A HIV-fertőzés klinikai és laboratóriumi diagnosztikája három iránya van:

1. A HIV-fertőzés tényének megállapítása, HIV-fertőzés diagnosztizálása.
2. A betegség klinikai lefolyásának stádiumának meghatározása és a másodlagos betegségek azonosítása.
3. A betegség klinikai lefolyásának előrejelzése, a kezelés hatékonyságának és az antiretrovirális gyógyszerek mellékhatásainak laboratóriumi monitorozása.

1. HIV-fertőzés megállapítása, HIV-fertőzés diagnosztizálása

A HIV-fertőzés meghatározásához a következő specifikus mutatókat használják: HIV elleni antitestek, HIV antigének, HIV RNS és provírus DNS. A HIV elleni antitesteket enzim immunoassay (ELISA) vagy immunoblot módszerrel határozzák meg, amely lényegében az ELISA egyik típusa. A HIV antigénjeit (fehérjéit) ELISA-val határozzák meg. A polimeráz láncreakció (PNR) és a bDNS molekuláris genetikai módszerei segítségével lehetőség nyílik a HIV RNS és a provírus DNS meghatározására. A nukleinsavak specifikus DNS-próbákkal történő hibridizálásának további módszerének alkalmazása lehetővé teszi a PCR során kapott DNS-szekvenciák specifitásának ellenőrzését. A PCR érzékenysége - vírusgének kimutatása az ötezer sejt egyikében.

Az elsődleges fertőzés során a HIV-markerek következő dinamikája figyelhető meg a fertőzöttek vérében. Az első hónapban a replikációs folyamat aktiválódása következtében a vírusterhelés élesen megnövekszik (HIV RNS-tartalom a plazmában), majd a vírus terjedése és a célsejtek masszív fertőzése miatt a vérben és a nyirokben. csomópontok, lehetővé válik a provirális DNS meghatározása. Kiemelkedő diagnosztikai értékű a célsejt genomjába integrált provírus DNS kimutatásának ténye.

A vírusterhelés a fertőzött sejtekben a replikációs folyamat intenzitását tükrözi. Az elsődleges fertőzés időszakában a vírusterhelés mértéke különböző HIV-altípusokkal fertőzöttek esetén eltérő, de változásának dinamikája megközelítőleg azonos. Tehát, ha például B altípussal fertőzött, ha a fertőzést követő első hónapban a vírusterhelés értéke 700 kópia / ml, akkor a 2. hónapban 600-ra, a 3. hónapban 100-ra csökken. a 4. - 50 példány / ml-ig. Ez a dinamika a HIV-ellenes specifikus antitestek vérben történő növekedésének hátterében figyelhető meg. A HIV-fertőzött betegek vér mononukleáris sejtjeinek provirális DNS-tartalmát relatív állandóság jellemzi az első 6 hónapban, néhány altípusnál enyhe ingadozásokkal. Így az RNS és a DNS terhelése nem azonos.

Az inkubációs szakaszban egy ideig nem képződnek olyan specifikus HIV-ellenanyagok, amelyek elegendő mennyiségben a meglévő laboratóriumi módszerekkel meghatározhatók. Az antitestek kimutatása előtt nagyon rövid ideig megfigyelhető a replikációs folyamatot elnyomó Nef fehérje és a p24 szerkezeti fehérje megjelenése a vérben. A p24 antigén enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal már a fertőzés után 1-2 héttel kimutatható a vérből, és a 8. hétig meghatározható, majd tartalma meredeken csökken. Ezenkívül a HIV-fertőzés klinikai lefolyása során a vér p24-protein-tartalmának második emelkedése figyelhető meg. Az AIDS kialakulásának időszakára esik. A szabad (antitestekkel nem kötött) p24 magfehérjék eltűnése a vérben és a HIV-fehérjék elleni specifikus antitestek megjelenése jelzi a szerokonverzió kezdetét (9.6. ábra).

A virémia és az antigenemia az IgM osztályba tartozó specifikus antitestek képződését okozza (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). A p24 fehérje elleni IgM és IgG osztályú szabad antitestek már a 2. héttől megjelenhetnek, tartalmuk 2-4 héten belül megemelkedik, elér egy bizonyos szintet, amely hónapokig (IgM) és évekig (IgG) is megmarad (9.7. ábra). ).

A teljes szerokonverzió megjelenése, amikor a HIV p24, gp41, gp120, gp160 strukturális fehérjéivel szembeni IgG osztályú specifikus antitestek magas szintjét rögzítik a perifériás vérben, nagyban megkönnyíti a HIV-fertőzés diagnosztizálását. A HIV-ellenes antitestek a fertőzöttek 90-95% -ánál a fertőzést követő 3 hónapon belül, 5-9% -ánál - a fertőzés pillanatától számított 3-6 hónapos időszakban, 0,5-1% -ánál pedig később jelentkeznek.

Annak ellenére, hogy a HIV elleni antitestek utoljára jelennek meg, a fő laboratóriumi diagnosztikai indikátor eddig a specifikus antitestek ELISA és immunblot vizsgálata.

A 9.2. táblázatban bemutatott adatok [előadás] és 9.3 [előadás] , egyértelműen bizonyítják a modern ELISA tesztrendszerek nagy érzékenységét a HIV elleni antitestek kimutatásában, ami meghaladja az immunoblot érzékenységét. Egyes esetekben, amikor az ELISA elsődleges pozitív eredményt kap, csak 2-3 hét elteltével lehet megerősíteni immunblot-vizsgálattal.

A HIV-fertőzött (HIV-fertőzött) betegek vizsgálatakor a világ vezető vállalatainak immunblot tesztrendszerével minden esetben gp160 és p24/25 elleni antitestek, az esetek 38,8-93,3%-ában más fehérjék elleni antitestek mutathatók ki (1. táblázat). 9.4 [előadás] ).

