تست منفی کاذب تست کومبس غیر مستقیم. تست کومبز: مستقیم و غیر مستقیم

- یک آزمایش آنتی گلوبولین با هدف شناسایی آنتی بادی های ناقص ضد گلبول قرمز در خون Rh منفی به فاکتور Rh - یک پروتئین خاص که در سطح گلبول های قرمز خون Rh مثبت قرار دارد. دو نوع از این آزمایش وجود دارد: مستقیم - تشخیص آنتی بادی در سطح گلبول های قرمز خون، غیر مستقیم - تشخیص آنتی بادی در سرم خون. یک آزمایش مستقیم در تشخیص و نظارت بر درمان بیماری های خونی انجام می شود: کم خونی همولیتیک، بیماری همولیتیک نوزاد و غیره. آزمایش غیرمستقیم برای ارزیابی سازگاری خون اهداکننده و گیرنده در حین انتقال خون و همچنین برای تعیین وجود و خطر تضاد Rh هنگام برنامه ریزی و مدیریت بارداری انجام می شود. ماده برای آزمایش کومبس خون وریدی است، این مطالعه با روش‌های مبتنی بر واکنش آگلوتیناسیون انجام می‌شود. به طور معمول، هر دو آزمایش نتیجه منفی می دهد. تجزیه و تحلیل در یک روز انجام می شود. در مجموع، 87 آدرس در مسکو وجود داشت که این تحلیل را می‌توان انجام داد.

- یک آزمایش آنتی گلوبولین با هدف شناسایی آنتی بادی های ناقص ضد گلبول قرمز در خون Rh منفی به فاکتور Rh - یک پروتئین خاص که در سطح گلبول های قرمز خون Rh مثبت قرار دارد. دو نوع از این آزمایش وجود دارد: مستقیم - تشخیص آنتی بادی در سطح گلبول های قرمز خون، غیر مستقیم - تشخیص آنتی بادی در سرم خون. یک آزمایش مستقیم در تشخیص و نظارت بر درمان بیماری های خونی انجام می شود: کم خونی همولیتیک، بیماری همولیتیک نوزاد و غیره. آزمایش غیرمستقیم برای ارزیابی سازگاری خون اهداکننده و گیرنده در حین انتقال خون و همچنین برای تعیین وجود و خطر تضاد Rh هنگام برنامه ریزی و مدیریت بارداری انجام می شود. ماده برای آزمایش کومبس خون وریدی است، این مطالعه با روش‌های مبتنی بر واکنش آگلوتیناسیون انجام می‌شود. به طور معمول، هر دو آزمایش نتیجه منفی می دهد. تجزیه و تحلیل در یک روز انجام می شود.

تست کومبس یک معاینه بالینی خون Rh منفی است که هدف آن تشخیص آنتی بادی های فاکتور Rh است. این آزمایش برای شناسایی خطر بروز تضاد رزوس و واکنش های همولیتیک استفاده می شود. در هر فرد، سطح گلبول های قرمز حاوی مجموعه خاصی از آنتی ژن ها یا آگلوتینوژن ها است - ترکیباتی با طبیعت مختلف که از وجود یا عدم وجود آنها برای قضاوت در مورد گروه خون و فاکتور Rh استفاده می شود. انواع مختلفی از آنتی ژن ها وجود دارد، در عمل پزشکی، آگلوتینوژن های A و B که تعیین کننده گروه خونی هستند و آگلوتینوژن D، فاکتور Rh، بیشترین اهمیت عملی را دارند. با فاکتور Rh مثبت، آنتی ژن های D بر روی غشای خارجی گلبول های قرمز، با منفی - شماره شناسایی می شود.

آزمایش کومبس که به آن تست آنتی گلوبولین نیز گفته می شود، با هدف شناسایی آنتی بادی های ناقص ضد گلبول قرمز سیستم فاکتور Rh در خون انجام می شود. آنتی بادی های فاکتور Rh ایمونوگلوبولین های اختصاصی هستند که در خون Rh منفی با ورود گلبول های قرمز با آگلوتینوژن D تولید می شوند. این می تواند زمانی اتفاق بیفتد که خون جنین و زن باردار با هم مخلوط شود و بدون تعیین گروه خون قبلی، تزریق خون انجام شود. آزمون Coombs در دو نسخه وجود دارد - مستقیم و غیر مستقیم. هنگام انجام آزمایش کومبز مستقیم، آنتی بادی های متصل به سطح گلبول های قرمز خون شناسایی می شوند. این مطالعه برای تعیین علت واکنش همولیتیک استفاده می شود. آزمایش غیرمستقیم کومبس با هدف شناسایی آنتی بادی های ضد گلبول قرمز در پلاسمای خون انجام می شود. تعیین سازگاری خون اهداکننده و گیرنده یا مادر و جنین ضروری است، به جلوگیری از ایجاد تضاد رزوس و متعاقب آن همولیز گلبول های قرمز کمک می کند.

خون برای هر دو نوع آزمایش کومبس از ورید گرفته می شود. تجزیه و تحلیل با روش آگلوتیناسیون با استفاده از سرم آنتی گلوبولین انجام می شود. نتایج مطالعه در هماتولوژی در شناسایی علل واکنش‌های همولیتیک، در جراحی و احیاء در هنگام تزریق خون، در زنان و زایمان در نظارت بر بارداری در زنان دارای خون Rh منفی استفاده می‌شود.

نشانه ها

تست مستقیم کومبس که آنتی بادی های متصل به سطح گلبول های قرمز را تشخیص می دهد، برای واکنش های همولیتیک (تخریب گلبول های قرمز) با منشاء مختلف تجویز می شود. این مطالعه برای کم خونی همولیتیک خودایمنی اولیه، کم خونی همولیتیک پس از تزریق خون، بیماری همولیتیک نوزاد، همولیز گلبول های قرمز ناشی از بیماری های خود ایمنی، نئوپلاستیک یا عفونی، و همچنین مصرف داروها، به عنوان مثال، کینیدین، متیل دوپا، پروکائین آمید نشان داده شده است. . تست غیرمستقیم کومبس، که آنتی بادی‌ها را در پلاسمای خون تشخیص می‌دهد، برای جلوگیری از ایجاد درگیری رزوس استفاده می‌شود. این دارو برای بیمارانی که برای انتقال خون آماده می شوند و همچنین برای زنان باردار با فاکتور Rh منفی نشان داده می شود، مشروط بر اینکه پدر آینده کودک دارای فاکتور Rh مثبت باشد.

