Bakteriológiai laboratóriumi vizsgálatok. Bakteriológiai laboratórium - laboratóriumok, paraklinikák

Bevezetés

Mint minden más tudomány általános része, az általános bakteriológia sem konkrét kérdésekkel (mondjuk az egyes baktériumfajok azonosításával) foglalkozik, hanem általában a problémákkal; módszertana lefedi azokat az alapvető eljárásokat, amelyeket széles körben alkalmaznak a legkülönfélébb laboratóriumi vizsgálatokban. Ennek a tanulmányi útmutatónak nem célja a mikroorganizmusok egyetlen csoportjának azonosítása sem. Ez a feladat a következő publikációkban - a magán- és egészségügyi mikrobiológiáról. A benne bemutatott módszerek azonban hasznosak lehetnek minden olyan területen, ahol baktériumokkal kell küzdeni, és gyakorlati problémákra is alkalmazhatók, beleértve a baktériumok izolálását és tipizálását.

A bakteriológia csak azután vált tudománygá, hogy olyan egyedi technikákat fejlesztettek ki, amelyek továbbra is befolyásolják és beszivárogják a később feltörekvő tudományterületeket, például a virológiát, az immunológiát és a molekuláris biológiát. Az R. Koch által kifejlesztett tisztatenyészetek felhasználási technikája és L. Pasteur által úttörő immunológiai reakciók és kémiai elemzések még ma sem veszítették el jelentőségét.

Az általános bakteriológia módszertana jelen kiadásban egy olyan konstrukció segítségével jelenik meg, amely az e tudományág standard tankönyveire jellemző. Az egyetemi mikrobiológia tantárgyakkal foglalkozó laboratóriumi műhelyektől eltérően azonban egyes fejezetekben részletesebben is bemutatásra kerül, és csak tájékoztató jellegű. Ez a struktúra figyelembe veszi a bakteriológusok és állategészségügyi szakértők képzésének és specializációjának sajátosságait. Az anyagot gyakran önkényesen mutatják be, így egyes módszereket többször is megemlítenek, kapcsolatuk bemutatásának vágya miatt.

bakteriológiai laboratórium

A bakteriológiai laboratóriumok, mint szerkezeti egységek a regionális, járási, járásközi állatorvosi laboratóriumok részeként, valamint övezeti állatorvosi laboratóriumok struktúrájában szerveződnek. Az egészségügyi és járványügyi felügyeleti központokban, fertőzőkórházakban, általános kórházakban, egyes szakkórházakban (például tuberkulózis, reumatológia, dermatovenereológia) és poliklinikákban is megszervezik őket. A bakteriológiai laboratóriumok speciális kutatóintézetek részét képezik. Bakteriológiai laboratóriumokat folyamatosan használnak a hús élelmiszer-alkalmassági minősítésének megerősítésére vagy megállapítására az ESS szerint.

A bakteriológiai laboratóriumok vizsgálati tárgyai a következők:

1. Kiválasztás a szervezetből: vizelet, széklet, köpet, genny, valamint vér, kóros és holttestek.

2. A külső környezet tárgyai: víz, levegő, talaj, leltári cikkekből származó kimosódások, takarmány, haszonállatok levágásából nyert technológiai alapanyagok.

3. Élelmiszeripari termékek, hús- és hústermékminták, tej és tejtermékek, amelyek élelmiszeripari célra való alkalmasságát értékelni kell.

Bakteriológiai laboratóriumi helyiségek és munkahelyi berendezések

A mikrobiológiai munka sajátossága megkívánja, hogy a laboratórium számára elkülönített helyiséget el kell különíteni a lakószobáktól, élelmiszer-blokkoktól és egyéb, nem alapvető ipari helyiségektől.

A bakteriológiai laboratórium a következőket tartalmazza: bakteriológiai kutatás laboratóriumi helyiségei és használati helyiségei; autokláv vagy sterilizálás a hulladékanyagok és a szennyezett edények fertőtlenítésére; mosogatás, mosogatáshoz felszerelt; bakteriológiai konyha - tápközegek előkészítésére, palackozására, sterilizálására és tárolására; Vivárium kísérleti állatok tartására; tartalék reagensek, edények, berendezések és háztartási felszerelések tárolására szolgáló anyagok.

A felsorolt ​​használati helyiségek, mint önálló szerkezeti egységek nagy bakteriológiai laboratóriumok részét képezik. Kislaboratóriumokban a bakteriológiai konyhát és a sterilizáló konyhát egy helyiségben egyesítik; nincs külön hely a kísérleti állatok tartására.

A személyzet veszélyeztetettségének mértéke szerint a mikrobiológiai laboratóriumok helyiségei 2 zónára oszthatók:

I. „Fertőző” terület - laboratóriumi helyiség vagy helyiségcsoport, ahol kórokozó biológiai ágenseket kezelnek és tárolnak, a személyzet megfelelő típusú védőruházatot visel.

II. "Tiszta" zóna - olyan helyiségek, ahol biológiai anyagokkal nem dolgoznak, a személyzet személyes ruházatban van.

A laboratóriumi helyiségek alatt, ahol minden bakteriológiai vizsgálatot végeznek, a legvilágosabb, tágasabb helyiségek vannak kiosztva. Ezekben a szobákban a padlótól 170 cm magasságban lévő falak világos színekre vannak festve olajfestékkel vagy csempével burkolva. A padlót relin vagy linóleum borítja. Ez a fajta felület lehetővé teszi fertőtlenítő oldatok használatát a helyiség tisztítása során.

Minden szobában legyen egy mosdó vízvezetékkel és egy polc egy üveg fertőtlenítő oldat számára.

Az egyik szobában egy üvegezett doboz van felszerelve - egy elszigetelt helyiség előszobával (elődoboz) az aszeptikus körülmények közötti munkavégzéshez. A dobozba termények asztalát, zsámolyt, baktériumölő lámpákat helyeztek el a munkahely fölé. Az előszobában egy szekrény van elhelyezve a steril anyagok tárolására. A "fertőző" zóna helyiségeinek ablakainak és ajtóinak légmentesnek kell lenniük. A „fertőző” területről származó elszívó szellőzést el kell szigetelni a többi szellőzőrendszertől, és finom légszűrőkkel kell felszerelni.

A laboratóriumi helyiség laboratóriumi típusú asztalokkal, szekrényekkel, polcokkal van felszerelve a munkavégzéshez szükséges eszközök, edények, festékek, reagensek tárolására.

A bakteriológus és a laboráns munkahelyének megfelelő megszervezése nagyon fontos a munkához. A laboratóriumi asztalok az ablakok közelében vannak felszerelve. Elhelyezésüknél törekedni kell arra, hogy a lámpa a dolgozó elé vagy oldalára essen, lehetőleg a bal oldalra, de semmi esetre se hátulról. Kívánatos, hogy az elemzéshez, különösen a mikroszkópiához szükséges helyiségek ablakai északi vagy északnyugati irányúak legyenek, mivel a munkához még szórt fényre is szükség van. A munkaasztalok felületének megvilágítása 500 lux legyen. A fertőtlenítés megkönnyítése érdekében a laboratóriumi asztalok felületét műanyaggal borítják, vagy vasalóval kárpitozzák. Minden laboratóriumi dolgozó külön 150x60 cm méretű munkahelyet kap.

Valamennyi munkahely fel van szerelve a napi bakteriológiai munkához szükséges eszközökkel, melyek listája az 1. táblázatban található.

Asztal 1.

A bakteriológiai munkához szükséges tárgyak

Termék név	Hozzávetőleges mennyiség
1. Festék- és reagenskészlet színezéshez
2. Diák	25-50
3. Takarja le a poharakat	25-50
4. Szemüvegek lyukakkal	5-10
5. Kémcsőtartó állvány
6. Bakteriális hurok
7. Üveg spatulák
8. Fém spatulák
9. Egy üveg pamut
10. 1, 2, 5, 10 ml-es beosztású pipetták	minden kötetből 25
11. Pasteur pipetták	25-50
12. Csipesz, olló, szike	1-től
13. Tartályok fertőtlenítő oldatokkal
14. Mikroszkóp megvilágítóval
15. Nagyító 5 ´
16. Vajas edény merülőolajjal
17. Szűrőpapír	3-5 lap
18. Egy üveg fertőtlenítő oldat pipettákhoz
19. Alkohol- vagy gázégő
20. Színező készítmények telepítése
21. Homokóra 1 vagy 2 percig	1-től
22. Körte gumicsővel
23. Ceruza üvegen
24. Egy tégely alkoholos törlőkendővel
25. Szükséges steril edények	-

Fertőtlenítés

A fertőtlenítés a mikroorganizmusok elpusztítása a környezeti tárgyakban.

