Rolul infecției fungice în patologia umană. Diagnosticul micozelor

Conform instrucțiunilor SP 1.2.036-95 ale Comitetului de Stat pentru Supravegherea Epidemiologică al Federației Ruse, Moscova, 1996 „Procedura de contabilizare, depozitare, transfer și transport al microorganismelor din grupele de patogenitate I-IV” în funcție de pericolul epidemiologic ciupercile, drojdiile și mucegaiurile, precum și dermatofitele, aparțin grupelor III-IV de patogeni boli infecțioase, prin urmare, atunci când se lucrează cu acestea, este necesar să se respecte reguli speciale de siguranță, salubritate industrială, regim antiepidemic și igiena personală, care vizează la asigurarea prevenirii personale și publice a infecției, alergizării și răspândirii infecției.

Laboratorul de lucru cu microorganisme din grupele de patogenitate III-IV este dotat cu mobilier ușor dezinfectat, inclusiv dulapuri pentru sticlă curată de laborator, reactivi, medii nutritive, echipamente și instrumente adecvate. Lămpi cu spirt sau arzătoare cu gaz, bucle microbiologice, spatule micologice, spatule, pensete pentru epilare și anatomice, mașini de tăiat unghii, bisturii, foarfece, linguri Volkmann, pipete, pipete Pasteur, ace de disecție, baghete de sticlă, seringi, centrifugă de viteză mică, aparate de scuturare sunt necesare pentru lucru, vase Petri, eprubete, sticlărie, lampă ultravioletă Wood cu filtru, microscoape, iluminatoare, termostate, autoclave, frigidere, cuptoare uscate, lămpi bactericide.

Luarea de material pentru cercetare

Diagnosticul microscopic al micozelor presupune detectarea miceliului și a sporilor în biomaterialul studiat. Fulgii epidermici, părul și unghiile sunt considerate biomaterialul studiat. O cerință indispensabilă înainte de efectuarea studiului este absența tratamentului local timp de cel puțin zece zile și tratamentul sistemic timp de o lună. Trebuie avut în vedere faptul că utilizarea detergenților de către pacient (în special a celor care conțin antiseptice) poate afecta fiabilitatea rezultatelor studiului, astfel încât spălarea este interzisă cu 3-4 zile înainte.

Instrumentele pentru preluarea biomaterialului și pregătirea preparatului sunt prezentate în figură:

O fotografie. Instrumente pentru luarea biomaterialului și prepararea medicamentului.

Dacă bănuiți micoza pielii netede, micoza mâinilor și picioarelor fără deteriorarea plăcilor de unghii, fulgii epidermici sunt examinați de la suprafața leziunii. Cu micoza pielii netede, este de preferat să se studieze epiderma din zona marginală a leziunii, deoarece în zona centrală procesul patologic este adesea rezolvat. În același timp, nu trebuie să uităm de posibilitatea de deteriorare a părului vellus, care determină alegerea tacticilor de tratament ulterioare. Parul se indeparteaza cu penseta de epilare. Cu micoza mâinilor și picioarelor fără deteriorarea plăcilor unghiilor, se examinează solzile epidermei din a treia și a patra pliu interdigital, precum și din palme și din arcul picioarelor.

Dacă bănuiți o infecție fungică a părului lung (scalp, barbă, mustață și pubis), precum și a părului vellus, se efectuează examinarea microscopică a acestora. Cu tricofitoza scalpului, părul se rupe la o distanță de 1-2 mm deasupra nivelului gurii foliculului de păr, în timp ce seamănă cu cioturi și puncte. Dacă părul nu poate fi capturat cu penseta de epilare, atunci în acest caz încearcă să-l îndepărteze cu capătul ascuțit al unui bisturiu sau cu un ac de disecție.

Cu microsporia scalpului, părul se rupe la o înălțime de 5-6 mm, asemănând cu o „pajiste înclinată”. Cu microscopie, acești fire de păr rupte sunt examinate. Părul din leziuni este îndepărtat cu ajutorul unei pensete.

Cu favus, se examinează părul subțire deasupra suprafeței scutulei.

Dacă se suspectează onicomicoză, se examinează materialul ușor zdrobit din zona de hipercheratoză subunguală, precum și plăcile unghiilor modificate.

Trebuie înțeles că orice material de testat de la un pacient este potențial infecțios, așa că trebuie luat într-o cameră în care se efectuează curățarea umedă zilnică cu dezinfectanți (soluție de cloramină 5%, înălbitor clarificat 5%), iar aerul este sterilizat cu iradiatoare cu ultraviolete (includ timp de 1-1,5 ore și intră în cameră la 20 de minute după oprire). Termostatele se șterg săptămânal cu o soluție de cloramină 0,5%, pereții sunt tratați cu dezinfectanți o dată pe lună. Când lucrează, medicul trebuie protejat de mască, ochelari de protecție, halat și mănuși. Instrumentele pentru preluarea biomaterialului, mănușile, lamele și lamele, pelerine și șervețele de unică folosință sunt dezinfectate după utilizare prin scufundare într-o soluție 1,5% de clindesin-extra (soluție de fenol 5% sau soluție de Lysol 5%) timp de 30 de minute. Materialul patologic rămas (solzi de păr, piele și unghii) este autoclavat la 2 atm. și 132˚ C timp de 20 de minute (control - uree) sau la 1,5 atm. și 126˚ C timp de 30 de minute (martor - acid benzoic), sau fierbeți timp de 1 oră în apă sau 30 de minute într-o soluție de săpun-sodă 1%.