به منظور تعیین سازگاری Rh، تست کومبس برای بیماران دارای خون Rh مثبت انجام نمی شود. در این موارد، از قبل آنتی ژن هایی در سطح گلبول های قرمز وجود دارد، تولید آنتی بادی نمی تواند با تزریق خون یا ورود خون جنین به جریان خون زن باردار تحریک شود. همچنین، اگر هر دو والدین فاکتور Rh منفی داشته باشند، این مطالعه برای زنان باردار توصیه نمی شود. کودک در چنین زوج هایی همیشه خون Rh منفی دارد، درگیری ایمنی با مادر غیرممکن است. در پاتولوژی های همولیتیک، آزمایش آنتی گلوبولین برای نظارت بر موفقیت درمان استفاده نمی شود، زیرا نتایج نشان دهنده فعالیت روند تخریب گلبول قرمز نیست.

محدودیت آزمون کومبز پیچیدگی روش تحقیق است - برای به دست آوردن نتایج قابل اعتماد، لازم است شرایط دما و زمان، قوانین تهیه معرف ها و مواد زیستی رعایت شود. مزیت تست کومبز حساسیت بالای آن است. در کم خونی همولیتیک، حتی اگر هموگلوبین، بیلی روبین و رتیکولوسیت ها به حالت عادی برگردند، نتایج این آزمایش مثبت می ماند.

آماده سازی برای تجزیه و تحلیل و جمع آوری مطالب

ماده لازم برای انجام آزمایش کومبس خون وریدی است. هیچ شرایط خاصی برای زمان انجام روش نمونه گیری خون و برای آماده سازی بیمار وجود ندارد. مانند هر مطالعه دیگری، توصیه می شود پس از صرف غذا حداقل 4 ساعت استراحت کنید و در 30 دقیقه آخر سیگار را ترک کنید، ورزش کنید و از استرس عاطفی خودداری کنید. همچنین لازم است در مورد نیاز به توقف مصرف داروها از قبل با پزشک خود صحبت کنید - برخی از داروها می توانند نتایج آزمایش کومبس را تحریف کنند. خون با سرنگ از ورید کوبیتال و کمتر از ورید پشت دست گرفته می شود. ظرف چند ساعت مواد به آزمایشگاه تحویل داده می شود.

هنگام انجام آزمایش کومبز مستقیم، سرم آنتی گلوبولین به سرم خون بیمار اضافه می شود. پس از مدتی، مخلوط برای وجود آگلوتینات ها بررسی می شود - در صورت وجود آنتی بادی بر روی گلبول های قرمز، آنها تشکیل می شوند. با یک نتیجه مثبت، یک تیتر آگلوتیناسیون تعیین می شود. آزمون غیرمستقیم کومبس از مراحل بیشتری تشکیل شده است. ابتدا آنتی بادی های موجود در سرم در طی انکوباسیون روی گلبول های قرمز تزریق شده ثابت می شوند. سپس سرم آنتی گلوبولین به نمونه اضافه می شود و پس از مدتی وجود و تیتر آگلوتینات ها مشخص می شود. دوره تجزیه و تحلیل 1 روز است.

نتایج عادی

به طور معمول، نتیجه آزمایش مستقیم کومبز منفی است (-). این بدان معنی است که هیچ آنتی بادی مرتبط با گلبول های قرمز در خون وجود ندارد و آنها نمی توانند عامل همولیز باشند. نتیجه طبیعی آزمایش کومبس غیرمستقیم نیز منفی است (-)، یعنی هیچ آنتی بادی برای فاکتور Rh در پلاسمای خون وجود ندارد. هنگام آماده شدن برای انتقال خون برای گیرنده، این به معنای سازگاری با خون اهداکننده است، در حالی که بارداری را نظارت می کند - عدم وجود حساسیت Rh در مادر، خطر کم ایجاد درگیری ایمنی. عوامل فیزیولوژیکی مانند عادات غذایی یا فعالیت بدنی نمی توانند بر نتیجه آزمایش تأثیر بگذارند. بنابراین در صورت مثبت بودن نتیجه، مشاوره با پزشک ضروری است.

ارزش تشخیصی تجزیه و تحلیل

نتیجه آزمایش کومبس مثبت به صورت کیفی، از (+) تا (++++)، یا به صورت کمی، در تیترهای 1:16 تا 1:256 بیان می شود. تعیین غلظت آنتی بادی ها روی گلبول های قرمز و سرم خون در هر دو نوع نمونه انجام می شود. با مثبت شدن نتیجه آزمایش مستقیم کومبز، آنتی بادی هایی بر روی غشای خارجی گلبول های قرمز تشخیص داده می شود که منجر به تخریب این سلول های خونی می شود. علت ممکن است انتقال خون بدون تایپ قبلی باشد - یک واکنش همولیتیک پس از تزریق، و همچنین اریتروبلاستوز نوزادی، یک واکنش همولیتیک ناشی از استفاده از داروها، کم خونی همولیتیک خودایمنی اولیه یا ثانویه. تخریب ثانویه گلبول های قرمز می تواند ناشی از لوپوس اریتماتوز سیستمیک، سندرم ایوانز، ماکروگلوبولینمی والدنستروم، هموگلوبینوری سرد حمله ای، لوسمی لنفوسیتی مزمن، لنفوم، مونونوکلئوز عفونی، سیفلیس، پنومونی مایکوپلاسمی باشد.

نتیجه مثبت تست کومبس غیرمستقیم نشان دهنده وجود آنتی بادی در برابر فاکتور Rh در پلاسما است. در عمل، این بدان معنی است که حساسیت Rh رخ داده است، احتمال ایجاد تضاد Rh پس از تزریق خون اهدا کننده در دوران بارداری وجود دارد. برای جلوگیری از عوارض بارداری، زنانی که نتیجه آزمایش کومبس مثبت است در سوابق ویژه ای قرار می گیرند.

درمان انحراف از هنجار

آزمون کومبز به مطالعات همسرولوژیکی اشاره دارد. نتایج آن شناسایی یک واکنش همولیتیک و همچنین تعیین سازگاری خون اهداکننده و گیرنده، مادر و جنین را ممکن می‌سازد تا از ایجاد تضاد رزوس جلوگیری شود. اگر نتیجه آزمایش مثبت باشد، لازم است از پزشک معالج - متخصص زنان و زایمان، هماتولوژیست، جراح مشاوره بگیرید.

آنتی بادی هابر روی سطح گلبول های قرمز قرار دارد، می تواند هم در حالت ساکن و هم در حالت آزاد باشد پلاسمای خون. بسته به وضعیت آنتی بادی ها، واکنش کومبس مستقیم یا غیرمستقیم انجام می شود. اگر دلیلی برای این باور وجود داشته باشد که آنتی بادی ها روی سطح گلبول های قرمز ثابت شده اند، آزمایش کومبز مستقیم انجام می شود. در این مورد، آزمون در یک مرحله می گذرد - اضافه می شود سرم آنتی گلوبولین. اگر آنتی بادی های ناقص روی سطح گلبول های قرمز وجود داشته باشد، آگلوتیناسیونگلبول های قرمز

واکنش غیر مستقیم

واکنش غیر مستقیم کومبس در 2 مرحله انجام می شود. ابتدا لازم است به صورت مصنوعی پیاده سازی شود حساس شدنگلبول های قرمز برای این کار گلبول های قرمز و سرم خون مورد مطالعه انکوبه می شوند که باعث تثبیت آنتی بادی ها در سطح گلبول های قرمز می شود. پس از آن، مرحله دوم آزمایش کومبس انجام می شود - افزودن سرم آنتی گلوبولین.

