Hamis negatív teszt közvetett Coombs-teszt. Coombs-teszt: közvetlen és közvetett

- antiglobulin teszt, amelynek célja az Rh-faktorral szembeni hiányos vörösvértest-ellenes antitestek kimutatása Rh-negatív vérben - egy specifikus fehérje, amely az Rh-pozitív vér eritrocitáinak felszínén található. Ennek a tesztnek két típusa van: közvetlen - antitestek kimutatása a vörösvértestek felszínén, közvetett - antitestek kimutatása a vérszérumban. Közvetlen vizsgálatot végeznek a vérbetegségek diagnosztizálásában és kezelésében: hemolitikus anémia, újszülött hemolitikus betegsége és mások. Közvetett tesztet végeznek a donor és a recipiens vérének összeegyeztethetőségének felmérésére transzfúzió során, valamint az Rh-konfliktus jelenlétének és kockázatának meghatározására a terhesség tervezése és kezelése során. A Coombs-teszt anyaga vénás vér, a vizsgálatot az agglutinációs reakción alapuló módszerekkel végzik. Általában mindkét teszt negatív eredményt ad. Az elemzést egy napon belül elvégzik. Összesen 87 olyan cím volt Moszkvában, ahol ezt az elemzést el lehetett végezni.

- antiglobulin teszt, amelynek célja az Rh-faktorral szembeni hiányos vörösvértest-ellenes antitestek kimutatása Rh-negatív vérben - egy specifikus fehérje, amely az Rh-pozitív vér eritrocitáinak felszínén található. Ennek a tesztnek két típusa van: közvetlen - antitestek kimutatása a vörösvértestek felszínén, közvetett - antitestek kimutatása a vérszérumban. Közvetlen vizsgálatot végeznek a vérbetegségek diagnosztizálásában és kezelésében: hemolitikus anémia, újszülött hemolitikus betegsége és mások. Közvetett tesztet végeznek a donor és a recipiens vérének összeegyeztethetőségének felmérésére transzfúzió során, valamint az Rh-konfliktus jelenlétének és kockázatának meghatározására a terhesség tervezése és kezelése során. A Coombs-teszt anyaga vénás vér, a vizsgálatot az agglutinációs reakción alapuló módszerekkel végezzük. Általában mindkét teszt negatív eredményt ad. Az elemzést egy napon belül elvégzik.

A Coombs-teszt az Rh-negatív vér klinikai vizsgálata, amelynek célja az Rh-faktor elleni antitestek kimutatása. A tesztet a Rhesus-konfliktus és a hemolitikus reakciók kialakulásának kockázatának azonosítására használják. Minden emberben az eritrociták felülete tartalmaz egy bizonyos antigén- vagy agglutinogén-készletet - különféle természetű vegyületeket, amelyek jelenlétét vagy hiányát a vércsoport és az Rh-faktor megítélésére használják. Sokféle antigén létezik, az orvosi gyakorlatban a legnagyobb gyakorlati jelentőséggel bír a vércsoportot meghatározó A és B agglutinogén, valamint az Rh faktor D agglutinogén. Pozitív Rh-faktorral a D-antigéneket az eritrociták külső membránján észlelik, negatív - nem.

A Coombs-teszt, amelyet antiglobulin tesztnek is neveznek, az Rh-faktor rendszerrel szembeni hiányos vörösvértest-ellenanyagok kimutatására irányul a vérben. Az Rh-faktor elleni antitestek olyan specifikus immunglobulinok, amelyek az Rh-negatív vérben képződnek, amikor a D-agglutinogént tartalmazó eritrociták bekerülnek.Ez akkor fordulhat elő, ha a magzat és a terhes nő vére keveredik, előzetes vércsoport-meghatározás nélkül végzett vérátömlesztéssel. A Coombs-teszt két változatban létezik - közvetlen és közvetett. Közvetlen Coombs-teszt végrehajtásakor a vörösvértestek felületéhez kötődő antitesteket mutatnak ki. A vizsgálatot a hemolitikus reakció okának meghatározására használják. A közvetett Coombs-teszt célja az eritrocita elleni antitestek kimutatása a vérplazmában. Meg kell határozni a donor és a recipiens vagy az anya és a magzat vérének kompatibilitását, ez segít megelőzni a Rhesus konfliktus kialakulását és az azt követő vörösvértestek hemolízisét.

A Coombs-teszt mindkét változatához a vért vénából veszik. Az elemzést agglutinációs módszerrel végezzük, antiglobulin szérum felhasználásával. A vizsgálat eredményeit felhasználják a hematológiában a hemolitikus reakciók okainak azonosításában, a sebészetben és a vérátömlesztés során az újraélesztésben, a szülészet-nőgyógyászatban Rh-negatív vérű nők terhességének monitorozásában.

Javallatok

A direkt Coombs-tesztet, amely a vörösvértestek felületéhez kötődő antitesteket detektálja, különböző eredetű hemolitikus reakciókra (a vörösvértestek pusztulása) írják elő. A vizsgálat primer autoimmun hemolitikus anémia, transzfúzió utáni hemolitikus vérszegénység, újszülöttek hemolitikus betegsége, autoimmun, daganatos vagy fertőző betegségek által okozott vörösvértestek hemolízise, ​​valamint gyógyszerek, például kinidin, metildopa, prokainamid esetén javasolt. . A Rhesus-konfliktus kialakulásának megelőzésére szolgál az indirekt Coombs-teszt, amely a vérplazmában antitesteket mutat ki. Vérátömlesztésre készülő betegek, valamint negatív Rh-faktorral rendelkező terhes nők számára javasolt, feltéve, hogy a gyermek leendő apja pozitív Rh-faktorral rendelkezik.