Materialul patologic este transportat la laborator într-un recipient special sau biciclete metalice, ferindu-l de lumina directă a soarelui. Documentul de însoțire indică numele de familie, numele, patronimul, sexul, vârsta și adresa pacientului, diagnosticul clinic propus, denumirea materialului de testare, ora la care a fost efectuat, locația focalizării, numărul istoricului cazului. , prenumele medicului si institutia care trimite materialul.

Prepararea medicamentului

După primirea solzilor epidermei din leziune, preparatul este pregătit pentru examinarea microscopică. Pe materialul de testat plasat pe o lamă de sticlă se aplică 1-2 picături de 20% KOH, după care lama de sticlă se încălzește la flacăra unui arzător până când la periferie apare o margine albicioasă de alcalin cristalizat. Apoi, preparatul este acoperit cu o lametă (care este presată în jos cu un ac de disecție) și microscopat. Studiul trebuie efectuat nu mai târziu de 2 ore de la prepararea preparatului din cauza posibilității de cristalizare alcaline.

Metoda de preparare a unui preparat de păr în cazul suspiciunii de infecție fungică corespunde celei descrise anterior, cu singura diferență că lamela nu este presată în jos cu un ac de disecție (pentru a evita zdrobirea părului).

O fotografie. Aspectul unei margini de alcali cristalizat.

Pentru a pregăti preparatul, bucăți de plăci de unghii tăiate sunt scufundate într-o eprubetă cu 20% KOH și expuse într-un termostat timp de 1 oră (t≈37˚C), iar apoi masa rezultată asemănătoare jeleului este transferată pe o lamă de sticlă. , acoperit cu o lametă și examinat la microscop.

Spre deosebire de plăcile de unghii, mostrele din materialul ușor zdrobit al zonei de hiperkeratoză subunguală sunt așezate pe o lamă, se aplică 1-2 picături de KOH 20%, după care lama este încălzită peste flacăra unui arzător până la o culoare albicioasă. la periferie apare marginea de alcali cristalizat (Fig. 65) . Apoi, preparatul este acoperit cu o lamelă, care este apăsată ușor cu un ac de disecție și examinată la microscop.

Microscopia medicamentului

Pentru examinarea microscopică, se folosește un microscop de laborator fără utilizarea imersiei. Microscopia solzilor epidermei, solzilor din zona hiperkeratozei subunguale, precum și plăcilor de unghii dizolvate se efectuează inițial la o mărire scăzută (×100) și dacă sunt detectate filamente de miceliu asemănătoare cu o „hartă a râurilor” (căi ferate), obiectivul este comutat la o mărire mai mare (×400) . Miceliul la mărire medie seamănă cu tijele de sticlă de formă bizare care modifică gradul de refracție a luminii atunci când lucrează cu un microșurub de microscop.

Microscopia preparatului de păr se efectuează imediat la mărire medie (×200 sau ×400). La tricofitoză, în interiorul părului se găsesc spori mari dispuși în rânduri, în timp ce la microsporia există mulți spori mici aranjați în mozaic în interiorul părului (de unde și termenul de „microsporie”). Uneori se remarcă prezența unui capac pe exteriorul părului - acest lucru este tipic atât pentru trichophytosis (o variantă de ectothrix, în timp ce sporii sunt mari), cât și pentru microsporie (în acest caz, capacul este format din spori mici). Microscopia părului afectat cu favus, în interiorul părului, pe lângă acumulări de spori rotunzi sau poligonali, se găsesc bule de aer și filamente miceliale.

Preparatele trebuie vizualizate nu mai tarziu de 2 ore de la momentul prepararii lor datorita posibilitatii de cristalizare alcalina. Pentru a crește fiabilitatea diagnosticului, trebuie făcute mai multe preparate (cel puțin două) dintr-o leziune. Posibilele erori în diagnosticul microscopic al micozelor pot fi asociate atât cu pregătirea de proastă calitate a preparatelor (supraîncălzirea la flacăra unui arzător, care este însoțită de cristalizarea prematură a alcalii), cât și cu experiența insuficientă a cercetătorului (când firele de miceliu sunt adesea greșite). pentru fibrele tisulare găsite accidental în preparat).

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL MICOZELOR

Luarea de material pentru cercetarea de laborator asupra ciupercii.

1. OST 42-21-2-854: ordin nr.222/80 din 27.06.00
2. Dotare: penseta, lamele de sticla, foarfeca, lingura lui Volkmann.
4. Indicatii: boli fungice.
5. Complicații: nu.

Pregatirea camerei de tratament:

Schimbarea solutiilor.

Bucătar:
-1% soluție de cloramină pentru cârpe
-3% soluție de cloramină - pentru dezinfecția pansamentelor și pensetelor
- soluție de spălare (156 ml peroxid de hidrogen + 5 g pulbere de spălat + 839 ml apă distilată) - pentru prelucrarea pensetei
- soluție de peroxid de hidrogen 6% - pentru tratarea mănușilor.

Algoritm de manipulare.

Trebuie să luați o pensetă, o lamă de sticlă, o lingură Volkmann, foarfece;
- invita pacientul la dressing;
- pacientul stă pe scaun sau canapea;
- Valoare m/s.

