Diagnosticul clinic și de laborator al infecției cu HIV are trei directii:

1. Stabilirea faptului infecției cu HIV, diagnosticarea infecției cu HIV.
2. Determinarea stadiului evoluției clinice a bolii și identificarea bolilor secundare.
3. Prognosticul evoluției evoluției clinice a bolii, monitorizarea de laborator a eficacității tratamentului și efectele secundare ale medicamentelor antiretrovirale.

1. Stabilirea infectiei HIV, diagnosticarea infectiei HIV

Pentru determinarea infecției cu HIV se folosesc următorii indicatori specifici: anticorpi la HIV, antigeni HIV, ARN HIV și ADN provirus. Anticorpii împotriva HIV sunt determinați prin imunotest enzimatic (ELISA) sau imunoblot, care este în esență un tip de ELISA. Antigenele (proteinele) HIV sunt determinate prin ELISA. Cu ajutorul metodelor genetice moleculare de reacție în lanț a polimerazei (PNR) și bDNA, este posibil să se determine ARN HIV și ADN-ul provirus. Utilizarea unei metode suplimentare de hibridizare a acizilor nucleici cu sonde ADN specifice vă permite să verificați specificitatea secvențelor de ADN obținute în timpul PCR. Sensibilitatea PCR - detectarea genelor virale într-una din cinci mii de celule.

În timpul infecției primare, se observă următoarea dinamică a markerilor HIV din sângele celor infectați. În prima lună, ca urmare a activării procesului de replicare, are loc o creștere bruscă a încărcăturii virale (conținutul de ARN HIV în plasmă), apoi, datorită diseminării virusului și infecției masive a celulelor țintă în sânge și limfă. noduri, devine posibilă determinarea ADN-ului proviral. De o valoare diagnostică primordială este faptul de a detecta ADN-ul provirusului integrat în genomul celulei țintă.

Încărcarea virală reflectă intensitatea procesului de replicare în celulele infectate. În perioada infecției primare, nivelul încărcăturii virale este diferit atunci când este infectat cu diferite subtipuri de HIV, dar dinamica modificărilor sale este aproximativ aceeași. Deci, atunci când este infectat cu subtipul B, de exemplu, dacă în prima lună după infectare valoarea încărcăturii virale este de 700 de copii / ml, atunci în a 2-a lună există o scădere la 600, în a 3-a - la 100, în al 4-lea - până la 50 de exemplare / ml. O astfel de dinamică este observată pe fondul creșterii conținutului de anticorpi specifici împotriva HIV în sânge. Conținutul de ADN proviral în celulele mononucleare sanguine ale pacienților infectați cu HIV se caracterizează prin constantă relativă în primele 6 luni cu ușoare fluctuații la unele subtipuri. Astfel, încărcările de ARN și ADN nu sunt identice.

În timpul etapei de incubație, de ceva timp, nu se formează anticorpi specifici împotriva HIV într-o cantitate suficientă pentru a fi determinată prin metodele de laborator existente. Înainte de detectarea anticorpilor, se observă pentru un timp foarte scurt apariția în sânge a proteinei Nef, care reprimă procesul de replicare, și a proteinei structurale p24. Antigenul p24 poate fi detectat în sânge prin test imunosorbent legat de enzime deja la 1-2 săptămâni după infecție și poate fi determinat până în a 8-a săptămână, apoi conținutul său scade brusc. În plus, în cursul clinic al infecției cu HIV, se observă o a doua creștere a conținutului de proteină p24 din sânge. Se încadrează în perioada de formare a SIDA. Dispariția proteinelor de bază p24 libere (nelegate de anticorpi) din sânge și apariția anticorpilor specifici la proteinele HIV marchează debutul seroconversiei (Fig. 9.6).

Viremia și antigenemia determină formarea de anticorpi specifici clasei IgM (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). Anticorpii liberi din clasele IgM și IgG la proteina p24 pot apărea începând cu a 2-a săptămână, conținutul acestora crește în 2-4 săptămâni, atingând un anumit nivel, care rămâne luni (IgM) și ani (IgG) (Fig. 9.7). ).

Apariția seroconversiei complete, atunci când în sângele periferic se înregistrează un nivel ridicat de anticorpi specifici din clasa IgG la proteinele structurale ale HIV p24, gp41, gp120, gp160, facilitează foarte mult diagnosticul infecției cu HIV. Anticorpii HIV apar la 90-95% dintre cei infectați în decurs de 3 luni de la infectare, la 5-9% - în perioada de la 3 la 6 luni de la momentul infectării și la 0,5-1% - la o dată ulterioară.

În ciuda faptului că anticorpii împotriva HIV apar ultimii, principalul indicator de diagnostic de laborator de până acum este detectarea anticorpilor specifici prin ELISA și imunoblot.

Datele prezentate în Tabelul 9.2 [spectacol] și 9.3 [spectacol] , demonstrează clar sensibilitatea ridicată a sistemelor moderne de testare ELISA în detectarea anticorpilor la HIV, care depășește sensibilitatea imunoblotării. În unele cazuri, atunci când se primește un rezultat pozitiv primar în ELISA, acesta poate fi confirmat prin imunoblot numai după 2-3 săptămâni.

