El agente causante de la sífilis. Taxonomía

No. 23 El agente causante de la sífilis. Taxonomía. Característica. Diagnóstico microbiológico. Tratamiento.
Treponema paladio; T. entericum
Morfología: treponemas típicos con 8-12 verticilos, aparato motor: 3 flagelos periplásmicos en cada polo celular. La tinción de Gram no se percibe; la tinción de Romanovsky-Giemsa es ligeramente rosada, revelada por la impregnación de plata.
Bienes culturales: cepa virulenta en el hoyo. no crece en ambientes, la acumulación del cultivo se produce por infección del conejo en el testículo. Las cepas virulentas se cultivan en medios que contienen tejido cerebral y renal.
Propiedades bioquímicas: microaerófilo
Estructura antigénica: complejo, tiene antígenos proteicos y lipoides específicos, este último es idéntico en composición a la cardiolipina extraída del corazón bovino (difosfadilglicerol)
Factores de patogenicidad: las adhesinas intervienen en el proceso de unión, las lipoproteínas intervienen en el desarrollo de procesos inmunopatológicos.
Resistencia: sensible al secado, a la luz solar, permanece sobre los objetos hasta que se seque. En condiciones desfavorables, se transforma en forma de L y forma quistes.
Patogenia: Causa sífilis. Desde la puerta de entrada, el treponema ingresa a los ganglios linfáticos regionales, donde se multiplican. Luego, T. ingresa al torrente sanguíneo, donde se adhiere a las células endoteliales, causando endarteritis, lo que lleva a vasculitis y necrosis tisular. Con la sangre, T. se propaga por todo el cuerpo, sembrando los órganos: hígado, riñones, huesos, sistema cardiovascular y nervioso.
Inmunidad: no se desarrolla inmunidad protectora. En respuesta a los antígenos patógenos, se desarrollan TRH y procesos autoinmunes. La inmunidad humoral se desarrolla en respuesta al antígeno lipoide de T. y es un título de IgA e IgM.
Examinación microscópica. Realizar para la sífilis primaria durante la aparición del chancro. Material de investigación: secreción de chancro, el contenido de los ganglios linfáticos regionales, a partir del cual se prepara una gota "triturada" y se examina en un campo oscuro. Si el resultado es positivo, se ven finos hilos rizados de 6 a 14 micrones de largo, con 10 a 12 pequeños rizos uniformes de forma regular. Treponema pallidum se caracteriza por movimientos pendulares y de flexión traslacional. Con el desarrollo de lesiones en la mucosa oral durante la sífilis secundaria, así como con la localización del chancroide en la cavidad bucal, es necesario diferenciar Treponema pallidum de Treponema saprofito, que son representantes de la microflora normal. En este caso, la detección de treponemas típicos en el punto de los ganglios linfáticos regionales tiene una importancia diagnóstica decisiva.
Serodiagnóstico. La reacción de Wasserman se realiza simultáneamente con 2 antígenos: 1) específico, que contiene el antígeno del patógeno: treponemas destruidos por ultrasonido; 2) inespecífico - cardiolipina. El suero problema se diluye en una proporción de 1:5 y se coloca RSC según el método generalmente aceptado. Con una reacción positiva, se observa un retraso en la hemólisis, con una reacción negativa, se produce hemólisis de los glóbulos rojos; la intensidad de la reacción se evalúa en consecuencia de (+ + + +) a (-). El primer período de la sífilis es seronegativo y se caracteriza por una reacción de Wasserman negativa. En el 50% de los pacientes, la reacción se vuelve positiva no antes de 2 a 3 semanas después de la aparición del chancro. En el segundo y tercer período de sífilis, la frecuencia de reacciones positivas alcanza el 75-90%. Después del curso del tratamiento, la reacción de Wasserman se vuelve negativa. Paralelamente a la reacción de Wasserman, se realiza una reacción de microprecipitación con un antígeno de cardiolipina inespecífico y la prueba inactiva el suero o plasma sanguíneo. Se aplican 3 gotas de suero en un pocillo sobre una placa de plexiglás (o vidrio normal) y se agrega 1 gota de antígeno de cardiolipina. La mezcla se mezcla bien y se tienen en cuenta los resultados. Una reacción positiva con el suero sanguíneo de un paciente con sífilis se caracteriza por la formación y pérdida de escamas de diferentes tamaños; con un resultado negativo, se observa opalescencia ligera uniforme.
RIF (reacción de inmunofluorescencia indirecta) es específica para el diagnóstico de sífilis. Como antígeno se utiliza una suspensión de treponemas tisulares. Se utiliza la reacción RIF_200. El suero del paciente se inactiva del mismo modo que en la reacción de Wassermann y se diluye en una proporción de 1:200. Se aplican gotas de antígeno a portaobjetos de vidrio, se secan y se fijan en acetona durante 5 minutos. Luego se aplica el suero del paciente a la preparación, después de 30 minutos se lava y se seca. El siguiente paso es tratar el fármaco con suero fluorescente contra globulinas humanas. La preparación se estudia mediante un microscopio fluorescente, observando el grado de luminiscencia de los treponemas.
La reacción RIT de inmovilización de treponemas también es específica. Se obtiene un cultivo vivo de Treponema cultivándolo en un testículo de conejo. El testículo se tritura en un medio especial en el que los treponemas permanecen móviles. La reacción se organiza de la siguiente manera: se combina una suspensión de treponemas tisulares (móviles) en un tubo de ensayo con el suero problema y se añade complemento fresco. En un tubo de control, en lugar del suero problema, se agrega suero de una persona sana, en el otro, en lugar de complemento fresco, se agrega inactivado (inactivo). Después de mantener a 35 °C en condiciones anaeróbicas (anaerostato), se prepara una gota "triturada" de todos los tubos de ensayo y se determina en un campo oscuro el número de treponemas móviles e inmóviles.
Tratamiento: Penicilinas, tetraciclinas, fármacos que contienen bismuto.

La sífilis es una enfermedad venérea humana cíclica causada por una espiroqueta pallidum; El estadio I se manifiesta por chancroide (fr. chancro– úlcera), etapa II – daño a las paredes de los vasos sanguíneos y diversas erupciones, etapa III – encías en varios órganos con daño al sistema nervioso. Gumma (lat. . gomita- encía) es un infiltrado crónico en forma de nódulo, propenso a pudrirse y ulcerarse. Goma sifilítica ( sinónimo.: granuloma sifilítico, goma sifilida, sifiloma terciario) es una goma hemisférica indolora, que es una manifestación de la sífilis terciaria activa. Patógeno – Treponema pallidum- fue descubierto en 1905 por F. Schaudin y E. Hoffmann.

pallidum– un microorganismo en forma de espiral, dimensiones 0,09 – 0,18 x 6 – 20 micrones. El número de vueltas de la espiral es de 8 a 12, las vueltas son uniformes, ubicadas a la misma distancia entre sí, aproximadamente 1 micrón, la altura disminuye hacia los extremos. En un microscopio electrónico parece una serpiente o una lombriz de tierra. En ambos extremos del treponema hay blefaroplastos con flagelos adheridos, cuyo número varía de dos a varios, forman un hilo axial retorcido alrededor del cilindro protoplásmico de la espiroqueta. En condiciones desfavorables puede formar quistes. En el cuerpo de los animales puede aparecer una cápsula de naturaleza mucopolisacárido.