Az Rh-kompatibilitás meghatározása érdekében a Coombs-tesztet nem adják be Rh-pozitív vérű betegeknek. Ezekben az esetekben már antigének vannak a vörösvértestek felszínén, az antitestek termelődését sem vérátömlesztéssel, sem magzati vér bejutásával nem lehet kiváltani a terhes nő vérkeringésébe. Ezenkívül a vizsgálat nem javasolt terhes nők számára, ha mindkét szülő negatív Rh-faktorral rendelkezik, amely öröklött recesszív tulajdonság. Az ilyen párok gyermekének mindig Rh-negatív vére van, az anyával való immunológiai konfliktus lehetetlen. Hemolitikus patológiákban az antiglobulin tesztet nem használják a terápia sikerének ellenőrzésére, mivel az eredmények nem tükrözik az eritrocita pusztulási folyamat aktivitását.

A Coombs-teszt korlátja a kutatási eljárás összetettsége - a megbízható eredmények eléréséhez be kell tartani a hőmérsékleti és időbeli feltételeket, a reagensek és a bioanyag elkészítésének szabályait. A Coombs-teszt előnye a nagy érzékenység. Hemolitikus anémia esetén ennek a tesztnek az eredménye pozitív marad, még akkor is, ha a hemoglobin, a bilirubin és a retikulociták normalizálódnak.

Felkészülés az elemzésre és az anyaggyűjtésre

A Coombs-teszt elvégzésének anyaga vénás vér. A vérvételi eljárás idejére és a beteg felkészítésére nincs különösebb követelmény. Mint minden vizsgálatnál, evés után legalább 4 órás szünetet, az utolsó 30 percben pedig a dohányzás abbahagyását, a testmozgást és az érzelmi stressz elkerülését javasolt. Érdemes előre megbeszélni kezelőorvosával a gyógyszerek szedésének abbahagyásának szükségességét – egyes gyógyszerek torzíthatják a Coombs-teszt eredményeit. A vért fecskendővel a cubitalis vénából, ritkábban a kézháti vénából veszik. Néhány órán belül az anyagot a laboratóriumba szállítják.

Közvetlen Coombs-teszt végrehajtásakor antiglobulin szérumot adnak a páciens vérszérumához. Egy idő után a keveréket megvizsgálják az agglutinátok jelenlétére - ezek akkor képződnek, ha antitestek vannak a vörösvértesteken. Pozitív eredmény esetén agglutináló titert határozunk meg. A közvetett Coombs-teszt több lépésből áll. Először is, a szérumban jelenlévő antitesteket az injektált eritrocitákon rögzítik az inkubáció során. Ezután antiglobulin szérumot adunk a mintához, majd egy idő után meghatározzuk az agglutinátok jelenlétét és titerét. Az elemzési időszak 1 nap.

Normális eredmények

Általában a közvetlen Coombs-teszt eredménye negatív (-). Ez azt jelenti, hogy a vérben nincsenek vörösvértestekhez kapcsolódó antitestek, és ezek nem okozhatják a hemolízist. Az indirekt Coombs-teszt normál eredménye is negatív (-), vagyis nincs Rh-faktor elleni antitest a vérplazmában. A recipiens vérátömlesztésére való felkészüléskor ez a donor vérével való kompatibilitást jelenti, miközben figyelemmel kíséri a terhességet - az anya Rh-érzékenységének hiányát, az immunológiai konfliktus kialakulásának alacsony kockázatát. Fiziológiai tényezők, mint például az étkezési szokások vagy a fizikai aktivitás, nem befolyásolhatják a teszt eredményét. Ezért, ha az eredmény pozitív, orvosi konzultációra van szükség.

Az elemzés diagnosztikai értéke

A pozitív Coombs-teszt eredményét minőségileg (+)-tól (++++-ig), vagy mennyiségileg 1:16 és 1:256 közötti titerekben fejezik ki. Az eritrocitákon és a vérszérumban lévő antitestek koncentrációjának meghatározását mindkét mintatípusban elvégezzük. A közvetlen Coombs-teszt pozitív eredménye esetén a vörösvértestek külső membránján antitesteket mutatnak ki, amelyek ezeknek a vérsejteknek a pusztulásához vezetnek. Az ok lehet előzetes tipizálás nélküli vérátömlesztés - transzfúzió utáni hemolitikus reakció, valamint újszülöttkori eritroblasztózis, gyógyszerhasználat miatti hemolitikus reakció, primer vagy másodlagos autoimmun hemolitikus anémia. A vörösvértestek másodlagos pusztulását okozhatja szisztémás lupus erythematosus, Evans-szindróma, Waldenström-féle makroglobulinémia, paroxizmális hideg hemoglobinuria, krónikus limfocitás leukémia, limfóma, fertőző mononukleózis, szifilisz, mycoplasmalis tüdőgyulladás.

Az indirekt Coombs-teszt pozitív eredménye az Rh-faktor elleni antitestek jelenlétét jelzi a plazmában. A gyakorlatban ez azt jelenti, hogy Rh-szenzitizáció történt, a terhesség alatti donorvér infúziója után fennáll a Rh-konfliktus kialakulásának lehetősége. A terhességi szövődmények megelőzése érdekében a pozitív Coombs-teszt eredményes nőket külön nyilvántartásba veszik.

A normától való eltérések kezelése

A Coombs-teszt izoszerológiai vizsgálatokra vonatkozik. Eredményei lehetővé teszik a hemolitikus reakció azonosítását, valamint a donor és a recipiens, az anya és a magzat vérének kompatibilitásának meghatározását a Rhesus-konfliktus kialakulásának megelőzése érdekében. Ha a vizsgálat eredménye pozitív, akkor tanácsot kell kérni a kezelőorvostól - szülész-nőgyógyász, hematológus, sebész.

Antitestek Az eritrociták felszínén található, statikus és szabad állapotban is lehet vérplazma. Az antitestek állapotától függően közvetlen vagy közvetett Coombs-reakciót hajtanak végre. Ha okkal feltételezhető, hogy antitestek rögzülnek a vörösvértestek felületén, közvetlen Coombs-tesztet kell végezni. Ebben az esetben a teszt egy szakaszban megy át - hozzáadódik antiglobulin szérum. Ha hiányos antitestek vannak jelen a vörösvértestek felületén, agglutináció eritrociták.

