Ролята на гъбичната инфекция в човешката патология. Диагностика на микози

Съгласно инструкциите SP 1.2.036-95 на Държавния комитет за епидемиологичен надзор на Руската федерация, Москва, 1996 г. „Процедура за регистриране, съхранение, трансфер и транспортиране на микроорганизми от I-IV групи на патогенност“ според епидемиологичната опасност, дрожди и плесенните гъбички, както и дерматофитите принадлежат към III-IV групи патогени на инфекциозни заболявания, поради което при работа с тях е необходимо да се спазват специални правила за безопасност, промишлена санитария, противоепидемичен режим и лична хигиена, насочени към осигуряване на лична и обществена профилактика на инфекцията, алергизацията и разпространението на инфекцията.

Лабораторията за работа с микроорганизми от III-IV група на патогенност е оборудвана с лесно дезинфекциращо се обзавеждане, включващо шкафове за чисто лабораторно стъкло, реактиви, хранителни среди, подходящо оборудване и инструменти. За работа са ви необходими спиртни лампи или газови горелки, микробиологични бримки, микологични шпатули, шпатули, епилационни и анатомични пинсети, нокторезачки, скалпели, ножици, лъжици Фолкман, пипети, пастьорови пипети, дисекционни игли, стъклени пръчици, спринцовки, нискооборотна центрофуга , разклащащи апарати, петриеви панички, епруветки, стъклария, ултравиолетова лампа на Ууд с филтър, микроскопи, осветители, термостати, автоклави, хладилници, сушилни, бактерицидни лампи.

Вземане на материал за изследване

Микроскопската диагностика на микозите включва откриването на мицел и спори в биоматериала, който се изследва. Епидермалните люспи, косата и ноктите се считат за изследван биоматериал. Задължително изискване преди провеждане на изследването е липсата на локално лечение в продължение на поне десет дни и системно лечение в продължение на един месец. Трябва да се има предвид, че използването на детергенти от пациента (особено тези, съдържащи антисептици) може да повлияе на надеждността на резултатите от теста, поради което измиването е забранено 3-4 дни преди теста.

Инструментите за вземане на биоматериал и приготвяне на лекарството са представени на фигурата:

снимка. Инструменти за вземане на биоматериал и приготвяне на лекарството.

Ако се подозира микоза на гладка кожа, микоза на ръцете и краката без увреждане на нокътните плочи, се изследват епидермални люспи от повърхността на лезията. При микоза на гладка кожа е за предпочитане да се изследва епидермиса от маргиналната зона на лезията, тъй като патологичният процес често преминава в централната зона. В същото време не трябва да забравяме за възможността за увреждане на велусната коса, което определя избора на по-нататъшна тактика на лечение. Космите се отстраняват с пинсети за епилация. За микоза на ръцете и краката без увреждане на нокътните плочи се изследват епидермални люспи от третата и четвъртата интердигитална гънка, както и от дланите и арките на краката.

При съмнение за гъбична инфекция на дълга коса (скалп, брада, мустаци и пубис), както и велус се извършва микроскопско изследване. При трихофитоза на скалпа косата се откъсва на разстояние 1-2 mm над нивото на устието на космения фоликул, наподобяващи пънове и точки. Ако космите не могат да бъдат хванати с пинсети за епилация, те се опитват да го отстранят с острия край на скалпел или дисекционна игла.

При микроспория на скалпа косата се откъсва на височина 5-6 mm, наподобяваща „окосена ливада“. Именно тези счупени косми се изследват под микроскоп. Косата се отстранява от лезиите с помощта на пинсети.

С фавус се изследва изтъняване на косата над повърхността на скутулата.

При съмнение за онихомикоза се изследва лесно раздробен материал от областта на субунгвалната хиперкератоза, както и самите променени нокътни плочки.

Необходимо е да се разбере, че всеки тестов материал от пациент е потенциално инфекциозен, така че събирането му трябва да се извършва в стая, където се извършва ежедневно мокро почистване с дезинфектанти (5% разтвор на хлорамин, 5% избистрена белина) и въздухът се стерилизира с ултравиолетови облъчватели (те включват за 1-1,5 часа и влизат в стаята 20 минути след изключване). Термостатите се избърсват всяка седмица с 0,5% разтвор на хлорамин, стените се третират с дезинфектанти веднъж месечно. При работа лекарят трябва да бъде защитен с маска, очила, халат и ръкавици. Инструменти за вземане на биоматериал, ръкавици, предметни стъкла и покривни стъкла, салфетки за еднократна употреба и салфетки се дезинфекцират след употреба чрез потапяне в 1,5% разтвор на клиндезин-екстра (5% разтвор на фенол или 5% разтвор на лизол) за 30 минути. Останалият патологичен материал (коса, кожа и люспи на ноктите) се автоклавира при 2 atm. и 132˚ С за 20 минути (контрола - урея) или при 1,5 атм. и 126˚ C за 30 минути (контрола - бензоена киселина), или се вари 1 час във вода или 30 минути в 1% разтвор на сапунена сода.

