Analiza pentru sifilis ELISA - decodificarea analizei. Normă și abateri

În legătură cu dezvoltarea tehnologiilor celulare, biologie moleculară, genetică, fizică, chimie și o serie de alte discipline de înaltă tehnologie, noi metode de înaltă precizie și de înaltă tehnologie sunt introduse în practica de zi cu zi. Aceste tendințe interdisciplinare afectează atât domeniul cunoștințelor medicale, cât și domeniile conexe ale problemelor biologice și biochimice. În ultimii zece ani, o metodă de diagnosticare clinică de laborator numită imunotest enzimatic a devenit larg răspândită și introdusă în practica de masă.

În general, tehnologiile reacțiilor enzimatice și radiologice imunologice au fost utilizate pe scară largă în tiparea celulelor, culturilor celulare și diferitelor țesuturi încă de la începutul anilor 1980. Cu toate acestea, aceste metode au fost foarte laborioase, nu unificate, nestandardizate, ceea ce a împiedicat utilizarea lor în scopuri medicale și de diagnosticare la scară masivă. Doar laboratoarele înguste, intensive în cunoștințe și foarte specializate au folosit astfel de metode.

Cu toate acestea, odată cu dezvoltarea tehnologiei, microtehnologiei și producerea diferitelor materiale biopolimerice, a devenit posibil să se producă truse de imunotest enzimatic gata făcute care pot fi utilizate de laboratoarele instituțiilor medicale generale. ELISA este utilizat pe scară largă pentru a diagnostica toate tipurile de infecții (chlamydia, sifilis, citomegalovirus, toxoplasmoză, herpes etc.), atât acute, cât și cronice, precum și forme latente care apar fără simptome clinice.Această metodă este folosită și pentru controlul bolilor cronice. . Să încercăm să ne dăm seama ce fel de metodă este și ce principii stau la baza ei?

Componentele imunotestului enzimatic - Reacția imună și Reacția enzimatică

Imunotestul enzimatic, după cum sugerează și numele, constă din două componente diferite - un răspuns imun și o reacție enzimatică. Reacția imună produce legarea de molecule biologice, elemente ale celulei sau microorganismului, care de fapt încearcă să detecteze, iar reacția enzimatică vă permite să vedeți și să măsurați rezultatul reacției imunologice. Adică răspunsul imun face parte dintr-o tehnică complexă care detectează efectiv microbul dorit. Iar reacția enzimatică este acea parte a unei tehnici complexe care vă permite să traduceți rezultatul unei reacții imune într-o formă care este vizibilă pentru ochi și accesibilă pentru măsurare prin metode chimice de rutină. Pe baza acestei structuri a metodei imunologice enzimatice, vom analiza separat ambele părți ale acesteia.

Reacția imună, ce este? Ce este un anticorp sau un antigen?

Ce este un răspuns imun? Ce este un antigen?
În primul rând, să ne uităm la ce sunt reacțiile imune. reacții imune- Acestea sunt reacții specifice de legare a unui antigen la un anticorp cu formarea unui complex imun. Ce înseamnă? Pe suprafața fiecărei celule a oricărui organism există structuri speciale numite antigene. Antigenele în general sunt molecule care poartă informații despre o celulă (similar cu informațiile de pe ecusonul unei persoane, care indică datele de bază ale acestei persoane).

Antigenele individuale și ale speciilor - ce este? De ce sunt necesare aceste antigene?

Disponibil antigene individuale, adică inerent numai acestui organism particular. Acești antigeni individuali sunt diferiți pentru toți oamenii, unii sunt similari între ei, dar totuși diferiți. Nu există două copii identice ale antigenelor individuale în natură!

Al doilea tip principal de antigene este antigene ale speciilor, adică inerente oricărei specii particulare de ființe vii. De exemplu, oamenii au propriul antigen de specie comun tuturor oamenilor, șoarecii au propriul antigen de specie de șoarece și așa mai departe. Pe suprafața fiecărei celule este în mod necesar prezent un antigen specific și individual.

Antigenul speciei este folosit de celulele sistemului imunitar pentru a identifica „prietenul sau dușmanul”.

Cum are loc recunoașterea antigenului?