Nehézségek az antitestek kimutatásában HIV-fertőzött betegeknél a masszív virémia és antigenemia időszakában, amikor a vérben meglévő specifikus antitestek vírusrészecskékhez kapcsolódnak, és a replikációs folyamat megelőzi az új antivirális antitestek termelését. Ez a helyzet a fertőzési folyamat során előfordulhat és elmúlik.

A kezdetben legyengült immunrendszerű betegeknél a virémia és az antigenemia korábban jelentkezik, és a betegség kimeneteléig magas szinten marad. Az ilyen betegekben alacsony a HIV-ellenes antitestek mennyisége, két okból kifolyólag - a B-limfociták elégtelen antitesttermelése, valamint a virionok és az oldható HIV-fehérjék általi antitestek kötődése, ezért a fertőzés meghatározásához fokozott érzékenységű tesztrendszereket kell végezni. vagy olyan elemzési módszerek módosítására van szükség, amelyek magukban foglalják az antitest immunkomplexekből történő felszabadulásának szakaszát.

Leggyakrabban a HIV-ellenes antitestek mennyiségének csökkenése a jelzett okok miatt a terminális szakaszban következik be, amikor a vágás szérumában lévő HIV-ellenes antitestek nem rögzíthetők sem enzimes immunológiai vizsgálati módszerekkel, sem immunoblot-vizsgálattal (Western blot). A HIV-ellenes specifikus antitestek megjelenése mellett az első 4 hónapban az immunválaszt a vér fertőzött CD4+-tartalmának csökkenése és a CD8+-sejtek számának növekedése jellemzi. Továbbá a CD4 és CD8 receptorokat hordozó sejtek tartalma stabilizálódik, és egy ideig változatlan marad. A CD8-limfociták tartalmának növekedése védőreakció, mert. sejtfüggő citotoxicitást a CD8+-limfociták valósítják meg, amelyek célja a HPV-fertőzött sejtek elpusztítása. Kezdetben a citotoxikus limfociták (CTL) reagálnak a vírus Nef szabályozó fehérjére, amely fontos szerepet játszik a HIV-fertőzött személy plazmájának vírus (RNS) terhelésének csökkentésében az első hónapokban. Ezután a CTL válasz kialakul másoknak, beleértve a a HIV strukturális fehérjéi, aminek következtében a fertőzés után 12 hónappal a cptotoxikus hatás jelentősen megnő.

Sémák a HIV-fertőzés laboratóriumi diagnosztizálására

Figyelembe véve a HIV-fertőzés specifikus markereinek adott dinamikáját, a gyakorlatban a felnőttek laboratóriumi diagnosztikájánál az alábbi sémákat célszerű betartani (9.8-9.10. ábra).

A sémák a HIV-fertőzés elsődleges laboratóriumi diagnózisának három fő szakaszát tükrözik:

1. Szűrés.
2. Referencia.
3. Szakértő.

A laboratóriumi diagnosztika több szakaszának szükségességét elsősorban gazdasági megfontolások indokolják. Így például egy szakértői vizsgálat költsége a hazai tesztrendszerekkel immunoblot segítségével akár 40 USD, a szűrés (ELISA-val) körülbelül 0,2, vagyis az arány 1:200.

Az első szakaszban (9.8. ábra) az alanyokat HIV-ellenes antitestekre tesztelik egy ELISA tesztrendszer segítségével, amelyet a vírus mindkét típusa – a HIV-1 és a HIV-2 – elleni antitestek kimutatására terveztek.

A gyártók a javasolt tesztrendszerekben víruslizátumot, rekombináns fehérjéket, szintetikus peptideket használnak antigén alapként. A HIV-antigén-determinánsok felsorolt ​​hordozói mindegyikének megvannak a maga előnyei és hátrányai. Ezért a megközelítőleg azonos költségű tesztrendszerek kiválasztásakor a legmagasabb érzékenységű (lehetőleg 100%) készleteket kell előnyben részesíteni. Az azonos költségű és érzékenységű tesztrendszerek közül célszerű a maximális specificitásúaknál elidőzni.

A víruslizátum alapján létrehozták az első tesztrendszereket a HIV-fertőzés laboratóriumi diagnosztizálására. Az 1980-as években az ilyen tesztrendszereket 100%-nál kisebb érzékenység és alacsony specificitás jellemezte, ami nagyszámú (legfeljebb 60%) hamis pozitív eredményben nyilvánult meg.

A virion limfocitatenyészetben történő képződése során a burok a külső membránból jön létre, és ezért tartalmazza az I. és II. osztályba tartozó fő hisztokompatibilitási komplex antigénjeit. Ez a körülmény álpozitív reakciókat okoz abban az esetben, ha hisztokompatibilitási alloantigének elleni antitestek vannak jelen a betegek vérében.

Később a vírus megszerzéséhez makrofágtenyészet alkalmazását javasolták, amelyben a vírusrészecskék főleg intracellulárisan, nem a sejt külső membránjából, hanem az endoplazmatikus retikulum membránjaiból bimbózva képződnek. Ez a technológia csökkentette a hamis pozitív eredmények számát.

A legfontosabb jellemzők - szenzitivitás és specificitás - tekintetében az egyik legjobbnak tartják az enzimes immunoassay-t, melynek részeként egy tisztított víruslizátum kombinációja szintetikus peptidekkel, amelyek a vírusfehérjék legantigén-szignifikánsabb régiói, ill. rekombináns fehérjéket használnak.