Патологичният материал се транспортира до лабораторията в специален контейнер или метални кутии, предпазвайки го от пряка слънчева светлина. Придружаващият документ посочва фамилията, собственото име, бащиното име, пол, възраст и адрес на пациента, очакваната клинична диагноза, името на материала, който се изследва, времето на събирането му, местоположението на лезията, медицинската история номер, името на лекаря и институцията, изпращаща материала.

Приготвяне на лекарството

След получаване на епидермални люспи от лезията се приготвя препарат за микроскопско изследване. 1-2 капки 20% КОН се нанасят върху тестовия материал, поставен върху предметно стъкло, след което предметното стъкло се нагрява върху пламък на горелка, докато около периферията се появи белезникав ръб от кристализирана основа. След това пробата се покрива с покривно стъкло (което се притиска надолу с дисекционна игла) и се изследва под микроскоп. Изследването трябва да се проведе не по-късно от 2 часа след приготвянето на лекарството поради възможността за алкална кристализация.

Методът за приготвяне на препарат за коса при съмнение за гъбична инфекция съответства на описания по-горе, с единствената разлика, че покривното стъкло не се натиска с дисекционна игла (за да се избегне смачкване на косата).

снимка. Появата на ръб от кристализирана основа.

За да се приготви лекарството, парчета отрязани нокътни плочи се потапят в епруветка с 20% KOH и се излагат в термостат за 1 час (t≈37˚C), след което получената желеобразна маса се прехвърля върху предметно стъкло , покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп.

За разлика от нокътните плочи, проби от лесно раздробен материал от зоната на субунгвална хиперкератоза се поставят върху предметно стъкло, върху тях се нанасят 1-2 капки 20% KOH, след което предметното стъкло се нагрява върху пламък на горелка до белезникав ръб кристализирана основа се появява по периферията (фиг. 65) . След това пробата се покрива с покривно стъкло, което се притиска внимателно с дисекционна игла и се изследва под микроскоп.

Микроскопия на препарата

За извършване на микроскопско изследване се използва лабораторен микроскоп без използване на потапяне. Микроскопията на епидермалните люспи, люспите от областта на субунгвалната хиперкератоза, както и разтворените нокътни плочи се извършва първо при ниско увеличение (×100), а когато се открият мицелни нишки, напомнящи „карта на реките“ (железопътни линии) , обективът се превключва на по-голямо увеличение (×400) . При средно увеличение мицелът прилича на стъклени пръчици със странна форма, които променят степента на пречупване на светлината при работа с микровинт на микроскоп.

Микроскопията на пробата от коса се извършва веднага при средно увеличение (×200 или ×400). При трихофитоза вътре в косата се намират големи спори, подредени в редици, докато при микроспория има много малки мозаечни спори вътре в косата (оттук и терминът „микроспория“). Понякога се отбелязва наличието на обвивка от външната страна на косъма - това е типично както за трихофитоза (вариант на ектотрикс, спорите са големи), така и за микроспория (в този случай обвивката се състои от малки спори). При микроскопиране на засегнатата коса с фавус, вътре в косата, в допълнение към клъстери от кръгли или многоъгълни спори, се откриват въздушни мехурчета и нишки от мицел.

Препаратите трябва да се прегледат не по-късно от 2 часа от момента на приготвянето им, поради възможността от алкална кристализация. За да се повиши надеждността на диагнозата, трябва да се направят няколко препарата (поне два) от една лезия. Възможните грешки в микроскопската диагностика на микозите могат да бъдат свързани както с лошото качество на подготовката на препаратите (прегряване над пламъка на горелката, което е придружено от преждевременна кристализация на основата), така и с недостатъчен опит на изследователя (когато влакна от тъкани, случайно намерени в препарата, често се бъркат с мицелни нишки).

ЛАБОРАТОРНА ДИАГНОСТИКА НА МИКОЗИ

Вземане на материал за лабораторно изследване за гъбички.

1.ОСТ 42-21-2-854: Заповед № 222/80 от 27.06.2000г.
2. Оборудване: пинсети, предметни стъкла, ножици, лъжица Volkmann.
4.Показания: гъбични заболявания.
5. Усложнения: няма.

Подготовка на стаята за лечение:

Промяна на решенията.

Приготви се:
-1% разтвор на хлорамин за парцали
-3% разтвор на хлорамин – за дезинфекция на превръзки и пинсети
- измиващ разтвор (156 ml водороден прекис + 5 g прах за пране + 839 ml дестилирана вода) - за обработка на пинсети
- 6% разтвор на водороден прекис – за обработка на ръкавици.

Алгоритъм за извършване на манипулацията.

Трябва да вземете пинсети, предметно стъкло, лъжица Volkmann и ножици;
- поканете пациента в съблекалнята;
- пациентът сяда на стол или диван;
- м/с стои.

