Taxonomía, neumococo, métodos de laboratorio para influenza.

MINISTERIO DE SALUD DE LA FEDERACIÓN DE RUSIA DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA DE LA UNIVERSIDAD MÉDICA DEL ESTADO DE KAZÁN

NEUMOCOCO

KAZÁN 1999

CDU 576.851.21(07)

Publicado por decisión del Consejo Central de Coordinación y Metodología de la Universidad Médica Estatal de Kazán.

Compilado por:

(Jefe del Departamento de Microbiología, Doctor en Ciencias Médicas, Profesor O.K. Pozdeev, Asistente del Departamento de Microbiología, Candidato de Ciencias Médicas, E.R. Fedorova.

Revisores:

Jefe del Departamento de Epidemiología de la Universidad Médica Estatal de Kazán, Doctor en Ciencias Médicas, Profesor Asociado M.Sh. Shafeev, Jefe del Departamento de Epidemiología de la Academia Médica Estatal de Kazán, Doctor en Ciencias Médicas, Profesor V.E. Grigóriev.

Neumococos /O.K. Pozdeev, E.R. Fedorov - Kazán: KSMU, 1999. - 14 s.

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Universidad Médica Estatal de Kazán, 1999

El neumococo (Streptococcus pneumoniae) fue aislado por primera vez por Pasteur (1881) mientras trabajaba en una vacuna antirrábica e inicialmente se consideró el agente causante de la rabia. Frenkel y Weichselbaum (1884) demostraron el papel etiológico del microorganismo en el desarrollo de la neumonía en humanos. Las bacterias colonizan organismos humanos y animales y pertenecen al grupo de los llamados estreptococos "orales". Son los principales agentes causantes de la neumonía y también pueden provocar pleuresía, meningitis, úlceras corneales progresivas, inflamación purulenta del oído medio, afecciones sépticas y otras enfermedades. En la IX edición de la guía de bacterias de Bergey (1994), los neumococos se incluyen en el grupo 17, "Cocos grampositivos".

Epidemiología de las lesiones. El neumococo es uno de los principales agentes causantes de la neumonía bacteriana registrada fuera de los hospitales (2 a 4 casos por 1.000 personas); Cada año se observan en el mundo al menos 500.000 casos de neumonía neumocócica (el valor real es mucho mayor). Los niños y los ancianos son los más susceptibles a las infecciones. El reservorio de infección son los pacientes y portadores (20-50% de los niños en edad preescolar y 20-25% de los adultos); la principal vía de transmisión es el contacto; durante los brotes también se transmite por el aire. La incidencia máxima ocurre en la estación fría. En la gran mayoría de los casos, las formas clínicas de infección se desarrollan cuando la resistencia del cuerpo se ve afectada (incluso debido al estrés por frío), así como en el contexto de otras patologías (anemia falciforme, enfermedad de Hodgkin, infección por VIH, mieloma, diabetes mellitus). , condiciones después de la esplenectomía, etc.) o con alcoholismo. Las opciones 1, 2 y 3 tienen la mayor importancia epidemiológica en patología en adultos; para niños: 1, 2, 3 y 14 opciones. La virulencia de los serovares en orden descendente son las variantes 3, 1, 2, 5, 7 y 8. Los ratones blancos (si están infectados, mueren de septicemia en 24 horas), los terneros, corderos, lechones, perros y monos son sensibles a los neumococos.

Morfología. Los neumococos son inmóviles, no forman esporas y tienen una forma ligeramente alargada, que recuerda a los contornos de la llama de una vela. En los frotis de material clínico, se disponen en pares, cada uno de los cuales está rodeado por una cápsula gruesa. En frotis de medios de cultivo, pueden ubicarse en cadenas cortas y ser más redondeados. En medios simples forman una cápsula delgada; su desarrollo es estimulado por la introducción de sangre, suero o líquido ascítico. La formación de cápsulas es más pronunciada en las bacterias de tipo III. Cuando se disponen en cadenas, la cápsula puede ser común.

Bienes culturales. Los neumococos son aerobios o anaerobios facultativos; Durante el cultivo se prefieren condiciones capnófilas (5-10 % de CO2). Son quimioorganogrofos y crecen bien en sangre o suero suplementados con 0,1% de glucosa. Pueden crecer en el rango de temperatura de 28-42°C, óptimo - 37°C. pH óptimo -7,6-7,8. En medios densos forman colonias delicadas, translúcidas y claramente definidas con un diámetro de aproximadamente 1 mm. A veces pueden ser planos con una depresión central; Como otros estreptococos, las colonias nunca se fusionan.

entre ellos mismos. En agar sangre forman pequeñas colonias translúcidas de color gris verdoso. El centro de las colonias es más oscuro, la periferia es más clara. Debajo de la colonia y a lo largo de su periferia, se ve una zona de a-hemólisis en forma de una zona de color verdoso (que se debe a la transición de la hemoglobina a metahemoglobina). Las colonias de neumococo tipo III suelen tener una consistencia mucosa y miden hasta 2 mm. Están un poco turbios y pueden fusionarse entre sí. Forman colonias en forma S y R. Al pasar de la forma S a la R, pierden la capacidad de sintetizar la cápsula. En medios líquidos con suero y glucosa al 0,2% dan una turbidez uniforme y un pequeño sedimento floculante. Con un cultivo prolongado, el sedimento aumenta.

Sostenibilidad. Los neumococos pertenecen al grupo de microorganismos inestables. Persisten en esputo seco hasta por dos meses. Capaz de almacenarse durante mucho tiempo a bajas temperaturas; con una temperatura de 60 °C mueren en 3-5 minutos. Una solución de ácido fénico al 3% los mata en 1-2 minutos. La optoquina (en una concentración de 1:100.000) y la bilis tienen un efecto perjudicial sobre los neumococos, que se utilizan para identificar bacterias.