O celulă imunitară se leagă de o celulă suspectă și realizează identificarea exact de către un antigen individual. În memoria celulei imune, este „înregistrat” cum arată „antigenul său”. Astfel, dacă antigenul unei celule suspecte se potrivește cu descrierea „propriul antigen”, atunci această celulă a propriului corp nu reprezintă un pericol. Apoi celula imunitară „se dezleagă” și pleacă. Și dacă antigenul nu se potrivește cu descrierea „sinelui”, atunci celula imunitară identifică această celulă ca „străină”, și, prin urmare, potențial periculoasă pentru întregul organism. În acest caz, celula imunitară nu „scapă”, ci începe să distrugă obiectul periculos. Precizia unei astfel de recunoașteri imunologice este uimitoare - 99,97%. Aproape că nu există greșeli!

Ce este un anticorp, complex imun?
Ce este un anticorp?

Un anticorp este o moleculă specială situată pe suprafața unei celule imunitare. Este anticorpul care se leagă de antigenele celulei suspecte. Mai mult, anticorpul transmite informații în interiorul celulei, unde are loc identificarea, și primește un semnal de întoarcere de două tipuri, „self” sau „extraterestru”. La semnalul „propriu”, anticorpul distruge legătura cu antigenul și eliberează celula.

Ce este un complex imunitar?
Cu semnalul „extraterestru”, situația se desfășoară diferit. Anticorpul nu rupe legătura cu antigenul, ci dimpotrivă, prin trimiterea de semnale specifice, provoacă „întărire”. Din punct de vedere biologic, aceasta înseamnă că alți anticorpi localizați într-o altă parte a celulei încep să se deplaseze în zona de unde provine semnalul de pericol și, de asemenea, formează o legătură între ei și antigenul capturat. În cele din urmă, antigenul se dovedește a fi înconjurat pe toate părțile și ferm atașat.Un astfel de complex antigen + anticorp se numește complex imun. Din acest moment începe utilizarea antigenului. Dar acum nu ne interesează detaliile procesului de neutralizare a antigenului.

Tipuri de anticorpi (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Anticorpii sunt structuri proteice, care, în consecință, au un nume chimic, care este folosit ca sinonim pentru cuvântul anticorp. Asa de, anticorpi = imunoglobuline.

Există 5 tipuri de imunoglobuline (Ig), care se leagă de diferite tipuri de antigene în diferite locuri ale corpului uman (de exemplu, pe piele, pe membranele mucoase, în sânge etc.). Adică, anticorpii au o diviziune a muncii. Aceste imunoglobuline sunt numite literele alfabetului latin - A, M, G, D, E și sunt desemnate după cum urmează - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

În diagnosticare, este utilizat un singur tip de anticorp, care este cel mai specific pentru microbul care este determinat. Adică, legarea acestui tip de anticorp la antigenul care este determinat are loc întotdeauna. Cele mai frecvent utilizate sunt IgG și IgM.

Acest principiu al răspunsului imun (se determină acuratețea și specificitatea unică a recunoașterii obiectului biologic) este cel care stă la baza imunotestului enzimatic Datorită acurateței mari a anticorpilor în recunoașterea antigenelor, acuratețea întregii metode de imunotest enzimatic este de asemenea cel mai inalt.

reactie enzimatica

Ce este o reacție enzimatică? Ce este afinitatea, substratul și produsul de reacție?
Să ne întoarcem la luarea în considerare a reacției enzimatice în activitatea metodei imunotestare enzimatică.

Ce este o reacție enzimatică?

O reacție enzimatică este o reacție chimică în care o substanță este transformată în alta prin acțiunea unei enzime. Substanța asupra căreia acționează o enzimă se numește substrat. O substanță care se obține ca urmare a acțiunii unei enzime se numește produs de reacție. Mai mult, particularitatea reacției enzimatice este de așa natură încât o anumită enzimă acționează numai pe un anumit substrat. Această proprietate a unei enzime de a-și recunoaște „propriul” substrat se numește afinitate.

Astfel, fiecare enzimă realizează o singură reacție specifică acesteia. Există o mulțime de enzime în lumea biologică, precum și reacții enzimatice. În imunotestul enzimatic, se folosesc doar câteva reacții enzimatice - nu mai mult de 10. În acest caz, au fost alese astfel de reacții enzimatice, ale căror produse sunt substanțe colorate. De ce ar trebui colorați produsele unei reacții enzimatice? Deoarece există o metodă chimică simplă pentru calcularea concentrației unei substanțe dintr-o soluție colorată - colorimetrie.