واکنش بارش - RP (از Lat praecipilo به رسوب) تشکیل و رسوب مجموعه ای از آنتی ژن مولکولی محلول با آنتی بادی هایی به شکل کدورت است که به آن می گویند. رسوب می کند. با مخلوط کردن آنتی ژن ها و آنتی بادی ها در مقادیر معادل تشکیل می شود، بیش از حد یکی از آنها سطح تشکیل کمپلکس ایمنی را کاهش می دهد. واکنش رسوب در لوله های آزمایش (واکنش رسوب حلقه ای)، در ژل ها، محیط های غذایی و غیره قرار می گیرد. Ouchterlony، ایمونودیفیوژن رادیوم، ایمونوالکتروفورزو غیره.

واکنش بارش حلقه ای. واکنش در لوله‌های رسوب‌دهنده باریک انجام می‌شود: یک آنتی ژن محلول روی سرم ایمنی لایه‌ای قرار می‌گیرد. با نسبت بهینه آنتی ژن و آنتی بادی، یک لایه مات در مرز این دو محلول تشکیل می شود. حلقه رسوبی. اگر از عصاره های بافت جوشانده و صاف شده به عنوان آنتی ژن در واکنش استفاده شود، چنین واکنشی واکنش I-ترمو رسوب (واکنشی که در آن هاپتن سیاه زخم شناسایی می شود) نامیده می شود.
واکنش ایمونودیفیوژن دوگانه Ouchterlony. برای تنظیم واکنش، ژل آگار ذوب شده را در یک لایه نازک روی صفحه شیشه ای ریخته و پس از انجماد، سوراخ هایی در آن بریده می شود. آنتی ژن ها و سرم های ایمنی به طور جداگانه در چاهک های ژل قرار می گیرند که به سمت یکدیگر پخش می شوند. در نقطه تلاقی به نسبتهای معادل، رسوبی را به شکل نوار سفید تشکیل می دهند. در سیستم های چند جزئی، چندین خط رسوب بین چاهک ها با آنتی ژن ها و آنتی بادی ها ظاهر می شود. در AGهای یکسان، خطوط رسوب ادغام می شوند. در AG های غیر یکسان، آنها را قطع می کنند.
واکنش ایمونودیفیوژن شعاعیسرم ایمنی با ژل آگار مذاب به طور یکنواخت روی لیوان ریخته می شود. پس از انجماد در ژل، چاه هایی ساخته می شود که آنتی ژن در رقت های مختلف در آنها قرار می گیرد. آنتی ژن، با انتشار در ژل، مناطق رسوب حلقوی را در اطراف چاهک ها با آنتی بادی تشکیل می دهد. قطر حلقه رسوب متناسب با غلظت آنتی ژن است. این واکنش برای تعیین ایمونوگلوبولین های سرم خون طبقات مختلف، اجزای سیستم کمپلمان و غیره استفاده می شود.
ایمونوالکتروفورز- ترکیبی از روش الکتروفورز و ایمونوفورز: مخلوطی از آنتی ژن ها به چاهک های ژل وارد می شود و با استفاده از الکتروفورز در ژل جدا می شود، سپس یک سرم ایمنی به موازات مناطق الکتروفورز وارد شیار می شود که آنتی بادی های آن است. در ژل منتشر می شود و یک خط رسوب در محل "ملاقات" با آنتی ژن تشکیل می دهد.
واکنش لخته سازی(طبق نظر رامون) (از لات f1oecus - پولکهای پشمی) - ظهور مات یا توده پوسته پوسته (ایمونوفیلاسیون) در لوله آزمایش در هنگام واکنش سم - آنتی توکسین یا توکسوئید - آنتی سم. برای تعیین فعالیت سرم یا توکسوئید آنتی توکسیک استفاده می شود.

تایپ HLA- مطالعه کمپلکس اصلی سازگاری بافتی انسانی - کمپلکس HLA. این تشکیل شامل ناحیه ای از ژن ها در کروموزوم 6 است که آنتی ژن های HLA درگیر در پاسخ های ایمنی مختلف را کد می کند.

وظایف در تایپ HLAمی تواند بسیار متفاوت باشد - شناسایی بیولوژیکی (نوع HLA همراه با ژن های والدین به ارث می رسد)، تعیین استعداد ابتلا به بیماری های مختلف، انتخاب اهداکنندگان برای پیوند عضو - در این مورد، نتایج HLA تایپ بافت های دهنده و گیرنده مقایسه می شود. با کمک HLA تایپ مشخص می شود که همسران تا چه حد از نظر آنتی ژن های سازگاری بافتی مشابه یا متفاوت هستند تا موارد ناباروری تشخیص داده شود.

تایپ HLA پیشنهاد می کند تجزیه و تحلیل پلی مورفیسم HLAو به دو روش سرولوژیکی و ژنتیکی مولکولی انجام می شود. روش کلاسیک سرولوژیکی تایپ HLA بر اساس تست میکرولنفوسیتوتوکسیک است، در حالی که روش مولکولی از PCR (واکنش زنجیره ای پلیمراز) استفاده می کند.

سرولوژیکی تایپ HLAبر روی جمعیت های سلولی جدا شده انجام می شود. آنتی ژن های اصلی کمپلکس سازگاری بافتی عمدتاً توسط لنفوسیت ها حمل می شوند. بنابراین، سوسپانسیون لنفوسیت های T به عنوان حامل اصلی آنتی ژن های کلاس I، و سوسپانسیون لنفوسیت های B برای تعیین آنتی ژن های HLA کلاس II استفاده می شود. برای جداسازی جمعیت سلولی مورد نظر از خون کامل، از سانتریفیوژ یا جداسازی ایمونومغناطیسی استفاده می شود. اعتقاد بر این است که روش اول می تواند به داده های مثبت کاذب منجر شود، زیرا برخی از سلول ها در این مورد می میرند. روش دوم به عنوان خاص تر شناخته می شود - در حالی که بیش از 95٪ از سلول ها زنده می مانند.

اما اساس مرحله بندی آزمایش لنفوسیتوتوکسیک تایپ HLAیک سرم اختصاصی حاوی آنتی بادی برای انواع مختلف آللی آنتی ژن های HLA کلاس I و II است. آزمایش سرولوژی به شما امکان می دهد تا با بررسی اینکه کدام یک از سرم ها با لنفوسیت ها واکنش نشان می دهند و کدام نه، نوع HLA را تعیین کنید.

