A gombás fertőzés szerepe az emberi patológiában. A mikózisok diagnosztizálása

Az Orosz Föderáció Járványügyi Felügyeleti Állami Bizottságának SP 1.2.036-95, Moszkva, 1996 "Az I-IV. patogenitási csoportba tartozó mikroorganizmusok elszámolásának, tárolásának, szállításának és szállításának eljárása" utasítása szerint, a járványügyi veszély szerint Az élesztő- és penészgombák, valamint a dermatofiták a fertőző betegségek kórokozóinak III-IV csoportjába tartoznak, ezért a velük való munka során különleges biztonsági szabályokat, ipari higiéniát, járványellenes rendszert és személyi higiéniát kell betartani. a fertőzések, allergiák és fertőzések terjedésének személyes és nyilvános megelőzése érdekében.

A III-IV. patogenitási csoportba tartozó mikroorganizmusokkal foglalkozó laboratórium könnyen fertőtleníthető bútorokkal van felszerelve, beleértve a tiszta laboratóriumi üvegedények, reagensek, táptalajok, megfelelő felszerelések és eszközök tárolására szolgáló szekrényeket. Szellemlámpák vagy gázégők, mikrobiológiai hurkok, mikológiai spatulák, spatulák, epiláló és anatómiai csipeszek, körömvágók, szikék, ollók, Volkmann kanalak, pipetták, Pasteur pipetták, boncolótűk, üvegrudak, fecskendők, alacsony fordulatszámú centrifugák, munkához szükséges , Petri-csészék, kémcsövek, üvegáru, Wood's ultraibolya lámpa szűrővel, mikroszkópok, megvilágítók, termosztátok, autoklávok, hűtőszekrények, szárítókemencék, baktériumölő lámpák.

Anyagfelvétel kutatáshoz

A mikózisok mikroszkópos diagnózisa magában foglalja a micélium és a spórák kimutatását a vizsgált bioanyagban. Az epidermális pelyhek, a haj és a körmök tekinthetők a vizsgált bioanyagnak. A vizsgálat elvégzése előtt elengedhetetlen követelmény a helyi kezelés legalább tíz napig tartó és a szisztémás kezelés hiánya egy hónapig. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a mosószerek (különösen az antiszeptikumokat tartalmazó) betegek általi használata befolyásolhatja a vizsgálat eredményeinek megbízhatóságát, ezért a mosás előtt 3-4 nappal tilos.

A bioanyag felvételéhez és a készítmény elkészítéséhez szükséges eszközöket az ábra mutatja:

Fénykép. Eszközök a bioanyag felvételéhez és a gyógyszer elkészítéséhez.

Ha gyanítja a sima bőr mikózisát, a kezek és lábak mikózisát a körömlemezek károsodása nélkül, az epidermális pelyheket a lézió felszínéről vizsgálják. A sima bőr mycosisával célszerű az epidermiszt a lézió marginális zónájából vizsgálni, mivel a központi zónában a kóros folyamat gyakran megoldódik. Ugyanakkor nem szabad megfeledkezni a vellus haj károsodásának lehetőségéről, amely meghatározza a további kezelési taktika megválasztását. A szőrszálakat epiláló csipesszel távolítják el. A kezek és lábak mycosisával a körömlemezek károsodása nélkül megvizsgálják az epidermisz pikkelyeit a harmadik és negyedik interdigitális redőkből, valamint a tenyérből és a lábboltozatból.

Ha a hosszú haj (fejbőr, szakáll, bajusz és szemérem), valamint vellusszőr gombás fertőzésére gyanakszik, mikroszkópos vizsgálatot végeznek. A fejbőr trichophytosisával a haj a szőrtüsző szája felett 1-2 mm-rel letörik, miközben csonkokhoz és pöttyökhöz hasonlít. Ha a szőrszálat epiláló csipesszel nem lehet befogni, akkor ebben az esetben szike éles végével vagy boncolótűvel próbálják eltávolítani.

A fejbőr mikrospóriájával a haj 5-6 mm magasságban letörik, "lejtős réthez" hasonlítva. Mikroszkóppal ezeket a törött szőrszálakat vizsgálják. A szőrszálakat a sérülésekről csipesszel távolítják el.

A favusszal a scutula felszíne felett ritkuló szőrszálakat vizsgáljuk.

Onychomycosis gyanúja esetén megvizsgálják a subungualis hyperkeratosis zónájából könnyen összetörhető anyagot, valamint magukat a megváltozott körömlemezeket.

Meg kell érteni, hogy a pácienstől származó bármely vizsgálati anyag potenciálisan fertőző, ezért olyan helyiségbe kell vinni, ahol fertőtlenítőszerrel (5% klóramin oldat, 5% derített fehérítő) naponta nedves tisztítást végeznek, és a levegőt sterilizálják. ultraibolya besugárzók (beleértve 1-1,5 órát, és a kikapcsolás után 20 perccel belépnek a helyiségbe). A termosztátokat hetente töröljük le 0,5% -os klóramin oldattal, a falakat havonta egyszer fertőtlenítőszerekkel kezelik. Munkavégzés közben az orvost maszkban, védőszemüvegben, köpenyben és kesztyűben kell védeni. A bioanyag felvételéhez szükséges eszközöket, kesztyűket, tárgylemezeket és fedőlemezeket, eldobható köpenyeket és szalvétákat használat után fertőtlenítjük 1,5%-os clindesin-extra (5%-os fenol-oldat vagy 5%-os lizololdat) oldatba 30 percre való merítéssel. A fennmaradó kóros anyagot (haj-, bőr- és körömpikkelyeket) 2 atm nyomáson autoklávozzuk. és 132°C-on 20 percig (kontroll - karbamid) vagy 1,5 atm nyomáson. és 126˚ C-on 30 percig (kontroll - benzoesav), vagy forraljuk 1 órán át vízben vagy 30 percig 1%-os szappan-szóda oldatban.

