon belirlenir. Daha sonra hesaplama yapılır.
Örneğin test serumundaki anti-difteri antikorlarının konsantrasyonunu belirlemek gerekir. Reaksiyonda 1 ml'de 50 Lf içeren difteri toksini kullanılır (Lf, 1 antitoksik birim (AU) antiserum tarafından nötralize edilen minimum toksin miktarıdır.
Bu serumdan 0,2 ml ve 100 Lf (50 Lf x 2) aktiviteye sahip bilinen bir toksinden 2 ml içeren bir test tüpünde ilk flokülasyonun gözlemlendiğini varsayalım.
Bu, 0,2 ml serumun bu toksini nötralize ettiği anlamına gelir. Bu nedenle 0,2 ml serum 100 AE içerir ve bu serumun 1 ml'sinde antikor konsantrasyonu 500 AE'ye (100 AE x 5) karşılık gelir.
Benzer bir yöntemle, toksoidlerin bağışıklık kazandırıcı özelliklerini belirlemek için topaklaşma reaksiyonu ters amaç için kullanılabilir.
Bu standart bir antitoksik serum gerektirir.
Nötralizasyon reaksiyonu
Reaksiyon, bakteriyel gıda zehirlenmesinin tanısında, test materyalindeki bakteriyel toksinleri belirlemek için kullanılır. Ek olarak, dış ortamın belirli nesnelerinin bakım amacıyla incelenmesinde de kullanılabilir. patojenik bakterilerörneğin toprağı tetanoz veya gazlı kangren patojenlerinin varlığı açısından test ederken toksin üretir.
Toksinin homolog antitoksik serumla karıştırıldığında özelliklerini göstermediği bilinmektedir. toksik etkiçünkü toksin nötralize edilir. Bir toksinin bir antitoksin ile etkileşim reaksiyonu, kural olarak kesinlikle spesifiktir, bu nedenle, toksinin tipini belirlemek amacıyla bir nötralizasyon reaksiyonu gerçekleştirmek için, her tür ve tipe özgü teşhis serumlarının olması gerekir. toksin. Test materyalinde birden fazla toksinin bulunması bekleniyorsa, 2-3 antitoksik serum veya daha fazlasının karışımı aynı anda kullanılabilir.
Nötralizasyon reaksiyonu, patojenin toksinin tipini ve tipini belirlemenizi sağlar.
Test edilen malzeme, zehirlenmeye neden olduğu iddia edilen gıda ürünlerinin süzüntüleri, bu ürünlerin bulunduğu tabaklardan akanlar vb. olabilir.
Şüphelenilen toksin ilk önce nötralize edilir. Bunu yapmak için, test materyali (deney tüpü) ile birlikte test tüpüne antitoksik bir teşhis serumu eklenir (istenen toksine karşı antikorlar içerir); başka bir test tüpüne (kontrol) eşit hacimde fizyolojik çözelti eklenir.
Kısa süreli bir inkübasyonun ardından tüplerin içerikleri iki grup beyaz fareye (deney ve kontrol) uygulanır.
Nötralizasyon reaksiyonunun sonuçları, kontrol hayvanlarının ölümünden hemen sonra dikkate alınır. Bu durumda, alınan hayvanların hayatta kalma gerçeği antitoksik serum test materyali ile birlikte uygulanan seruma karşılık gelen bir toksinin varlığını gösterir.
Nötrleştirme reaksiyonunun avantajı, elde edilen sonuçların yüksek güvenilirliğidir.
Ancak duyarlılığı ve cevaba ulaşma hızı açısından diğer bazı araştırma yöntemlerinden daha aşağıdır.
Lizis reaksiyonları
Lizis reaksiyonlarına genellikle kompleman varlığında belirli bir antijene özgü antikorların etkisi altında korpüsküler antijenlerin çözünmesi denir.
İtibaren bağışıklık reaksiyonları Bakterilerin ve diğer korpüsküler antijenlerin parçalanması olgusuna dayanarak, esas olarak bakteriyoliz ve hemoliz reaksiyonları kullanılır.