La examinarea pacienților cu infecție HIV (infectați cu HIV) folosind sistemele de testare imunoblotting ale companiilor lider din lume, anticorpii la gp160 și p24/25 sunt detectați în toate cazurile, anticorpii la alte proteine ​​sunt detectați în 38,8-93,3% din cazuri (Tabelul 1). ). 9.4 [spectacol] ).

Dificultăți în detectarea anticorpilor la pacienții cu infecție HIV pot apărea în perioadele de viremie masivă și antigenemie, când anticorpii specifici existenți în sânge sunt asociați cu particule virale, iar procesul de replicare este înaintea producerii de noi anticorpi antivirali. Această situație poate să apară și să dispară în timpul procesului infecțios.

La pacienții cu un sistem imunitar inițial slăbit, viremia și antigenemia apar mai devreme și rămân la un nivel ridicat până la deznodământul bolii. La astfel de pacienți, există un conținut scăzut de anticorpi liberi împotriva HIV, din două motive - producția insuficientă de anticorpi de către limfocitele B și legarea anticorpilor de către virioni și proteine ​​​​HIV solubile, prin urmare, pentru a determina infecția, sistemele de testare cu sensibilitate crescută. sau sunt necesare modificări ale metodelor de analiză care includ stadiul eliberării anticorpilor din complexele imune.

Cel mai adesea, o scădere a conținutului de anticorpi împotriva HIV din motivele indicate are loc în stadiul terminal, când anticorpii HIV din serul tăieturii nu pot fi captați prin metode imunoenzimatice și nici prin imunoblot (Western blot). Pe lângă apariția anticorpilor specifici pentru HIV, răspunsul imun în primele 4 luni se caracterizează printr-o scădere a conținutului de CD4+ infectat din sânge și o creștere a celulelor CD8+. În plus, conținutul de celule care poartă receptorii CD4 și CD8 se stabilizează și rămâne neschimbat pentru o perioadă de timp. O creștere a conținutului de limfocite CD8 este o reacție de protecție, deoarece. citotoxicitatea dependentă de celule este realizată de limfocitele CD8+, care vizează distrugerea celulelor infectate cu HPV. Inițial, limfocitele citotoxice (CTL) răspund la proteina reglatoare Nef a virusului, care joacă un rol important în reducerea încărcăturii virale (ARN) din plasma unei persoane infectate cu HIV în primele luni. Apoi răspunsul CTL este format pentru alții, incl. proteine ​​structurale ale HIV, drept urmare, la 12 luni de la infectare, efectul cptotoxic crește semnificativ.

Scheme pentru diagnosticul de laborator al infecției cu HIV

Ținând cont de dinamica dată a markerilor specifici ai infecției cu HIV, în practică este recomandabil să se respecte următoarele scheme pentru diagnosticarea de laborator la adulți (Fig. 9.8-9.10).

Schemele reflectă cele trei etape principale ale diagnosticului primar de laborator al infecției cu HIV:

1. Screening.
2. Referinţă.
3. Expert.

Necesitatea mai multor etape ale diagnosticului de laborator se datorează în primul rând considerentelor economice. Deci, de exemplu, costul efectuării unui studiu de experți folosind sistemele de testare interne prin imunoblot este de până la 40 de dolari SUA, screeningul (prin ELISA) este de aproximativ 0,2, adică raportul este de 1:200.

În prima etapă (Fig. 9.8), subiecții sunt testați pentru anticorpi la HIV folosind un sistem de testare ELISA conceput pentru a detecta anticorpii la ambele tipuri de virus - HIV-1 și HIV-2.

Producătorii din sistemele de testare propuse folosesc un lizat viral, proteine ​​recombinate, peptide sintetice ca bază antigenică. Fiecare dintre purtătorii enumerați ai determinanților antigenici HIV are propriile sale avantaje și dezavantaje. Prin urmare, atunci când alegeți sisteme de testare cu costuri aproximativ egale, ar trebui să fie preferate kiturile cu cea mai mare sensibilitate (de preferință 100%). Dintre sistemele de testare de același cost și sensibilitate, este indicat să ne oprim asupra celor cu specificitate maximă.

Pe baza lizatului de virus au fost create primele sisteme de testare pentru diagnosticul de laborator al infecției cu HIV. În anii 1980, astfel de sisteme de testare se caracterizau printr-o sensibilitate mai mică de 100% și o specificitate scăzută, manifestată printr-un număr mare (până la 60%) de rezultate fals pozitive.

În timpul formării unui virion într-o cultură de limfocite, învelișul acestuia este creat din membrana exterioară și, prin urmare, conține antigene din complexul major de histocompatibilitate din clasele I și II. Această circumstanță provoacă reacții fals pozitive în cazul în care în sângele pacienților sunt prezenți anticorpi la aloantigenele de histocompatibilitate.

Ulterior, pentru obținerea virusului, s-a propus utilizarea unei culturi de macrofage, în care particulele virale se formează în principal intracelular prin înmugurire nu din membrana exterioară a celulei, ci din membranele reticulului endoplasmatic. Această tehnologie a redus numărul de rezultate fals pozitive.

Imunotestele enzimatice sunt recunoscute ca fiind una dintre cele mai bune în ceea ce privește cele mai importante caracteristici - sensibilitate și specificitate - ca parte a cărora o combinație a unui lizat viral purificat cu peptide sintetice, care sunt regiunile cele mai semnificative pentru antigen ale proteinelor virale, sau se utilizează proteine ​​recombinante.