A mikrobiológiai laboratóriumokban nagyon széles körben alkalmazzák a fertőtlenítő intézkedéseket. A fertőző anyaggal végzett munka befejezésekor a bakteriológiai laboratóriumok dolgozói megelőzően fertőtlenítik a kezet és a munkahelyet.

Az elhasznált kóros anyagot (ürülék, vizelet, köpet, különféle folyadékok, vér) fertőtlenítésnek vetik alá, mielőtt a csatornába dobnák.

A kóros anyaggal vagy mikrobakultúrával szennyezett graduált és Pasteur pipettákat, üveglapátokat és fémeszközöket használatuk után azonnal az asztalon elhelyezett fertőtlenítő oldattal ellátott üvegedényekbe engedik le.

A munkában felhasznált tárgylemezeket és fedőlemezeket is kötelező fertőtleníteni, hiszen még a rögzített és festett kenetben is időnként életképes mikroorganizmusok maradnak, amelyek laboratóriumon belüli szennyeződés forrásai lehetnek. Csak azokat az edényeket nem kezelik fertőtlenítőszerrel, amelyekben mikroorganizmusokat termesztettek. Fémtartályokba vagy bixekbe hajtogatják, lezárják és átadják autoklávozásra.

A fertőtlenítőszer megválasztását, oldatának koncentrációját, a fertőtlenítőszer és a fertőtlenítendő anyag mennyiségének arányát, valamint a fertőtlenítés időtartamát az adott körülmények függvényében határozzák meg, figyelembe véve először mindenekelőtt a fertőtlenítendő mikrobák stabilitása, a várható szennyeződés mértéke, az anyag összetétele és állaga, amelyben elhelyezkednek.

Kézfertőtlenítés a fertőző anyaggal végzett munka és a bőrrel való érintkezés után. A fertőző anyaggal végzett munka végén a kezet profilaktikusan fertőtlenítjük. Egy vattakorongot vagy gézruhát 1%-os klóramin-oldattal megnedvesítünk, először a bal, majd a jobb kezét töröljük le a következő sorrendben: kézhát, tenyérfelszín, ujjközi terek, körömágyak. Így először a legkevésbé szennyezett területeket kezelik, majd ezek továbbhaladnak a bőr legerősebben szennyezett területeire. Két egymás utáni pálcikával 2 percig törölgessen kezet. Ha a kezet kórokozó mikroba vagy kóros anyag tenyészetével szennyezik, először a bőr szennyezett területeit fertőtlenítik. Ebből a célból 3-5 percre 1%-os klóramin oldattal megnedvesített vattával letakarják, majd a gyapotot hulladékanyagot tartalmazó tartályba vagy vödörbe dobják, és a kezeket egy második pálcikával kezelik ugyanabban. úgy, mint a megelőző fertőtlenítés során. A klóraminnal végzett kezelés után kezet mosunk meleg vízzel és szappannal. Amikor spórákat képző baktériumokkal dolgozunk, a kezünket 1%-os aktivált klóraminnal kezeljük. Ha fertőző anyag kerül a kézre, a fertőtlenítőszer expozíciós ideje 5 percre nő.

Sterilizáció

A sterilizálás a fertőtlenítéssel ellentétben magában foglalja a sterilizált tárgyban lévő összes vegetatív és spóra, patogén és nem patogén mikroorganizmus elpusztítását. A sterilizálást különféle módokon hajtják végre: gőzzel, száraz forró levegővel, forralással, szűréssel stb. Az egyik vagy másik sterilizációs módszer kiválasztását a sterilizálandó tárgy mikroflórájának minősége és tulajdonságai határozzák meg.

Laboratóriumi eszközök előkészítése, sterilizálása

Sterilizálás előtt a laboratóriumi üvegedényeket kimossák és szárítják. A kémcsöveket, palackokat, palackokat, matracokat és lombikokat pamut-gézdugóval zárják le. Az egyes edények dugóit (kivéve a kémcsöveket) helyezze papírkupakokra.

A gumi-, parafa- és üvegdugókat az edény nyakára kötözött külön zacskóban sterilizálják. A Petri-csészéket papírba csomagolva sterilizáljuk, egyenként 1-10 darabot. Pasteur pipetta, 3-15 db. csomagolópapírba csomagolva. Mindegyik pipetta felső részébe egy darab vattát helyeznek, hogy az anyag ne kerüljön a környezetbe. A pipetták becsomagolásakor nagyon ügyelni kell arra, hogy a kapillárisok lezárt vége ne törjön le. Működés közben a pipettákat a felső végénél távolítják el a csomagolásból.

A beosztásos pipetták felső részébe biztonsági vattát helyeznek, mint a Pasteur pipettáknál, majd vastag papírba csomagolják, előre vágva 2-2,5 cm széles és 50-70 cm hosszú csíkokra A csíkot az asztalra helyezzük. , bal végét behajtjuk és rájuk tekerjük a pipetta hegyét, majd a pipettát forgatva tekerjünk rá papírszalagot. A papír kihajtásának megakadályozása érdekében a másik végét csavarják vagy ragasztják. A becsomagolt pipetta térfogata papírra van írva. Ha vannak esetek, beosztásos pipettákat sterilizálnak bennük.

Sterilizálja a laboratóriumi üvegedényeket

a) száraz hő 180°C-on, illetve 160°C-on 1 órán át, illetve 150 percig.

b) autoklávban 1,5 atm nyomáson. 60 percen belül, a spóra mikroflóra elpusztítására - 90 perc 2 atm.

A fecskendők sterilizálása. A fecskendőket szétszerelve sterilizáljuk: külön a hengert és a dugattyút 2%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldatban 30 percig. A spórás mikroflórával végzett munka során a sterilizálást autoklávban 132±2°C-on (2 atm.) 20 percig, 126±2°C-on (1,5 atm.) - 30 percig végezzük. A sterilizált fecskendőt lehűlés után összegyűjtjük, dugattyút helyezünk a hengerbe, tűt helyezünk rá, miután eltávolítjuk belőle a tüskét. A tűt, a hengert és a dugattyút csipesszel veszik, amelyeket fecskendővel együtt sterilizálnak.

Fémműszerek sterilizálása. A fémeszközöket (olló, szike, csipesz stb.) 2%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldatban sterilizálják, ami megakadályozza a rozsdásodást és az élesség elvesztését. Javasoljuk, hogy a szike és olló pengéit vattával tekerje be, mielőtt az oldatba merítené.

Bakteriális hurkok sterilizálása. A platina- vagy nikrómhuzalból készült bakteriális hurkokat alkohol- vagy gázégő lángjában sterilizálják. Ezt a sterilizálási módszert kalcinálásnak vagy lángolásnak nevezik.

A vízszintes helyzetben lévő hurok az égő lángjának alsó, leghidegebb részébe kerül, hogy az égett kórokozó anyag ne fröcsköljön ki. Kiégése után a hurkot függőleges helyzetbe helyezzük, először a huzal alsó, majd a felső részét vörösre melegítjük és a huroktartót elégetjük. A teljes gyújtás 5-7 másodpercet vesz igénybe.

Előkészítés papír, géz és pamut sterilizálására és sterilizálására. A vattát, gézet, szűrőpapírt száraz hőkemencében 160 ° C hőmérsékleten sterilizálják egy órán keresztül attól a pillanattól kezdve, hogy a hőmérsékletet hőmérővel jelzik, vagy autoklávban 1 atm nyomáson. 30 percen belül.

Sterilizálás előtt a papírt és a gézt darabokra vágják, és a vattát a kívánt méretű golyók vagy tamponok formájában feltekerik. Ezt követően minden anyagtípust külön-külön, egy vagy több darabot vastag papírba csomagolnak. Ha a csomagolás megsérül, a sterilizált anyagot újra sterilizálni kell, mivel a sterilitás sérül.

Kesztyűk és egyéb gumitermékek sterilizálása. A mikrobák vegetatív formájával szennyezett gumitermékeket (kesztyűk, tubusok stb.) 2%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldatban vagy átfolyó gőzben 30 percig forralva sterilizálják; ha spórás mikroflórával szennyezett, autoklávban 1,5-2 atm nyomáson. 30 vagy 20 percen belül. Sterilizálás előtt a gumikesztyűket kívül-belül megszórjuk talkummal, hogy megóvjuk a letapadást. A kesztyűk közé géz kerül. Minden pár kesztyűt külön-külön gézbe csomagolunk, és ebben a formában kerékpárokba helyezzük.