Техника:

Вземете кожни люспи и косми от лезията с пинсети;
- поставете взетия материал върху предметно стъкло и го покрийте с друго предметно стъкло.
- измийте ръцете си със сапун;
- изпратете взетия материал в лабораторията.

СЪБИРАНЕ НА МАТЕРИАЛ

Вземане на нокти за преглед.

Вземете ножици и предметни стъкла;
- използвайте ножица, за да отрежете парче от свободния ръб на нокътя;
- покрийте взетия материал с друго предметно стъкло;

Накиснете ножици и пинсети в 3% разтвор на формалдехид.

Правилното вземане на материал от засегнатите нокти е ключът към успешното микробиологично изследване. При вземане на материала те не винаги улавят области на нокътя, съдържащи жизнеспособни гъбички. Естествено, нежизнеспособните гъби няма да растат в култура и техният вид не може да бъде определен.

Областта на нокътя, която трябва да се вземе, се определя от формата на онихомикоза.

Така че, с повърхностна форма на онихомикоза, трябва да се направят изстъргвания от повърхността на нокътната плоча.

При най-разпространената дистална поднокътна форма най-жизнеспособните гъбички се намират под нокътната плочка. Материалът, изпратен за изследване, трябва да включва не само изрезки от нокътната плоча, но и изстъргвания от нокътното легло, изпод плочата.

Освен това трябва да се заснемат и участъци от непроменения нокът, тъй като най-активните гъбички се намират на границата между тях и засегнатите области на нокътя.

При проксималната поднокътна форма е трудно да се вземе материалът. В тези случаи понякога, особено ако ще се прави хистологично изследване или диференциална диагноза, се прави биопсия на нокътя, понякога се използва бормашина.

При паронихия се правят остъргвания от проксималния гребен и отдолу.

Във всички случаи, за да се избегне бактериално замърсяване, нокътят трябва да се третира с етилов алкохол преди вземане на проба.

МИКРОСКОПИЧЕСКО ИЗСЛЕДВАНЕ

Микроскопското изследване на патологичен материал за гъбички се извършва в нативни и оцветени препарати.

За да се приготвят неоцветени препарати, полученият материал се раздробява с помощта на скалпел или дисекционна игла и се поставя в средата на предметно стъкло. За по-ясно идентифициране на елементите на гъбичките материалът се избистря (мацерира). За тази цел те прибягват до помощта на различни вещества, най-често разяждащи алкали (KOH, NaOH), които разтварят епидермални люспи, слуз, гной, изсветляват пигмента на косата и по този начин правят гъбите достъпни за изследване.

Нанесете 1-3 капки 20-30% разтвор на KOH (NaOH) върху размекната кожа или люспи на ноктите, които се поставят в средата на предметно стъкло. Изследваният материал в капки основа се нагрява внимателно върху пламъка на спиртна лампа, докато по периферията на капката се появи деликатен бял ръб от алкални кристали. Не загрявайте до точка на кипене. След нагряване капката се покрива с покривно стъкло, като се избягва навлизането на въздушни мехурчета.

R. A. Arabian и G. I. Gorshkova (1995) препоръчват да се оставят препарати от кожни люспи и коса избистрени и покрити с покривно стъкло за 5 - 10 минути, а препарати от нокътни плочи за 30 - 40 минути преди микроскопия.

Изчистването на препаратите може да се извърши без нагряване, за това те се оставят в 20% разтвор на КОН за 30 - 60 минути или се използват други методи за изчистване на патологичен материал: хлоралактофенол по Аман; лактофенол; разтвор, съдържащ 15% диметилсулфоксид и KOH във вода. Добри резултати се получават след изчистване на нокътните плочки, поставени в 5% разтвор на KOH за 24 часа, като в този случай не е необходимо нагряване.

Микроскопското изследване се извършва на конвенционален лабораторен микроскоп без потапяне.

Кондензаторът на микроскопа трябва да се спусне и отворът да се стесни. Първоначално лекарството се намира върху стъклото при ниско увеличение (40x), последващо изследване се извършва при по-голямо увеличение (100x);

Лекарството се изследва подробно при увеличение 400x. Необходимо е да се изследват няколко лекарства, за да се повиши надеждността на анализа и да се избегнат фалшиво положителни резултати.

Грешки при микроскопската диагностика на гъбички могат да възникнат както поради дефекти в подготовката на лекарството, така и поради недостатъчен опит на лаборанта.

Производствените дефекти се свързват предимно с:
с прегряване на лекарството, което може да доведе до загуба на алкални кристали, разрушаване на косата и появата на финозърнест гниене в патологичния материал.

Линейното подреждане на удължени, гладки кристали на алкали много напомня на нишки от септиран мицел, дори върху чисто стъкло без патологичен материал.

Диференциално-диагностичните характеристики са изключителната еднородност на кристалите, тяхната стъклена прозрачност, многостранни ръбове и липса на неразривна връзка между един елемент и друг. В съмнителни случаи се препоръчва към препарата да се добавят капки леко загрята дестилирана вода, които бързо разтварят алкалните кристали.