Tehnică:

Din leziune cu penseta se iau fulgi de piele si par;
- se pune materialul luat pe o lama de sticla si se inchide cu o alta lama de sticla.
- spălați-vă mâinile cu săpun;
- a trimis materialul la laborator.

COLECTAREA DE MATERIAL

Luarea unghiilor pentru examinare.

Luați foarfece și lamele de sticlă;
- tăiați o bucată de pe marginea liberă a unghiei cu foarfecele;
- acoperă materialul luat cu o altă lamă de sticlă;

Înmuiați foarfecele și penseta în soluție de formol 3%.

Colectarea corectă a materialului din unghiile afectate este cheia unui studiu microbiologic de succes. Atunci când iau materialul, acestea nu captează întotdeauna zone ale unghiei care conțin ciuperci viabile. Ciupercile neviabile în cultură, desigur, nu vor crește, iar speciile lor nu pot fi stabilite.

Zona unghiei care trebuie luată este determinată de forma onicomicozei.

Deci, cu o formă superficială de onicomicoză, ar trebui să se facă răzuire de pe suprafața plăcii unghiei.

Cu cea mai comună formă subungală distală, cele mai viabile ciuperci sunt situate sub placa unghiei. Materialul care este trimis spre cercetare ar trebui să includă nu doar o tăietură a plăcii de unghii, ci și o răzuire de pe patul unghiei, de sub placă.

În plus, zonele unghiei neschimbate ar trebui, de asemenea, capturate, deoarece cele mai active ciuperci sunt situate la granița dintre ele și zonele afectate ale unghiei.

Cu o formă subunguală proximală, este dificil să luați materialul. În aceste cazuri, uneori, mai ales dacă urmează să efectueze un examen histologic sau un diagnostic diferențial, iau o biopsie a unghiei și ocazional folosesc un burghiu.

Cu paronichie, se fac răzuire din rola proximală și de sub acesta.

În toate cazurile, pentru a evita contaminarea bacteriană, unghia trebuie tratată cu alcool etilic înainte de a preleva proba.

STUDIU MICROSCOPIC

Examinarea microscopică a materialului patologic pentru ciuperci se efectuează în preparate native și colorate.

Pentru a pregăti preparatele nepătate, materialul rezultat este zdrobit cu un bisturiu sau cu un ac de disecție și plasat în mijlocul unei lame de sticlă. Pentru a identifica mai clar elementele ciupercii, materialul este clarificat (macerat). În acest scop, ei apelează la ajutorul diferitelor substanțe, cel mai adesea alcaline caustice (KOH, NaOH), care dizolvă solzii epidermici, mucusul, puroiul, clarifică pigmentul de păr și astfel pun ciupercile disponibile pentru cercetare.

Pe pielea înmuiată sau fulgii de unghii, care sunt plasați în mijlocul unei lame de sticlă, aplicați 1-3 picături de soluție 20-30% KOH (NaOH). Materialul de testat în picături alcaline este încălzit cu grijă peste flacăra unei lămpi cu alcool până când apare o margine albă delicată de cristale alcaline de-a lungul periferiei picăturii. Nu trebuie încălzit până la fierbere. După încălzire, picătura este acoperită cu o lamela, evitând bulele de aer.

R. A. Arabian și G. I. Gorshkova (1995) recomandă lăsarea preparatelor din solzi de piele și păr limpezite și acoperite cu o sticlă de acoperire timp de 5-10 minute, iar pentru plăcile de unghii timp de 30-40 de minute înainte de microscopie.

Limpezirea preparatelor poate fi efectuată fără încălzire, pentru aceasta sunt lăsate într-o soluție de KOH 20% timp de 30-60 de minute sau se folosesc alte metode de clarificare a materialului patologic: cloralactofenol conform Aman; lactofenol; o soluție care conține 15% dimetil sulfoxid și KOH în apă. Rezultate bune se obțin după limpezirea plăcilor de unghii plasate într-o soluție de KOH 5% timp de 24 de ore; în acest caz nu este necesară încălzirea.

Examinarea microscopică se efectuează pe un microscop convențional de laborator fără imersie.

Condensatorul microscopului ar trebui să fie coborât, diafragma îngustată. La început, medicamentul se găsește pe sticlă la o mărire scăzută (40x), studiul ulterior se efectuează la o mărire mai mare (100x);

preparatul este studiat în detaliu la o mărire de 400x. Mai multe medicamente trebuie testate pentru a crește fiabilitatea testului și pentru a evita rezultate fals pozitive.

Erorile în diagnosticarea microscopică a ciupercilor pot apărea atât din cauza defectelor de pregătire a preparatului, cât și a experienței insuficiente a asistentului de laborator.

Defectele de fabricație sunt asociate în principal cu:
cu supraîncălzirea medicamentului, ceea ce poate duce la precipitarea cristalelor alcaline, distrugerea părului și apariția degradarii cu granulație fină a materialului patologic.

Aranjamentul liniar al cristalelor alcaline alungite, chiar amintește foarte mult de filamentele de miceliu septat, chiar și pe sticlă curată, fără material patologic.

Caracteristicile diagnostice diferențiale sunt uniformitatea excepțională a cristalelor, transparența lor vitroasă, versatilitatea marginilor și absența unei legături inseparabile între un element și altul. În cazuri îndoielnice, se recomandă adăugarea de picături de apă distilată ușor încălzită la preparat, care dizolvă rapid cristalele alcaline.