Közvetett reakció

A közvetett Coombs-reakció 2 lépésben megy végbe. Először is mesterségesen kell végrehajtani túlérzékenységet eritrociták. Ennek érdekében a vizsgált vörösvértesteket és a vérszérumot inkubálják, ami a vörösvértestek felszínén antitestek rögzítését idézi elő. Ezt követően a Coombs-teszt második szakaszát hajtják végre - antiglobulin szérum hozzáadása.

csapadék reakció - Az RP (Lat praecipilo-tól csapadékig) egy oldható molekuláris antigén komplexének kialakulása és kicsapása az antitestekkel zavarosság formájában, ún. kicsapódik. Antigének és antitestek egyenértékű mennyiségben történő keverésével jön létre, ezek egyikének feleslege csökkenti az immunkomplex képződésének szintjét. A kicsapási reakciót kémcsövekbe (gyűrűs precipitációs reakció), gélekbe, táptalajokba, stb. helyezik. A kicsapási reakció különböző változatait félfolyékony agar- vagy agarózgélben széles körben alkalmazzák, kettős immundiffúzió a szerint. Ouchterlony, rádium immundiffúzió, immunelektroforézis satöbbi.

Gyűrűs kicsapódási reakció. A reakciót keskeny kicsapócsövekben hajtják végre: egy oldható antigént rétegeznek az immunszérumra. Az antigén és az antitestek optimális aránya esetén e két oldat határán átlátszatlan réteg képződik. csapadékgyűrű. Ha a reakcióban főtt és szűrt szövetkivonatokat használnak antigénként, akkor az ilyen reakciót I reakció-termoprecipitációnak nevezik (olyan reakció, amelyben lépfene-haptént mutatnak ki).
Ouchterlony kettős immundiffúziós reakció. A reakció felállításához az olvadt agargélt vékony rétegben üveglapra öntjük, majd megszilárdulás után lyukakat vágunk ki rajta. Az antigének és az immunszérumok külön kerülnek a gél üregeibe, amelyek egymás felé diffundálnak. A találkozási ponton egyenlő arányban fehér sáv formájában csapadékot képeznek. Többkomponensű rendszerekben az antigéneket és antitesteket tartalmazó lyukak között több csapadékvonal jelenik meg; azonos AG-kban a csapadékvonalak egyesülnek; a nem azonos AG-kban metszik egymást.
Radiális immundiffúziós reakció. Az olvadt agargéllel készült immunszérumot egyenletesen az üvegre öntjük. A gélben való megszilárdulás után lyukakat készítünk, amelyekbe az antigént különféle hígításokban helyezzük. Az antigén a gélbe diffundálva gyűrű alakú kicsapódási zónákat képez a lyukak körül az antitestekkel. A kicsapógyűrű átmérője arányos az antigénkoncentrációval. A reakció segítségével meghatározzák a vérszérumban a különböző osztályokba tartozó immunglobulinokat, a komplementrendszer komponenseit stb.
Immunelektroforézis- az elektroforézis és az immunprecipitáció módszerének kombinációja: a gél üregeibe antigének keverékét vezetik be és a gélben elektroforézissel elválasztják, majd az elektroforézis zónáival párhuzamos barázdába immunszérumot vezetnek, amelynek antitesteit diffundálnak a gélbe, és kicsapódási vonalat képeznek az antigénnel való „találkozási” helyen.
flokkulációs reakció(Ramon szerint) (lat. f1oecus - gyapjú pelyhek) - opálosodás vagy pelyhes tömeg (immunprecipitáció) megjelenése kémcsőben a toxin - antitoxin vagy toxoid - antitoxin reakciója során. Az antitoxikus szérum vagy toxoid aktivitásának meghatározására szolgál.

HLA gépelés- a fő humán hisztokompatibilitási komplex – HLA komplex vizsgálata. Ez a formáció magában foglalja a 6. kromoszómán lévő gének egy régióját, amelyek különböző immunválaszokban részt vevő HLA antigéneket kódolnak.

Feladatok at HLA gépelés nagyon eltérő lehet - biológiai azonosítás (a HLA-típus a szülői génekkel együtt öröklődik), a különböző betegségekre való hajlam meghatározása, a donorok kiválasztása szervátültetésre - ebben az esetben a donor és a recipiens szövetek HLA-tipizálásának eredményeit hasonlítják össze. A HLA tipizálás segítségével megállapítható, hogy a házastársak mennyire hasonlóak vagy eltérőek a szöveti kompatibilitási antigének tekintetében a meddőségi esetek diagnosztizálásához.

A HLA tipizálás azt sugallja HLA polimorfizmus elemzésés két módszerrel - szerológiai és molekuláris genetikai - hajtják végre. A HLA tipizálás klasszikus szerológiai módszere a mikrolimfocitotoxikus teszten, míg a molekuláris módszer PCR-en (polimeráz láncreakció) alapul.

Szerológiai HLA gépelés izolált sejtpopulációkon végezzük. A fő hisztokompatibilitási komplex antigéneket főként limfociták hordozzák. Ezért a T-limfociták szuszpenzióját használják az I. osztályú antigének fő hordozóiként, és a B-limfociták szuszpenzióját a HLA II. osztályú antigének meghatározására. Centrifugálást vagy immunmágneses elválasztást alkalmaznak a kívánt sejtpopulációk teljes vérből történő izolálására. Úgy gondolják, hogy az első módszer hamis pozitív adatokhoz vezethet, mivel ebben az esetben a sejtek egy része elpusztul. A második módszert specifikusabbnak ismerik el – miközben a sejtek több mint 95%-a életképes marad.

De a limfocitotoxikus teszt elvégzésének alapja HLA gépelés egy specifikus szérum, amely antitesteket tartalmaz a HLA I. és II. osztályú antigének különböző allélváltozatai ellen. A szerológiai teszt lehetővé teszi a HLA típusának meghatározását annak megvizsgálásával, hogy a szérumok közül melyik reagál a limfocitákra, és melyik nem.