اگر واکنشی بین سلول ها و سرم رخ دهد، یک کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی روی سطح سلول تشکیل می شود. پس از افزودن محلول حاوی کمپلمان، لیز و مرگ سلولی رخ می دهد. تست سرولوژیکی تایپ HLA با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس برای ارزیابی واکنش های مثبت (فلورسانس قرمز) و منفی (فلورسانس سبز) یا میکروسکوپ فاز کنتراست برای رنگ آمیزی هسته سلول های مرده ارزیابی می شود. نتیجه تایپ HLA با در نظر گرفتن ویژگی سرم‌های واکنش‌دهنده و گروه‌های واکنش متقابل آنتی‌ژن‌ها، شدت واکنش سمیت سلولی به دست می‌آید.

مضرات سرولوژیک تایپ HLAوجود واکنش های متقاطع، میل ترکیبی ضعیف آنتی بادی یا بیان کم آنتی ژن های HLA، عدم وجود محصولات پروتئینی در تعدادی از ژن های HLA است.

روش های مولکولی مدرن تر تایپ HLAاز نمونه های سنتزی استاندارد شده استفاده می شود که با آنتی ژن های روی سطح لکوسیت ها واکنش نمی دهند، بلکه با DNA واکنش نشان می دهند و مستقیماً نشان می دهند که کدام آنتی ژن در نمونه وجود دارد. روش‌های مولکولی به لکوسیت‌های زنده نیاز ندارند، هر سلول انسانی را می‌توان مطالعه کرد و چند میکرولیتر خون برای کار کافی است یا می‌توان آن را به خراش دادن از مخاط دهان محدود کرد.

ژنتیک مولکولی تایپ HLAاز روش PCR استفاده می کند که اولین مرحله آن بدست آوردن DNA ژنومی خالص (از خون کامل، سوسپانسیون لکوسیت ها، بافت ها) است.

سپس نمونه DNA کپی می شود - در یک لوله آزمایش با استفاده از پرایمرها (DNA تک رشته ای کوتاه) مخصوص یک مکان خاص HLA. انتهای هر جفت پرایمر باید کاملاً مکمل یک توالی منحصر به فرد مربوط به یک آلل خاص باشد، در غیر این صورت هیچ تقویتی رخ نمی دهد.

پس از PCR در طی کپی مکرر تعداد زیادی قطعه DNA به دست می آید که می توان آنها را به صورت دیداری ارزیابی کرد. برای انجام این کار، مخلوط های واکنش تحت الکترولیز یا هیبریداسیون قرار می گیرند و مشخص می شود که آیا تقویت خاصی با استفاده از یک برنامه یا جدول رخ داده است. نتیجه تایپ HLA در قالب یک گزارش جامع در سطح ژن و آللی ارائه شده است. با توجه به استاندارد بودن نمونه های مورد استفاده، مولکولی تایپ HLAبه طور دقیق سرولوژیکی علاوه بر این، اطلاعات بیشتر (الل های DNA جدید بیشتر) و سطح بالاتری از جزئیات را فراهم می کند، زیرا به شما امکان می دهد نه تنها آنتی ژن ها، بلکه خود آلل ها را نیز شناسایی کنید، که تعیین می کند کدام آنتی ژن در سلول وجود دارد.

واکنش لیز ایمنیاین واکنش بر اساس توانایی آنتی‌بادی‌های خاص برای تشکیل کمپلکس‌های ایمنی با سلول‌ها، از جمله گلبول‌های قرمز، باکتری‌ها است که منجر به فعال شدن سیستم کمپلمان در طول مسیر کلاسیک و لیز سلولی می‌شود. از واکنش‌های لیز ایمنی، واکنش همولیز بیشتر استفاده می‌شود و به ندرت واکنش باکتریولیز (عمدتاً در تمایز وبا و ویبریوهای شبه وبا) استفاده می‌شود.

واکنش همولیزتحت تأثیر واکنش با آنتی بادی ها در حضور مکمل، سوسپانسیون کدر گلبول های قرمز به دلیل انتشار هموگلوبین به مایع شفاف قرمز روشن - "خون لاکی" تبدیل می شود. هنگام تنظیم یک واکنش تشخیصی تثبیت کمپلمان (RCC)، واکنش همولیز به عنوان یک شاخص استفاده می شود: برای آزمایش وجود یا عدم وجود (پیوند) مکمل آزاد.

واکنش همولیز موضعی در ژل(واکنش جرن) یکی از انواع واکنش همولیز است. این به شما امکان می دهد تعداد سلول های تشکیل دهنده آنتی بادی را تعیین کنید. تعداد سلول های ترشح کننده آنتی بادی ها - همولیزین ها، با تعداد پلاک های همولیز که در ژل آگار حاوی گلبول های قرمز، سوسپانسیون سلولی بافت لنفوئیدی مورد مطالعه و مکمل ظاهر می شوند، تعیین می شود.

روش ایمونوفلورسانس

(RIF، واکنش ایمونوفلورسانس) - روشی برای تشخیص Ag خاص (Ab) با استفاده از Ab (Ag) کونژوگه با فلوروکروم. از حساسیت و ویژگی بالایی برخوردار است. برای عفونت های اکسپرس d-ki استفاده می شود. بیماری ها (شناسایی عامل ایجاد کننده در مواد تحقیق)، و همچنین برای تعیین آنتی بادی ها و گیرنده های سطحی و نشانگرهای لکوسیت ها (ایمونوفنوتایپ) و سایر سلول ها. مستقیم I. m.شامل پردازش یک بخش بافتی یا اسمیر از مواد پاتولوژیک یا میکروبی حاوی پادتن های خاص کونژوگه شده با فلوروکروم است. دارو برای حذف آنتی بادی های غیر متصل شسته می شود و زیر میکروسکوپ فلورسنت بررسی می شود. در موارد مثبت، یک کمپلکس ایمنی نورانی در اطراف محیط جسم ظاهر می شود. کنترل برای حذف لومینسانس غیر اختصاصی ضروری است. در غیر مستقیم آنهادر مرحله اول یک برش بافتی یا اسمیر با یک عامل اختصاصی غیر فلورسنت و در مرحله دوم با یک عامل شب تاب علیه -گلوبولین های آن حیوان که در مرحله اول اعمال شد، درمان می شود. در حالت مثبت یک کمپلکس نورانی متشکل از Ar، Am به آن و Am در مقابل At (روش ساندویچی) تشکیل می شود. علاوه بر یک میکروسکوپ درخشان، برای محاسبه RIF در طول فنوتیپ سلولی، مرتب کننده سلول لیزری .

فلوسیتومتری- روشی برای اندازه گیری نوری پارامترهای یک سلول، اندامک های آن و فرآیندهای رخ داده در آن.

این تکنیک شامل تشخیص پراکندگی نور از پرتو لیزر هنگامی است که یک سلول در یک جت مایع از آن عبور می کند، و درجه پراکندگی نور به فرد اجازه می دهد تا ایده ای از اندازه و ساختار سلول داشته باشد. علاوه بر این، تجزیه و تحلیل سطح فلورسانس ترکیبات شیمیایی را که سلول را تشکیل می دهند (اتوفلورسانس) یا قبل از فلوسیتومتری وارد نمونه می شود، در نظر می گیرد.

