A szifilisz elemzése ELISA - az elemzés dekódolása. Norma és eltérések

A sejttechnológiák, a molekuláris biológia, a genetika, a fizika, a kémia és számos más high-tech tudományág fejlődése kapcsán új, nagy pontosságú és high-tech módszerek kerülnek be a mindennapi gyakorlatba. Ezek az interdiszciplináris irányzatok mind az orvosi ismeretek területét, mind a biológiai és biokémiai problémák kapcsolódó területeit érintik. Az elmúlt tíz évben széles körben elterjedt és tömeges gyakorlatba is bevezették a klinikai laboratóriumi diagnosztikai módszert, az úgynevezett enzim immunoassay-t.

Általánosságban elmondható, hogy az immunológiai enzimatikus és radiológiai reakciók technológiáit az 1980-as évek eleje óta széles körben alkalmazzák sejtek, sejttenyészetek és különféle szövetek tipizálására. Ezek a módszerek azonban nagyon munkaigényesek voltak, nem egységesek, nem szabványosítottak, ami kizárta tömeges orvosi és diagnosztikai célú alkalmazásukat. Csak szűk, tudásintenzív és magasan szakosodott laboratóriumok alkalmaztak ilyen módszereket.

A technológia, a mikrotechnológia fejlődésével, a különböző biopolimer anyagok gyártásával azonban lehetővé vált olyan kész enzim-immunoassay kitek előállítása, amelyeket általános egészségügyi intézmények laboratóriumai is használhatnak. Az ELISA-t széles körben alkalmazzák mindenféle fertőzés (chlamydia, szifilisz, citomegalovírus, toxoplazmózis, herpesz stb.), akut és krónikus, valamint a klinikai tünetek nélkül jelentkező látens formák diagnosztizálására. . Próbáljuk kitalálni, milyen módszerről van szó, és milyen elvek támasztják alá?

Enzim immunoassay komponensek - Immunreakció és enzimatikus reakció

Az enzim immunoassay, ahogy a neve is sugallja, két különböző komponensből áll - egy immunválaszból és egy enzimatikus reakcióból. Az immunreakció biológiai molekulák, sejt- vagy mikroorganizmuselemek megkötését állítja elő, amelyek ténylegesen megpróbálják kimutatni, és az enzimatikus reakció lehetővé teszi az immunológiai reakció eredményének megtekintését és mérését. Vagyis az immunválasz egy komplex technika része, amely ténylegesen kimutatja a kívánt mikrobát. Az enzimatikus reakció pedig egy olyan komplex technika része, amely lehetővé teszi, hogy az immunreakció eredményét olyan formába lefordítsák, amely szemmel látható, és rutin kémiai módszerekkel mérhető. Az enzimimmunoassay módszer ezen szerkezete alapján mindkét részét külön elemezzük.

Immunreakció, mi ez? Mi az antitest vagy antigén?

Mi az immunválasz? Mi az antigén?
Először is nézzük meg, mik az immunreakciók. immunreakciók- Ezek olyan specifikus reakciók, amikor egy antigén egy antitesthez kötődik immunkomplex kialakulásával. Mit jelent? Bármely szervezet minden sejtjének felszínén speciális struktúrák találhatók, az úgynevezett antigének. Az antigének általában olyan molekulák, amelyek információt hordoznak egy sejtről (hasonlóan a személy jelvényén lévő információhoz, amely az adott személy alapvető adatait jelzi).

Egyedi és faji antigének – mi ez? Miért van szükség ezekre az antigénekre?

Elérhető antigének egyéni, vagyis csak ennek a szervezetnek a sajátja. Ezek az egyedi antigének minden embernél eltérőek, némelyik hasonlít egymáshoz, de mégis különbözik. A természetben nincs két egyforma másolata az egyes antigéneknek!

Az antigének második fő típusa az faj antigének, azaz bármely adott élőlényfaj velejárója. Például az embereknek megvan a saját, minden emberre jellemző antigénje, az egereknek saját egérfajú antigénjük stb. Minden sejt felületén szükségszerűen jelen van egy specifikus és egyedi antigén.

A faj antigénjét az immunrendszer sejtjei a „barát vagy ellenség” azonosítására használják.

Hogyan történik az antigén felismerés?

Az immunsejt egy gyanús sejthez kötődik, és pontosan egy egyedi antigén alapján végzi el az azonosítást. Az immunsejt memóriájában „rögzül”, hogyan néz ki az „antigénje”. Így ha egy gyanús sejt antigénje megegyezik a „saját antigén” leírással, akkor a saját testének ez a sejtje nem jelent veszélyt. Aztán az immunsejt "leoldódik" és távozik. És ha az antigén nem egyezik az „én” leírásával, akkor az immunsejt „idegen”-ként azonosítja ezt a sejtet, és ezért potenciálisan veszélyes az egész szervezetre. Ebben az esetben az immunsejt nem „megszabadul”, hanem elkezdi elpusztítani a veszélyes tárgyat. Az ilyen immunológiai felismerés pontossága elképesztő - 99,97%. Szinte nincs hiba!