Ha reakció lép fel a sejtek és a szérum között, akkor a sejt felszínén antigén-antitest komplex képződik. Komplementet tartalmazó oldat hozzáadása után lízis és sejthalál következik be. A HLA-tipizálás szerológiai tesztjét fluoreszcens mikroszkóppal értékelik a pozitív (vörös fluoreszcencia) és negatív (zöld fluoreszcencia) reakciók értékelésére, vagy fáziskontraszt mikroszkóppal az elhalt sejtek magjainak megfestésére. A HLA-tipizálás eredményét a reagált szérumok és az antigének keresztreakciói csoportjainak specifitásának, a citotoxicitási reakció intenzitásának figyelembevételével határozzák meg.

A szerológiai kezelés hátrányai HLA gépelés keresztreakciók jelenléte, gyenge antitest-affinitás vagy HLA-antigének alacsony expressziója, fehérjetermékek hiánya számos HLA-génben.

Modernebb, molekuláris módszerek HLA gépelés már standardizált szintetikus mintákat használnak, amelyek nem a leukociták felszínén lévő antigénekkel, hanem a DNS-sel reagálnak, és közvetlenül jelzik, hogy mely antigének vannak jelen a mintában. A molekuláris módszerekhez nincs szükség élő leukocitákra, bármilyen emberi sejt tanulmányozható, és néhány mikroliter vér is elegendő a működéshez, vagy korlátozódhat a szájnyálkahártya lekaparására.

Molekuláris genetika HLA gépelés PCR módszert alkalmaz, melynek első lépéseként tiszta genomiális DNS-t nyernek (teljes vérből, leukocita szuszpenzióból, szövetekből).

Ezután a DNS-mintát lemásolják – egy kémcsőben amplifikálják egy specifikus HLA-lókuszra specifikus primerek (rövid egyszálú DNS) segítségével. Az egyes primerpárok végeinek szigorúan komplementereknek kell lenniük egy adott allélnak megfelelő egyedi szekvenciához, különben nem történik amplifikáció.

A PCR után az ismételt másolás során nagyszámú DNS-fragmentumot kapunk, amely vizuálisan értékelhető. Ehhez a reakcióelegyeket elektrolízisnek vagy hibridizációnak vetik alá, és program vagy táblázat segítségével megállapítják, hogy történt-e konkrét amplifikáció. A HLA tipizálás eredményét átfogó jelentés formájában mutatjuk be gén- és allélszinten. A felhasznált minták szabványosítása miatt a molekuláris HLA gépelés pontosabban szerológiai. Ezen kívül több információt (több új DNS allélt) és nagyobb részletezést biztosít, mivel nemcsak az antigének azonosítását teszi lehetővé, hanem magukat az allélokat is, amelyek meghatározzák, hogy melyik antigén van jelen a sejten.

immun lízis reakció. A reakció a specifikus antitestek azon képességén alapul, hogy immunkomplexeket képeznek a sejtekkel, beleértve a vörösvértesteket, baktériumokat, ami a komplementrendszer aktiválásához vezet a klasszikus útvonalon és a sejt lízisén. Az immunlízis reakciók közül leggyakrabban a hemolízis reakciót, ritkán a bakteriolízis reakciót alkalmazzák (főleg a kolera és a koleraszerű vibriók megkülönböztetésében).

hemolízis reakció. A komplement jelenlétében az antitestekkel való reakció hatására az eritrociták zavaros szuszpenziója élénkvörös átlátszó folyadékká - „lakkvérré” válik a hemoglobin felszabadulása miatt. A komplementkötés diagnosztikai reakciójának (RCC) felállításakor a hemolízis reakciót indikátorként használják: a szabad komplement jelenlétének vagy hiányának (kötődésének) tesztelésére.

Helyi hemolízis reakció gélben(Jerne-reakció) a hemolízis reakció egyik változata. Lehetővé teszi az antitestképző sejtek számának meghatározását. Az antitesteket - hemolizineket - szekretáló sejtek számát a vörösvértesteket, a vizsgált limfoid szövet sejtszuszpenzióját és komplementet tartalmazó agargélben megjelenő hemolízis plakkok száma határozza meg.

Immunfluoreszcens módszer

(RIF, immunfluoreszcens reakció) - specifikus Ag (Ab) kimutatására szolgáló módszer fluorokrómmal konjugált Ab (Ag) felhasználásával. Nagy érzékenységgel és specifitással rendelkezik. Expressz d-ki fertőzésekre használják. betegségek (a kórokozó azonosítása a kutatási anyagban), valamint a leukociták antitesteinek és felszíni receptorainak és markereinek meghatározására (immunfenotipizálás), valamint egyéb sejtek. Közvetlen I. m. fluorokrómmal konjugált specifikus antitesteket tartalmazó kóros anyagból vagy kórokozóból származó mikrobiális metszet vagy kenet feldolgozásából áll; a gyógyszert mossuk, hogy eltávolítsuk a meg nem kötött antitesteket, és fluoreszcens mikroszkóp alatt vizsgáljuk. Pozitív esetekben egy világító immunkomplex jelenik meg az objektum perifériáján. A szabályozás a nem specifikus lumineszcencia kizárása érdekében szükséges. Nál nél közvetett. Őket. az első szakaszban egy szövetmetszetet vagy kenetet nem fluoreszcens specifikus szerrel, a második szakaszban az adott állat -globulinjai elleni lumineszcens szerrel kezelnek, amelyet az első szakaszban alkalmaztak. Pozitív esetben egy világító komplexum keletkezik, amely Arból, Am hozzá és Am ellen At (szendvics módszer) áll. A lumineszcens mikroszkóp mellett a sejtfenotipizálás során előforduló RIF figyelembevétele érdekében, lézeres sejtválogató .

áramlási citometria- a sejt paramétereinek, sejtszervecskéi és a benne lejátszódó folyamatok optikai mérésének módszere.

A technika a lézersugárból származó fény szóródásának detektálásából áll, amikor egy sejt folyadéksugárban áthalad rajta, és a fény diszperziós foka lehetővé teszi, hogy képet kapjunk a sejt méretéről és szerkezetéről. Ezenkívül az elemzés figyelembe veszi a sejtet alkotó kémiai vegyületek fluoreszcenciájának szintjét (autofluoreszcencia), vagy az áramlási citometria előtt a mintába bevitt kémiai vegyületek szintjét.