Los neumococos se diferencian de otros microorganismos en varias propiedades (Tabla 1).

Tabla 1 Propiedades bioquímicas de los neumococos.

Sustrato de prueba	Resultado	Sustrato de prueba	Resultado
Crecimiento a 100°C
		rafinosa
Miércoles con 6,5% Nad
a-hemólisis
B-hemólisis		trehalosa
		fosfatasa
hipurato		β-galactosidasa
Glicerol
Designaciones: “+” - 90% o más de las cepas son positivas; (+) - 80-89% de las cepas son positivas; d - entre el 21 y el 79% de las cepas son positivas; (-) - 11-20% de las cepas son positivas; “- - El 90% o más de las cepas son negativas.

Estructura antigénica. En los neumococos se han encontrado varios tipos de antígenos: polisacárido, antígeno 0-somático, situado en la pared celular; antígenos K capsulares polisacáridos y proteína M. El antígeno somático polisacárido es similar a la sustancia C de otros estreptococos. La relación determina la similitud en la estructura química de los ácidos ribitteicoicos asociados con el fosfato de colina. Los antígenos cápsula también tienen una naturaleza polisacárida, constituida por monosacáridos repetidos en varias combinaciones: D-glucosa, D-galactosa y L-ramnosa. Según la estructura de los antígenos capsulares, los neumococos se dividen en 84 serovares. Cabe recordar que los antígenos capsulares reaccionan de forma cruzada con antisueros contra antígenos de estreptococos de los grupos A y B, así como con sueros contra antígenos de Klebsiella y Escherichia. Durante la transición de la forma S a la R, se pierden antígenos capsulares. Para la serotipificación de neumococos, se producen sueros grupales, designados con letras latinas (A, B, C, D, etc.) y sueros serovariantes, designados con números romanos. El suero aglutinante III no está incluido en las mezclas de sueros. Se libera por separado y no se puede criar. En humanos, los neumococos de las serovariantes I, II y III se aíslan con mayor frecuencia. Son las más virulentas para el ser humano, por lo que la prueba de aglutinación se realiza inicialmente utilizando antisueros contra estas variantes. Si el resultado es negativo, se realiza la reacción de aglutinación con una mezcla de sueros A, B, C, etc. (hasta obtener un resultado positivo), y luego con antisueros separados. Para una identificación más rápida de los serovares, se utiliza la reacción de Neufeld (hinchazón de la cápsula inmune). El método se basa en la capacidad de las cápsulas de neumococo para aumentar de volumen en presencia de un antisuero homólogo, lo que se registra mediante microscopía óptica óptica. Los polisacáridos capsulares tienen propiedades sensibilizantes, que se manifiestan en el desarrollo de una reacción de hipersensibilidad de tipo retardado, detectada mediante pruebas cutáneas.

Factores de patogenicidad. El factor principal es la cápsula, que protege a las bacterias del potencial microbicida de los fagocitos y las desvía de la acción de las opsoninas. Las cepas no encapsuladas son prácticamente avirulentas y raras. La mayor parte del conjunto de AT antineumocócicos consta de cápsulas de AT a Ag. Una función importante de la cápsula y de la proteína M es también asegurar la adhesión a la mucosa. La sustancia C es esencial, ya que interactúa específicamente con la proteína C reactiva. La consecuencia de tal reacción es la activación de la cascada complementaria y la liberación de mediadores de la fase aguda de la inflamación; su acumulación en el tejido pulmonar estimula la migración de fagocitos polimorfonucleares. La formación de potentes infiltrados inflamatorios se acompaña de una alteración de la homeostasis del tejido pulmonar y su hepatización. Los neumococos producen endotoxinas, hemolisinas a y beta (neumolisinas) y leucocidina. La α-neumolisina es una proteína termolábil capaz de neutralizar la O-estreptolisina,

Sustancia eritrogénica, neuraminidasa. Los neumococos también sintetizan una serie de enzimas que contribuyen a la patogénesis de las lesiones: muramidasa, hialuronidasa (promueve la propagación de microorganismos en los tejidos), peptidasa (degrada la IgA).

Patogenia de las lesiones. El biotopo de los neumococos es el tracto respiratorio superior. La patogénesis de la mayoría de las neumonías implica la aspiración de saliva que contiene S. pneumoniae y la penetración de bacterias en las vías respiratorias inferiores. Es esencial la violación de los mecanismos protectores de drenaje (impulso de tos y aclaramiento mucociliar). En los adultos se observan con mayor frecuencia lesiones pulmonares lobares, en niños y ancianos predominan las lesiones peribronquiales o focales. La formación de potentes infiltrados inflamatorios se acompaña de una alteración de la homeostasis del tejido pulmonar y su hepatización. Las infecciones por el serovariedad 3 más virulento pueden ir acompañadas de la formación de cavidades en el parénquima pulmonar. Desde el foco primario, el patógeno puede penetrar en la cavidad pleural y el pericardio o diseminarse por vía hematógena y provocar meningitis, endocarditis y lesiones articulares.

Manifestaciones clínicas. La neumonía neumocócica clásica comienza repentinamente; Notan un aumento de la temperatura corporal, tos productiva y dolor en el pecho. En personas debilitadas y ancianos, la enfermedad se desarrolla lentamente, con fiebre leve, alteración de la conciencia y signos de insuficiencia cardíaca pulmonar. La meningitis estreptocócica se registra en todos los grupos de edad; se caracterizan por un inicio violento con aumento de la temperatura corporal, rigidez de los músculos del cuello, dolor de cabeza, náuseas y vómitos. Las lesiones de los vasos de las meninges suelen ir acompañadas de pérdida del conocimiento; entre los niños y los ancianos, la mortalidad puede alcanzar el 80%. Muy a menudo, se observan lesiones neumocócicas hematógenas, así como sinusitis, mastoiditis, otitis media, endocarditis y peritonitis, en personas con inmunodeficiencias (por ejemplo, infectadas por el VIH) o pacientes con esplenectomía. Después de una enfermedad se desarrolla una inmunidad inestable, que es específica del tipo y está causada por la aparición de anticuerpos contra el típico polisacárido capsular.

