Test fals negativ Testul Coombs indirect. Testul Coombs: direct și indirect

- un test antiglobulinic care vizează detectarea în sângele Rh negativ a anticorpilor antieritrocitari incompleti la factorul Rh - o proteină specifică care se află la suprafața eritrocitelor din sângele Rh pozitiv. Există două tipuri de acest test: direct - detectarea anticorpilor pe suprafața globulelor roșii, indirect - detectarea anticorpilor în serul sanguin. Un test direct este efectuat în diagnosticarea și monitorizarea tratamentului bolilor de sânge: anemie hemolitică, boala hemolitică a nou-născutului și altele. Se efectuează un test indirect pentru a evalua compatibilitatea sângelui donatorului și al primitorului în timpul transfuziei, precum și pentru a determina prezența și riscul de conflict Rh la planificarea și gestionarea sarcinii. Materialul pentru testul Coombs este sânge venos, studiul se realizează prin metode bazate pe reacția de aglutinare. În mod normal, ambele teste dau un rezultat negativ. Analiza se efectuează într-o zi. În total, au fost 87 de adrese la Moscova unde s-ar putea face această analiză.

- un test antiglobulinic care vizează detectarea în sângele Rh negativ a anticorpilor antieritrocitari incompleti la factorul Rh - o proteină specifică care se află la suprafața eritrocitelor din sângele Rh pozitiv. Există două tipuri de acest test: direct - detectarea anticorpilor pe suprafața globulelor roșii, indirect - detectarea anticorpilor în serul sanguin. Un test direct este efectuat în diagnosticarea și monitorizarea tratamentului bolilor de sânge: anemie hemolitică, boala hemolitică a nou-născutului și altele. Se efectuează un test indirect pentru a evalua compatibilitatea sângelui donatorului și al primitorului în timpul transfuziei, precum și pentru a determina prezența și riscul de conflict Rh la planificarea și gestionarea sarcinii. Materialul pentru testul Coombs este sânge venos, studiul se realizează prin metode bazate pe reacția de aglutinare. În mod normal, ambele teste dau un rezultat negativ. Analiza se efectuează într-o zi.

Testul Coombs este o examinare clinică a sângelui Rh negativ, care vizează detectarea anticorpilor la factorul Rh. Testul este utilizat pentru a identifica riscul de a dezvolta un conflict Rhesus și reacții hemolitice. La fiecare persoană, suprafața eritrocitelor conține un anumit set de antigeni sau aglutinogeni - compuși de natură variată, a căror prezență sau absență este utilizată pentru a judeca grupa de sânge și factorul Rh. Există multe tipuri de antigene, în practica medicală, aglutinogenii A și B, care determină grupa sanguină, iar aglutinogenul D, factorul Rh, au cea mai mare importanță practică. Cu un factor Rh pozitiv, antigenele D sunt detectate pe membrana exterioară a eritrocitelor, cu un negativ - nr.

Testul Coombs, numit și test antiglobulină, are ca scop detectarea anticorpilor anti-eritrocitari incompleti la sistemul factorului Rh din sânge. Anticorpii la factorul Rh sunt imunoglobuline specifice care sunt produse în sângele Rh negativ atunci când intră în el eritrocitele cu aglutinogeni D. Acest lucru poate apărea atunci când sângele fătului și al gravidei este amestecat, cu transfuzii de sânge efectuate fără gruparea prealabilă a sângelui. Testul Coombs există în două versiuni - directă și indirectă. Când se efectuează un test Coombs direct, anticorpii sunt detectați atașați la suprafața globulelor roșii. Studiul este utilizat pentru a determina cauza reacției hemolitice. Testul indirect Coombs are ca scop detectarea anticorpilor anti-eritrocitari în plasma sanguină. Este necesar să se determine compatibilitatea sângelui donatorului și al primitorului sau al mamei și al fătului, ajută la prevenirea dezvoltării conflictului Rhesus și a hemolizei ulterioare a globulelor roșii.

Sângele pentru ambele variante ale testului Coombs este prelevat dintr-o venă. Analiza se face prin metoda aglutinarii folosind ser antiglobulinic. Rezultatele studiului sunt utilizate în hematologie în identificarea cauzelor reacțiilor hemolitice, în chirurgie și resuscitare în timpul transfuziilor de sânge, în obstetrică și ginecologie în monitorizarea sarcinilor la femeile cu sânge Rh negativ.

Indicatii

Testul Coombs direct, care detectează anticorpii atașați la suprafața globulelor roșii, este prescris pentru reacții hemolitice (distrugerea globulelor roșii) de diferite origini. Studiul este indicat pentru anemie hemolitică autoimună primară, anemie hemolitică post-transfuzie, boala hemolitică a nou-născutului, hemoliza celulelor roșii din sânge cauzată de boli autoimune, neoplazice sau infecțioase, precum și pentru administrarea de medicamente, de exemplu chinidină, metildopa, procainamidă. . Testul indirect Coombs, care detectează anticorpii în plasma sanguină, este utilizat pentru a preveni dezvoltarea conflictului Rhesus. Este indicat pacienților în pregătire pentru transfuzii de sânge, precum și femeilor însărcinate cu factor Rh negativ, cu condiția ca viitorul tată al copilului să aibă factor Rh pozitiv.