El treponema no se tiñe bien con tintes de anilina, por lo que el agente causante de la sífilis se llama espiroqueta pálida. Reduce el nitrato de plata a plata metálica, que se deposita en la superficie del microbio y lo hace visible en los tejidos: cuando se tiñen según Morozov, los treponemas aparecen de color marrón o casi negro. Cuando se tiñen según Romanovsky-Giemsa, adquieren un color rosa pálido.

Los treponemas suelen reproducirse por división transversal y las células divididas pueden adherirse entre sí durante algún tiempo. El tiempo de división es de unas 30 horas.

Los treponemas vivos son muy móviles y realizan movimientos alrededor de su propio eje longitudinal, así como movimientos de flexión, ondulatorios y de traslación.

Hasta la fecha, no existe ningún método mediante el cual sea posible obtener cultivos de treponemas de manera estable. Treponema pallidum, patógeno para el hombre, nunca ha sido cultivado en medios nutritivos artificiales, en embriones de pollo o cultivos celulares. Aquellas variedades de sus cepas que crecen en condiciones anaeróbicas son probablemente espiroquetas saprofitas, cercanas al agente causante de la sífilis. Su fisiología sigue siendo poco estudiada. Los treponemas son quimioorganotrofos, no tienen catalasa ni oxidasa y pueden fermentar carbohidratos. Crecen en medios muy ricos que contienen hasta 11 aminoácidos, vitaminas, sales y albúmina sérica. La mejor manera de cultivar espiroquetas patógenas es infectar un conejo en el testículo (orquitis experimental). Se ha sugerido que existe pallidum ciclo de vida, que incluye, además de la forma espiral, la etapa granular y la etapa de cuerpos esféricos parecidos a quistes. Son las formas granulares de estos microorganismos las que pueden pasar a través de filtros bacterianos.

Los antígenos de treponema están poco estudiados. Se ha establecido que los treponemas contienen complejos de proteínas, polisacáridos y lípidos. La composición antigénica de los treponemas culturales y tisulares es tan parecida que los antígenos preparados a partir de treponemas culturales se pueden utilizar para el RSC en el diagnóstico de la sífilis. En el cuerpo humano, los treponemas estimulan la producción de anticuerpos, que provocan la inmovilización y muerte de los treponemas móviles vivos y fijan el complemento en presencia de una suspensión. pallidum o espiroquetas relacionadas, y también se detectan en RIF indirecto.

El agente causante de la sífilis no produce exotoxinas. Treponema pallidum es relativamente resistente a las influencias externas. Mueren rápidamente cuando se secan y a temperaturas elevadas (a 55 °C durante 15 minutos). En una solución de HCl al 0,3 – 0,5% pierden instantáneamente su movilidad; También lo pierden rápidamente y mueren en presencia de arsénico, bismuto y mercurio. En sangre total o suero a 4 °C permanecen viables durante 24 horas, lo que debe tenerse en cuenta en las transfusiones de sangre.

Epidemiología. La sífilis es una enfermedad venérea típica. La fuente de infección es una persona enferma, generalmente contagiosa durante 3 a 5 años; Los pacientes con formas tardías de sífilis no son contagiosos. La infección en la gran mayoría de los casos se produce a través de diversos tipos de contactos sexuales y domésticos, rara vez a través de la vía transplacentaria de una madre enferma a un niño (sífilis congénita) o como una infección ocupacional a través del contacto entre personal médico. En condiciones naturales, sólo los humanos padecen sífilis; en experimentos, pueden infectarse monos, hámsteres y conejos. En los monos, el chancro se desarrolla en el lugar de la inyección del treponema; en conejos y hámsteres, la infección es asintomática.

Patogénesis y clínica. El período de incubación de la sífilis adquirida varía de 2 a 10 semanas, generalmente de 20 a 28 días. Los puntos de entrada de la infección suelen ser las membranas mucosas de los órganos genitales, con menos frecuencia la cavidad bucal y la piel dañada. En el lugar de penetración, el patógeno se multiplica y se forma un sifiloma primario (chancro duro): erosión o úlcera con una base compactada. Luego, el patógeno ingresa al sistema linfático y se desarrolla linfangitis y linfadenitis regional. Este es un cuadro clínico típico de la sífilis primaria, que dura entre 1,5 y 2 meses. Entonces estos signos desaparecen. El período secundario de la sífilis se asocia con la generalización del proceso, cuando muchos ganglios linfáticos se agrandan y aparecen erupciones en la piel y las membranas mucosas; Pueden producirse daños a los órganos internos y al sistema nervioso. Hay sífilis secundaria fresca y secundaria recurrente. Con cada recaída posterior, la intensidad de la erupción se vuelve menos pronunciada y los períodos entre recaídas aumentan. Los elementos de la erupción contienen una gran cantidad de treponemas vivos; durante este período el paciente es más contagioso. La duración de la sífilis secundaria es de hasta 4 años o más. La enfermedad entra entonces en un largo período asintomático, tras el cual, al cabo de unos años, se desarrolla la sífilis terciaria. En este caso, se observa un daño orgánico grave a los órganos internos, el sistema cardiovascular, el sistema nervioso central, los huesos, se forman gomas, acompañado de descomposición de los tejidos y cambios degenerativos. Un rasgo clínico característico de la sífilis es la ausencia de quejas subjetivas por parte del paciente (dolor, picazón, ardor, etc.).

Inmunidad. No existe inmunidad natural o artificial contra la sífilis; Sólo existe inmunidad infecciosa y, mientras exista, una persona prácticamente no es susceptible a una nueva infección. La inmunidad infecciosa se desarrolla 10 a 11 días después de la aparición de un chancro duro (inmunidad chancroide); durante este período, no se observa reinfección o el chancro recién formado resulta abortivo (sobreinfección). Posteriormente, durante la sobreinfección, la naturaleza de las lesiones resultantes corresponde al estadio de la enfermedad en el momento de la reinfección. La superinfección se explica por un debilitamiento o "colapso" temporal de la inmunidad infecciosa. Es necesario distinguir la reinfección de la sobreinfección, es decir, una nueva infección repetida de una persona que previamente tuvo sífilis (curada) y, por lo tanto, ha perdido la inmunidad infecciosa. Se han descrito incluso tres casos de sífilis. El período de incubación en estos pacientes es más corto, se desarrolla con mayor frecuencia chancro ulceroso múltiple con linfadenitis y las reacciones serológicas se vuelven positivas antes. En el período secundario, las pápulas de la piel a menudo se erosionan. Esto se explica por el hecho de que en la sífilis se desarrolla una reacción de hipersensibilidad de tipo retardado; después del tratamiento, los linfocitos sensibilizados permanecen en el cuerpo durante mucho tiempo. La inmunidad infecciosa es de naturaleza no estéril y está causada por factores humorales: las inmunoglobulinas de clases G, A y M se encuentran en el suero del paciente.