Metoda colorimetriei - esență și principiu

Colorimetrie folosește măsurarea densității de culoare a soluției, iar concentrația substanței este calculată din densitatea culorii.În acest caz, un dispozitiv special - un colorimetru măsoară densitatea de culoare a soluției. În colorimetrie, sunt posibile două variante ale dependenței densității culorii de concentrația unei substanțe - aceasta este o dependență direct proporțională sau o dependență invers proporțională. Cu o relație direct proporțională, cu cât concentrația substanței este mai mare, cu atât densitatea de culoare a soluției este mai intensă. Într-o relație invers proporțională, cu cât concentrația unei substanțe este mai mare, cu atât densitatea de culoare a soluției este mai mică. Din punct de vedere tehnic, acest lucru se întâmplă astfel: se iau mai multe soluții cu o concentrație cunoscută a unei substanțe, se măsoară densitatea acestor soluții și este trasat un grafic al dependenței concentrației de densitatea culorii ( graficul de calibrare).

În continuare, se măsoară densitatea de culoare a soluției, a cărei concentrație este determinată și, conform graficului de calibrare, se află valoarea concentrației corespunzătoare nivelului densității de culoare măsurate a soluției.

În imunotestul enzimatic, se folosesc cel mai des următoarele enzime: peroxidază, fosfatază alcalină, avidină.

Cum sunt combinate reacțiile imunologice și enzimatice în imunotestul enzimatic? Ne întoarcem acum la considerarea testului imunosorbant legat de enzime în sine. Ce pași include și ce se întâmplă în timpul acestor reacții? Imunotestul enzimatic este directe și indirecte.

Imunotestul enzimatic direct - etape de implementare

Într-un imunotest enzimatic direct, sunt utilizați anticorpi la antigenul detectat, combinați cu o etichetă specifică. Această etichetă specifică este substratul reacției enzimatice.

Atașarea antigenelor la suprafața godeului și legarea antigenului de anticorp

Cum se efectuează imunotestul enzimatic direct? Materialul biologic este prelevat (sânge, răzuire de pe mucoase, frotiuri) și plasat în puțuri speciale. Materialul biologic este lăsat în godeuri timp de 15-30 de minute, astfel încât antigenele să poată adera la suprafața godeurilor. Mai mult, anticorpii la antigenul detectat sunt adăugați în aceste godeuri. Aceasta înseamnă că la detectarea antigenelor, de exemplu, sifilisul, se adaugă anticorpi împotriva antigenelor sifilisului. Acești anticorpi sunt produși industrial, iar laboratoarele cumpără truse gata făcute.Acest amestec de material de testat și anticorpi este lăsat ceva timp (de la 30 de minute la 4-5 ore) pentru ca anticorpii să poată găsi și să se lege de antigenul „lor”. eșantion de antigeni, cu atât mai mulți anticorpi se vor lega de ei.

Îndepărtarea anticorpilor „extra”.

După cum s-a indicat, anticorpii sunt, de asemenea, asociați cu o etichetă specifică.Deoarece anticorpii sunt adăugați în exces, nu toți se vor lega de antigene și, dacă nu există deloc antigen în probă, atunci, în consecință, nici un singur anticorp nu se va lega. la antigenul dorit. Pentru a elimina anticorpii „în plus”, conținutul godeurilor este pur și simplu turnat. Ca urmare, toți anticorpii „în plus” sunt îndepărtați, iar cei care au intrat în contact cu antigenele rămân, deoarece antigenele sunt „lipite” de suprafața godeurilor. Sondele sunt clătite de mai multe ori cu o soluție specială care vă permite să spălați toți anticorpii „în plus”.

Apoi începe a doua etapă - reacția enzimatică. Soluția cu enzima se adaugă în godeurile spălate și se lasă timp de 30-60 de minute. Această enzimă are o afinitate pentru substanța (marca specifică) de care sunt legați anticorpii. Enzima realizează o reacție, în urma căreia această etichetă specifică (substrat) este transformată într-o substanță (produs) colorată. Apoi concentrația acestei substanțe colorate este găsită prin colorimetrie. Deoarece această etichetă specifică este asociată cu anticorpi, înseamnă că concentrația produsului de reacție colorat este egală cu concentrația de anticorpi. Și concentrația de anticorpi este egală cu concentrația de antigene. Astfel, în urma analizei, obținem răspunsul, care este concentrația microbului sau hormonului detectat.

Acesta este modul în care funcționează imunotestul enzimatic direct. Cu toate acestea, imunotestul enzimatic indirect este mai frecvent utilizat astăzi, deoarece sensibilitatea și acuratețea indirectă este mai mare decât cea a directă. Deci, să trecem la imunotestul enzimatic indirect.

