Studii bacteriologice de laborator. Laborator bacteriologic - laboratoare, paraclinici

Introducere

Ca și partea generală a oricărei alte științe, bacteriologia generală nu se ocupă de întrebări specifice (să zicem, identificarea speciilor individuale de bacterii), ci de probleme în general; metodologia sa acoperă procedurile de bază care sunt utilizate pe scară largă într-o mare varietate de studii de laborator. Acest ghid de studiu nu are scopul de a identifica niciun grup de microorganisme. Aceasta este sarcina următoarelor publicații - despre microbiologia privată și sanitară. Cu toate acestea, metodele prezentate în acesta pot fi utile în orice domeniu în care bacteriile trebuie tratate și pot fi aplicate la probleme practice, inclusiv izolarea și tipificarea bacteriilor.

Bacteriologia a devenit o știință doar după ce au fost dezvoltate tehnici unice care continuă să influențeze și să se infiltreze în domeniile științifice emergente ulterioare, cum ar fi virologia, imunologia și biologia moleculară. Tehnica de utilizare a culturilor pure dezvoltată de R. Koch și reacțiile imunologice și analiza chimică inițiate de L. Pasteur nu și-au pierdut semnificația nici acum.

Metodologia bacteriologiei generale este reflectată în această ediție cu ajutorul unei astfel de construcții, care este tipică pentru manualele standard din această disciplină. Cu toate acestea, spre deosebire de atelierele de laborator privind cursul de microbiologie pentru universități, acesta este prezentat mai detaliat în unele secțiuni și este doar pentru referință. Această structură ține cont de particularitățile pregătirii și specializării bacteriologilor și experților sanitari veterinari. Adesea materialul este prezentat arbitrar, așa că unele metode sunt menționate de mai multe ori, din dorința de a demonstra relația lor.

laborator bacteriologic

Laboratoarele bacteriologice ca unități structurale sunt organizate ca parte a laboratoarelor veterinare regionale, raionale, interraionale, precum și în structura laboratoarelor veterinare zonale. Sunt organizate și la centrele de supraveghere sanitară și epidemiologică, în spitale de boli infecțioase, spitale generale, unele spitale specializate (de exemplu, în tuberculoză, reumatologie, dermatovenerologie), și policlinici. Laboratoarele bacteriologice fac parte din instituții de cercetare specializate. Laboratoarele bacteriologice sunt utilizate în mod constant pentru confirmarea sau stabilirea ratingului de adecvare alimentară a cărnii conform ESS.

Obiectele de studiu în laboratoarele bacteriologice sunt:

1. Evacuări din organism: urină, fecale, spută, puroi, precum și sânge, material patologic și cadaveric.

2. Obiecte ale mediului extern: apă, aer, sol, spălări din obiecte de inventar, furaje, materii prime tehnologice obţinute din sacrificarea animalelor de fermă.

3. Produse alimentare, mostre de carne și produse din carne, lapte și produse lactate, care trebuie evaluate pentru adecvarea în scopuri alimentare.

Sala de laborator bacteriologic si echipamente la locul de munca

Specificul muncii microbiologice impune ca încăperea alocată laboratorului să fie izolată de camere de zi, blocuri alimentare și alte spații industriale non-core.

Laboratorul bacteriologic cuprinde: săli de laborator pentru cercetări bacteriologice și săli de utilitate; autoclavă sau sterilizare pentru decontaminarea deșeurilor și a ustensilelor contaminate; spălat, echipat pentru spălat vase; bucatarie bacteriologica - pentru prepararea, imbutelierea, sterilizarea si depozitarea mediilor nutritive; vivarium pentru păstrarea animalelor de experiment; material pentru depozitarea reactivilor de rezervă, ustensilelor, echipamentelor și echipamentelor de uz casnic.

Camerele de utilitate enumerate, ca unități structurale independente, fac parte din mari laboratoare bacteriologice. În laboratoarele mici, bucătăria bacteriologică și cea de sterilizare sunt combinate într-o singură cameră; nu există încăpere specială pentru păstrarea animalelor de experiment.

În funcție de gradul de pericol pentru personal, sediul laboratoarelor microbiologice este împărțit în 2 zone:

I. Zona „contagioasă” - o încăpere sau un grup de încăperi dintr-un laborator în care sunt manipulați și depozitați agenți biologici patogeni, personalul este îmbrăcat cu îmbrăcămintea de protecție de tipul adecvat.

II. Zona „curată” - spații în care nu se efectuează lucrări cu material biologic, personalul este îmbrăcat cu îmbrăcăminte personală.

Sub sălile de laborator, în care se efectuează toate studiile bacteriologice, sunt alocate cele mai luminoase și mai spațioase încăperi. Peretii din aceste incaperi la inaltimea de 170 cm fata de podea sunt vopsiti in culori deschise cu vopsea in ulei sau acoperiti cu gresie. Podeaua este acoperită cu relin sau linoleum. Acest tip de finisaj vă permite să utilizați soluții dezinfectante atunci când curățați camera.

Fiecare cameră ar trebui să aibă o chiuvetă cu instalații sanitare și un raft pentru o sticlă de soluție dezinfectantă.

Într-una dintre încăperi este dotată o cutie vitrata - o cameră izolată cu vestibul (pre-box) pentru efectuarea lucrărilor în condiții aseptice. În cutie, au pus o masă pentru culturi, un scaun, lămpi bactericide sunt montate deasupra locului de muncă. Un dulap pentru depozitarea materialului steril este amplasat în anticameră. Ferestrele și ușile spațiilor din zona „infecțioasă” trebuie să fie etanșe. Ventilația de evacuare existentă din zona „infecțioasă” trebuie izolată de alte sisteme de ventilație și echipată cu filtre fine de aer.

Sala de laborator este dotata cu mese de tip laborator, dulapuri si rafturi pentru depozitarea echipamentelor, ustensilelor, vopselelor si reactivilor necesari muncii.

Organizarea corectă a locului de muncă a unui bacteriolog și asistent de laborator este foarte importantă pentru muncă. Mesele de laborator sunt instalate lângă ferestre. Când le plasați, trebuie să vă străduiți să vă asigurați că lumina cade în față sau în lateralul lucrătorului, de preferință pe partea stângă, dar în niciun caz din spate. Este de dorit ca încăperile de analiză, în special pentru microscopie, să aibă ferestre orientate spre nord sau nord-vest, deoarece chiar și lumină difuză este necesară pentru lucru. Iluminarea suprafeței meselor pentru lucru ar trebui să fie de 500 de lux. Pentru confortul dezinfectării, suprafața meselor de laborator este acoperită cu plastic sau tapițată cu fier. Fiecărui angajat al laboratorului i se atribuie un loc de muncă separat de 150x60 cm.

Toate locurile de muncă sunt echipate cu articole necesare lucrărilor bacteriologice zilnice, a căror listă este dată în tabelul 1.

Tabelul 1.

Elemente necesare pentru lucrări bacteriologice

Numele articolului	Cantitate aproximativă
1. Un set de vopsele și reactivi pentru colorare
2. Diapozitive	25-50
3. Ochelari de acoperire	25-50
4. Ochelari cu gauri	5-10
5. Raft pentru eprubete
6. Ansa bacteriană
7. Spatule de sticla
8. Spatule metalice
9. Un borcan de bumbac
10. Pipete gradate 1, 2, 5, 10 ml	25 din fiecare volum
11. Pipete Pasteur	25-50
12. Penseta, foarfeca, bisturiu	Până la 1
13. Recipiente cu soluții dezinfectante
14. Microscop cu iluminator
15. Lupa 5 ´
16. Vas cu unt cu ulei de imersie
17. Hârtie de filtru	3-5 foi
18. Un borcan cu soluție dezinfectantă pentru pipete
19. Arzător cu alcool sau gaz
20. Instalatie pentru preparate de colorat
21. Clepsidra timp de 1 sau 2 minute	Până la 1
22. Para cu tub de cauciuc
23. Creion pe sticlă
24. Un borcan cu tampoane cu alcool
25. Vase sterile necesare	-

Dezinfectare

Dezinfecția este distrugerea microorganismelor din obiectele din mediu.