Mi az antitest, immunkomplex?
Mi az antitest?

Az antitest egy speciális molekula, amely az immunsejt felszínén található. Ez az antitest, amely a gyanús sejt antigénjéhez kötődik. Továbbá az antitest információt továbbít a sejt belsejében, ahol az azonosítás megtörténik, és kétféle visszatérési jelet kap, „saját” vagy „idegen”. A „saját” jelre az antitest tönkreteszi az antigénnel való kötést, és felszabadítja a sejtet.

Mi az immunkomplex?
Az „idegen” jelzéssel a helyzet másként alakul. Az antitest nem szakítja meg az antigénnel való kapcsolatot, hanem éppen ellenkezőleg, specifikus jelek küldésével "erősítést" okoz. Biológiailag ez azt jelenti, hogy a sejt egy másik részében elhelyezkedő más antitestek elkezdenek mozogni arra a területre, ahonnan a veszélyjelzés jön, és kötést is kialakítanak maguk és a befogott antigén között. A végén kiderül, hogy az antigén minden oldalról körül van véve és szilárdan rögzítve van.Egy ilyen antigén + antitest komplex ún. immunkomplex. Ettől a pillanattól kezdődik az antigén hasznosítása. De most nem érdekelnek minket az antigénsemlegesítési folyamat részletei.

Az antitestek típusai (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Az antitestek fehérjeszerkezetek, amelyek ennek megfelelően kémiai elnevezéssel rendelkeznek, amelyet az antitest szó szinonimájaként használnak. Így, antitestek = immunglobulinok.

5 típusú immunglobulin (Ig) létezik, amelyek az emberi test különböző helyein (például a bőrön, a nyálkahártyákon, a vérben stb.) különböző típusú antigénekhez kötődnek. Vagyis az antitesteknek munkamegosztásuk van. Ezeket az immunglobulinokat a latin ábécé betűinek nevezik - A, M, G, D, E, és a következőképpen jelölik - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

A diagnosztikában csak egyfajta antitestet használnak, amely a legspecifikusabb a meghatározandó mikrobára. Vagyis az ilyen típusú ellenanyagnak a meghatározandó antigénhez való kötődése mindig megtörténik. A leggyakrabban használt IgG és IgM.

Ez az immunválasz elve (a meghatározandó biológiai objektum felismerésének egyedi pontossága és specifitása) az enzim immunoassay alapja.Az antitestek nagy pontossága miatt az antigének felismerésében a teljes enzim immunoassay módszer pontossága is a legmagasabb.

enzimatikus reakció

Mi az enzimes reakció? Mi az affinitás, a szubsztrát és a reakciótermék?
Térjünk rá az enzimreakció figyelembevételére az enzim immunoassay módszer munkája során.

Mi az enzimes reakció?

Az enzimatikus reakció olyan kémiai reakció, amelyben az egyik anyag egy másik enzim hatására átalakul. Azt az anyagot, amelyre egy enzim hat, ún szubsztrát. Egy enzim hatásának eredményeként nyert anyagot ún reakciótermék. Ezenkívül az enzimreakció sajátossága, hogy egy bizonyos enzim csak egy bizonyos szubsztrátra hat. Az enzimnek azt a tulajdonságát, hogy felismeri „saját” szubsztrátját, az ún affinitás.

Így minden enzim csak egy sajátos reakciót hajt végre. Nagyon sok enzim létezik a biológiai világban, valamint enzimatikus reakciók is. Az enzimes immunoassay-ben csak néhány enzimes reakciót alkalmaznak - legfeljebb 10-et. Ebben az esetben olyan enzimes reakciókat választottak, amelyek termékei színes anyagok. Miért kell az enzimreakció termékeit színezni? Mivel létezik egy egyszerű kémiai módszer egy anyag koncentrációjának kiszámítására színes oldatból - kolorimetria.

Kolorimetriás módszer - lényeg és elv

Kolorimetria az oldat színsűrűségének mérését használja, és a színsűrűségből számítja ki az anyag koncentrációját.Ebben az esetben egy speciális készülék - egy koloriméter - méri az oldat színsűrűségét. A kolorimetriában a színsűrűségnek az anyag koncentrációjától való függésének két változata lehetséges - ez közvetlenül arányos vagy fordítottan arányos függőség. Egyenesen arányos összefüggés esetén minél nagyobb az anyag koncentrációja, annál intenzívebb az oldat színsűrűsége. Fordítva arányos összefüggésben, minél nagyobb egy anyag koncentrációja, annál kisebb az oldat színsűrűsége. Technikailag ez így történik: több, ismert koncentrációjú anyag oldatot veszünk, megmérjük ezeknek az oldatoknak a sűrűségét, és ábrázoljuk a koncentráció színsűrűségtől való függésének grafikonját ( kalibrációs grafikon).