A sejtszuszpenzió, amelyet korábban fluoreszcens monoklonális antitestekkel vagy fluoreszcens festékekkel jelöltek meg, belép az áramlási cellán áthaladó folyadékáramba. A feltételeket úgy választják ki, hogy a sejtek egymás után sorakoznak fel az ún. egy sugár hidrodinamikus fókuszálása egy sugárban. Abban a pillanatban, amikor a cella keresztezi a lézersugarat, a detektorok rögzítik:

fényszórás kis szögben (1°-tól 10°-ig) (ez a jellemző a cellák méretének meghatározására szolgál).

fényszórás 90°-os szögben (lehetővé teszi a sejtmag / citoplazma arányának, valamint a sejtek heterogenitásának és szemcsésségének megítélését).

fluoreszcencia intenzitása több fluoreszcencia csatornában (2-től 18-20-ig) - lehetővé teszi a sejtszuszpenzió szubpopulációs összetételének meghatározását stb.

Tányérra vagy tárgylemezre pipettákkal (különböző!) 1 nagy csepp O (I), A (II), B (III) szérumot viszünk fel. Figyelve az időt, egy tiszta üvegrúddal vagy a tárgylemez tiszta szögével a szérumcseppeket vércseppekkel kombinálják. A meghatározás 5 percig tart, a lemezt felrázzuk, majd minden cseppkeverékhez 1 csepp sóoldatot adunk, és az eredményeket kiértékeljük. Jobb, ha a szérum 2 különböző sorozatból áll. A vércsoport-eredményeknek meg kell egyeznie mindkét szérumsorozatban.

Az izohemagglutináció eredményeinek értékelése:

izohemagglutináció. Pozitív reakció esetén a keverékben összetapadt vörösvértestek apró vörös szemcséi jelennek meg. A szemek nagyobb szemcsékké, az utóbbiak pedig pelyhekké egyesülnek. A szérum szinte elszíneződött;

negatív reakció esetén a keverék egyenletesen rózsaszínű marad 5 percig, és nem észlelünk szemcséket;

ha 3 O(I), A(II), B(III) csoportba tartozó szérummal dolgozunk, 4 reakciókombináció lehetséges:

1. ha mind a 3 szérum negatív reakciót adott, vagyis a keverék egyenletesen rózsaszínű - ez az O (I) vércsoport;

   ha csak az A (II) csoport széruma adott negatív reakciót, és az O (I) és B (III) szérum pozitív reakciót adott, azaz szemek jelentek meg - ez az A (II) vércsoport;

   a B(II) csoport széruma negatív, az O(I) és A(II) csoport széruma pedig pozitív reakciót adott - ez a B(III) vércsoport.

mind a 3 szérum pozitív reakciót adott - az AB (IV) csoport vizsgált vére. Ebben az esetben vizsgálatot végeznek az AB (IV) csoport szérumával.

Jegyzet! A vizsgált vér cseppeinek 5-10-szer kisebbnek kell lenniük, mint a szérum cseppjei.

Isohemagglutinációs hibák.

Nem agglutinál ott, ahol lennie kellene, és ott van agglutináció, ahol nem kellene. Ennek oka lehet az alacsony szérumtiter és a gyenge eritrocita-agglutináció.

Az agglutináció jelenléte ott, ahol nem kellene- ez pszeudoagglutináció, amikor vörösvértestek halmazai "érmeoszlopokat" alkotnak. A tányér ringatása vagy sóoldat hozzáadása tönkreteszi őket.

Panagglutináció, amikor a szérum összeragasztja az összes vörösvérsejtet, beleértve a saját vércsoportját is. Az 5. percre az agglutináció jelei eltűnnek.

Létezik az úgynevezett hideg panagglutináció is, amikor a vörösvértestek összetapadnak a helyiségben lévő alacsony (15 °C alatti) levegő hőmérséklete miatt.

Mindezekben az esetekben vagy ismételt reakciót hajtanak végre, vagy a standard eritrociták szerint.

A vér Rh-tartozásának meghatározása

Az Rh-hovatartozás meghatározására, azaz az Rh-rendszer antigének jelenlétének vagy hiányának kimutatására az emberek vérében standard anti-Rhesus szérumokat (reagenseket) használnak, amelyek specifitásukban eltérőek, azaz antitesteket tartalmaznak a vérben. ennek a rendszernek a különféle antigénjei. Az Rh 0 (D) antigén meghatározásához leggyakrabban anti-Rhesus szérumot használnak 10% -os zselatin oldat hozzáadásával, vagy 33% -os poliglucin oldattal előzetesen elkészített standard anti-Rhesus reagenst. A vizsgálat pontosabb eredményeinek megszerzéséhez, valamint más szerológiai rendszerek antigénjeinek kimutatásához a Coombs-tesztet alkalmazzák (nagyon érzékeny a transzfundált vér kompatibilitásának meghatározására is). A vizsgálathoz natív vért vagy valamilyen tartósítószerrel elkészített vért használnak. Ebben az esetben a vért tízszeres térfogatú izotóniás nátrium-klorid oldattal kell lemosni a tartósítószerről. Az Rh-hovatartozás meghatározásakor- Rh 0 (D) két különböző sorozatú szérummintát vagy Rhesus-ellenes reagenst kell használni, és egyidejűleg Rh-pozitív (Rh +) és Rh-negatív (Rh -) vérből származó standard eritrocitákat kell használni. ) magánszemélyek. Más izoantigének meghatározásakor ennek megfelelően a kontroll vörösvértesteket kell használni, amelyek a standard szérumban tartalmazzák vagy hiányozzák azt az antigént, amely ellen az antitestek irányulnak.

A hiányos hőagglutininek az antitestek leggyakoribb típusai, amelyek autoimmun hemolitikus anémia kialakulását okozhatják. Ezek az antitestek az IgG-hez, ritkán az IgM-hez, IgA-hoz tartoznak.