În laboratoarele de microbiologie, măsurile de dezinfecție sunt utilizate foarte larg. La terminarea lucrărilor cu material infecțios, angajații laboratoarelor bacteriologice efectuează dezinfecția preventivă a mâinilor și a locului de muncă.

Materialul patologic uzat (fecale, urină, spută, diverse tipuri de lichide, sânge) este supus dezinfectării înainte de a fi aruncat în canalizare.

Pipetele gradate și Pasteur, spatulele de sticlă și instrumentele metalice contaminate cu material patologic sau cultură de microbi imediat după utilizare sunt coborâte în borcane de sticlă cu o soluție dezinfectantă amplasată pe masă la fiecare loc de muncă.

Lamelele și lamelele utilizate în lucrare sunt, de asemenea, supuse dezinfectării obligatorii, deoarece chiar și într-un frotiu fix și colorat rămân uneori microorganisme viabile, care pot fi o sursă de contaminare intralaborator. Numai acele vase în care au fost cultivate microorganisme nu sunt tratate cu dezinfectanți. Este pliat în rezervoare metalice sau bixes, sigilat și predat pentru autoclavare.

Alegerea unui dezinfectant, concentrația soluției acestuia, raportul dintre cantitatea de dezinfectant și materialul de dezinfectat, precum și durata perioadei de dezinfectare, sunt stabilite în funcție de condițiile specifice, luând în considerare, mai întâi, dintre toate, stabilitatea microbilor de dezinfectat, gradul de contaminare așteptat, compoziția și consistența materialului în care se află.

Dezinfectarea mâinilor după lucrul cu material infecțios și când acesta intră în contact cu pielea. La sfârșitul lucrului cu material infecțios, mâinile sunt dezinfectate profilactic. O cârpă de vată sau de tifon se umezește cu o soluție 1% de cloramină, mai întâi mâna stângă și apoi cea dreaptă se șterg în următoarea succesiune: dosul mâinii, suprafața palmară, spațiile interdigitale, paturile unghiale. Astfel, zonele cel mai puțin contaminate sunt tratate mai întâi, apoi se trece la zonele cele mai puternic contaminate ale pielii. Ștergeți mâinile timp de 2 minute cu două tampoane succesive. Când mâinile sunt contaminate cu o cultură a unui microb patogen sau material patologic, zonele contaminate ale pielii sunt mai întâi dezinfectate. În acest scop, acestea sunt acoperite timp de 3-5 minute cu vată umezită cu o soluție de 1% cloramină, apoi bumbacul este aruncat într-un rezervor sau găleată cu material rezidual, iar mâinile sunt tratate cu un al doilea tampon în același timp. mod ca în timpul dezinfectării preventive. După tratamentul cu cloramină, mâinile se spală cu apă caldă și săpun. Când se lucrează cu bacterii care formează spori, mâinile sunt tratate cu 1% cloramină activată. Dacă materialul infecțios ajunge pe mâini, expunerea dezinfectantului crește la 5 minute.

Sterilizarea

Sterilizarea, spre deosebire de dezinfecție, presupune distrugerea tuturor microorganismelor vegetative și sporice, patogene și nepatogene din obiectul sterilizat. Sterilizarea se realizează în diferite moduri: abur, aer cald uscat, fierbere, filtrare etc. Alegerea uneia sau alteia metode de sterilizare este determinată de calitatea și proprietățile microflorei obiectului sterilizat.

Pregatirea si sterilizarea echipamentelor de laborator

Înainte de sterilizare, sticlăria de laborator este spălată și uscată. Tuburile de testare, sticlele, sticlele, saltelele și baloanele sunt închise cu dopuri din tifon de bumbac. Peste dopurile de pe fiecare vas (cu excepția eprubetelor) puneți capace de hârtie.

Dopurile din cauciuc, plută și sticlă sunt sterilizate într-o pungă separată legată de gâtul vasului. Vasele Petri se sterilizeaza invelite in hartie, cate 1-10 bucati fiecare. Pipete Pasteur, 3-15 buc. învelit în hârtie de împachetat. În partea superioară a fiecărei pipete se pune o bucată de vată pentru a preveni pătrunderea materialului în mediul înconjurător. La ambalarea pipetelor, trebuie avută mare grijă pentru a nu rupe capetele sigilate ale capilarelor. În timpul funcționării, pipetele sunt scoase din ambalaj prin capătul superior.

Vata de siguranta se introduce in partea superioara a pipetelor gradate, ca la pipetele Pasteur, si apoi se inveleste in hartie groasa, pretaiata in fasii de 2-2,5 cm latime si 50-70 cm lungime. , capătul său stâng este pliat și le înfășurați vârful pipetei, apoi, rotind pipeta, înfășurați o bandă de hârtie în jurul ei. Pentru a preveni desfacerea hârtiei, capătul opus este răsucit sau lipit. Volumul pipetei împachetate este scris pe hârtie. Dacă există cazuri, pipetele gradate sunt sterilizate în ele.

Sterilizați sticla de laborator

a) căldură uscată la 180°C și 160°C timp de 1 oră, respectiv 150 minute.

b) în autoclavă la o presiune de 1,5 atm. în 60 de minute, pentru distrugerea microflorei sporilor - 90 de minute la 2 atm.

Sterilizarea seringilor. Seringile se sterilizeaza demontate: separat cilindrul si pistonul intr-o solutie de bicarbonat de sodiu 2% timp de 30 de minute. Când se lucrează cu microfloră purtătoare de spori, sterilizarea se efectuează într-o autoclavă la 132±2°C (2 atm.) timp de 20 de minute, la 126±2°C (1,5 atm.) - 30 minute. Se colectează seringa sterilizată după ce s-a răcit, se introduce un piston în cilindru, se pune un ac, după ce se scoate dornul din acesta. Acul, cilindrul si pistonul se iau cu penseta, care se sterilizeaza impreuna cu o seringa.

Sterilizarea instrumentelor metalice. Instrumentele metalice (foarfece, bisturii, pensete etc.) se sterilizeaza intr-o solutie de bicarbonat de sodiu 2%, care previne rugina si pierderea claritatii. Se recomandă să înfășurați lamele bisturiilor și foarfecelor cu vată înainte de scufundarea în soluție.

Sterilizarea anselor bacteriene. Buclele bacteriene din sârmă de platină sau nicrom sunt sterilizate în flacăra unui arzător cu alcool sau gaz. Această metodă de sterilizare se numește calcinare sau ardere.

Bucla în poziție orizontală este adusă în partea inferioară, cea mai rece, a flăcării arzătorului, astfel încât materialul patogen ars să nu stropească. După ce se arde, bucla este transferată într-o poziție verticală, mai întâi partea inferioară, apoi partea superioară a firului este încălzită la roșu și suportul buclei este ars. Aprinderea în ansamblu durează 5-7 s.

Pregatire pentru sterilizarea si sterilizarea hartiei, tifonului si bumbacului. Vata, tifon, hârtie de filtru sunt sterilizate într-un cuptor cu căldură uscată la o temperatură de 160 ° C timp de o oră din momentul în care temperatura este indicată de un termometru sau într-o autoclavă la o presiune de 1 atm. în 30 de minute.

Înainte de sterilizare, hârtia și tifonul sunt tăiate în bucăți, iar vata este rulată sub formă de bile sau tampoane de dimensiunea dorită. După aceea, fiecare tip de material individual, una sau mai multe bucăți, este înfășurat în hârtie groasă. Dacă pachetul este spart, materialul sterilizat trebuie sterilizat din nou, deoarece sterilitatea acestuia este încălcată.

Sterilizarea mănușilor și a altor produse din cauciuc. Produsele din cauciuc (mănuși, tuburi etc.) contaminate cu forma vegetativă a microbilor se sterilizează prin fierbere într-o soluție de bicarbonat de sodiu 2% sau curgerea de abur timp de 30 de minute; când este contaminat cu microfloră purtătoare de spori, în autoclavă la o presiune de 1,5-2 atm. în 30 sau 20 de minute. Înainte de sterilizare, mănușile de cauciuc sunt stropite în interior și exterior cu talc pentru a le proteja de lipire. Se pune tifon între mănuși. Fiecare pereche de mănuși este înfășurată separat în tifon și plasată în biciclete sub această formă.