Patogén mikrobák tenyészeteinek sterilizálása. A további munkához nem szükséges mikrobatenyészetet tartalmazó kémcsöveket, csészéket fémtartályba helyezzük, a fedelet lezárjuk és átadjuk sterilizálásra. A patogén mikrobák, vegetatív formák tenyészeteit autoklávban 30 percig 1 atm nyomáson elpusztítják. A sterilizálásra szánt tartályok autoklávba szállítását egy erre kijelölt személy végzi átvétel ellenében. A sterilizálási módot egy speciális naplóban rögzítik. Az I. és II. patogenitási csoportba tartozó mikrobák tenyészeteinek, valamint az e csoportokhoz tartozó kórokozókkal fertőzött vagy fertőzésre gyanús anyagok megsemmisítésekor a hulladékanyagot tartalmazó tartályokat magas oldalú fémtálcákra helyezik át egy kísérő személy jelenlétében, fertőző anyagokkal dolgozhat.

A sterilizálás típusai

Sterilizálás forralással. A forralással történő sterilizálást sterilizátorban végezzük. Desztillált vizet öntünk a sterilizátorba, mivel a csapvíz vízkövet képez. (Az üvegtárgyakat hideg, a fémtárgyakat nátrium-hidrogén-karbonát hozzáadásával forró vízbe merítjük). A sterilizált tárgyakat alacsony lángon 30-60 percig főzzük. A sterilizálás kezdetének azt a pillanatot kell tekinteni, amikor a víz felforr a sterilizátorban. A forralás végén steril csipesszel veszik a műszereket, amelyeket a többi elemmel együtt felforralnak.

Száraz hő sterilizálás. A száraz hővel történő sterilizálást Pasteur kemencében végezzük. A sterilizálásra előkészített anyagot úgy helyezzük a polcokra, hogy ne érintkezzen a falakkal. A szekrény zárva van, és utána bekapcsolják a fűtést. A sterilizálás időtartama 150°C-on 2 óra, 165°C-on - 1 óra, 180°C-on - 40 perc, 200°C-on - 10-15 perc (170°C-on papír- és vattaforgatás sárga, és magasabb hőmérsékleten elszenesedett). A sterilizálás kezdete az a pillanat, amikor a sütő hőmérséklete eléri a kívánt magasságot. A sterilizálási időszak végén a sütőt kikapcsolják, de a szekrényajtókat nem nyitják ki, amíg teljesen ki nem hűltek, mivel a szekrénybe belépő hideg levegő repedéseket okozhat a forró edényeken.

Gőzsterilizálás nyomás alatt. A nyomás alatti gőzsterilizálást autoklávban végezzük. Az autokláv két egymásba helyezett kazánból, egy burkolatból és egy fedélből áll. A külső kazánt víz-gőz kamrának, a belsőt sterilizáló kamrának nevezik. A gőzt gőzkazánban állítják elő. A sterilizálandó anyagot a belső üstbe helyezzük. A sterilizáló vízforraló felső részén kis lyukak vannak, amelyeken keresztül a gőzkamrából származó gőz áthalad. Az autokláv fedele hermetikusan a házhoz van csavarozva. Az autoklávnak a felsorolt ​​főbb részeken kívül számos működését szabályozó alkatrésze van: nyomásmérő, vízmérő üveg, biztonsági szelep, kipufogó-, levegő- és kondenzvízcsapok. A nyomásmérő a sterilizáló kamrában keletkező nyomás meghatározására szolgál. A normál légköri nyomást (760 Hgmm. Art.) nullának vesszük, ezért az üresjárati autoklávban a nyomásmérő mutatója nullán áll. Van egy bizonyos kapcsolat a nyomásmérő leolvasása és a hőmérséklet között (2. táblázat).

2. táblázat.

A nyomásmérő leolvasásának és a víz forráspontjának aránya

A piros vonal a mérőskálán az autoklávban megengedett legnagyobb üzemi nyomást jelzi. A biztonsági szelep a túlzott nyomásképződés elleni védelemre szolgál. Előre meghatározott nyomásra van beállítva, vagyis arra a nyomásra, amelyen a sterilizálást végre kell hajtani, amikor a nyomásmérő nyila túlmegy a vonalon, az autokláv szelepe automatikusan kinyílik és kiengedi a felesleges gőzt, ezáltal lelassítja a nyomás további emelkedését. .

Az autokláv oldalfalán egy mérőüveg található, amely a gőzkazán vízszintjét mutatja. A vízmérő üveg csövére két vízszintes vonal van felhelyezve - az alsó és a felső, amelyek jelzik a vízgőz kamrában a megengedett alsó és felső vízszintet. A légcsapot úgy tervezték, hogy a sterilizálás kezdetén eltávolítsa a levegőt a sterilizáló és a víz-gőz kamrából, mivel a levegő, mivel rossz hővezető, megsérti a sterilizálási rendszert. Az autokláv alján egy kondenzációs csap található, amely a sterilizáló kamrát kiszabadítja a sterilizált anyag melegítése során keletkező kondenzátumból.

Autokláv szabályok. A munka megkezdése előtt ellenőrizze az autoklávot és a műszereket. Az automatikus gőzszabályozással rendelkező autoklávokban a vízgőzkamra elektrovákuum-manométerén lévő nyilak a sterilizálási módnak megfelelően vannak beállítva: az alsó nyíl 0,1 atm-re van állítva. alsó, felső - 0,1 atm. az üzemi nyomás felett a vízgőz kamra a mérőüveg felső jeléig vízzel van feltöltve. A vízzel való feltöltés ideje alatt a cső szelepét, amelyen keresztül a gőz belép a kamrába, nyitva tartják, hogy szabad levegő távozhasson a kazánból. Az autokláv sterilizáló kamrája meg van töltve a sterilizálandó anyaggal. Ezt követően az autokláv fedelét (vagy ajtaját) zárják, szorosan rögzítik központi zárral vagy csavarokkal; a torzulás elkerülése érdekében a csavarokat keresztben (átmérőben) csavarják be. Ezután kapcsolja be a fűtőforrást (villamos áram, gőz), zárja el a gőzforrást a sterilizáló kamrával összekötő cső szelepét. A párologtatás megkezdésével és a víz-gőz kamrában nyomás keletkezésével öblítést hajtanak végre (levegőt eltávolítanak a sterilizáló kazánból). A levegő eltávolításának módját az autokláv kialakítása határozza meg. Eleinte a levegő külön-külön adagokban távozik, majd egyenletes, folyamatos gőzáram jelenik meg, jelezve, hogy a levegő teljesen kiürült a sterilizáló kamrából. A levegő eltávolítása után a szelep záródik, és a sterilizáló kamrában fokozatosan megnövekszik a nyomás.

A sterilizálás kezdete az a pillanat, amikor a nyomásmérő mutatja a beállított nyomást. Ezt követően a fűtési intenzitás csökken, hogy az autoklávban a nyomás a szükséges ideig ugyanazon a szinten maradjon. A sterilizálási idő végén a melegítés leáll. Zárja el a sterilizáló kamrába gőzt szállító csővezeték szelepét, és nyissa ki a kondenzvízcső szelepét (lefelé), hogy csökkentse a kamrában lévő gőznyomást. Miután a nyomásmérő tű nullára süllyedt, lassan lazítsa meg a szorítóeszközöket, és nyissa ki az autokláv fedelét.

A sterilizálás hőmérsékletét és időtartamát a sterilizálandó anyag minősége és a fertőzött mikroorganizmusok tulajdonságai határozzák meg.

A sterilizáló kamrában a hőmérsékletet rendszeresen bakteriológiai tesztekkel szabályozzák. A bioteszteket a Központi Epidemiológiai Szolgálat bakteriológiai laboratóriumai készítik. Ha ezek a tesztek sikertelenek, az autokláv műszaki állapotát ellenőrzik.

Gőzsterilizálás. A folyékony gőzzel történő sterilizálást Koch folyadékgőz készülékben vagy lecsavart fedéllel és nyitott kiömlőcsappal rendelkező autoklávban végezzük. A Koch-készülék egy fém üreges henger, kettős fenékkel. A felső és az alsó alsó lemez közötti teret 2/3-ig feltöltjük vízzel (van egy csap a sterilizálás után visszamaradt víz leeresztéséhez). A készülék fedelének közepén egy lyuk van a hőmérő számára, és több kis lyuk a gőz távozásához. A sterilizálandó anyagot lazán töltik be a készülék kamrájába, hogy a lehető legnagyobb mértékben érintkezzen a gőzzel. A sterilizálás kezdete az az idő, amikor a víz felforr, és a gőz belép a sterilizáló kamrába. Folyékony gőzkészülékben főként tápközeget sterilizálnak, amelyek tulajdonságai 100°C feletti hőmérsékleten megváltoznak. Az áramló gőzzel történő sterilizálást meg kell ismételni, mivel egyetlen melegítés 100 ° C-on nem biztosítja a teljes fertőtlenítést. Ezt a módszert frakcionált sterilizálásnak nevezik: a sterilizált anyagot 3 napon keresztül naponta 30 percig áramló gőzzel kezelik. A sterilizálások közötti időközökben az anyagot szobahőmérsékleten tartják, hogy a spórák vegetatív formába csírázzanak, amelyek a későbbi melegítés során elhalnak.