Tratamiento. La base del tratamiento de la infección neumocócica son los antibióticos: penicilina, tetraciclina, cloranfenicol, vancomicina, rifampicina, ceftriaxona.

Prevención. La prevención inespecífica de las infecciones neumocócicas tiene como objetivo identificar a los pacientes y portadores con su tratamiento posterior. Para una prevención específica de la infección, los niños mayores de dos años, los adultos en situación de riesgo y las personas sanas durante un brote de enfermedad se vacunan con la vacuna polivalente de polisacárido "Pneumovex 23". El medicamento contiene 23 antígenos de polisacáridos capsulares de neumococos (1, 2, 3, 4, 5, 6B 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1-9F, 19A, 20). , 22F , 23F, 33F). Antígenos

Los neumococos se obtuvieron del 90% de las cepas aisladas de la sangre de pacientes con infección neumocócica invasiva en los EE. UU. y correspondientes a las cepas encontradas en Rusia. La inmunización se realiza dos veces con un intervalo de 5 a 8 años.

Después de la vacunación, se crea una inmunidad artificial, activa y específica del tipo.

Diagnóstico de laboratorio. El “estándar de oro” es el aislamiento de patógenos. Cabe recordar que el material debe examinarse rápidamente, porque Las bacterias son propensas a una rápida autólisis debido a la actividad de las enzimas intracelulares. El material para el estudio es esputo, derrame pleural y otros exudados, líquido cefalorraquídeo, sangre, moco de nariz y faringe, secreción de ulceraciones oculares, secreción de oído, orina, trozos de órganos (en caso de muerte del paciente). . Se puede emitir una señal de respuesta a la infección neumocócica cuando se detectan neutrófilos y diplococos lanceolados grampositivos (al menos 10 por campo de visión) en los frotis de esputo. De lo contrario, recurren al aislamiento del patógeno.

La primera etapa del estudio. El material patológico se somete a una bacterioscopia preliminar (excepto sangre). El esputo se coloca en una placa de Petri estéril, se lava, se captura un bulto mucoso purulento con un asa, se muele en un portaobjetos de vidrio, se seca y se tiñe con tinción de Gram. El frotis revela cocos grampositivos con forma de lanceta u ovalada rodeados por una cápsula (la formación de cápsulas se observa solo en neumococos aislados de animales enfermos e infectados). La detección de cápsulas neumocócicas se puede realizar mediante el método Burri-Gins. La inoculación del material patológico se realiza en agar sangre o suero al 5-10% y en medio de enriquecimiento (caldo de suero al 8-10%). Si se sospecha sepsis de naturaleza neumocócica, se inoculan de 5 a 10 ml de sangre del paciente en 45 a 90 ml de caldo de suero. El líquido cefalorraquídeo, si es claro, se centrifuga y se inoculan unas gotas del sedimento en un medio nutritivo. Como medio de enriquecimiento se utiliza agar de suero semisólido. Los cultivos se incuban a 37 °C durante 24 horas. El mejor método para aislar un cultivo puro de neumococos es infectar ratones blancos con material patológico. El esputo, lavado en una placa de Petri con solución salina estéril, se muele en un mortero estéril con una mano de mortero estéril o con vidrios rotos mientras se añade solución salina en una proporción de 1:2-1:5. Se sedimenta la suspensión, se administra por vía intraperitoneal el líquido sobrenadante en una cantidad de 0,5 a 1 ml a ratones blancos. Si hay neumococos en el material, los ratones mueren en 72 horas. Los neumococos típicos se encuentran en frotis de órganos y sangre. Los órganos y la sangre también se cultivan en caldo de suero y en placas de Petri con agar sangre o suero.

Segunda etapa del estudio. Se estudia el patrón de crecimiento en medios nutritivos. En agar sangre, las colonias de neumococos son pequeñas, redondas y lisas.

Bordes tiernos, rodeados por una zona de verdor del medio (que recuerda mucho al crecimiento de los estreptococos viridans). En agar suero, las colonias son delicadas, translúcidas y transparentes. Durante la bacterioscopia de frotis teñidos con Gram. Se detectan diplococos grampositivos sin cápsulas. Después de la bacterioscopia, las colonias sospechosas de neumococos se subcultivan en suero inclinado o agar sangre o en caldo de suero. Al microscopizar frotis del medio de enriquecimiento, junto con diversas microfloras, se pueden detectar cocos grampositivos, dispuestos en pares o en cadenas cortas. El material del medio de enriquecimiento se transfiere a medios nutritivos sólidos. Los cultivos se incuban a 37°C durante 24 horas.

La tercera etapa del estudio. En muestras inclinadas de agar sangre, los neumococos forman una capa delicada, delgada y translúcida. En el caldo de suero, los neumococos provocan turbidez y un ligero sedimento. En frotis de medios de cultivo sólidos, los neumococos pueden tener diferentes apariencias. Junto con los diplococos de forma alargada con extremos exteriores puntiagudos, que recuerdan a la llama de una vela, hay células de forma ovalada y redonda regular. En el cultivo en caldo, los neumococos suelen estar dispuestos en cadenas. Según las propiedades morfológicas y culturales de los neumococos, es difícil distinguirlos de los estreptococos viridans, por lo que se ha propuesto un conjunto de pruebas especiales para diferenciarlos:

Solubilidad en la bilis (prueba de desoxicolato);

Capacidad de descomponer la inulina;

Sensibilidad a la optoquina;

Reacción de aglutinación con sueros antineumocócicos específicos;

La capacidad de descomponer glucosa, maltosa, sacarosa, lactosa, manitol, sorbitol y salicina.