A tesztrendszer érzékenysége a készletek egyéb alkatrészeinek jellemzőitől is függ. Így az olyan konjugátumokat használó tesztrendszerek, amelyek nemcsak az IgG osztályba tartozó antitesteket, hanem az IgM-et és az IgA-t is felismerik, lehetővé teszik a szerokonverzió korábbi fázisának kimutatását. Ígéretesnek tűnik olyan tesztrendszerek alkalmazása, amelyek egyszerre képesek meghatározni a vírusellenes antitesteket és a p24 antigént, ami még korábbra teszi a HIV-fertőzés laboratóriumi diagnózisát.

A kezdeti pozitív eredményt újra kell ellenőrizni a minta ismételt vizsgálatával ugyanabban a vizsgálati rendszerben, de lehetőleg egy másik tételben és egy másik laboratóriumi asszisztens által. Ha a második vizsgálat során negatív eredmény születik, a vizsgálatot harmadik alkalommal kell elvégezni.

A pozitív eredmény megerősítése után kívánatos újból vért venni, és elsődlegesen megvizsgálni a HIV elleni antitestek jelenlétét. Az ismételt vérvétel segít megelőzni a csövek pontatlan címkézéséből és a beutalók kitöltéséből adódó hibákat.

A szűrési szakaszban pozitív szérumot két vagy három nagyon specifikus ELISA tesztrendszerrel végzett referenciavizsgálatokhoz küldik. Két pozitív eredmény esetén szakértői vizsgálatot végeznek immunblot módszerrel.

A HIV-1 és HIV-2 specifikus antitestek megkülönböztetésére alkalmas ELISA tesztrendszerek referenciadiagnosztikában történő alkalmazása megkönnyíti a további munkát, és lehetővé teszi a pozitív minta azonnali szakértői szakaszban történő vizsgálatát a megfelelő immunblot (HIV-) segítségével. 1 vagy HIV-2) .

A HIV-fertőzésről szóló laboratóriumi szakértői véleményt csak pozitív Western blot eredmény alapján adják ki. A szakértői diagnosztika során a HIV génjeinek és géntermékeinek nómenklatúráját kell használni, amelyet 1990-ben javasolt a WHO szakértői csoport (9.5. táblázat). [előadás] ).

Az immunbloton lévő sávok specifitását nagyon körültekintően és körültekintően kell értékelni, felhasználva a kísérleti minták vizsgálatával párhuzamosan végzett kontrollszérum (pozitív és negatív) vizsgálati eredményeit, valamint a jelöléssel ellátott immunoblot mintát. HIV-fehérjék (a gyártó által a tesztrendszerhez csatolva). A kapott eredmények értelmezését a vizsgálati rendszerhez mellékelt utasítások szerint kell elvégezni. Általános szabály, hogy a pozitivitás kritériuma az env gén által kódolt két fehérje (prekurzor, külső vagy transzmembrán) elleni antitestek kötelező jelenléte, valamint két másik strukturális HIV gén - gag és pol - termékei elleni antitestek lehetséges jelenléte. 9.6. táblázat [előadás] ).

Kétes eredmény elérése esetén az immunoblot-vizsgálat eredményeinek végső tisztázásához az ajánlások listáját kell használni (9.7. táblázat). [előadás] ).

Az AIDS Megelőzése és Ellenőrzése Orosz Tudományos és Módszertani Központja ajánlásai szerint pozitív eredménynek tekinthető a gp41, gp120, gp160 fehérjék legalább egyike elleni antitestek jelenléte, más specifikus HIV-vírus elleni antitestekkel kombinálva. 1 fehérjét vagy anélkül. Ezek az ajánlások a nozokomiális gócokból származó gyermekek szérumaival kapcsolatos tapasztalatokon alapulnak, amelyekben gyakran csak a vírusburok fehérjéinek egyikére mutattak ki antitesteket.

Az ELISA-ban szeropozitív kezdetben vizsgált betegek nagy része a perzisztens generalizált limfadenopathia (PGL) vagy a tünetmentes fázisba tartozik. Ezért egy immunbloton (nitrocellulóz csík, amelyen HIV-fehérjéket rögzítenek) általában a HIV-1 elleni antitestek következő kombinációját határozzák meg: az env gén által kódolt gp160, gp120 és gp41 burokfehérjék elleni antitestek, kombinálva a HIV-1 elleni antitestekkel. a p24 magfehérjék (a gag gén által kódolt fehérje nukleokapszid) és a p31/34 (a pol gén által kódolt endonukleáz).

A csak gag és/vagy pol fehérjékkel járó pozitív reakciók a szerokonverzió korai fázisában fordulhatnak elő, és HIV-2 által okozott fertőzésre vagy nem specifikus reakcióra is utalhatnak.

Ha megkérdőjelezhető eredmény születik, lehetőség van különböző módszertani technikák alkalmazására a HIV-fertőzés tényének tisztázására.

A műszaki lehetőségektől függően (diagnosztikai készletek és reagensek rendelkezésre állása, speciális felszereléssel ellátott berendezések és a személyzet képzése) a szakértői laboratórium további diagnosztikai vizsgálatokat végez (9.10. ábra).

Bizonyos esetekben célszerű molekuláris genetikai módszereket alkalmazni a HIV genetikai szekvenciájának meghatározására a szérumban, a vér limfocitáiban vagy a nyirokcsomó punkciókban. A PCR-rel kapott DNS-szekvenciák specifitásának ellenőrzése nukleinsavak specifikus DNS-próbákkal történő hibridizálásával végezhető el.

A radioimmunoprecipitációs (RIP) és az indirekt immunfluoreszcens (IFl) módszerek is használhatók a megkérdőjelezhető immunoblot eredményekkel rendelkező szérumok végső ellenőrzésére.