Sensibilitatea sistemului de testare depinde și de caracteristicile altor componente ale truselor. Astfel, sistemele de testare care folosesc conjugați care recunosc anticorpi nu numai din clasa IgG, ci și din IgM și IgA, fac posibilă detectarea unei faze mai timpurii a seroconversiei. Pare promițătoare utilizarea sistemelor de testare care pot determina simultan atât anticorpii antivirali, cât și antigenul p24, ceea ce face diagnosticul de laborator al infecției cu HIV și mai devreme.

Un rezultat pozitiv inițial trebuie verificat din nou prin retestarea probei în același sistem de testare, dar de preferință într-un lot diferit și de către un alt asistent de laborator. Dacă se obține un rezultat negativ în timpul celei de-a doua examinări, examinarea se efectuează a treia oară.

După confirmarea unui rezultat pozitiv, este de dorit să se preia din nou sânge și să se examineze pentru anticorpi la HIV ca fiind primari. Prelevarea repetată a probelor de sânge ajută la prevenirea unei erori cauzate de etichetarea inexactă a tuburilor și de completarea formularelor de trimitere.

Serul pozitiv în etapa de screening este trimis pentru studii de referință efectuate folosind două sau trei sisteme de testare ELISA foarte specifice. În cazul a două rezultate pozitive, se efectuează un studiu de specialitate prin imunoblot.

Utilizarea sistemelor de testare ELISA în diagnosticul de referință, care pot fi utilizate pentru a diferenția anticorpii specifici pentru HIV-1 și HIV-2, facilitează munca ulterioară și vă permite să examinați imediat o probă pozitivă la stadiul de expert folosind imunoblotarea adecvată (HIV- 1 sau HIV-2).

O aviz de expert de laborator privind infecția cu HIV este emisă numai pe baza unui rezultat pozitiv Western blot. Atunci când se efectuează diagnostice de experți, este necesar să se utilizeze nomenclatura genelor și a produselor genetice ale HIV propusă în 1990 de un grup de experți OMS (Tabelul 9.5). [spectacol] ).

Specificitatea benzilor de pe imunoblot trebuie evaluată cu mare atenție și atenție, folosind rezultatele studiilor serurilor de control (pozitive și negative), care sunt efectuate în paralel cu studiul probelor experimentale, și o probă de imunblot cu denumirea a proteinelor HIV (atașate de producător la sistemul de testare). Interpretarea rezultatelor obținute trebuie efectuată în conformitate cu instrucțiunile atașate sistemului de testare. De regulă, criteriul de pozitivitate este prezența obligatorie a anticorpilor la două proteine ​​(precursoare, exterioare sau transmembranare) codificate de gena env și posibila prezență a anticorpilor la produsele altor două gene structurale HIV - gag și pol ( Tabelul 9.6 [spectacol] ).

În cazul obținerii unui rezultat îndoielnic, este necesar să se utilizeze lista de recomandări pentru clarificarea finală a rezultatelor imunoblotării (Tabelul 9.7). [spectacol] ).

Conform recomandărilor Centrului științific și metodologic rus pentru Prevenirea și Controlul SIDA, se consideră un rezultat pozitiv în prezența anticorpilor la cel puțin una dintre proteinele gp41, gp120, gp160 în combinație cu anticorpi împotriva altor HIV-specifici. 1 proteine ​​sau fără ele. Aceste recomandări se bazează pe experiența cu seruri de la copii din focare nosocomiale, în care au fost detectați adesea anticorpi la doar una dintre proteinele învelișului viral.

Cea mai mare parte a pacienților examinați inițial seropozitivi în ELISA aparține fazei de limfadenopatie generalizată persistentă (PGL) sau fazei asimptomatice. Prin urmare, pe un imunblot (bandă de nitroceluloză pe care sunt imobilizate proteinele HIV), se determină de obicei următoarea combinație de anticorpi împotriva HIV-1: anticorpi la proteinele anvelopei gp160, gp120 și gp41 codificate de gena env, în combinație cu anticorpi împotriva proteinele de bază p24 (nucleocapsidul proteic codificat de gena gag) și p31/34 (endonucleaza codificată de gena pol).

Reacțiile pozitive numai cu proteine ​​gag și/sau pol pot apărea în faza incipientă a seroconversiei și indică, de asemenea, o infecție cauzată de HIV-2 sau o reacție nespecifică.

Dacă se obține un rezultat discutabil, este posibil să se utilizeze diverse tehnici metodologice pentru a clarifica faptul infecției cu HIV.

În funcție de capacitățile tehnice (disponibilitatea truselor și reactivilor de diagnosticare, echipamente cu echipament special și pregătirea personalului), laboratorul expert realizează studii suplimentare de diagnosticare (Fig. 9.10).

În unele cazuri, este recomandabil să se folosească metode genetice moleculare pentru a determina secvențele genetice ale HIV în ser, limfocitele din sânge sau puncția ganglionilor limfatici. Verificarea specificității secvențelor de ADN obținute prin PCR poate fi realizată prin hibridizarea acizilor nucleici cu sonde ADN specifice.

Metodele de radioimunoprecipitare (RIP) și imunofluorescență indirectă (IFl) pot fi, de asemenea, utilizate pentru verificarea finală a serurilor cu rezultate îndoielnice de imunoblot.