Pentru a determina compatibilitatea Rh, testul Coombs nu este administrat pacienților cu sânge Rh pozitiv. În aceste cazuri, există deja antigene pe suprafața globulelor roșii, producția de anticorpi nu poate fi declanșată de transfuzia de sânge sau de pătrunderea sângelui fetal în sângele gravidei. De asemenea, studiul nu este indicat femeilor însărcinate dacă ambii părinți au un factor Rh negativ, o trăsătură recesivă moștenită. Un copil din astfel de cupluri are întotdeauna sânge Rh negativ, un conflict imunologic cu mama este imposibil. În patologiile hemolitice, testul antiglobulinei nu este utilizat pentru a monitoriza succesul terapiei, deoarece rezultatele nu reflectă activitatea procesului de distrugere a eritrocitelor.

Limitarea testului Coombs este complexitatea procedurii de cercetare - pentru a obține rezultate fiabile, este necesar să se respecte condițiile de temperatură și timp, regulile de preparare a reactivilor și biomaterialului. Avantajul testului Coombs este sensibilitatea sa ridicată. În anemia hemolitică, rezultatele acestui test rămân pozitive, chiar dacă hemoglobina, bilirubina și reticulocitele revin la normal.

Pregatirea pentru analiza si colectarea materialului

Materialul pentru efectuarea testului Coombs este sângele venos. Nu există cerințe speciale pentru timpul procedurii de prelevare de sânge și pentru pregătirea pacientului. Ca în cazul oricărui studiu, se recomandă să faceți o pauză după ce ați mâncat cel puțin 4 ore, iar în ultimele 30 de minute să renunțați la fumat, să faceți exerciții fizice și să evitați stresul emoțional. De asemenea, merită să discutați cu medicul dumneavoastră în prealabil necesitatea de a înceta să luați medicamente - unele medicamente pot distorsiona rezultatele testului Coombs. Sângele este luat cu o seringă din vena cubitală, mai rar dintr-o venă de pe dosul mâinii. În câteva ore, materialul este livrat la laborator.

La efectuarea unui test Coombs direct, serul antiglobulinic este adăugat în serul sanguin al pacientului. După ceva timp, amestecul este examinat pentru prezența aglutinaților - aceștia se formează dacă există anticorpi pe globulele roșii. Cu un rezultat pozitiv, se determină un titru aglutinant. Testul indirect Coombs constă din mai mulți pași. În primul rând, anticorpii prezenți în ser sunt fixați pe eritrocitele injectate în timpul incubației. Apoi se adaugă ser antiglobulinic în probă, după un timp se determină prezența și titrul aglutinaților. Perioada de analiză este de 1 zi.

Rezultate normale

În mod normal, rezultatul testului Coombs direct este negativ (-). Aceasta înseamnă că nu există anticorpi asociați cu celulele roșii din sânge în sânge și nu pot fi cauza hemolizei. Rezultatul normal al testului Coombs indirect este, de asemenea, negativ (-), adică nu există anticorpi împotriva factorului Rh în plasma sanguină. Atunci când se pregătește pentru transfuzia de sânge pentru primitoare, aceasta înseamnă compatibilitate cu sângele donatorului, în timp ce monitorizează sarcina - absența sensibilizării Rh a mamei, un risc scăzut de a dezvolta un conflict imunologic. Factorii fiziologici, cum ar fi obiceiurile alimentare sau activitatea fizică, nu pot afecta rezultatul testului. Prin urmare, dacă rezultatul este pozitiv, este necesară consultarea unui medic.

Valoarea diagnostică a analizei

Un rezultat pozitiv al testului Coombs este exprimat calitativ, de la (+) la (++++), sau cantitativ, în titruri de la 1:16 la 1:256. Determinarea concentrației de anticorpi pe eritrocite și în serul sanguin se realizează în ambele tipuri de probe. Cu un rezultat pozitiv al testului Coombs direct, anticorpii sunt detectați pe membrana exterioară a globulelor roșii, ceea ce duce la distrugerea acestor celule sanguine. Cauza poate fi o transfuzie de sânge fără tipizare prealabilă - o reacție hemolitică post-transfuzie, precum și eritroblastoza neonatală, o reacție hemolitică datorată utilizării de medicamente, anemie hemolitică autoimună primară sau secundară. Distrugerea secundară a eritrocitelor poate fi cauzată de lupus eritematos sistemic, sindrom Evans, macroglobulinemie Waldenström, hemoglobinurie paroxistică rece, leucemie limfocitară cronică, limfom, mononucleoză infecțioasă, sifilis, pneumonie micoplasmatică.

Un rezultat pozitiv al testului Coombs indirect indică prezența anticorpilor la factorul Rh în plasmă. În practică, aceasta înseamnă că a avut loc sensibilizarea Rh, există posibilitatea dezvoltării unui conflict Rh după perfuzia de sânge de la donator în timpul sarcinii. Pentru a preveni complicațiile sarcinii, femeile cu un rezultat pozitiv la testul Coombs sunt plasate în evidențe speciale.

Tratarea abaterilor de la normă

Testul Coombs se referă la studii izoserologice. Rezultatele sale permit identificarea unei reacții hemolitice, precum și determinarea compatibilității sângelui donatorului și primitorului, mamei și fătului, pentru a preveni dezvoltarea conflictului Rhesus. Dacă rezultatul testului este pozitiv, atunci este necesar să solicitați sfatul medicului curant - obstetrician-ginecolog, hematolog, chirurg.

Anticorpi situat pe suprafața eritrocitelor, poate fi atât în ​​stare statică, cât și în stare liberă în plasma din sânge. În funcție de starea anticorpilor, se realizează o reacție Coombs directă sau indirectă. Dacă există motive să credem că anticorpii sunt fixați pe suprafața globulelor roșii, se efectuează un test Coombs direct. În acest caz, testul trece într-o singură etapă - se adaugă ser antiglobulinic. Dacă pe suprafața globulelor roșii sunt prezenți anticorpi incompleti, aglutinare eritrocite.