Pentru elementele ciupercii, acestea pot fi confundate cu:

- picături de grăsime,
- bule de aer
- fire de bumbac de îmbrăcăminte
- și așa-numita „ciupercă de mozaic”.

Lipidele pielii, degradarea celulelor grase și boabele de keratohialină, în special cele care au o formă regulată, pot semăna cu sporii fungici individuali. Dar varietatea formelor și, cel mai important, dimensiunile, absența unei structuri interne a formațiunilor (vacuole, cochilii) vorbesc împotriva naturii fungice a acestor elemente. De asemenea, lipidele pot intra în medicament atunci când iau material patologic dintr-o leziune insuficient curățată.

Bulele de aer pot semăna cu sporii celulelor asemănătoare drojdiei, dar spre deosebire de acestea din urmă, ele sunt înconjurate de o coajă densă întunecată și chiar și cele mai mici bule de aer sunt întotdeauna mai mari decât celulele fungice.

Firele din țesătura șosetelor, hainelor etc. se află de obicei separat de materialul patologic, sunt întotdeauna mai mari decât hifele, mai grosiere și nu septate.

„Ciuperca mozaic” este un artefact care apare în timpul procesului de cristalizare (poate din cauza defalcării colesterolului). Are forma unei ochiuri sau bucle, ale căror contururi corespund limitelor solzilor cornos; spre deosebire de firele de miceliu, nu traversează niciodată pereții celulelor epidermice.

În unele laboratoare, preparatele pentru examinarea microscopică sunt clarificate cu o soluție de 15–30% KOH, la care se adaugă 5–10% cerneală comercială Parker’s Superchrome Blue-Black.

Cu această colorare, hifele și sporii sunt colorate în albastru.

Microscopia evidențiază hife filamentoase ale ciupercilor sau ale celulelor în devenire (Fig. 1).

Astfel, microscopia dă o concluzie doar despre natura fungică a infecției, dar nu și despre tipul de agent cauzator al ciupercilor.

Desigur, eficacitatea examinării microscopice depinde de calificările personalului de laborator.

Orez. 1. Microscopia răzuirilor de la unghiile afectate de T. rubrum. Hifele ciupercii sunt vizibile.

STUDIU CULTURAL

Materialul este inoculat pe un mediu Sabouraud standard, adesea cu aditivi antibiotici. În diagnosticul infecțiilor dermatofite, se obișnuiește să se adauge cicloheximidă în mediul Sabouraud, care suprimă creșterea ciupercilor contaminante din aer. Există medii comerciale gata făcute, suplimentate cu antibiotice și cicloheximidă. De retinut ca multe mucegaiuri nedermatofite si unele specii de Candida nu cresc pe mediu cu cicloheximida, de aceea se recomanda inocularea pe mediu Sabouraud cu cicloheximida si pe mediu fara aceasta. Identificarea speciilor se realizează de obicei prin examinarea microscopică a culturii crescute sau prin subcultură pe medii selective (Fig. 2-15).

Orez. 2. Cultura ciupercii T. rubrum izolata din unghiile afectate. Obținut pe mediu Sabouraud (stânga) și agar de porumb (dreapta).

Orez. 3. Cultura ciupercii T. mentagrophytes var. interdigitale izolate de unghiile afectate. Obținut pe suportul lui Saburo.

Orez. 4. Cultura ciupercii Candida albicans. Obținut pe suportul lui Saburo.

Orez. 5. Cultura ciupercii Torulopsis glabrata izolata din unghiile afectate. Obținut pe suportul lui Saburo.

Orez. 6. Cultura ciupercii Ulocladium sp. izolata din unghiile afectate.

Orez. 7. Micromorfologia Acremonium sp. izolat din unghiile afectate.

Orez. 8. Micromorfologia Fusarium sp. excizat din unghiile afectate.

Orez. 9. Micromorfologia Scopulariopsis sp. izolat din unghiile afectate.

Orez. 10. Micromorfologia Candida albicans izolata din unghiile afectate.

Orez. 11. Micromorfologia Altemaria sp. izolata din unghiile afectate.

Orez. 12. Micromorfologia Aspergillus sp. izolat din unghiile afectate.

Orez. 13. Micromorfologia Ulocladium sp izolat din unghiile afectate.

Orez. 14. Micromorfologia Chaetomium sp. izolat din unghiile afectate.

Fig. 15. Panoul de alimentare cu nutrienți pentru identificarea dermatofitelor (stânga - cultura T rubrum, dreapta - T mentagrophytes var. mterdigitale).

De la stânga la dreapta: mediu Sabouraud, mediu Baxter, mediu Christensen, agar de porumb

De remarcat că unele ciuperci de mucegai, inclusiv dermatofite, cresc încet în cultură, în 2-3 săptămâni.

Chiar dacă sunt respectate toate regulile de colectare a materialului, cu echipament de laborator bun și personal înalt calificat, numărul rezultatelor pozitive ale unui studiu cultural este foarte mic.

Potrivit literaturii străine, procentul de studii pozitive nu depășește 50.
Procentul de rezultate pozitive în cele mai bune laboratoare autohtone abia ajunge la 30.