Tindalizáció. A Tyndall a Tyndall által javasolt frakcionált sterilizálást jelenti 100 °C alatti hőmérsékleten. A sterilizálandó anyag melegítését termosztáttal ellátott vízfürdőben egy órán keresztül 60-65°C-on 5 napig, illetve 70-80°C-on 3 napig végezzük. A hevítések között a feldolgozott anyagot 25°C hőmérsékleten tartják, hogy a spórák vegetatív formába csírázzanak, amelyek a későbbi hevítések során elpusztulnak. A tindalizálást a fehérjét tartalmazó tápközeg dehidratálására használják.

Mechanikus sterilizálás bakteriális ultraszűrőkkel. Bakteriális szűrőket használnak a folyadék megszabadítására a benne lévő baktériumoktól, valamint a baktériumok elválasztására a vírusoktól, fágoktól és exotoxinoktól. A vírusokat a bakteriális szűrők nem tartják vissza, ezért az ultraszűrés nem tekinthető a szó elfogadott értelmében vett sterilizálásnak. Az ultraszűrők gyártásához finoman porózus anyagokat (kaolin, azbeszt, nitrocellulóz stb.) használnak, amelyek képesek megfogni a baktériumokat.

Az azbesztszűrők (Seitz-szűrők) 3-5 mm vastag és 35 és 140 mm átmérőjű azbesztlemezek kis és nagy térfogatú folyadékok szűrésére. Hazánkban az azbesztszűrőket két fokozatban gyártják: „F” (szűrő), lebegő részecskéket visszatartó, de áthaladó baktériumokat és „SF” (sterilizáló), sűrűbb, visszatartó baktériumokat. Használat előtt az azbesztszűrőket szűrőberendezésekbe szerelik, és velük együtt sterilizálják egy autoklávban. Az azbesztszűrőt egyszer használják. A membrán ultraszűrők nitrocellulózból készülnek, és 35 mm átmérőjű, 0,1 mm vastagságú fehér korongok.

A bakteriális szűrők pórusméretükben különböznek, és sorozatszámmal vannak jelölve (3. táblázat).

3. táblázat

Bakteriális szűrők

A membránszűrőket közvetlenül felhasználás előtt forralással sterilizálják. A szűrőket 50-60°C-ra melegített desztillált vízbe helyezzük, hogy ne csavarodjanak ki, 30 percig lassú tűzön forraljuk, 2-3-szor cserélve a vizet. A sterilizált szűrőket flambírozott és hűtött, sima hegyű csipesszel távolítják el a sterilizátorból a sérülések elkerülése érdekében.

A folyadékok szűrésére bakteriális szűrőket szerelnek fel speciális szűrőeszközökbe, különösen a Seitz szűrőbe.

2 részből áll: a felső, henger vagy tölcsér alakú, valamint a készülék alsó tartórésze, fémhálóból vagy tiszta kerámialapból készült úgynevezett szűrőasztallal, amelyen membrán vagy azbesztszűrő található. kerül elhelyezésre. A készülék alátámasztó része tölcsér alakú, amelynek elvékonyodó része a Bunsen-lombik nyakának gumidugójában található. Működőképes állapotban a készülék felső része csavarokkal van rögzítve az alsóhoz. A szűrés megkezdése előtt a berendezés különböző részeinek csomópontjait paraffinnal töltjük fel a tömítettség érdekében. A lombik kivezető csöve vastag falú gumicsővel csatlakozik vízsugárhoz, olaj- vagy kerékpárszivattyúhoz. Ezt követően a szűrt folyadékot a berendezés hengerébe vagy tölcsérébe öntik, és a szivattyút bekapcsolják, vákuumot hozva létre a fogadóedényben. A kialakuló nyomáskülönbség hatására a szűrt folyadék a szűrő pórusain keresztül a vevőbe jut. A mikroorganizmusok a szűrő felületén maradnak.

Kenetek készítése

A mikroorganizmusok színes formában történő tanulmányozásához egy üveglemezen kenetet készítenek, szárítják, rögzítik, majd megfestik.

A vizsgálandó anyagot vékony rétegben eloszlatjuk egy jól zsírtalanított tárgylemez felületén.

A keneteket mikrobakultúrákból, kóros anyagból (köpet, genny, vizelet, vér stb.) és a holttestek szerveiből készítik.

A kenetek készítésének technikáját a vizsgált anyag természete határozza meg.

Mikrobatenyészetekből folyékony tápközeggel és folyékony kóros anyagból (vizelet, agy-gerincvelői folyadék stb.) kenet készítése. A tesztfolyadék egy kis cseppjét bakteriális hurokkal egy tárgylemezre visszük, és a hurkokat körkörös mozdulatokkal egyenletes rétegben, egy fillér érme átmérőjű kör alakjában elosztjuk.

Vérkenetek készítése. Egy csepp vért csepegtetünk a tárgylemezre, közelebb annak egyik végéhez. A második - polírozott - üveget, amelynek keskenyebbnek kell lennie, mint a tárgyüveg, 45°-os szögben ráhelyezzük az elsőre, és a vércsepphez tesszük, amíg az nem érintkezik vele. Miután a vér szétterül a polírozott él mentén, az üveget jobbról balra csúsztatják, egyenletesen elosztva a vért vékony rétegben az üveg teljes felületén. Az ütés vastagsága az üvegek közötti szögtől függ: minél élesebb a szög, annál vékonyabb a körvonal. A megfelelően elkészített kenet halvány rózsaszín színű és végig azonos vastagságú.

Vastag csepp elkészítése. Pasteur pipettával egy csepp vért csepegtetünk a tárgylemez közepére, vagy az üveget közvetlenül a kiálló vércseppre. Az üvegre felvitt vért bakteriális hurokkal bekenjük úgy, hogy a kapott kenet átmérője egy fillér érme méretének feleljen meg. Az üveget vízszintes helyzetben kell hagyni, amíg a vér meg nem szárad. A "vastag csepp" vére egyenetlenül oszlik el, egyenetlen szélt képezve.

Kenet készítése viszkózus anyagból (köpet, genny). A keskeny széléhez közelebb eső üveglemezre lerakódott köpetet vagy gennyet egy másik üveglemez fedi le. A szemüvegek kissé egymáshoz vannak nyomva.

Ezt követően mindkét kéz 1 és 2 ujjával megfogják a poharak szabad végeit, és ellentétes irányba terítik szét, hogy mozgás közben mindkét pohár szorosan illeszkedjen egymáshoz. A keneteket egyenletesen elosztott anyaggal készítik, nagy területet elfoglalva.

Kenet készítése sűrű tápközeggel rendelkező tenyészetekből. Tiszta, jól zsírtalanított tárgylemez közepére csepp vizet csepegtetünk, abba egy baktériumhurkot vezetünk be a vizsgált mikrobatenyészet kis mennyiségével, így a folyadékcsepp enyhén zavarossá válik. Ezt követően a hurkon lévő mikrobiális anyag feleslegét lángban elégetjük, és a fenti módszer szerint elkészítjük a kenetet.

Kenet készítése szervekről és szövetekről. Fertőtlenítés céljából a szerv felületét csipesz felhevített ágaival cauterizálják, ezen a helyen bemetszést készítenek, majd hegyes ollóval a mélységből kis szövetdarabot vágnak ki, amelyet két üveglap közé helyeznek. . Ezután járjon el ugyanúgy, mint a gennyből és köpetből készült kenet elkészítésekor. Ha a szerv szövete sűrű, akkor a bemetszés mélységéből szikével kaparják le. A kaparással nyert anyagot szikével vagy bakteriális hurokkal vékony rétegben eloszlatjuk az üveg felületén.

A szövet elemeinek és a benne lévő mikroorganizmusok egymáshoz viszonyított helyzetének tanulmányozására keneteket készítenek. Ennek érdekében a szerv közepéről levágott kis szövetdarabot csipesszel befogjuk, és a vágott felülettel egymás után többször felvisszük a tárgylemezre, így kenet-lenyomat sorozatot kapunk.

Kenetek szárítása és rögzítése. Az üveglemezre készített kenetet levegőn szárítják, és a teljes száradás után rögzítik. Rögzítéskor a kenetet a tárgylemez felületére rögzítik, ezért a készítmény későbbi festése során a mikrobasejtek nem mosódnak le. Ráadásul az elölt mikrobasejtek jobban festődnek, mint az élők.

Megkülönböztetik a fizikai rögzítési módszert, amely a magas hőmérsékletnek a mikrobiális sejtre gyakorolt ​​hatásán alapul, és a kémiai módszerek között, amelyek során fehérje koagulációt okozó szereket használnak. Az I-II patogenitási csoportba tartozó kórokozókat tartalmazó keneteket a láng fölött nem lehet rögzíteni.