Bakteriyoliz reaksiyonu
Reaksiyon hem in vitro hem de in vivo olarak gerçekleşir. İkincisi V.I. reaksiyonu olarak bilinir. Isaev-Pfeiffer.
Bu bilim adamları şunu gösterdiler ki kobaylar kolera antijenleri ile ön bağışıklık kazandırın, ardından yüksek derecede öldürücü bir Vibrio cholerae kültürünün karın boşluğuna enjeksiyonu hayvanlarda enfeksiyona neden olmaz, çünkü karın boşluğu Patojen spesifik antikorların etkisi altında çözülür.
Daha sonra İ.
I. Mechnikov, ana bileşenlere bir tamamlayıcı kaynağı olan taze serum eklenirse, bir test tüpünde bağışıklık serumunun etkisi altında Vibrio cholerae'nin benzer bir çözünmesinin meydana geldiğini kanıtladı. Bakterilerin kompleman varlığında spesifik antikorların etkisi altında çözünmesine bakteriyoliz reaksiyonu denir.
Bir bakteriyoliz reaksiyonu hazırlanırken, ilk önce test serumunun 10 kat seyreltimlerinden oluşan bir seri hazırlanır. Daha sonra her test tüpüne aynı miktarda (1-2 damla) mikrobiyal süspansiyon eklenir. Karışıma tamamlayıcı eklenir. 37 °C'de inkübasyonun ardından karışım, canlı bakterilerin varlığını veya yokluğunu belirlemek için her tüpten bir besin ortamına aşılanır.
Reaksiyon, bilinen bir mikroorganizmayı kullanarak antikorları belirlemek veya tanısal bir bağışıklık serumu kullanarak mikrop tipini belirlemek için kullanılabilir.
İÇİNDE pratik çalışma Bu reaksiyon bakteriyologlar tarafından nadiren, esas olarak kolera ve kolera benzeri vibrioları ayırt etmek için kullanılır.
Hemoliz reaksiyonu
Hemoliz mekanizması bakteriyoliz mekanizmasına benzer.
Reaksiyonda kullanılan kırmızı kan hücreleri antijendir. Antikorların kaynağı anti-eritrosit serumudur (örneğin, reaksiyonda koyun eritrositleri kullanılıyorsa, o zaman spesifik anti-eritrosit antikorlarına sahip gerekli serum, koyun eritrositleriyle immünize edilmiş tavşanlardan elde edilir).
Kobay kanı serumu, diğer hayvanların serumlarından önemli ölçüde daha fazla tamamlayıcı içerdiğinden, lizis reaksiyonlarında tamamlayıcı olarak sıklıkla kullanılır.
Kompleman varlığında antikorların kırmızı kan hücrelerini yok ettiği durumlarda, hemoglobin bunlardan çıkar ve kırmızı kan hücrelerinin bulanık bir süspansiyonunun reaksiyona giren karışımı şeffaf bir kırmızı sıvıya (lake kan) dönüşür.
Bu reaksiyona hemoliz denir. Laboratuvar uygulamalarında kompleman fiksasyon reaksiyonunda kompleman adsorpsiyonunun bir göstergesi olarak kullanılır.