Imunotestul enzimatic indirect - etape

Există două etape în imunotestul enzimatic indirect. În timpul primei etape, sunt utilizați anticorpi nemarcați la antigenii detectați, iar în a doua etapă, anticorpi marcați sunt utilizați împotriva primilor anticorpi nemarcați. Adică, nu se dovedește legarea directă a anticorpului la antigen, ci un control dublu: legarea anticorpilor la antigen, după care legarea celui de-al doilea anticorp la complexul anticorp + antigen. De regulă, anticorpii pentru prima etapă sunt de șoarece, iar pentru a doua etapă de capră.

Fixarea antigenelor pe suprafața godeului și legarea antigenului la anticorpul nemarcat
La fel ca și pentru imunotestul enzimatic direct, se ia material biologic - sânge, răzuire, frotiuri. Materialul biologic studiat este introdus în godeuri și lăsat timp de 15-30 de minute pentru ca antigenele să adere la suprafața godeurilor. Apoi, anticorpii nemarcați la antigeni sunt adăugați în godeuri și lăsați pentru o perioadă de timp (1-5 ore), astfel încât anticorpii să se lege de antigenele „lor” și să formeze un complex imun ( primul stagiu). După aceea, „extra”, anticorpii nelegați sunt îndepărtați prin turnarea conținutului godeurilor. Spălarea se efectuează cu o soluție specială pentru a elimina complet toți anticorpii nelegați.

Legarea anticorpului marcat la complexul antigen + anticorp nemarcat
După aceea, se iau al doilea anticorp - etichetați, adăugați în godeuri și lăsați din nou pentru un timp - 15-30 de minute ( a doua fază). În acest timp, anticorpii marcați se leagă de primul - nemarcat și formează un complex - anticorp + anticorp + antigen. Cu toate acestea, atât anticorpii marcați, cât și cei nemarcați sunt adăugați în godeuri în exces. Prin urmare, este necesar să se elimine din nou anticorpii „în plus”, deja marcați, care nu s-au legat de anticorpii nemarcați. Pentru a face acest lucru, repetați procedura de turnare a conținutului godeurilor și spălare cu o soluție specială.

Reacție enzimatică - formarea unui compus colorat
După aceea, se introduce o enzimă care realizează reacția de transformare a „etichetei” într-o substanță colorată. Culoarea se dezvoltă în 5-30 de minute. Apoi se efectuează colorimetria și se calculează concentrația substanței colorate. Deoarece concentrația substanței colorate este egală cu concentrația de anticorpi marcați, iar concentrația de anticorpi marcați este egală cu concentrația de anticorpi nemarcați, care, la rândul său, este egală cu concentrația de antigen. Astfel, obținem concentrația antigenului detectat.
Un astfel de control dublu sub forma utilizării a două tipuri de anticorpi a făcut posibilă creșterea sensibilității și specificității metodei de imunotest enzimatic. În ciuda prelungirii timpului de analiză și a includerii unor etape suplimentare, aceste pierderi sunt compensate de acuratețea rezultatului. De aceea, în prezent, marea majoritate a metodelor imunologice enzimatice sunt imunotestele enzimatice indirecte.

Ce boli sunt detectate prin imunotestul enzimatic?

Să trecem la considerarea ce boli și ce substanțe biologic active sunt detectate prin imunotestul enzimatic. Substanțele detectate prin imunotestul enzimatic sunt prezentate în tabel.

Hormoni și markeri ai bolii tiroidiene	tiroperoxidaza (TPO)
	tiroglobulina (TG)
	Hormonul de stimulare a tiroidei (TSH)
	Tiroxina (T4)
	Triiodotironina (T3)
	Tiroxină liberă (T4)
	Triiodotironina liberă (T3)
Diagnosticul funcției de reproducere	hormonul luteinizant (LH)
	Hormonul foliculostimulant (FSH)
	Prolactina
	Progesteron
	Estradiol
	Testosteron
	cortizolul
	Globulina care leagă steroizii (SHB)
	Alfafetoproteina (AFP)
markeri tumorali	Gonadotropină corionică (CG)
	Antigenul specific prostatic (PSA)
	SA - 125
	SA - 19.9
	CYFRA-21-1
	M - 12 (SA - 15,3)
	MUC-1 (M-22)
	MUC1(M–20)
	Alveomucină
	K - lanț
	L - lanț
	Factorul de necroză tumorală (TNFα)
	γ - interferon
	Antigen cancer-embrionar (CEA)
Diagnosticul bolilor infecțioase

ELISA este un studiu de laborator modern, în timpul căruia anticorpii specifici din sânge (sau antigenele) sunt căutați pentru boli specifice pentru a identifica nu numai etiologia, ci și stadiul bolii.