Sterilizarea culturilor patogene de microbi. Eprubete și pahare care conțin culturi microbiene care nu sunt necesare pentru lucrări ulterioare sunt plasate într-un rezervor metalic, capacul este sigilat și predat pentru sterilizare. Culturile de microbi patogeni, forme vegetative, sunt ucise într-o autoclavă timp de 30 de minute la o presiune de 1 atm. Livrarea rezervoarelor pentru sterilizare la autoclavă se efectuează de către o persoană special desemnată, contra primirii. Modul de sterilizare este înregistrat într-un jurnal special. La distrugerea culturilor de microbi din grupele I și II de patogenitate, precum și a materialelor infectate sau suspectate de a fi infectate cu agenți patogeni alocați acestor grupe, rezervoarele cu material rezidual sunt transferate pe tăvi metalice cu laturile înalte în prezența unei persoane însoțitoare care este permis să lucreze cu material infecțios.

Tipuri de sterilizare

Sterilizarea prin fierbere. Sterilizarea prin fierbere se realizează într-un sterilizator. Apa distilată este turnată în sterilizator, deoarece apa de la robinet formează depuneri. (Obiectele de sticlă sunt scufundate în obiecte metalice reci, în apă fierbinte cu adaos de bicarbonat de sodiu). Articolele sterilizate se fierb la foc mic timp de 30-60 de minute. Începutul sterilizării este considerat momentul fierberii apei în sterilizator. La sfârșitul fierberii, instrumentele sunt luate cu pensete sterile, care se fierb împreună cu restul articolelor.

Sterilizare la căldură uscată. Sterilizarea la căldură uscată se realizează într-un cuptor Pasteur. Materialul pregatit pentru sterilizare este asezat pe rafturi astfel incat sa nu intre in contact cu peretii. Dulapul este închis și după aceea se pornește încălzirea. Durata sterilizării la temperatura de 150°C este de 2 ore, la 165°C - 1 oră, la 180°C - 40 minute, la 200°C - 10-15 minute (la 170°C hârtia și vata se rotesc galben, iar la o temperatură mai mare carbonizat). Inceputul sterilizarii este momentul in care temperatura din cuptor atinge inaltimea dorita. La sfârșitul perioadei de sterilizare, cuptorul este oprit, dar ușile dulapului nu sunt deschise până când nu se răcesc complet, deoarece aerul rece care intră în dulap poate provoca crăpături pe vasele fierbinți.

Sterilizare cu abur sub presiune. Sterilizarea cu abur sub presiune se realizează într-o autoclavă. Autoclava este formată din două cazane introduse una în alta, o carcasă și un capac. Cazanul exterior se numește cameră apă-abur, cel interior se numește cameră de sterilizare. Aburul este produs într-un cazan cu abur. Materialul de sterilizat se pune in cazanul interior. Există mici găuri în partea superioară a ibricului de sterilizare prin care trece aburul din camera de abur. Capacul autoclavei este înșurubat ermetic pe carcasă. În plus față de părțile principale enumerate, autoclavul are o serie de părți care îi reglează funcționarea: un manometru, o sticlă pentru manometru, o supapă de siguranță, robinete de evacuare, aer și condens. Manometrul este utilizat pentru a determina presiunea care este creată în camera de sterilizare. Presiunea atmosferică normală (760 mm Hg. Art.) este considerată zero, prin urmare, într-o autoclavă inactivă, acul manometrului este la zero. Există o anumită relație între citirile manometrului și temperatură (Tabelul 2).

Masa 2.

Raportul dintre citirile manometrului și punctul de fierbere al apei

Linia roșie de pe scara manometrului indică presiunea maximă de lucru permisă în autoclavă. Supapa de siguranță servește pentru a proteja împotriva creșterii excesive a presiunii. Este setat la o presiune predeterminată, adică presiunea la care trebuie efectuată sterilizarea, când săgeata manometrului depășește linia, supapa autoclavei se deschide automat și eliberează excesul de abur, încetinind astfel creșterea ulterioară a presiunii. .

Pe peretele lateral al autoclavei există un pahar de măsurare care arată nivelul apei din cazanul de abur. Pe tubul sticlei de măsurare a apei se aplică două linii orizontale - inferioară și superioară, indicând, respectiv, nivelurile admisibile de apă inferior și superior în camera de apă-abur. Robinetul de aer este conceput pentru a elimina aerul din camerele de sterilizare și apă-abur la începutul sterilizării, deoarece aerul, fiind un slab conductor de căldură, încalcă regimul de sterilizare. În partea inferioară a autoclavei se află un robinet de condensare pentru a elibera camera de sterilizare din condensul format în timpul încălzirii materialului sterilizat.

Reguli de autoclave. Înainte de a începe lucrul, inspectați autoclavul și instrumentele. În autoclavele cu control automat al aburului, săgețile de pe manometrul electrovacuum al camerei de vapori de apă sunt setate în conformitate cu modul de sterilizare: săgeata inferioară este setată la 0,1 atm. inferior, superior - cu 0,1 atm. peste presiunea de lucru, camera de apă-abur este umplută cu apă până la marcajul superior al paharului de măsurare. În perioada de umplere cu apă, supapa de pe conducta prin care intră aburul în cameră se menține deschisă pentru ca aerul liber să iasă din cazan. Camera de sterilizare a autoclavei este încărcată cu materialul de sterilizat. După aceea, capacul (sau ușa) autoclavei este închis, bine fixat cu o încuietoare centrală sau șuruburi; pentru a evita deformarea, șuruburile sunt înșurubate în cruce (în diametru). Apoi porniți sursa de încălzire (curent electric, abur), închizând supapa de pe conducta care leagă sursa de abur la camera de sterilizare. Odată cu debutul vaporizării și crearea presiunii în camera de apă-abur, se efectuează o purjare (se scoate aerul din cazanul de sterilizare). Metoda de eliminare a aerului este determinată de proiectarea autoclavei. La început, aerul iese în porțiuni separate, apoi apare un curent continuu de abur, care indică faptul că aerul a fost complet eliminat din camera de sterilizare. După îndepărtarea aerului, supapa este închisă și începe o creștere treptată a presiunii în camera de sterilizare.

Începutul sterilizării este momentul în care manometrul indică presiunea setată. După aceea, intensitatea de încălzire este redusă, astfel încât presiunea din autoclavă să rămână la același nivel pentru timpul necesar. La sfârșitul timpului de sterilizare, încălzirea este oprită. Închideți supapa din conducta care furnizează abur în camera de sterilizare și deschideți supapa de pe conducta de condens (în jos) pentru a reduce presiunea aburului în cameră. După ce acul manometrului scade la zero, slăbiți încet dispozitivele de prindere și deschideți capacul autoclavei.

Temperatura si durata sterilizarii sunt determinate de calitatea materialului de sterilizat si de proprietatile microorganismelor cu care este infectat.

Controlul temperaturii în camera de sterilizare se efectuează periodic prin teste bacteriologice. Biotestele sunt produse de laboratoarele bacteriologice ale Serviciului Central Epidemiologic. Dacă aceste teste eșuează, se verifică starea tehnică a autoclavei.

Sterilizarea cu abur. Sterilizarea cu abur fluid se efectuează într-un aparat cu abur fluid Koch sau într-o autoclavă cu un capac deșurubat și un robinet de evacuare deschis. Aparatul Koch este un cilindru metalic gol cu ​​fund dublu. Spațiul dintre plăcile superioare și inferioare este umplut 2/3 cu apă (există un robinet pentru a scurge apa rămasă după sterilizare). Capacul aparatului are un orificiu în centru pentru un termometru și câteva orificii mici pentru a ieși aburului. Materialul care urmează să fie sterilizat este încărcat liber în camera aparatului pentru a oferi posibilitatea celui mai mare contact al acestuia cu aburul. Începutul sterilizării este timpul din momentul în care apa fierbe și aburul intră în camera de sterilizare. Într-un aparat cu abur fluid, în principal mediile nutritive sunt sterilizate, ale căror proprietăți se modifică la temperaturi peste 100°C. Sterilizarea cu abur curgător trebuie repetată, deoarece o singură încălzire la o temperatură de 100 ° C nu asigură dezinfecția completă. Această metodă se numește sterilizare fracționată: tratarea materialului sterilizat cu abur curgător se efectuează timp de 30 de minute pe zi, timp de 3 zile. În intervalele dintre sterilizări, materialul este păstrat la temperatura camerei pentru ca sporii să germineze în forme vegetative, care mor în timpul încălzirii ulterioare.