Diagnóstico de laboratorio. Para diagnosticar la sífilis, lo óptimo es un enfoque integrado que implique el uso simultáneo de varios métodos. Tradicionalmente se dividen en directos, que permiten comprobar la presencia de un patógeno en el material en estudio (infección de animales, diversos tipos de microscopía y métodos genéticos moleculares de detección de ADN). pallidum– PCR y sondaje de ADN), e indirectas – pruebas serológicas para detectar anticuerpos. A su vez, las pruebas serológicas están representadas por pruebas treponémicas y no treponémicas.

El material a analizar para la detección de treponemas por métodos directos es la secreción de chancro o su punteado, el punteado de ganglios linfáticos, el raspado de roséola y el líquido cefalorraquídeo. El patógeno se detecta mejor en material nativo mediante microscopía de campo oscuro (v. fig. 111.4) o de contraste de fases, lo que permite observar diferentes tipos de movimiento del patógeno vivo. Si ya se ha iniciado el tratamiento con antibióticos, no se puede detectar el patógeno en el material patológico. Si es necesario, se realiza RIF directa (o indirecta) o se tiñe la preparación según Romanovsky-Giemsa. Estos métodos se utilizan únicamente para el diagnóstico precoz de la sífilis.

Las pruebas serológicas se pueden utilizar en diversas etapas de la enfermedad, excepto en la sífilis primaria seronegativa. Por lo general, se utiliza un complejo de reacciones serológicas. A no treponémico las pruebas con determinación visual de los resultados incluyen: reacción de fijación del complemento (reacción de Wassermann = RSKk = RW) con antígeno de cardiolipina del músculo cardíaco bovino (antígeno de reacción cruzada), reacción de microprecipitación (MR o RMP): microrreacción con plasma y suero inactivado; RPR: prueba rápida de reagina plasmática y otras reacciones. Los expertos creen que para un examen masivo es mejor utilizar dos pruebas: RPR y RPGA o ELISA, ya que RPR es más sensible en la sífilis primaria, RPGA, en las etapas posteriores de la enfermedad, y ELISA, en todas las etapas. Las pruebas no treponémicas con lectura microscópica de los resultados incluyen la prueba VDRL y la prueba USR. Las pruebas no treponémicas se utilizan como pruebas de detección, ya que pueden dar resultados falsos positivos. EN treponémico Las pruebas utilizan antígenos de origen treponémico. Se utilizan para confirmar los resultados de pruebas no treponémicas (¿falsos positivos?) ante la sospecha clínica, epidemiológica y anamnésica de sífilis, para el diagnóstico de formas latentes y tardías, para un diagnóstico retrospectivo. Las pruebas treponémicas incluyen: RSKt (RSK con antígeno treponémico), RIBT (o RIT): reacción de inmovilización de Treponema pallidum, RIF (una de las mejores reacciones), RPGA, ELISA, inmunotransferencia.

Diagnóstico microbiológico de la sífilis.

Trabajo practico

Medicina y veterinaria.

El nombre de treponema "pálido" se le dio debido a su baja capacidad colorante. Hay otros treponemas patógenos: T. pertenue, el agente causante del pian, T. carateum, el agente causante de la pinta, T. bejel, el agente causante de la espiroquetasis crónica generalizada (bejel). Los patógenos especificados y los causados...

Pautas para estudiantes para la lección práctica No. 36.

Tema de la lección:

Objetivo: Estudio de métodos de diagnóstico microbiológico, terapia y prevención de la sífilis.

Módulo 2 . Microbiología especial, clínica y ambiental.

Tema 36: Diagnóstico microbiológico de la sífilis.

Relevancia del tema:

El agente causante de la sífilis.

La sífilis es una enfermedad infecciosa venérea causada por Treponema pallidum, caracterizada por daños en la piel, órganos internos, huesos y sistema nervioso. Hay sífilis adquirida y congénita.

Taxonomía. El agente causante de la sífilis, Treponema pallidum (Treponema pallidum), fue descubierto en 1905 por F. Schaudinn y E. Hoffman; Pertenece a la familia Spirochaetaceae, división Gracilicutes.

Morfología y propiedades tintoriales.El nombre de treponema "pálido" se le dio debido a su baja capacidad colorante. Hay otros treponemas patógenos: T. pertenue, el agente causante del pian, T. carateum, el agente causante de la pinta, T. bejel, el agente causante de la espiroquetasis crónica generalizada (bejel). Estos patógenos y las enfermedades que causan son más comunes en regiones con climas cálidos y húmedos. Treponema pallidum es una bacteria delgada con forma de espiral, de 4 a 14 micrones de largo, con pequeños rizos uniformes (8-14 rizos); junto con la forma de espiral, puede tener otras formas: en forma de quistes, gránulos, formas de L; teñido según Romanovsky-Giemsa en un característico color rosa pálido. Los movimientos van desde helicoidales hasta de flexión.

Cultivo.Treponema pallidum es un anaerobio obligado, extremadamente exigente con los medios nutritivos. El treponema cultivado en medios nutritivos, una espiroqueta cultural, se diferencia del patógeno en que es menos virulento, pero sus antígenos son similares, lo que se utiliza en el serodiagnóstico de la sífilis.

Estructura antigénica.Treponema pallidum se caracteriza por conexiones antigénicas con otros treponemas, así como con lipoides de tejidos animales y humanos. Se han identificado varios antígenos en el patógeno, uno de los cuales, el antígeno lipoide, es idéntico al extracto lipoide de corazón bovino.

Resistencia. Treponema pallidum es débilmente resistente en el medio ambiente; a los 55 0 C muere en 15 minutos, es sensible a la desecación, a la luz, a las sales de mercurio, al bismuto, al arsénico y a la penicilina. En los artículos del hogar sigue siendo infeccioso hasta que se seca; Bien conservado en tejido cadavérico.

Susceptibilidad animal.Experimentalmente, el proceso patológico puede inducirse en los testículos y la piel de los conejos y en la piel de los grandes simios.

Epidemiología. La fuente de infección es una persona enferma. La infección se produce principalmente por contacto sexual, rara vez a través de artículos del hogar (vasos, cepillos de dientes, cigarrillos, etc.) contaminados con secreciones del paciente; Es posible la infección por besos, leche de una madre lactante (sífilis doméstica), no se pueden descartar casos de infección por transfusiones de sangre de donantes con sífilis.