Следното може да се сбърка с гъбени елементи:

- капчици мазнина,
- въздушни мехурчета,
- памучни конци за дрехи
- и така наречената „мозаечна гъба“.

Кожните липиди, разграждането на мастните клетки и кератохиалиновите зърна, особено тези с правилна форма, могат да наподобяват отделни гъбични спори. Но разнообразието от форми и най-важното размери, липсата на вътрешна структура на образуванията (вакуоли, черупки) говорят против гъбичната природа на тези елементи. Липидите могат да попаднат в препарата и при вземане на патологичен материал от недостатъчно почистена лезия.

Въздушните мехурчета могат да приличат на спори на клетки, подобни на дрожди, но за разлика от последните, те са заобиколени от плътна тъмна мембрана и дори най-малките въздушни мехурчета винаги са по-големи от гъбичните клетки.

Нишките от тъканта на чорапи, дрехи и др., обикновено лежат отделно от патологичния материал, те винаги са по-големи от хифите, по-груби и не септирани.

„Мозаечната гъба“ е артефакт, който възниква по време на процеса на кристализация (вероятно поради разграждането на холестерола). Има вид на мрежа или бримки, чиито очертания съответстват на границите на роговите люспи; за разлика от нишките на мицела, той никога не пресича стените на епидермалните клетки.

В някои лаборатории препаратите за микроскопско изследване се избистрят с 15-30% разтвор на KOH, към който се добавят 5-10% търговско тъмно синьо мастило от Parker (Parker's Superchrome Blue-Black Ink).

При това оцветяване хифите и спорите са оцветени в синьо.

Микроскопията разкрива филаментозни гъбични хифи или пъпкуващи клетки (фиг. 1).

Така микроскопията дава заключение само за гъбичния характер на инфекцията, но не и за вида на гъбичките, които я причиняват.

Разбира се, ефективността на микроскопското изследване зависи от квалификацията на лабораторния служител.

Ориз. 1. Микроскопия на остъргвания от нокти, засегнати от T. rubrum. Виждат се гъбични хифи.

КУЛТУРНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ

Материалът се инокулира върху стандартна среда на Sabouraud, често с добавени антибиотици. При диагностицирането на дерматофитни инфекции е обичайно да се добавя циклохексимид към средата на Sabouraud, която потиска растежа на замърсители от въздуха. Предлагат се готови търговски среди с добавени антибиотици и циклохексимид. Трябва да се помни, че много недерматофитни плесени и някои видове Candida не растат в среда с циклохексимид, така че се препоръчва да се инокулира върху среда на Sabouraud с циклохексимид и върху среда без него. Идентифицирането на видовете обикновено се извършва чрез микроскопско изследване на отгледаната култура или чрез субкултура върху селективни среди (фиг. 2-15).

Ориз. 2. Култура на гъбичките T. rubrum, изолирани от засегнатите нокти. Получено върху среда на Sabouraud (вляво) и царевичен агар (вдясно).

Ориз. 3. Култура на гъбата T. mentagrophytes var. interdigitale, изолиран от засегнатите нокти. Получено на среда на Sabouraud.

Ориз. 4. Култура на гъбата Candida albicans. Получено на среда на Sabouraud.

Ориз. 5. Култура на гъбата Torulopsis glabrata, изолирана от засегнатите нокти. Получено на среда на Sabouraud.

Ориз. 6. Култура на гъбата Ulocladium sp., изолирана от засегнатите нокти.

Ориз. 7. Микроморфология на Acremonium sp., изолиран от засегнатите нокти.

Ориз. 8. Микроморфология на Fusarium sp., изолиран от засегнатите нокти.

Ориз. 9. Микроморфология на Scopulariopsis sp., изолиран от засегнатите нокти.

Ориз. 10. Микроморфология на Candida albicans, изолирана от засегнатите нокти.

Ориз. 11. Микроморфология на Altemaria sp., изолирана от засегнатите нокти.

Ориз. 12. Микроморфология на Aspergillus sp., изолиран от засегнатите нокти.

Ориз. 13. Микроморфология на Ulocladium sp, изолиран от засегнатите нокти.

Ориз. 14. Микроморфология на Chaetomium sp., изолиран от засегнатите нокти.

Фиг. 15. Панел от хранителни съединения за идентифициране на дерматофити (вляво - T rubrum култура, вдясно - T mentagrophytes var. mterdigitale).

Отляво надясно: среда на Сабуро, среда на Бакстър, среда на Кристенсен, царевичен агар

Трябва да се отбележи, че някои плесени, включително дерматофити, растат бавно в култура, в рамките на 2-3 седмици.

Дори при спазване на всички правила за събиране на материал, при добро лабораторно оборудване и висококвалифициран персонал, броят на положителните резултати от културните изследвания е много малък.

Според чуждестранна литература процентът на положителните изследвания не надвишава 50.
Процентът на положителните резултати в най-добрите местни лаборатории едва достига 30.