Detectarea ARN HIV în plasmă printr-o metodă calitativă sau cantitativă nu este semnificativă pentru diagnosticul infecției cu HIV. Un astfel de rezultat ar trebui confirmat prin metode standard, cum ar fi imunoblotting, la 2-4 luni de la primirea unui răspuns inițial discutabil sau negativ.

Izolarea HIV în cultura celulară este adevărul suprem. Cu toate acestea, metoda este complexă, costisitoare și se realizează doar în laboratoare de cercetare special echipate.

Conținutul de celule CD4+ din sânge este un indicator nespecific, cu toate acestea, în cazuri controversate (ELISA „+”, imunoblot „-”, prezența semnelor clinice de infecție cu HIV/SIDA), acesta poate fi folosit ca ghid. pentru a lua o decizie de specialitate. Dacă laboratorul are capacitatea de a efectua numai imunoblotting, atunci recomandările din tabelul 1 trebuie urmate. 9.7 și în fig. 9.9.

Persoanele ale căror seruri au rezultate discutabile (nedeterminate) într-o examinare de specialitate, cu excepția cazurilor de detectare a anticorpilor numai pentru p17 (HIV-1) sau p16 (HIV-2), trebuie retestate în decurs de 6 luni (după 3 luni). În cazul unei adevărate infecții cu HIV, după 3-6 luni, se observă o tendință „pozitivă” în spectrul de anticorpi - formarea suplimentară de anticorpi la alte proteine ​​ale virusului. O reacție falsă se caracterizează prin persistența unui model de imunoblot ambiguu pentru o lungă perioadă de timp sau prin dispariția benzilor suspecte. Dacă, după perioada de timp specificată, rezultatele imunoblotării repetate sunt negative sau rămân îndoielnice, atunci în absența factorilor de risc, a simptomelor clinice sau a altor factori asociați cu infecția cu HIV, persoana poate fi considerată seronegativă pentru anticorpii la HIV- 1 și HIV-2.

Rezultate fals pozitive datorită conținutului în sângele pacienților de anticorpi la aloantigenele de histocompatibilitate, care fac parte din plicul HIV, apar pe imunoblot sub formă de benzi la nivelul gp41 și gp31. Cauzele altor reacții nespecifice (de exemplu, la p24, adesea întâlnite la indivizii cu procese autoimune) nu au fost încă clarificate.

Îmbunătățirea tehnologiei de producere a sistemelor de testare ELISA a făcut posibilă atingerea unei sensibilități ridicate - până la 99,99%, în timp ce sensibilitatea metodei de imunoblot este de 97%. Prin urmare, un rezultat negativ al imunoblotului cu rezultate ELISA pozitive poate indica o perioadă inițială de seroconversie caracterizată prin niveluri scăzute de anticorpi specifici. Prin urmare, este necesar să se repete studiul după 1,5-2 luni, adică perioada de timp necesară pentru finalizarea seroconversiei, pentru a obține o concentrație de anticorpi specifici în sânge suficientă pentru a fi detectați prin imunoblot.

Un rezultat pozitiv (rezultate) al studiului la etapa de referință sau numai de screening a diagnosticului de laborator al infecției cu HIV, adică un rezultat pozitiv în orice sistem de testare imunologică enzimatică, care în cele din urmă nu este confirmat de metodele experte, este interpretat ca prezență încrucișată. -anticorpi reactivi in ​​sangele anticorpilor examinati. Reactivitatea încrucișată se referă la legarea anticorpilor la situsuri nespecifice ale proteinelor sau peptidelor HIV utilizate ca bază antigenică în sistemul de testare în care se obține un rezultat pozitiv.

În absența imunodeficienței și a semnelor clinice de infecție cu HIV, astfel de persoane sunt considerate seronegative pentru anticorpii la HIV și ar trebui anulate.

Diagnosticul final al infecției cu HIV se stabilește numai pe baza tuturor datelor clinice, epidemiologice și de laborator. Doar medicul curant are dreptul de a informa pacientul cu privire la diagnosticul de infectie HIV.

Principala metodă de diagnostic de laborator de confirmare (expert) al infecției cu HIV este imunoblotting. Cu toate acestea, având în vedere sensibilitatea sa mai mică în comparație cu ELISA, un număr de cercetători au propus utilizarea unei combinații de mai multe sisteme de testare pentru determinarea finală a prezenței anticorpilor specifici la HIV. De exemplu, G. van der Groen et al. a propus o alternativă la metoda imunoblot pentru verificarea rezultatelor pozitive ale etapei de screening a diagnosticului de laborator al infecției cu HIV. Presupune studiul materialului în paralel în trei sisteme de testare, care se bazează pe diverse metode de depistare a anticorpilor specifici HIV (mai multe variante de ELISA, reacție de aglutinare) folosind antigene de natură diferită. Autorii au putut alege astfel de combinații de sisteme de testare, a căror utilizare oferă sensibilitate și specificitate de 100% în comparație cu rezultatele obținute în imunoblot.

Costul scăzut al acestei metode de diagnosticare de specialitate este un avantaj incontestabil, cu toate acestea, lipsa de informații cu privire la proteinele specifice ale virusului care există anticorpi în sângele pacientului nu permite evaluarea specificității reacției în fiecare caz individual, precum și ca urmărirea modificărilor în spectrul de anticorpi într-un stadiu incipient al seroconversiei.