A HIV-RNS plazmában kvalitatív vagy kvantitatív módszerrel történő kimutatása nem jelentős a HIV-fertőzés diagnosztizálása szempontjából. Az ilyen eredményt standard módszerekkel, például immunblot-vizsgálattal kell megerősíteni 2-4 hónappal a kezdeti megkérdőjelezhető vagy negatív válasz beérkezése után.

A HIV izolálása sejtkultúrában a végső igazság. A módszer azonban összetett, költséges, és csak speciálisan felszerelt kutatólaboratóriumokban végzik.

A vér CD4+ sejttartalma nem specifikus indikátor, azonban vitatott esetekben (ELISA "+", immunoblot "-", HIV-fertőzés / AIDS klinikai tüneteinek jelenléte) iránymutatóként használható. szakértői döntés meghozatalához. Ha a laboratórium csak immunoblotot tud végezni, akkor az 1. táblázatban található ajánlásokat kell követni. 9.7. 9.9.

Azon személyeknél, akiknek a széruma megkérdőjelezhető (meghatározhatatlan) eredményt hozott, szakértői vizsgálatot végez, kivéve a csak p17 (HIV-1) vagy p16 (HIV-2) elleni antitestek kimutatását, 6 hónapon belül (3 hónap után) újra kell vizsgálni. Valódi HIV-fertőzés esetén 3-6 hónap elteltével "pozitív" tendencia figyelhető meg az antitestek spektrumában - további antitestek képződése a vírus más fehérjéi ellen. A hamis reakciót a kétértelmű immunblot mintázat hosszú ideig tartó fennmaradása vagy a gyanús sávok eltűnése jellemzi. Ha a meghatározott idő elteltével az ismételt immunoblot eredménye negatív vagy kétséges, akkor a HIV-fertőzéssel összefüggő kockázati tényezők, klinikai tünetek vagy egyéb tényezők hiányában a személy szeronegatívnak tekinthető a HIV-ellenes antitestek tekintetében. 1 és HIV-2.

A HIV-burok részét képező hisztokompatibilitás alloantigénjei elleni antitestek betegek vérében lévő álpozitív eredmények az immunbloton gp41 és gp31 szintjén sávok formájában jelennek meg. Az egyéb nem specifikus reakciók (például a p24-re, gyakran autoimmun folyamatokban szenvedő egyénekben előforduló) okai még nem tisztázottak.

Az ELISA tesztrendszerek gyártásának technológiájának fejlesztése lehetővé tette a magas érzékenység elérését - akár 99,99%, míg az immunoblot módszer érzékenysége 97%. Ezért a negatív immunblot-eredmény pozitív ELISA-eredményekkel jelezheti a szerokonverzió kezdeti időszakát, amelyet a specifikus antitestek alacsony szintje jellemez. Ezért a vizsgálatot 1,5-2 hónap elteltével meg kell ismételni, vagyis annyi idő után, ameddig a szerokonverzió befejeződik, hogy a vérben olyan specifikus antitestek koncentrációját érjük el, amely elegendő az immunoblot-vizsgálattal kimutatható.

A HIV-fertőzés laboratóriumi diagnosztizálásának referencia- vagy csak szűrési szakaszában a vizsgálat pozitív eredményét (eredményeit), azaz bármely enzim-immunoassay tesztrendszerben kapott pozitív eredményt, amelyet végül szakértői módszerekkel nem erősítenek meg, keresztezés jelenléteként értelmezik. -reaktív antitestek a vizsgált antitestek vérében. A keresztreaktivitás az antitesteknek a HIV-fehérjék vagy peptidek nem specifikus helyeihez való kötődésére utal, amelyeket antigénbázisként használnak a tesztrendszerben, amely pozitív eredményt ad.

Immunhiány és a HIV-fertőzés klinikai tüneteinek hiányában az ilyen személyeket szeronegatívnak tekintik a HIV-ellenes antitestek tekintetében, és törölni kell őket.

A HIV-fertőzés végső diagnózisát csak az összes klinikai, epidemiológiai és laboratóriumi adat alapján állapítják meg. Csak a kezelőorvosnak van joga tájékoztatni a beteget a HIV-fertőzés diagnózisáról.

A HIV-fertőzés megerősítő (szakértői) laboratóriumi diagnózisának fő módszere az immunoblot. Tekintettel azonban az ELISA-hoz képest alacsonyabb érzékenységére, számos kutató több tesztrendszer kombinációjának alkalmazását javasolta a HIV-ellenes specifikus antitestek jelenlétének végleges meghatározására. Például G. van der Groen és mtsai. az immunblot módszer alternatíváját javasolta a HIV-fertőzés laboratóriumi diagnózisának szűrési szakaszának pozitív eredményeinek ellenőrzésére. Ez magában foglalja az anyag párhuzamos tanulmányozását három tesztrendszerben, amelyek különböző módszereken alapulnak a HIV-ellenes specifikus antitestek kimutatására (az ELISA több változata, agglutinációs reakció) különböző természetű antigének felhasználásával. A szerzők a tesztrendszerek olyan kombinációit tudták kiválasztani, amelyek alkalmazása 100%-os szenzitivitást és specificitást biztosít az immunblot-vizsgálat eredményeivel összehasonlítva.

Ennek a szakértői diagnosztikai módszernek az alacsony költsége kétségtelen előny, azonban az információ hiánya arról, hogy a vírus mely specifikus fehérjéire van antitest a beteg vérében, nem teszi lehetővé minden egyes esetben a reakció specifitásának felmérését. mint az antitestek spektrumában bekövetkezett változások nyomon követése a szerokonverzió korai szakaszában.