Ezután megmérjük az oldat színsűrűségét, melynek koncentrációját meghatározzuk, majd a kalibrációs grafikon szerint automatikusan megkeressük az oldat mért színsűrűségének szintjének megfelelő koncentrációértéket.

Az enzim immunoassay során leggyakrabban a következő enzimeket használják: peroxidáz, alkalikus foszfatáz, avidin.

Hogyan kombinálódnak az immunológiai és enzimatikus reakciók az enzim immunoassayben? Most magára az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatra térünk ki. Milyen lépéseket tartalmaz, és mi történik e reakciók során? Az enzim immunoassay az közvetlen és közvetett.

Közvetlen enzim immunoassay - a végrehajtás szakaszai

A közvetlen enzimes immunoassay során a kimutatott antigén elleni antitesteket specifikus jelöléssel kombinálva alkalmazzák. Ez a specifikus címke az enzimatikus reakció szubsztrátja.

Az antigének rögzítése a lyuk felületéhez és az antigén kötődése az antitesthez

Hogyan történik a közvetlen enzimes immunoassay? Biológiai anyagot vesznek (vér, nyálkahártya-kaparék, kenetek) és speciális lyukakba helyezik. A biológiai anyagot 15-30 percig a lyukakban hagyjuk, hogy az antigének a lyukak felületéhez tapadhassanak. Ezenkívül a kimutatott antigén elleni antitesteket hozzáadjuk ezekhez a mérőhelyekhez. Ez azt jelenti, hogy antigének, például szifilisz kimutatásakor a szifilisz antigének elleni antitesteket adják hozzá. Ezeket az antitesteket iparilag állítják elő, a laboratóriumok kész készleteket vásárolnak, ezt a tesztanyag és antitest keveréket egy ideig (30 perctől 4-5 óráig) hagyják, hogy az antitestek megtalálják „antigénjüket” és kötődjenek hozzá. minta antigéneket, annál több antitest kötődik hozzájuk.

Az "extra" antitestek eltávolítása

Amint jeleztük, az antitestek egy specifikus jelöléshez is kapcsolódnak, mivel az antitestek feleslegben kerülnek hozzáadásra, ezért nem mindegyik kötődik az antigénekhez, és ha egyáltalán nincs antigén a mintában, akkor ennek megfelelően egyetlen antitest sem kötődik. a kívánt antigénhez. Az "extra" antitestek eltávolítása érdekében a lyukak tartalmát egyszerűen kiöntik. Ennek eredményeként az összes "extra" antitest eltávolítódik, és azok, amelyek érintkezésbe kerültek az antigénekkel, megmaradnak, mivel az antigének "ragasztják" a lyukak felületét. A lyukakat többször öblítik egy speciális oldattal, amely lehetővé teszi az összes "extra" antitest kimosását.

Ezután kezdődik a második szakasz - az enzimatikus reakció. Az enzimet tartalmazó oldatot a mosott üregekbe adjuk, és 30-60 percig állni hagyjuk. Ez az enzim affinitással rendelkezik ahhoz az anyaghoz (specifikus jelölés), amelyhez az antitestek kötődnek. Az enzim olyan reakciót hajt végre, amelynek eredményeként ez a specifikus címke (szubsztrát) színes anyaggá (termékké) alakul. Ezután ennek a színes anyagnak a koncentrációját kolorimetriával határozzuk meg. Mivel ez a specifikus jelölés antitestekhez kapcsolódik, ez azt jelenti, hogy a színes reakciótermék koncentrációja megegyezik az antitestek koncentrációjával. És az antitestek koncentrációja megegyezik az antigének koncentrációjával. Így az elemzés eredményeként azt a választ kapjuk, hogy mekkora a kimutatott mikroba vagy hormon koncentrációja.

Így működik a közvetlen enzimes immunoassay. Az indirekt enzimes immunoassay-t azonban manapság gyakrabban alkalmazzák, mivel az indirekt módszer érzékenysége és pontossága nagyobb, mint a közvetlené. Tehát térjünk át az indirekt enzim immunoassay-re.

Indirekt enzim immunoassay - lépések

Az indirekt enzim immunoassay két szakaszból áll. Az első szakaszban a kimutatott antigének jelöletlen antitesteit, a második szakaszban pedig jelölt antitesteket használnak az első jelöletlen antitestek ellen. Vagyis nem az ellenanyagnak az antigénhez való közvetlen kötődését kapjuk, hanem kettős kontrollt: az antitestek kötődését az antigénhez, ami után a második antitest kötődik az antitest + antigén komplexhez. Az első szakaszban az antitestek általában egér, a második szakaszban pedig a kecske.