Los métodos más accesibles para diferenciar los neumococos de otros estreptococos son una prueba con optoquina (inhibe su crecimiento); Se distinguen de los estreptococos viridans por su capacidad para fermentar la inulina, así como por su sensibilidad a la bilis.

Prueba de desoxicolato. Después de la bacterioscopia preliminar, se añaden 10 gotas de cultivo puro aislado (preferiblemente caldo) a un tubo de ensayo con 5 gotas de bilis bovina estéril. El control es un cultivo añadido a un tubo de ensayo con 5 gotas de solución salina. Después de 30-60 minutos de incubación a 37 °C, se observa la lisis completa del cultivo en forma de aclaramiento en el tubo de ensayo con bilis; en el tubo de control la mezcla permanece turbia. Cabe recordar que los cultivos de neumococos avirulentos son resistentes a la bilis.

La resistencia a la bilis también se puede probar mediante cultivo en caldo de bilis al 10%. El material de prueba se agrega al medio y el caldo se vuelve turbio. Después de 24 horas de incubación a 37 °C, la presencia de neumococos quedará indicada por la aclaración del caldo como resultado de la lisis de las bacterias.

También puede utilizar discos empapados en una solución de bilis al 20%. Los discos se colocan sobre el cultivo crecido en una placa y se incuban durante 1-2 horas a 37 °C. En presencia de neumococos, las colonias se lisan alrededor del disco a una distancia de 1 a 2 mm.

Prueba de inulina. El cultivo de neumococo se inocula en un medio con inulina. Para ello, añadir 200 ml de agua destilada esterilizada, 18 ml de tintura de tornasol y 3 g de inulina a 100 ml de suero bovino calentado a 56 °C durante 30 minutos y esterilizar con vapor corriente durante 30 minutos. Los cultivos se incuban a 37 °C durante 24 horas. El neumococo descompone la inulina y hace que el medio se vuelva rojo. El estreptococo viridans no provoca enrojecimiento del ambiente.

Prueba con optoquina. El cultivo de prueba de neumococo se inocula en caldo de suero con optoquina en una dilución de 1:100.000 o 1:200.000. El neumococo no crece en ese medio. También puede determinar la sensibilidad a la optoquina sembrando en placas de agar sangre al 10% que contenga optoquina en una dilución de 1:50.000. El control consiste en inocular el cultivo en agar sangre. Los neumococos no crecen en el medio con optoquina; se observa crecimiento de neumococos en el medio de control. Se pueden utilizar discos empapados en 6 μg de optoquina, que se aplican a la superficie del medio después de la inoculación. En los neumococos se forma alrededor del disco una zona de inhibición del crecimiento de al menos 18 mm de diámetro.

Prueba de virulencia. Un cultivo diario de neumococo cultivado en caldo de suero se diluye con agua peptonada estéril al 1% (pH - 7,6) o caldo ligeramente alcalino hasta 1:10. El cultivo diluido se administra por vía intraperitoneal a ratones blancos que pesan entre 16 y 20 g en un volumen de 0,5 ml y se observa durante 72 horas. Los órganos de un ratón muerto se inoculan en medios nutritivos y las huellas dactilares se examinan al microscopio. Los cultivos altamente virulentos incluyen los neumococos, que provocan la muerte de los ratones después de la introducción de un cultivo en una dilución de 1:10. Los cultivos avirulentos no causan la muerte en ratones.

Serotipado de neumococos. El cultivo de 18 horas se prueba en la reacción de microaglutinación de Sabin. Se aplican 4 gotas de cultivo de neumococo a un portaobjetos de vidrio. A 1 gota agregue una gota de suero antineumocócico tipo 1, a la segunda - suero tipo II, a la tercera - suero - 111, a la cuarta - una gota de suero normal. Las mezclas sobre vidrio se mezclan con un asa y se examinan con una lupa o un microscopio a bajo aumento. En caso positivo, se observa aglutinación en una de las tres primeras gotas. El tipo de neumococo se determina mediante una reacción de aglutinación con sueros aglutinantes específicos de los tres primeros tipos fijos. Los cultivos que no son aglutinados por este tipo de sueros se clasifican en el grupo X. La reacción se organiza de la siguiente manera. Vierta 0,5 ml de caldo de cultivo de 18 horas en tubos de ensayo. Luego se añade un volumen igual de suero, diluido con solución salina en una proporción de 1:5. Los controles son 2 tubos de ensayo, uno de los cuales contiene el cultivo de prueba mezclado con

suero de conejo normal, y el otro, sólo el cultivo de prueba. El contenido de los tubos se agita bien y se coloca en un termostato a 37 °C durante 2 horas, después de lo cual se realiza un cálculo preliminar de la reacción. Los resultados finales se observan después de un almacenamiento adicional a temperatura ambiente durante 20 horas. La aglutinación se evalúa como cuatro ventajas si el contenido de los tubos está completamente limpio y el cultivo de aglutinación es una película densa que no se rompe cuando se agita; tres ventajas si, cuando el contenido del tubo se aclara por completo, el cultivo aglutinante se rompe fácilmente en pedazos; dos ventajas: si no se aclara, las partículas del cultivo aglutinado son claramente visibles a simple vista en el contenido turbio del tubo de ensayo; con aglutinación para uno más, se encuentra en el tubo de ensayo una mezcla de grano fino de neumococos pegados. En caso de una reacción negativa visible a simple vista, no se observa aglutinación;

El contenido de los tubos de ensayo después de agitar está uniformemente turbio.