İlgili bilgiler:
Sitede ara:
Dersin özeti: Mikrobiyolojinin konusu ve gelişiminin kısa tarihçesi. Mikroorganizmaların genel özellikleri ve doğadaki yerleri. çökelme reaksiyonu
Veteriner mikrobiyolojisi ve görevleri
mir.zavantag.com > Biyoloji > Ders
1 … 7 8 9 10 11 12 13 14 15
| ^
RA ilk kez 1896 yılında M. Gruber tarafından geliştirildi. Reaksiyonun özü, bir antikorun bir antijen ile etkileşimidir, bu da mikropların yapışmasına (aglutinasyon) ve çıplak gözle görülebilen pul ve topaklar oluşmasına neden olur. RA yaygın olarak kullanılmaktadır serolojik teşhis birçok bakteriyel enfeksiyonlar(bruselloz, ruam, salmonelloz, kolibasilloz, vb.) ve izole edilen mikroorganizmaların türlerinin ve türlerinin serolojik tanımlanması için. RA'yı evrelemek için çeşitli yöntemler vardır: test tüpü (hacim), damlama (plaka), kan damlatma, sütle halka reaksiyonu, hemaglutinasyon reaksiyonu ve varyantları (RZGA, RNGA), Coombs antiglobulin testi vb. ^ – Serum yerine kan alınır. Bir plaka reaksiyonu gerçekleştirilir. Tavuk ve hindilerde pulloroz, tavuklarda mikoplazmoz tanısı konur. Coombs reaksiyonu Eksik antikorları tanımlamanıza olanak tanır. İkincisi tek değerlidir ve bu nedenle aglütinat oluşumunu engellerler. Yöntem, korpüsküler antijenlere (eritrositler, bakteriler) sabitlenmiş eksik antikorların bağlanması için aracı görevi gören antiglobulin serumunun kullanımına dayanmaktadır. ^ – serolojik ve teşhis açısından doğru reaksiyonlar için geçerli değildir, ancak antijen - hemaglutinin tespit etmenize ve bazı bakteri ve mikoplazmalarda hemaglutinasyon özellikleri (kırmızı kan hücrelerini aglütine etme yeteneği) oluşturmanıza olanak tanır. RNGA– son yıllarda serodinamik alanında önde gelen yerlerden birini almıştır. Bunun özü, karşılık gelen patojenin veya antikorun antijeninin protein moleküllerinin, bir koyun veya başka bir hayvanın tanenle işlenmiş eritrositlerine önceden adsorbe edilmesi gerçeğinde yatmaktadır. Daha sonra duyarlılaştırılmış eritrositler hasta hayvanların kan serumlarıyla veya ikinci durumda incelenen antijenle karıştırılarak bir reaksiyon gerçekleştirilir. Serumun içinde özel bir madde varsa. Bu antijene karşı oluşan antikorlar (veya tam tersi), kırmızı kan hücrelerinin aglütinasyonuna neden olur - pozitif bir reaksiyon. 1897'de R. Kraus tarafından önerildi. Yağış, çökelti antikorları ile çökelti oluşturucu antijenin etkileşimi sırasında gözlenen bir olgudur. Reaksiyonun özü, antijen kolloidlerinin dağılımındaki bir değişiklik ve bunların bağışıklık serumunda bulunan spesifik antikorların etkisi altında çökelmesidir. RP, sıvı ortamda (halka reaksiyonu) veya agar jelde (plaka RP) test tüplerinde verilebilir. Halka pripitasyon reaksiyonu ilk olarak Ascoli (1910) tarafından önerilmiştir; en yaygın olarak şarbonun teşhisinde kullanılır. Yürürken veteriner muayenesi RP et, un ve diğer ürünlerde sahteciliğin belirlenmesine yönelik bir yöntemdir. Özel önem Bu reaksiyon adli tıp muayenesinde kanın cinsi belirlenirken ortaya çıkar. Bununla birlikte, sıvı bir ortamda çökeltme reaksiyonunun kullanılması, antijenlerin heterojenliğinin karakterize edilmesine izin vermez; preparattaki antijenlerin miktarı ve konsantrasyonu. Bu bilgi, RP'nin bir jele (genellikle agar) yerleştirilmesiyle elde edilebilir. İlacın çeşitli antijenleri, hareket hızına sahip olarak eşit olmayan bir şekilde yayılarak, homolog antikorla buluştuğu noktada şeffaf jelin kalınlığında çökeltiler oluşturur. Çökelti çizgilerinin lokalizasyonu ve konsantrasyonu, kalitesi için bir kriter görevi gören antijenik preparasyonun her bir bileşeninin karakteristiği olacaktır. İlacın seyreltilmesiyle içindeki antijenlerin göreceli içeriği karakterize edilebilir. RDP'yi evrelemek için çeşitli yöntemler geliştirilmiştir: Houdin'e (1946) göre doğrudan tek boyutlu difüzyon yöntemi, Mancini'ye (1963) göre basit radyal immünodifüzyon yöntemi, Ouchterlony'ye göre bir agar jeline çift difüzyon yöntemi ( 1948), vb. ^