Reacție indirectă

Reacția indirectă Coombs are loc în 2 pași. În primul rând, este necesar să se implementeze artificial sensibilizare eritrocite. Pentru a face acest lucru, se incubează eritrocitele și serul sanguin studiat, ceea ce determină fixarea anticorpilor pe suprafața eritrocitelor. După aceea, se efectuează a doua etapă a testului Coombs - adăugarea de ser antiglobulină.

reacție de precipitare - RP (din Lat praecipilo to precipitate) este formarea si precipitarea unui complex de antigen molecular solubil cu anticorpi sub forma de turbiditate, numit precipitat. Se formează prin amestecarea antigenelor și anticorpilor în cantități echivalente, un exces al unuia dintre aceștia reduce nivelul de formare a complexului imun. Reacția de precipitare se pune în eprubete (reacție de precipitare circulară), în geluri, medii nutritive etc. Sunt utilizate pe scară largă varietăți de reacții de precipitare într-un gel semilichid de agar sau agaroză, imunodifuziune dublă conform Ouchterlony, imunodifuzie de radiu, imunoelectroforeză si etc.

Reacția de precipitare inelară. Reacția se efectuează în tuburi de precipitare înguste: un antigen solubil este stratificat pe serul imunitar. Cu un raport optim de antigen și anticorpi, la limita acestor două soluții se formează un strat opac. inel precipitat. Dacă extractele de țesut fierte și filtrate sunt folosite ca antigene în reacție, atunci o astfel de reacție se numește reacția I-termoprecipitare (o reacție în care este detectată haptena de antrax).
Reacție de imunodifuzie dublă Ouchterlony. Pentru a stabili reacția, gelul de agar topit este turnat într-un strat subțire pe o placă de sticlă, iar după solidificare, se decupează găuri în el. Antigenele și serurile imune sunt plasate separat în godeurile gelului, care difuzează unul spre celălalt. La punctul de întâlnire în proporții echivalente, ele formează un precipitat sub forma unei benzi albe. În sistemele multicomponente, între godeurile cu antigeni și anticorpi apar mai multe linii de precipitat; în AG identice, liniile de precipitat se îmbină; în AG-uri neidentice, acestea se intersectează.
Reacție de imunodifuzie radială. Serul imunitar cu gel de agar topit este turnat uniform pe pahar. După solidificare în gel, se fac godeuri în care antigenul este plasat în diferite diluții. Antigenul, difuzând în gel, formează zone inelare de precipitare în jurul godeurilor cu anticorpi. Diametrul inelului de precipitare este proporțional cu concentrația de antigen. Reacția este utilizată pentru a determina în serul sanguin imunoglobuline de diferite clase, componente ale sistemului complement etc.
Imunoelectroforeza- o combinație a metodei de electroforeză și imunoprecipitare: un amestec de antigeni este introdus în godeurile gelului și separat în gel folosind electroforeză, apoi imunoserum este introdus în șanțul paralel cu zonele de electroforeză, ai căror anticorpi difuzează în gelul și formează o linie de precipitare la locul de „întâlnire” cu antigenul.
reacție de floculare(după Ramon) (din lat. f1oecus - fulgi de lână) - apariția opalescenței sau a masei fulgioase (imunoprecipitare) într-o eprubetă în timpul reacției toxină - antitoxină sau toxoid - antitoxină. Este utilizat pentru determinarea activității serului antitoxic sau a toxoidului.

Tastarea HLA- studiul complexului principal de histocompatibilitate umană - complexul HLA. Această formațiune include o regiune de gene de pe cromozomul 6 care codifică antigenele HLA implicate în diferite răspunsuri imune.

Sarcini la Tastarea HLA poate fi foarte diferită - identificarea biologică (tipul HLA se moștenește împreună cu genele parentale), determinarea predispoziției la diferite boli, selecția donatorilor pentru transplantul de organe - în acest caz, se compară rezultatele tipării HLA a țesuturilor donatorului și primitorului. Cu ajutorul tipării HLA se determină cât de asemănători sau diferiți sunt soții în ceea ce privește antigenele de compatibilitate tisulară pentru a diagnostica cazurile de infertilitate.

Tastarea HLA sugerează Analiza polimorfismului HLAși se realizează prin două metode - serologică și genetică moleculară. Metoda serologică clasică de tipare HLA se bazează pe testul microlimfocitotoxic, în timp ce metoda moleculară utilizează PCR (reacția în lanț a polimerazei).

Serologic Tastarea HLA efectuate pe populații de celule izolate. Antigenele complexe majore de histocompatibilitate sunt transportate în principal de limfocite. Prin urmare, o suspensie de limfocite T este utilizată ca purtători principali ai antigenelor de clasa I și o suspensie de limfocite B pentru determinarea antigenelor HLA clasa II. Se utilizează fie centrifugarea, fie separarea imunomagnetică pentru a izola populațiile de celule dorite din sângele integral. Se crede că prima metodă poate duce la date fals pozitive, deoarece unele dintre celule mor în acest caz. A doua metodă este recunoscută ca fiind mai specifică - în timp ce mai mult de 95% din celule rămân viabile.

Dar baza pentru stabilirea unui test limfocitotoxic Tastarea HLA este un ser specific care conține anticorpi la diferite variante alelice ale antigenelor HLA clase I și II. Testul serologic vă permite să determinați tipul HLA examinând care dintre seruri reacționează cu limfocitele și care nu.