A HIV-fertőzött anyáktól született gyermekek HIV-fertőzésének laboratóriumi diagnózisának megvannak a maga sajátosságai. A születés pillanatától kezdve hosszú ideig (akár 15 hónapig) az ilyen gyermekek vérében keringhetnek a HIV-ellenes anyai antitestek. Csak az IgG osztályba tartozó immunglobulinok hatolnak át a placenta gáton, ezért az IgM és IgA osztályú HPV-specifikus mupoglobulinok gyermekben történő kimutatása megerősítheti a fertőzést, de a negatív eredmény nem jelezheti a HIV hiányát.

Az 1 hónaposnál fiatalabb gyermekeknél még nincs HPV-replikáció, és a PCR az egyetlen igazolási módszer. A p24 antigén meghatározása 1 hónaposnál idősebb gyermekeknél szintén megerősítő módszer.

A HIV elleni antitestek hiánya újszülötteknél nem jelenti azt, hogy a vírus nem lépte át a placenta gáton. Mindenesetre a HIV-fertőzött anyák gyermekeit a születéstől számított 36 hónapig laboratóriumi diagnosztikai vizsgálatnak és megfigyelésnek vetik alá.

A HIV-fertőzés markereire vonatkozó laboratóriumi vizsgálatok eredményei gondos értelmezést igényelnek, és csak az epidemiológiai és klinikai felmérésekből származó adatokkal összefüggésben vehetők figyelembe. Másrészt meg kell jegyezni, hogy a modern módszerek nagy érzékenysége ellenére a negatív teszteredmények nem zárják ki teljesen a HIV-fertőzés jelenlétét. Ezért a negatív teszteredmény, például immunoblottal, csak úgy fogalmazható meg, hogy hiányzik a HIV-1 és HIV-2 elleni specifikus antitestek.

A HIV-fertőzés diagnosztizálása szeronegatív betegeknél

A HIV-fertőzés laboratóriumi diagnosztikájában használt tesztrendszerek minősége évről évre javul, érzékenységük nő. A HIV nagy variabilitása azonban új típusok megjelenéséhez vezethet, amelyek ellen a meglévő tesztrendszerek esetleg nem ismerik fel az antitesteket. Ezenkívül ismertek a gazdaszervezet immunrendszerének a vírusra adott atipikus humorális válaszreakciói. Tehát L. Montagnier 1996-ban két AIDS-es betegről számolt be, akiknél az elmúlt néhány évben nem mutattak ki specifikus antitesteket a vérben, a diagnózist klinikai adatok és laboratóriumi vizsgálatok alapján igazolták csak a HPV izolálásával. 1 sejttenyészetben. Ilyen esetekben alkalmazni kell a WHO ajánlásait, amelyek szerint a HIV-fertőzés klinikai diagnózisa felnőtteknél és gyermekeknél lehetséges a 12 AIDS-meghatározó betegség valamelyikének jelenlétében:

1. a nyelőcső, légcső, hörgők, tüdő candidiasisa;
2. extrapulmonális cryptococcosis;
3. több mint egy hónapig tartó kriptosporidiózis hasmenéssel;
4. bármely szerv citomegalovírus károsodása (a máj, a lép és a nyirokcsomók kivételével és ezen kívül 1 hónaposnál idősebb betegeknél):
5. a herpes simplex vírus által okozott fertőzés, amely több mint 1 hónapig fennáll egy hónapnál idősebb betegnél;
6. agyi limfóma 60 évnél fiatalabb betegeknél;
7. limfocitás intersticiális tüdőgyulladás 13 év alatti gyermekeknél;
8. a Mycobacterium avium intracellulare vagy M. Kansassii csoportba tartozó baktériumok által okozott disszeminált fertőzés;
9. pneumocystis tüdőgyulladás;
10. progresszív multifokális leukoencephalopathia;
11. a központi idegrendszer toxoplazmózisa 1 hónaposnál idősebb betegeknél.

E betegségek egyikének jelenléte lehetővé teszi a HIV-fertőzés diagnosztizálását a HIV-ellenes antitestek jelenlétére vonatkozó laboratóriumi vérvizsgálat hiányában, vagy akár szeronegatív eredmény esetén is.

Forrás: Orvosi laboratóriumi diagnosztika, programok és algoritmusok. Szerk. prof. Karpiscsenko A.I., Szentpétervár, Intermedica, 2001

Figyelem! Pozitív és kétséges reakciók esetén az eredmény kiadásának határideje 10 munkanapig meghosszabbítható.

HIV 1, 2 típusú, p 24 antigén elleni antitestek – a humán immundeficiencia vírus 1., 2. típusú humán immundeficiencia vírus (HIV) és p 24 antigénjének fertőzésére adott válaszként a szervezetben keletkezett specifikus antitestek vizsgálata.

HIV(humán immundeficiencia vírus) - a retrovírusok családjába tartozó vírus (lassú replikációjú vírus), amely megfertőzi az emberi immunrendszer sejtjeit (CD4, T-helpers), és szerzett immunhiányos szindrómát okoz.

A lappangási idő általában 3-6 hét. Ritka esetekben a HIV-ellenes antitestek kimutatása csak néhány hónappal a fertőzés után kezdődik. Koncentrációjuk szintje jelentősen csökkenhet a betegség terminális időszakában. Ritka esetekben a HIV-fertőzéssel szembeni antitestek hosszú időre eltűnhetnek.

Antigén p 24 HIV 1.2 típusú, a vérszérumban kimutatható, a betegség korai stádiumát jelzi. A fertőzés utáni első hetekben a vírus és a p24 antigén mennyisége a vérben gyorsan növekszik. Amint elkezdődik a HIV 1, 2 elleni antitestek termelődése, a p 24 antigén szintje csökkenni kezd.

A p24 antigén meghatározása lehetővé teszi a HIV-fertőzés diagnosztizálását a fertőzés korai szakaszában, még az antitestek termelődése előtt.