A rögzítés fizikai módja. A készítménnyel ellátott tárgylemezt csipesszel vagy a jobb kéz I-es és II-es ujjával a bordák mögé, felfelé húzással, sima mozdulattal 2-3-szor az égőláng felső része fölött veszik. A teljes rögzítési folyamat nem tarthat tovább 2 másodpercnél. A rögzítés megbízhatóságát a következő egyszerű technikával ellenőrizzük: az üveglemez kenettől mentes felületét a bal kéz hátsó felületére visszük fel. A kenet megfelelő rögzítésével az üvegnek forrónak kell lennie, de nem okozhat égési érzést.

Kémiai rögzítés. A 4. táblázatban látható vegyszereket és vegyületeket a kenetek rögzítésére is használják.

4. táblázat

Kémiai rögzítéshez használt anyagok

A megszáradt kenettel ellátott tárgylemezt fixálószeres palackba merítjük, majd levegőn megszárítjuk.

Színező vonások

Kenetfestési technika. A kenetek színezéséhez festékoldatokat vagy színezőpapírt használnak, amelyet A. I. javasolt. Kék. Az egyszerű előkészítés, a könnyű használat, valamint a színezőpapír korlátlan ideig történő tárolásának lehetősége volt az alapja a különféle színezési módszerekben való széles körű használatuknak.

Színező körvonalak színező papírral. A megszáradt és rögzített készítményre néhány csepp vizet csepegtetünk, 2x2 cm-es színes papírokat helyezünk, amelyekre a teljes festési idő alatt nedvesnek kell lennie, és szorosan illeszkednie kell az üvegfelülethez. Szárításkor a papírt még vízzel is megnedvesítik. A kenetfestés időtartamát a festési módszer határozza meg. A festés végén a papírt csipesszel óvatosan eltávolítjuk, a kenetet csapvízzel lemossuk és levegőn vagy szűrőpapíron megszárítjuk.

Kenetek festése festékoldatokkal. A megszáradt és rögzített készítményre pipettával olyan mennyiségben festéket viszünk fel, hogy az a teljes kenetet befedje. A kenetek koncentrált festékoldatokkal (Ziehl karbolikus fukszin, karbolikus encián vagy kristályibolya) történő festéskor a festést szűrőpapíron keresztül végezzük, amely visszatartja a festékrészecskéket: egy szűrőpapírcsíkot helyezünk egy rögzített kenetre, és festékoldatot öntünk rá. azt.

Mikroszkópos vizsgálathoz az előkészített, szárított és fixált keneteket megfestik. A színezés egyszerű és összetett. Az egyszerű színezés abból áll, hogy bármely festéket felvisz egy kenetre egy bizonyos ideig. Leggyakrabban alkohol-víz (1:10) Pfeiffer fukszint, Leffler-féle metilénkéket és szafranint használnak egyszerű színezéshez. Az eozint, mint savas festéket, csak a sejtek citoplazmájának festésére és a háttér színezésére használják. A savas fukszin teljesen alkalmatlan a baktériumok megfestésére.

fotó a lentachel.ru webhelyről

Alig száz évvel ezelőtt a tudományos kutatás során a fertőzést szinte elkerülhetetlennek tartották. Sok tudós kockáztatta testét a halálozással a mikrobák és baktériumok tanulmányozásával, amelyek természetét kevesen ismerték. Mára a minket körülvevő veszélyes mikroorganizmusok nagy részét leírták és tanulmányozták, sőt, léteznek olyan speciális orvosi eszközök is a bakteriológiai laboratóriumok számára, amelyek használata 99%-os valószínűséggel megvédi a kutatókat az esetleges szakmai kockázatoktól.

Minden olyan tárgy, amellyel a bakteriológiai laboratórium dolgozói dolgoznak, patogén mikroflórával telítettek. Az egészséges környezet fenntartása érdekében a helyiségben, a szennyezett anyagokkal való közvetlen érintkezés elkerülése érdekében fokozott védő- és antimikrobiális tulajdonságokkal rendelkező bútorokat, ruházati eszközöket és edényeket használnak.

A hermetikusan zárt üvegezett és fém szekrények és dobozok, a fertőtlenítésre, sterilizálásra és autoklávozásra alkalmas laboratóriumi asztalok, valamint a zárható hűtőszekrény olyan tárgyak, amelyek a fertőzött mintákon kutatók biztonságát biztosítják.

A minták tárolására használt összes edény: lombik, mérőpohár hermetikusan lezárva, hogy elkerüljük a baktériumok terjedését a laboratóriumi levegőben.

A tartályok gyártásához speciális törhetetlen üveget vagy nagy szilárdságú műanyagot használnak. A dupla falak, a speciális stabil fenékforma, a gumielemek a fedeleken, a tálcákon és a küvettákon a legjobb feltételeket teremtik a veszélyes szomszédok, például meningococcusok, streptococcusok, staphylococcusok, bacilusok és clostridiumok elkülönítéséhez.

A kutatás megkezdése előtt a személyzet speciális ruházatot vesz fel: védőköpenyt, maszkot, védőszemüveget. A nagyon veszélyes anyagokkal való munkavégzéshez gumírozott kötényeket vagy speciális, vízlepergető impregnálással ellátott köpenyt használnak.

A levegő megfelelő időben történő kezelése ultraibolya besugárzókkal és baktériumölő lámpákkal, a bevált mosási módosítások alkalmazása, minden dolgozó teljes körű védőruházattal való ellátása általánosan elfogadott szabvány, ettől való eltérés adminisztratív, súlyos következmények esetén pedig büntetőjogi felelősség. büntethető.

Az integrált eszközök és minden óvintézkedés végrehajtása segíti a munkavállalók egészségének megőrzését, a foglalkozási megbetegedések csökkentését, valamint a magas kutatási hatékonyságot: megfigyelhető, hogy a megbízható, bevált védőfelszerelések használata csökkenti a szorongást, elősegíti a gyorsabb és hatékonyabb cselekvést.

bakteriológiai laboratórium

A bakteriológiai laboratórium 1996-ban önálló alosztályként különült el.

Vezető - az orvostudomány kandidátusa, a legmagasabb kategóriájú bakteriológus Polikarpova Szvetlana Veniaminovna

KIEMELT TEVÉKENYSÉGI TERÜLETEK

A bakteriológiai laboratóriumban a következő típusú elemzéseket végzik:

A vér (hemokultúra) és a cerebrospinális folyadék bakteriológiai vizsgálata;
- a köpet, a légcső aspirátum, a hörgők lemosása bakteriológiai vizsgálata;
- különböző gócokból kivált gyulladások bakteriológiai vizsgálata: tonsillo-pharyngitis, otitis media, sinusitis stb.;
- pontok, effúziók, váladékok bakteriológiai vizsgálata;
- a garat és az orr nyálkahártyájának bakteriológiai vizsgálata feltételesen patogén mikroflóra kimutatására;
- a vizelet bakteriológiai vizsgálata a bakteriuria mértékének meghatározásával;
- a nemi szervek kisülésének bakteriológiai vizsgálata feltételesen patogén mikroflóra kimutatására;
- a leválasztható kötőhártya bakteriológiai vizsgálata;
- a széklet vizsgálata kórokozó bélflóra kimutatására;
- a széklet bakteriológiai vizsgálata dysbacteriosisra;
- az anyatej bakteriológiai vizsgálata;
- a B csoportú streptococcusok antigénjének kvalitatív meghatározása;
- az antigén minőségi meghatározása Helicobacter pylori emberi ürülékben;
- az A és B toxinok antigénjének minőségi meghatározása Clostridium difficile emberi ürülékben;
- izolált mikroorganizmusok antibiotikumokkal szembeni érzékenységének/rezisztenciájának értékelése.

EREDMÉNYEK

A bakteriológiai laboratóriumban a különböző bioanyagokból izolált patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok izolálására, azonosítására és antibiotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározására vizsgálatokat végeznek.

A laboratórium a klasszikus klinikai mikrobiológia elvei alapján új kutatási módszereket vezetett be, amelyek a molekuláris genetikai technológiák legújabb vívmányaira épülnek.

A bakteriológiai laboratórium a modern orosz és nemzetközi szabványoknak megfelelő mikrobiológiai vizsgálatokat végez.

Évente több mint 10 000 kórházi osztályokon hospitált beteg, 6 000 szülészeten 6 000 beteg és újszülött, a CDC és EAO poliklinikák több mint 5 000 betegének bakteriológiai vizsgálatát végzik el a laboratórium munkatársai, évente több mint 45 000 mikrobiológiai vizsgálatot.