(RN) model üzerinde tetanoz toksinleri ve antitoksinler. RN'nin özü, immün serumun homolog antikorlarının, patojenin veya onun metabolik ürünlerinin bulaşıcı özelliklerini baskılama (nötrleştirme) yeteneğinde yatmaktadır. Reaksiyonun sonucunu belirlemek için laboratuvar hayvanları, CC ve EC, bir antijen-antikor karışımı ile enfekte edilir. Gösterge pozitif RN'dir - biyolojik test sistemlerinin ölümünün olmaması. İÇİNDE bakteriyel uygulama RN, anaerobik enterotoksemi, botulizm vb. tanısında kullanılır. RN, toksinleri, toksoidleri veya antitoksinleri tespit etmek ve titre etmek için yapılır. Kan serumundaki antikorları tespit etmek ve test materyalindeki antijeni tespit etmek için kullanılır (bruselloz, ruam, riketsiyoz, tüberküloz vb. için). Bu reaksiyon dolaylı iki sistem reaksiyonudur. 5 bileşen içerir:
Bileşenler 3,4,5 gösterge sistemini oluşturur. Test serumunun antijeni ve antikoru birbirine uyuyorsa dostum, reaksiyonun meydana geldiği ortamdan komplemanı bağlayan ve çıkaran bir antijen-antikor immün kompleksi ortaya çıkar. Test serumunda antijene karşılık gelen antikor yoksa, belirtilen kompleks oluşmaz - tamamlayıcı serbest kalır. Bunlar görünmez süreçler olduğundan, tamamlayıcıya ne olduğu sorusunu çözmek için, hemolitik sistemin bileşenleri - hemolitik serum + kırmızı kan hücreleri - bir gösterge olarak test tüpüne sokulur. Kompleman bakteriyolojik sisteme bağlanırsa, kırmızı kan hücrelerinin hemolizi meydana gelmez, sonuç pozitiftir - serum antikor içerir. Hemolizin varlığı, bakteriyolojik sistemde serbest kompleman varlığının bir göstergesi olarak hizmet eder; bu, yalnızca test serumunda antikorların yokluğunda mümkündür - sonuç negatiftir. RSC sıkı koşullar altında gerçekleşir niceliksel ilişkiler bileşenler. Bu, ön titrasyonlarıyla elde edilir (tamamlayıcı ve hemolitik serum, reaksiyonun olduğu gün titre edilir; mikrobiyal antijen - 2-3 ay içinde bir kez). Titrasyon, reaksiyonu gerçekleştirmek için bir reaksiyondaki belirli bir bileşenin en küçük miktarının belirlenmesidir; fazlalık veya eksiklik, sonuçların bozulması anlamına gelir. RDSC, RSK'nın bir çeşididir, ancak reaksiyonun ilk aşamasının soğukta (40°C) 16-18 saat sürmesi bakımından farklılık gösterir; bu, tamamlayıcının antijen-antikor kompleksi tarafından daha uzun süre emilmesi nedeniyle duyarlılığı artırır. |
7 8 9 10 11 12 13 14 15
Benzer:
| “Ekolojik mikrobiyoloji” kavramının tanımı Genel mikrobiyoloji, mikroorganizmaların birbirleriyle, çevresel nesnelerle ve makroorganizmalarla ilişkilerini inceleyen |
Temelleri yansıtan en genel ve temel kavramlar... Felsefe en çok araştıran bilimdir genel hükümler insan, doğa ve bilgi hakkında |
||
| Plan “Uluslararası Ekonomik İlişkiler” disiplininin konusu ve yöntemi... “Uluslararası Ekonomik İlişkiler” disiplininin konusu ve yöntemi ve uluslararası ekonomik ilişkilerin gelişim tarihi |
“Hukuk Psikolojisi” dersinde sınav soruları Öğrenciler için… Hukuk psikolojisi kavramı. Hukuk psikolojisinin gelişiminin konusu, amaçları ve tarihçesi |
||
| 1. Siyasi ve Hukuki Doktrinler Tarihinin Konusu ve Yöntemi > Konu… Bunun nedeni, bu hukuk disiplini çerçevesinde belirli bir konunun - menşe tarihinin - çalışılması ve ele alınmasıdır... |
1.