Diagnosticul de laborator al infecției cu HIV la copiii născuți din mame infectate cu HIV are propriile sale caracteristici. Din momentul nașterii, pentru o lungă perioadă de timp (până la 15 luni), anticorpii materni împotriva HIV pot circula în sângele unor astfel de copii. Doar imunoglobulinele din clasa IgG pătrund în bariera placentară, prin urmare, detectarea mupoglobulinelor specifice HPV din clasele IgM și IgA la un copil poate confirma infecția, dar un rezultat negativ nu poate indica absența HIV.

Copiii cu vârsta sub 1 lună nu au încă replicare HPV, iar PCR este singura metodă de verificare. Determinarea antigenului p24 la copiii mai mari de 1 lună este, de asemenea, o metodă de confirmare.

Absența anticorpilor împotriva HIV la nou-născuți nu înseamnă că virusul nu a trecut bariera placentară. În orice caz, copiii mamelor infectate cu HIV sunt supuși examinării și observării diagnosticului de laborator timp de 36 de luni de la naștere.

Rezultatele testelor de laborator pentru markerii infecției cu HIV necesită o interpretare atentă și trebuie luate în considerare numai împreună cu datele din anchetele epidemiologice și clinice. Pe de altă parte, trebuie remarcat faptul că, în ciuda sensibilității ridicate a metodelor moderne, rezultatele negative ale testelor nu pot exclude complet prezența infecției cu HIV. Prin urmare, un rezultat negativ al testului, de exemplu, prin imunoblotting, poate fi formulat doar ca absența anticorpilor specifici pentru HIV-1 și HIV-2.

Diagnosticul infecției HIV la pacienții seronegativi

Calitatea sistemelor de testare utilizate în diagnosticul de laborator al infecției cu HIV se îmbunătățește în fiecare an, iar sensibilitatea acestora crește. Cu toate acestea, variabilitatea ridicată a HIV poate duce la apariția de noi tipuri, anticorpi față de care ar putea să nu fie recunoscuți de sistemele de testare existente. În plus, sunt cunoscute cazuri de răspuns umoral atipic al sistemului imunitar al organismului gazdă la virus. Deci, L. Montagnier în 1996 a raportat la doi pacienți cu SIDA, la care anticorpi specifici nu au fost detectați în sânge în ultimii ani, diagnosticul a fost pus pe baza datelor clinice și de laborator confirmate doar prin izolarea HPV- 1 în cultura celulară. În astfel de cazuri, este necesar să se utilizeze recomandările OMS, conform cărora diagnosticul clinic al infecției cu HIV la adulți și copii este posibil în prezența uneia dintre cele 12 boli care definesc SIDA:

1. candidoza esofagului, traheei, bronhiilor, plămânilor;
2. criptococoză extrapulmonară;
3. criptosporidioza cu diaree mai mult de o luna;
4. leziuni ale citomegalovirusului la orice organ (cu excepția și pe lângă ficatul, splina și ganglionii limfatici la un pacient mai în vârstă de 1 lună):
5. o infecție cauzată de virusul herpes simplex care persistă mai mult de 1 lună la un pacient mai în vârstă de 1 lună;
6. limfom cerebral la un pacient mai mic de 60 de ani;
7. pneumonie interstițială limfocitară la un copil sub 13 ani;
8. infecție diseminată cauzată de bacterii din grupul Mycobacterium avium intracellulare sau M. Kansassii;
9. pneumonie pneumocystis;
10. leucoencefalopatie multifocală progresivă;
11. toxoplasmoza sistemului nervos central la pacienții cu vârsta mai mare de 1 lună.

Prezența uneia dintre aceste boli face posibilă diagnosticarea infecției cu HIV în absența unui test de sânge de laborator pentru prezența anticorpilor la HIV sau chiar atunci când se obține un rezultat seronegativ.

Sursă: Diagnosticare de laborator medical, programe și algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., Sankt Petersburg, Intermedica, 2001

Atenţie!În cazul reacțiilor pozitive și îndoielnice, termenul de eliberare a rezultatului poate fi prelungit până la 10 zile lucrătoare.

Anticorpi la HIV 1, 2 tipuri, antigenul p 24 - un studiu al anticorpilor specifici care au apărut în organism ca răspuns la infecția cu virusul imunodeficienței umane (HIV) 1, 2 și antigenul p 24 al virusului imunodeficienței umane.

HIV(virusul imunodeficienței umane) - un virus din familia retrovirusurilor (un virus cu replicare lentă) care infectează celulele sistemului imunitar uman (CD4, T-helpers) și provoacă sindromul imunodeficienței dobândite.

Perioada de incubație este de obicei de 3-6 săptămâni. În cazuri rare, anticorpii împotriva HIV nu încep să fie detectați decât la câteva luni sau mai mult după infectare. Nivelul concentrației lor poate scădea semnificativ în perioada terminală a bolii. În cazuri rare, anticorpii împotriva infecției cu HIV pot dispărea pentru o lungă perioadă de timp.

Antigenul p 24 HIV 1.2 tipul, detectat în serul sanguin, indică un stadiu incipient al bolii. În primele câteva săptămâni după infecție, cantitatea de virus și antigen p24 din sânge crește rapid. De îndată ce anticorpii la HIV 1, 2 încep să fie produși, nivelul de antigen p 24 începe să scadă.