A kóros anyagot speciális tartályban vagy fém bicikliben szállítják a laboratóriumba, védve a közvetlen napfénytől. A kísérő dokumentum tartalmazza a beteg vezetéknevét, nevét, családnevét, nemét, korát és címét, a javasolt klinikai diagnózist, a vizsgálati anyag nevét, a felvétel idejét, a fókusz helyét, a kórelőzmény számát. , az orvos vezetékneve és az anyagot küldő intézmény.

A gyógyszer elkészítése

Miután megkaptuk az epidermisz pikkelyeit az elváltozásból, a készítményt mikroszkópos vizsgálatra készítjük elő. A tárgylemezre helyezett vizsgálandó anyagra 1-2 csepp 20%-os KOH-t csepegtetünk, majd az üveglemezt égőláng fölött addig hevítjük, amíg a peremén fehéres kristályos lúgperem meg nem jelenik. Ezután a készítményt fedőlemezzel (melyet bonctűvel lenyomnak) lefedjük és mikroszkóppal lefedjük. A vizsgálatot legkésőbb a készítmény elkészítése után 2 órával el kell végezni a lúgos kristályosodás lehetősége miatt.

A hajkészítmény elkészítésének módja gombás fertőzés gyanúja esetén megegyezik az előzőekben leírtakkal, azzal a különbséggel, hogy a fedőlemezt nem preparáló tűvel nyomják le (a haj összezúzásának elkerülése érdekében).

Fénykép. Kikristályosodott lúg peremének megjelenése.

A készítmény elkészítéséhez a levágott körömlemez darabjait 20%-os KOH-os kémcsőbe merítjük, és termosztátban 1 órán át exponáljuk (t≈37˚C), majd a kapott zselészerű masszát egy tárgylemezre visszük. , fedőlemezzel letakarva és mikroszkóp alatt vizsgálva.

A körömlemezekkel ellentétben a subungualis hyperkeratosis zóna könnyen zúzó anyagából származó mintákat tárgylemezre helyezzük, 1-2 csepp 20%-os KOH-t csepegtetünk rájuk, majd a tárgylemezt égőláng felett fehéresre hevítjük. perifériáján kristályos lúg perem jelenik meg (65. ábra). Ezután a készítményt fedőlemezzel fedjük le, amelyet boncolótűvel finoman lenyomunk, és mikroszkóp alatt megvizsgáljuk.

A gyógyszer mikroszkópos vizsgálata

A mikroszkópos vizsgálathoz laboratóriumi mikroszkópot használnak merítés nélkül. Az epidermisz pikkelyek, a szubunguális hyperkeratosis területéről származó pikkelyek, valamint az oldott körömlemezek mikroszkópos vizsgálata kezdetben alacsony (100-as) nagyítással történik, és ha „folyók térképére” (vasútra) emlékeztető micéliumszálakat észlelünk, az objektív nagyobb nagyításra (×400) van kapcsolva. A közepes nagyítású micélium bizarr alakú üvegrudakra hasonlít, amelyek megváltoztatják a fénytörés mértékét, amikor mikroszkóp mikrocsavarral dolgozik.

A hajpreparátum mikroszkópos vizsgálatát azonnal elvégezzük közepes nagyítással (×200 vagy ×400). Trichophytosis esetén a nagy, sorokban elhelyezkedő spórák a haj belsejében találhatók, míg a microsporia esetén sok kis mozaikszerűen elrendezett spóra található a haj belsejében (innen ered a "mikrosporia" kifejezés). Néha megfigyelhető sapka jelenléte a haj külső oldalán - ez jellemző mind a trichophytosisra (egy ectothrix-változat, míg a spórák nagyok), mind a mikrospóriákra (ebben az esetben a sapka kis spórákból áll). Az érintett szőrzet mikroszkópos vizsgálata favusszal, a haj belsejében, a kerek vagy sokszögű spórák felhalmozódása mellett légbuborékok és micéliumszálak is megtalálhatók.

A készítményeket az elkészítéstől számított 2 órán belül meg kell tekinteni a lúgos kristályosodás lehetősége miatt. A diagnózis megbízhatóságának növelése érdekében egy elváltozásból több (legalább kettő) készítményt kell készíteni. A mycosisok mikroszkópos diagnózisának lehetséges hibái összefüggésbe hozhatók mind a készítmények rossz minőségű előkészítésével (égőláng feletti túlmelegedés, amely idő előtti lúgkristályosodással jár), mind a kutató elégtelen tapasztalatával (amikor a micéliumszálakat gyakran összetévesztik). a készítményben véletlenül talált szövetrostokra).

MYCOSES LABORATÓRIUMI DIAGNOSZTIKA

Anyag vétele a gomba laboratóriumi kutatásához.

1. OST 42-21-2-854: 222/80 számú rendelés, 2000.06.27.
2. Felszerelés: csipesz, üveglap, olló, Volkmann kanál.
4. Javallatok: gombás betegségek.
5. Komplikációk: nem.

A kezelőszoba előkészítése:

Változó megoldások.

Szakács:
-1%-os klóramin oldat rongyokhoz
-3%-os klóramin oldat - kötszerek és csipeszek fertőtlenítésére
- mosóoldat (156 ml hidrogén-peroxid + 5 g mosópor + 839 ml desztillált víz) - csipeszek feldolgozásához
- 6%-os hidrogén-peroxid oldat - kesztyűk kezelésére.

Manipulációs algoritmus.