Tindalizare. Tyndalizarea este sterilizarea fracționată folosind temperaturi sub 100°C, propusă de Tyndall. Incalzirea materialului de sterilizat se realizeaza intr-o baie de apa dotata cu termostat timp de o ora la temperatura de 60-65°C timp de 5 zile sau la 70-80°C timp de 3 zile. Între încălziri, materialul prelucrat este menținut la o temperatură de 25°C pentru ca sporii să germineze în forme vegetative, care mor în timpul încălzirilor ulterioare. Tindalizarea este utilizată pentru a deshidrata mediile nutritive care conțin proteine.

Sterilizare mecanică cu ultrafiltre bacteriene. Filtrele bacteriene sunt folosite pentru a elibera lichidul de bacteriile din acesta, precum și pentru a separa bacteriile de viruși, fagi și exotoxine. Virușii nu sunt reținuți de filtrele bacteriene și, prin urmare, ultrafiltrarea nu poate fi considerată sterilizare în sensul acceptat al cuvântului. Pentru fabricarea ultrafiltrelor se folosesc materiale fin poroase (caolin, azbest, nitroceluloză etc.) care pot prinde bacterii.

Filtrele de azbest (filtrele Seitz) sunt plăci de azbest cu grosimea de 3-5 mm și cu diametrul de 35 și 140 mm pentru filtrarea unor volume mici și mari de lichid. În țara noastră, filtrele de azbest sunt produse în două grade: „F” (filtrare), reținând particulele în suspensie, dar care trece bacterii, și „SF” (sterilizant), mai dens, reținând bacteriile. Înainte de utilizare, filtrele de azbest sunt montate în aparate de filtrare și sterilizate împreună cu acestea într-o autoclavă. Filtrele de azbest sunt folosite o singură dată. Ultrafiltrele cu membrana sunt realizate din nitroceluloza si sunt discuri albe cu diametrul de 35 mm si grosimea de 0,1 mm.

Filtrele bacteriene diferă în dimensiunea porilor și sunt desemnate prin numere de serie (Tabelul 3).

Tabelul 3

Filtre bacteriene

Filtrele cu membrană sunt sterilizate prin fierbere imediat înainte de utilizare. Filtrele se pun in apa distilata incalzita la o temperatura de 50-60°C pentru a preveni rasucirea lor, se fierb la foc mic timp de 30 de minute, schimband apa de 2-3 ori. Filtrele sterilizate sunt îndepărtate din sterilizator cu pensete flambate și răcite, cu vârfuri netede, pentru a evita deteriorarea.

Pentru filtrarea lichidelor, filtrele bacteriene sunt montate în dispozitive speciale de filtrare, în special în filtrul Seitz.

Se compune din 2 părți: partea superioară, în formă de cilindru sau pâlnie, și partea inferioară de susținere a aparatului, cu așa-numita masă de filtrare realizată dintr-o plasă metalică sau o placă ceramică curată, pe care se filtrează o membrană sau azbest. este pus. Partea de susținere a aparatului are forma unei pâlnii, a cărei parte conică este situată în dopul de cauciuc al gâtului balonului Bunsen. În stare de funcționare, partea superioară a dispozitivului este fixată de cea inferioară cu șuruburi. Înainte de a începe filtrarea, joncțiunile diferitelor părți ale instalației sunt umplute cu parafină pentru a crea etanșeitate. Tubul de evacuare al balonului este conectat cu un tub de cauciuc cu pereți groși la o pompă cu jet de apă, ulei sau bicicletă. După aceea, lichidul filtrat este turnat în cilindrul sau pâlnia aparatului și pompa este pornită, creând un vid în vasul de primire. Ca urmare a diferenței de presiune rezultată, lichidul filtrat trece prin porii filtrului în recipient. Microorganismele rămân pe suprafața filtrului.

Prepararea frotiurilor

Pentru a studia microorganismele într-o formă colorată, se face un frotiu pe o lamă de sticlă, se usucă, se fixează și apoi se colorează.

Materialul de testat este întins într-un strat subțire pe suprafața unei lame de sticlă bine degresate.

Frotiurile se prepară din culturi de microbi, material patologic (sputa, puroi, urină, sânge etc.) și din organele cadavrelor.

Tehnica de pregătire a frotiurilor este determinată de natura materialului studiat.

Prepararea frotiurilor din culturi microbiene cu mediu nutritiv lichid și din material patologic lichid (urină, lichid cefalorahidian etc.). O picătură mică din lichidul de testat este aplicată cu o buclă bacteriană pe o lamă de sticlă și buclele sunt distribuite într-o mișcare circulară într-un strat uniform sub forma unui cerc cu diametrul unei monede penny.

Pregătirea frotiurilor de sânge. O picătură de sânge este aplicată pe lama de sticlă, mai aproape de unul dintre capete. A doua sticlă - lustruită, care ar trebui să fie mai îngustă decât sticla obiectului, este plasată pe prima la un unghi de 45 ° și adusă la picătura de sânge până când vine în contact cu aceasta. După ce sângele se răspândește de-a lungul marginii lustruite, paharul este alunecat de la dreapta la stânga, distribuind uniform sângele într-un strat subțire pe întreaga suprafață a sticlei. Grosimea cursei depinde de unghiul dintre ochelari: cu cât unghiul este mai ascuțit, cu atât cursa este mai subțire. Un frotiu pregătit corespunzător are o culoare roz deschis și aceeași grosime pe tot parcursul.

Prepararea unei picături groase. O picătură de sânge este aplicată în mijlocul lamei de sticlă cu o pipetă Pasteur sau sticla este aplicată direct pe picătura de sânge proeminentă. Sângele aplicat pe sticlă este uns cu o buclă bacteriană, astfel încât diametrul frotiului rezultat să corespundă mărimii unei monede penny. Paharul este lăsat în poziție orizontală până când sângele se usucă. Sângele din „picătura groasă” este distribuit neuniform, formând o margine neuniformă.

Pregătirea unui frotiu dintr-un material vâscos (sputa, puroi). Sputa sau puroiul depus pe o lamă de sticlă mai aproape de marginea îngustă este acoperită cu o altă lamă de sticlă. Ochelarii sunt ușor apăsați unul împotriva celuilalt.

După aceea, capetele libere ale ochelarilor sunt captate de 1 și 2 degete ale ambelor mâini și răspândite în direcții opuse, astfel încât, atunci când se mișcă, ambii ochelari se potrivesc perfect unul pe celălalt. Frotiurile se obțin cu material distribuit uniform, ocupând o suprafață mare.

Prepararea unui frotiu din culturi cu mediu nutritiv dens. O picătură de apă se aplică în mijlocul unei lame de sticlă curată, bine degresată, se introduce o buclă bacteriană cu o cantitate mică din cultura microbiană studiată, astfel încât picătura de lichid să devină ușor tulbure. După aceea, excesul de material microbian de pe buclă este ars într-o flacără și frotiul este pregătit conform metodei de mai sus.

Pregătirea frotiurilor din organe și țesuturi. În scopul dezinfectării, suprafața organului este cauterizată cu ramuri încălzite de pensetă, se face o incizie în acest loc și o mică bucată de țesut este tăiată din adâncime cu foarfece ascuțite, care este plasată între două lame de sticlă. . Apoi procedați în același mod ca atunci când pregătiți un frotiu din puroi și spută. Dacă țesutul organului este dens, atunci se face o răzuire din adâncimea inciziei cu un bisturiu. Materialul obținut prin răzuire este întins într-un strat subțire pe suprafața sticlei cu un bisturiu sau o buclă bacteriană.

Pentru a studia poziția relativă a elementelor țesutului și a microorganismelor din acesta, se fac frotiuri. Pentru aceasta se captează cu penseta o mică bucată de țesut tăiată din mijlocul organului și se aplică succesiv de mai multe ori cu suprafața tăiată pe lama de sticlă, obținându-se astfel o serie de frotiuri-amprente.