Dacă are loc o reacție între celule și ser, pe suprafața celulei se formează un complex antigen-anticorp. După adăugarea unei soluții care conține complement, au loc liza și moartea celulară. Testul serologic de tipare HLA este evaluat folosind microscopia cu fluorescență pentru a evalua reacțiile pozitive (fluorescență roșie) și negative (fluorescență verde), sau microscopia cu contrast de fază pentru a colora nucleele celulelor moarte. Rezultatul tipării HLA este derivat ținând cont de specificitatea serurilor reacționate și a grupurilor de antigene cu reacție încrucișată, de intensitatea reacției de citotoxicitate.

Dezavantajele serologice Tastarea HLA sunt prezența reacțiilor încrucișate, afinitatea slabă a anticorpilor sau expresia scăzută a antigenelor HLA, absența produselor proteice într-un număr de gene HLA.

Metode moleculare mai moderne Tastarea HLA se folosesc probe sintetice deja standardizate, care nu reacţionează cu antigenele de pe suprafaţa leucocitelor, ci cu ADN-ul şi indică direct ce antigene sunt prezente în probă. Metodele moleculare nu necesită leucocite vii, orice celulă umană poate fi studiată și câțiva microlitri de sânge sunt suficienți pentru a funcționa sau se poate limita la răzuirea de pe mucoasa bucală.

Genetică moleculară Tastarea HLA folosește metoda PCR, al cărei prim pas este obținerea ADN-ului genomic pur (din sânge integral, suspensie de leucocite, țesuturi).

Apoi proba de ADN este copiată - amplificată într-o eprubetă folosind primeri (ADN monocatenar scurt) specifici unui locus HLA specific. Capetele fiecărei perechi de primeri trebuie să fie strict complementare unei secvențe unice corespunzătoare unei anumite alele, altfel nu are loc amplificarea.

După PCR, în timpul copierii repetate, se obține un număr mare de fragmente de ADN, care pot fi evaluate vizual. Pentru a face acest lucru, amestecurile de reacție sunt supuse electrolizei sau hibridizării și se determină dacă a avut loc o amplificare specifică folosind un program sau un tabel. Rezultatul tipării HLA este prezentat sub forma unui raport cuprinzător la nivel de genă și alelic. Datorită standardizării probelor utilizate, molecular Tastarea HLA mai precis serologic. În plus, oferă mai multe informații (mai multe alele ADN noi) și un nivel mai ridicat de detaliu, deoarece vă permite să identificați nu numai antigenele, ci și alelele în sine, care determină ce antigen este prezent pe celulă.

reacție de liză imună. Reacția se bazează pe capacitatea anticorpilor specifici de a forma complexe imune cu celulele, inclusiv eritrocite, bacterii, ceea ce duce la activarea sistemului complementului de-a lungul căii clasice și la liza celulară. Dintre reacțiile de liză imună, cel mai des este utilizată reacția de hemoliză și rar reacția de bacterioliză (în principal în diferențierea holerei și vibrioanele asemănătoare holerei).

reacție de hemoliză. Sub influența reacției cu anticorpi în prezența complementului, suspensia tulbure de eritrocite se transformă într-un lichid transparent roșu strălucitor - „sânge lac” datorită eliberării hemoglobinei. La stabilirea unei reacții de diagnostic de fixare a complementului (RCC), reacția de hemoliză este utilizată ca indicator: pentru a testa prezența sau absența (legarea) complementului liber.

Reacție locală de hemoliză în gel(reacția Jerne) este una dintre variantele reacției de hemoliză. Vă permite să determinați numărul de celule care formează anticorpi. Numărul de celule care secretă anticorpi - hemolizine, este determinat de numărul de plăci de hemoliză care apar într-un gel de agar care conține eritrocite, o suspensie celulară a țesutului limfoid studiat și complement.

Metoda imunofluorescenței

(RIF, reacție de imunofluorescență) - o metodă pentru detectarea Ag specific (Ab) folosind Ab (Ag) conjugat cu fluorocrom. Are sensibilitate și specificitate ridicate. Este folosit pentru infecții expres d-ki. boli (identificarea agentului cauzal în materialul de cercetare), precum și pentru determinarea anticorpilor și a receptorilor de suprafață și a markerilor leucocitelor (imunofenotiparea) și a altor celule. Direct I. m. constă în prelucrarea unei secțiuni de țesut sau frotiu din material patologic sau to-ry microbian cu coy care conține anticorpi specifici conjugați cu fluorocrom; medicamentul este spălat pentru a elimina anticorpii nelegați și examinat la microscop fluorescent. În cazuri pozitive, la periferia obiectului apare un complex imunitar luminos. Controlul este necesar pentru a exclude luminiscența nespecifică. La indirect. Lor.în prima etapă, o secțiune de țesut sau frotiu este tratată cu un agent specific nefluorescent, în a doua etapă, cu un agent luminiscent împotriva -globulinelor acelui animal, care a fost aplicat în prima etapă. Într-un caz pozitiv, se formează un complex luminos, format din Ar, Am to it și Am contra At (metoda sandwich). În plus față de un microscop luminiscent, pentru a ține cont de RIF în timpul fenotipării celulare, sortator de celule laser .

citometrie în flux- o metodă de măsurare optică a parametrilor unei celule, ai organelelor acesteia și a proceselor care au loc în ea.

Tehnica constă în detectarea împrăștierii luminii dintr-un fascicul laser atunci când o celulă trece printr-un jet de lichid, iar gradul de dispersie a luminii permite să ne facem o idee despre dimensiunea și structura celulei. În plus, analiza ține cont de nivelul de fluorescență al compușilor chimici care alcătuiesc celula (autofluorescență) sau introduși în probă înainte de citometria în flux.