Bir bilim olarak felsefe tarihi. Konusu ve yöntemi |
||
| Kazakistan Cumhuriyeti Eğitim ve Bilim Bakanlığı Öğrenci Birliği... Cumhuriyet yarışması “2011 Yılın Öğrencisi” (bundan böyle yarışma olarak anılacaktır) hakkındaki bu yönetmelik, yarışmanın amaçlarını ve hedeflerini, katılımcılarını tanımlar... |
“Mikrobiyoloji” ve “mikroorganizma” terimlerinin tanımı … |
||
| “Çatışma bilimi” disiplinindeki teste hazırlanacak sorular Bir bilim olarak çatışma bilimi: konu, amaçlar, hedefler, güncel sorunlar, önemi modern sahne toplumun gelişimi |
Bölgesel video klip yarışması “K-role-k!” hakkında Genel hükümler Bu Yönetmelik, Yarışmanın amaçlarını, hedeflerini, ilkelerini, düzenleme ve yürütme usullerini, katılım ve belirleme usullerini belirler... |
Web sitenize bir düğme ekleyin:
Okul malzemeleri
mir.zavantag.com
Yağış reaksiyonu
Çökelme ve aglütinasyon oldukça benzer reaksiyonlardır ve esas olarak temel olarak farklılık gösterir. fiziksel özellikler AG.
İlk durumda, çözünür olarak, ikincisinde ise tanecikli formlarda sunulur. RP'nin temeli AG-AT reaksiyonu sırasında çökeltinin oluşmasıdır. RP oldukça spesifik ve duyarlıdır.
Reaksiyon bileşenleri:
1. çözünür AG veya hapten (çökeltiojen);
2. AT - çökeltiler (bağışıklık çökeltici serum; tavşanların uygun antijen çözeltileriyle aşılanmasıyla elde edilir);
Yağış reaksiyonu
izotonik sodyum klorür çözeltisi veya agar jeli.
RP'yi ayarlama yöntemleri:
1) Çözümlerde RP - s.
halka çökelmesi;
2) Jel halinde RP.
Halka çökeltme reaksiyonu, içine çöken serumların döküldüğü dar çökeltme tüplerinde gerçekleştirilir.
Daha sonra çökeltici bir çözelti dökülür. Reaksiyon pozitifse, bileşenler arasındaki arayüzde bulanık bir çökelme halkası belirir. RP'yi evrelemeye yönelik bu yöntemin bir örneği, hayvan organlarından, deriden ekstrakte edilen şarbon patojeninin termostabil haptenini tespit etmek için kullanılan Ascoli termopresipitasyon reaksiyonudur. ve yünün kaynatılarak ekstraksiyonu yoluyla jeldeki RP çeşitlerinden biri (Ouchterlony reaksiyonu) toksikojeniteyi belirlemenizi sağlar. difteri basili antitoksik serum kullanın.
Bir Petri kabında besin ortamı Antitoksik difteri serumuna batırılmış bir filtre kağıdı şeridi yerleştirin ve bunu kağıt şeridine dik çizgiler şeklinde test kültürleriyle aşılayın. 24 saat boyunca 37 PS'de inkübe edin. Toksijenik bir kültürün varlığında, toksinin antitoksin ile etkileşimi bölgesinde çökelme çizgileri oluşur. Jeldeki çökelme reaksiyonuna immünodifüzyon denir.
Genellikle bir jelde forez - immünoelektroforez. Yöntemin prensibi: incelenen antijen elektroforetik olarak parçalanır. elde edilen fraksiyonlar antiserum kullanılarak çift difüzyonla analiz edilir.