Az antigének rögzítése a lyuk felületén és az antigén kötődése jelöletlen antitesthez
A közvetlen enzim immunoassay mellett biológiai anyagot is vesznek - vért, kaparékot, kenetet. A vizsgált biológiai anyagot bevisszük a lyukakba, és 15-30 percig állni hagyjuk, hogy az antigének a lyukak felületéhez tapadjanak. Ezután az antigénekkel szembeni jelöletlen antitesteket adják a lyukakba, és hagyják egy ideig (1-5 órán át) állni, hogy az antitestek „a saját” antigénjeikhez kötődjenek, és immunkomplexet képezzenek ( első fázis). Ezt követően az „extra”, meg nem kötött antitesteket a lyukak tartalmának kiöntésével távolítják el. A mosást speciális oldattal végezzük, hogy teljesen eltávolítsuk az összes meg nem kötött antitestet.

Jelzett antitest kötődése antigénhez + jelöletlen antitest komplex
Ezt követően a második antitesteket veszik - jelölik, hozzáadják a lyukakba, és ismét hagyják egy ideig - 15-30 percig ( második fázis). Ez idő alatt a jelölt antitestek az első - nem jelölt - antitesthez kötődnek és komplexet képeznek - antitest + antitest + antigén. Azonban mind a jelölt, mind a jelöletlen antitesteket feleslegben adagoljuk a lyukakba. Ezért újra el kell távolítani azokat az „extra”, már jelölt antitesteket, amelyek nem kötődtek jelöletlen antitestekhez. Ehhez ismételje meg az eljárást a lyukak tartalmának öntéséhez és speciális oldattal történő mosásához.

Enzimatikus reakció - színes vegyület képződése
Ezt követően egy enzimet vezetnek be, amely végrehajtja a "címke" színes anyaggá alakításának reakcióját. A szín 5-30 percen belül kialakul. Ezután kolorimetriát végzünk, és kiszámítjuk a színezett anyag koncentrációját. Mivel a színes anyag koncentrációja megegyezik a jelölt antitestek koncentrációjával, a jelöltek koncentrációja pedig a jelöletlen antitestek koncentrációjával, ami viszont megegyezik az antigén koncentrációjával. Így megkapjuk a kimutatott antigén koncentrációját.
Egy ilyen kettős kontroll kétféle antitest felhasználásával lehetővé tette az enzim immunoassay módszer érzékenységének és specificitásának növelését. Az elemzési idő meghosszabbítása és további szakaszok beiktatása ellenére ezeket a veszteségeket az eredmény pontossága kompenzálja. Ez az oka annak, hogy jelenleg az enzimes immunoassay módszerek túlnyomó többsége indirekt enzim immunoassay.

Milyen betegségeket mutat ki az enzim immunoassay?

Térjünk át annak mérlegelésére, hogy milyen betegségeket és milyen biológiailag aktív anyagokat mutat ki az enzim immunoassay. Az enzim immunoassay-vel kimutatott anyagokat a táblázat tartalmazza.

Hormonok és a pajzsmirigybetegség markerei	tiroperoxidáz (TPO)
	tiroglobulin (TG)
	Pajzsmirigy-stimuláló hormon (TSH)
	Tiroxin (T4)
	Trijódtironin (T3)
	szabad tiroxin (T4)
	szabad trijódtironin (T3)
A reproduktív funkció diagnosztikája	luteinizáló hormon (LH)
	Follikulus stimuláló hormon (FSH)
	prolaktin
	Progeszteron
	Ösztradiol
	Tesztoszteron
	Kortizol
	Szteroidkötő globulin (SHB)
	Alfafetoprotein (AFP)
tumormarkerek	Korion gonadotropin (CG)
	Prosztata specifikus antigén (PSA)
	SA - 125
	SA - 19.9
	CYFRA-21-1
	M - 12 (SA - 15,3)
	MUC-1 (M-22)
	MUC1 (M–20)
	Alveomucin
	K - lánc
	L - lánc
	Tumor nekrózis faktor (TNFα)
	y - interferon
	Rák-embrionális antigén (CEA)
A fertőző betegségek diagnosztizálása

Az ELISA egy modern laboratóriumi vizsgálat, melynek során specifikus vér antitesteket (vagy antigéneket) keresnek bizonyos betegségekre, hogy ne csak az etiológiát, hanem a betegség stádiumát is azonosítsák.

1. specifikus antitestek keresése bármely fertőző betegség ellen;
2. bármely fertőző betegség antigénjének keresése;
3. a beteg hormonális állapotának vizsgálata;
4. autoimmun betegségek jelenlétének vizsgálata.