A laboratórium bázisán fejlesztették ki és folyamatosan korszerűsítik a "Mikrobiológus, epidemiológus és kemoterapeuta automatizált munkahelye" két programot: MIKROBIOLÓGIAI MONITORING RENDSZER "MICROB" (CMM). A programok lehetővé teszik a kórház mikrobiológiai szolgálatának fő feladatainak megoldását: a mikrobiális táj és annak antibiotikum-rezisztencia szintjének folyamatos monitorozását a megfelelő antibiotikum terápia előírása érdekében, valamint az egészségügyi ellátással összefüggő fertőzések (HAI) időben történő felismerését.

A mikrobiológiai vizsgálatok megfelelő minőségének biztosítása érdekében a laboratórium munkájába a következők kerülnek be:

• Minőségirányítási rendszer a szabvány szerint GOST R ISO 15189-15

Orvosi laboratóriumok. A minőségre és a szakértelemre vonatkozó különleges követelmények”;

• Alapok Sovány technológiák (lean termelés) - a laboratóriumi menedzsment megközelítései, amelyek célja a munka minőségének javítása a veszteségek csökkentésével: anyagi, pénzügyi, ideiglenes;
• Rendszer 5S- a lean termelés eszköze - a munkaterület szervezése a műveletek elvégzésének optimális feltételeinek megteremtése, a rend, a tisztaság, a pontosság, az idő- és energiamegtakarítás érdekében.

A laboratórium 2014 óta vesz részt a Közép-Ázsia és Kelet-Európa országaiban zajló antibiotikum-rezisztencia ellenőrzését célzó nemzetközi programban, melynek szervezője. KI(UK NEQAS) A laboratórium szakértői laboratóriumként vesz részt a laboratóriumi kutatások külső minőségértékelésében a „Klinikai mikrobiológia” (FSVOK) szekcióban.

A bakteriológusok sok éven át folytatják a "Modern kutatási módszerek a klinikai mikrobiológiában" javítási ciklusait a moszkvai egészségügyi intézmény középfokú orvosi végzettséggel rendelkező alkalmazottainak kórháza alapján.

CSÚCSTECHNOLÓGIA

• Molekuláris genetikai módszerek bevezetése a fertőző betegségek diagnosztizálásában - a polimeráz láncreakció (PCR) módszere "valós időben";

• az antibakteriális gyógyszerekkel szembeni bakteriális rezisztencia kialakulásának és terjedésének fő mechanizmusainak meghatározása fenotípusos és genotípusos módszerekkel;

• immunkromatográfiás expressz módszerek (IMCT) alkalmazása a fertőző és gyulladásos betegségek kórokozóinak etiológiai diagnosztizálására;

• a bakteriológusok, kezelőorvosok, klinikai farmakológusok számára a mikroorganizmusok antimikrobiális gyógyszerekkel szembeni érzékenységének megállapításának eredményeinek értelmezésére és a rezisztencia mechanizmusok azonosítására szolgáló elektronikus szakértői modul létrehozása és megvalósítása.

TUDOMÁNYOS TEVÉKENYSÉG

Az egység fennállása alatt 2 Ph.D. disszertáció készült a laboratóriumban. A részleg munkatársai rendszeresen tartanak előadásokat nemzetközi, össz-oroszországi, városi kongresszusokon, konferenciákon, szimpóziumokon és szemináriumokon, rendszeresen publikálnak tudományos és gyakorlati kiadványokban.

A bakteriológiai laboratórium együttműködik:

• FSBI Szövetségi Epidemiológiai és Mikrobiológiai Kutatóközpont

őket. N. F. Gamaleya, az MZRF tiszteletbeli akadémikusa”;

• Az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériumának FGAU "Gyermekegészségügyi Tudományos Központja";
• Az Orosz Orvostudományi Akadémia "Orvosi Genetikai Kutatóközpont" Szövetségi Állami Költségvetési Tudományos Intézete;
• FBUN Roszpotrebnadzor Központi Epidemiológiai Kutatóintézete;
• FBUN Moszkvai Epidemiológiai és Mikrobiológiai Kutatóintézet. G. N. Gabrichevsky Roszpotrebnadzor;
• A.I. Evdokimov (MGMSU) Moszkvai Állami Orvosi és Fogorvosi Egyetem Reproduktív Orvostudományi és Sebészeti Tanszéke;

A tudományos munka a következő területeken folyik:

• az egészségügyi ellátással összefüggő fertőzések (HAI) mikrobiológiai diagnosztikája és megelőzése. Mikrobiökológia az egészségügyi intézményekben.
• az alsó légúti fertőzések mikrobiológiai diagnosztikájának jellemzői cisztás fibrózisban szenvedő betegeknél;
• az enterobaktériumok antimikrobiális gyógyszerekkel szembeni rezisztenciájának mechanizmusainak tanulmányozása;
• Algoritmusok kidolgozása a B csoportú streptococcusok hordozásának expressz diagnosztikájára terhes nőknél és újszülötteknél.

CIKKEK, KONFERENCIÁK

2016

LABORATÓRIUMI FELSZERELÉS

Jelenleg a bakteriológiai laboratórium modern berendezésekkel van felszerelve:

• Automata vérkultúra analizátor VersaTREK(TREK Diagnostic Systems) - a szepszis mielőbbi diagnosztizálásának képessége - a pozitív eredmények 90%-a már az első napon észlelhető. A kutatási protokoll maximális ideje 5
• Bakteriológiai analizátor mikroorganizmusok azonosítására és érzékenységi vizsgálatára Főnix 100(BD) - az azonosítási eredmény megszerzésének átlagos ideje 6-8 óra, az antimikrobiális érzékenységi eredmény megszerzésének átlagos ideje 12-16 óra.
• Félautomata analizátor iEMSolvasó(ThermoLabsystems), amely nemcsak a mikroorganizmusok érzékenységének azonosítását és meghatározását teszi lehetővé, hanem számos gyakorlati és tudományos probléma megoldását is lehetővé teszi: vizelet és egyéb bioanyagok mikrobiális szennyezettségének meghatározása, antibiotikum terápia hatékonyságának laboratóriumi ellenőrzése, felmérése. a vérszérum baktericid hatásának vizsgálatára, valamint a mikroorganizmusok növekedésének kinetikai modelljeinek vizsgálatára.

Az "ALISA" információs laboratóriumi rendszer bevezetésre került a laboratórium munkájába, a bakteriológus minden munkahelye számítógépes.

CSAPAT

Pivkina Nadezsda Vasziljevna

A legmagasabb kategóriájú orvos-bakteriológus, szakmai átképzéssel rendelkezik a "Bakteriológia" szakterületen. Tagja a Klinikai Mikrobiológusok és Antimikrobiális Kemoterapeuták Nemzetközi Szövetségének (IACMAC), tagja a Laboratóriumi Orvostudományi Szövetségnek (FLM). Számos tudományos cikk társszerzője a klinikai mikrobiológia problémáiról. Szakterületen szerzett szakmai tapasztalat 1992 óta.

Timofejeva Olga Gennadievna

A legmagasabb kategóriájú orvos-bakteriológus szakmai gyakorlatot végzett a "Bakteriológia" szakon, képesítést javító tanfolyamot végzett a "PCR elemzés klinikai diagnosztikai laboratóriumokban" témában. Tagja a Laboratóriumi Orvostudományi Szövetségnek (FLM). Jelenleg PhD disszertációján dolgozik. Publikációi vannak a klinikai mikrobiológia problémáiról. Szakterületen szerzett szakmai tapasztalat 1996 óta.

Bondarenko Natalja Alekszandrovna

Első kategóriás orvos-bakteriológus, a Laboratóriumi Orvostudományi Szövetség (FLM) tagja. Számos tudományos cikk társszerzője a klinikai mikrobiológia problémáiról. Szakterületen szerzett szakmai tapasztalat 1988 óta.

Balina Valeria Vladimirovna

Orvos-bakteriológus, klinikai laboratóriumi diagnosztika doktora. Szakmai gyakorlatot a „Klinikai laboratóriumi diagnosztika” szakon végzett, szakmai átképzést kapott a „Bakteriológia” szakterületen. Sikeres végzettségfejlesztés a "Molekuláris genetikai módszerek a fertőző betegségek diagnosztizálásában" témában. Tagja a Laboratóriumi Orvostudományi Szövetségnek (FLM). Szakterületen szerzett szakmai tapasztalat 2013 óta.

Ápoló személyzet

Laboratóriumi munka:

• 1 orvostechnológus
• 1 orvosi laboráns
• 5 laboratóriumi mentős
• 1 fő laboráns
• Minden alkalmazott rendelkezik a legmagasabb képesítési besorolással.