Şarbon basilinin antijenini tespit etmek amacıyla şarbon tanısı koymak için Ascoli testi yapılır. Çöktürme reaksiyonunu gerçekleştirmek için şunlara sahip olmanız gerekir: çökeltici - hapten B.
Antrakhis (doku ekstraktı), presipitin (şarbon serumunu çökelten) ve salin.
Termopresipitinojenin hazırlanması.
1. 1 g ezilmiş deri veya 1 ml B. antilgas kültürü içeren 8'lik bir şişeyi 10 ml fizyolojik solüsyonla doldurun.
2. Şişeyi 30-45 dakika boyunca kaynayan bir banyoya yerleştirin.
3. Asbest malzemesinden süzün. Süzüntü tamamen şeffaf olmalıdır. Çökeltme reaksiyonu için süzüntü 100 kat veya daha fazla seyreltilir.
Halka çökeltme reaksiyonunun ayarlanması.
1) 0,3 ml çökeltici serum, bütün olarak veya 1:5, 1:10 oranında seyreltilmiş, bir çökeltme tüpüne dökülür.
2) Çöktürme maddesi test tüpünün duvarı boyunca dikkatlice katmanlanır. İki sıvının sınırında en geç 5-15 dakika içinde bulanık bir çökeltici protein halkası oluşursa reaksiyon pozitif kabul edilir.
Çöktürme reaksiyonunu ayarlarken aşağıdaki kontroller kullanılır:
a) antijen ve salin solüsyonu;
b) spesifik serum ve fiziksel.
c) antijen ve spesifik olmayan serum.
Tüm kontrol tüplerinde bulanıklık olmamalıdır. Çöktürme reaksiyonu için 40-60 mm yüksekliğinde ve 4-5 mm çapında özel çökeltme tüpleri kullanılır; dar tüplerde çökelme çok daha hızlı gerçekleşir ve daha net görünür. sıradan tüpler, camlarının tamamen şeffaf ve kuru olması için iyice yıkanır ve kurutulur.
Çökeltme reaksiyonunda, elektrolitlerin varlığında çözünebilir bir antijen (lizat, ekstrakt, hapten) ve spesifik bir antikordan oluşan spesifik bir bağışıklık kompleksi çökeltilir.
Bu reaksiyon sonucunda oluşan bulutlu halka veya çökeltiye denir. çökelti. Bu reaksiyon esas olarak antijen parçacıklarının boyutunda aglütinasyon reaksiyonundan farklılık gösterir.
Çökelme reaksiyonu genellikle bir dizi enfeksiyonun (şarbon, menenjit vb.) tanısında antijeni belirlemek için kullanılır; adli tıpta - kan, sperm vb. türlerinin belirlenmesi; sıhhi ve hijyenik çalışmalarda - ürünlerin tahrifatını oluştururken; onun yardımıyla hayvanların ve bitkilerin filogenetik ilişkisi belirlenir. İhtiyacınız olan reaksiyon için:
1. Antikorlar (çökeltiler) - yüksek antikor titresine sahip bağışıklık serumu (1:100.000'den düşük değil). Çöken serumun titresi, reaksiyona girdiği antijenin en yüksek seyreltilmesiyle belirlenir. Serum genellikle seyreltilmemiş veya seyreltilmiş olarak kullanılır. 1:5 -1:10.
2. Antijen - protein veya lipoid polisakarit niteliğindeki çözünmüş maddeler (tam antijenler ve haptenler).
3. İzotonik çözüm.
Çökeltme reaksiyonunu gerçekleştirmenin ana yöntemleri şunlardır: halka çökeltme reaksiyonu ve agarda (jel) çökeltme reaksiyonu.
Dikkat! Çöktürme reaksiyonunda yer alan tüm bileşenler tamamen şeffaf olmalıdır.