Patogénesis y cuadro clínico.El agente causante de la sífilis ingresa al cuerpo a través de la piel o las membranas mucosas, se propaga a través de órganos y tejidos y causa daños. El período de incubación dura un promedio de 3 a 4 semanas. Después del período de incubación, la sífilis se presenta cíclicamente en forma de períodos primario, secundario y terciario. En el lugar de introducción del patógeno (en los genitales, en la cavidad bucal, etc.), aparece una lesión primaria, el chancro, una compactación claramente delimitada con una úlcera en la superficie. El período secundario de la sífilis dura de 3 a 4 años y se caracteriza por una erupción y una violación del estado general del cuerpo. El período terciario se caracteriza por daños en la piel, las membranas mucosas, los órganos internos, los huesos y el sistema nervioso: aparecen formaciones propensas a pudrirse y ulcerarse.

Inmunidad. No existe inmunidad innata a la sífilis. Con la sífilis, se desarrolla inmunidad no estéril; Después de la recuperación, la inmunidad no se conserva, por lo que es posible que se presenten enfermedades recurrentes.

La microscopía de campo oscuro se utiliza para detectar Treponema pallidum en la secreción de chancroide. Al final del período primario y secundario, las reacciones sergológicas de Wasserman, las reacciones sedimentarias de Kahn, las pruebas citocólicas y otras que detectan anticuerpos contra treponema pallidum se vuelven positivas. Durante los exámenes masivos, se utiliza una reacción de selección o microrreacción sobre vidrio con una gota de sangre o suero y un antígeno especial. Los laboratorios de investigación también utilizan la reacción de inmovilización de treponemas y otros métodos modernos.

Esquema de investigación microbiológica para la sífilis.

Examen microscópico Serodiagnóstico

(conjunto de reacciones serológicas):

Reacción de Wasserman

Reacción de inmovilización de treponema.

Microscopía de la preparación nativa RIF.

en un campo oscuro

RESPONDER RESPONDER

Tratamiento. Los agentes antimicrobianos más eficaces son los antibióticos de penicilina. También se utilizan preparaciones de bismuto, yodo, etc.

Prevención. No existe una prevención específica. La prevención inespecífica consiste en observar las normas de higiene, así como en la realización de un conjunto de medidas sanitarias e higiénicas de carácter público: registro de pacientes con sífilis, hospitalización de todos los pacientes con formas infecciosas, participación en el examen de todos los miembros de la familia. del enfermo, examen sistemático de los grupos de riesgo, educación de la población, etc.

Objetivos específicos:

Familiarícese con la morfología del agente causante de la sífilis.

Determinar las características del curso clínico de la sífilis.

Definir los conceptos de treponemas “tejidos” y “culturales”.

Interpretar los resultados del examen microscópico.

Métodos de estudio de diagnóstico serológico de la sífilis.

Familiarícese con los métodos de prevención y terapia específica.

Ser capaz de:

• Recoger material para la investigación de los pacientes.
• Interpretar los resultados del examen microscópico.
• Ser capaz de realizar la reacción de Wasserman.

Preguntas teóricas:

1. Patógeno.

• Propiedades. Resistencia.
• Patogenicidad para humanos y animales. Factores de patogenicidad, toxinas.
• Patogenia de la enfermedad en humanos, inmunidad.
• Diagnóstico microbiológico.
• Prevención y tratamiento específicos

2. Los objetivos de la puesta en escena de la reacción de Wasserman.

3. Valor diagnóstico de la reacción de Wasserman y reacciones sedimentarias.

4. El mecanismo de la reacción de Wasserman.

5. Características de la inmunidad en la sífilis.

Tareas prácticas realizadas en clase:

• Microscopía de preparaciones de demostración.
• Dibujar microportaobjetos de demostración en el protocolo.
• Análisis del esquema de diagnóstico de laboratorio.
• Elaboración del protocolo.

Literatura:

1. Korotyaev A.I., Babichev S.A., Microbiología médica, inmunología y virología / Libro de texto para universidades de medicina, San Petersburgo: “Literatura especial”, 1998. - 592 p.

2. Timakov V.D., Levashev V.S., Borisov L.B. Microbiología / Libro de texto - 2ª ed., revisada. y adicional - M.: Medicina, 1983, - 512 p.

3. Pyatkin K.D. Krivoshein Yu.S. Microbiología con virología e inmunología - Kiev: Escuela Vishcha, 1992. - 431 p.

4. Microbiología médica /Editado por V.I. Pokrovsky.- M.: GEOTAR-MED, 2001.- 768 p.

5. Guía de clases prácticas de microbiología, inmunología y virología. /Ed. MP Zykova.- M. “Medicina”. 1977. 288 pág.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. Microbiología. /Ed. F.K. Circasiano M.: Medicina, 1986. 512 p.

7. Apuntes de clase.

Literatura adicional:

1. Makiyarov K.A. Microbiología, virología e inmunología.- Alma-Ata.: “Kazajstán”, 1974. 372 p.

2. Titov M.V. Enfermedades infecciosas.- K., 1995. 321 p.

3. Shuvalova E.P. Enfermedades infecciosas.- M.: Medicina, 1990. - 559 p.

4. BME, T. 1, 2, 7.

5. Pavlovich S.A. Microbiología médica en gráficos: libro de texto. subsidio para gastos médicos in-tov Mn.: Superior. escuela, 1986. 255 p.

Breves pautas para trabajar en una lección práctica.

Al comienzo de la lección, se comprueba el nivel de preparación de los estudiantes para la lección.

• Trabajo independiente.
• puesta en escena de la reacción de Wasserman.
• Contabilización de la reacción de Wasserman y registro en el protocolo.
• Análisis y registro de esquemas de diagnóstico de laboratorio en el protocolo.

El trabajo independiente también incluye la microscopía de los preparativos de demostración y su boceto en el protocolo de la lección.

Al final de la lección se realiza un test de control y análisis de los resultados finales del trabajo independiente de cada alumno.

Mapa tecnológico para la realización de una lección práctica.

No.	Etapas	Tiempo en min.	Formas de aprender	Equipo	Ubicación
	Comprobar y corregir el nivel de salida de preparación para una lección.	20	Pruebas de nivel de salida	Mesas. Pruebas sobre el tema.	Sala de estudio
	Trabajo independiente	35	Grafico estructura lógica	Colección de medicamentos de demostración, productos biológicos.
	Autocontrol y corrección del material aprendido.	15	Programas de formación específicos
	Control de prueba	15	Pruebas
	Análisis de resultados del trabajo.

Algoritmo de trabajo de laboratorio:

Estudio del esquema de diagnóstico de laboratorio de la sífilis.

Microscopía de frotis preparados a partir de treponemas tisulares y cultivados.

Familiarización con las reglas para la recolección de material de pacientes para microscopía del material en estudio.

Microscopía y análisis de preparaciones de demostración.

Incorporar medicamentos al protocolo.

Registro de esquemas de diagnóstico de laboratorio en el protocolo.

Elaboración del protocolo.

Control de pruebas y análisis de los resultados del trabajo independiente de cada alumno.

Tareas de entrenamiento objetivo:

1. Un paciente ingresó en el hospital con diagnóstico de sífilis primaria. ¿Cuál de los siguientes métodos de diagnóstico se utiliza en esta etapa de la enfermedad?