COOMBS-TESZT

Coombs-teszt: bevezetés. A Coombs-teszt a hemagglutinációs reakción alapuló laboratóriumi diagnosztikai módszer.

Az autoimmun hemolitikus anémia diagnosztizálásának fő módszere a Coombs-teszt. Azon alapul, hogy az immunglobulinokra (különösen az IgG-re) vagy a komplement komponensekre (különösen a C3-ra) specifikus antitestek képesek agglutinálni az IgG-vel vagy C3-mal bevont eritrocitákat.

Az IgG és a C3b kötődését a vörösvértestekhez autoimmun hemolitikus anémiában és gyógyszer-indukálta immunhemolitikus anémiában figyelték meg. Közvetlen Coombs-teszt. A közvetlen Coombs-teszt a vörösvértestek felületén rögzített antitestek vagy komplement komponensek kimutatására szolgál. Ez a következőképpen történik:

Humán immunglobulinok (antiglobulin szérum) vagy komplement (antikomplementer szérum) elleni antitestek előállításához az állatot humán szérummal, immunglobulinokkal vagy humán komplementtel immunizálják. Az állatból nyert szérumot megtisztítják más fehérjék elleni antitestektől.

A páciens eritrocitáit sóoldattal mossuk, hogy teljesen eltávolítsuk a szérumot, amely semlegesíti az immunglobulinok és a komplement elleni antitesteket, és hamis negatív eredményt okozhat.

Ha antitestek vagy komplement komponensek rögzülnek az eritrociták felszínén, az antiglobulin vagy antikomplementer szérum hozzáadása az eritrociták agglutinációját okozza.

A közvetlen Coombs-tesztet a következő esetekben használják:

autoimmun hemolízis.

Az újszülött hemolitikus betegsége.

Gyógyszer által kiváltott immunhemolitikus vérszegénység.

Hemolitikus transzfúziós reakciók. Közvetett Coombs-teszt. Az indirekt Coombs-teszt kimutatja a vörösvértestek elleni antitesteket a szérumban. Ehhez a páciens szérumát 0-ás csoportba tartozó donor eritrocitákkal inkubálják, majd direkt Coombs-tesztet végeznek.

A közvetett Coombs-tesztet a következő esetekben használják:

A donor és a recipiens vére egyéni összeférhetőségének meghatározása.

Alloantitestek kimutatása, beleértve a hemolitikus transzfúziós reakciókat okozó antitesteket.

Felszíni eritrocita antigének meghatározása az orvosi genetikában és az igazságügyi orvostanban.

Egypetéjű ikrek megerősítése csontvelő-transzplantációban.

A biológiai vizsgálat elvégzéséhez a vért a lehető leggyorsabban át kell juttatni (lehetőleg sugárban). 25 ml vér transzfúziója után a rendszer csövét egy bilinccsel rögzítjük. Ezután 3 perces szünetet tartunk, amely alatt a címzett állapotát figyeljük. A biológiai minta felállításához háromszor 25 ml vért fecskendeznek be. A vizsgálat végén (az első 75 ml vér transzfúziója után, 25 ml-es töredékes adagokban 3 perces időközönként) a rendszert a szükséges transzfúziós sebességre állítják be. Ha egynél több injekciós üveg vért ad át a betegnek, el kell távolítani a tűt a vénából. Ebben az esetben a tűt eltávolítják annak az injekciós üvegnek a kémcsövéből, amelyben a vér kifolyt, és behelyezik a következő injekciós üvegbe. A rendszercső (gumi vagy műanyag) ebben a pillanatban egy bilinccsel van rögzítve. Ha a vérátömlesztés során bármilyen más gyógyszer intravénás beadására van szükség a recipiensnek, ezt úgy kell megtenni, hogy átszúrják a rendszer gumicsövét. A műanyag cső lyukasztása elfogadhatatlan, mivel nem esik le. Minden egyes vérátömlesztés után a beteget ellenőrizni kell a lehetséges szövődmények, köztük az allergiás reakciók azonosítása és időben történő megszüntetése érdekében. A testhőmérsékletet a vérátömlesztés befejezése után 2 órával kell mérni. A mérést a következő 4 órában óránként meg kell ismételni. Ugyanilyen fontos a vizeletürítés és a vizelet összetételének monitorozása, amely lehetővé teszi a toxikus transzfúziót követő reakció jelenlétének megállapítását. A vérátömlesztés után fellépő oliguria és anuria, a vérsejtek és a fehérje jelenléte a vizeletben közvetlenül jelzi a transzfúzió utáni hemolízis kialakulását.

Coombs teszt- a felülethez kapcsolódó vagy plazmában oldott antitestek kimutatására irányuló elemzés. Segítségével kimutatható az immunizálás és a vörösvértestek elleni antitestek. A második név az antiglobulin teszt. Közvetlenül és közvetetten történik.

Nál nél közvetlen antiglobulin teszt kimutatja az eritrociták felületén rögzített antitesteket. Más autoimmun betegségek gyanújával, gyógyszerek szedése után (metildopa, penicillin, kinin) és.

Az eritrociták in vivo szenzitizáltak - az antitestek már szilárdan kötődnek hozzájuk, és az antiglobulin szérum (anti-IgG) hozzáadása az érzékenyített sejtek összetapadását okozza, ami szabad szemmel is látható.

Közvetett Coombs-teszt kimutatja az anti-eritrocita antitesteket a vérplazmában, ezt vérátömlesztés előtt és közben végzik.

Anti-eritrocita antitestek - az autoantitestek egy típusa, i.e. saját szöveteik elleni antitestek. Autoantitest akkor fordul elő, ha az immunrendszer abnormálisan reagál bizonyos gyógyszerekre, például nagy dózisú penicillinre.

Felületükön az eritrociták különféle kémiai szerkezeteket tartalmaznak (glikolipidek, szacharidok, glikoproteinek és fehérjék), amelyeket az orvostudományban antigéneknek neveznek. Egy személy a szüleitől örököl egy bizonyos antigéntérképet minden egyes vörösvértesten.