Suspensia celulară, marcată anterior cu anticorpi monoclonali fluorescenți sau coloranți fluorescenți, intră în fluxul de lichid care trece prin celula de curgere. Condițiile sunt selectate în așa fel încât celulele să se alinieze una după alta datorită așa-numitelor. focalizarea hidrodinamică a unui jet într-un jet. În momentul în care celula traversează fasciculul laser, detectoarele înregistrează:

împrăștierea luminii la unghiuri mici (de la 1° la 10°) (această caracteristică este folosită pentru a determina dimensiunea celulelor).

împrăștierea luminii la un unghi de 90° (vă permite să judecați raportul dintre nucleu / citoplasmă, precum și eterogenitatea și granularitatea celulelor).

intensitatea fluorescenței în mai multe canale de fluorescență (de la 2 la 18-20) - vă permite să determinați compoziția subpopulației suspensiei celulare etc.

Pe o farfurie sau lamă de sticlă se aplică cu pipete (diferite!) 1 picătură mare de ser O (I), A (II), B (III). Observând timpul, cu o tijă de sticlă curată sau un unghi curat al lamei de sticlă, picăturile de ser se combină cu picături de sânge. Determinarea durează 5 minute, scuturând placa, apoi se adaugă 1 picătură de soluție salină la fiecare amestec de picături și se evaluează rezultatele. Este mai bine dacă serul este în 2 serii diferite. Rezultatele grupelor de sânge trebuie să se potrivească în ambele serii de ser.

Evaluarea rezultatelor izohemaglutinării:

izohemaglutinare. Cu o reacție pozitivă, în amestec apar mici granule roșii de globule roșii lipite. Boabele se contopesc în boabe mai mari, iar acestea din urmă în fulgi. Serul este aproape decolorat;

cu o reacție negativă, amestecul rămâne uniform colorat roz timp de 5 minute și nu sunt detectate boabe;

când se lucrează cu 3 seruri din grupele O(I), A(II), B(III), sunt posibile 4 combinații de reacții:

1. dacă toate cele 3 seruri au dat o reacție negativă, adică amestecul este colorat uniform în roz - acesta este grupa sanguină O (I);

   dacă numai serul grupului A (II) a dat o reacție negativă, iar serurile O (I) și B (III) au dat o reacție pozitivă, adică au apărut boabe - aceasta este grupa sanguină A (II);

   serul grupului B(II) a dat o reacție negativă, iar serurile grupelor O(I) și A(II) au dat o reacție pozitivă - aceasta este grupa sanguină B(III).

toate cele 3 seruri au dat reacții pozitive - sângele testat din grupul AB (IV). În acest caz, se efectuează un studiu cu serul grupului AB (IV).

Notă! Picăturile de sânge studiat trebuie să fie de 5-10 ori mai mici decât picăturile de ser.

Erori de izohemaglutinare.

Neaglutinarea unde ar trebui să fie și având aglutinarea acolo unde nu ar trebui. Acest lucru se poate datora titrului seric scăzut plus aglutinarea slabă a eritrocitelor.

Prezența aglutinarii acolo unde nu ar trebui să fie- aceasta este pseudoaglutinarea, când grămezi de eritrocite formează „coloane de monede”. Legănarea farfurii sau adăugarea de soluție salină le distruge.

Panaglutinare, când serul lipește toate celulele roșii din sânge, inclusiv propria sa grupă de sânge. Până în minutul 5, semnele de aglutinare dispar.

Există și așa-numita panaglutinare la rece, când eritrocitele se lipesc împreună din cauza temperaturii scăzute a aerului (sub 15 ° C) din cameră.

În toate aceste cazuri, fie se efectuează o reacție repetată, fie conform eritrocitelor standard.

Determinarea afilierii Rh a sângelui

Pentru a determina afilierea Rh, adică pentru a detecta prezența sau absența antigenelor sistemului Rh în sângele oamenilor, se folosesc seruri (reactivi) standard anti-Rhesus, care sunt diferite ca specificitate, adică conțin anticorpi în raport cu diverși antigeni ai acestui sistem. Pentru a determina antigenul Rh 0 (D), serul anti-Rhesus este folosit cel mai adesea cu adăugarea unei soluții de gelatină 10% sau se folosește un reactiv anti-Rhesus standard preparat în prealabil cu o soluție de poliglucină 33%. Pentru a obține rezultate mai precise ale studiului, precum și pentru a detecta antigenele altor sisteme serologice, se folosește testul Coombs (este și foarte sensibil în determinarea compatibilității sângelui transfuzat). Pentru studiu se folosește sânge nativ sau preparat cu un fel de conservant. În acest caz, sângele trebuie spălat din conservant cu un volum de zece ori soluție izotonică de clorură de sodiu. La determinarea afilierii Rh- Rh 0 (D) trebuie utilizate două probe de ser sau reactiv anti-Rhesus din două serii diferite și, în același timp, eritrocitele standard obținute din sânge de la indivizi Rh-pozitiv (Rh +) și Rh-negativ (Rh -) trebuie să fie utilizate. fi folosit pentru control. La determinarea altor izoantigene, trebuie utilizate în mod corespunzător eritrocitele de control, care conțin sau nu au antigenul împotriva căruia anticorpii sunt direcționați în serul standard.

Aglutininele de căldură incomplete sunt cel mai frecvent tip de anticorp care poate provoca dezvoltarea anemiei hemolitice autoimune. Acești anticorpi aparțin IgG, rar - IgM, IgA.

TEST COOMBS

Testul lui Coombs: o introducere. Testul Coombs este o metodă de diagnostic de laborator bazată pe reacția de hemaglutinare.