La tipificación de neumococos del grupo X se realiza utilizando el grupo

sueros que contienen una mezcla de sueros aglutinantes típicos tomados

en volúmenes iguales. Prepare los siguientes sueros de grupo

mezclar volúmenes iguales de diagnóstico estándar sin diluir

sueros (Lund, I960):

Serovares A -1, II, IV, V, XVIII;

B - serovares VI, VIII, XIX;

C - VII, XX. Serovares XXIV, XXXI, XL;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII serovares;

E-X, XXI. serovares XXXIII, XXXIX;

F - XII. XVII. serovares XXII, XXXVII, XXXII, XLI;

G - XIII, XXV. serovares XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII;

J-XLIII. Serovares XLIV, XLV, XLVI.

El suero aglutinante tipo III se utiliza per se (sin mezclar con otros sueros estándar) debido a la dificultad de obtenerlo en un título suficientemente alto. La tipificación se realiza en dos etapas: primero con la ayuda de sueros grupales y luego con sueros individuales del grupo con el que se obtuvo una reacción positiva. La serotipificación de neumococos se utiliza principalmente para estudios epidemiológicos de los resultados de la seroterapia y la seroprofilaxis específicas.

La microaglutinación de neumococos mediante el método Sabin se puede obtener mezclando sueros antineumocócicos con exudado de la cavidad abdominal de un ratón contaminado con el esputo de un paciente. Ya cuatro horas después de la infección se detecta en el exudado un cultivo puro de neumococos, lo que da una aglutinación de Sabin positiva.

Métodos acelerados para la detección y tipificación de neumococos. 1. Método de Neufeld o fenómeno de hinchazón de la cápsula neumocócica. Se aplica un trozo de esputo recién secretado del paciente a tres

cubreobjetos, a cada uno de ellos se añade una gota de suero antineumocócico específico sin diluir (tipos 1, II, III) y una gota de azul de Loeffler. Las gotas se mezclan bien y se cubren con un portaobjetos de vidrio con un borde bien untado con vaselina. Después de dos minutos, las gotas colgantes se examinan al microscopio con un sistema de inmersión. En un caso positivo, es visible un fuerte aumento de cápsulas neumocócicas. Si el resultado es negativo, las cápsulas apenas se valoran. La reacción de hinchazón es específica y no da un resultado positivo con otras bacterias capsulares. No lo uso para examinar el esputo de pacientes tratados con sulfonamidas y antibióticos, porque en este caso se pueden aislar neumococos no capsulares.

2. Método de precipitación. Se hierven 5-10 ml de esputo en un baño de agua hasta obtener un coágulo denso. Se muele el coágulo y se añade una pequeña cantidad de solución salina y se hierve nuevamente durante varios minutos para extraer el polisacárido específico de los neumococos. La suspensión se centrifuga y se realiza una reacción de precipitación en anillo con el líquido transparente resultante y los sueros estándar específicos en tubos de precipitación. La aparición de un anillo en la interfaz entre los líquidos indica un resultado positivo.

3. Determinación de cápsulas de neumococo según Burri. Se aplica una gota del material de prueba y una gota de tinta al final del portaobjetos. La mezcla se mezcla y se hace un frotis, se seca al aire y, sin fijar, se examina al microscopio. El fondo del preparado es ahumado oscuro, los cuerpos microbianos y sus cápsulas no están coloreados. La preparación preparada según Burri se puede fijar con la mezcla de Nikiforov, enjuagar con agua y teñir con fucsina Ziel diluida 1:3 durante 3-5 minutos. Sobre el fondo oscuro del frotis, se destacan cápsulas sin pintar, en cuyo interior hay bacterias de un color carmesí brillante (método Hins).

escarlatina causan varios serotipos de estreptococos beta-hemolíticos que tienen antígeno M y producen eritrogenina (estreptococos toxigénicos del serogrupo A) - (Streptococcus pyogenes). En ausencia de inmunidad antitóxica, se produce escarlatina y en presencia de dolor de garganta.

Cuadro clinico

 Intoxicación: fiebre, malestar general, dolores de cabeza.

 La erupción de la escarlatina es puntual, con una presión moderada con una espátula de vidrio las manchas son más claramente visibles. Cuando se presiona con más fuerza, la erupción da paso a un tinte dorado amarillento en la piel. Aparece entre los días 1 y 3 de la enfermedad y se localiza principalmente en las mejillas, la ingle y los costados del cuerpo. La piel del triángulo nasolabial permanece pálida y sin erupciones. La erupción suele durar de 3 a 7 días y luego desaparece sin dejar pigmentación. La erupción se espesa en las curvas de las extremidades: áreas axilares, del codo y poplíteas.

 Lengua escarlata: entre el segundo y el cuarto día de la enfermedad, la lengua del paciente se vuelve claramente granular, de color rojo brillante, la llamada lengua "frambuesa".

 El dolor de garganta es un síntoma constante de la escarlatina. Puede ser más grave que el dolor de garganta común.

 Descamación de la piel: ocurre después de que desaparece la erupción (14 días desde el inicio de la enfermedad): en el área de las palmas y los pies es una placa grande, comenzando desde las puntas de los dedos; Hay descamación similar a la pitiriasis en el cuerpo, el cuello y las orejas.

Neumococos, taxonomía. Propiedades. Grupos serológicos. Rasgos distintivos de otros estreptococos. Enfermedades causadas. Principios y métodos de diagnóstico de laboratorio.