Az antigéneket csoportokba egyesítik, és ezek mellett a vért több csoportra osztják - az AB0 rendszer szerint Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Az orvos munkájában a leghíresebb és legjelentősebb az AB0 és az Rh-faktor (Rh).

AB0 rendszer

Egy személy Rh-hovatartozását ezen antigének jelenléte határozza meg. Különösen fontos eritrocita antigén a D antigén. Ha jelen van, akkor beszélnek róla Rh-pozitív vér RhD, és ha nem – kb Rh negatív Rhd.

Ha a megfelelő antitest csatlakozik az eritrociták antigénjéhez, akkor az eritrocita elpusztul - hemolízis.

Javallatok

A fő indikáció a közvetlenantiglobulin teszt- Hemolitikus vérszegénység gyanúja. Leggyakrabban primer autoimmun hemolitikus anémiával, reumás, daganatos, fertőző betegségekkel járó hemolízissel, gyógyszerek okozta hemolízissel végzik.

Ha a vérszegénység néhány nappal vagy hónappal a vérátömlesztés után jelentkezik, vagy egy újszülöttnél elhúzódó sárgaság jelentkezik, közvetlen Coombs-tesztet is végeznek.

Közvetettantiglobulin tesztet végeztek vérátömlesztés előtt és Rh-negatív nő terhessége alatt.

Autoimmun hemolitikus anémia

Autoimmun hemolitikus anémia (elsődleges) egy klasszikus autoimmun betegség, melynek oka ismeretlen. Az immunrendszeren belüli kölcsönhatás megszakad, ami a saját vörösvértestek idegenként való észleléséhez vezet. A nyirokcsomókban IgG osztályú (t 37 °C-on reagál) és/vagy IgM (t 40 °C-on) antitestek szintetizálódnak, amelyek az eritrocita felszínéhez kapcsolódva számos enzimet (a komplement rendszer) és "perforálja" az eritrocita falát, ami annak pusztulásához - hemolízishez - vezet.

Az első tünetek a vörösvértestek pusztulásából és a hemoglobinszint csökkenéséből erednek. Közöttük:

• fáradtság, általános gyengeség, ingerlékenység
• nehézlégzés
• hasi és mellkasi fájdalom, hányinger
• sötét vizelet színű
• hátfájás
• a bőr és a nyálkahártyák icterikus elszíneződése
• az eritrociták számának csökkenése és

pozitív közvetlen eredmény Coombs teszt 100%-ban megerősíti az autoimmun hemolitikus anémia diagnózisát, igazolva annak autoimmun eredetét. Ugyanakkor a negatív eredmény nem teszi lehetővé a diagnózis eltávolítását.

Másodlagos hemolitikus anémia

A másodlagos autoimmun hemolitikus anémia és a pozitív Coombs-teszt a következő betegségekhez vezethet:

• Evans szindróma
• tüdőgyulladás fertőzés

A pozitív antiglobulin teszt ezekben a betegségekben az egyik tünet, nem pedig diagnosztikai kritérium.

Az újszülött hemolitikus betegsége

Ok az újszülött hemolitikus betegsége a vércsoport inkompatibilitása az anyában és a magzatban, a legtöbb esetben Rh rendszer szerint, egyedi esetekben - AB0 rendszer szerint kazuisztikusan - egyéb antigének szerint.

Rh-konfliktus akkor alakul ki, ha egy Rh-negatív nőben a magzat Rh-pozitív vért örökölt az apjától.

Az újszülöttben a betegség csak akkor alakul ki, ha az anyában már kialakultak a megfelelő antigénekkel szembeni antitestek, ami korábbi terhességek, abortuszok, összeférhetetlen vér transzfúziója után következik be. Az eritrocita membrán antigénekkel szembeni antitestek szintézisének kiváltásának leggyakoribb oka a szülés (a magzati anyai vérzés). Az első szülések általában komplikációk nélkül zajlanak le, de a következő szülések tele vannak az újszülött hemolitikus betegségével a születést követő első napokban.

Az újszülött hemolitikus betegségének tünetei:

• a bőr sárgasága
• , és nyálkás
• a máj és a lép megnagyobbodása
• légzési rendellenességek
• az egész test duzzanata
• a központi idegrendszer izgalma és fokozatos depressziója

Anémia vérátömlesztés után

Közvetett Coombs-teszt vérátömlesztés előtt végezzük el a kompatibilitás felmérését, és közvetlen Coombs-tesztet – utána, ha transzfúziót követő hemolízis gyanúja merül fel, pl. ha olyan tünetei vannak, mint a láz, öntözés (lásd alább). A vizsgálat célja a transzfúziós vörösvértestek elleni antitestek kimutatása, amelyek a recipiens VVT-jéhez kötődtek, és a transzfúzió utáni hemolízis okozói, valamint a donor VVT-k idő előtti eltávolítása a recipiens (receiver) keringéséből.

Tünetek:

• a testhőmérséklet emelkedése
• kiütés a bőrön
• hátfájás
• piros
• hányinger
• szédülés

Dekódolás

Érdemes emlékeztetni arra, hogy a direkt és indirekt antiglobulin tesztek dekódolásának alapvető szabályai megegyeznek. Az egyetlen különbség az antitestek elhelyezkedése - a vérben vagy már a vörösvértesten.

• ha a közvetlen Coombs-teszt negatív- ez azt jelenti, hogy az antitest nem „ül le” a vörösvértestekre, és tovább kell keresni a tünetek okát, és közvetett Coombs-tesztet kell végezni
• ha pozitív Coombs-teszt eredménye vérátömlesztés, fertőzés, gyógyszeres kezelés után - a pozitivitás legfeljebb 3 hónapig tart (a vörösvértestek élettartama 120 nap - 3 hónap)
• autoimmun betegség esetén az antiglobulin teszt pozitív eredménye hónapokig, sőt évekig is fennáll

Norma

• közvetlen Coombs-teszt - negatív
• indirekt Coombs-teszt - negatív

Minőségileg a pozitív eredményt a pluszok számában mérik egytől négyig (+, ++, +++, ++++), mennyiségileg pedig digitális formában - 1:16, 1:256 stb.