Determinarea antigenului p24 permite diagnosticarea infecției cu HIV în stadiile incipiente ale infecției, înainte de producerea de anticorpi.

Detectarea simultană a anticorpilor împotriva virusului HIV-1.2 și a antigenului virusului p24 crește valoarea diagnostică a studiului.

Acest test detectează anticorpii la HIV-1.2, precum și antigenul p24 al HIV-1.2. Analiza vă permite să diagnosticați infecția cu HIV într-un stadiu incipient.

Modalitati de transmitere a infectiei:

• sexual;
• în timpul transfuziei de sânge;
• de la o mamă infectată la un nou-născut.

infectie cu HIV- o boală lungă și severă, care este însoțită de afectarea celulelor sistemului imunitar uman; metode eficiente de tratament și mijloace de profilaxie specifică (vaccinuri) nu au fost încă dezvoltate împotriva acesteia.

Oamenii sunt sursa virusului imunodeficienței. Virusul la om poate fi izolat din lichidul seminal, secrețiile cervicale, limfocite, plasma sanguină, lichidul cefalorahidian, lacrimi, salivă, urină și laptele matern, dar concentrația virusului în ele este diferită. Cea mai mare concentrație a virusului se găsește în următoarele medii biologice: în material seminal, sânge, secreție cervicală.

Modalitățile prin care virusul poate fi transmis de la o persoană infectată la o persoană neinfectată sunt limitate.

Modalități de transmitere a infecției cu HIV
Există 3 căi de transmitere a virusului imunodeficienței:

1. Calea sexuală – este cea mai frecventă. Infecția are loc prin contact sexual neprotejat, în timp ce virusul pătrunde în organism prin mucoasele. Răni pe membrana mucoasă, răni, inflamații - cresc probabilitatea de infecție. La persoanele care suferă de infecții cu transmitere sexuală, riscul de infectare prin contactul cu o persoană infectată este de 2-5 ori mai mare. Pentru transmiterea virusului, nu numai gradul de intimitate al contactului este important, ci și cantitatea de agent patogen. În timpul sexului neprotejat, o femeie are de aproximativ trei ori mai multe șanse de a fi infectată de un bărbat, deoarece mai mult virus intră în organismul ei, iar femeia are o suprafață mult mai mare prin care virusul poate intra în organism (mucoasa vaginală). Riscul de infecție este cel mai mare în cazul sexului anal și cel mai puțin în cazul sexului oral.
2. Contactul cu sângele unei persoane infectate: a) atunci când se utilizează în comun ace, seringi, ustensile pentru prepararea medicamentelor, instrumente medicale nesterile; b) introducerea de medicamente în prepararea cărora se utilizează sânge; c) utilizarea, transfuzia de sânge donator infectat și preparatele făcute din acesta (riscul este extrem de scăzut, deoarece toți donatorii, precum și sângele, sunt verificați cu atenție).
3. De la o mamă infectată cu HIV (traseu vertical) la făt în timpul sarcinii, în timpul trecerii prin canalul de naștere, în timpul alăptării.

SIDA este stadiul terminal al infecției cu HIV
SIDA nu se dezvoltă peste noapte. La majoritatea oamenilor cu prezența anticorpilor împotriva virusului imunodeficienței, semnele clinice ale SIDA pot să nu apară timp de 2 până la 10 ani sau mai mult, iar cu un tratament de succes, această perioadă este semnificativ crescută. Acest lucru se datorează faptului că este nevoie de un timp suficient de lung pentru a reduce numărul de celule T CD4 la un nivel la care există o slăbire a sistemului imunitar.

Virusul infectează, de asemenea, alte tipuri de celule, inclusiv celulele sistemului nervos central și celulele roșii și albe din sânge, în care virusul pare să fie într-o stare „latente” mult timp înainte de a începe să se înmulțească activ. Factorii care influențează evoluția bolii sunt diverși: caracteristici genetice, tulpina virusului, starea psihologică a pacientului, condițiile de viață și altele.

Cursul bolii și durata etapelor depind, de asemenea, dacă persoana primește tratament și, dacă da, ce medicamente.

4 etape ale infecției cu HIV

• Perioada de incubație („perioada fereastră”) este timpul de la momentul infecției până la apariția în sângele uman a anticorpilor (proteine ​​protectoare ale sistemului imunitar) la virus. În această perioadă, infecția nu se manifestă în niciun fel, toate testele sunt negative, dar persoana este deja contagioasă. Perioada de incubație poate dura până la 3 luni (în medie 25 de zile).
• Stadiul manifestărilor primare. Durează în medie 2-3 săptămâni și se caracterizează printr-o creștere bruscă a cantității de virus din sânge. Această afecțiune se numește „boală de seroconversie” deoarece în acest moment apar anticorpi împotriva virusului în sânge în cantități suficiente pentru a fi detectați în timpul testelor. Această perioadă nu se manifestă la majoritatea oamenilor, totuși, fenomene asemănătoare gripei pot apărea în 20-30%: febră, ganglioni limfatici umflați, cefalee, dureri în gât, stare de rău, oboseală și dureri musculare. Această afecțiune se rezolvă după 2-4 săptămâni fără niciun tratament.
• Perioada asimptomatică. Apare după terminarea manifestărilor primare ale infecției și durează, în absența tratamentului, în medie până la 10 ani. În această perioadă, sistemul imunitar luptă împotriva virusului din corpul uman: numărul de particule virale crește treptat, iar imunitatea scade. Până la sfârșitul acestei etape, persoanele infectate prezintă ganglioni limfatici umflați, transpirații nocturne, stare generală de rău și primele manifestări ale infecțiilor oportuniste care apar la om, cu o slăbire puternică a sistemului imunitar. Aceste infecții sunt cauzate de microorganismele care ne înconjoară și nu provoacă infecții la oamenii sănătoși. Un sistem imunitar slăbit poate duce și la dezvoltarea altor boli, cum ar fi cancerul.
• SIDA este ultima etapă a acestei boli și se caracterizează prin apariția unui număr de boli datorate slăbirii sistemului imunitar al organismului. De obicei, pacienții au un număr foarte scăzut de CD4 T; una sau mai multe infecții oportuniste severe (pneumonie cu pneumocystis, infecție fungică severă, tuberculoză etc.), care provoacă moartea în absența tratamentului; boli oncologice; encefalopatie (leziuni cerebrale, însoțite de dezvoltarea demenței).