Csipesz, üveglap, Volkmann kanal, olló kell hozzá;
- hívja be a beteget az öltözőbe;
- a beteg széken vagy kanapén ül;
- m/s értékű.

Technika:

A lézióból csipesszel vegye ki a bőrpelyheket és a hajat;
- tedd a kivett anyagot tárgylemezre és zárd le egy másik tárgylemezzel.
- mosson kezet szappannal;
- elküldte az anyagot a laboratóriumba.

ANYAGGYŰJTÉS

Köröm vétel vizsgálatra.

Vegyünk ollót és üveglapokat;
- vágjon le egy darabot a köröm szabad széléről ollóval;
- fedjük le a felvett anyagot egy másik tárgylemezzel;

Áztassa az ollót és a csipeszt 3%-os formalinoldatba.

Az érintett körmök anyagának megfelelő összegyűjtése a sikeres mikrobiológiai vizsgálat kulcsa. Az anyag felvételekor nem mindig ragadják meg a köröm életképes gombákat tartalmazó területeit. A kultúrában életképtelen gombák természetesen nem fognak növekedni, és fajuk sem állapítható meg.

A beveendő köröm területét az onychomycosis formája határozza meg.

Tehát az onychomycosis felületes formájával kaparásokat kell készíteni a körömlemez felületéről.

A leggyakoribb distalis subungualis formánál a legéletképesebb gombák a körömlemez alatt helyezkednek el. A kutatásra küldött anyagnak nemcsak a körömlemez vágását kell tartalmaznia, hanem a körömágyból, a lemez alól egy kaparást is.

Ezenkívül a változatlan köröm területeit is meg kell ragadni, mivel a legaktívabb gombák a köztük és a köröm érintett területei közötti határon találhatók.

Proximális subungualis formánál nehéz átvenni az anyagot. Ezekben az esetekben időnként, különösen, ha szövettani vizsgálatot vagy differenciáldiagnózist végeznek, biopsziát vesznek a körömről, és alkalmanként fúrót is alkalmaznak.

Paronychia esetén a proximális hengerről és az alól kaparók készülnek.

A bakteriális szennyeződés elkerülése érdekében a körömet minden esetben etil-alkohollal kell kezelni a mintavétel előtt.

MIKROSZKÓPOS VIZSGÁLAT

A gombák patológiás anyagának mikroszkópos vizsgálatát natív és festett készítményekben végezzük.

A festetlen készítmények elkészítéséhez a kapott anyagot szikével vagy boncolótűvel összetörjük, és egy tárgylemez közepére helyezzük. A gomba elemeinek pontosabb azonosítása érdekében az anyagot tisztítják (macerálják). Ebből a célból különféle anyagok, leggyakrabban maró lúgok (KOH, NaOH) segítségét veszik igénybe, amelyek feloldják a hám pikkelyeit, nyálkát, gennyét, kitisztítják a haj pigmentjét, és ezáltal a gombákat kutatásra bocsátják.

A tárgylemez közepére helyezett megpuhult bőrre vagy körömpelyhekre 1-3 csepp 20-30%-os KOH (NaOH) oldatot kell alkalmazni. A lúgcseppekben lévő vizsgálati anyagot alkohollámpa lángja fölött óvatosan melegítjük, amíg a csepp peremén alkálikristályok finom fehér pereme meg nem jelenik. Nem szabad forrásig hevíteni. Melegítés után a cseppet fedőlemezzel fedjük le, elkerülve a légbuborékok kialakulását.

R. A. Arabian és G. I. Gorshkova (1995) azt javasolja, hogy a bőrpikkelyekből és hajból készült készítményeket a mikroszkópos vizsgálat előtt 5–10 percig letisztítva, fedőüveggel letakarva, körömlemezeknél pedig 30–40 percig hagyják.

A készítmények tisztítása melegítés nélkül is elvégezhető, ehhez 30-60 percig 20% ​​-os KOH-oldatban hagyják őket, vagy a kóros anyag tisztítására más módszereket alkalmaznak: klorallaktofenol Aman szerint; laktofenol; 15% dimetil-szulfoxidot és KOH-t tartalmazó vizes oldat. Jó eredményeket kapunk az 5%-os KOH-oldatba helyezett körömlemezek 24 órás derítését követően, ilyenkor nincs szükség melegítésre.

A mikroszkópos vizsgálatot hagyományos laboratóriumi mikroszkóppal, merítés nélkül végezzük.

A mikroszkóp kondenzátorát le kell engedni, a nyílást szűkíteni. A gyógyszer kezdetben kis nagyítással (40-szeres) található az üvegen, a későbbi vizsgálat pedig nagyobb (100-szoros) nagyítással történik;

a készítményt 400x-os nagyítással részletesen tanulmányozzuk. Több gyógyszert is meg kell vizsgálni a vizsgálat megbízhatóságának növelése és a hamis pozitív eredmények elkerülése érdekében.

A gombák mikroszkópos diagnosztizálásában a készítmény elkészítésének hibái és a laboratóriumi asszisztens elégtelen tapasztalata miatt hibák léphetnek fel.

A gyártási hibák elsősorban a következőkhöz kapcsolódnak:
a gyógyszer túlmelegedésével, ami alkálikristályok kicsapódásához, hajpusztuláshoz és finomszemcsés bomlás megjelenéséhez vezethet a kóros anyagban.

A megnyúlt, egyenletes alkálikristályok lineáris elrendeződése nagyon emlékeztet a szeptummicélium szálaira, még tiszta, kóros anyag nélküli üvegen is.

A differenciáldiagnosztikai jellemzők a kristályok kivételes egységessége, üveges átlátszósága, a szélek sokoldalúsága és az egyik elem és a másik között elválaszthatatlan kapcsolat hiánya. Kétes esetekben ajánlatos enyhén felmelegített desztillált víz cseppecskéit hozzáadni a készítményhez, amely gyorsan feloldja az alkálikristályokat.