1. căutarea de anticorpi specifici oricărei boli infecțioase;
2. căutarea antigenelor oricăror boli infecțioase;
3. studiul stării hormonale a pacientului;
4. examinarea prezenței bolilor autoimune.

Ca și în cazul oricărei metode de diagnosticare de laborator, ELISA are avantajele și dezavantajele sale. Avantajele metodei includ:

1. specificitatea și sensibilitatea ridicată a metodei (mai mult de 90%);
2. capacitatea de a determina boala și de a urmări dinamica procesului, adică de a compara cantitatea de anticorpi în diferite intervale de timp;
3. disponibilitatea și rapiditatea acestui studiu;
4. metoda neinvazivă de eșantionare a materialelor nu este un studiu;

Dezavantajul metodei este faptul că în timpul analizei este posibil să se identifice nu agentul cauzal al bolii, ci doar răspunsul imun la aceasta (anticorpi).

Esența metodei ELISA

Exista mai multe tipuri de ELISA: directa, indirecta, metoda blocante, competitiva. Cu toate acestea, în practică, testul imunologic în fază solidă heterogenă sau ELISA este cel mai frecvent utilizat.

Baza testului imunosorbent legat de enzime este reacția imună a unui antigen și a unui anticorp cu formarea unui complex imun, care are ca rezultat o modificare a activității enzimatice a etichetelor specifice de pe suprafața anticorpilor.

De fapt, acest proces poate fi împărțit în mai multe etape:

1. pe suprafața godeurilor sistemului de testare există un antigen purificat al unui anumit agent patogen. Când se adaugă serul de sânge al animalului, are loc o reacție specifică între acest antigen și anticorpul dorit;
2. în continuare, se adaugă în godeu un cromogen special (conjugat marcat cu peroxidază). Are loc o reacție enzimatică, care are ca rezultat formarea unei substanțe colorate în godeul tabletei. Intensitatea culorii sale depinde de cantitatea de imunoglobuline (anticorpi) continuta in serul animalului;
3. Urmează evaluarea rezultatului. Cu ajutorul unui spectrofotometru multicanal, densitatea optică a materialului de testat este comparată cu densitatea optică a probelor de control, iar rezultatele sunt prelucrate matematic. Cantitatea de anticorpi la un pacient depinde direct de înălțimea densității optice a unui godeu dat.

Trebuie reținut: pentru fiecare sistem de testare, sunt dezvoltați indicatori individuali pentru a ține cont de rezultate, indicatorii de normă și patologie („valori de referință”). Acest lucru ar trebui să fie luat în considerare atunci când se evaluează rezultatele fiecărui studiu specific.

Nu este corect să interpretăm rezultatele unui laborator din „valorile de referință” ale altui laborator. De asemenea, este incorect să comparăm rezultatele diferitelor laboratoare între ele.

La evaluarea rezultatelor pentru infecții specifice, clasa de anticorpi detectați și numărul acestora sunt importante. Nu numai problema etiologiei infecției depinde de aceasta, ci și stadiul așteptat al bolii (acut, cronic), precum și prezența unei infecții active (acută sau exacerbarea cronică) în momentul examinării. .

Care este momentul aproximativ al apariției anticorpilor?

Cei mai timpurii anticorpi sunt IgM. Ele pot fi detectate la 1-3 săptămâni după o posibilă infecție, care caracterizează faza acută a procesului infecțios. A doua situație a apariției anticorpilor IgM este o exacerbare a unui proces cronic. IgM circulă în medie aproximativ 3 luni, apoi numărul lor dispare treptat. Cu toate acestea, la unii pacienți, urme de IgM pot fi detectate în decurs de 1-2 ani de la infecție.

Din a 4-a săptămână după infectare, încep să apară anticorpi IgG. În majoritatea infecțiilor, titrul lor crește treptat cu un maxim în momente diferite (în medie, după 1,5-2 luni), apoi titrul rămâne la un nivel scăzut și indică imunitate. În unele boli, nivelul de IgG nu este ridicat.

Opțiuni de detectare a anticorpilor

• Detectarea izolată a anticorpilor IgM sugerează o infecție primară.
• Detectarea simultană a IgM și IgG în sânge este tipică pentru infecția primară în ultimele 2-3 luni, precum și în timpul unei exacerbări a unei boli cronice.
• Detectarea IgG izolat poate indica atât imunitatea la boală, cât și infecția cronică. În a doua situație contează atât cantitatea de anticorpi (titru), cât și modificarea acestui titru în timp. De obicei, studiile sunt efectuate la intervale de 2-4-6 săptămâni.