Astfel, în 2 din 3 cazuri de onicomicoză, etiologia acesteia nu poate fi stabilită.

STUDIU LUMINESCENT

În 1925, Margaret și Deveze au descoperit că părul afectat de anumite dermatofite prezenta o luminozitate caracteristică sub razele ultraviolete trecute printr-un filtru Byd. Sticla Byda constă din sulfat de bariu, conține aproximativ 9% oxid de nichel; transmite raze cu lungimea de 365 nm. Diferite dispozitive pot fi folosite ca sursă de raze ultraviolete. Natura strălucirii nu a fost stabilită cu precizie. Părul continuă să strălucească după moartea ciupercii și după încercările de extragere a materialului fluorescent cu apă fierbinte sau soluție rece de bromură de sodiu. Intensitatea și natura strălucirii depind de pH-ul soluției. Se crede că substanța fluorescentă apare în procesul de interacțiune dintre ciupercă și părul în creștere.

Strălucirea în razele ultraviolete trecute printr-un filtru Wood este caracteristică doar pentru părul afectat de ciuperci din genul Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium și, ocazional, M. gypseum și M. nanum), ca precum şi Trichophyton schonleinii . Părul afectat de microsporuri, în special M. canis și M. audouinii, oferă cea mai strălucitoare strălucire; părul afectat de T. schonleinii are o fluorescență verzuie ternă.

Strălucirea se observă numai în părul complet afectat de ciupercă. Este posibil să nu fie prezent în leziuni proaspete. În aceste cazuri, părul trebuie epilat din zona marginală, cea mai activă, iar strălucirea poate fi detectată în rădăcina părului.

Metoda luminiscentă poate fi utilizată atât pentru diagnosticarea și monitorizarea eficacității tratamentului la pacienți individuali, cât și în focarele epidemiologice. Unitățile mobile compacte sunt convenabile pentru examinarea persoanelor de contact din școli, grădinițe etc.

Un examen luminiscent trebuie efectuat intr-o camera intunecata, leziunile trebuie curatate in prealabil de cruste, reziduuri de unguent etc. Metoda luminescenta poate fi folosita pentru diagnosticarea pitiriazisului versicolor, mai ales cand leziunile sunt localizate pe scalp. Leziunile din această boală au o strălucire galben-roșiatică sau maronie. Această strălucire, însă, nu este strict specifică, deoarece poate fi observată în prezența mătreții pe scalp și chiar la persoanele sănătoase din regiunea gurii foliculilor de păr de pe față și de pe partea superioară a corpului. Identificat prin metoda luminiscentei, parul afectat trebuie supus unui examen microscopic.

STUDII IMUNOLOGICE ŞI BIOLOGICE

Metodele de cercetare imunologică sunt utilizate pentru identificarea modificărilor specifice ale organismului și diagnosticul serologic al bolilor fungice. Pentru detectarea anticorpilor specifici în serul probei se efectuează următoarele reacții serologice: aglutinare, precipitare, fixare a complementului, imunofluorescență cu antigenele corespunzătoare.

Starea alergică a corpului pacientului este detectată prin teste cutanate alergice. Alergenii sunt aplicați pe pielea scarificată conform Pirque sau prin frecare în piele după Moro, intradermic după Mantoux și, de asemenea, prin injectare în piele. Cu ajutorul acestor teste sunt detectate reacții alergice atât de tip imediat cât și întârziat, ceea ce face posibilă evaluarea stării imunității umorale și celulare.

Pentru detectarea sensibilizării specifice a limfocitelor se folosesc reacțiile de degranulare, aglomerare și alterare bazofile, test de transformare blastică, suprimare a migrației macrofagelor etc.

Compararea rezultatelor reacțiilor serologice și alergice este utilă atât pentru diagnostic, cât și pentru prognosticul evoluției micozelor.

metoda biologica. Este utilizat pentru diagnosticarea de laborator a micozelor profunde și mai ales periculoase. Pe baza infecției animalelor cu material patologic de la un pacient sau o cultură a ciupercii studiate. Se efectuează în laboratoare speciale.

STUDIU HISTOLOGIC

Histologia micozelor cutanate cauzate de dermatofite

Modificările patologice ale leziunilor se datorează introducerii de ciuperci în stratul cornos al epidermei, părului și unghiilor și unui răspuns inflamator al pielii, care poate fi acut, subacut sau cronic. Diagnosticul poate fi considerat stabilit numai dacă în preparatele histologice se găsesc elemente de ciuperci. Pentru aceasta se folosesc diverse colorații histologice, cea mai informativă este reacția periodică acidă (PAS), care face posibilă identificarea polizaharidelor prezente în celuloza și chitina peretelui celular al majorității dermatofitelor (colorația Shifu și modificările acesteia). De asemenea, puteți utiliza reacții de sulfatare și impregnarea secțiunilor histologice cu argint [Khmelnitsky OK, 1973; Lewer W. F. şi Schaumburg-Lewerl., 1983].

Ciupercile din stratul cornos al epidermei, chiar și atunci când se folosesc pete speciale, sunt detectate în cantități mici sub formă de filamente miceliene și spori. În cazuri rare, când există multe ciuperci în leziuni, acestea pot fi găsite în secțiuni colorate cu hematoxilin-eozină ca structuri bazofile delicate în stratul cornos.