A gomba elemeihez összetéveszthetők:

- zsírcseppek,
- légbuborékok
- pamut ruhaszálak
- és az úgynevezett "mozaikgomba".

A bőrlipidek, a zsírsejtek lebomlása és a keratohyalin szemcsék, különösen a szabályos alakúak, hasonlíthatnak az egyes gombaspórákra. De a formák sokfélesége, és ami a legfontosabb, a méretek, a képződmények belső szerkezetének hiánya (vacuolák, héjak) ezeknek az elemeknek a gombás természete ellen szól. A lipidek akkor is bejuthatnak a gyógyszerbe, ha egy nem megfelelően tisztított elváltozásból kóros anyagot veszünk.

A légbuborékok hasonlíthatnak élesztőszerű sejtek spóráira, de ez utóbbiakkal ellentétben sűrű, sötét héj veszi körül, és a legkisebb légbuborékok is mindig nagyobbak, mint a gombasejtek.

A zokni, ruha stb. szövetéből származó szálak általában külön fekszenek a kóros anyagtól, mindig nagyobbak, mint a hifák, durvábbak és nem szeptikusak.

A "mozaikgomba" egy műtermék, amely a kristályosodási folyamat során keletkezik (talán a koleszterin lebomlása miatt). Háló vagy hurkok formája van, amelyek körvonalai megfelelnek a kanos pikkelyek határainak; a micéliumszálakkal ellentétben soha nem lépi át az epidermális sejtek falát.

Egyes laboratóriumokban a mikroszkópos vizsgálatra szánt készítményeket 15-30%-os KOH-oldattal derítik, amelyhez 5-10%-os kereskedelmi Parker's Superchrome Blue-Black Ink-t adnak.

Ezzel a színezéssel a hifák és a spórák kékre festődnek.

A mikroszkóppal gombák vagy bimbózó sejtek fonalas hifái tárulnak fel (1. ábra).

Így a mikroszkópos vizsgálat csak a fertőzés gombás természetére ad következtetést, a gomba-kórokozó típusára azonban nem.

Természetesen a mikroszkópos vizsgálat eredményessége függ a laboratóriumi személyzet képzettségétől.

Rizs. 1. T. rubrum által érintett körmök kaparékának mikroszkópos vizsgálata. A gomba hifái láthatók.

KULTÚRATUDOMÁNY

Az anyagot szabványos Sabouraud táptalajra oltják be, gyakran antibiotikus adalékokkal. A dermatofita fertőzések diagnosztizálása során a Sabouraud-féle táptalajhoz cikloheximidet szokás adni, amely elnyomja a levegőből a szennyező gombák szaporodását. Vannak kész kereskedelmi médiumok antibiotikumokkal és cikloheximiddel kiegészítve. Emlékeztetni kell arra, hogy sok nem dermatofita penészgomba és néhány Candida faj nem növekszik cikloheximidet tartalmazó táptalajon, ezért ajánlatos a Sabouraud-féle cikloheximidet tartalmazó táptalajra és az anélküli táptalajra oltani. A fajok azonosítása általában a kifejlett tenyészet mikroszkópos vizsgálatával vagy szelektív táptalajon történő szubkultúrával történik (2-15. ábra).

Rizs. 2. Az érintett körmökből izolált T. rubrum gomba tenyésztése. Sabouraud táptalajon (balra) és kukorica-agaron (jobbra) nyertük.

Rizs. 3. A T. mentagrophytes var. érintett körmökből izolált interdigitale. Saburo médiumán szerezték be.

Rizs. 4. A Candida albicans gomba tenyésztése. Saburo médiumán szerezték be.

Rizs. 5. Az érintett körmökről izolált Torulopsis glabrata gomba tenyésztése. Saburo médiumán szerezték be.

Rizs. 6. Az érintett körmökből izolált Ulocladium sp. gomba tenyésztése.

Rizs. 7. Az érintett körmökből izolált Acremonium sp. mikromorfológiája.

Rizs. 8. Az érintett körmökből kimetszett Fusarium sp. mikromorfológiája.

Rizs. 9. Az érintett körmökből izolált Scopulariopsis sp. mikromorfológiája.

Rizs. 10. Az érintett körmökből izolált Candida albicans mikromorfológiája.

Rizs. 11. Az érintett körmökből izolált Altemaria sp. mikromorfológiája.

Rizs. 12. Az érintett körmökből izolált Aspergillus sp. mikromorfológiája.

Rizs. 13. Az érintett körmökből izolált Ulocladium sp mikromorfológiája.

Rizs. 14. Az érintett körmökből izolált Chaetomium sp. mikromorfológiája.

15. ábra: Tápanyag-táppanel a dermatofiták azonosítására (bal - T rubrum kultúra, jobb - T mentagrophytes var. mterdigitale).

Balról jobbra: Sabouraud táptalaj, Baxter táptalaj, Christensen táptalaj, kukorica agar

Megjegyzendő, hogy egyes penészgombák, köztük a dermatofiták, lassan, 2-3 hét alatt szaporodnak a tenyészetben.

Még ha az anyaggyűjtésre vonatkozó összes szabályt betartják is, jó laboratóriumi felszereléssel és magasan képzett személyzettel, a kulturális tanulmányok pozitív eredményeinek száma nagyon kicsi.

A külföldi szakirodalom szerint a pozitív vizsgálatok százaléka nem haladja meg az 50-et.
A legjobb hazai laboratóriumokban a pozitív eredmények aránya alig éri el a 30-at.

Így az onychomycosis minden harmadik esetéből 2-ben nem állapítható meg etiológiája.