A . microscopía de campo oscuro;

C. RP en gel

D. REAL ACADEMIA DE BELLAS ARTES

mi . inmunofluorescencia indirecta

2. En un paciente del departamento de cirugía maxilofacial, cuando se realizó la reacción de Wasserman resultó negativa. ¿Cuál de los siguientes resultados se utiliza para determinar el fenómeno del RSC negativo?

A . por aglutinación de eritrocitos;

B . por la presencia de sedimento de glóbulos rojos;

C . cambiando el color del líquido;

D . por formación de película

mi . por la presencia de hemólisis en los tubos de ensayo.

3. Al examinar a un paciente con KVD, se revelaron erupciones papulares-roséolosas en el torso y las extremidades y ganglios linfáticos agrandados. Diagnóstico preliminar de sífilis. ¿Qué método de diagnóstico de laboratorio puede confirmar este diagnóstico?

A. alérgico;

B. biológico;

C . bacteriológico;

D . bacterioscópico;

MI. ELISA

4. Durante la cita, el dentista descubrió un chancro duro en la boca del paciente. ¿Cuál de los siguientes métodos de diagnóstico de laboratorio se puede utilizar para hacer un diagnóstico?

A . Reacción de inmovilización de treponema.

B . Reacción de Wasserman

C. reacción de kahn

D. REAL ACADEMIA DE BELLAS ARTES

mi . bacterioscópico

5. Una mujer acudió a la consulta prenatal a las 8 semanas de embarazo. Durante el examen, le extrajeron sangre para comprobar la presencia de anticuerpos específicos contra los treponemas. ¿Cuál de las siguientes pruebas serológicas se puede utilizar para detectar anticuerpos contra el treponema?

A. La reacción de Wright.

B . Reacción de Wasserman

C. Reacción vidal

D . Reacción de Bordet-Gengou

MI. RTGA.

6. Para confirmar el diagnóstico de sífilis, el técnico de laboratorio realizó una reacción serológica, en la que utilizó el suero sanguíneo del paciente, el antígeno cardiolipídico, el complemento y un sistema indicador. ¿Cómo se llama la reacción dada?

A . Reacción de inmovilización de treponema;

B . Reacción de Wasserman;

C. reacción de kahn

D. PR

mi . reacción de inmunofluorescencia.

7. Al realizar una reacción serológica para detectar anticuerpos contra el agente causante de la sífilis en el suero sanguíneo del paciente, se incubaron treponemas con el suero del paciente en condiciones anaeróbicas, después de lo cual las bacterias perdieron su movilidad. ¿Qué reacción se dio y qué significa?

A . Reacción de Wasserman, el paciente tiene sífilis;

B .Reacción de Wassermann, el paciente se encuentra en periodo de incubación;

C . Reacción de inmovilización de treponema, el paciente tiene sífilis;

D . reacción de inmunofluorescencia indirecta, el paciente tiene sífilis;

mi . Reacción de inmovilización de treponema, el paciente una vez padeció sífilis.

8. Para el diagnóstico serológico de la sífilis mediante la reacción de Wasserman, el médico de laboratorio preparó los siguientes reactivos: antígeno cardiolipídico, solución isotónica de cloruro de sodio, sistema hemolítico. ¿Qué otro componente se necesita para realizar esta reacción?

A . treponema vivo;

B . glóbulos rojos de oveja;

C. complementar;

D . suero antiglobulina;

mi . Suero precipitante de diagnóstico.

9. En un portaobjetos preparado a partir de un punteado de los ganglios linfáticos del paciente, teñido según Romanovsky-Giemsa, el médico identificó microorganismos delgados con 12-14 rizos uniformes de color rosa pálido. ¿De qué agente causante de enfermedad infecciosa podemos hablar en este caso?

A . fiebre recurrente;

B. leptospirosis;

C. leishmaniasis

D. sífilis

MI. tripanosomiasis.

10. Se tomó un raspado de la mucosa oral de un paciente con sospecha de sífilis primaria. La microscopía de un frotis teñido con el método Romanovsky-Giemsa reveló bacterias enrevesadas de color púrpura. ¿Cuál de las siguientes conclusiones es correcta?

A . el paciente fue diagnosticado T. pálido;

B . Se encontró que el paciente tenía formas atípicas. T. pálido;

C . El paciente fue diagnosticado con treponemas no patógenos;

D . se eligió el método de pintura incorrecto;

MI. -

11. Un médico sospechó sífilis primaria en un paciente. ¿Qué material de investigación es apropiado recolectar para confirmar el diagnóstico?

A . líquido tisular de chancro y ganglios linfáticos puntiformes;

B . raspado de erupciones cutáneas;

C. fluido cerebroespinal;

D. moco de la nariz

MI. saliva.

12. Se extrajo sangre de un paciente con sospecha de sífilis secundaria para realizar pruebas. ¿Qué método de diagnóstico es apropiado utilizar para confirmar el diagnóstico?

A . Reacción de Vidal;

B . prueba de alergia;

D . Reacción de Bordet-Gengou

mi . método bacteriológico

C . reacción de inmunofluorescencia indirecta.

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T. pallidum subespecie pallidum es una bacteria con forma de espiral que mide 6-14x0,2-0,3 µm; en cultivos pueden ser grandes. Los rizos en espiral tienen la misma altura, puede haber hasta 14. Capaces de formar formas de L.

Básico método de reproducción de la sífilis- división transversal. El agente causante de la sífilis. No es muy estable en el ambiente externo y muere cuando se seca, pero en el frío persiste hasta 50 días. El calentamiento a una temperatura de 40 °C durante una hora provoca la pérdida de propiedades patógenas; a 48 °C las bacterias mueren en 10 minutos.

El agente causante de la sífilis. no se tiñe bien con tintes de anilina (de ahí el nombre de “espiroqueta pálida”). Bacterias de la sífilis reduce el nitrato de plata a plata metálica, lo que da a las telas un color negro o marrón oscuro.

En la práctica doméstica, el método de plateado de Morozov está muy extendido. Según Romanovsky-Giemsa, es de color rosa y no patógeno. treponema- en morado o azul. También se utiliza el contraste negativo de Burri.

Propiedades culturales de la sífilis. Cultivo del agente causante de la sífilis.

espiroqueta pálida exigente con las condiciones de cultivo, crece mal en medios artificiales; Aún faltan métodos para una producción estable de cultivos.

En nuestro país el mayor número cepas de sífilis identificado por los microbiólogos de Kazán V.M. Aristovsky y P.P. Geltser.

Estos "Kazan" cepas de sífilis junto con la cepa Reiter, se utiliza para la producción de Ag para el serodiagnóstico. Con cultivo a largo plazo. bacterias de la sífilis adaptarse a ambientes más simples (por ejemplo, Kitta-Tarozzi) y perder propiedades patógenas.

Colonias de sífilis pequeños, aparecen entre el 3 y el 5º día de cultivo.