Morfología y propiedades biológicas. Los neumococos (Streptococcus pneumoniae) son cocos ovalados, ligeramente alargados y de forma lanceolada, dispuestos en pares, que se asemejan a la llama de una vela. También pueden ubicarse en cadenas cortas, parecidas a los estreptococos. Móvil, no forma esporas, grampositivo.
Se cultivan en medios con proteínas añadidas: sangre, suero y líquido ascítico. En agar sangre, las colonias de neumococos son pequeñas, parecidas a gotas de rocío, transparentes a la luz transmitida, con el centro deprimido, rodeadas por una zona de hemólisis incompleta, de color verdoso, similar a las colonias de estreptococo viridans. En medios líquidos producen una ligera turbidez, formando en ocasiones un precipitado. Bioquímicamente son bastante activos: descomponen la glucosa, la lactosa, la maltosa, la inulina y otros carbohidratos para formar ácido, no licuan la gelatina y no forman indol. La descomposición de la inulina es una característica de diagnóstico diferencial que ayuda a distinguir los neumococos de los estreptococos, que no degradan la inulina. Una característica distintiva importante es la capacidad de los neumococos para disolverse en la bilis, mientras que los estreptococos se conservan bien en ella.

Patogénesis y clínica. Los neumococos son los agentes causantes de la neumonía lobular en humanos. También pueden causar úlceras corneales progresivas, catarro del tracto respiratorio superior, meningitis, endocarditis, daño a las articulaciones y otras enfermedades.

Después de una enfermedad, la inmunidad es débil, de corta duración y específica del tipo.
Diagnóstico microbiológico. Los materiales para el estudio son esputo, sangre, hisopo de garganta y líquido cefalorraquídeo. Debido al hecho de que el neumococo muere rápidamente, el material patológico debe entregarse al laboratorio para su examen lo antes posible.

Meningococos. Taxonomía, propiedades. Estructura antigénica de meningococos, clasificación. Patogénesis de la infección meningocócica, manifestaciones clínicas. Principios y métodos de diagnóstico microbiológico. Diferenciación del agente causante de la infección meningocócica y otros meningococos. Prevención específica.

N.meningitidis (meningococos).

El meningococo es el agente causante de la infección meningocócica: antroponosis estricta con transmisión aérea del patógeno. La fuente principal son los medios de comunicación. El reservorio natural es la nasofaringe humana. Las propiedades morfológicas, culturales y bioquímicas son similares a las del gonococo. Diferencias: fermentan no solo la glucosa, sino también la maltosa y producen hemolisina. Tienen una cápsula de mayor tamaño y estructura diferente a la del gonococo.

Composición antigénica. Tienen cuatro sistemas antigénicos principales.

1. Antígenos polisacáridos específicos del grupo capsular. Las cepas del serogrupo A suelen provocar brotes epidémicos.

2. Antígenos proteicos de la membrana exterior. Según estos antígenos, los meningococos de los serogrupos B y C se dividen en clases y serotipos.

3. Antígenos específicos de género y especie.

4. Antígenos lipopolisacáridos (8 tipos). Tienen alta toxicidad y provocan efectos pirógenos.

Factores de patogenicidad. Factores de adhesión y colonización: pili y proteínas de la membrana externa. Los factores de invasividad son la hialuronidasa y otras enzimas producidas (neuraminidasa, proteasas, fibrinolisina). De gran importancia son los antígenos de polisacáridos capsulares que protegen a los microorganismos de la fagocitosis.

Inmunidad duradero, antimicrobiano.

Diagnóstico de laboratorio basado en bacterioscopia, aislamiento de cultivos y su identificación bioquímica, métodos de diagnóstico serológico. El material se inocula en medios nutritivos sólidos y semilíquidos que contienen sangre, líquido ascítico y suero sanguíneo.

Los cultivos oxidasa positivos se consideran pertenecientes al género Neisseria. El meningococo se caracteriza por la fermentación de glucosa y maltosa. La pertenencia a un serogrupo se determina mediante una prueba de aglutinación (AR).

Gonococos. Taxonomía, propiedades. Patogénesis de la infección gonocócica, características de la inmunidad. Principios y métodos de diagnóstico de laboratorio de gonorrea aguda y crónica, blenorrea. RSK Bordet-Gengou, finalidad, mecanismo, contabilidad de reacciones. Prevención de la blenorrea en recién nacidos. Prevención y tratamiento de la gonorrea. Terapia específica.

N.gonorrheae (gonococo).

El gonococo es el agente causante de la gonorrea, una enfermedad de transmisión sexual con manifestaciones inflamatorias en el tracto genitourinario. El sustrato para la colonización es el epitelio de la uretra, recto, conjuntiva del ojo, faringe, cuello uterino, trompas de Falopio y ovario.

Los diplococos, que se tiñen fácilmente con azul de metileno y otros tintes de anilina, son pleomórficos (polimorfismo). Son muy exigentes con las condiciones de cultivo y los medios nutritivos. De los carbohidratos, sólo se fermenta la glucosa.

Estructura antigénica muy variable: caracterizado por variaciones de fase (desaparición de determinantes antigénicos) y variaciones antigénicas (cambios en determinantes antigénicos).

Factores de patogenicidad. Los factores principales son bebió, con la ayuda de los cuales los gonococos realizan la adhesión y colonización de las células epiteliales de la membrana mucosa del tracto genitourinario, y lipopolisacárido(endotoxina liberada cuando se destruyen los gonococos). Los gonococos sintetizan la proteasa IgAI, que descompone la IgA.

Diagnóstico de laboratorio. El diagnóstico bacterioscópico incluye tinción de Gram y azul de metileno. Los signos típicos de gonococos son tinción gramnegativa, diplococos en forma de frijol y localización intracelular.

La inoculación se realiza en medios especiales (KDS-MPA a partir de carne de conejo o corazón de bovino con suero, agar ascítico, agar sangre).

Agentes causantes de la infección por anaeróbicos gaseosos. Taxonomía. Propiedades. Características de las toxinas. Patogenia, formas clínicas. Principios y métodos de diagnóstico de laboratorio, fármacos para prevención y tratamiento específicos.