Mint minden laboratóriumi diagnosztikai módszernek, az ELISA-nak is megvannak a maga előnyei és hátrányai. A módszer előnyei a következők:

1. a módszer magas specifitása és érzékenysége (több mint 90%);
2. a betegség meghatározásának és a folyamat dinamikájának nyomon követésének képessége, vagyis az antitestek mennyiségének összehasonlítása különböző időintervallumokban;
3. a tanulmány elérhetősége és gyorsasága;
4. az anyagmintavétel non-invazív módszere nem tanulmány;

A módszer hátránya, hogy az elemzés során nem a betegség kórokozója, hanem csak az arra adott immunválasz (antitestek) azonosítható.

Az ELISA módszer lényege

Az ELISA többféle típusa létezik: direkt, indirekt, blokkoló módszer, kompetitív. A gyakorlatban azonban leggyakrabban heterogén szilárd fázisú immunoassay-t vagy ELISA-t alkalmaznak.

Az enzimkapcsolt immunszorbens assay alapja egy antigén és egy antitest immunreakciója immunkomplex kialakulásával, melynek eredményeként megváltozik az antitestek felületén lévő specifikus jelölések enzimatikus aktivitása.

Valójában ez a folyamat több szakaszra osztható:

1. a tesztrendszer üregeinek felületén egy bizonyos kórokozó tisztított antigénje található. Amikor az állat vérszérumát adják hozzá, specifikus reakció megy végbe ezen antigén és a kívánt antitest között;
2. továbbá speciális kromogént (peroxidázzal jelölt konjugátumot) adunk a lyukba. Enzimatikus reakció játszódik le, melynek eredményeként a tabletta mélyedésében színes anyag képződik. Színének intenzitása az állat szérumában található immunglobulinok (antitestek) mennyiségétől függ;
3. Ezután következik az eredmény értékelése. Többcsatornás spektrofotométer segítségével a vizsgált anyag optikai sűrűségét összehasonlítják a kontrollminták optikai sűrűségével, és az eredményeket matematikailag feldolgozzák. A páciensben lévő antitestek mennyisége közvetlenül függ az adott lyuk optikai sűrűségének magasságától.

Emlékeztetni kell arra, hogy minden tesztrendszerhez egyedi mutatókat dolgoznak ki, hogy figyelembe vegyék az eredményeket, a norma és a patológia mutatóit („referenciaértékek”). Ezt figyelembe kell venni az egyes konkrét vizsgálatok eredményeinek értékelésekor.

Nem helyes egy laboratórium eredményeit egy másik laboratórium "referenciaértékeiből" értelmezni. Ugyancsak helytelen a különböző laboratóriumok eredményeinek összehasonlítása egymással.

A specifikus fertőzések eredményeinek értékelésekor fontos a kimutatott antitestek osztálya és számuk. Nemcsak a fertőzés etiológiájának kérdése függ ettől, hanem a betegség várható stádiuma (akut, krónikus), valamint aktív fertőzés (akut vagy krónikus exacerbáció) jelenléte a vizsgálat időpontjában. .

Mi az antitestek megjelenésének hozzávetőleges ideje?

A legkorábbi antitestek az IgM. Egy esetleges fertőzés után 1-3 héttel kimutathatók, ami a fertőzéses folyamat akut fázisát jellemzi. Az IgM antitestek megjelenésének második helyzete egy krónikus folyamat súlyosbodása. Az IgM átlagosan körülbelül 3 hónapig kering, majd számuk fokozatosan eltűnik. Egyes betegeknél azonban a fertőzést követő 1-2 éven belül nyomokban IgM kimutatható.

A fertőzést követő 4. héttől kezdenek megjelenni az IgG antitestek. A legtöbb fertőzésben titerük fokozatosan emelkedik maximummal különböző időpontokban (átlagosan 1,5-2 hónap után), majd a titer alacsony szinten marad és immunitást jelez. Egyes betegségekben az IgG szintje nem magas.

Antitest kimutatási lehetőségek

• Az IgM antitestek izolált kimutatása primer fertőzésre utal.
• Az IgM és az IgG egyidejű kimutatása a vérben jellemző az előző 2-3 hónapos primer fertőzésre, valamint egy krónikus betegség súlyosbodása során.
• Az IgG izolált kimutatása egyaránt jelezheti a betegséggel szembeni immunitást és a krónikus fertőzést. A második helyzetben mind az antitestek mennyisége (titer), mind ennek a titernek az időbeli változása számít. A vizsgálatokat általában 2-4-6 hetes időközönként végzik.

Az ELISA analízis egy modern technika számos különböző betegség laboratóriumi diagnosztizálására. A rövidítés az enzim immunoassay rövidítése. A technika lényege az antitestek titerének (aktivitásának) meghatározása.