El contenido del artículo.

Treponema pallidum

Morfología y fisiología.

T. pallidum tiene forma de espiral, un cilindro protoplástico, que está retorcido en 8-12 verticilos. 3 flagelos periplásmicos se extienden desde los extremos de la célula. Treponema pallidum no acepta bien los tintes de anilina, por lo que se tiñe con pintura Romanovsky-Giemsa. Sin embargo, el método más eficaz es estudiarlo en un microscopio de campo oscuro o de contraste de fases. Microaerófilo. No crece en medios nutritivos artificiales. T. pallidum se cultiva en tejido testicular de conejo, donde se multiplica bien y conserva plenamente sus propiedades, provocando orquitis en el animal. Antígenos. La estructura antigénica de T. pallidum es compleja. Está asociado con proteínas de la membrana externa, lipoproteínas. Estos últimos son antígenos de reacción cruzada comunes a los humanos y al ganado. Se utilizan como antígeno en la reacción de Wassermann para el serodiagnóstico de la sífilis.

Patogenicidad y patogénesis.

Los factores de virulencia de Treponema pallidum incluyen proteínas de la membrana externa y LPS, que exhiben sus propiedades tóxicas después de su liberación de la célula. Al mismo tiempo, aparentemente, la capacidad del treponema, cuando se divide, para formar fragmentos separados que penetran profundamente en los tejidos, también puede atribuirse a factores de virulencia. Hay tres etapas en la patogénesis de la sífilis. Con la sífilis primaria, se observa la formación de un foco primario: chancro duro en el sitio de la puerta de entrada de la infección, seguido de la penetración en los ganglios linfáticos regionales, donde el patógeno se multiplica y acumula. La sífilis primaria dura aproximadamente 6 semanas. La segunda etapa se caracteriza por la generalización de la infección, acompañada de la penetración y circulación del patógeno en la sangre, que se acompaña de erupciones cutáneas. La duración de la sífilis secundaria en pacientes no tratados oscila entre 1 y 2 años. En la tercera etapa se detectan granulomas infecciosos (gomas propensas a pudrirse), localizados en órganos y tejidos internos. Este período en pacientes no tratados dura varios años y termina con daño al sistema nervioso central (parálisis progresiva) o a la médula espinal (tabes dorsalis).

Inmunidad

Con la sífilis, se produce una respuesta inmune humoral y celular. Los anticuerpos resultantes no tienen propiedades protectoras. La respuesta inmune celular está asociada con la fijación del patógeno y la formación de granulomas. Sin embargo, no se produce la eliminación de los treponemas del organismo. Al mismo tiempo, las condiciones ambientales desfavorables inducen la formación de quistes por treponema, que se localizan en la pared de los vasos sanguíneos. Se cree que esto indica la transición de la enfermedad a la remisión. Junto con los quistes, los treponemas forman formas L. Con la sífilis, se forma HRT, que puede detectarse mediante una prueba cutánea alérgica con una suspensión muerta de treponemas. Se cree que la manifestación del período terciario de la sífilis está asociada con la TRH.

Ecología y epidemiología

La sífilis es una infección típicamente antroponótica. Sólo las personas que son reservorios de infección por naturaleza se enferman. La transmisión de la infección se produce por contacto sexual y, con mucha menor frecuencia, a través de ropa interior y otros objetos. En el ambiente externo (aire), los treponemas mueren rápidamente.

Sífilis y otras treponematosis.

La sífilis es una enfermedad venérea infecciosa crónica del ser humano, tiene un curso cíclico progresivo, afecta la piel, las membranas mucosas, los órganos internos y el sistema nervioso. El agente causante de la enfermedad es Treponema pallidum. Hay tres períodos principales de desarrollo de la sífilis, cuyos métodos de diagnóstico de laboratorio tienen sus propias características. En el período inicial de la enfermedad, el material para el diagnóstico de laboratorio es secreción de chancro, punteado de ganglios linfáticos, raspados de roséola, sífilis, etc. Durante los períodos secundario y terciario se examina el suero sanguíneo y el líquido cefalorraquídeo. Debido a que es imposible aislar cultivos puros de treponemas en laboratorios bacteriológicos convencionales, durante el período primario de la enfermedad (rara vez más tarde) se realiza un método de diagnóstico bacterioscópico. A partir del período secundario se utilizan principalmente métodos serológicos.

Examen bacterioscópico

Antes de tomar material patológico, primero se limpia la úlcera sifilítica con un hisopo de algodón para eliminar la placa sebácea y la microflora contaminante. Luego, se irrita la parte inferior del chancro con un bisturí o una espátula de metal, o se aprieta vigorosamente la úlcera desde los lados con los dedos en un guante de goma para liberar el exudado de la herida. Si queda una pequeña cantidad de líquido transparente, se puede añadir a una gota de solución de cloruro de sodio al 0,85%. Si es imposible extraer material del fondo del chancro (fimosis, cicatrización de la úlcera, etc.), se realiza una punción de los ganglios linfáticos regionales y se aplica una gota de líquido de la úlcera o punteado a un vaso fino. portaobjetos (1,1-1,2 mm), cubierto con un cubreobjetos y examinado en un campo de visión oscuro (¡más bonito!), o utilizando un microscopio de contraste de fases o anoptral. El treponema pálido en un campo de visión oscuro tiene la apariencia de una superficie ligeramente brillante. espiral delgada y delicada con rizos primarios empinados, uniformes y redondeados. Los movimientos son suaves, por lo que se dobla en ángulo. Pero especialmente características son las oscilaciones pendulares. El agente causante de la sífilis debe distinguirse de Treponema refringens (que coloniza los genitales externos), que es más grueso, más áspero, con rizos grandes y desiguales y tiene movimientos erráticos activos, pero no se dobla. Los treponemas de la simbiosis fusosp-iroqueta se distinguen por un patrón delgado, rizos suaves y movimientos erráticos. Al diagnosticar la sífilis oral, el treponema pálido debe diferenciarse de los treponemas dentales, especialmente T. dentium, así como de T. buccalis. El primero de ellos es generalmente difícil de distinguir del sifilítico. Sin embargo, es más corto, tiene de 4 a 8 rizos afilados y no tiene ningún movimiento pendular. T. buccalis es más grueso, tiene rizos iniciales ásperos y movimiento errático, en caso de duda hay que tener en cuenta que todos los treponemas saprofitos, a diferencia del pálido, se tiñen bien con tintes de anilina. No penetran en los ganglios linfáticos, por lo que el estudio de los puntiformes tiene un gran valor diagnóstico. La identificación de treponemas típicos en los puntos de los ganglios linfáticos confirma indiscutiblemente el diagnóstico de sífilis, por lo que el examen de campo oscuro de las gotas prensadas es el mejor método para identificar el agente causante de la sífilis. Sus ventajas son que el material se examina rápidamente y la morfología de los treponemas en estado vivo es más característica. Ya no se utilizan manchas de tinta con el método Burri. Si es imposible realizar la investigación en un campo de visión oscuro, se pueden utilizar varios métodos de tinción. Treponema pallidum no acepta bien los tintes de anilina. De los muchos métodos de tinción propuestos, los mejores resultados se obtienen con la tinción de Romanoveki-Giemsa. Los frotis preparados se fijan con alcohol metílico o en la mezcla de Nikiforov. Los resultados de claridad se obtienen cuando se vierte pintura Romanovsky-Giemsa en la preparación. Para ello, se colocan fragmentos de cerillas en una placa de Petri, se les coloca un portaobjetos de vidrio, se untan y se vierte tinte hasta que moje el frotis. El tiempo de pintura se duplica. Bajo el microscopio, los treponemas pálidos tienen un color rosa suave, mientras que otros tipos de treponemas son de color azul o azul violeta. También se puede utilizar el método de plateado de Morozov. Los treponemas conservan completamente sus características morfológicas y, al microscopio, se ven marrones o casi negros. Pero las preparaciones plateadas no se conservan durante mucho tiempo. Recientemente, los métodos de tinción con treponemas rara vez se utilizan. Si se inicia el tratamiento de la sífilis con quimioterapia, es prácticamente imposible identificar el patógeno en materiales patológicos, incluso con la ayuda de un campo de visión oscuro. Si se recibe una prueba negativa, se debe repetir.