Analiza ELISA este o tehnică modernă pentru diagnosticarea de laborator a unui număr semnificativ de diferite boli. Abrevierea înseamnă imunotest enzimatic. Esența tehnicii este de a determina titrul (activitatea) anticorpilor.

Tehnica ELISA câștigă o popularitate considerabilă astăzi. Este utilizat în medicina clinică pentru diagnosticarea diferitelor patologii, precum și în studiile experimentale care necesită determinarea precisă a concentrației diferiților compuși în mediile studiate.

Principiul tehnicii ELISA

ELISA este o reacție imunologică. Se bazează pe adăugarea de anticorpi specifici
sau antigene în mediul de testare (cel mai adesea sângele de testat) cu determinarea enzimatică ulterioară a concentrației complexelor antigen-anticorp rezultate. După concentrația complexului, se poate aprecia nivelul sau activitatea analitului în mediul de testat.

Determinarea concentrației complexelor antigen-anticorp se realizează de obicei folosind echipamente speciale prin metoda cromatografică.

Indicatii de realizare

Analiza ELISA se efectuează pentru diverse indicații, principalele în medicina clinică sunt:

• Diagnosticul patologiei infecțioase cu transmitere predominant sexuală (ITS), care include chlamydia, micoplasmoza, ureaplasmoza, trichomonaza, în timp ce sunt detectați anticorpi specifici la agentul infecțios.
• Diagnosticul bolilor infecțioase de diferite localizări pentru a determina stadiul procesului patologic, în primul rând în procesul de diagnosticare a hepatitei virale parenterale și HIV.
• Determinarea concentrației de hormoni pentru diagnosticul diferitelor patologii ale organelor sistemului endocrin (glandele endocrine).
• Determinarea diverșilor compuși pentru diagnosticarea cauzei intoxicației organismului în caz de otrăvire, mușcături de insecte sau șarpe.

Cu aceste indicații medicale se efectuează un test de sânge ELISA. De asemenea, această tehnică este utilizată activ în medicina experimentală în timpul diferitelor studii clinice în timpul dezvoltării de noi medicamente, vaccinuri pentru imunoprofilaxie.

Cum se face studiul

Un test de sânge ELISA este efectuat într-un laborator specializat. Anterior, pentru implementarea lui se prelevează sânge venos, de obicei din vena cubitală într-un volum de 5-10 ml, care este apoi trimis la laborator. În medie, rezultatul analizei poate fi obținut chiar a doua zi, ceea ce este un punct important pentru numirea promptă a tratamentului după stabilirea diagnosticului bolii.

Cum să vă pregătiți pentru ELISA

Pentru a obține rezultate fiabile ale studiului prin imunotest enzimatic, ar trebui să urmați câteva recomandări pregătitoare simple, care includ:

• Cu o zi înainte de test, ar trebui să încetați să consumați alimente grase (carne, carne afumată) și alcool.
• Materialul pentru cercetare trebuie luat dimineața pe stomacul gol.
• În ziua studiului, este de dorit să se evite stresul fizic și psiho-emoțional.
• Înainte de studiu, trebuie să încercați să nu fumați.

Majoritatea rezultatelor fals pozitive obținute ale imunotestului enzimatic se datorează implementării necorespunzătoare a recomandărilor pregătitoare. Acest lucru este asociat în cele mai multe cazuri cu consumul de alimente grase, ceea ce duce la o creștere a concentrației de trigliceride (grăsimi) în plasma sanguină, care reduc specificitatea ELISA.

Descifrarea rezultatelor

Testul de sânge pentru anticorpi folosind ELISA are 2 modificări - determinare calitativă și cantitativă. La
determinarea calitativă a anticorpilor, rezultatul poate fi pozitiv (se detectează anticorpi, ceea ce indică posibila prezență a unui proces patologic cauzat de agentul infecțios) sau negativ (fără anticorpi, ceea ce indică absența unui proces infecțios).

Absența anticorpilor nu este întotdeauna un indicator 100% al absenței unui proces infecțios. Acest lucru se datorează faptului că după infecție, anticorpii nu se formează imediat, ci într-o anumită perioadă de timp (cel puțin aproximativ 2 săptămâni). Prin urmare, pentru a confirma absența infecției, ELISA poate fi repetat după un timp.