سوسپانسیون سلولی که قبلاً با آنتی بادی های مونوکلونال فلورسنت یا رنگ های فلورسنت برچسب گذاری شده بود، وارد جریان مایع عبوری از سلول جریان می شود. شرایط به گونه ای انتخاب می شوند که سلول ها یکی پس از دیگری به دلیل به اصطلاح. تمرکز هیدرودینامیکی جت در جت در لحظه ای که سلول از پرتو لیزر عبور می کند، آشکارسازها ثبت می کنند:

پراکندگی نور در زوایای کوچک (از 1 درجه تا 10 درجه) (از این مشخصه برای تعیین اندازه سلول ها استفاده می شود).

پراکندگی نور در زاویه 90 درجه (به شما امکان می دهد نسبت هسته / سیتوپلاسم و همچنین ناهمگنی و دانه بندی سلول ها را قضاوت کنید).

شدت فلورسانس در چندین کانال فلورسانس (از 2 تا 18-20) - به شما امکان می دهد ترکیب زیر جمعیتی سوسپانسیون سلولی و غیره را تعیین کنید.

1 قطره بزرگ سرم O (I)، A (II)، B (III) روی یک صفحه یا اسلاید شیشه ای با پیپت (متفاوت!) اعمال می شود. با توجه به زمان، با یک میله شیشه ای تمیز یا یک زاویه تمیز از لام شیشه، قطرات سرم با قطرات خون ترکیب می شود. تعیین 5 دقیقه طول می کشد، صفحه را تکان می دهیم، سپس 1 قطره محلول نمکی به هر مخلوط قطره اضافه می شود و نتایج ارزیابی می شود. اگر سرم 2 سری مختلف باشد بهتر است. نتایج گروه خونی باید در هر دو سری سرم مطابقت داشته باشد.

ارزیابی نتایج ایزوهماگلوتیناسیون:

ایزوهماگلوتیناسیون با یک واکنش مثبت، دانه های قرمز ریز گلبول های قرمز چسبنده در مخلوط ظاهر می شوند. دانه‌ها به دانه‌های درشت‌تر و دومی به صورت تکه‌ها ادغام می‌شوند. سرم تقریباً تغییر رنگ داده است.

با یک واکنش منفی، مخلوط به مدت 5 دقیقه به رنگ صورتی باقی می ماند و هیچ دانه ای تشخیص داده نمی شود.

هنگام کار با 3 سرم از گروه های O(I)، A(II)، B(III)، 4 ترکیب واکنش ممکن است:

1. اگر هر 3 سرم واکنش منفی نشان داد، یعنی مخلوط به طور مساوی صورتی رنگ شد - این گروه خونی O (I) است.

   اگر فقط سرم گروه A (II) واکنش منفی نشان دهد و سرم O (I) و B (III) واکنش مثبت نشان دهد، یعنی دانه ها ظاهر شوند - این گروه خونی A (II) است.

   سرم گروه B(II) واکنش منفی نشان داد و سرم گروه های O(I) و A(II) واکنش مثبت نشان داد - این گروه خونی B(III) است.

هر 3 سرم واکنش مثبت نشان دادند - خون آزمایش شده از گروه AB (IV). در این مورد، مطالعه ای با سرم گروه AB (IV) انجام می شود.

توجه داشته باشید!قطرات خون مورد مطالعه باید 10-5 برابر کوچکتر از قطرات سرم باشد.

خطاهای ایزوهماگلوتیناسیون

آگلوتیناسیون نکردن در جایی که باید باشد و آگلوتیناسیون در جایی که نباید باشد. این ممکن است به دلیل پایین بودن تیتر سرم به علاوه آگلوتیناسیون ضعیف گلبول های قرمز باشد.

وجود آگلوتیناسیون در جایی که نباید باشد- این شبه آگلوتیناسیون است، زمانی که انبوهی از گلبول های قرمز "ستون های سکه" را تشکیل می دهند. تکان دادن بشقاب یا اضافه کردن سالین آنها را از بین می برد.

پاناگلوتیناسیون، زمانی که سرم تمام گلبول های قرمز، از جمله گروه خونی خود را به هم می چسباند. در دقیقه 5 علائم آگلوتیناسیون از بین می رود.

همچنین به اصطلاح پاناگلوتیناسیون سرد وجود دارد، زمانی که گلبول های قرمز به دلیل دمای هوای پایین (زیر 15 درجه سانتیگراد) در اتاق به هم می چسبند.

در تمام این موارد، یا یک واکنش مکرر انجام می شود، یا طبق گلبول های قرمز استاندارد.

تعیین وابستگی Rh خون

برای تعیین وابستگی Rh، به عنوان مثال، برای تشخیص وجود یا عدم وجود آنتی ژن های سیستم Rh در خون افراد، از سرم های استاندارد ضد رزوس (واگرها) استفاده می شود که از نظر ویژگی متفاوت هستند، یعنی حاوی آنتی بادی ها در رابطه با آنتی ژن های مختلف این سیستم برای تعیین آنتی ژن Rh 0 (D)، سرم ضد رزوس اغلب با افزودن محلول ژلاتین 10٪ یا یک معرف استاندارد ضد رزوس که از قبل با محلول پلی گلوکین 33٪ تهیه شده است استفاده می شود. برای به دست آوردن نتایج دقیق تر مطالعه و همچنین تشخیص آنتی ژن های سایر سیستم های سرولوژیکی، از تست کومبس استفاده می شود (همچنین در تعیین سازگاری خون تزریق شده بسیار حساس است). برای مطالعه از خون بومی یا تهیه شده با نوعی نگهدارنده استفاده می شود. در این حالت، خون باید از ماده نگهدارنده با حجم ده برابر محلول ایزوتونیک کلرید سدیم شسته شود. هنگام تعیین وابستگی Rh- از Rh 0 (D) باید از دو نمونه سرم یا معرف ضد رزوس دو سری مختلف استفاده کرد و همزمان از گلبول های قرمز استاندارد به دست آمده از خون از خون Rh مثبت (Rh +) و Rh منفی (Rh-) استفاده کرد. ) اشخاص حقیقی. هنگام تعیین سایر ایزوآنتی ژن ها، باید از گلبول های قرمز کنترل بر این اساس استفاده کرد که حاوی آنتی ژنی هستند که آنتی بادی ها در سرم استاندارد علیه آن هدایت می شوند یا فاقد آن هستند.

آگلوتینین های حرارتی ناقص رایج ترین نوع آنتی بادی هستند که می توانند باعث ایجاد کم خونی همولیتیک خود ایمنی شوند. این آنتی بادی ها متعلق به IgG هستند، به ندرت - به IgM، IgA.