Uscarea și fixarea frotiurilor. Un frotiu preparat pe o lamă de sticlă se usucă la aer și se fixează după uscarea completă. La fixare, frotiul este fixat pe suprafața lamei de sticlă și, prin urmare, în timpul colorării ulterioare a preparatului, celulele microbiene nu sunt spălate. În plus, celulele microbiene ucise se colorează mai bine decât cele vii.

Se face o distincție între o metodă fizică de fixare, care se bazează pe efectul temperaturii ridicate asupra unei celule microbiene, și metodele chimice, care implică utilizarea agenților care provoacă coagularea proteinelor. Este imposibil să se fixeze frotiurile care conțin agenți patogeni din grupele I-II de patogenitate peste flacără.

Mod fizic de fixare. Lama de sticlă cu preparatul se ia cu penseta sau degetele I și II ale mâinii drepte în spatele coastelor cu o lovitură în sus și cu o mișcare lină de 2-3 ori peste partea superioară a flăcării arzătorului. Întregul proces de fixare nu trebuie să dureze mai mult de 2 secunde. Fiabilitatea fixării este verificată prin următoarea tehnică simplă: suprafața lamei de sticlă liberă de frotiu este aplicată pe suprafața din spate a mâinii stângi. Cu fixarea corectă a frotiului, paharul ar trebui să fie fierbinte, dar să nu provoace o senzație de arsură.

Fixare chimică. Substanțele chimice și compușii indicați în tabelul 4 sunt, de asemenea, utilizați pentru fixarea frotiurilor.

Tabelul 4

Substanțe pentru fixarea chimică

O lamă cu un frotiu uscat este scufundată într-o sticlă cu un agent de fixare și apoi uscată în aer.

Tunsele de colorat

Tehnica de colorare a frotiurilor. Pentru colorarea frotiurilor se folosesc soluții de vopsea sau hârtie de colorat, care a fost propusă de A.I. Albastru. Ușurința de pregătire, ușurința de utilizare, precum și posibilitatea de a păstra hârtie de colorat pentru o perioadă nedeterminată de timp, au stat la baza utilizării lor pe scară largă în diferite metode de colorare.

Tunsele de colorat cu hârtie de colorat. Pe preparatul uscat și fixat se aplică câteva picături de apă, se pun hârtii colorate de 2x2 cm.Pe tot timpul de colorare hârtia trebuie să rămână umedă și să se potrivească perfect pe suprafața sticlei. La uscare, hârtia este umezită suplimentar cu apă. Durata colorării frotiului este determinată de metoda de colorare. La sfârșitul colorării, hârtia se îndepărtează cu grijă cu o pensetă, iar frotiul se spală cu apă de la robinet și se usucă în aer sau hârtie de filtru.

Colorarea frotiurilor cu soluții de colorant. Se aplică un colorant pe preparatul uscat și fixat cu o pipetă într-o astfel de cantitate încât să acopere întregul frotiu. La colorarea frotiurilor cu soluții concentrate de coloranți (Ziehl carbolic fuchsine, gențiană carbolic sau cristal violet), colorarea se efectuează prin hârtie de filtru care reține particulele de colorant: o bandă de hârtie de filtru este plasată pe un frotiu fix și o soluție de colorant este turnată pe aceasta.

Pentru examinarea microscopică, frotiurile preparate, uscate și fixate, sunt colorate. Colorarea este simplă și complexă. Colorarea simplă constă în aplicarea oricărei vopsele pe un frotiu pentru o anumită perioadă de timp. Cel mai adesea, alcool-apă (1:10) Pfeiffer fuchsine, albastru de metilen Leffler și safranina sunt folosite pentru colorarea simplă. Eozina, ca colorant acid, este folosită numai pentru colorarea citoplasmei celulelor și colorarea fundalului. Fuchsinul acid este complet nepotrivit pentru colorarea bacteriilor.

fotografie de pe lentachel.ru

Cu doar o sută de ani în urmă, infecția în timpul cercetării științifice era considerată aproape inevitabilă. Mulți oameni de știință își pun corpul în pericol de moarte studiind microbii și bacteriile, a căror natură era puțin cunoscută. Astăzi, majoritatea microorganismelor periculoase care ne înconjoară au fost descrise și studiate, în plus, există dispozitive medicale speciale pentru laboratoarele bacteriologice, a căror utilizare cu o probabilitate de 99% protejează cercetătorii de orice riscuri profesionale.

Toate obiectele cu care lucrează angajații laboratorului bacteriologic sunt saturate cu microfloră patogenă. Pentru a menține un mediu sănătos în cameră, pentru a evita contactul direct cu materialul contaminat, se folosesc mobilier, îmbrăcăminte și ustensile cu barieră îmbunătățită și proprietăți antimicrobiene.

Dulapuri și cutii din sticlă și metal închise ermetic, mesele de laborator convenabile pentru echipamentele de dezinfecție, sterilizare și autoclave și un frigider care se încuie sunt articole care asigură siguranța persoanelor care efectuează cercetări asupra probelor infectate.

Toate ustensilele folosite pentru depozitarea probelor: baloane, pahare gradate, sunt închise ermetic pentru a evita răspândirea germenilor în aerul din laborator.

Pentru fabricarea recipientelor se folosește sticlă specială care nu se sparge sau plastic de înaltă rezistență. Pereții dubli, o formă specială a fundului stabil, elementele de cauciuc pe capace, tăvi și cuve creează cele mai bune condiții pentru izolarea vecinilor periculoși precum meningococi, streptococi, stafilococi, bacili și clostridii.

Înainte de a începe cercetările, personalul își îmbracă îmbrăcăminte specială: halat de protecție, mască, ochelari de protecție. Pentru a lucra cu substanțe foarte periculoase se folosesc șorțuri cauciucate sau halate speciale cu impregnare hidrofugă.

Tratarea adecvată a aerului în timp util cu iradiatoare ultraviolete și lămpi bactericide, utilizarea modificărilor de spălare dovedite, furnizarea tuturor angajaților cu un set complet de îmbrăcăminte de protecție este un standard general acceptat, abaterea de la care este administrativ, iar în caz de consecințe grave, penal. pedepsit.

Echipamentele integrate și implementarea tuturor măsurilor de precauție ajută la păstrarea sănătății angajaților, la reducerea morbidității profesionale și la asigurarea unei eficiențe ridicate a cercetării: s-a observat că utilizarea echipamentelor de protecție fiabile, dovedite reduce anxietatea, promovează acțiuni mai rapide și mai eficiente.

laborator bacteriologic

Laboratorul bacteriologic a fost separat ca subdiviziune independentă în 1996.

Şef - candidat de ştiinţe medicale, bacteriolog de cea mai înaltă categorie Polikarpova Svetlana Veniaminovna

DOMENIILE PRIORITARI DE ACTIVITATE

În laboratorul bacteriologic se efectuează următoarele tipuri de analize:

Examenul bacteriologic al sângelui (hemocultura) și lichidului cefalorahidian;
- examen bacteriologic al sputei, aspiratului traheal, spălărilor bronșice;
- examenul bacteriologic al inflamatiei evacuate din diverse focare: amigda-faringita, otita medie, sinuzita etc.;
- examenul bacteriologic al punctatelor, revărsărilor, exsudatelor;
- examinarea bacteriologică a membranei mucoase a faringelui și a nasului pentru microflora condiționată patogenă;
- examen bacteriologic al urinei cu determinarea gradului de bacteriurie;
- examinarea bacteriologică a secreției organelor genitale pentru microflora condiționată patogenă;
- examenul bacteriologic al conjunctivei detașabile;
- examinarea fecalelor pentru flora intestinală patogenă;
- examenul bacteriologic al fecalelor pentru disbacterioză;
- examen bacteriologic al laptelui matern;
- determinarea calitativă a antigenului streptococilor de grup B;
- determinarea calitativă a antigenului Helicobacter pylori în fecalele umane;
- determinarea calitativă a antigenului toxinelor A și B Clostridium difficile în fecalele umane;
- evaluarea sensibilității/rezistenței microorganismelor izolate la antibiotice.

REALIZĂRI

În laboratorul bacteriologic se efectuează studii pentru izolarea, identificarea și determinarea sensibilității la antibiotice a microorganismelor patogene și condiționat patogene izolate din diverse biomateriale.

Bazat pe principiile microbiologiei clinice clasice, laboratorul a introdus noi metode de cercetare bazate pe cele mai recente progrese în tehnologiile genetice moleculare.