Az ELISA technika manapság egyre nagyobb népszerűségnek örvend. A klinikai gyógyászatban különféle patológiák diagnosztizálására, valamint olyan kísérleti vizsgálatokra használják, amelyek a vizsgált táptalajban a különböző vegyületek koncentrációjának pontos meghatározását igénylik.

Az ELISA technika elve

Az ELISA egy immunológiai reakció. Ez specifikus antitestek hozzáadásán alapul
vagy antigéneket a tesztközegbe (leggyakrabban a tesztvérbe), majd a keletkező antigén-antitest komplexek koncentrációjának enzimatikus meghatározásával. A komplex koncentrációjából meg lehet ítélni a vizsgálandó közegben lévő analit szintjét vagy aktivitását.

Az antigén-antitest komplexek koncentrációjának meghatározását általában speciális berendezéssel kromatográfiás módszerrel végzik.

A végrehajtás jelzései

Az ELISA elemzést különféle indikációkra végzik, a klinikai gyógyászatban a főbbek a következők:

• A túlnyomórészt szexuális úton terjedő fertőző patológia (STI) diagnosztizálása, amely magában foglalja a chlamydia, mycoplasmosis, ureaplasmosis, trichomoniasis, miközben kimutatják a fertőző ágens elleni specifikus antitesteket.
• Különböző lokalizációjú fertőző betegségek diagnosztizálása a kóros folyamat stádiumának meghatározására, elsősorban a parenterális vírusos hepatitis és a HIV diagnosztizálásának folyamatában.
• A hormonok koncentrációjának meghatározása az endokrin rendszer szerveinek (endokrin mirigyek) különféle patológiáinak diagnosztizálására.
• Különféle vegyületek meghatározása mérgezés, rovar- vagy kígyócsípés esetén a szervezet mérgezésének okának diagnosztizálására.

Ezekkel az orvosi indikációkkal ELISA vérvizsgálatot végeznek. Ezt a technikát a kísérleti gyógyászatban is aktívan használják különféle klinikai vizsgálatok során, új gyógyszerek, immunprofilaxis elleni vakcinák kifejlesztése során.

Hogyan történik a tanulmány

Az ELISA vérvizsgálatot speciális laboratóriumban végzik. Korábban a végrehajtáshoz vénás vért vettek, általában a cubitalis vénából 5-10 ml térfogatban, amelyet ezután a laboratóriumba küldenek. Átlagosan az elemzés eredménye már a következő napon megkapható, ami fontos pont a kezelés azonnali kijelöléséhez a betegség diagnózisának megállapítása után.

Hogyan készüljünk fel az ELISA-ra

Ahhoz, hogy az enzim immunoassay segítségével megbízható eredményeket kapjon, kövesse néhány egyszerű előkészítő ajánlást, amelyek magukban foglalják:

• A vizsgálat előtti napon abba kell hagynia a zsíros ételek (hús, füstölt hús) és az alkoholfogyasztást.
• A kutatáshoz szükséges anyagot reggel éhgyomorra kell bevenni.
• A vizsgálat napján kívánatos elkerülni a fizikai és pszicho-érzelmi stresszt.
• A vizsgálat előtt meg kell próbálnia nem dohányozni.

Az enzim immunoassay kapott hamis pozitív eredményének többsége az előkészítő ajánlások nem megfelelő végrehajtásának köszönhető. Ez a legtöbb esetben zsíros ételek fogyasztásával jár, ami a trigliceridek (zsírok) koncentrációjának növekedéséhez vezet a vérplazmában, ami csökkenti az ELISA specifitását.

Az eredmények megfejtése

Az ELISA-val végzett antitestek vérvizsgálatának 2 módosítása van - minőségi és mennyiségi meghatározás. Nál nél
az antitestek kvalitatív meghatározása, az eredmény lehet pozitív (antitestek kimutathatók, ami a fertőző ágens által okozott kóros folyamat esetleges jelenlétét jelzi) vagy negatív (nincs antitest, ami a fertőző folyamat hiányát jelzi).

Az antitestek hiánya nem mindig 100%-ban jelzi a fertőző folyamat hiányát. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy a fertőzés után az antitestek nem azonnal, hanem egy bizonyos ideig (legalább körülbelül 2 hétig) képződnek. Ezért a fertőzés hiányának megerősítésére az ELISA egy idő után megismételhető.

Kvantitatív ELISA-val meghatározzuk az antitestek titerét (aktivitását), valamint osztályukat. A legtöbb esetben a fertőző betegségek diagnosztizálására az IgG osztályba tartozó (immunglobulinok G) és IgM (immunglobulinok M) antitesteket határozzák meg, amelyek a fertőzés után különböző időközönként képződnek a szervezetben, így az elemzés eredményének megfejtése több jelentése:

• Az IgM aktivitás növekedése és az IgG hiánya a közelmúltban történt fertőzés és a fertőző folyamat akut lefolyásának bizonyítéka.
• Az IgM és IgG aktivitásának növekedése a fertőző folyamat súlyosbodása annak krónikus lefolyásában és hosszú távú fertőzésben.
• Az IgG magas aktivitása és az IgM hiánya a fertőző folyamat krónikus lefolyása egy régóta fennálló fertőzés hátterében, amely után több mint hat hónap telt el (az IgG osztályú antitestek képződéséhez szükséges idő).