Halka çökelme reaksiyonu. Bir Pasteur pipeti kullanarak çökeltme tüpüne 0,2 - 0,3 ml (5-6 damla) serum ekleyin (serum tüpün duvarlarına bulaşmamalıdır). Aynı hacimdeki antijen, serumun üzerine dikkatlice katmanlanır ve ince bir Pasteur pipeti ile test tüpünün duvarı boyunca dökülür. Test tüpü eğimli bir konumda tutulur. Düzgün bir şekilde katmanlandığında serum ile antijen arasında net bir sınır olmalıdır. Sıvının karışmaması için test tüpünü dikkatlice bir standa yerleştirin. Reaksiyon pozitifse, antijen ve antikorun arayüzünde bulanık bir "halka" - bir çökelti - oluşur.
Agarda çökelme reaksiyonu(gel). Reaksiyonun özelliği, antijen ile antikor arasındaki etkileşimin yoğun bir ortamda meydana gelmesidir, yani. jel. Ortaya çıkan çökelti, ortamın kalınlığında bulanık bir çizgi oluşturur. Bir bandın yokluğu reaksiyon bileşenleri arasında bir tutarsızlık olduğunu gösterir. Bu reaksiyon biyomedikal araştırmalarda, özellikle difteri etken maddesinde toksin oluşumunun araştırılmasında yaygın olarak kullanılmaktadır.
Lizis reaksiyonu (immün sitoliz)
Bağışıklık lizisi- bu, tamamlayıcının zorunlu katılımıyla antikorların etkisi altındaki hücrelerin çözünmesidir. İhtiyacınız olan reaksiyon için:
1. Antijen- mikroplar, kırmızı kan hücreleri veya diğer hücreler.
2. Antikor(lizin) - bağışıklık serumu, daha az sıklıkla hasta serumu. Bakteriyolitik serum, bakterilerin parçalanmasında rol oynayan antikorları içerir; hemolitik - kırmızı kan hücrelerinin parçalanmasını destekleyen hemolizinler; spiroketlerin parçalanması için spiroketolizinler, hücre-itolisinler vb. gereklidir.
3. Tamamlayıcı. Kobay serumu en fazla tamamlayıcıyı içerir. Bu serum (birkaç hayvanın karışımı) genellikle tamamlayıcı olarak kullanılır.
4. İzotonik çözüm.
Yağış reaksiyonu.
| Parametre adı | Anlam |
| Makale konusu: | Yağış reaksiyonu. |
| Değerlendirme listesi (tematik kategori) | Eğitim |
Çökelme reaksiyonu (RP) - bir elektrolit varlığında antikorların etkisi altında çözünür bir antijenin çökeltilmesi. Görünür reaksiyon etkisi (yağış fenomeni) – bulanıklık (bulanık bir halka veya çökeltinin oluşması - çökelti).
RP bazı durumlarda bilinmeyen bir antijeni tespit etmek için kullanılır bulaşıcı hastalıklar: Şarbon, tularemi, menenjit, çiçek hastalığı için. Adli tıpta kan ve sperm türlerinin belirlenmesinde kullanılır; sıhhi ve hijyenik çalışmalarda - gıda ürünlerinde sahteciliğin belirlenmesi. RP çok hassastır ve 1:1.000.000 ve 1:10.000.000 dilüsyonlarında antijeni tespit edebilir.
Çökelme reaksiyonunun bileşenleri.
1. Antijen (çöktürmeojen) - Bu, ince bir şekilde dağılmış (çözünür) bir durumda bulunan, moleküler nitelikte bir antijendir. Presipitinojenler - çeşitli lizatlar veya doku ekstraktları vb.
ref.rf'de yayınlandı
Presipitinojen, antijen parçacıklarının boyutunda aglütinojenden farklıdır. Aglütinojen sahip olmak hücre boyutları(bunlar hücrelerin tamamını yok etmez), ancak boyutları çökeltici ile orantılı moleküler boyutlar(bunlar proteinler ve bunların karbonhidrat veya lipitlerle olan kompleksleridir). Çöktürücü çözelti şeffaf.
2. Antikorlar (çökeltiler) insan kan serumunda veya bilinen antikorları içeren immün tanısal çökeltici serumlarda bulunur.
3. Elektrolit– izotonik sodyum klorür çözeltisi.
Çöktürücü maddenin elde edilmesi.