Така при 2 от всеки 3 случая на онихомикоза не може да се установи нейната етиология.

ИЗСЛЕДВАНЕ НА ЛУМИНЕСЦЕНЦИЯТА

През 1925 г. Маргарет и Девезе откриват, че косата, заразена с определени дерматофити, излъчва характерен блясък в ултравиолетовите лъчи, преминали през филтър на Девезе. Стъклото Wuda се състои от бариев сулфат, съдържа около 9% никелов оксид; той пропуска лъчи с дължина 365 nm. Като източник на ултравиолетови лъчи могат да се използват различни устройства. Природата на сиянието не е точно установена. Косата продължава да свети след смъртта на гъбичките и след опити за извличане на флуоресцентния материал с гореща вода или студен разтвор на натриев бромид. Интензитетът и естеството на сиянието зависят от рН на разтвора. Смята се, че флуоресцентното вещество се появява при взаимодействието на гъбичките и растящата коса.

Сиянието в ултравиолетовите лъчи, преминали през филтър на Wood, е характерно само за коса, засегната от гъбички от рода Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, понякога M. gypseum и M. nanum), както и като Trichophyton schonleinii. Косата, заразена с микроспори, особено M. canis и M. audouinii, дава най-ярък блясък; косата, засегната от T. schonleinii, има матова зеленикава флуоресценция.

Блясъкът се наблюдава само при напълно засегната от гъбички коса. Може да не присъства в пресни лезии. В тези случаи космите трябва да се епилират от маргиналната, най-активна зона, като блясъкът може да се открие в кореновата част на косъма.

Луминесцентният метод може да се използва както за диагностика, така и за проследяване на ефективността на лечението при отделни пациенти и в епидемиологични огнища. Компактните мобилни апарати са удобни за преглед на контактни лица в училища, детски градини и др.

Луминесцентното изследване трябва да се извършва в затъмнена стая, като лезиите трябва да бъдат предварително почистени от крусти, остатъци от мехлем и др.. Луминесцентният метод може да се използва за диагностициране на pityriasis versicolor, особено когато лезиите са локализирани върху скалпа. Лезиите при това заболяване имат червеникаво-жълт или кафяв блясък. Този блясък обаче не е строго специфичен, тъй като може да се наблюдава при наличие на пърхот по скалпа и дори при здрави хора в областта на устията на космените фоликули по лицето и горната част на тялото. Засегнатата коса, открита чрез луминесцентния метод, трябва да бъде подложена на микроскопско изследване.

ИМУНОЛОГИЧНИ И БИОЛОГИЧНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ

Имунологичните методи на изследване се използват за идентифициране на специфични промени в тялото и серологична диагностика на гъбични заболявания. За откриване на специфични антитела в серумни проби се провеждат следните серологични реакции: аглутинация, утаяване, фиксиране на комплемента, имунофлуоресценция със съответните антигени.

Алергичното състояние на тялото на пациента се открива с помощта на алергични кожни тестове. Алергените се прилагат върху скарифицирана кожа по Pirquet или чрез втриване в кожата по Moreau, интрадермално по Mantoux или чрез инжектиране в кожата. С помощта на тези тестове се откриват алергични реакции от незабавен и забавен тип, което позволява да се оцени състоянието на хуморалния и клетъчния имунитет.

За идентифициране на специфична сенсибилизация на лимфоцитите се използват реакции на базофилна дегранулация, агломерация и промяна, тест за бластна трансформация, потискане на миграцията на макрофагите и др.

Сравнението на резултатите от серологичните и алергичните реакции се оказва полезно както за диагностика, така и за прогнозиране на хода на микозите.

Биологичен метод. Използва се за лабораторна диагностика на дълбоки и особено опасни микози. Основава се на заразяване на животни с патологичен материал от пациент или култура от изследваната гъба. Извършва се в специални лаборатории.

ХИСТОЛОГИЧНО ИЗСЛЕДВАНЕ

Хистология на кожни микози, причинени от дерматофити

Патоморфологичните промени в лезиите са причинени от въвеждането на гъбички в роговия слой на епидермиса, косата и ноктите и възпалителния отговор на кожата, който може да бъде остър, подостър или хроничен. Диагнозата може да се счита за установена само ако в хистологичните препарати се открият гъбични елементи. За това се използват различни хистологични оцветявания, най-информативната е периодичната киселинна реакция (PAS), която позволява да се идентифицират полизахаридите, присъстващи в целулозата и хитина на клетъчната стена на повечето дерматофити (оцветяване Shifu и неговите модификации). Можете също така да използвате реакции на сулфатиране и импрегниране на хистологични срезове със сребро [Khmelnitsky O.K., 1973; Lewer W. F. и Schaumburg-Lewerl., 1983].

Гъбите в роговия слой на епидермиса, дори когато се използват специални оцветители, се откриват в малки количества под формата на мицелни нишки и спори. В редки случаи, когато има много гъбички в лезиите, те могат да бъдат открити в срезове, оцветени с хемотоксилин-еозин, под формата на деликатни базофилни структури в роговия слой.