LUMISZCENCIÓS TANULMÁNY

1925-ben Margaret és Deveze megállapította, hogy bizonyos dermatofiták által érintett haj jellegzetes fényességet mutat a Byd-szűrőn áthaladó ultraibolya sugárzás hatására. A Byda üveg bárium-szulfátból áll, körülbelül 9% nikkel-oxidot tartalmaz; 365 nm hosszúságú sugarakat enged át. Különféle eszközök használhatók ultraibolya sugárzás forrásaként. A ragyogás természetét nem állapították meg pontosan. A haj továbbra is ragyog a gomba elpusztulása után, és miután a fluoreszkáló anyagot forró vízzel vagy hideg nátrium-bromid oldattal próbálták kivonni. A ragyogás intenzitása és jellege az oldat pH-jától függ. Úgy gondolják, hogy a fluoreszkáló anyag a gomba és a növekvő haj közötti kölcsönhatás folyamatában jelenik meg.

A faszűrőn áthaladó ultraibolya sugarak fénye csak a Microsporum nemzetséghez tartozó gombák (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, esetenként M. gypseum és M. nanum) által érintett hajra jellemző, mivel valamint a Trichophyton schonleinii . A mikrospórák, különösen a M. canis és a M. audouinii által érintett haj adja a legfényesebb fényt; a T. schonleinii által érintett haj tompa zöldes fluoreszcenciával rendelkezik.

Ragyogás csak a gomba által teljesen érintett hajon figyelhető meg. Lehetséges, hogy friss elváltozásokban nincs jelen. Ezekben az esetekben a szőrszálat a szélső, legaktívabb zónából kell epilálni, és a fény a haj gyökerében észlelhető.

A lumineszcens módszer mind az egyes betegek diagnosztizálására és a kezelés eredményességének monitorozására, mind epidemiológiai gócokban alkalmazható. A kompakt mobil egységek kényelmesek a kapcsolattartók vizsgálatára iskolákban, óvodákban stb.

Sötétített helyiségben lumineszcens vizsgálatot kell végezni, az elváltozásokat előzetesen meg kell tisztítani a kéregtől, kenőcsmaradványoktól stb. A lumineszcens módszerrel a pityriasis versicolor diagnosztizálható, különösen akkor, ha az elváltozások a fejbőrön lokalizálódnak. Ebben a betegségben az elváltozások vöröses-sárga vagy barna fényűek. Ez a ragyogás azonban nem szigorúan specifikus, mivel a fejbőrön korpásodás esetén, sőt egészséges embereknél is megfigyelhető az arcon és a felsőtesten lévő szőrtüszők szája táján. A lumineszcens módszerrel azonosított hajat mikroszkópos vizsgálatnak kell alávetni.

IMMUNOLÓGIAI ÉS BIOLÓGIAI TANULMÁNYOK

Immunológiai kutatási módszereket alkalmaznak a szervezetben bekövetkező specifikus változások azonosítására és a gombás betegségek szerológiai diagnosztizálására. A specifikus antitestek kimutatására a minta szérumában a következő szerológiai reakciókat hajtják végre: agglutináció, precipitáció, komplementkötés, immunfluoreszcencia a megfelelő antigénekkel.

A páciens testének allergiás állapotát allergiás bőrtesztekkel állapítják meg. Az allergéneket Pirque szerint a karcolt bőrre vagy Moro szerint bőrbe dörzsölve, Mantoux szerint intradermálisan, illetve bőrbe injektálva alkalmazzák. A tesztek segítségével azonnali és késleltetett típusú allergiás reakciókat is kimutatnak, ami lehetővé teszi a humorális és celluláris immunitás állapotának felmérését.

A limfociták specifikus szenzitizációjának kimutatására a bazofil degranuláció, agglomeráció és elváltozás reakciói, blast transzformációs teszt, makrofág migráció gátlása stb.

A szerológiai és allergiás reakciók eredményeinek összehasonlítása hasznos mind a mikózisok diagnosztizálása, mind a lefolyás előrejelzése szempontjából.

biológiai módszer. Mély és különösen veszélyes mikózisok laboratóriumi diagnosztikájára használják. Az állatok betegtől származó kóros anyaggal vagy a vizsgált gomba tenyészetével történő fertőzése alapján. Ezt speciális laboratóriumokban végzik.

TÖRTÉNETI TANULMÁNY

A dermatofiták által okozott bőrmikózisok szövettana

A léziók patológiás elváltozásait az epidermisz szarurétegébe, a hajba és a körmökbe gombák bejutása, valamint a bőr gyulladásos reakciója okozza, amely lehet akut, szubakut vagy krónikus. A diagnózis csak akkor tekinthető megalapozottnak, ha a szövettani készítményekben gombaelemek találhatók. Ehhez különféle szövettani festéseket használnak, a leginformatívabb a periodikus sav reakció (PAS), amely lehetővé teszi a legtöbb dermatofita sejtfalának cellulózában és kitinében jelen lévő poliszacharidok azonosítását (Shifu festés és módosításai). Használhat szulfatálási reakciókat és a szövettani metszetek ezüsttel való impregnálását is [Khmelnitsky OK, 1973; Lewer W. F. és Schaumburg-Lewerl., 1983].

Az epidermisz stratum corneumában lévő gombák még speciális foltok használata esetén is kis mennyiségben kimutathatók micéliumszálak és spórák formájában. Ritka esetekben, amikor sok gomba található a léziókban, a hematoxilin-eozinnal megfestett metszetekben finom bazofil struktúrákként találhatók meg a stratum corneumban.