Malzemenin öğütülmesi ve protein antijenlerinin kaynatılarak veya başka yöntemlerle çıkarılmasıyla elde edilir.
Çökelti oluşturucu örnekleri: çeşitli organ ve dokuların lizatları veya ekstraktları, yabancı kan serumu (serum çözüm her şeyden önce çeşitli proteinler), mikropların et suyu kültürlerinin filtreleri, mikropların tuz ekstraktları, otolizatlar vb.
Çökeltici serumların hazırlanması.
Tavşanların uygun presipitinojenlerle hiperimmünizasyonuyla elde edilir. Bu tür serumlar, tavşanların bağışıklandığı çökeltici maddelere karşı antikorlar içerir.
Serum çökeltme örnekleri: Şarbon serumunu çökelten(şarbon antijenlerine karşı antikorlar içerir), antimeningokok serumunun çökeltilmesi(menenjitin etken maddesinin antijenlerine karşı antikorlar içerir), vb.
Titreçökeltici serum - serumun hala çökelme reaksiyonu verdiği en yüksek çökelti maddesi seyreltmesi.
RP kurma yöntemleri.
1. Halka çökeltme reaksiyonu –özel çökeltme tüplerinde gerçekleştirilir (çap - 0,4-0,5 cm, yükseklik - 7-8 cm). Test tüpüne 0,2 - 0,3 ml çökeltici serum eklenir ve aynı miktarda çökeltici, bir Pasteur pipetinin uzun ağzıyla duvar boyunca dikkatlice katmanlar halinde yayılır. Sonra, dikkatlice yatay konum Test tüpleri dikey olarak yerleştirilir.
Reaksiyon sonuçlarının muhasebeleştirilmesi antijen-antikor arayüzünde beyaz bir halkanın ortaya çıkmasıyla gerçekleştirilir. Tepki olumlu ise böyle bir halkanın oluşumu gözlenir. Bu durumda antijen antikorla eşleşir ve bağlanır.
Haşlanıp süzülürse sulu ekstreler organ ve dokularda reaksiyona genellikle reaksiyon denir. termoring yağış (örneğin, şarbonun teşhisinde).
2. Jelde çökelme reaksiyonu – Petri kaplarında veya bir agar jel tabakasının yerleştirildiği cam slaytlarda gerçekleştirilir. Jel sertleştikçe antijenlerin veya antikorların veya her ikisinin yerleştirileceği kuyucuklar açılır. Ayırt etmek 2 yöntem Jeldeki RP:
a) yöntem basit (radyal) immünodifüzyon: İmmün reaksiyonun bileşenlerinden biri (antijen veya antikor) kuyucuğa yerleştirilir ve diğer bileşen agar ile karıştırılır; sonuç olumlu ise (antijen antikora karşılık gelir) a çökelti halkası ;
b) yöntem çift immün difüzyon: hem antikor hem de antijen ayrı kuyucuklara yerleştirilir, agar jelinde birbirlerine doğru yayılırlar; sonuç olumlu ise Antikorların ve antijenin buluştuğu yer yağış hatları.
Jeldeki RP örneği Ouchterlony çift immünodifüzyon reaksiyonudur difteri tanısı koyarken
İmmünoelektroforez – Bu, elektroforez yöntemini ve çökeltme reaksiyonunu birleştiren bir yöntemdir. Bir antijen karışımı (örneğin serum proteinleri), elektroforez kullanılarak bir jel içerisinde ayrılır. Daha sonra ilgilenilen proteini (bilinmeyen antijen) bulmak ve tanımlamak için, bu proteine karşı antikorlar (bilinen antikor) içeren tanısal çökeltici bir serum kullanılır. Bunu yapmak için, teşhis serumu proteinlere paralel oluğa sokulur. Proteinler arasında serumda bulunan antikora karşılık gelen bir tane varsa, o zaman yağış hatları.
Yağış reaksiyonu. - kavram ve türleri. "Yağış reaksiyonu" kategorisinin sınıflandırılması ve özellikleri. 2017, 2018.