Възпалителните промени в епидермиса могат да варират: от лек интра- и извънклетъчен оток на спинозни клетки до тежка спонгиоза. Спонгиозата обикновено се развива с дисхидротични варианти на микози на краката и ръцете; клинично в тези случаи се отбелязват везикули. Тази реакция обикновено се причинява от T. mentagrophytes var. interdigitale. Понякога се наблюдава изразена хиперкератоза в епидермиса, която най-често се наблюдава при микоза, причинена от T. rubrum.

Хистологичните промени в дермата са неспецифични и съответстват на остро, подостро и хронично възпаление.

При микоза на гладка кожа, причинена от T. rubrum, понякога се откриват гъбички във велусната коса и космените фоликули. Около фоликулите се развива възпалителна реакция, която поради навлизането на гъбички в дермата може да придобие грануломатозен характер. Централната част на инфилтрата в тези случаи може да бъде подложена на нагнояване и некроза, а периферната част може да се състои от лимфоцити, хистоцити, епителиоидни и многоядрени гигантски клетки, вътре в които понякога се откриват гъбични спори. Размерът на спорите тук достига 6 микрона в диаметър, в косата те обикновено не надвишават 2 микрона.

При инфилтративно-гнойна форма на микози на скалпа и областта на растежа на брадата и мустаците, гъбичните елементи се откриват в космения фоликул, вътре и около косата. В косата те се откриват точно над зоната, където започва кератинизацията (приблизително на ниво от 30 микрона). В дермата се отбелязва възпалителна реакция с различна интензивност, най-силно изразена при kerion Celsii. В случай на остра гнойна реакция в инфилтрата се наблюдава голям брой неутрофилни левкоцити, гъбичните елементи в този случай могат напълно да изчезнат. В хроничния ход на процеса инфилтратът може да придобие грануломатозен характер и в него да се появят многоядрени гигантски клетки. За потвърждаване на диагнозата при липса на гъбички в инфилтрата могат да се използват методи за имунофлуоресцентно оцветяване. За тези цели се използва белязан с флуоресцеин антисерум срещу T. mentagrophytes, което прави възможно откриването на гъбични антигени в косата и в перифоликуларния инфилтрат.

Образуването на инфилтративно-гнойна кожна реакция по време на микоза на скалпа (kerion Celsii) и областта на растежа на брадата и мустаците, причинена от гъбичките M. canis, T. tonsurans и T. verrucosum, е проява на имунологична реакция . Това се доказва от:

1. Тенденцията на лезиите към спонтанно разрешаване.

2. Липса на гъбични елементи със силно изразена възпалителна реакция от страна на кожата при микоза, причинена от T. verrucosum (faviforme) и T. tonsurans.

3. Постоянна положителна реакция в отговор на интрадермално приложение на трихофитин при инфилтративно-гнойни форми на микоза, причинена от зоофилни трихофитини (например T. tonsurans), и отрицателна реакция при повърхностни микози, причинени от същия T. tonsurans.

При фавус в роговия слой на епидермиса се откриват голям брой мицелни нишки и единични гъбични спори. Скутулата е представена от ексудат, паракератотични клетки на епидермиса, клетки на възпалителния инфилтрат, както и мицелни нишки и гъбични спори, които са разположени главно в периферната зона на скутулата. В активния стадий на заболяването се наблюдава изразен възпалителен инфилтрат, съдържащ многоядрени гигантски и плазмени клетки в дермата около дегенеративните космени фоликули. При стари лезии косата и мастните жлези липсват и има признаци на фиброза.

Хистология на микози на кожата и лигавиците, причинени от гъбички, подобни на дрожди

При кандидоза на кожата и лигавиците, гъбичките от рода Candida се намират в роговия слой на епидермиса или в повърхностните слоеве на епитела на лигавицата. Гъбичните елементи обикновено са малко на брой и се оцветяват добре чрез PAS реакция или оцветяване по Грам; са представени под формата на нишки от септиран разклонен мицел, 2-4 µm в диаметър, или яйцевидни спори, 3-5 µm в диаметър. Откриването на мицелната форма на гъбата е от диагностично значение.

При хистологично изследване на хронична грануломатозна кандидоза на кожата и лигавиците елементите на гъбичките също се откриват предимно в роговия слой на епидермиса или в най-горните части на епитела на лигавицата, но понякога и в stratum spinosum, вътре косата и в дермата. Отбелязват се също тежка хиперкератоза и папиломатоза; в дермата има дебел възпалителен инфилтрат, състоящ се от лимфоидни клетки, неутрофили, плазмени клетки и многоядрени гигантски клетки. Инфилтратът може да се разпространи в подкожната мастна тъкан.

При pityriasis versicolor голям брой гъбични елементи се намират в роговия слой на епидермиса под формата на деликатни базофилни структури, които са ясно видими дори при оцветяване на препарати с хемотоксилин-еозин. Гъбите са представени както от нишки, така и от спори.