Az epidermisz gyulladásos elváltozásai a tüskés sejtek enyhe intra- és extracelluláris ödémájától a súlyos spongiosisig változhatnak. A spongiosis általában a lábak és kezek mycosisának diszhidrotikus változataival alakul ki, klinikailag ezekben az esetekben hólyagok figyelhetők meg. Ennek a reakciónak az oka általában a T. mentagrophytes var. interdigitale. Néha kifejezett hyperkeratosis figyelhető meg az epidermiszben, amelyet leggyakrabban a T. rubrum által okozott mycosis esetén figyelnek meg.

A dermisz szövettani változásai nem specifikusak, és megfelelnek akut, szubakut és krónikus gyulladásnak.

A T. rubrum által okozott sima bőr mikózisa esetén néha gombákat észlelnek a vellus hajban és a szőrtüszőkben. A tüszők körül gyulladásos reakció alakul ki, amely a gombák irhaba jutása miatt granulomatózus jelleget tud szerezni. Az infiltrátum központi része ezekben az esetekben gennyedéssel és nekrózissal járhat, míg a perifériás része limfocitákból, hisztocitákból, epithelioid és többmagvú óriássejtekből állhat, amelyek belsejében időnként gombaspórák találhatók. A spórák mérete itt eléri a 6 mikron átmérőt, a szőrben általában nem haladja meg a 2 mikront.

A fejbőr mycosisának infiltratív-gennyes formájával, valamint a szakáll és a bajusz növekedési területével a gombás elemek a szőrtüszőben, a haj belsejében és környékén találhatók. A hajban közvetlenül a keratinizáció kezdeti zónája felett vannak meghatározva (körülbelül 30 mikron szinten). A dermiszben változó intenzitású gyulladásos reakció figyelhető meg, a legkifejezettebb a kerion Celsii-vel. Akut gennyes reakcióban nagyszámú neutrofil leukocita figyelhető meg az infiltrátumban, a gombás elemek ebben az esetben teljesen eltűnhetnek. A folyamat krónikus lefolyása során az infiltrátum granulomatikus jelleget kaphat, többmagvú óriássejtek jelennek meg benne. A diagnózis megerősítésére, ha az infiltrátumban nincs gomba, immunfluoreszcens festési módszerek alkalmazhatók. Erre a célra fluoreszceinnel jelölt T. mentagrophytes elleni antiszérumot használnak, amely lehetővé teszi a gomba antigének kimutatását a hajban és a perifollikuláris infiltrátumban.

A M. canis, T. tonsurans és T. verrucosum gombák által okozott infiltratív-gennyes reakció kialakulása a bőrön a fejbőr mycosisával (kerion Celsii), valamint a szakáll és a bajusz növekedési területével. az immunológiai reakció megnyilvánulása. Ezt bizonyítja:

1. Az elváltozások spontán feloldódási tendenciája.

2. A T. verrucosum (faviforme) és a T. tonsurans által okozott mikózissal járó gombás elemek hiánya a bőrből.

3. Állandó pozitív reakció a trichophytin intradermális adagolására a zoofil trichophytinek (például T. tonsurans) által okozott mycosis infiltratív-gennyes formáival, és negatív - ugyanazon T. tonsurans által okozott felületes mycosisokkal.

Egy favus esetén nagyszámú micéliumfonala és a gomba egyes spórái találhatók az epidermisz stratum corneumában. A scutulát a váladék, az epidermisz parakeratotikus sejtjei, a gyulladásos infiltrátum sejtjei, valamint a micéliumszálak és gombaspórák képviselik, amelyek főként a scutula perifériás zónájában helyezkednek el. A betegség aktív stádiumában a degeneratív szőrtüszők körüli dermiszben kifejezett gyulladásos infiltrátum van, amely többmagvú óriás- és plazmasejteket tartalmaz. A régi elváltozásokban a haj és a faggyúmirigyek hiányoznak, vannak fibrózis jelenségek.

A bőr és a nyálkahártyák mikózisainak szövettana, amelyet élesztőszerű gombák okoznak

A bőr és a nyálkahártyák candidiasisa esetén a Candida nemzetség gombái az epidermisz stratum corneumában vagy a nyálkahártya hám felszíni rétegeiben találhatók. A gombás elemek általában kevés, PAS-reakció vagy Gram hatására jól festődnek; 2-4 mikron átmérőjű septate elágazó micélium szálak vagy 3-5 mikron átmérőjű tojásdad spórák formájában jelennek meg. A gomba micélium formájának kimutatása diagnosztikus jelentőségű.

A bőr és a nyálkahártyák krónikus granulomatosus candidiasisának szövettani vizsgálata során a gombás elemek túlnyomórészt az epidermisz stratum corneumában vagy a nyálkahártya hám legfelső szakaszaiban, de esetenként a tüskés rétegben is megtalálhatók. a hajban és a dermisben. Jelentős hyperkeratosis és papillomatosis is van; a dermisben - limfoid sejtekből, neutrofilekből, plazmából és többmagvú óriássejtekből álló sűrű gyulladásos infiltrátum. Az infiltrátum kiterjedhet a szubkután zsírszövetbe.

A pityriasis versicolor esetén az epidermisz stratum corneumában nagyszámú gombás elem található finom bazofil struktúrák formájában, amelyek jól láthatóak még a készítmények hematoxilin-eozinnal történő festésekor is. A gombákat fonalak és spórák egyaránt képviselik.

A pityriasis versicolor tüszős formájával a szőrtüszők megnagyobbodott szájában szaros tömegek és gyulladásos infiltrátum sejtjei halmozódnak fel. Gyulladásos infiltrátum is megfigyelhető a tüszők körül. A PAS reakció során a gomba gömbölyű vagy ovális, 2-4 µm átmérőjű spórái a szőrtüszők szájában, esetenként a perifollikuláris infiltrátumban találhatók. A micélium soha nem derül ki.