Diagnóstico serológico de sífilis.

Al realizar reacciones serológicas, ahora se utilizan los siguientes métodos de investigación, unificados en Ucrania: reacción de fijación del complemento (CFR), inmunofluorescencia (RIF), inmovilización treponémica (PIT), reacción de microprecipitación (MPR) y ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). ) Durante muchos años, la reacción principal y más común fue la reacción de fijación del complemento o reacción de Wassermann (RW). Para realizarlo se utiliza suero sanguíneo de un paciente con sífilis y líquido cefalorraquídeo en caso de daño sistema nervioso... La técnica de estadificación de la reacción de Wasserman no difiere de la técnica de realización de RSC. La única diferencia es que para RO no solo se utiliza un antígeno treponémico específico, sino también un antígeno de cardiolipina inespecífico.l La extracción de 5 a 10 ml de sangre de la vena cubital se realiza con el estómago vacío o no antes de 6 horas después de una comida. No se debe extraer sangre de pacientes con fiebre, después de beber alcohol y alimentos grasos, de mujeres embarazadas 10 días antes del parto y de mujeres en trabajo de parto. El suero extraído de la sangre se calienta a una temperatura de 56°C durante 30 minutos para inactivar su propio complemento. La RO debe colocarse con dos antígenos: específico y no específico.El antígeno treponémico específico para ultrasonido se prepara a partir de cultivos de Treponema pallidum (cepa Reiter) cultivados en tubos de ensayo y expuestos a ultrasonido. Se produce en forma de polvo liofilizado. El antígeno de cardiolipina inespecífico se prepara mediante extracción alcohólica de lípidos de corazón bovino y purificación a partir de mezclas de lastre, envasado en ampollas de 2 ml. Para introducir el antígeno en la vía oral, se titula según estas instrucciones. Inmediatamente antes de la estadificación de RV, la titulación del complemento y del suero hemolítico se realiza de acuerdo con el mismo esquema que en RSC. La reacción de Wasserman se realiza utilizando métodos tanto cualitativos como cuantitativos. Se lleva a cabo una reacción cualitativa en tres tubos con dos antígenos según el esquema habitual. Los resultados de la reacción se evalúan según el sistema 4 plus: reacción positiva: cuando hay un retraso completo o significativo en la hemólisis (4 +, 3+); reacción débilmente positiva: retraso parcial de la hemólisis (2 +); reacción cuestionable: ligero retraso en la hemólisis (1 +). En caso de hemólisis completa, la RO se considera negativa. Cada suero que haya dado una reacción cualitativa positiva debe ser examinado mediante un método cuantitativo con su dilución seriada de 1:10 a 1:640. El título del suero problema (título de reagina ) se considera su dilución máxima, a la que provoca un retraso completo (4 +) o significativo (3 +) en la hemólisis. El método cuantitativo de estadificación de la RO es importante para evaluar la eficacia del tratamiento de la sífilis. Una rápida disminución del título de reagina indica un tratamiento exitoso. Si el título sérico no disminuye durante mucho tiempo, esto indica una falta de eficacia de los fármacos utilizados y la necesidad de cambiar las tácticas de tratamiento. En caso de pilosis por sífilis primaria seronegativa o latente, terciaria o congénita, se recomienda realizar la prueba de Wasserman en frío según el mismo esquema. Si se sospecha neurosífilis, se realiza RO con líquido cefalorraquídeo, que se inactiva al no contener complemento propio. Se introduce en la reacción licor sin diluir en diluciones de 1:2 y 1:5. La reacción de Wasserman se vuelve positiva 2-3 semanas después de la aparición del chancro. En la sífilis secundaria, es positivo en el 100% de los casos, en la sífilis terciaria, en el 75%. Además, en el complejo de reacciones serológicas (CSR), se utiliza como prueba de detección una reacción de microprecipitación con plasma sanguíneo o suero inactivado.

Microrreacción de precipitación

La microrreacción de precipitación se realiza con antígeno de cardiolipina. El principio de la reacción es que cuando se añade una emulsión de antígeno cardiolipina al plasma o suero de un paciente con sífilis, se forma un precipitado (complejo antígeno-anticuerpo), que precipita en forma de escamas blancas. Se utiliza la siguiente técnica: se pipetean tres gotas de plasma (o suero inactivado) en el pocillo de la placa y luego se añade una gota de emulsión de antígeno de cardiolipina estándar. Los componentes de la reacción se mezclan agitando la placa durante 5 minutos, después de lo cual se añaden tres gotas de solución de cloruro de sodio al 0,9% y se dejan a temperatura ambiente durante otros 5 minutos. Control obligatorio con suero sanguíneo débilmente positivo. Los resultados se evalúan a simple vista sobre una fuente de luz artificial. Cuando aparecen escamas grandes en el agujero, la reacción se considera positiva (4 +, 3 +), las escamas medianas y pequeñas se consideran débilmente positivas (2 +, 1 +). Si el resultado es negativo, no se forma precipitado. La microrreacción de precipitación también se puede realizar mediante un método cuantitativo para establecer el título de los anticuerpos precipitantes y evaluar la eficacia del tratamiento sobre esta base. Se obtienen títulos de MRP más elevados con plasma que con suero. En el extranjero, el análogo de MRP con suero de paciente es el VDRL (laboratorio de investigación de enfermedades venéreas) y con plasma, el RPR (reagina plasmática rápida).