La gangrena gaseosa es una infección (traumática) de heridas policlostridiales anaeróbicas (es decir, causadas por varios tipos de clostridios). El principal valor es C.perfringens, con menos frecuencia - C.novyi, así como otros tipos de clostridios en asociaciones persistentes entre sí, cocos piógenos aeróbicos y bacterias anaeróbicas putrefactas.

C.perfringens es un habitante normal de los intestinos de humanos y animales, ingresa al suelo con las heces. Es un agente causante de la infección de heridas: causa enfermedad cuando el patógeno ingresa a las heridas en condiciones anaeróbicas. Es altamente invasivo y toxicogénico. La invasividad está asociada con la producción de hialuronidasa y otras enzimas que tienen un efecto destructivo sobre los músculos y el tejido conectivo. Principal factor de patogenicidad - exotoxina, que tiene efectos hemo, necro, neuro, leucotóxico y letal. De acuerdo con la especificidad antigénica de las exotoxinas, se aíslan serotipos patógeno. Junto con la gangrena gaseosa, C. perfringens provoca infecciones tóxicas transmitidas por los alimentos (se basan en la acción de enterotoxinas y necrotoxinas).

Características de la patogénesis. A diferencia de las enfermedades purulentas causadas por aerobios, en la infección anaeróbica no predomina la inflamación, sino necrosis, edema, formación de gases en los tejidos, intoxicación por toxinas y productos de descomposición de los tejidos.

Inmunidad- predominantemente antitóxico.

Diagnóstico de laboratorio incluye bacterioscopia de la secreción de la herida, aislamiento e identificación del patógeno, detección e identificación de la toxina en muestras biológicas mediante una reacción de neutralización con anticuerpos antitóxicos específicos.

Prevención y tratamiento. La base para prevenir la gangrena gaseosa es el tratamiento quirúrgico correcto y oportuno de las heridas. En caso de heridas graves, se administran sueros antitóxicos contra los principales tipos de clostridios, 10 mil UI cada uno, con fines medicinales, 50 mil UI.

Clostridia tétanos. Taxonomía. Propiedades, características de las toxinas. Patogenia de la enfermedad. Tétanos descendente. Clínica. Principios y métodos de diagnóstico de laboratorio. El propósito de la investigación bacteriológica, medicamentos para prevención y tratamiento específicos.

El tétanos es una infección aguda de heridas caracterizada por lesiones neurotoxina células motoras de la médula espinal y del cerebro, que se manifiesta en forma de convulsiones de los músculos estriados. Las personas y los animales de granja se enferman. El suelo, especialmente contaminado con excrementos humanos y animales, es una fuente constante de infección por tétanos.

El agente causal es C.tetani, un bacilo grampositivo grande que forma esporas. Las esporas están ubicadas terminalmente (tipo de muslo) y son móviles gracias a los flagelos: peritrichs. Anaerobio obligatorio. Las esporas son muy resistentes.

Propiedades antigénicas. El patógeno tiene antígenos O y H.

Factores de patogenicidad. El factor principal es la exotoxina más fuerte. Hay dos fracciones principales: tetanospasmina (neurotoxina) y tetanolisina (hemolisina). La neurotoxina ingresa al sistema nervioso central en las áreas de las sinapsis mioneurales, se transmite de neurona a neurona en el área de las sinapsis, se acumula en las áreas motoras de la médula espinal y el cerebro y bloquea la transmisión sináptica. La muerte se produce por parálisis del centro respiratorio, asfixia (daño a los músculos de la laringe, diafragma, músculos intercostales) o parálisis del corazón.

Diagnóstico de laboratorio. El diagnóstico microbiológico incluye la bacterioscopia de los materiales de partida, el cultivo para aislar el patógeno y su identificación y la detección de la toxina tetánica.

El aislamiento del patógeno se realiza según el esquema estándar para anaerobios, utilizando diversos medios sólidos y líquidos (medio Kitt-Tarozzi), identificación basada en propiedades morfológicas, culturales, bioquímicas y toxigénicas.

El método de diagnóstico microbiológico más simple y eficaz es un bioensayo en ratones blancos. Un grupo se infecta con el material de prueba, el segundo (control), después de mezclar las muestras con suero antitetánico antitóxico. En presencia de la toxina tetánica, el grupo experimental de ratones muere, mientras que el grupo de control permanece vivo.

Tratamiento y prevención de urgencias. Se utilizan inmunoglobulina tetánica de donante (antitoxina), suero antitóxico (350 UI/kg), antibióticos (penicilinas, cefalosporinas). Para crear inmunidad a la vacuna, se utiliza el toxoide tetánico, con mayor frecuencia como parte de las vacunas DTP (toxoides tetánico, difteria y bacilos muertos de tos ferina).

Botulismo por Clostridium. Taxonomía. Propiedades. Características de las toxinas, diferencia con las exotoxinas de patógenos de otras infecciones alimentarias. Principios y métodos de diagnóstico de laboratorio. Medicamentos para prevención y tratamiento específicos.

El botulismo es una intoxicación alimentaria grave asociada al consumo de productos contaminados con C.botulinum y caracterizada por daños específicos en el sistema nervioso central. Debe su nombre del lat. botulus - salchicha.

Propiedades del patógeno. Grandes bacilos grampositivos polimórficos, móviles, con flagelos perítricos. Las esporas son ovaladas y ubicadas en forma subterminal (raqueta de tenis). Producen ocho tipos de toxinas, que se diferencian en la especificidad antigénica y, en consecuencia, se distinguen 8 tipos de patógenos. Entre las características más importantes se encuentra la presencia o ausencia de propiedades proteolíticas (hidrólisis de caseína, producción de sulfuro de hidrógeno).