تست کومبز

تست کومبز: مقدمهتست کومبس یک روش تشخیصی آزمایشگاهی بر اساس واکنش هماگلوتیناسیون است.

روش اصلی برای تشخیص کم خونی همولیتیک خودایمنی، تست کومبز است. این بر اساس توانایی آنتی بادی های اختصاصی برای ایمونوگلوبولین ها (به ویژه IgG) یا اجزای مکمل (به ویژه C3) برای آگلوتیناسیون گلبول های قرمز پوشش داده شده با IgG یا C3 است.

اتصال IgG و C3b به گلبول های قرمز در کم خونی همولیتیک خودایمنی و کم خونی همولیتیک ایمنی ناشی از دارو مشاهده می شود. تست کومبز مستقیمتست مستقیم کومبس برای تشخیص آنتی بادی ها یا اجزای مکمل ثابت شده روی سطح گلبول های قرمز خون استفاده می شود. به شرح زیر انجام می شود:

برای به دست آوردن آنتی بادی علیه ایمونوگلوبولین های انسانی (سرم آنتی گلوبولین) یا مکمل (سرم ضد مکمل)، حیوان با سرم انسانی، ایمونوگلوبولین ها یا مکمل انسانی ایمن سازی می شود. سرم به دست آمده از حیوان از آنتی بادی های پروتئین های دیگر خالص می شود.

گلبول های قرمز بیمار با سالین شستشو داده می شود تا سرم به طور کامل حذف شود، که آنتی بادی های ایمونوگلوبولین ها و مکمل را خنثی می کند و می تواند نتیجه منفی کاذب ایجاد کند.

اگر آنتی بادی ها یا اجزای مکمل روی سطح گلبول های قرمز تثبیت شوند، افزودن آنتی گلوبولین یا سرم ضد مکمل باعث آگلوتیناسیون گلبول های قرمز می شود.

آزمایش کومبز مستقیم در موارد زیر استفاده می شود:

همولیز خود ایمنی

بیماری همولیتیک نوزادان.

کم خونی همولیتیک ایمنی ناشی از دارو.

واکنش های همولیتیک انتقال خون تست کومبس غیر مستقیمتست غیرمستقیم کومبس آنتی بادی های گلبول های قرمز را در سرم تشخیص می دهد. برای این کار، سرم بیمار با گلبول های قرمز اهداکننده گروه 0 انکوبه می شود و سپس آزمایش کومبز مستقیم انجام می شود.

تست کومبس غیر مستقیم در موارد زیر استفاده می شود:

تعیین سازگاری فردی خون اهداکننده و گیرنده.

تشخیص آلوآنتی بادی ها، از جمله آنتی بادی هایی که باعث واکنش های همولیتیک انتقال خون می شوند.

تعیین آنتی ژن های گلبول قرمز سطحی در ژنتیک پزشکی و پزشکی قانونی.

تایید دوقلوهای همسان در پیوند مغز استخوان.

برای انجام آزمایش بیولوژیکی، خون در اسرع وقت (ترجیحاً در جت) تزریق می شود. پس از تزریق 25 میلی لیتر خون، لوله سیستم با یک گیره بسته می شود. سپس یک مکث به مدت 3 دقیقه انجام می شود و در طی آن وضعیت گیرنده کنترل می شود. برای تنظیم یک نمونه بیولوژیکی، 25 میلی لیتر خون سه بار تزریق می شود.در پایان آزمایش (پس از تزریق 75 میلی لیتر اول خون در دوزهای کسری 25 میلی لیتر در فواصل 3 دقیقه)، سیستم بر روی سرعت انتقال خون مورد نیاز تنظیم می شود. هنگام تزریق بیش از یک ویال خون به بیمار، باید سوزن را از ورید خارج کرد. در این حالت سوزن از لوله آزمایش ویال که خون در آن تمام شده است خارج می شود و وارد ویال بعدی می شود. لوله سیستم (لاستیک یا پلاستیک) در این لحظه با یک گیره بسته می شود. اگر در حین انتقال خون نیاز به تزریق داخل وریدی هر داروی دیگری به گیرنده باشد، این کار با سوراخ کردن لوله لاستیکی سیستم انجام می شود. سوراخ شدن لوله پلاستیکی غیرقابل قبول است، زیرا از بین نمی رود. پس از هر بار تزریق خون، بیمار باید تحت نظر باشد تا عوارض احتمالی از جمله واکنش های آلرژیک شناسایی و به موقع برطرف شود. دمای بدن باید 2 ساعت پس از پایان تزریق خون اندازه گیری شود. با افزایش اندازه گیری آن باید در 4 ساعت آینده هر ساعت تکرار شود. به همان اندازه مهم نظارت بر ادرار و ترکیب ادرار است که امکان ایجاد یک واکنش سمی پس از تزریق را فراهم می کند. شروع اولیگوری و آنوری پس از تزریق خون، وجود سلول های خونی و پروتئین در ادرار نشانه مستقیم ایجاد همولیز پس از تزریق است.

تست کومبز- تجزیه و تحلیل برای تشخیص آنتی بادی های متصل به سطح یا محلول در پلاسما. با کمک آن، ایمن سازی و آنتی بادی های گلبول های قرمز تشخیص داده می شود. نام دوم آزمایش آنتی گلوبولین است. مستقیم و غیر مستقیم اتفاق می افتد.

در آزمایش آنتی گلوبولین مستقیمآنتی بادی های ثابت شده روی سطح گلبول های قرمز را تشخیص می دهد. با مشکوک بودن، با سایر بیماری های خود ایمنی، پس از مصرف داروها (متیل دوپا، پنی سیلین، کینین) و.

گلبول‌های قرمز در داخل بدن حساس شده‌اند - آنتی‌بادی‌ها قبلاً محکم به آنها چسبیده‌اند و افزودن سرم آنتی‌گلوبولین (ضد IgG) باعث می‌شود سلول‌های حساس به هم بچسبند که با چشم غیرمسلح قابل مشاهده است.

تست کومبس غیر مستقیمآنتی بادی های ضد گلبول قرمز را در پلاسمای خون تشخیص می دهد، قبل از تزریق خون و در طی آن انجام می شود.

آنتی بادی های ضد گلبول قرمز - یک نوع اتوآنتی بادی، به عنوان مثال. آنتی بادی ها علیه بافت های خود اتوآنتی بادی زمانی اتفاق می افتد که سیستم ایمنی به طور غیر طبیعی به برخی داروها مانند دوزهای بالای پنی سیلین واکنش نشان دهد.

گلبول های قرمز در سطح خود حاوی ساختارهای شیمیایی مختلفی (گلیکولیپیدها، ساکاریدها، گلیکوپروتئین ها و پروتئین ها) هستند که در پزشکی به آنها آنتی ژن می گویند. یک فرد از والدین خود نقشه خاصی از آنتی ژن ها را در هر گلبول قرمز به ارث می برد.