Általánosságban elmondható, hogy az ELISA eredményeinek értelmezése minden fertőző folyamat esetében bizonyos jellemzőkkel rendelkezik. A fertőző betegség jelenlétének pontosabb meghatározását, valamint lefolyásának szakaszát orvos végzi el.

Az ELISA jelenleg a választott módszer a legtöbb fertőző betegség diagnosztizálására. Egy ilyen vizsgálat eredményei alapján az orvosnak lehetősége van pontos diagnózis felállítására és a kóros folyamat lefolyásának stádiumának meghatározására a későbbi megfelelő és hatékony kezelés előírása érdekében.

A modern diagnosztikai módszerek lehetővé teszik egy adott betegség laboratóriumi azonosítását speciális tesztek segítségével. Ezek egyikének tartalmaznia kell az enzim immunoassay-t, amelyen keresztül megerősítheti az előzetes diagnózist.

Az ELISA az egyik leghatékonyabb és legmodernebb módszer az immun- és hormonális kudarcokhoz kapcsolódó rendellenességek, valamint az onkológiai folyamatok kimutatására. A vérben végzett elemzés során olyan antitestek mutathatók ki, amelyek akkor képződnek, amikor a szervezetben fertőzés van. Tekintettel erre az árnyalatra, a betegség még a fejlődésének korai szakaszában is kimutatható.

Mi a módszertan alapja

Az ELISA analízis eredményei az enzimekre adott kémiai reakciókon alapulnak, amelyek speciális azonosító jelként szolgálnak az antitestek felismeréséhez. Ezért az immunkémiai reakciók során az antitestek kölcsönhatásba lépnek bizonyos antigénekkel. Mindez alapot ad annak állítására, hogy az ELISA-hoz való véradás során a hamis eredmények minimálisak.

A vizsgálat lehetővé teszi az immunsejtek számának, tulajdonságaik, valamint a szükséges antitestek jelenlétének meghatározását.

Pozitív eredményt akkor tekintünk, ha az oldat színét észleljük. A szín azt jelzi, hogy az antigének kölcsönhatásba lépnek az antitesttel. Abban az esetben, ha semmi ilyesmi nem történik, az eredmény negatív.

Enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA) végeznek a szervezet védő funkcióinak átfogó felmérésére. A vizsgálat során meghatározzák az immunsejtek számát és tulajdonságait, a szükséges antitestek jelenlétét. Az ELISA vérvizsgálatot fertőző, hematológiai, autoimmun betegségek, primer és másodlagos immunhiányos betegségek diagnosztizálására végezzük. Fontolja meg, mi az ELISA-val végzett vérvizsgálat, és milyen jelzések léteznek erre a vizsgálatra.

Ami

Az ELISA vérvizsgálat egy olyan laboratóriumi módszer, amely kimutatja az antitesteket vagy antigéneket a vérmintában. Ez a vizsgálat az immunglobulinok, immunológiai komplexek, hormonok szintjének kimutatására szolgál.

Az elemzés indikációi

Az ELISA vérvizsgálat kijelöléséhez a következő jelzések vannak:

• szexuális úton terjedő fertőzések diagnosztizálása - ureaplasma, mycoplasma, chlamydia, trichomonas, szifilisz;
• vírusos betegségek diagnosztizálása - citomegalovírus, herpesz, hepatitis, Epstein-Barr vírus;
• a hormonok szintjének meghatározása;
• onkológiai betegségek diagnosztizálása;
• az immunhiány meghatározása;
• allergiák diagnosztizálása;
• műtét előtti átfogó vizsgálat szervátültetés előtt;
• a terápia hatékonyságának értékelése.

A módszer elve

Az enzim immunoassay módszer működési elve a vérben lévő specifikus fehérje-antitestek - immunglobulinok - meghatározásán alapul. Az immunglobulinokat az emberi immunrendszer termeli, amikor az antigének (idegen mikroorganizmusok) belépnek a szervezetbe. Ezek az immunmolekulák a szervezetben számos fertőző ágenshez kötődnek, és semlegesítik azokat.

Az immunglobulinoknak van egy fontos jellemzőjük - a specifitás. Ennek köszönhetően kötődni tudnak egy specifikus antigénhez, antigén-antitest komplexet képezve. Az ELISA vérvizsgálat során ezt a komplexet határozzák meg minőségileg és mennyiségileg.