Laboratorul bacteriologic realizează studii microbiologice care îndeplinesc standardele moderne rusești și internaționale.

În fiecare an, personalul de laborator efectuează examinări bacteriologice a peste 10.000 de pacienți internați în secțiile spitalului, a 6.000 de pacienți și nou-născuți ai maternității, a peste 5.000 de pacienți ai policlinicilor CDC și EAO, efectuând peste 45.000 de analize microbiologice pe an.

Pe baza laboratorului s-a dezvoltat „Locul de muncă automatizat al unui microbiolog, epidemiolog și chimioterapeut” și este în continuă modernizare, incluzând două programe: SISTEM DE MONITORIZARE MICROBIOLOGICĂ „MICROB” (CMM). Programele permit rezolvarea principalelor sarcini ale serviciului microbiologic al spitalului: monitorizarea continuă a peisajului microbian și a nivelului rezistenței sale la antibiotice pentru a prescrie antibioticoterapie adecvată și depistarea în timp util a cazurilor de infecții asociate asistenței medicale (IAS).

Pentru a asigura calitatea corespunzătoare a studiilor microbiologice, în activitatea laboratorului sunt introduse următoarele:

• Sistem de management al calitatii conform standardului GOST R ISO 15189-15

Laboratoare medicale. Cerințe speciale de calitate și competență”;

• Bazele A se sprijini tehnologii (Lean production) - abordări ale managementului de laborator care vizează îmbunătățirea calității muncii prin reducerea pierderilor: materiale, financiare, temporare;
• Sistem 5S- un instrument de producție lean - organizarea spațiului de lucru pentru a crea condiții optime pentru efectuarea operațiunilor, menținerea ordinii, curățeniei, acurateței, economisirii de timp și energie.

Din 2014, laboratorul participă la programul internațional de control al rezistenței la antibiotice în țările din Asia Centrală și Europa de Est, organizat de CARE(UK NEQAS) Laboratorul participă la evaluarea externă a calității cercetării de laborator în calitate de laborator expert în secțiunea „Microbiologie clinică” (FSVOK).

De mulți ani, bacteriologii desfășoară cicluri de certificare de îmbunătățire „Metode moderne de cercetare în microbiologie clinică” pe baza spitalului pentru angajații cu studii medii secundare la unitatea de sănătate din Moscova.

HIGH TECH

• Introducerea metodelor genetice moleculare în diagnosticul bolilor infecțioase - metoda reacției polimerazei în lanț (PCR) „în timp real”;

• determinarea principalelor mecanisme de dezvoltare și răspândire a rezistenței bacteriene la medicamentele antibacteriene prin metode fenotipice și genotipice;

• utilizarea metodelor imunocromatografice exprese (IMCT) pentru diagnosticul etiologic al agenților patogeni ai bolilor infecțioase și inflamatorii;

• crearea și implementarea unui modul electronic de opinii ale experților pentru bacteriologi, medici curant, farmacologi clinici pentru a interpreta rezultatele determinării sensibilității microorganismelor la medicamentele antimicrobiene și pentru a identifica mecanismele de rezistență.

ACTIVITATE ŞTIINŢIFICĂ

Pe parcursul existenței unității au fost finalizate în laborator 2 teze de doctorat. Angajații diviziei fac în mod regulat prezentări la congrese, conferințe, simpozioane și seminarii internaționale, în întregime rusă, din oraș, sunt publicate în mod regulat în publicații științifice și practice.

Laboratorul bacteriologic cooperează cu:

• Centrul Federal de Cercetare FSBI pentru Epidemiologie și Microbiologie

lor. Academician de onoare N.F. Gamaleya al MZRF”;

• FGAU „Centrul științific pentru sănătatea copiilor” al Ministerului Sănătății al Federației Ruse;
• Instituția științifică a bugetului federal de stat „Centrul de cercetare genetică medicală” a Academiei Ruse de Științe Medicale;
• FBUN Institutul Central de Cercetare de Epidemiologie din Rospotrebnadzor;
• FBUN Moscova Institutul de Cercetare de Epidemiologie și Microbiologie. G.N.Gabrichevsky Rospotrebnadzor;
• Departamentul de Medicină și Chirurgie a Reproducerii, Universitatea de Stat de Medicină și Stomatologie din Moscova, numit după A.I. Evdokimov (MGMSU);

Lucrările științifice se desfășoară în următoarele domenii:

• diagnosticul microbiologic și prevenirea infecțiilor asociate asistenței medicale (HAI). Ecologia microbiană în unitățile de îngrijire a sănătății.
• caracteristicile diagnosticului microbiologic al infecțiilor tractului respirator inferior la pacienții cu fibroză chistică;
• studiul mecanismelor de rezistență a enterobacteriilor la medicamentele antimicrobiene;
• dezvoltarea algoritmilor pentru diagnosticarea expresă a purtării streptococilor de grup B la gravide și nou-născuți.

ARTICOLE, CONFERINȚE

2016

ECHIPAMENT DE LABORATOR

În prezent, laboratorul bacteriologic este dotat cu echipamente moderne:

• Analizor automat de hemocultură VersaTREK(TREK Diagnostic Systems) - capacitatea de a diagnostica sepsisul cât mai curând posibil - 90% din rezultatele pozitive sunt detectate în prima zi. Durata maximă a protocolului de cercetare este de 5
• Analizor bacteriologic pentru identificarea și testarea sensibilității microorganismelor Phoenix 100(BD) - timpul mediu pentru obținerea unui rezultat de identificare este de 6-8 ore, timpul mediu pentru obținerea unui rezultat de susceptibilitate antimicrobiană este de 12-16 ore.
• Analizor semi-automat iEMScititor(ThermoLabsystems), care face posibilă nu numai identificarea și determinarea sensibilității microorganismelor, ci și rezolvarea multor probleme practice și științifice: determinarea contaminării microbiene a urinei și a altor biomateriale, controlul de laborator al eficacității terapiei cu antibiotice, evaluarea a activității bactericide a serului sanguin și, de asemenea, pentru a investiga modele cinetice de creștere a microorganismelor.

În activitatea laboratorului a fost introdus sistemul informațional de laborator „ALISA”, fiecare loc de muncă al unui bacteriolog fiind computerizat.

ECHIPĂ

Pivkina Nadezhda Vasilievna

Medic-bacteriolog de cea mai înaltă categorie, are recalificare profesională în specialitatea „Bacteriologie”. Membru al Asociației Internaționale a Microbiologilor Clinici și Chimioterapeuților Antimicrobieni (IACMAC), membru al Federației de Medicină de Laborator (FLM). Este coautor al multor articole științifice despre problemele microbiologiei clinice. Experiență de muncă în specialitate din 1992.

Timofeeva Olga Gennadievna

Medic-bacteriolog de cea mai înaltă categorie, a efectuat un stagiu în specialitatea „Bacteriologie”, a promovat un curs de perfecţionare a calificării la tema „Analiza PCR în laboratoarele de diagnostic clinic”. Membru al Federației de Medicină de Laborator (FLM). În prezent lucrează la teza de doctorat. Are publicații despre probleme de microbiologie clinică. Experiență de lucru în specialitate din 1996.

Bondarenko Natalia Alexandrovna

Medic-bacteriolog de categoria I, membru al Federației de Medicină de Laborator (FLM). Este coautor al multor articole științifice despre problemele microbiologiei clinice. Experiență de muncă în specialitate din 1988.

Balina Valeria Vladimirovna

Medic-bacteriolog, doctor în diagnostic clinic de laborator. Ea a efectuat un stagiu de practică în specialitatea „Diagnostic de laborator clinic”, are recalificare profesională în specialitatea „Bacteriologie”. A promovat îmbunătățirea calificării la tema „Metode genetice moleculare în diagnosticul bolilor infecțioase”. Membru al Federației de Medicină de Laborator (FLM). Experiență de lucru în specialitate din 2013.

Personalul de asistenta medicala

Lucru în laborator:

• 1 tehnolog medical
• 1 tehnician de laborator medical
• 5 paramedici de laborator
• 1 asistent de laborator
• Toți angajații au cea mai înaltă categorie de calificare.