آنتی ژن ها به گروه ها ترکیب می شوند و در کنار آن، خون به چند گروه تقسیم می شود - طبق سیستم AB0، Rh، Kell، Lewis، Kidd، Duffy. معروف ترین و شاخص ترین آنها در کار پزشک AB0 و فاکتور Rh (Rh) هستند.

سیستم AB0

وابستگی Rh یک فرد با وجود این آنتی ژن ها تعیین می شود. یک آنتی ژن گلبول قرمز بسیار مهم آنتی ژن D است. اگر وجود داشته باشد، در مورد آن صحبت می کنند Rh مثبت خون RhD، و اگر نیست - در مورد Rh منفی Rhd.

اگر آنتی بادی مربوطه به آنتی ژن های گلبول های قرمز بپیوندد، گلبول قرمز از بین می رود - وجود خواهد داشت. همولیز.

نشانه ها

نشانه اصلی برای مستقیمتست آنتی گلوبولین- مشکوک به کم خونی همولیتیک. اغلب با کم خونی همولیتیک خودایمنی اولیه، همولیز با بیماری های روماتیسمی، نئوپلاستیک، عفونی، همولیز ناشی از داروها انجام می شود.

اگر کم خونی چند روز یا چند ماه پس از تزریق خون یا با زردی طولانی مدت در نوزاد ظاهر شود، آزمایش کومبز مستقیم نیز انجام می شود.

غیر مستقیمآزمایش آنتی گلوبولین انجام شدقبل از تزریق خون و در دوران بارداری یک زن Rh منفی.

کم خونی همولیتیک خود ایمنی

کم خونی همولیتیک خود ایمنی (اولیه)یک بیماری خودایمنی کلاسیک با علل ناشناخته است. تعامل درون سیستم ایمنی مختل می شود، که منجر به درک اریتروسیت های خود به عنوان خارجی می شود. در غدد لنفاوی، آنتی بادی های کلاس IgG (در دمای 37 درجه سانتیگراد واکنش نشان می دهند) و / یا IgM (در دمای 40 درجه سانتیگراد) سنتز می شوند که وقتی به سطح گلبول قرمز متصل می شوند، تعدادی آنزیم را شروع می کنند. سیستم مکمل) و دیواره گلبول قرمز را " سوراخ می کند" که منجر به تخریب آن - همولیز می شود.

اولین علائم هم به دلیل تخریب گلبول های قرمز و هم کاهش هموگلوبین است. از جمله:

• خستگی، ضعف عمومی، تحریک پذیری
• تنگی نفس
• درد شکم و قفسه سینه، حالت تهوع
• رنگ ادرار تیره
• کمر درد
• رنگ آمیزی ایکتریک پوست و غشاهای مخاطی
• کاهش تعداد گلبول های قرمز و

نتیجه مستقیم مثبت تست کومبز 100٪ تشخیص کم خونی همولیتیک خودایمنی را تایید می کند و منشا خود ایمنی آن را ثابت می کند. در عین حال، نتیجه منفی حذف تشخیص را ممکن نمی کند.

کم خونی همولیتیک ثانویه

کم خونی همولیتیک خودایمنی ثانویه و تست کومبس مثبت می تواند با بیماری های زیر باشد:

• سندرم ایوانز
• عفونت پنومونی

مثبت بودن تست آنتی گلوبولین در این بیماری ها یکی از علائم است نه یک معیار تشخیصی.

بیماری همولیتیک نوزادان

علت بیماری همولیتیک نوزادانناسازگاری گروه خونی در مادر و جنین، در بیشتر موارد با توجه به سیستم Rh، در موارد منفرد - با توجه به سیستم AB0، به طور تصادفی - با توجه به آنتی ژن های دیگر.

اگر در یک زن Rh منفی، جنین خون Rh مثبت را از پدرش به ارث برده باشد، تضاد Rh ایجاد می شود.

این بیماری در یک نوزاد تازه متولد شده تنها در صورتی ایجاد می شود که مادر قبلاً آنتی بادی هایی را علیه آنتی ژن های مربوطه ایجاد کرده باشد که پس از بارداری های قبلی، سقط جنین، انتقال خون ناسازگار اتفاق می افتد. شایع ترین دلیل برای تحریک سنتز آنتی بادی ها علیه آنتی ژن های غشای گلبول های قرمز، زایمان (خونریزی جنینی-مادر) است. اولین زایمان ها معمولاً بدون عارضه می گذرد، اما زایمان های بعدی مملو از بیماری همولیتیک نوزاد در روزهای اول پس از تولد است.

علائم بیماری همولیتیک در نوزادان:

• زردی پوست
• ، و مخاطی
• بزرگ شدن کبد و طحال
• اختلالات تنفسی
• تورم کل بدن
• تحریک و افسردگی تدریجی سیستم عصبی مرکزی

کم خونی پس از تزریق خون

تست کومبس غیر مستقیمقبل از انتقال خون برای ارزیابی سازگاری، و آزمایش کومبز مستقیم - پس از آن در صورت مشکوک شدن به همولیز پس از تزریق خون انجام می شود. اگر علائمی مانند تب، آبیاری دارید (در زیر بخوانید). هدف از این آزمایش، شناسایی آنتی بادی‌هایی برای گلبول‌های قرمز تزریق‌شده است که به گلبول‌های قرمز گیرنده متصل شده‌اند و عامل همولیز پس از تزریق هستند، و همچنین حذف زودهنگام گلبول‌های قرمز اهداکننده از گردش خون گیرنده (گیرنده).

علائم:

• افزایش دمای بدن
• بثورات روی پوست
• کمر درد
• قرمز
• حالت تهوع
• سرگیجه

رمزگشایی

شایان ذکر است که قوانین اساسی برای رمزگشایی آزمایش های آنتی گلوبولین مستقیم و غیر مستقیم یکسان است. تنها تفاوت در محل آنتی بادی ها است - در خون یا قبلاً روی گلبول های قرمز.

• اگر تست کومبز مستقیم منفی است- به این معنی است که آنتی بادی روی گلبول های قرمز نمی نشیند و باید علت علائم را بیشتر جستجو کرد و آزمایش کومبس غیر مستقیم انجام داد.
• اگر نتیجه آزمایش کومبس مثبت پس از تزریق خون، عفونت ها، داروها تشخیص داده شود - مثبت شدن تا 3 ماه طول می کشد (زمان عمر گلبول قرمز 120 روز - 3 ماه)
• نتیجه مثبت تست آنتی گلوبولین در یک بیماری خودایمنی ماهها و حتی سالها ادامه دارد

هنجار

• تست کومبز مستقیم - منفی است
• تست کومبس غیر مستقیم - منفی است

از نظر کیفی، یک نتیجه مثبت در تعداد مثبت ها از یک تا چهار (+، ++، +++، ++++) و از نظر کمی به صورت دیجیتال - 1:16، 1:256 و غیره اندازه گیری می شود.