Modificările inflamatorii ale epidermei pot varia de la edem ușor intra și extracelular al celulelor spinoase până la spongioză severă. Spongioza se dezvoltă de obicei cu variante dishidrotice ale micozei picioarelor și mâinilor, clinic în aceste cazuri se notează vezicule. Cauza acestei reacții este de obicei T. mentagrophytes var. interdigitale. Uneori, hiperkeratoza marcată este observată în epidermă, care se observă cel mai adesea cu micoza cauzată de T. rubrum.

Modificările histologice ale dermului sunt nespecifice și corespund inflamației acute, subacute și cronice.

Cu micoza pielii netede cauzată de T. rubrum, ciupercile sunt uneori detectate în părul vellus și foliculii de păr. În jurul foliculilor se dezvoltă o reacție inflamatorie, care, datorită pătrunderii ciupercilor în derm, pot dobândi un caracter granulomatos. Partea centrală a infiltratului în aceste cazuri poate suferi supurație și necroză, în timp ce partea periferică poate consta din limfocite, histocite, epitelioide și celule gigantice multinucleate, în interiorul cărora se găsesc uneori spori fungici. Dimensiunea sporilor aici ajunge la 6 microni în diametru, în păr, de obicei, nu depășește 2 microni.

Cu forma infiltrativ-supurativă de micoză a scalpului și zona de creștere a barbii și a mustaței, elementele fungice se găsesc în foliculul de păr, în interiorul și în jurul părului. În păr, acestea sunt determinate chiar deasupra zonei de început a keratinizării (aproximativ la nivelul de 30 de microni). La nivelul dermului se remarcă o reacție inflamatorie de intensitate variabilă, cel mai pronunțată cu Kerion Celsii. Într-o reacție purulentă acută, un număr mare de leucocite neutrofile sunt observate în infiltrat, elementele fungice în acest caz pot dispărea complet. În cursul cronic al procesului, infiltratul poate dobândi un caracter granulomatos, în el apar celule gigantice multinucleate. Pentru a confirma diagnosticul în absența ciupercilor în infiltrat, pot fi utilizate metode de colorare imunofluorescentă. În aceste scopuri, se folosește un antiser marcat cu fluoresceină împotriva T. mentagrophytes, care face posibilă detectarea antigenelor fungice în păr și în infiltratul perifolicular.

Formarea unei reacții infiltrative-supurative a pielii cu micoză a scalpului (kerion Celsii) și zona de creștere a bărbii și a mustaței, cauzată de ciupercile M. canis, T. tonsurans și T. verrucosum, este o manifestare a reacţiei imunologice. Acest lucru este dovedit de:

1. Tendința leziunilor la rezoluție spontană.

2. Absența elementelor fungice cu reacție inflamatorie foarte pronunțată din piele cu micoză cauzată de T. verrucosum (faviforme) și T. tonsurans.

3. O reacție pozitivă constantă ca răspuns la administrarea intradermică de tricofitine cu forme infiltrativ-supurative de micoză cauzate de tricofitine zoofile (de exemplu, T. tonsurans), și una negativă - cu micoze superficiale cauzate de același T. tonsurans.

Cu un favus, în stratul cornos al epidermei se găsesc un număr mare de filamente miceliale și spori unici ai ciupercii. Scutula este reprezentată de exudat, celule parakeratotice ale epidermei, celule ale infiltratului inflamator, precum și filamente miceliale și spori fungici, care sunt localizați în principal în zona periferică a scutulei. În stadiul activ al bolii în dermul din jurul foliculilor de păr degenerativi, există un infiltrat inflamator pronunțat care conține celule gigantice și plasmatice multinucleate. În leziunile vechi, părul și glandele sebacee sunt absente, există fenomene de fibroză.

Histologia micozelor pielii și mucoaselor cauzate de ciuperci asemănătoare drojdiei

Cu candidoza pielii și mucoaselor, ciupercile din genul Candida se găsesc în stratul cornos al epidermei sau în straturile de suprafață ale epiteliului membranei mucoase. Elementele fungice sunt de obicei puține, sunt bine colorate prin reacția PAS sau prin Gram; prezentate sub formă de fire de miceliu ramificat septat, cu diametrul de 2-4 microni, sau spori ovoizi, cu diametrul de 3-5 microni. Detectarea formei miceliale a ciupercii este de importanță diagnostică.

La examenul histologic al candidozei granulomatoase cronice ale pielii și mucoaselor, elementele fungice se găsesc predominant și în stratul cornos al epidermei sau în secțiunile superioare ale epiteliului mucoasei, dar uneori în stratul spinos, în interiorul par si in derm. Există, de asemenea, hipercheratoză și papilomatoză marcate; în derm - un infiltrat inflamator dens format din celule limfoide, neutrofile, plasmă și celule gigantice multinucleate. Infiltratul se poate extinde în țesutul adipos subcutanat.

Cu pitiriazisul versicolor, un număr mare de elemente fungice se găsesc în stratul cornos al epidermei sub formă de structuri bazofile delicate, care sunt clar vizibile chiar și atunci când se colorează preparatele cu hematoxilină-eozină. Ciupercile sunt reprezentate atât de filamente, cât și de spori.