A pityriasis versicolor-ban szenvedő betegek bőrpigmentációjának megsértése a Pityrosporum gomba azon képességének köszönhető, hogy olyan anyagot termel, amely gátolja a pigmentképződés folyamatát az epidermiszben. A hipopigmentált területekről vett bőrbiopsziák elektronmikroszkópos vizsgálata azt mutatta, hogy a melanocitákban nagyon kicsi melanoszómák képződnek, amelyek nem képesek behatolni a keratinocitákba. A bőr hiperpigmentált területein éppen ellenkezőleg, a melanoszómák nagyok és nagy mennyiségű melanint tartalmaznak.

A statisztikák szerint hazánk lakosságának mintegy 20% -a valamilyen módon mycosisban szenved. De nem mindegyik kér szakembertől segítséget. Ennek egyik oka az, hogy az emberek egyszerűen nem ismerik a betegség összes tünetét és megnyilvánulását.

A mycosis tünetei

Először is érdemes megjegyezni, hogy ez nem egy specifikus betegség, hanem a bőr és függelékeinek különböző gombás elváltozásainak csoportja. Ezért a tünetek meglehetősen változatosak lehetnek, de leggyakrabban a következőket jegyezzük fel:

• Pettyes foltok megjelenése a bőrön. Leggyakrabban a lábujjak között, a láb bőrén jelennek meg. Gyakran viszketést, irritációt és egyéb kellemetlen érzéseket okoznak.
• A köröm színének és szerkezetének megváltoztatása. Sárgássá válnak, törékenyek, morzsolódnak, hámlik, felületük göröngyös, egyenetlen lehet.
• Repedések a bőrön. Gyakran a lábbőr gombás fertőzése esetén eldurvul, és erősen repedezni kezd.
• Rossz szag. Sok beteg panaszkodik az érintett bőr kellemetlen szagára, különösen lábgombásodás esetén.

Amikor ilyen jelek jelentkeznek, a lehető leghamarabb fel kell keresni egy bőrgyógyászt, és teljes körű diagnózist kell végezni annak meghatározására, hogy milyen típusú mycosis érintette a bőrt.

A mikózisok diagnosztizálásának módszerei

Amikor a betegek bőrgyógyászhoz fordulnak a gombás bőrelváltozások jellegzetes tüneteivel, akkor leggyakrabban egy elsődleges külső vizsgálat elegendő az orvosnak a diagnózis felállításához. A kérdés csak az, hogy milyen típusú mycosis érintette a bőrt.

Ez az információ szükséges a további kezelési stratégia meghatározásához. A mycosis diagnosztizálására a következő módszerek használhatók:

• Wood's lámpa tanulmány. Az ultraibolya fény speciális spektruma lehetővé teszi a gombás fertőzések jelenlétének meghatározását. Ez a módszer nagyon egyszerű és megfizethető, segítségével nemcsak diagnózist készíthet, hanem figyelemmel kísérheti a kezelés folyamatát is. De ez nem teszi lehetővé a mycosis típusának meghatározását.
• Mikroszkópia. A mycosis diagnosztizálásának egyik legegyszerűbb és leggyakoribb módszere a gomba által érintett szövetek kaparásának mikroszkópos vizsgálata. Ehhez üveglemezre kell helyezni. Kétféle kaparási vizsgálat létezik: foltok és fehérítők használata.
• Bakteriológiai kultúra. Az egyik legpontosabb diagnosztikai módszer a táptalajra történő tartályos vetés. A gomba kifejlett telepeinek megjelenése és jellemzői alapján az orvos meghatározhatja a kórokozó típusát. Ennek a módszernek a hátránya az időtartam, 2-3 hétig is eltarthat a telep növekedése. Ráadásul csak az esetek felében lehet eredményt elérni.
• PCR diagnosztika. Ez az egyik legpontosabb és legmodernebb diagnosztikai módszer, de több vizsgálatra is szükség lehet a mycosis típusának meghatározásához, ami bizonyos költségeket igényel.

Érdemes megjegyezni, hogy a mycosis diagnózisa szükséges a betegség leghatékonyabb kezelési módjának meghatározásához. Ha pedig nem lehetséges azonnal szakorvoshoz fordulni, igénybe veheti rendelőnk szolgáltatását és

Első fogadás

A találkozón a mikológus vizsgálatot végez, és átfogó vizsgálatot is előír.

Laboratóriumi diagnosztika

A bőrmikózisok diagnosztizálásának leghatékonyabb módszerei a különféle laboratóriumi vizsgálatok, amelyek segítségével azonosítani lehet a kórokozót, és segíthet a terápia kiválasztásában. A mycosis kórokozójának azonosítására a következő laboratóriumi vizsgálatokat írják elő:

• szövettani elemzés;
• bakteriológiai tenyészet;
• immunológiai kutatások;
• PCR diagnosztika;
• kulturális vizsgálat;
• mikrobiológiai kutatás.

A mikrobiológiai diagnosztika segít a gomba kimutatásában, nemzetségének és fajának meghatározásában.

A mikrobiológiai diagnosztika a leggyakoribb és legegyszerűbb módszer a mycosis kimutatására a vérben és a bőrön. A pontos diagnózis azonosításához tudnia kell, hogyan kell megfelelően összegyűjteni a vizsgálathoz szükséges anyagot. Az érintett hajat csipesszel kell összegyűjteni. Ha a bőr fertőzött, akkor mikroszkópos vizsgálathoz a bőrt le kell kaparni a sérült területről. Az összes felvett anyagot 30%-os kálium-hidroxid-oldatba, majd egy tárgylemezre helyezzük. A mikrobiológiai diagnosztika képes pontosan meghatározni, hogy a gomba hol található (bőrön, bőrön belül vagy kívül) és annak méretét.