A HIV-1.2 vírus elleni antitestek és a p24 vírus antigénjének egyidejű kimutatása növeli a vizsgálat diagnosztikus értékét.

Ez a teszt kimutatja a HIV-1.2 elleni antitesteket, valamint a HIV-1.2 p24 antigénjét. Az elemzés lehetővé teszi a HIV-fertőzés korai szakaszában történő diagnosztizálását.

A fertőzés átvitelének módjai:

• szexuális;
• vérátömlesztés során;
• fertőzött anyától újszülöttig.

HIV fertőzés- hosszú és súlyos betegség, amelyet az emberi immunrendszer sejtjeinek károsodása kísér; ellene még nem dolgoztak ki hatékony kezelési módszereket és specifikus profilaxist (vakcinákat).

Az ember az immunhiányos vírus forrása. A vírus emberben magfolyadékból, méhnyakváladékból, limfocitákból, vérplazmából, agy-gerincvelői folyadékból, könnyekből, nyálból, vizeletből és anyatejből izolálható, de ezekben eltérő a vírus koncentrációja. A vírus legmagasabb koncentrációja a következő biológiai közegekben található: spermában, vérben, méhnyakváladékban.

A vírus fertőzött személyről nem fertőzött személyre való átvitelének módjai korlátozottak.

A HIV-fertőzés átvitelének módjai
Az immunhiányos vírus 3 átviteli módja van:

1. Szexuális mód - a leggyakoribb. A fertőzés védekezés nélküli szexuális érintkezés útján történik, míg a vírus a nyálkahártyán keresztül jut be a szervezetbe. Sebek a nyálkahártyán, sebek, gyulladások - növelik a fertőzés valószínűségét. A szexuális úton terjedő fertőzésekben szenvedőknél a fertőzés kockázata 2-5-ször nagyobb a fertőzött személlyel való érintkezés során. A vírus átviteléhez nem csak a kontaktus intimitása a fontos, hanem a kórokozó mennyisége is. A védekezés nélküli szex során egy nő körülbelül háromszor nagyobb valószínűséggel fertőződik meg a férfitól, mert a vírus nagyobb része jut be a szervezetébe, és a nőnek sokkal nagyobb felülete van, amelyen keresztül a vírus bejuthat a szervezetbe (hüvelynyálkahártya). A fertőzés kockázata anális szex esetén a legmagasabb, orális szex esetén a legkisebb.
2. A fertőzött személy vérével való érintkezés: a) közös tűk, fecskendők, gyógyszerkészítéshez szükséges eszközök, nem steril orvosi műszerek használatakor; b) olyan gyógyszerek bevezetése, amelyek elkészítéséhez vért használnak; c) fertőzött donorvér és az abból készült készítmények felhasználása, transzfúziója (a kockázat rendkívül alacsony, hiszen minden donort, a vért is gondosan ellenőriznek).
3. HIV-fertőzött anyától (függőleges úton) a magzatig terhesség alatt, a szülőcsatornán való áthaladáskor, szoptatás alatt.

Az AIDS a HIV-fertőzés végső szakasza
Az AIDS nem egyik napról a másikra alakul ki. Az immunhiányos vírus elleni antitestek jelenléte esetén a legtöbb embernél az AIDS klinikai tünetei 2-10 évig vagy tovább nem jelentkeznek, és sikeres kezelés esetén ez az időszak jelentősen megnő. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy kellően hosszú időbe telik a CD4 T-sejtek számának olyan szintre történő csökkentése, amelynél az immunrendszer legyengül.

A vírus más típusú sejteket is megfertőz, beleértve a központi idegrendszer sejtjeit, valamint a vörös- és fehérvérsejteket, amelyekben a vírus hosszú ideig "alvó" állapotban tűnik, mielőtt elkezdene aktívan szaporodni. A betegség progresszióját befolyásoló tényezők sokfélék: genetikai jellemzők, a vírus törzse, a beteg pszichés állapota, életkörülmények és mások.

A betegség lefolyása és a szakaszok időtartama attól is függ, hogy az illető részesül-e kezelésben, és ha igen, milyen gyógyszereket.

A HIV-fertőzés 4 szakasza

• Az inkubációs időszak („ablakperiódus”) a fertőzés pillanatától a vírus elleni antitestek (az immunrendszer védőfehérjéi) megjelenéséig az emberi vérben. Ebben az időszakban a fertőzés semmilyen módon nem jelentkezik, minden teszt negatív, de az ember már fertőző. A lappangási idő legfeljebb 3 hónapig tarthat (átlagosan 25 nap).
• Az elsődleges megnyilvánulások szakasza. Átlagosan 2-3 hétig tart, és a vírus mennyiségének éles növekedése jellemzi a vérben. Ezt az állapotot "szerokonverziós betegségnek" nevezik, mivel ekkor a vírus elleni antitestek olyan mennyiségben jelennek meg a vérben, amely elegendő ahhoz, hogy a vizsgálatok során kimutatható legyen. Ez az időszak a legtöbb embernél nem jelentkezik, 20-30%-ban azonban influenzaszerű jelenségek fordulhatnak elő: láz, nyirokcsomó-dagadás, fejfájás, torokfájás, rossz közérzet, fáradtság és izomfájdalom. Ez az állapot 2-4 hét után kezelés nélkül megszűnik.
• Tünetmentes időszak. A fertőzés elsődleges megnyilvánulásainak vége után jelentkezik, és kezelés hiányában átlagosan 10 évig tart. Ebben az időszakban az immunrendszer felveszi a harcot a vírussal az emberi szervezetben: fokozatosan növekszik a vírusrészecskék száma, és csökken az immunitás. Ennek a szakasznak a végére a fertőzött egyének nyirokcsomói megduzzadnak, éjszakai izzadásuk, általános rossz közérzetük van, és az emberben előforduló opportunista fertőzések első megnyilvánulásai, az immunrendszer erős gyengülésével járnak. Ezeket a fertőzéseket a minket körülvevő mikroorganizmusok okozzák, és egészséges emberekben nem okoznak fertőzést. A legyengült immunrendszer más betegségek, például rák kialakulásához is vezethet.
• Az AIDS a betegség utolsó szakasza, és számos betegség megjelenése jellemzi a szervezet immunrendszerének gyengülése miatt. Jellemzően a betegek CD4 T-száma nagyon alacsony; egy vagy több súlyos opportunista fertőzés (pneumocystis tüdőgyulladás, súlyos gombás fertőzés, tuberkulózis stb.), amelyek kezelés hiányában halált okoznak; onkológiai betegségek; encephalopathia (agykárosodás, demencia kialakulásával együtt).