Az immunglobulinoknak öt osztálya van. De általában három osztályt határoznak meg - immunglobulinok A, M, G. Ezek az antitestek a fertőzés pillanatától különböző időpontokban halmozódnak fel a szervezetben.

• Immunglobulinok M osztály (IgM) a fertőzés pillanatától számított ötödik napon jelennek meg a vérben. 5-6 hétig vannak a szervezetben, majd eltűnnek a véráramból. Az IgM antitestek a betegség akut periódusát vagy a betegség súlyosbodását jelzik krónikus lefolyásában.
• Körülbelül 3-4 héttel a fertőzés után immunglobulinok jelennek meg a vérben G osztály (IgG). Az emberi vérben több hónapig vagy akár évekig is létezhetnek. Az ELISA vérvizsgálat dekódolása szerint, ha két, két héttel később egymás után vett vérmintában az IgG immunglobulinok mennyisége megemelkedik, az aktuális fertőzésről vagy újrafertőződésről beszél - ugyanazzal a fertőzéssel való újrafertőződésről.
• Immunglobulinok A osztály (IgA) fertőzést vagy fertőző betegség súlyosbodását követően 2-4 héttel kimutatható ezzel a kutatási módszerrel. Ezeknek mindössze 20%-a kering a vérben, a többit a nyálkahártyák választják ki. Az IgA antitestek a fertőző ágensek elpusztulása után 2-8 héttel eltűnnek a véráramból. Ezen immunglobulinok eltűnése a fertőzés gyógyulását jelenti. Ha a betegség vége után meghatározzák az IgA antitestek jelenlétét a vérben, akkor a betegség krónikus stádiumba került.

Felkészülés az elemzésre

Az emberi vért leggyakrabban ELISA vérvizsgálat elvégzésére használják. De meg lehet vizsgálni az üvegtest tartalmát, agy-gerincvelői folyadékot, magzatvizet is.

Kubitális vénából vérmintát vesznek a pácienstől kutatás céljából. Javasoljuk, hogy éhgyomorra adjon vért (legalább 12 órának kell eltelnie az utolsó étkezéstől számítva). Szükséges tájékoztatni az orvost, ha a beteg gyógyszereket szed, mivel ezek egy része megváltoztathatja az elemzés eredményét. A vizsgálat eredményeinek megbízhatóságát befolyásolja az alkohol- és drogfogyasztás.

Dekódolás

Ennek az analízisnek az eredmény formája pozitív (+) vagy negatív (-) eredményt jelez az immunglobulinok minden osztályára vonatkozóan.

Fontolja meg az ELISA vérvizsgálat lehetséges dekódolásának értelmezését.

• Az IgM, IgG, IgA negatív eredménye - a fertőzésekkel szembeni immunitás hiánya.
• Negatív IgM, IgA és pozitív IgG eredmény - fertőzés utáni vagy vakcinázás utáni immunitás.
• A negatív vagy pozitív IgG, IgA és pozitív IgM akut fertőzés.
• Az IgM, IgG, IgA pozitív eredménye egy krónikus fertőző betegség súlyosbodása.
• A negatív IgM eredmény és a negatív vagy pozitív IgG, IgA eredmény krónikus fertőzés.
• Negatív IgM eredmény és nincs IgG, IgA - felépülés.

A módszer előnyei

Az ELISA vérvizsgálatnak számos előnye van. A főbbek megkülönböztethetők:

• viszonylag nagy pontosság (érzékenység);
• a korai diagnózis lehetősége;
• a fertőző folyamat dinamikájának nyomon követésének képessége;
• magas szintű egységesítés, amely lehetővé teszi a tömeges felméréseket;
• az elemzés eredményének megszerzéséhez szükséges rövid idő;
• kényelem a munkában;
• az elemzés minden szakaszának automatizálása;
• viszonylag alacsony költséggel.

Hibák

Az ELISA módszer hátránya, hogy néha álnegatív vagy álpozitív eredményeket ad. A vizsgálat során fellépő technikai hibákon túlmenően a hamis eredmények oka lehet a páciens reumás faktora, krónikus betegségek jelenléte (amelyben antitestek termelődnek), anyagcserezavarok és bizonyos gyógyszerek szedése.

• ascariasis;
• trichinosis - az elemzést többször elvégzik, az antitestek maximális szintjét a fertőzés után 4-12 héttel határozzák meg;
• cysticercosis;
• taeniasis;
• fascioliasis - az antitesteket a betegség akut szakaszában határozzák meg;
• opisthorchiasis - differenciáldiagnózis elvégzése a betegség krónikus és akut formái között;
• giardiasis;
• zsigeri és bőr leishmaniasis;
• amőbiasis;
• toxoplazmózis.

4.2 4,20 az 5-ből (5 szavazat)