A mycosis hibás diagnózisának megakadályozása érdekében helyesen és hozzáértően kell elvenni az anyagot mikrobiológiai vizsgálatra.

Az orvostudományban a következő mikrobiológiai diagnosztikai módszerek vannak:

• Mikroszkópia natív vagy festetlen készítményekkel. Ehhez az anyagot 10-30% -os kálium- vagy nátrium-hidroxid-oldattal tisztítják. Ezután a feldolgozott anyagot egy laboratóriumi üvegre helyezik, ahová előzőleg kevés glicerint csepegtetnek. Fedje le a tetejét egy üveglappal, és végezze el az elemzést.
• A festett készítmények mikroszkópos vizsgálatát többféle módon végzik el, amelyek segítségével azonosítják a baktériumokat, megkülönböztetik a különböző baktériumokat és azonosítják a különböző gombákat.

Bakteriológiai kultúra

A bakteriológiai tenyésztés az egyik leghatékonyabb diagnosztikai módszer.

A bakteriológiai oltás táptalajra gyűjtése pontos módja a mycosis diagnosztizálásának. Tekintettel a gomba kifejlett kolóniájának megjelenésére és jellemzőire, a bőrgyógyász meghatározza a mikózist okozó kórokozó típusát. A felmérés egyetlen hátránya, hogy hosszú ideig tart egy kolónia növekedése. Átlagosan körülbelül 3 hétig tart a kórokozó törzsének kiderítése. Egyes esetekben a módszer nem hozza meg a várt eredményeket.

PCR diagnosztika

A PCR diagnosztikai módszer magában foglalja a mycosis kórokozójának azonosítását polimeráz láncreakció segítségével. A vizsgálat során megnő a hibridizáció érzékenysége, ami növeli a vizsgált anyag vírus DNS-tartalmát. Ez a vizsgálati módszer új, és számos vizsgálatot igényel a pácienstől. Úgy gondolják, hogy az ilyen típusú diagnosztika meglehetősen drága, de pontos eredményeket ad.

Kulturális vizsga

Kulturális diagnosztikai intézkedések javasoltak a diagnózis végső szakaszában. A módszer abból áll, hogy egy gombakultúrát nyerünk, amelyet azután mikroszkópos vizsgálatra küldünk. A keletkező anyagot mesterségesen létrehozott táptalajra helyezzük, és azonosítjuk a kórokozó típusát, megjelenését, méretét. Ezt követően egy speciális kezelést mutatnak be, amely a mycosis egy adott típusú kórokozójának leküzdésére irányul.

A mikózisok diagnosztizálására mikroszkópos, mikológiai (kulturális), allergiás, szerológiai, biológiai és szövettani kutatási módszerek alkalmazhatók. A patogenezistől függően a kutatás anyaga lehet genny, köpet, érintett haj, köröm, bőrpelyhek, csontvelő, nyirokcsomók, belső szervek, vér, epe, széklet, szövetbiopszia stb.

A mikroszkópos vizsgálat magában foglalja a natív (festetlen) és a festett kenetek mikroszkópos vizsgálatát. Natív készítmények készítéséhez a haj-, bőr- és körömkaparékot 10,30%-os KOH vagy NaOH oldatban derítik. A lúggal kezelt anyagot tárgylemezre helyezzük egy csepp glicerinben, fedőlemezzel lefedjük és mikroszkóppal (fáziskontraszt mikroszkóppal is használható), amely lehetővé teszi a gomba szerkezetének, a gomba elhelyezkedésének tanulmányozását. spórákat, de a gombafajtára vonatkozó végső következtetést csak tenyésztési vizsgálatok után lehet levonni.

A kenetek festésére leggyakrabban Gram, Ziehl.Nielsen, Romanovsky-Giemsa módszereit alkalmazzák. A dermatofiták festésére Saburo, Adamson és mások módszereit is alkalmazzák.

Kulturális (mikológiai) vizsgálatot végeznek a gomba tiszta kultúrájának izolálására és azonosítására. Szilárd és folyékony tápközeget használnak (Saburo, wort agar, Chapek stb.). A termosztátban (22,28ºС) való inkubálás hosszú (3,4 hét). A gomba tiszta tenyészetét a tulajdonságok kombinációja azonosítja: a telepek alakja, színe, állaga, mikroszkópos képe (a micélium jellege, a spórák elhelyezkedése, konidiofórok) és egyéb jellemzők Szerológiai reakciók a diagnózishoz A gombás megbetegedések vizsgálatát gomba antigénekkel végezzük általánosan elfogadott módszerek szerint, valamint más fertőző betegségek (RA, RP, RSK, RNGA, RIF stb.) diagnosztizálására.

Az allergiás tesztek általánosan elfogadott módszerekkel végezhetők megfelelő allergének intradermális adagolásával (sejtekből vagy sejtmembránokból származó poliszacharid- és fehérjefrakciók, elpusztult gombák sejtszuszpenziója, tenyészet szűrletei). A HNT kimutatására használhatja a szöveti és szérumbazofil degranulációs tesztet, a HTH kimutatására pedig a fagocita migráció gátlásának reakcióját, a limfociták blast transzformációját.

A biológiai kutatásokat laboratóriumi modelleken (egerek, patkányok, tengerimalacok, nyulak, kutyák, macskák) végzik. A mycosis biológiai modelljét a kórokozó patogenitásának azonosítására, tiszta tenyészet izolálására és új antimikotikumok tanulmányozására használják. A szövettani vizsgálat lehetővé teszi a gomba szövetekben történő kimutatását, morfológiájának és a szervezetben általa okozott kóros folyamat jellemzőinek tanulmányozását.