Cu forma foliculară de pitiriazis versicolor, există o acumulare de mase cornoase și celule ale infiltratului inflamator în gurile mărite ale foliculilor de păr. În jurul foliculilor se observă și un infiltrat inflamator. În reacția PAS, sporii sferici sau ovali ai ciupercii, cu diametrul de 2-4 µm, se găsesc în interiorul gurii foliculilor de păr, iar uneori în infiltratul perifolicular. Miceliul nu este niciodată dezvăluit.

Încălcarea pigmentării pielii la pacienții cu pitiriazis versicolor se datorează capacității ciupercii Pityrosporum de a produce o substanță care inhibă procesul de formare a pigmentului în epidermă. Examinarea microscopică electronică a biopsiilor de piele din zonele hipopigmentate a arătat că în melanocite se formează melanozomi foarte mici, care nu sunt capabili să pătrundă în keratinocite. În zonele hiperpigmentate ale pielii, dimpotrivă, melanozomii sunt mari și conțin o cantitate mare de melanină.

Potrivit statisticilor, aproximativ 20% din populația țării noastre suferă într-un fel sau altul de micoză. Dar nu toți caută ajutor profesional de la. Unul dintre motive este că oamenii pur și simplu nu cunosc toate simptomele și manifestările acestei boli.

Simptomele micozei

În primul rând, este de remarcat faptul că aceasta nu este o boală specifică, ci un grup de diferite leziuni fungice ale pielii și anexelor sale. Prin urmare, simptomele pot fi destul de diverse, dar următoarele sunt cel mai des observate:

• Apariția petelor descuamate pe piele. Cel mai adesea apar între degetele picioarelor, pe pielea picioarelor. Adesea provoacă mâncărime, iritații și alte senzații neplăcute.
• Schimbarea culorii și structurii unghiilor. Ele devin gălbui, casante, se sfărâmă și se exfoliază, suprafața lor poate fi denivelată și neuniformă.
• Crăpături în piele. Adesea, cu infecții fungice ale pielii picioarelor, se aspru și începe să crape rău.
• Miros urât. Mulți pacienți se plâng de un miros neplăcut din pielea afectată, în special cu piciorul de atlet.

Când apar astfel de semne, este necesar să vizitați un dermatolog cât mai curând posibil și să efectuați un diagnostic complet pentru a determina ce tip de micoză a afectat pielea.

Metode de diagnosticare a micozelor

Când pacienții apelează la un dermatolog cu semne caracteristice de leziuni fungice ale pielii, atunci, cel mai adesea, un examen extern primar este suficient pentru ca un medic să pună un diagnostic. Singura întrebare este ce tip de micoză a afectat pielea.

Aceste informații sunt necesare pentru a determina o strategie de tratament ulterioară. Pentru diagnosticarea micozei, se pot utiliza următoarele metode:

• Studiu lampa lui Wood. Un spectru special de lumină ultravioletă vă permite să determinați prezența infecțiilor fungice. Această metodă este foarte simplă și accesibilă, cu ajutorul ei nu puteți doar să faceți un diagnostic, ci și să monitorizați cursul tratamentului. Dar nu permite determinarea tipului de micoză.
• Microscopie. Una dintre cele mai simple și mai comune metode de diagnosticare a micozei este examinarea microscopică a răzuirii țesuturilor afectate de ciupercă. Pentru a face acest lucru, este plasat pe o lamă de sticlă. Există două tipuri de examinare prin răzuire: folosind pete și folosind înălbitori.
• Cultura bacteriologică. Una dintre cele mai precise metode de diagnosticare este însămânțarea în rezervor pe medii nutritive. În funcție de aspectul și caracteristicile coloniilor crescute ale ciupercii, medicul poate determina tipul de agent patogen. Dezavantajul acestei metode este durata, poate dura 2-3 săptămâni pentru a crește o colonie. În plus, se poate obține un rezultat doar în jumătate din cazuri.
• Diagnosticare PCR. Aceasta este una dintre cele mai precise și moderne metode de diagnosticare, dar pot fi necesare mai multe teste pentru a determina tipul de micoză, care necesită anumite costuri.

Este de remarcat faptul că diagnosticul de micoză este necesar pentru a determina cea mai eficientă metodă de tratare a acestei boli. Iar dacă nu este posibil să vizitezi imediat un specialist, poți apela la serviciul oferit de clinica noastră și

Prima recepție

La întâlnire, micologul efectuează o examinare și, de asemenea, prescrie un studiu cuprinzător.

Diagnosticul de laborator

Cele mai eficiente metode de diagnosticare a micozelor cutanate sunt diverse teste de laborator care pot identifica agentul patogen și pot ajuta la alegerea unui regim de terapie. Pentru a identifica agentul cauzal al micozei, sunt prescrise următoarele teste de laborator:

• analiza histologică;
• cultura bacteriologica;
• cercetare imunologică;
• diagnostic PCR;
• examen cultural;
• cercetare microbiologică.

Diagnosticul microbiologic ajută la detectarea ciupercii, la determinarea genului și speciei acesteia.

Diagnosticul microbiologic este cea mai comună și simplă metodă de depistare a micozei în sânge și pe piele. Pentru a identifica un diagnostic precis, ar trebui să știți cum să colectați în mod corespunzător materialul necesar în studiu. Părul afectat trebuie colectat cu o pensetă. Dacă pielea este infectată, atunci pentru microscopie, pielea trebuie răzuită de pe zona deteriorată. Tot materialul luat este plasat într-o soluție de hidroxid de potasiu 30%, apoi pe o lamă de sticlă. Diagnosticul microbiologic este capabil să identifice exact locul unde se află ciuperca (în interiorul sau în afara părului, pielea) și dimensiunea acesteia.