5/91. oldal

Bakteriológiai laboratóriumok a kórházakban és a poliklinikán, vagy azoktól függetlenül léteznek mikrobiológiai kutatásra. Beteg emberektől származó különféle anyagokat (köpet, vizelet, genny, ürülék, vér, agy-gerincvelői folyadék stb.) kapnak kutatásra. Ezen kívül vannak egészségügyi és bakteriológiai laboratóriumok is, amelyekben a víz, a levegő és az élelmiszertermékek bakteriológiai ellenőrzésnek vannak kitéve.
A bakteriológiai laboratóriumok szerepe a fertőző betegségek megelőzésében is nagy. Egyesek fertőző betegség (tífusz, vérhas, diftéria stb.) elszenvedése után továbbra is kórokozó (kórokozó) mikrobákat bocsátanak ki a környezetbe. Ezek az úgynevezett baktériumhordozók. Az egészséges emberek között is vannak baktériumhordozók. Az ilyen baktériumhordozók azonosításával a bakteriológiai laboratóriumok számos megelőző intézkedés végrehajtásában segítik az egészségügyi hatóságokat.
A kórokozó mikroorganizmusokkal szennyezett víz és élelmiszerek tífusz, kolera stb. járványokat (tömeges megbetegedések) okozhatnak, ezért is olyan fontos az ivóvíz, tej és egyéb termékek jó minőségének mindennapos egészségügyi és bakteriológiai ellenőrzése.
A bakteriológiai laboratóriumnak legalább három helyiséggel kell rendelkeznie: 1) egy kis helyiség - recepciós pult a vizsgálatok fogadására és kiadására; 2) tápközeg és mosás - tápközeg készítéséhez és edények mosásához; 3) bakteriológiai kutatásokat végző laboratórium. Kísérleti állatok tartására szolgáló helyiség (vivárium) kívánatos. Minden helyiségben legyen megfelelő bútorzat (konyhai és laboratóriumi asztalok, különféle szekrények, zsámolyok stb.).
Az alábbiakban felsoroljuk a napi laboratóriumi munkához szükséges legfontosabb elemeket. Használatuk célját, kezelési módjait, valamint a készülék működési elvét a kurzus vonatkozó részei ismertetik.
Optikai eszközök. Biológiai mikroszkóp merülő rendszerrel, nagyítókkal, agglutinoszkóppal.
Sterilizáláshoz és melegítéshez szükséges eszközök. Autokláv, folyékony gőzkészülék, sütő, Seitz szűrők, termosztátok, műszerek sterilizálói.
Berendezések főzési környezethez. Tölcsér forró szűréshez, tölcsér közeg öntéséhez, vízfürdő, különböző méretű serpenyők, súlyokkal kalibrált mérlegek, húsdaráló, fém és fa állványok a szűréshez.
Eszközök. Különféle formájú és méretű szikék: maszkok, egyenes, íves, tompa, bélrendszeri, anatómiai, sebészeti csipeszek, fecskendők.
üvegtárgyak. Üveglemezek, lyukkal ellátott üveglemezek, fedőlemezek, bakteriológiai kémcsövek, rövid kémcsövek szerológiai reakciókhoz (agglutináció), centrifugák, Heidepreich csészék*, üvegcsövek és rudak, 1, 2, 5, 10 ml-es beosztású pipetták, Pasteur pipetták , festékekhez pipettával ellátott üvegpalackok, különböző méretű üvegpoharak és lombikok, különböző méretű hengerek, tölcsérek szűréshez stb.

*A mai napig a legtöbb mikrobiológus és a tankönyvekben az izolált mikrobakolóniák előállítására szolgáló edényeket Petri-csészéknek nevezik, és nem Heidenreich-csészéknek, ami nem felel meg a dolgok valós állapotának. A csészéket először Heidenreich orosz mikrobiológus vezette be a laboratóriumi gyakorlatba.

Vegyes cikkek. Bakteriális hurok, platina drót, gumicsövek, kézi kürtmérleg súlyokkal, állványok (fa, fém) kémcsövekhez, hőmérők, ketrecek állatoknak, állatok rögzítésére szolgáló készülékek, centrifuga.
Vegyszerek, festékek, tápanyagok stb. Agar-agar, zselatin, fehér lapokban, immerziós olaj, szűrőpapír, nedvszívó és sima vatta, géz, etil-alkohol, anilin festékek (bíbor, encián és kristályibolya, vesuvin, metilén kék, neutralrot, szafranin stb.), Giemsa festék, savak (salétromsav, sósav, kénsav, karbolsav, foszforsav, pikrinsav, oxálsav stb.), lúgok (kálium-hidroxid, nátrium-hidroxid, ammónia, szóda), sók (kálium-nitrát) , kálium-permanganát kálium, nátrium-szulfit, nátrium-klorid stb.).

laboratóriumi asztal

A mikrobiológiai vizsgálat elvégzéséhez a laboránsnak megfelelően felszerelt munkahelyet kell biztosítani. A laboratóriumi asztalnak bizonyos magasságúnak kell lennie, hogy könnyen mikroszkóppal lehessen rajta ülni (9. ábra). Lehetőleg az asztalt linóleummal, minden munkahelyet horganyzott tálcával vagy tükörüveggel borítsuk be. A munkahelyet fel kell szerelni mikroszkóppal, kémcsövek és festékek állványaival, platina hurokkal és tűvel a tenyészetekhez, híddal ellátott csészével a készítményekhez, alátéttel, homokórával, tárgylemezekkel és fedőlemezekkel, pipettákkal, festékkészlettel, szűrőpapír, alkoholos vagy gázégő és fertőtlenítő oldattal (lizol, karbolsav, szublimát, klóramin vagy lizoform) ellátott tégely, ahová fertőtlenítéshez mártják a használt tárgylemezeket és fedőlemezeket, pipettákat, üvegrudakat stb.. Edények, amelyekben mikrobák termesztettek nem fertőtleníthetők vegyszerekkel. Az ilyen edényeken lévő fertőtlenítőszerek nyomai alkalmatlanná teszik azokat a mikroorganizmusok szaporodására és szaporodására. Használat után az edényeket fémtartályokba vagy fedővel ellátott vödrökbe teszik, lezárják és autoklávban sterilizálják. A kis szerszámokat (csipesz, szike, olló) használat után sterilizálóba helyezzük és 30-60 percig forraljuk, vagy 30-60 percre 3-5%-os klóramin-karbolos szappanos oldatba merítjük.

Rizs. 9. Bakteriológiai tárgyak mikroszkópos vizsgálatának technikája.

A munkahelyet teljesen tisztán kell tartani. Elfogadhatatlan, hogy az asztal a vizsgált fertőző anyaggal (vizelet, széklet, genny stb.) legyen szennyezett. Utóbbi esetben az asztalról fertőző anyag kerülhet más környező tárgyakra, és akkor lehetséges a laboratóriumon belüli fertőzés. A munka befejezése után a laboránsnak rendbe kell tennie azt a munkahelyet, amelyért felelős, és a munkahelyi üveget megelőzés céljából 5%-os karbolsav- vagy klóraminoldattal megnedvesített vattadarabbal törölje át.

Laboratóriumi munka és magatartás szabályai

Fertőző anyaggal végzett munka során a laboratóriumi dolgozóknak tisztában kell lenniük azzal a lehetőséggel, hogy saját maguk is megfertőződhetnek, és egy fertőző betegséget családra, lakásra stb. átvihetnek. Ezért munkájuk során figyelmesnek, körültekintőnek, rendezettnek és pedánsnak kell lenniük.
A laboratóriumi munka során a következő szabályokat kell betartani:

1. A laboratóriumban való tartózkodáshoz, és még inkább a munkához pongyolát és sálat vagy sapkát kell viselnie.
2. Feleslegesen ne költözzön egyik laborhelyiségből a másikba, és csak a kijelölt munkahelyet és eszközöket használja.
3. Ne egyen és ne dohányozzon a laboratóriumban.
4. Fertőző anyagokkal és élő tenyészetekkel végzett munka során használja a megfelelő eszközöket: csipeszt, kampót, spatulát és egyéb olyan tárgyakat, amelyek használatuk után megsemmisülnek vagy semlegesíthetők (égő lángon égetve, forralva stb.). Folyékony fertőzőanyagot pipettákba szívni ne szájjal, hanem hengerek, körte segítségével, fertőző anyaggal ellátott folyadékot öntsünk egyik edényből a másikba csak minden olyan edény fölé (tálca, medence), amelybe a fertőtlenítő folyadékot öntjük (karbolsav oldat sav, lizol) . Az oltásokat és a szubkultúrákat úgy kell elvégezni, hogy égő kémcsöveket, spatulákat, platinahurkokat, pipettákat stb. égetünk égő lángján.
5. Ha az edények eltörnek, vagy fertőző anyagot tartalmazó folyadék vagy élő tenyészet kiömlött, haladéktalanul fertőtlenítse a szennyezett munkahelyet, ruhát és kezet a lehető legalaposabb módon. Mindezt a laboratórium vezetőjének jelenlétében vagy felügyelete mellett kell megtenni, akit azonnal értesíteni kell a balesetről.
6. Minden használt és szükségtelen tárgyat és anyagot lehetőség szerint meg kell semmisíteni (legjobb elégetéssel, vagy gondosan sterilizálóba vagy fertőtlenítő folyadékba dobni).