Principala metodă de diagnosticare a anemiei hemolitice autoimune este testul Coombs. Se bazează pe capacitatea anticorpilor specifici imunoglobulinelor (în special IgG) sau componentelor complementului (în special C3) de a aglutina eritrocitele acoperite cu IgG sau C3.

Legarea IgG și C3b la eritrocite este observată în anemia hemolitică autoimună și anemia hemolitică imună indusă de medicamente. Testul Coombs direct. Testul Coombs direct este utilizat pentru a detecta anticorpii sau componentele complementului fixate pe suprafața globulelor roșii. Se realizează astfel:

Pentru a obține anticorpi la imunoglobulinele umane (ser antiglobuline) sau complement (ser anticomplementar), animalul este imunizat cu ser uman, imunoglobuline sau complement uman. Serul obtinut de la animal este purificat de anticorpi la alte proteine.

Eritrocitele pacientului sunt spălate cu ser fiziologic pentru a elimina complet serul, care neutralizează anticorpii la imunoglobuline și complement și poate provoca un rezultat fals negativ.

Dacă anticorpii sau componentele complementului sunt fixați pe suprafața eritrocitelor, adăugarea de antiglobuline sau de ser anticomplementar determină aglutinarea eritrocitelor.

Testul Direct Coombs este utilizat în următoarele cazuri:

hemoliză autoimună.

Boala hemolitică a nou-născutului.

Anemia hemolitică imună indusă de medicamente.

Reacții hemolitice de transfuzie. Testul Coombs indirect. Testul indirect Coombs detectează anticorpi la eritrocite din ser. Pentru a face acest lucru, serul pacientului este incubat cu eritrocite donatoare de grup 0, apoi se efectuează un test Coombs direct.

Testul Coombs indirect este utilizat în următoarele cazuri:

Determinarea compatibilității individuale a sângelui donatorului și al primitorului.

Detectarea aloanticorpilor, inclusiv a anticorpilor care provoacă reacții hemolitice de transfuzie.

Determinarea antigenelor eritrocitare de suprafață în genetica medicală și medicina legală.

Confirmarea gemenilor identici în transplant de măduvă osoasă.

Pentru a efectua un test biologic, sângele este transfuzat cât mai repede posibil (de preferință într-un jet). După transfuzia a 25 ml de sânge, tubul sistemului este prins cu o clemă. Apoi se face o pauză de 3 minute, timp în care se monitorizează starea destinatarului. Pentru a stabili o probă biologică, se injectează de trei ori 25 ml de sânge. La sfârșitul testului (după transfuzia primilor 75 ml de sânge în doze fracționate de 25 ml la intervale de 3 minute), sistemul este ajustat la viteza de transfuzie necesară. La transfuzia unui pacient cu mai mult de un flacon de sânge, este necesar să se scoată acul din venă. În acest caz, acul este scos din eprubeta flaconului în care s-a scurs sângele și este introdus în următorul flacon. Tubul de sistem (cauciuc sau plastic) este prins în acest moment cu o clemă. Dacă în timpul unei transfuzii de sânge este nevoie de administrarea intravenoasă a oricărui alt medicament către primitor, aceasta se face prin străpungerea tubului de cauciuc al sistemului. Puncturile unui tub de plastic sunt inacceptabile, deoarece nu cad. După fiecare transfuzie de sânge, pacientul trebuie monitorizat pentru a identifica și a elimina în timp util posibilele complicații, inclusiv reacțiile alergice. Temperatura corpului trebuie măsurată la 2 ore după terminarea transfuziei de sânge. Odată cu creșterea măsurării sale, trebuie repetată în următoarele 4 ore la fiecare oră. La fel de importantă este monitorizarea urinării și a compoziției urinei, ceea ce face posibilă stabilirea prezenței unei reacții toxice post-transfuzie. Debutul oliguriei și anuriei după transfuzia de sânge, prezența elementelor formate de sânge și proteine ​​în urină sunt un indiciu direct al dezvoltării hemolizei post-transfuzie.

Testul Coombs- analiză pentru detectarea anticorpilor atașați la suprafață sau dizolvați în plasmă. Cu ajutorul acestuia, sunt detectate imunizarea și anticorpii la celulele roșii din sânge. Al doilea nume este testul antiglobulinei. Se întâmplă direct și indirect.

La testul direct cu antiglobulina detectează anticorpii fixați pe suprafața eritrocitelor. Se efectuează cu suspiciune de, cu alte boli autoimune, după administrarea de medicamente (metildopa, penicilină, chinină) și.

Eritrocitele au fost sensibilizate in vivo - anticorpii sunt deja ferm atașați de ele, iar adăugarea de ser antiglobulinic (anti-IgG) face ca celulele sensibilizate să se lipească împreună, ceea ce este vizibil cu ochiul liber.

Testul Coombs indirect detectează anticorpi antieritrocitari în plasma sanguină, se efectuează înaintea transfuziei de sânge și în timpul.

Anticorpi anti-eritrocitari - un tip de autoanticorp, de ex. anticorpi împotriva propriilor țesuturi. Un autoanticorp apare atunci când sistemul imunitar este anormal de reactiv la anumite medicamente, cum ar fi doze mari de penicilină.

Eritrocitele pe suprafața lor conțin diferite structuri chimice (glicolipide, zaharide, glicoproteine ​​și proteine), care sunt numite antigene în medicină. O persoană moștenește de la părinții săi o anumită hartă a antigenelor de pe fiecare globule roșie.