Principala metodă de diagnosticare de laborator este detectarea anticorpilor împotriva virusului folosind imunotestul enzimatic.

Procedura de efectuare a unui test de laborator pentru prezența antigenelor și anticorpilor virusului imunodeficienței umane împotriva acestui virus este strict reglementată de ordinele Ministerului Sănătății al Federației Ruse și include:

• stadiul studiului de screening (screening) prin metode imunoenzimatice (ELISA) aprobate pentru utilizare;
• stadiul studiului de verificare (confirmator) prin metoda imunoblot în laboratorul centrului SIDA orășenesc.

Diagnosticul de laborator al prezenței virusului imunodeficienței la copiii născuți din mame infectate cu acest virus are propriile sale caracteristici. Anticorpii materni împotriva virusului (clasa Ig G) pot circula în sângele copiilor până la 15 luni din momentul nașterii. Absența anticorpilor împotriva virusului la nou-născuți nu înseamnă că acesta nu a trecut bariera placentară. Copiii mamelor infectate cu virusul imunodeficienței sunt supuși examinării diagnostice de laborator în termen de 36 de luni de la naștere.

Până la obținerea unui rezultat pozitiv la imunoblot și dacă rezultatul studiului este negativ, persoana este considerată sănătoasă și nu se iau măsuri antiepidemice cu ea.

Materialul pentru testarea anticorpilor împotriva virusului imunodeficienței este sângele venos, care este de dorit să fie donat pe stomacul gol.

Desigur, testul pentru prezența virusului este o chestiune voluntară pentru fiecare persoană. Testele pentru purtarea virusului imunodeficienței nu pot fi prescrise forțat, fără acordul pacientului. Dar trebuie să înțelegi că, cu cât se pune mai devreme un diagnostic corect, cu atât este mai probabil să trăiești o viață lungă și împlinită, chiar fiind purtătorul acesteia.

Indicatii:

• ganglioni limfatici umflați în mai mult de două zone;
• leucopenie cu limfopenie;
• transpirații nocturne;
• pierdere bruscă în greutate de cauză necunoscută;
• diaree pentru mai mult de trei săptămâni de cauză necunoscută;
• febră de cauză necunoscută;
• planificarea sarcinii;
• pregătire preoperatorie, spitalizare;
• depistarea următoarelor infecții sau combinații ale acestora: tuberculoză, toxoplasmoză manifestă, infecție cu herpes virus adesea recurentă, candidoză a organelor interne, nevralgie herpes-zosterică repetată, pneumonie cauzată de micoplasme, pneumocystis sau legionella;
• sarcomul lui Kaposi la o vârstă fragedă;
• sex ocazional.

Reguli de aplicare pentru HIV:
Înregistrarea cererilor de cercetare în DNAOM se efectuează în baza unui pașaport sau a unui document care îl înlocuiește (carte de migrare, înregistrare temporară la locul de reședință, certificat de militar, adeverință de la biroul de pașapoarte în caz de pierdere a pașaportului, carte de înregistrare din un hotel). Documentul transmis trebuie să conțină informații despre înregistrarea temporară sau permanentă pe teritoriul Federației Ruse și o fotografie. În lipsa unui pașaport (un document care îl înlocuiește), pacientul are dreptul de a face o cerere anonimă pentru livrarea de biomaterial. Cu o examinare anonimă, aplicației și probei de biomaterial primite de la client li se atribuie un număr cunoscut doar pacientului și personalului medical care a plasat comanda.

Rezultatele studiilor efectuate anonim nu pot fi depuse pentru internare, examinări profesionale și nu fac obiectul înregistrării la ORUIB.

Interpretarea rezultatelor
Testul de anticorpi HIV 1/2 este calitativ. În absența anticorpilor, răspunsul este „negativ”. În cazul depistarii anticorpilor la HIV, studiul se repetă într-o altă serie. Când un rezultat pozitiv este repetat în imunotestul enzimatic, proba este trimisă pentru examinare printr-o metodă de confirmare a imunoblot, care este „standardul de aur” în diagnosticul HIV.

Rezultat pozitiv:

• infecție cu HIV;
• rezultat fals pozitiv care necesită studii repetate sau suplimentare*;
• studiul nu este informativ la copiii sub 18 luni născuți din mame infectate cu HIV.