При фоликуларната форма на pityriasis versicolor има натрупване на рогови маси и възпалителни инфилтратни клетки в разширените отвори на космените фоликули. Около фоликулите също се отбелязва възпалителен инфилтрат. При PAS реакцията сферични или овални гъбични спори с диаметър 2-4 μm се откриват вътре в устата на космените фоликули, а понякога и в перифоликуларния инфилтрат. Мицелът никога не се открива.

Нарушената пигментация на кожата при пациенти с pityriasis versicolor се причинява от способността на гъбичките Pityrosporum да произвеждат вещество, което инхибира процеса на образуване на пигмент в епидермиса. Електронномикроскопското изследване на кожни биопсии от хипопигментирани зони показа, че в меланоцитите се образуват много малки меланозоми, които не могат да проникнат в кератиноцитите. В хиперпигментираните участъци от кожата, напротив, меланозомите са големи и съдържат големи количества меланин.

Според статистиката около 20% от населението на нашата страна страда от микоза в една или друга степен. Но не всички се обръщат към професионална помощ. Една от причините е, че хората просто не познават всички симптоми и прояви на това заболяване.

Симптоми на микоза

На първо място, заслужава да се отбележи, че това не е конкретно заболяване, а група от различни гъбични инфекции на кожата и нейните придатъци. Следователно симптомите могат да бъдат доста разнообразни, но най-често отбелязваните са следните:

• Появата на лющещи се петна по кожата. Най-често се появяват между пръстите на краката, върху кожата на краката. Те често причиняват сърбеж, дразнене и други неприятни усещания.
• Промени в цвета и структурата на ноктите. Те стават жълтеникави, чупливи, ронят се и се лющят, повърхността им може да е неравна и неравна.
• Пукнатини по кожата. Често при гъбични инфекции кожата на краката загрубява и започва силно да се напуква.
• неприятна миризма. Много пациенти се оплакват от неприятна миризма от засегнатата кожа, особено при микоза на краката.

Ако се появят такива признаци, е необходимо да посетите дерматолог възможно най-скоро и да извършите пълна диагностика, за да определите какъв тип микоза е засегнала кожата.

Методи за диагностициране на микози

Когато пациентите се обърнат към дерматолог с характерни признаци на гъбични кожни лезии, най-често е достатъчен първичен външен преглед, за да може лекарят да постави диагноза. Единственият въпрос е какъв тип микоза е засегнала кожата.

Тази информация е необходима за определяне на по-нататъшна тактика на лечение. За диагностициране на микоза могат да се използват следните методи:

• Изследване с лампата на Ууд. Специален спектър на ултравиолетова светлина ви позволява да определите наличието на гъбични инфекции. Този метод е много прост и достъпен, с негова помощ можете не само да поставите диагноза, но и да наблюдавате напредъка на лечението. Но не ни позволява да определим вида на микозата.
• Микроскопия. Един от най-простите и най-често срещаните методи за диагностициране на микоза е изследването на остъргвания от тъкан, засегната от гъбичките, под микроскоп. За целта се поставя върху предметно стъкло. Има два вида изследване на остъргване: с помощта на оцветители и с използване на изсветляващи агенти.
• Бактериологична култура. Един от най-точните диагностични методи е инокулацията на резервоара с хранителни среди. Въз основа на външния вид и характеристиките на израсналите колонии от гъбички, лекарят може да определи вида на патогена. Недостатъкът на този метод е продължителността на времето, отглеждането на колония може да отнеме 2-3 седмици. Освен това е възможно да се получат резултати само в половината от случаите.
• PCR диагностика. Това е един от най-точните и модерни диагностични методи, но определянето на вида на микозата може да изисква няколко теста, което изисква определени разходи.

Струва си да се отбележи, че диагностицирането на микоза е необходимо, за да се определи най-ефективният метод за лечение на това заболяване. И ако не е възможно незабавно да посетите специалист, можете да използвате услугата, предоставяна от нашата клиника и

Първа среща

При назначаването микологът провежда преглед и също така предписва цялостен преглед.

Лабораторна диагностика

Най-ефективните методи за диагностициране на кожни микози са различни лабораторни тестове, които могат да идентифицират патогена и да помогнат при избора на режим на лечение. За идентифициране на причинителя на микозата се предписват следните лабораторни изследвания:

• хистологичен анализ;
• бактериологична култура;
• имунологични изследвания;
• PCR диагностика;
• културен преглед;
• микробиологични изследвания.

Микробиологичната диагностика помага да се открие гъбичката и да се определи нейният род и вид.

Микробиологичната диагностика е най-честият и прост метод за откриване на микоза в кръвта и кожата. За да установите точна диагноза, трябва да знаете как правилно да съберете материала, необходим за изследването. Засегнатите косми трябва да се събират с пинсети. Ако кожата е инфектирана, кожата от увредената зона трябва да се изстърже за микроскопия. Целият събран материал се поставя в 30% разтвор на калиев хидроксид и след това върху предметно стъкло. Микробиологичната диагностика може да разкрие къде точно се намира гъбичката (вътре или извън косата, кожата) и нейния размер.