آره. این واقعیت که شما تزریق خون دریافت کرده اید باید برای پزشکتان شناخته شود، زیرا اکنون بر تفسیر صحیح نتایج آزمایش تأثیر می گذارد. هنگام دریافت خون شخص دیگری (البته خون بارها آزمایش شده)، همیشه این احتمال وجود دارد که بدن شما آنتی بادی علیه خون تزریق شده ایجاد کند. این آنتی بادی ها هستند که تأثیر منفی بر سلامتی خواهند داشت. با تزریق خون بعدی، پزشک باید بداند که شما قبلاً تزریق خون دریافت کرده اید، به این معنی که زمان برای سنتز آنتی بادی ها وجود دارد. برای زنان باردار، این اطلاعات حتی بیشتر مرتبط است.

3. در صورت عدم تطابق فاکتور Rh بین مادر و کودک، آیا همه کودکان بیمار خواهند بود؟

بستگی به Rh مثبت یا منفی کودک (RhD) دارد. ناقلان گروه های خونی I، II، III و IV می توانند هم Rh مثبت و هم منفی باشند. در شرایطی که مادر Rh منفی و کودک Rh مثبت باشد، آنتی‌بادی‌هایی از قبل با اولین بارداری تولید می‌شوند، اما تنها پس از اولین تولد (یا خاتمه بارداری) تماس مستقیم بین خون خون وجود خواهد داشت. مادر و کودک اجرای اثر همولیتیک آنتی بادی ها تنها در تولد دوم و بعدی خواهد بود که منجر به بیماری همولیتیک در نوزاد خواهد شد.

هر زن با فاکتور Rh منفی باید در دوران بارداری به دقت بررسی شود و پس از زایمان، درمان پیشگیرانه برای جلوگیری از ظهور آنتی بادی ها و عوارض بعدی انجام شود.

4. آیا در دوران بارداری قبل از انجام آزمایش کومبس باید از گروه خونی شوهر اطلاع داشت؟

نه تنها دانستن، بلکه بررسی گروه خونی پدر بیولوژیکی کودک در دوران بارداری نیز ضروری است.

داده ها

• برای اولین بار در سال 1945 در کمبریج پیشنهاد شد
• آستانه حساسیت - حداقل 300 مولکول آنتی بادی ثابت روی یک گلبول قرمز
• تعداد آنتی بادی هایی که همولیز را تحریک می کنند - به صورت جداگانه برای هر فرد (از 16-30 تا 300)
• پویایی سایر شاخص های آزمایشگاهی کم خونی همولیتیک (هموگلوبین، بیلی روبین، رتیکولوسیت ها) ممکن است عادی شود و تست کومبز در همان سطح باقی می ماند.

آخرین ویرایش آزمون کومبز: 16 مارس 2018 توسط ماریا بودیان

به طور معمول، هیچ آنتی بادی برای گلبول های قرمز در خون وجود ندارد.

آزمایش مستقیم کومبس یک آزمایش آنتی گلوبولین (آگلوتیناسیون ژل، که امکان تشخیص آنتی بادی های دو ظرفیتی کامل را فراهم می کند) است که آنتی بادی های کلاس IgG و جزء C3 مکمل را در سطح گلبول های قرمز تعیین می کند. به طور معمول، آنتی بادی هایی که با آزمایش مستقیم کومبس شناسایی می شوند، ویژگی گسترده ای دارند که با یک آنتی ژن به خوبی تثبیت شده مرتبط نیست. مثبت بودن تست مستقیم کومبز به وضوح نشان دهنده وجود کم خونی همولیتیک در بیمار است، اگرچه همه بیماران با تست آنتی گلوبولین مستقیم مثبت این بیماری را ندارند. تقریباً 10٪ از بیماران دارای آنتی بادی یا اجزای مکمل روی غشای گلبول قرمز با آزمایش مستقیم کومبس (تست منفی) قابل تشخیص نیستند، اما با این وجود از کم خونی همولیتیک خودایمنی رنج می برند. برای روشن شدن ویژگی آنتی بادی ها در چنین مواردی، از آزمایش هایی با شستشوی آنها استفاده می شود. تست مستقیم کومبس که فقط برای مکمل مثبت است، معمولاً با آنتی بادی های IgM نوع سرد همراه است. در این حالت، آنتی بادی های IgM روی گلبول های قرمز در دمای پایه بدن وجود ندارد. با این حال، با توجه به این واقعیت که آنتی بادی های IgM به طور فعال مکمل را تثبیت می کنند، و مکمل روی گلبول های قرمز باقی می ماند، در این شکل از کم خونی همولیتیک خودایمنی (بیماری آگلوتینین سرد)، تست کومبز فقط برای مکمل مثبت خواهد بود.

تست مستقیم کومبس در کم خونی همولیتیک خودایمنی ناشی از آنتی بادی های گرم، کم خونی دارویی خودایمنی (هنگام مصرف متیل دوپا، تا 20 درصد بیماران واکنش مثبت نشان می دهند)، نوع جذب دارو، کم خونی همولیتیک، نوع کمپلکس ایمنی کم خونی همولیتیک مثبت است. آزمایش فقط برای C3 مثبت است)، با کم خونی همولیتیک خودایمنی ناشی از آنتی بادی های سرما - بیماری آگلوتینین سرد (تست فقط برای C3 مثبت است). با هموگلوبینوری سرد حمله ای، آزمایش کومبز مستقیم منفی است.

تست کومبس غیرمستقیم - یک آزمایش آنتی گلوبولین غیرمستقیم (آنتی بادی های ناقص را تشخیص می دهد) به شما امکان می دهد آنتی بادی های غیر معمول در خون، از جمله آلوآنتی بادی ها، به آنتی ژن های گلبول قرمز خارجی را شناسایی کنید. این نام خود را (غیر مستقیم) به دلیل این واقعیت که در 2 مرحله پیش می رود. در ابتدا، سرم خون بیمار، حاوی آنتی بادی های ناقص، بدون تظاهرات قابل مشاهده، با تشخیصی Ag corpuscular اضافه شده برهم کنش می کند. در مرحله دوم، سرم آنتی‌گلوبولین معرفی‌شده با آنتی‌بادی‌های ناقص جذب شده روی آنتی‌ژن‌ها، با ظاهری رسوب قابل مشاهده، تعامل می‌کند. انتقال گلبول های قرمز همولوگ (آلوژنیک) یا حاملگی شایع ترین علل این آنتی بادی های ضد RBC هستند. ترکیب تست کومبس غیرمستقیم مثبت با تست مستقیم منفی هیچ کمکی به تشخیص کم خونی همولیتیک خودایمنی نمی کند. مثبت بودن تست کومبس غیرمستقیم باعث ایجاد مشکلات خاصی در انتخاب خون برای انتقال خون و تطبیق آن با خون بانکی می شود، اما ارزش تشخیصی دیگری ندارد.