Pentru a preveni diagnosticul eronat al micozei, este necesar să luați în mod corect și competent materialul pentru examinarea microbiologică.

În medicină, există astfel de metode de diagnostic microbiologic:

• Microscopie folosind preparate native sau necolorate. Pentru a face acest lucru, materialul este clarificat cu soluții de 10-30% de hidroxid de potasiu sau de sodiu. Apoi materialul prelucrat este așezat pe un pahar de laborator, unde în prealabil s-a scăpat puțină glicerină. Acoperiți de sus cu o placă de sticlă și efectuați analiza.
• Microscopia preparatelor colorate este efectuată în mai multe moduri care identifică bacteriile, diferențiază diferite bacterii și identifică diferite ciuperci.

Cultura bacteriologică

Cultura bacteriologică este una dintre cele mai eficiente metode de diagnostic.

Colectarea de însămânțare bacteriologică pe un mediu nutritiv este o modalitate precisă de a diagnostica micoza. Având în vedere aspectul și caracteristicile coloniei crescute de ciupercă, medicul dermatolog determină tipul de agent patogen care a provocat micoza. Singurul dezavantaj al sondajului este că este nevoie de mult timp pentru a crește o colonie. În medie, este nevoie de aproximativ 3 săptămâni pentru a afla tulpina agentului patogen. În unele cazuri, metoda nu aduce rezultatele așteptate.

Diagnosticare PCR

Metoda de diagnosticare PCR implică identificarea agentului cauzal al micozei folosind o reacție în lanț a polimerazei. În timpul examinării, sensibilitatea hibridizării crește, ceea ce crește conținutul de ADN viral din materialul de testat. Această metodă de examinare este nouă și necesită mai multe teste de la pacient. Se crede că acest tip de diagnosticare este destul de costisitor, dar oferă rezultate precise.

Examen cultural

Măsurile de diagnostic cultural sunt recomandate în etapa finală a diagnosticului. Metoda constă în obținerea unei culturi a ciupercii, care este apoi trimisă spre examinare cu ajutorul unui microscop. Materialul rezultat este plasat pe un mediu nutritiv creat artificial și se identifică tipul de agent patogen, aspectul, dimensiunea. După aceea, este prezentat un tratament special, care are ca scop combaterea unui anumit tip de agent cauzal al micozei.

Pentru diagnosticul micozelor se pot folosi metode de cercetare microscopică, micologică (culturală), alergică, serologică, biologică și histologică. În funcție de patogeneză, materialul pentru cercetare poate fi puroi, spută, păr afectat, unghii, fulgi de piele, măduvă osoasă, ganglioni limfatici, organe interne, sânge, bilă, fecale, biopsii tisulare etc.

Examenul microscopic include microscopia frotiurilor native (necolorate) și colorate. Pentru prepararea preparatelor native, părul, răzuirea pielii și unghiile sunt clarificate în soluții 10,30% KOH sau NaOH. Materialul tratat cu alcali este plasat pe o lamă de sticlă într-o picătură de glicerol, acoperit cu o lamă și microscopat (se poate folosi microscopia cu contrast de fază), ceea ce face posibilă studierea structurii ciupercii, a locației spori, dar concluzia finală despre specia ciupercii se poate face numai după studii culturale.

Pentru colorarea frotiurilor, se folosesc cel mai des metodele Gram, Ziehl.Nielsen, Romanovsky-Giemsa. Metodele Saburo, Adamson și altele sunt, de asemenea, folosite pentru colorarea dermatofitelor.

Se efectuează un studiu cultural (micologic) pentru a izola o cultură pură a ciupercii și a o identifica. Se folosesc medii nutritive solide și lichide (Saburo, agar de must, Chapek etc.). Incubarea într-un termostat (22,28ºС) este lungă (3,4 săptămâni). O cultură pură a ciupercii este identificată printr-o combinație de caracteristici: forma coloniilor, culoarea lor, consistența, imaginea microscopică (natura miceliului, localizarea sporilor, conidioforilor) și alte caracteristici Reacții serologice pentru diagnostic a bolilor fungice se efectuează cu antigeni fungici conform metodelor general acceptate, precum și pentru diagnosticarea altor boli infecțioase (RA, RP, RSK, RNGA, RIF etc.).

Testele alergice pot fi efectuate conform metodelor general acceptate prin administrarea intradermică a alergenilor corespunzători (fracții de polizaharide și proteine ​​din celule sau membrane celulare, o suspensie de celule de ciuperci omorâte, filtrate de cultură). Pentru a detecta HNT, puteți utiliza testul de degranulare a țesutului și bazofilelor serice și pentru a detecta HTH, reacția de inhibare a migrației fagocitelor, transformarea blastică a limfocitelor.

Cercetările biologice se efectuează pe modele de laborator (șoareci, șobolani, cobai, iepuri, câini, pisici). Modelul biologic al micozei este utilizat pentru a identifica patogenitatea agentului patogen, a izola o cultură pură și a studia noi antimicotice. Examinarea histologică face posibilă detectarea ciupercii în țesuturi, studierea morfologiei acesteia și a caracteristicilor procesului patologic cauzat de aceasta în organism.