За да се предотврати погрешна диагноза на микоза, материалът трябва да бъде събран правилно и компетентно за микробиологично изследване.

В медицината съществуват следните микробиологични диагностични методи:

• Микроскопия с нативни или неоцветени препарати. За да направите това, материалът се избистря с помощта на 10-30% разтвори на калиев или натриев хидроксид. След това обработеният материал се поставя върху лабораторно стъкло, в което предварително е капнато малко глицерин. Отгоре се покрива със стъклена плоча и се извършва анализ.
• Микроскопията на оцветените препарати се извършва по няколко начина, които идентифицират бактерии, диференцират различни бактерии и идентифицират различни гъбички.

Бактериологична култура

Бактериологичната култура е един от най-ефективните методи за диагностика.

Събирането на бактериологична култура върху хранителна среда е точен начин за диагностициране на микоза. Вземайки предвид външния вид и характеристиките на израсналата гъбична колония, дерматологът определя вида на патогена, причинил микозата. Единственият недостатък на проучването е, че отглеждането на колония отнема много време. Средно са необходими около 3 седмици, за да се открие щамът на патогена. В някои случаи методът не носи очакваните резултати.

PCR диагностика

PCR диагностичният метод включва идентифициране на причинителя на микозата с помощта на полимеразна верижна реакция. По време на изследването се повишава чувствителността на хибридизацията, което увеличава съдържанието на вирусна ДНК в тестовия материал. Този метод на изследване е нов и изисква няколко изследвания от пациента. Смята се, че този вид диагностика е доста скъпа, но дава точни резултати.

Културен преглед

На последния етап от диагнозата се препоръчват културни диагностични мерки. Методът се състои в получаване на култура от гъбичките, която след това се изпраща за изследване с помощта на микроскоп. Полученият материал се поставя върху изкуствено създадена хранителна среда и се идентифицира вида на патогена, външния вид и размера. След което е показано специално лечение, което е насочено към борба с определен тип патоген на микоза.

За диагностициране на микози могат да се използват микроскопски, микологични (културни), алергични, серологични, биологични и хистологични методи за изследване. В зависимост от патогенезата материалът за изследване може да бъде гной, храчка, засегната коса, нокти, кожни люспи, пункции на костен мозък, лимфни възли, вътрешни органи, кръв, жлъчка, изпражнения, тъканни биопсии и др.

Микроскопското изследване включва микроскопиране на нативни (неоцветени) и оцветени цитонатривки. За приготвяне на местни препарати косата, кожата и ноктите се избистрят в 10,30% разтвори на КОН или NaOH. Алкално обработеният материал се поставя върху предметно стъкло в капка глицерин, покрива се с покривно стъкло и се микроскопира (може да се използва фазово-контрастна микроскопия), което дава възможност да се изследва структурата на гъбата и местоположението на спорите. , но окончателно заключение за вида на гъбата може да се направи само след културни изследвания.

За оцветяване на петна най-често се използват методите на Gram, Ziehl, Nielsen и Romanovsky-Giemsa. За оцветяване на дерматофити се използват и методите на Sabouraud, Adamson и др.

Провеждат се културни (микологични) изследвания, за да се изолира чиста култура на гъбичките и да се идентифицират. Използвайте твърди и течни хранителни среди (Sabouraud, wort agar, Chapek и др.). Инкубацията в термостат (22,28ºС) е дълга (3,4 седмици). Чистата култура на гъбичките се идентифицира чрез набор от характеристики: формата на колониите, техния цвят, консистенция, микроскопска картина (естеството на мицела, местоположението на спорите, конидиефорите) и други характеристики. на гъбични заболявания се извършват с гъбични антигени по общоприети методи, както и за диагностика на други инфекциозни заболявания (RA, RP, RSK, RNGA, RIF и др.).

Тестовете за алергия могат да се извършват съгласно общоприетите методи чрез интрадермално инжектиране на подходящи алергени (полизахаридни и протеинови фракции от клетки или клетъчни мембрани, суспензия от клетки на убити гъбички, културни филтрати). За да идентифицирате GNT, можете да използвате теста за дегранулация на тъканни и серумни базофили, а за откриване на GNT можете да използвате реакцията на инхибиране на миграцията на фагоцитите и бластната трансформация на лимфоцитите.

Биологичните изследвания се извършват върху лабораторни модели (мишки, плъхове, морски свинчета, зайци, кучета, котки). Биологичният модел на микозата се използва за идентифициране на патогенността на патогена, изолиране на чиста култура и изследване на нови антимикотици. Хистологичното изследване позволява да се открие гъбичката в тъканите, да се проучи нейната морфология и характеристиките на причинения от нея патологичен процес в тялото.