Rezultat negativ:

• neinfectat (s-au observat termenii diagnostici ai analizei);
• varianta seronegativă a cursului infecției (anticorpii sunt produși târziu);
• stadiul terminal al SIDA (formarea afectată a anticorpilor împotriva HIV);
• studiul nu este informativ (termenii de diagnostic nu sunt îndepliniți).

Relevanța identificării persoanelor infectate cu HIV în stadiile incipiente ale infecției se datorează necesității unui studiu epidemiologic mai eficient, organizării în timp util a măsurilor preventive necesare în rândul persoanelor de contact, precum și posibilei utilizări a unui ciclu scurt de antiretrovirale. terapie pentru a reduce încărcătura virală pentru a îmbunătăți prognosticul evoluției bolii. Informarea în timp util a pacientului despre infecție ajută la reducerea riscului de transmitere a bolii și posibila participare a acestuia la donație.

Diagnosticul de infecție HIV înainte de un rezultat pozitiv de blotting imun (IB) este confirmat prin detectarea antigenului p24 și/sau acidului nucleic HIV în serul pacientului.

Determinarea antigenului p24 folosind imunotestul enzimatic (ELISA) este o modalitate simplă și economică de a demonstra prezența unei proteine ​​virale în sângele unui pacient datorită replicării intensive a virusului în primele săptămâni după infecție. Testul antigen p24 este disponibil laboratoarelor cu facilități ELISA de rutină. În comparație cu determinarea încărcăturii virale prin metoda reacției în lanț a polimerazei, este mai puțin costisitoare și laborioasă. În ciuda faptului că strategia de determinare a infecției în perioada seronegativă este cunoscută, până acum acest test nu a fost inclus în algoritmul de diagnosticare a HIV. Se știe că cel mai mare procent de detecție a p24 este observat în seruri cu rezultate IB îndoielnice. Cu toate acestea, sa demonstrat că sistemele de testare cu un prag standard de sensibilitate analitică (10 pg/ml) au sensibilitate diagnostică insuficientă și semnificație prognostică a p24 detectat pentru includerea în procesul de diagnostic de rutină. În acest sens, dezvoltarea și implementarea unui sistem de testare pentru antigenul p24 cu sensibilitate analitică crescută este de mare interes.

Scopul lucrării este de a evalua semnificația prognostică a detectării antigenului HIV p24 folosind sisteme de testare cu diferite praguri de sensibilitate analitică la indivizi cu rezultate IB îndoielnice.

Într-un studiu retrospectiv al serurilor cu un rezultat nedeterminat pentru anticorpii HIV din IB, utilizarea unui sistem de testare pentru antigenul p24 cu un prag de sensibilitate analitică de 0,5 pg/ml a evidențiat 50% dintre pacienții infectați și utilizarea unui sistem de testare. care detectează 8 pg/ml - 22,9%. Utilizarea unui set suplimentar de reactivi pentru distrugerea complexului imun face posibilă creșterea detecției antigenului p24 până la 55,3%. Semnificația prognostică a prezenței infecției HIV cu testare suplimentară pentru antigenul p24 a fost de 91,7-96%. Introducerea unui test suplimentar pentru antigenul HIV p24 cu o sensibilitate analitică de 0,5 pg/ml în algoritmul de diagnosticare HIV face posibilă confirmarea diagnosticului HIV într-un stadiu incipient al bolii în cel puțin 13% din cazuri la indivizi. cu un rezultat nedeterminat de IB. (Vezi articolul: Neshumaev D.A. et al. „Semnificația prognostică a detectării antigenului HIV p24 folosind sisteme de testare cu sensibilitate analitică crescută”).

„Diagnosticare clinică de laborator”, 2009, nr. 2, p. 40 - 42.

SIDA este o boală în care sistemul imunitar uman este incapabil să protejeze organismul de infecții oportuniste și cancere care pun viața în pericol. HIV infectează limfocitele T prin introducerea unei bucăți de ADN viral în genomul persoanei infectate.

Fără a primi terapie antiretrovială, 50% dintre cei infectați cu HIV se vor dezvolta în SIDA la 10 ani după infectare. Moartea apare din cauza infecțiilor oportuniste (manifestate prin scăderea imunității) sau a bolilor maligne.

Anticorpii HIV 1,2 apar de obicei în ser la 12 săptămâni după infectare, rar (în 5-9% din cazuri) - mai târziu.

Antigenul p24 HIV 1.2 detectat în serul sanguin indică un stadiu incipient al bolii. În primele câteva săptămâni după infecție, cantitatea de virus și antigen p24 din sânge crește rapid. Imediat ce anticorpii la HIV 1.2 încep să fie produși, nivelul de antigen p24 începe să scadă. Determinarea antigenului p24 permite diagnosticarea infecției cu HIV în stadiile incipiente ale infecției, înainte de producerea de anticorpi.

Detectarea simultană a anticorpilor la virusul HIV-1,2 și antigenul p24 crește valoarea diagnostică a studiului.

• Strict pe stomacul gol (la cel puțin 12 ore după ultima masă), se fac următoarele teste:

Test de sânge clinic general; determinarea grupei sanguine și a factorului Rh;

Analize biochimice (glucoză, colesterol, trigliceride, AlAT, AsAT etc.);

Studiul sistemului de hemostază (APTT, protrombină, fibrinogen etc.);

Markeri tumorali.