Igen. Azt a tényt, hogy vérátömlesztést kapott, tudnia kell orvosának, mivel ez már befolyásolja a vizsgálati eredmények helyes értelmezését. Amikor valaki mástól kap (bár sokszor tesztelt vért), mindig fennáll annak a lehetősége, hogy az Ön szervezetében antitestek képződnek a transzfundált vér ellen. Ezek az antitestek negatív hatással lesznek az egészségre. A következő vérátömlesztéseknél az orvosnak tudnia kell, hogy Ön már kapott transzfúziót, ami azt jelenti, hogy volt idő az antitestek szintézisére. A terhes nők számára ez az információ még relevánsabb.

3. Ha az Rh-faktor nem egyezik az anya és a gyermek között, minden gyermek beteg lesz?

Attól függ, hogy a gyermek Rh-pozitív vagy negatív (RhD). Az I, II, III és IV vércsoport hordozói lehetnek Rh-pozitívak és negatívak is. Abban az esetben, ha az anya Rh-negatív, a gyermek pedig Rh-pozitív, már az első terhességgel antitestek képződnek, de csak az első szülés (vagy a terhesség megszakítása) után lesz közvetlen érintkezés a szülés vére között. anya és a gyermek. Az antitestek hemolitikus hatásának megvalósítása csak a második és az azt követő születéseknél lesz, ami az újszülöttben hemolitikus betegséghez vezet.

Minden negatív Rh-faktorral rendelkező nőt gondosan meg kell vizsgálni a terhesség alatt, és a szülés után megelőző kezelést kell végezni, hogy megakadályozzák az antitestek megjelenését és a további szövődményeket.

4. Terhesség alatt szükséges-e ismerni a férj vércsoportját a Coombs-teszt elvégzése előtt?

Nemcsak tudni, de ellenőrizni is kell a gyermek biológiai apjának vércsoportját a terhesség alatt.

Adat

• 1945-ben javasolták először Cambridge-ben
• érzékenységi küszöb - legalább 300 fix antitest molekula egy eritrocitán
• a hemolízist kiváltó antitestek száma - személyenként egyénileg (16-30-300)
• a hemolitikus anémia egyéb laboratóriumi mutatóinak (hemoglobin, bilirubin, retikulociták) dinamikája normalizálódhat, és a Coombs-teszt ugyanazon a szinten marad

A Coombs-tesztet legutóbb módosította: 2018. március 16 Mária Bodyan

Normális esetben a vérben nincsenek eritrociták elleni antitestek.

A direkt Coombs teszt egy antiglobulin teszt (gél agglutináció, amely lehetővé teszi a komplett kétértékű antitestek kimutatását), amely meghatározza az IgG osztályú antitesteket és a komplement C3 komponensét az eritrociták felszínén. A közvetlen Coombs-teszttel kimutatott antitestek jellemzően széles specifitással rendelkeznek, amely nem kapcsolódik egy jól megalapozott antigénhez. A pozitív közvetlen Coombs-teszt egyértelműen hemolitikus vérszegénység jelenlétét jelzi a betegben, bár nem minden pozitív közvetlen antiglobulin teszttel rendelkező betegnél van ez a betegség. Az eritrocita membránon antitestekkel vagy komplement komponensekkel rendelkező betegek körülbelül 10%-a nem mutatható ki közvetlen Coombs-teszttel (negatív teszt), de ennek ellenére autoimmun hemolitikus anémiában szenvednek. Az ilyen esetekben az antitestek specifitásának tisztázására elúciós teszteket alkalmaznak. A közvetlen Coombs-teszt, amely csak komplementre pozitív, általában hideg típusú IgM antitestekkel társul. Ebben az esetben az IgM antitestek nincsenek jelen az eritrocitákon az alaptest hőmérsékletén. Tekintettel azonban arra, hogy az IgM antitestek aktívan rögzítik a komplementet, és a komplement a vörösvértesteken marad, az autoimmun hemolitikus anémia (hideg agglutinin betegség) ilyen formájában a Coombs-teszt csak komplementre lesz pozitív.

A direkt Coombs-teszt pozitív a meleg antitestek okozta autoimmun hemolitikus anémiában, autoimmun gyógyszeres anémiában (metildopa szedése esetén a betegek akár 20%-a pozitív reakciót mutat), gyógyszer-adszorpciós típusú hemolitikus anémiában, immunkomplex típusú hemolitikus anémiában (a a teszt csak C3-ra pozitív), hideg antitestek által okozott autoimmun hemolitikus anémiával - hideg agglutinin betegség (a teszt csak C3-ra pozitív). Paroxizmális hideg hemoglobinuria esetén a közvetlen Coombs-teszt negatív.

Közvetett Coombs-teszt - egy közvetett antiglobulin teszt (a hiányos antitesteket észleli) lehetővé teszi az atipikus antitestek kimutatását a vérben, beleértve az alloantitesteket is, idegen eritrocita antigénekkel szemben. Nevét (közvetett) onnan kapta, hogy 2 szakaszban halad. Kezdetben a beteg nem teljes antitesteket tartalmazó vérszéruma látható megnyilvánulások nélkül kölcsönhatásba lép a hozzáadott corpuscularis Ag diagnosticum-mal. A második szakaszban a bejuttatott antiglobulin szérum kölcsönhatásba lép az antigéneken adszorbeált hiányos antitestekkel, látható csapadék megjelenésével. A homológ (allogén) vörösvértestek transzfúziója vagy a terhesség a leggyakoribb oka ezeknek az anti-vvt antitesteknek. A pozitív indirekt Coombs-teszt és a negatív közvetlen teszt kombinációja semmit sem tesz az autoimmun hemolitikus anémia diagnosztizálásához. A pozitív közvetett Coombs-teszt bizonyos nehézségeket okoz a transzfúzióra szánt vér kiválasztásában, és a vérrel való keresztezésben, de nincs más diagnosztikai értéke.