Pagina 5 din 91

Laboratoare bacteriologice există la spitale și policlinici sau independent de acestea pentru cercetări microbiologice. Aceștia primesc pentru cercetare diverse materiale obținute de la persoane bolnave (sputa, urină, puroi, fecale, sânge, lichid cefalorahidian etc.). În plus, există și laboratoare sanitare și bacteriologice în care apa, aerul și produsele alimentare sunt supuse controlului bacteriologic.
Rolul laboratoarelor bacteriologice în prevenirea bolilor infecțioase este de asemenea mare. Unii oameni după ce suferă de o boală infecțioasă (febră tifoidă, dizenterie, difterie etc.) continuă să elibereze microbi patogeni (patogeni) în mediu. Aceștia sunt așa-numiții purtători de bacterii. Există și purtători de bacterii printre oamenii sănătoși. Prin identificarea unor astfel de purtători de bacterii, laboratoarele bacteriologice ajută autoritățile sanitare în realizarea unui număr de măsuri preventive.
Apa și produsele alimentare contaminate cu microorganisme patogene pot provoca epidemii (boli în masă) de febră tifoidă, holeră etc., motiv pentru care controlul sanitar și bacteriologic zilnic asupra calității bunei apei potabile, laptelui și altor produse este atât de important.
Un laborator bacteriologic trebuie să aibă la dispoziție cel puțin trei încăperi: 1) o cameră mică - un birou de recepție pentru primirea și eliberarea testelor; 2) mediu și spălare - pentru prepararea mediilor nutritive și spălarea vaselor; 3) un laborator pentru producerea cercetărilor bacteriologice. Este de dorit să existe o cameră pentru păstrarea animalelor de experiment (vivarium). Fiecare camera trebuie sa aiba mobilier corespunzator (masa de bucatarie si de laborator, diverse dulapuri, taburete etc.).
Mai jos este o listă cu cele mai importante elemente necesare pentru munca zilnică de laborator. Scopul utilizării lor, modul de manipulare a acestora, precum și principiul dispozitivului sunt descrise în secțiunile relevante ale cursului.
Dispozitive optice. Microscop biologic cu sistem de imersie, lupe, aglutinoscop.
Dispozitive pentru sterilizare si incalzire. Autoclave, aparate cu abur fluid, cuptor, filtre Seitz, termostate, sterilizatoare pentru instrumentar.
Echipamente pentru medii de gătit. Pâlnie pentru filtrare la cald, pâlnie pentru turnare medii, baie de apă, cratițe de diferite dimensiuni, cântare calibrate cu greutăți, mașină de tocat carne, suporturi metalice și din lemn pentru filtrare.
Instrumente. Bisturii de diverse forme si marimi: masti, drepte, curbate, tocite, intestinale, anatomice, pensete chirurgicale, seringi.
obiecte din sticlă. Lame de sticla, lame de sticla cu orificiu, lame de acoperire, eprubete bacteriologice, eprubete scurte pentru reactii serologice (aglutinare), centrifuge, cupe Heidepreich *, tuburi si baghete de sticla, pipete gradate pentru 1, 2, 5, 10 ml, pipete Pasteur , sticle de sticla pentru vopsele cu pipete, pahare si baloane de sticla de diferite marimi, cilindri de diferite marimi, pâlnii pentru filtrare etc.

*Până în prezent, printre majoritatea microbiologilor și în manuale, vasele pentru obținerea de colonii izolate de microbi se numesc vase Petri, și nu vase Heidenreich, ceea ce nu corespunde cu adevărata stare a lucrurilor. Cupele au fost introduse pentru prima dată în practica de laborator de microbiologul rus Heidenreich.

Articole diverse. Bucla bacteriană, sârmă de platină, tuburi de cauciuc, cântare de corn de mână cu greutăți, suporturi (din lemn, metal) pentru eprubete, termometre, cuști pentru animale, aparate pentru fixarea animalelor, centrifugă.
Produse chimice, vopsele, materiale pentru medii etc. Agar-agar, gelatină, alb în foi, ulei de imersie, hârtie de filtru, vată absorbantă și simplă, tifon, alcool etilic, coloranți anilin (magenta, gențiană și violet cristal, vezuvină, metilen) albastru, neutralrot, safranin etc.), vopsea Giemsa, acizi (azotic, clorhidric, sulfuric, carbolic, fosforic, picric, oxalic etc.), alcaline (hidroxid de potasiu, hidroxid de sodiu, amoniac, sodă), săruri (nitrat de potasiu , permanganat de potasiu de potasiu, sulfit de sodiu, clorură de sodiu etc.).

masa de laborator

Pentru a efectua un studiu microbiologic, un asistent de laborator trebuie să aibă un loc de muncă echipat corespunzător. Masa de laborator trebuie să aibă o anumită înălțime, astfel încât să fie ușor de microscopat în timp ce stați la ea (Fig. 9). Dacă este posibil, masa trebuie acoperită cu linoleum și fiecare loc de muncă trebuie acoperit cu o tavă galvanizată sau o sticlă oglindă. Locul de muncă ar trebui să fie echipat cu un microscop, suporturi pentru eprubete și vopsele, o buclă de platină și un ac pentru culturi, o ceașcă cu punte pentru preparate, o șaibă, o clepsidră, lame și lamele, pipete, un set de vopsele, hârtie de filtru, un arzător cu alcool sau gaz și un borcan cu o soluție dezinfectantă (lizol, acid carbolic, sublimat, cloramină sau lizoform), unde se scufundă pentru dezinfecție lamele și lamelele, pipetele, baghetele de sticlă etc.. Vase în care microbii sunt cultivate nu pot fi dezinfectate cu substanțe chimice. Urmele de dezinfectanți pe astfel de vase le fac nepotrivite pentru creșterea și reproducerea microorganismelor. După utilizare, vasele sunt puse în rezervoare metalice sau găleți cu capac, sigilate și sterilizate într-o autoclavă. Uneltele mici (pensete, bisturii, foarfece) după utilizare se pun într-un sterilizator și se fierb timp de 30-60 de minute sau se scufundă într-o soluție de săpun-carbolic de cloramină 3-5% timp de 30-60 de minute.

Orez. 9. Tehnica microscopiei obiectelor bacteriologice.

Locul de muncă trebuie păstrat absolut curat. Este inacceptabil ca masa să fie contaminată cu materialul infecțios examinat (urină, fecale, puroi etc.). În acest din urmă caz, materialul infecțios de pe masă poate ajunge pe alte obiecte din jur, iar apoi este posibilă infecția intralaborator. După terminarea lucrărilor, asistentul de laborator trebuie să pună în ordine locul de muncă pentru care este responsabil și, în scopul prevenirii, șterge sticla de la locul de muncă cu o bucată de vată umezită cu o soluție 5% de acid carbolic sau cloramină.

Reguli de lucru și comportament în laborator

Atunci când lucrează cu material infecțios, lucrătorii de laborator ar trebui să fie conștienți de posibilitatea de a se infecta ei înșiși și de a transfera o boală infecțioasă la o familie, un apartament etc. Prin urmare, trebuie să fie atenți, atenți, ordonați și pedant în munca lor.
Când lucrați în laboratoare, trebuie respectate următoarele reguli:

1. Pentru a fi în laborator, și cu atât mai mult pentru a lucra în el, este necesar să purtați halat și o eșarfă sau pălărie.
2. În mod inutil, nu vă mutați dintr-o cameră de laborator în alta și utilizați numai locul de muncă și echipamentele desemnate.
3. Nu mâncați și nu fumați în laborator.
4. Atunci când lucrați cu materiale infecțioase și culturi vii, utilizați instrumentele adecvate: pensete, cârlige, spatule și alte obiecte care sunt supuse distrugerii sau neutralizării după utilizare (ardere pe flacăra unui arzător, fierbere etc.). Aspirați materialul infecțios lichid în pipete nu cu gura, ci cu ajutorul cilindrilor, perele, turnați lichid cu material infecțios dintr-un vas în altul numai peste orice recipient (tavă, bazin) în care este turnat lichidul dezinfectant (soluție de carbolic). acid, lizol). Inoculările și subculturile trebuie efectuate prin arderea eprubetelor, spatulelor, buclelor de platină, pipetelor etc. pe flacăra unui arzător.
5. Dacă vasele sunt sparte sau lichid care conține materiale infecțioase sau culturi vii este vărsat, dezinfectați imediat locul de muncă contaminat, îmbrăcămintea și mâinile în cel mai amănunțit mod. Toate acestea ar trebui făcute în prezența sau sub supravegherea șefului laboratorului, care trebuie anunțat imediat despre accident.
6. Toate articolele și materialele folosite și inutile trebuie distruse dacă este posibil (cel mai bine prin incinerare sau aruncate cu grijă în sterilizatoare sau lichide dezinfectante).