A laboratóriumi diagnosztika fő módszere a vírus elleni antitestek kimutatása enzim immunoassay segítségével.

A humán immunhiányos vírus antigének és a vírus elleni antitestek jelenlétére vonatkozó laboratóriumi vizsgálat elvégzésének eljárását az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériumának rendeletei szigorúan szabályozzák, és a következőket tartalmazza:

• szűrési (szűrési) vizsgálat szakasza az enzim immunoassay (ELISA) módszerekkel, használatra jóváhagyva;
• verifikációs (megerősítő) vizsgálat immunoblot módszerrel a városi AIDS központ laboratóriumában.

Az ezzel a vírussal fertőzött anyáktól született gyermekek immunhiányos vírus jelenlétének laboratóriumi diagnosztizálása megvannak a maga sajátosságai. A vírus elleni anyai antitestek (Ig G osztály) a gyermekek vérében a születéstől számított 15 hónapig keringhetnek. A vírus elleni antitestek hiánya újszülötteknél nem jelenti azt, hogy a vírus nem lépte át a placenta gáton. Az immunhiány-vírussal fertőzött anyák gyermekeit a születést követő 36 hónapon belül laboratóriumi diagnosztikai vizsgálatnak vetik alá.

Amíg az immunblot pozitív eredményt nem kap, és ha a vizsgálat eredménye negatív, a személyt egészségesnek tekintik, és nem hajtanak végre vele járványellenes intézkedéseket.

Az immunhiányos vírus elleni antitestek vizsgálatának anyaga vénás vér, amelyet kívánatos éhgyomorra adni.

Természetesen a vírus jelenlétének vizsgálata minden ember önkéntes dolga. Az immunhiányos vírus hordozójának vizsgálata nem írható elő erőszakkal, a beteg beleegyezése nélkül. De meg kell értened, hogy minél hamarabb felállítják a helyes diagnózist, annál valószínűbb, hogy hosszú és teljes életet fogsz élni, még akkor is, ha a hordozója leszel.

Javallatok:

• duzzadt nyirokcsomók kettőnél több területen;
• leukopenia limfopéniával;
• éjjeli izzadás;
• ismeretlen okból hirtelen fogyás;
• több mint három hétig tartó hasmenés ismeretlen okból;
• ismeretlen eredetű láz;
• terhesség tervezése;
• preoperatív előkészítés, kórházi kezelés;
• a következő fertőzések vagy ezek kombinációinak kimutatása: tuberkulózis, manifeszt toxoplazmózis, gyakran visszatérő herpeszvírus fertőzés, belső szervek candidiasisa, ismételt herpesz-zoster neuralgia, mycoplasma, pneumocystis vagy legionella okozta tüdőgyulladás;
• Kaposi-szarkóma fiatal korban;
• alkalmi szex.

A HIV-fertőzés bejelentésének szabályai:
A kutatási kérelmek DNAOM-ba történő regisztrációja útlevél vagy azt helyettesítő okmány (migrációs kártya, ideiglenes tartózkodási hely szerinti regisztráció, szolgálati igazolvány, útlevél-irodai igazolás útlevél elvesztése esetén, regisztrációs kártya -tól) alapján történik. Egy hotel). A benyújtott dokumentumnak tartalmaznia kell az Orosz Föderáció területén történő ideiglenes vagy állandó regisztrációra vonatkozó információkat és egy fényképet. Útlevél (az azt helyettesítő dokumentum) hiányában a betegnek jogában áll anonim kérelmet benyújtani bioanyag szállítására. Anonim vizsgálattal a kérelemhez és az ügyféltől kapott bioanyagmintához olyan számot rendelünk, amelyet csak a beteg és a rendelést feladó egészségügyi személyzet ismer.

Az anonim módon végzett vizsgálatok eredményei nem adhatók be kórházi kezelésre, szakmai vizsgálatra, és nem kötöttek ORUIB regisztrációhoz.

Az eredmények értelmezése
A HIV 1/2 antitest teszt kvalitatív. Antitestek hiányában a válasz „negatív”. HIV-ellenes antitestek kimutatása esetén a vizsgálatot egy másik sorozatban megismételjük. Ha az enzim immunoassay pozitív eredményt ad meg, a mintát megerősítő immunblot módszerrel küldik vizsgálatra, amely a HIV diagnózisának "arany standardja".

Pozitív eredmény:

• HIV fertőzés;
• hamis pozitív eredmény ismételt vagy további vizsgálatokat igényel*;
• a vizsgálat nem tájékoztató jellegű a HIV-fertőzött anyáktól született 18 hónaposnál fiatalabb gyermekek esetében.

Negatív eredmény:

• nem fertőzött (az elemzés diagnosztikai feltételeit megfigyelték);
• a fertőzés lefolyásának szeronegatív változata (az antitestek későn termelődnek);
• az AIDS terminális stádiuma (a HIV elleni antitestek képződésének károsodása);
• a tanulmány nem tájékoztató jellegű (a diagnosztikai feltételek nem teljesülnek).