Cu ELISA cantitativ, se determină titrul (activitatea) anticorpilor, precum și clasele acestora. În majoritatea cazurilor, pentru diagnosticul bolilor infecțioase se determină anticorpi din clasa IgG (imunoglobuline G) și IgM (imunoglobuline M), care se formează în organism la diferite intervale după infectare, astfel încât decodificarea rezultatului analizei poate avea mai multe sensuri:

• O creștere a activității IgM și absența IgG sunt dovezi ale unei infecții recente și ale unui curs acut al procesului infecțios.
• O creștere a activității IgM și IgG este o exacerbare a procesului infecțios în cursul său cronic și infecția pe termen lung.
• Activitatea ridicată a IgG și absența IgM este un curs cronic al procesului infecțios pe fondul unei infecții de lungă durată, după care au trecut mai mult de șase luni (timpul necesar pentru formarea anticorpilor din clasa IgG).

În general, interpretarea rezultatelor ELISA pentru fiecare proces infecțios are anumite caracteristici. O determinare mai precisă a prezenței unei boli infecțioase, precum și a stadiului cursului acesteia, este efectuată de un medic.

ELISA este în prezent metoda de alegere pentru diagnosticarea majorității bolilor infecțioase. Pe baza rezultatelor unui astfel de studiu, medicul are posibilitatea de a stabili un diagnostic precis și de a determina stadiul cursului procesului patologic pentru numirea unui tratament adecvat și eficient ulterior.

Metodele moderne de diagnostic fac posibilă în laborator identificarea unei anumite boli cu ajutorul unor teste speciale. Una dintre acestea ar trebui să includă imunotestul enzimatic, prin care puteți confirma un diagnostic preliminar.

ELISA este una dintre cele mai eficiente și moderne metode de detectare a tulburărilor asociate cu insuficiențe imunitare și hormonale, precum și a proceselor oncologice. În timpul analizei în sânge, pot fi detectați anticorpi care sunt produși atunci când există o infecție în organism. Având în vedere această nuanță, este posibil să se detecteze boala chiar și în stadiul foarte incipient al dezvoltării sale.

Care este baza metodologiei

Rezultatele analizei ELISA se bazează pe primirea reacțiilor chimice la enzime care servesc drept mărci speciale de identificare pentru recunoașterea anticorpilor. Prin urmare, în timpul reacțiilor imunochimice, anticorpii încep să interacționeze cu unii antigeni. Toate acestea dau motive pentru a afirma că rezultatele false la donarea de sânge pentru ELISA sunt minime.

Studiul vă permite să determinați numărul de celule imunitare, proprietățile acestora, precum și prezența anticorpilor necesari

Un rezultat pozitiv este considerat atunci când este detectată culoarea soluției. Culoarea indică faptul că antigenele interacționează cu anticorpul. În cazul în care nu se întâmplă nimic de genul acesta, rezultatul este negativ.

Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA) este efectuat pentru o evaluare cuprinzătoare a funcțiilor de protecție ale organismului. În timpul studiului, se determină numărul și proprietățile celulelor imune, prezența anticorpilor necesari. Testul de sânge ELISA se efectuează pentru a diagnostica boli infecțioase, hematologice, autoimune, imunodeficiențe primare și secundare. Luați în considerare ce este un test de sânge prin ELISA și ce indicații există pentru acest studiu.

Ce este

Un test de sânge ELISA este o metodă de laborator care detectează anticorpi sau antigeni într-o probă de sânge. Acest studiu este folosit pentru a detecta nivelul imunoglobulinelor, complexelor imunologice, hormonilor.

Indicații pentru analiză

Pentru numirea unui test de sânge ELISA, există următoarele indicații:

• diagnosticul infecțiilor cu transmitere sexuală - ureaplasmă, micoplasmă, chlamydia, trichomonas, sifilis;
• diagnosticul bolilor virale - citomegalovirus, herpes, hepatită, virus Epstein-Barr;
• determinarea nivelului de hormoni;
• diagnosticul bolilor oncologice;
• determinarea imunodeficienței;
• diagnosticarea alergiilor;
• examinare preoperatorie cuprinzătoare înainte de transplantul de organe;
• evaluarea eficacității terapiei.

Principiul metodei

Principiul de funcționare al metodei imunotestare enzimatică se bazează pe determinarea anticorpilor-proteine ​​specifici din sânge - imunoglobuline. Imunoglobulinele sunt produse de sistemul imunitar uman atunci când antigenele (microorganisme străine) intră în organism. Aceste molecule imune se leagă de o varietate de agenți infecțioși din organism și îi neutralizează.