Antigenele sunt combinate în grupuri și, alături de aceasta, sângele este împărțit în mai multe grupuri - conform sistemului AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Cele mai faimoase și semnificative în activitatea unui medic sunt AB0 și factorul Rh (Rh).

sistemul AB0

Rh-afilierea unei persoane este determinată de prezența acestor antigene. Un antigen eritrocitar deosebit de important este antigenul D. Dacă este prezent, atunci se vorbește despre Rh-pozitiv sânge RhD, iar dacă nu este - despre Rh negativ Rhd.

Dacă anticorpul corespunzător se unește cu antigenele eritrocitelor, atunci eritrocitul este distrus - va exista hemoliza.

Indicatii

Indicația principală pentru directtestul antiglobulinei- Suspiciunea de anemie hemolitică. Cel mai adesea se efectuează cu anemie hemolitică autoimună primară, hemoliză în boli reumatice, neoplazice, infecțioase, hemoliză cauzată de medicamente.

Dacă anemia apare la câteva zile sau luni după o transfuzie de sânge sau cu icter prelungit la un nou-născut, se face și un test Coombs direct.

Indirectefectuat testul antiglobulineiînainte de transfuzia de sânge și în timpul sarcinii unei femei Rh negativ.

Anemia hemolitică autoimună

Anemia hemolitică autoimună (primară) este o boală autoimună clasică cu cauze necunoscute. Interacțiunea în cadrul sistemului imunitar este perturbată, ceea ce duce la percepția propriilor eritrocite ca străine. În ganglionii limfatici sunt sintetizați anticorpi din clasa IgG (reacționează la t 37 ° C) și/sau IgM (la t 40 ° C), care, atunci când sunt atașați la suprafața eritrocitelor, declanșează o serie de enzime ( sistemul de complement) și „perforează” peretele eritrocitar, ceea ce duce la distrugerea acestuia – hemoliză.

Primele simptome se datorează atât distrugerii celulelor roșii din sânge, cât și scăderii hemoglobinei. Printre ei:

• oboseală, slăbiciune generală, iritabilitate
• dispnee
• dureri abdominale și toracice, greață
• culoare închisă a urinei
• dureri de spate
• colorarea icterică a pielii și a mucoaselor
• o scădere a numărului de eritrocite și

rezultat direct pozitiv Testul Coombs 100% confirmă diagnosticul de anemie hemolitică autoimună, dovedind originea sa autoimună. În același timp, un rezultat negativ nu face posibilă eliminarea diagnosticului.

Anemia hemolitică secundară

Anemia hemolitică autoimună secundară și un test Coombs pozitiv pot fi cu următoarele boli:

• sindromul Evans
• infecție cu pneumonie

Un test pozitiv la antiglobulină în aceste boli este unul dintre simptome, nu un criteriu de diagnostic.

Boala hemolitică a nou-născutului

Cauză boala hemolitică a nou-născutului incompatibilitatea grupei sanguine la mamă și făt, în majoritatea cazurilor conform sistemului Rh, în cazuri unice - conform sistemului AB0, cazuistic - conform altor antigene.

Conflictul Rh se dezvoltă dacă la o femeie Rh negativ fătul a moștenit sânge Rh pozitiv de la tatăl ei.

Boala la un nou-născut se dezvoltă numai dacă mama a dezvoltat deja anticorpi la antigenele corespunzătoare, ceea ce se întâmplă după sarcini anterioare, avorturi, transfuzii de sânge incompatibil. Cel mai frecvent motiv pentru declanșarea sintezei de anticorpi la antigenele membranei eritrocitare este nașterea (sângerarea feto-maternă). Primele nașteri trec în general fără complicații, dar nașterile ulterioare sunt pline de boală hemolitică a nou-născutului în primele zile după naștere.

Simptomele bolii hemolitice a nou-născutului:

• îngălbenirea pielii
• , și mucoasă
• mărirea ficatului și a splinei
• tulburări respiratorii
• umflarea întregului corp
• excitația și deprimarea treptată a sistemului nervos central

Anemia după transfuzie de sânge

Testul Coombs indirect efectuat înainte de transfuzia de sânge pentru a evalua compatibilitatea și un test Coombs direct - după acesta dacă se suspectează hemoliză post-transfuzie, adică dacă aveți simptome precum febră, udare (citiți mai jos). Scopul testului este de a detecta anticorpi la eritrocite transfuzate care s-au legat de eritrocitele primitorului și sunt cauza hemolizei post-transfuzie, precum și îndepărtarea prematură a globulelor roșii donatoare din fluxul sanguin al primitorului (cel care a primit sânge).

Simptome:

• creșterea temperaturii corpului
• erupție pe piele
• dureri de spate
• roșu
• greaţă
• ameţeală

Decriptare

Merită să reamintim că regulile fundamentale pentru decodarea testelor antiglobuline directe și indirecte sunt aceleași. Singura diferență este localizarea anticorpilor - în sânge sau deja pe eritrocit.

• dacă testul Coombs direct este negativ- înseamnă că anticorpul nu se „așează” pe eritrocite și trebuie căutată în continuare cauza simptomelor și trebuie efectuat un test Coombs indirect
• dacă un rezultat pozitiv al testului Coombs este detectat după o transfuzie de sânge, infecții, medicamente - pozitivitatea durează până la 3 luni (durata de viață a eritrocitelor 120 de zile - 3 luni)
• un rezultat pozitiv al testului antiglobulină într-o boală autoimună durează luni și chiar ani

Normă

• test Coombs direct - negativ
• testul Coombs indirect - negativ

Calitativ, un rezultat pozitiv este măsurat în numărul de plusuri de la unu la patru (+, ++, +++, ++++), iar cantitativ în formă digitală - 1:16, 1:256 etc.