Reacción de inmunofluorescencia (RIF)

El grupo de reacciones específicas que se utilizan ampliamente para el diagnóstico serológico de la sífilis incluye la reacción de inmunofluorescencia indirecta. Como antígeno, utiliza una suspensión de la cepa Nichols de Treponema pálido patógeno del parénquima de los testículos de conejo el séptimo día después de la infección. La reacción se lleva a cabo en dos modificaciones: RIF-ABS y RIF-200. En la primera opción, se utiliza un absorbente de anticuerpos (sonicato): antígeno treponémico ultrasónico para CSC. Lo produce la empresa Kaunas para la producción de preparados bacterianos (Lituania). Con la opción RIF-200, el suero del paciente se diluye 200 veces para eliminar la influencia de los anticuerpos antitreponémicos del grupo. RIF-ABS se realiza en portaobjetos de vidrio finos y bien desgrasados. En la parte posterior del vaso, un cortador de vidrio marca 10 círculos con un diámetro de 0,7 cm, dentro del círculo se aplica al vidrio un antígeno, una suspensión de treponema pálido, en tal cantidad que quedan entre 50 y 60 de ellos. en el campo de visión. Los frotis se secan al aire, se fijan sobre la llama y en acetona durante 10 minutos. Agregue 0,2 ml de sorbente (sonicado) y 0,5 ml del suero sanguíneo del paciente en un tubo de ensayo aparte y mezcle bien. La mezcla se aplica sobre el frotis (antígeno) para cubrirlo uniformemente y se mantiene durante 30 minutos en una cámara húmeda a 3-7 ° C (reacción de fase II). Después de esto, el frotis se lava con tampón fosfato, se seca y se le aplica suero fluorescente anti-shobulin durante 30 minutos, se coloca en una cámara húmeda a 37 ° C (fase II). La preparación se lava nuevamente con tampón de fosfato, se seca y se examina bajo un microscopio fluorescente. Con una reacción positiva, los treponemas pálidos emiten una luz verde dorada, con una reacción negativa, no brillan. La técnica para configurar RIF-200 es Al igual que RIF-ABS, sólo que el suero sanguíneo del paciente se prediluye 200 veces con tampón fosfato. Al realizar una reacción de inmunofluorescencia con el líquido cefalorraquídeo de un paciente con sífilis del sistema nervioso, se utilizan RIF-c y RIF-10, es decir. El licor se introduce en la reacción sin activar y se diluye o se diluye 1:10.

Reacción de inmovilización de Treponema pallidum (PIT)

La reacción de inmovilización del treponema pálido (PIT) se basa en el fenómeno de pérdida de su movilidad en presencia de anticuerpos antitreponémicos inmovilizadores del suero y complemento del paciente en condiciones de anaerobiosis. Como antígeno en la reacción se utiliza una suspensión de treponema pálido del tejido testicular de un conejo infectado con la cepa de laboratorio de Nichols. La suspensión se diluye con una solución estéril de cloruro de sodio al 0,85% de modo que queden entre 10 y 15 espiroquetas en el campo de visión. Para realizar la reacción se utilizan 0,05 ml de suero sanguíneo del paciente, 0,35 ml de antígeno y 0,15 ml de complemento. mezclado en un tubo de ensayo esterilizado. El experimento se acompaña de controles de suero, antígeno y complemento. Los tubos se colocan en un anerostato, se crean las condiciones anatómicas y se mantienen en un termostato durante 18-20 horas a una temperatura de 35 ° C. Luego se preparan gotas prensadas de cada tubo, se cuentan al menos 25 treponemas y cuántos de ellos son móviles y se anotan cuantos están anotados. El porcentaje de inmovilización específica del treponema pálido se calcula mediante la fórmula: x = (A-B) / B * 100, donde X es el porcentaje de inmovilización, A es el número de treponemas móviles en el tubo de control, B es el número de móviles treponemas en el tubo de ensayo. La reacción se considera positiva cuando el porcentaje de inmovilización es de 50 o más, débilmente positiva - de 30 a 50, dudosa - de 20 a 30 y negativa - de 0 a 20. En los laboratorios prácticos se utiliza el método melanger más simple PIT para M.M. Ovchinnikov. Las condiciones experimentales anaeróbicas se crean colocando la mezcla reactiva (suero, antígeno, complemento) en un melangeur, cuyos extremos están cerrados con un anillo de goma. La técnica de Melanger permite prescindir de equipos y aparatos complejos para crear anaerobiosis, pero da resultados que no se obtienen con la técnica clásica del microanaerostato. Las reacciones de inmovilización del treponema y la inmunofluorescencia se consideran las más específicas en el diagnóstico serológico de la sífilis. Y, sin embargo, no se recomienda el uso de PIT, a pesar de su especificidad, en la práctica generalizada debido a la laboriosidad de su implementación.

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA)

El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) se realiza tanto con el antígeno de cadriolipina (reacción de selección no específica) como con el antígeno treponémico (reacción específica), lo que confirma el diagnóstico de sífilis. El principio del método ELISA indirecto es que el antígeno adsorbido en la En la fase sólida, en los pocillos de la tableta se agrega el suero problema. Si contiene anticuerpos contra treponemas, se forma un complejo antígeno-anticuerpo (fase II). Después de eliminar por lavado los anticuerpos no específicos no unidos, se agrega a los pocillos suero antiglobulina conjugado con una enzima (con mayor frecuencia peroxidasa de rábano picante). El conjugado se une firmemente al complejo antígeno-anticuerpo (fase II) Después de lavar el conjugado no unido, se añade a los pocillos el sustrato de tinción OPD - ortofenilendiamina (fase III). La reacción de la peroxidasa se detiene añadiendo ácido sulfúrico. Para el control se utilizan las mismas muestras con sueros positivos y obviamente negativos, los resultados del análisis se registran mediante un fotómetro que determina la densidad óptica en modo de doble onda (492 nm y 620 nm). Para preparar una reacción enzimática-anticuerpo, además del fotómetro, se necesitan pipetas automáticas de uno y ocho canales con punta de polipropileno y los correspondientes juegos de sistemas de pruebas de diagnóstico. El método ELISA se utiliza ampliamente en el diagnóstico serológico de la sífilis. Es igualmente eficaz para detectar la enfermedad en el período de incubación (1-2 semanas después de la infección), con las manifestaciones clínicas de la enfermedad y sus formas latentes. Muy a menudo, el ELISA se utiliza en exámenes de detección de la población, especialmente en las estaciones de transfusión de sangre. En la práctica de laboratorio, a veces también se utilizan la reacción de adhesión inmune (IAR) y la reacción de hemaglutinación indirecta (IRHA). El primero de ellos se basa en el hecho de que los treponemas testiculares patógenos de la cepa Nichols, cuando se mezclan con el suero del paciente en presencia de complemento y glóbulos rojos humanos, se adhieren a la superficie de los glóbulos rojos. La RNGA se utiliza ampliamente para el diagnóstico de sífilis debido a su simplicidad metodológica. Se vuelve positivo dentro de las tres semanas posteriores a la infección. Un resultado de reacción positiva permanece durante años después de la recuperación. Un análogo de esta reacción en el extranjero es la TRHA (hemoaglutinación de Treponema pallidum).