A HIV-fertőzöttek azonosításának jelentősége a fertőzés korai szakaszában annak köszönhető, hogy hatékonyabb epidemiológiai felmérésre van szükség, a szükséges megelőző intézkedések időben történő megszervezése a kapcsolattartók körében, valamint az antiretrovirális kezelés rövid ciklusának lehetséges alkalmazása. terápia a vírusterhelés csökkentése érdekében a betegség lefolyásának prognózisának javítása érdekében. A beteg időben történő tájékoztatása a fertőzésről segít csökkenteni a betegség átvitelének kockázatát és az adományozásban való esetleges részvételét.

A HIV-fertőzés diagnózisát a pozitív immunblot (IB) eredmény előtt a p24 antigén és/vagy HIV-nukleinsav kimutatása erősíti meg a páciens szérumában.

A p24 antigén meghatározása enzim immunoassay (ELISA) segítségével egyszerű és gazdaságos módszer a vírusfehérje jelenlétének kimutatására a páciens vérében a vírus intenzív replikációja miatt a fertőzést követő első hetekben. A p24 antigénteszt a rutin ELISA-berendezéssel rendelkező laboratóriumok számára elérhető. A vírusterhelés polimeráz láncreakciós módszerrel történő meghatározásához képest ez olcsóbb és munkaigényesebb. Annak ellenére, hogy a szeronegatív időszakban a fertőzés meghatározásának stratégiája ismert, ez a teszt eddig nem szerepelt a HIV diagnosztizálásának algoritmusában. Ismeretes, hogy a p24 kimutatásának legmagasabb százaléka a megkérdőjelezhető IB eredményekkel rendelkező szérumokban figyelhető meg. Kimutatták azonban, hogy a standard analitikai érzékenységi küszöbértékkel (10 pg/ml) rendelkező tesztrendszerek nem rendelkeznek elegendő diagnosztikai érzékenységgel és a kimutatott p24 prognosztikai jelentőségével ahhoz, hogy bekerüljenek a rutin diagnosztikai folyamatba. Ebben a tekintetben a p24 antigén fokozott analitikai érzékenységű tesztrendszerének kifejlesztése és megvalósítása nagy érdeklődésre tart számot.

A munka célja a HIV p24 antigén kimutatásának prognosztikai jelentőségének értékelése különböző analitikai érzékenységi küszöbértékekkel rendelkező tesztrendszerek segítségével megkérdőjelezhető IB eredményekkel rendelkező egyénekben.

A HIV-ellenes antitestek meghatározására IB-ben meghatározatlan eredménnyel rendelkező szérumok retrospektív vizsgálata során a 0,5 pg/ml analitikai érzékenységi küszöbértékkel rendelkező p24 antigén tesztrendszere a fertőzött betegek 50%-át mutatta ki, és tesztrendszert használtak. amely 8 pg / ml - 22,9%-ot észlel. Egy további reagenskészlet használata az immunkomplex elpusztításához lehetővé teszi a p24 antigén kimutatásának 55,3% -ra történő növelését. A HIV-fertőzés jelenlétének prognosztikai jelentősége a p24 antigén további vizsgálatával 91,7-96% volt. A HIV p24 antigén 0,5 pg/ml analitikai érzékenységű kiegészítő tesztjének bevezetése a HIV diagnosztikai algoritmusba lehetővé teszi a HIV diagnózisának megerősítését a betegség korai stádiumában az esetek legalább 13%-ában. határozatlan eredménnyel IB. (Lásd a cikket: Neshumaev D.A. et al. „A HIV p24 antigén kimutatásának prognosztikai jelentősége fokozott analitikai érzékenységű tesztrendszerekkel”).

"Klinikai laboratóriumi diagnosztika", 2009, 2. szám, p. 40-42.

Az AIDS olyan betegség, amelyben az emberi immunrendszer nem képes megvédeni a szervezetet az életveszélyes opportunista fertőzésektől és rákos megbetegedésektől. A HIV úgy fertőzi meg a T-limfocitákat, hogy a vírus DNS-ét beilleszti a fertőzött személy genomjába.

Anélkül, hogy antiretrovirális terápiát kapnának, a HIV-fertőzöttek 50%-a a fertőzés után 10 évvel AIDS-be fejlődik. A halál opportunista (az immunitás csökkenésében nyilvánul meg) fertőzések vagy rosszindulatú betegségek következtében következik be.

A HIV 1,2 antitestek általában a fertőzés után 12 héttel jelennek meg a szérumban, ritkán (az esetek 5-9%-ában) később.

A vérszérumban kimutatott p24 HIV 1.2 antigén a betegség korai stádiumát jelzi. A fertőzés utáni első hetekben a vírus és a p24 antigén mennyisége a vérben gyorsan növekszik. Amint elkezdődik a HIV 1.2 elleni antitestek termelődése, a p24 antigén szintje csökkenni kezd. A p24 antigén meghatározása lehetővé teszi a HIV-fertőzés diagnosztizálását a fertőzés korai szakaszában, még az antitestek termelődése előtt.

A HIV-1,2 vírus és a p24 antigén elleni antitestek egyidejű kimutatása növeli a vizsgálat diagnosztikus értékét.

• Szigorúan éhgyomorra (legalább 12 órával az utolsó étkezés után) a következő vizsgálatokat kell elvégezni:

Általános klinikai vérvizsgálat; a vércsoport és az Rh faktor meghatározása;

Biokémiai elemzések (glükóz, koleszterin, trigliceridek, AlAT, AsAT stb.);

A hemosztázis rendszer vizsgálata (APTT, protrombin, fibrinogén stb.);

Tumor markerek.