Da. Faptul că ați primit o transfuzie de sânge trebuie să fie cunoscut de medicul dumneavoastră, deoarece afectează interpretarea corectă a rezultatelor testelor acum. Când primiți sângele altcuiva (deși de multe ori testat), există întotdeauna posibilitatea ca organismul dumneavoastră să dezvolte anticorpi împotriva sângelui transfuzat. Acești anticorpi vor avea un impact negativ asupra sănătății. Cu transfuziile de sânge ulterioare, medicul trebuie să știe că ați primit deja transfuzii, ceea ce înseamnă că a fost timp pentru sinteza anticorpilor. Pentru femeile însărcinate, aceste informații sunt și mai relevante.

3. Dacă există o nepotrivire a factorului Rh între mamă și copil, toți copiii vor fi bolnavi?

Depinde dacă copilul este Rh pozitiv sau negativ (RhD). Purtătorii de sânge de tip I, II, III și IV pot fi atât Rh-pozitivi, cât și negativi. Într-o situație în care mama este Rh negativ și copilul este Rh pozitiv, anticorpii vor fi produși deja cu prima sarcină, dar numai după prima naștere (sau întreruperea sarcinii) va exista contact direct între sângele mama si copilul. Implementarea efectului hemolitic al anticorpilor va fi numai în a doua naștere și în cele ulterioare, ceea ce va duce la boală hemolitică la nou-născut.

Fiecare femeie cu un factor Rh negativ trebuie examinată cu atenție în timpul sarcinii, iar după naștere se efectuează un tratament preventiv pentru a preveni apariția anticorpilor și a complicațiilor ulterioare.

4. În timpul sarcinii, este necesar să se cunoască grupa sanguină a soțului înainte de a efectua testul Coombs?

Este necesar nu numai să cunoașteți, ci și să verificați grupa de sânge a tatălui biologic al copilului în timpul sarcinii.

Date

• propus pentru prima dată la Cambridge în 1945
• pragul de sensibilitate - cel puțin 300 de molecule de anticorpi fixate pe un eritrocit
• numărul de anticorpi care declanșează hemoliza - individual pentru fiecare persoană (de la 16-30 la 300)
• dinamica altor indicatori de laborator ai anemiei hemolitice (hemoglobina, bilirubina, reticulocite) se poate normaliza, iar testul Coombs va ramane la acelasi nivel.

Testul Coombs a fost modificat ultima dată: 16 martie 2018 de Maria Bodyan

În mod normal, nu există anticorpi împotriva eritrocitelor în sânge.

Testul Coombs direct este un test cu antiglobulină (aglutinare cu gel, care permite depistarea anticorpilor bivalenți completi), care determină anticorpii de clasă IgG și componenta C3 a complementului pe suprafața eritrocitelor. De obicei, anticorpii detectați prin testul Coombs direct au o specificitate largă care nu este asociată cu un antigen bine stabilit. Un test Coombs direct pozitiv indică în mod clar prezența anemiei hemolitice la un pacient, deși nu toți pacienții cu un test direct pozitiv la antiglobulină au această boală. Aproximativ 10% dintre pacienții cu anticorpi sau componente ale complementului pe membrana eritrocitară nu pot fi detectați printr-un test Coombs direct (test negativ), dar cu toate acestea suferă de anemie hemolitică autoimună. Pentru a clarifica specificitatea anticorpilor în astfel de cazuri, se folosesc teste cu eluția lor. Testul Coombs direct, pozitiv numai pentru complement, este de obicei asociat cu anticorpi IgM de tip rece. În acest caz, anticorpii IgM nu sunt prezenți pe eritrocite la temperatura bazală a corpului. Totuși, datorită faptului că anticorpii IgM fixează în mod activ complementul, iar complementul rămâne pe eritrocite, în această formă de anemie hemolitică autoimună (boala aglutinină rece), testul Coombs va fi pozitiv doar pentru complement.

Testul Coombs direct este pozitiv în anemia hemolitică autoimună cauzată de anticorpi caldi, anemie autoimună medicamentoasă (la administrarea de metildopa, până la 20% dintre pacienți au o reacție pozitivă), anemie hemolitică de tip cu adsorbție de medicamente, anemie hemolitică de tip imunocomplex ( testul este pozitiv doar pentru C3), cu anemie hemolitică autoimună cauzată de anticorpi la rece - boala aglutinină la rece (testul este pozitiv doar pentru C3). Cu hemoglobinurie paroxistică rece, testul Coombs direct este negativ.

Testul indirect Coombs - un test indirect de antiglobulină (detectă anticorpi incompleti) vă permite să detectați anticorpi atipici în sânge, inclusiv aloanticorpi, la antigenele eritrocitare străine. Și-a primit numele (indirect) datorită faptului că se desfășoară în 2 etape. Inițial, serul sanguin al pacientului, care conține anticorpi incompleti, interacționează cu Ag diagnosticum corpuscular adăugat fără manifestări vizibile. În a doua etapă, serul antiglobulinic introdus interacționează cu anticorpi incompleti adsorbiți pe antigeni, cu apariția unui precipitat vizibil. Transfuzia de eritrocite omologi (alogene) sau sarcina sunt cele mai frecvente cauze ale acestor anticorpi anti-RBC. Combinația dintre un test Coombs indirect pozitiv cu un test direct negativ nu face nimic pentru a diagnostica anemie hemolitică autoimună. Un test Coombs indirect pozitiv provoacă anumite dificultăți în selectarea sângelui pentru transfuzie și potrivirea încrucișată cu sângele acumulat, dar nu are altă valoare diagnostică.