Colectați toate articolele de dezinfectat în interiorul laboratorului în recipiente speciale, rezervoare, găleți cu capace etc., transferați-le închise într-o autoclavă, unde pot fi dezinfectate în aceeași zi. Livrarea materialului infecțios în autoclavă și sterilizarea acestuia trebuie monitorizate de lucrători de laborator special desemnați.

1. Respectați curățenia și ordinea strictă. Dezinfectați și spălați mâinile cât mai des posibil în timpul zilei de lucru și după muncă.
2. Lucrătorii din laborator sunt supuși vaccinării obligatorii împotriva bolilor infecțioase majore (în primul rând împotriva celor intestinale).
3. Este obligatoriu să se efectueze o contabilitate cantitativă zilnică a tuturor culturilor vii și a animalelor infectate cu o înregistrare în reviste speciale și registre de contabilitate.
4. După muncă, toate materialele și culturile necesare pentru lucrările ulterioare trebuie lăsate într-un frigider care se încuie sau într-un seif, iar locul de muncă trebuie pus în ordine.
5. Curățarea zilnică minuțioasă a spațiilor de laborator trebuie efectuată printr-o metodă umedă, folosind un lichid dezinfectant.

Prezența diferitelor bacterii în intestine este considerată normală. Aceste bacterii iau parte la procesele de prelucrare, precum și la asimilarea alimentelor. Digestia și funcționarea corectă a intestinului este evidențiată de fecale, constând din particule mici fără structură, numite detritus.

Pentru a studia compoziția microbiană a fecalelor, se efectuează o analiză a rezervorului. Dacă numărul de bacterii crește, atunci o persoană are patologii intestinale, dureri abdominale de altă natură, bucăți de alimente nedigerate apar în fecale. Acest studiu vă permite să identificați agenții cauzali ai multor boli.

Clasificarea bacteriilor intestinale

Cu toate acestea, după un studiu detaliat, acestea sunt clasificate în următoarele grupe:

1. Bacterii sănătoase: lacto- și bifidobacterii, eschecheria. Aceste microorganisme activează funcționarea intestinelor.
2. Condițional patogeni: enterococi, candida, clostridii, stafilococi. Aceste microorganisme devin patogene ca urmare a anumitor circumstanțe și sunt capabile să provoace dezvoltarea diferitelor patologii.
3. Patogeni: coli, klebsiella, proteus, salmonella, shingella, sarcine. Acest grup de bacterii provoacă dezvoltarea unor boli grave.

Există diferite metode de examinare a fecalelor. Una dintre cele mai comune metode este bacanaliza.

Ce este un rezervor de analiză a fecalelor?

Examinarea bacteriologică a fecalelor vă permite să studiați compoziția microbiană a acesteia, precum și să determinați prezența agenților patogeni ai bolilor ulterioare:

• shigeloza;
• dizenterie;
• salmoneloză;
• febră tifoidă;
• holera și alte boli.

O analiză a fecalelor din rezervor durează destul de mult. Studiul este efectuat înainte de numirea terapiei cu antibiotice.

Indicații pentru cercetare

Ar trebui evidențiate principalele motive pentru a face o analiză a scaunului:

Studiile coprologice permit identificarea patologiilor care apar în cavitatea intestinală:

O analiză a rezervorului este, de asemenea, prescrisă pentru diagnosticarea patologiilor organelor digestive.

Cum se face o analiză fecală?

Înainte de a fi supus studiului, pacientul trebuie să fie supus unui antrenament special timp de câteva zile.

• verdeaţă;
• sfeclă;
• peste rosu;
• rosii.

În plus, rezultatele studiului pot fi afectate de produsele din carne.

În pregătirea pentru test, este necesar să încetați să luați antibiotice, medicamente antiinflamatoare și medicamente care conțin enzime și fier.

Colectarea materialului pentru cercetare ar trebui să fie efectuată dimineața. Pentru a colecta fecale, utilizați un recipient steril, care poate fi achiziționat de la o farmacie. Durata de depozitare a biomaterialului în frigider nu este mai mare de 10 ore.

Cum se face cercetarea?

Examinarea bacteriologică a fecalelor vă permite să determinați compoziția fizică și chimică a materialului, proprietățile acestuia, prezența patologiilor. Acest studiu ajută la detectarea bacteriilor din organism, modificări ale echilibrului biologic.

Suplimentul bakanaliza este analiza scatologică a fecalelor. Acest studiu vă permite să evaluați prezența unui miros specific de fecale, consistența și densitatea acestuia, aspectul general, prezența sau absența microorganismelor.

Studiul cuprinde 2 etape:

1. analiza macroscopică.
2. Microscopic.

Examenul microscopic evidențiază mucus, proteine, niveluri crescute de bilirubină, cheaguri de sânge, flora iodofilă în fecale. Acesta din urmă se formează datorită substanțelor active care transformă amidonul în glucoză. Detectarea florei iodofile nu indică infecție în toate cazurile. Acumularea bacteriilor de iod cauzată de fermentație mărturisește dezvoltarea bolii.

Deoarece corpul copiilor nu luptă bine cu agenții patogeni, foarte des astfel de bacterii sunt diagnosticate în fecalele copiilor.

Astăzi se utilizează metoda de însămânțare a biomaterialului studiat într-un mediu special cu anumite condiții. Experții determină capacitatea bacteriilor de a se înmulți și de a forma colonii. Pentru a obține rezultate precise, toate instrumentele utilizate, precum și vasele cu biomaterial colectat, trebuie să fie sterile.

Microorganismele patogene sunt studiate pentru sensibilitatea la diferite medicamente antibacteriene. Studiul se caracterizează prin acuratețe ridicată a rezultatelor, conform căreia medicul poate prescrie medicamente.

Doar 10% din cantitatea totală de material de testat poate fi microfloră patogenă.

Descifrarea rezultatelor

Examinarea fecalelor vă permite să identificați, precum și să stabiliți numărul oricăror bacterii. Pe baza rezultatelor obținute, medicul stabilește un diagnostic și prescrie tratamentul.

Soiuri de microfloră patogenă care pot fi găsite în fecale:

1. Escherichia coli. Ele interferează cu absorbția organismului de calciu, precum și de fier și, de obicei, indică prezența viermilor.
2. Enterobacteriile. Cel mai adesea, aceste bacterii provoacă dezvoltarea dizenteriei și a infecțiilor intestinale.
3. Escherichia coli, cu activitate enzimatică redusă, indică formarea disbacteriozei.
4. bacterii lactozo-negative. Ele provoacă tulburări în procesul digestiv și devin cauza de flatulență, arsuri la stomac, eructații rapide și senzație de greutate.
5. Bacteriile hemolitice. Ele formează toxine care afectează negativ sistemul nervos, precum și intestinele. Ele provoacă alergii.
6. Ciuperci asemănătoare drojdiei provoacă dezvoltarea sturzului.
7. Klebsiella, provoacă formarea de patologii gastroenterologice.
8. Enterococi, provoacă apariția patologiilor infecțioase ale organelor genitale, ale tractului excretor și ale sistemului genito-urinar.

Pe formulare este indicată decodificarea rezervorului de analiză, care indică și indicatorii normali ai bacteriilor.

Disbacterioza intestinală este o patologie foarte periculoasă care distruge microflora sănătoasă. Această afecțiune duce la dezvoltarea dizenteriei și a stafilococului auriu. Pentru a evita acest lucru, se recomanda efectuarea unei analize a scaunului pentru a controla bioechilibrul intestinal cel putin o data pe an.

Analiza Buck este considerată un studiu de încredere care oferă informații despre funcționarea organelor sale interne importante: intestinele și stomacul. Studiul vă permite să identificați în timp util microorganismele patogene care afectează microflora normală. Este prescris atât pentru adulți, cât și pentru copii.