Imunoglobulinele au o caracteristică importantă - specificitatea. Datorită acestui fapt, se pot lega de un antigen specific, formând un complex antigen-anticorp. În timpul unui test de sânge ELISA, acest complex este determinat calitativ și cantitativ.

Există cinci clase de imunoglobuline. Dar de obicei sunt definite trei clase - imunoglobulinele A, M, G. Acești anticorpi se acumulează în organism în momente diferite din momentul infecției.

• Imunoglobuline clasa M (IgM) apar în sânge foarte întâi în a cincea zi din momentul infecției. Sunt în organism timp de 5-6 săptămâni, apoi dispar din sânge. Anticorpii IgM indică o perioadă acută a bolii sau o exacerbare a bolii în cursul ei cronic.
• La aproximativ 3-4 săptămâni de la infecție, imunoglobulinele apar în sânge clasa G (IgG). Ele pot exista în sângele uman timp de câteva luni sau chiar ani. Conform decodării testului de sânge ELISA, dacă în două probe de sânge prelevate consecutiv două săptămâni mai târziu, cantitatea de imunoglobuline IgG este crescută, se vorbește despre o infecție curentă sau reinfecție - reinfecție cu aceeași infecție.
• Imunoglobuline clasa A (IgA) poate fi detectat prin această metodă de cercetare la 2-4 săptămâni după infectarea sau exacerbarea unei boli infecțioase. Dintre acestea, doar 20% circulă în sânge, restul sunt secretate de mucoasele. Anticorpii IgA dispar din sânge la 2-8 săptămâni după distrugerea agenților infecțioși. Dispariția acestor imunoglobuline înseamnă un remediu pentru infecție. Dacă, după terminarea bolii, se determină prezența anticorpilor IgA în sânge, atunci boala a trecut în stadiul cronic.

Pregătirea pentru analiză

Sângele uman este cel mai adesea folosit pentru a efectua un test de sânge ELISA. Dar puteți examina și conținutul corpului vitros, lichidul cefalorahidian, lichidul amniotic.

O probă de sânge pentru cercetare este prelevată de la pacient din vena cubitală. Se recomanda donarea sangelui pe stomacul gol (trebuie sa treaca cel putin 12 ore din momentul ultimei mese). Este necesar să spuneți medicului dacă pacientul ia medicamente, deoarece unele dintre ele pot schimba rezultatul analizei. Fiabilitatea rezultatelor studiului este afectată de consumul de alcool și droguri.

Decriptare

Forma rezultatului acestei analize indică un rezultat pozitiv (+) sau negativ (-) pentru fiecare clasă de imunoglobuline.

Luați în considerare interpretarea unei posibile decodări a testului de sânge ELISA.

• Rezultat negativ al IgM, IgG, IgA - lipsa imunității la infecții.
• Rezultat IgM negativ, IgA și IgG pozitiv - imunitate post-infecție sau post-vaccinare.
• IgG, IgA și IgM pozitive sau negative este o infecție acută.
• Un rezultat pozitiv al IgM, IgG, IgA este o exacerbare a unei boli infecțioase cronice.
• Un rezultat IgM negativ și un rezultat IgG negativ sau pozitiv, IgA este o infecție cronică.
• Rezultat IgM negativ și fără IgG, IgA - recuperare.

Avantajele metodei

Un test de sânge ELISA are multe avantaje. Se pot distinge principalele:

• precizie relativ mare (sensibilitate);
• posibilitatea diagnosticării precoce;
• capacitatea de a urmări dinamica procesului infecțios;
• un nivel ridicat de unificare, care permite anchete în masă;
• o perioadă scurtă de timp necesară pentru a obține rezultatul analizei;
• comoditate în muncă;
• automatizarea tuturor etapelor de analiză;
• cost relativ mic.

Defecte

Dezavantajul metodei ELISA este că uneori dă rezultate fals negative sau fals pozitive. Pe lângă erorile tehnice din timpul studiului, cauza rezultatelor false poate fi factorul reumatoid la pacient, prezența bolilor cronice (în care se produc anticorpi), tulburările metabolice și administrarea anumitor medicamente.

• ascariaza;
• trichineloză - analiza se efectuează de mai multe ori, nivelul maxim de anticorpi se determină la 4-12 săptămâni după infectare;
• cisticercoză;
• taeniasis;
• fascioliaza - anticorpii sunt determinați în stadiul acut al bolii;
• opistorhiază - efectuează un diagnostic diferențial între formele cronice și acute ale bolii;
• giardioza;
• leishmanioză viscerală și cutanată;
• amibiaza;
• toxoplasmoza.

4.2 4,20 din 5 (5 voturi)