Gyűjtse össze az összes fertőtlenítendő tárgyat a laboratóriumon belül speciális gyűjtőkbe, tartályokba, fedelű vödrökbe stb., majd zárva helyezze át egy autoklávba, ahol még aznap fertőtleníthető. A fertőző anyag autoklávba szállítását és sterilizálását a speciálisan kijelölt felelős laboratóriumi dolgozóknak kell felügyelnie.

1. Tartsa be a szigorú tisztaságot és rendet. A lehető leggyakrabban fertőtlenítsen és mosson kezet munkanapokon és munkavégzés után.
2. A laboratóriumi dolgozók kötelező védőoltásban részesülnek a súlyosabb fertőző betegségek (elsősorban a bélrendszeri betegségek) ellen.
3. Minden élő tenyészetről és fertőzött állatról kötelező napi mennyiségi elszámolást végezni speciális folyóiratokba és számviteli könyvekbe történő bejegyzéssel.
4. Munkavégzés után minden, a további munkához szükséges anyagot és kultúrát zárható hűtőben vagy széfben kell hagyni, és a munkahelyet teljes rendbe kell tenni.
5. A laboratórium helyiségeinek napi alapos tisztítását nedves módszerrel, fertőtlenítő folyadékkal kell végezni.

A különböző baktériumok jelenléte a belekben normálisnak tekinthető. Ezek a baktériumok részt vesznek a feldolgozási folyamatokban, valamint az élelmiszerek asszimilációjában. A bél megfelelő emésztését és működését a széklet bizonyítja, amely apró, szerkezet nélküli részecskékből, úgynevezett törmelékből áll.

A széklet mikrobiális összetételének tanulmányozására tartályelemzést végeznek. Ha a baktériumok száma megnövekszik, akkor az embernek bélrendszeri patológiái vannak, más jellegű hasi fájdalmak, emésztetlen ételdarabok jelennek meg a székletben. Ez a tanulmány lehetővé teszi számos betegség kórokozójának azonosítását.

A bélbaktériumok osztályozása

Részletes tanulmányozás után azonban a következő csoportokba sorolják őket:

1. Egészséges baktériumok: lakto- és bifidobaktériumok, eschecheria. Ezek a mikroorganizmusok aktiválják a belek működését.
2. Feltételesen patogén: enterococcusok, candida, clostridia, staphylococcusok. Ezek a mikroorganizmusok bizonyos körülmények hatására kórokozóvá válnak, és képesek különféle patológiák kialakulását kiváltani.
3. Kórokozó: coli, klebsiella, proteus, salmonella, shingella, sarcins. Ez a baktériumcsoport súlyos betegségek kialakulását provokálja.

Különféle módszerek léteznek a széklet vizsgálatára. Az egyik leggyakoribb módszer a bakanalízis.

Mi az a székletelemző tartály?

A széklet bakteriológiai vizsgálata lehetővé teszi a mikrobiális összetétel tanulmányozását, valamint a későbbi betegségek kórokozóinak jelenlétének meghatározását:

• Shigellosis;
• vérhas;
• szalmonellózis;
• tífusz;
• kolera és más betegségek.

A tartály székletelemzése meglehetősen hosszú időt vesz igénybe. A vizsgálatot az antibiotikum-terápia kijelölése előtt végzik.

Kutatási indikációk

Ki kell emelni a székletelemzés fő okait:

A koprológiai vizsgálatok lehetővé teszik a bélüregben előforduló patológiák azonosítását:

A tartály elemzését az emésztőszervek patológiáinak diagnosztizálására is előírják.

Hogyan történik a székletelemzés?

A vizsgálat előtt a páciensnek több napig speciális képzésen kell részt vennie.

• zöldek;
• cékla;
• vörös hal;
• paradicsom.

Ezenkívül a vizsgálat eredményeit a húskészítmények is befolyásolhatják.

A vizsgálatra való felkészülés során abba kell hagyni az antibiotikumok, gyulladáscsökkentők, valamint enzimeket és vasat tartalmazó gyógyszerek szedését.

A kutatáshoz szükséges anyaggyűjtést reggel kell elvégezni. A széklet összegyűjtéséhez használjon steril edényt, amelyet a gyógyszertárban vásárolhat meg. A bioanyag hűtőszekrényben való tárolásának időtartama nem haladja meg a 10 órát.

Hogyan történik a kutatás?

A széklet bakteriológiai vizsgálata lehetővé teszi az anyag fizikai és kémiai összetételének, tulajdonságainak, a patológiák jelenlétének meghatározását. Ez a vizsgálat segít kimutatni a baktériumokat a szervezetben, a bioegyensúly változásait.

A bakanaliza kiegészítése a széklet katológiai elemzése. Ez a tanulmány lehetővé teszi, hogy felmérje a széklet specifikus szaga jelenlétét, konzisztenciáját és sűrűségét, általános megjelenését, mikroorganizmusok jelenlétét vagy hiányát.

A tanulmány 2 szakaszból áll:

1. makroszkópos elemzés.
2. Mikroszkopikus.

A mikroszkópos vizsgálat során nyálkát, fehérjét, emelkedett bilirubinszintet, vérrögöket, jódfil flórát mutatnak ki a székletben. Ez utóbbi olyan hatóanyagoknak köszönhető, amelyek a keményítőt glükózzá alakítják. A jódfil flóra kimutatása nem minden esetben utal fertőzésre. Az erjedés okozta jódbaktériumok felhalmozódása a betegség kialakulásáról tanúskodik.

Mivel a gyermekek szervezete nem küzd jól a kórokozókkal, nagyon gyakran ilyen baktériumokat diagnosztizálnak a gyermekek székletében.

Ma azt a módszert alkalmazzák, hogy a vizsgált bioanyagot speciális környezetben, bizonyos feltételek mellett vetik el. A szakértők meghatározzák a baktériumok szaporodási és telepképző képességét. A pontos eredmények elérése érdekében minden használt műszernek, valamint az összegyűjtött bioanyagot tartalmazó edényeknek sterilnek kell lenniük.

A kórokozó mikroorganizmusokat vizsgálják a különféle antibakteriális gyógyszerekkel szembeni érzékenység szempontjából. A vizsgálatot az eredmények nagy pontossága jellemzi, amely szerint az orvos gyógyszert írhat fel.

A vizsgált anyag teljes mennyiségének csak 10%-a lehet patogén mikroflóra.

Az eredmények megfejtése

A széklet vizsgálata lehetővé teszi a baktériumok azonosítását és számának megállapítását. A kapott eredmények alapján az orvos diagnosztizálja és előírja a kezelést.

A székletben megtalálható patogén mikroflóra fajtái:

1. Escherichia coli. Megzavarják a kalcium, valamint a vas felszívódását a szervezetben, és általában férgek jelenlétét jelzik.
2. Enterobaktériumok. Leggyakrabban ezek a baktériumok okozzák a vérhas és a bélfertőzések kialakulását.
3. A csökkent enzimaktivitású Escherichia coli dysbacteriosis kialakulását jelzi.
4. laktóz-negatív baktériumok. Zavarokat okoznak az emésztési folyamatban, és puffadást, gyomorégést, gyors böfögést és elnehezülést okoznak.
5. Hemolitikus baktériumok. Méreganyagokat képeznek, amelyek negatívan hatnak az idegrendszerre, valamint a belekre. Allergiát okoznak.
6. Élesztőszerű gombák provokálja a rigó kialakulását.
7. Klebsiella, provokálja a gasztroenterológiai patológiák kialakulását.
8. Enterococcusok, provokálják a nemi szervek, a kiválasztó traktus és a húgyúti rendszer fertőző patológiáinak előfordulását.

Az analitikai tartály dekódolása fel van tüntetve az űrlapokon, amelyek a baktériumok normál mutatóit is jelzik.

A bél diszbakteriózisa nagyon veszélyes patológia, amely elpusztítja az egészséges mikroflórát. Ez az állapot dizentéria és staphylococcus aureus kialakulásához vezet. Ennek elkerülése érdekében javasolt legalább évente egyszer székletelemzést végezni a bél bioegyensúlyának szabályozására.

A bakanalízis megbízható tanulmánynak tekinthető, amely információt nyújt fontos belső szerveinek, a belek és a gyomor működéséről. A vizsgálat lehetővé teszi, hogy időben azonosítsa azokat a kórokozó mikroorganizmusokat, amelyek befolyásolják a normál mikroflórát. Felnőtteknek és gyermekeknek egyaránt felírják.