La toxina tiene un efecto neurotóxico. La toxina ingresa al cuerpo con los alimentos, aunque probablemente pueda acumularse cuando el patógeno se multiplica en los tejidos del cuerpo. La toxina es termolábil, aunque es necesario hervirla durante hasta 20 minutos para su inactivación completa. La toxina se absorbe rápidamente en el tracto gastrointestinal, penetra en la sangre y actúa selectivamente sobre los núcleos del bulbo raquídeo y las células ganglionares de la médula espinal. Se desarrollan fenómenos neuroparalíticos: trastornos de la deglución, afonía, disfagia, síndrome oftalmopléjico (estrabismo, visión doble, párpados caídos), parálisis y paresia de los músculos faríngeos y laríngeos, cese de la respiración y de la actividad cardíaca.

Diagnóstico de laboratorio. Los principios son comunes a los clostridios.

Tratamiento y prevención. Se basa en el uso temprano de sueros antitóxicos (polivalentes o, cuando se establezca el tipo, homólogos). La prevención se basa en un régimen sanitario e higiénico en el procesamiento de productos alimenticios. Especialmente peligrosos son los champiñones enlatados caseros y otros productos almacenados en condiciones anaeróbicas.

11. Pseudomonas aeruginosa. Taxonomía. Propiedades. Enfermedades causadas.
Papel en las infecciones nosocomiales. Principios y métodos de diagnóstico de laboratorio.

El género pseudomonas, P. aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa) es uno de los principales agentes causantes de procesos inflamatorios purulentos locales y sistémicos en los hospitales médicos.

El patógeno se distribuye por todas partes (agua, suelo, plantas, animales) y normalmente se encuentra en humanos (con mayor frecuencia en los intestinos, la piel y las membranas mucosas). Morfología- bacilos gramnegativos rectos o ligeramente curvados, móviles, ubicados individualmente, en pares o en cadenas cortas en frotis. Sintetiza moco (sustancia capsular), especialmente las cepas mucoides más virulentas.

Bienes culturales. Es aerobio y tiene un conjunto de enzimas correspondientes al tipo de respiración (citocromos, citocromo oxidasa, deshidratasas. En medios líquidos forma una película gris plateada. En medios sólidos se observa a menudo el fenómeno de la lisis del arco iris. Al final del día debido a la síntesis de pigmento piocianina Aparece un color azul verdoso en el cultivo.

Propiedades bioquímicas. Pseudomonas aeruginosa se caracteriza por una baja actividad sacarolítica (oxida solo la glucosa), una alta actividad proteolítica y la formación de una zona de beta-hemólisis en el agar sangre. Sintetiza trimetilamina, que aporta a los cultivos un agradable aroma a jazmín. Produce la producción de bacteriocinas. piocinas.

Propiedades antigénicas y patógenas. Los principales antígenos de Pseudomonas aeruginosa son el antígeno O somático específico de grupo y el antígeno H flagelar específico de tipo. Complejo antigénico O: un agregado de LPS con proteínas y lípidos de la pared celular, tiene propiedades de endotoxina y es uno de los principales factores de patogenicidad. Pseudomonas aeruginosa tiene un gran conjunto de factores de patogenicidad: endotoxina (LPS, similar a otras bacterias gramnegativas), varias exotoxinas: citotoxina, exoenzima S, hemolisinas, exotoxina A (la más importante, que recuerda a la exotoxina de la difteria), enzimas ( colagenasa, neuraminidasa, proteasas).

Diagnóstico de laboratorio. P.aeruginisa recibió su nombre por el color verde azulado de la secreción de la herida y del material del apósito. El principal método de diagnóstico es el bacteriológico. La detección del pigmento piocianina es importante. Tratamiento y prevención específica. No existe una prevención específica. Para las infecciones tóxicas alimentarias y la disbiosis intestinal causadas por Pseudomonas aeruginosa, es eficaz un complejo intestinal-bacteriófago, que incluye un fago de pseudomonas. Entre los fármacos antibacterianos, los más utilizados son aminoglucósidos, cefalosporinas y quinolonas.

Bacterias gramnegativas oportunistas: agentes causantes de procesos inflamatorios purulentos (Proteus, Klebsiella, bacilo milagroso, etc.), taxonomía. Características generales de las enterobacterias. Principios y métodos de diagnóstico de laboratorio.

Género Klebsiella.

El género Klebsiella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Una característica de los representantes del género es la capacidad de formar una cápsula. La especie principal es K. pneumoniae. Provocan lesiones oportunistas: neumonía adquirida en el hospital, infecciones del tracto urinario y diarrea en los recién nacidos. Klebsiella causa mastitis, septicemia y neumonía en animales y se encuentra constantemente en la piel y las membranas mucosas de humanos y animales. Klebsiella son varillas rectas e inmóviles de varios tamaños. Anaerobios facultativos. Oxidasa - negativa, catalasa - positiva.

Factores de patogenicidad. Estos incluyen una cápsula de polisacárido (antígeno K), endotoxina, fimbrias, sistema sideróforo (une iones ferrosos y reduce su contenido en los tejidos), exotoxinas termolábiles y termoestables.

Manifestaciones clínicas. K.pneumoniae (subsp. pneumoniae) se caracteriza por bronquitis y bronconeumonía hospitalarias, neumonía lobular, infecciones del tracto urinario, lesiones de las meninges, articulaciones, columna vertebral, ojos, así como bacteriemia y septicopiemia. La subespecie ozaenae causa una forma especial de rinitis atrófica crónica: ozén.

Diagnóstico de laboratorio. El método principal es bacteriológico. Tratamiento. Una de las características de Klebsiella es su resistencia a múltiples fármacos y el desarrollo de lesiones en el contexto de una disminución de la resistencia del cuerpo. Los antibióticos se utilizan para las formas crónicas generalizadas y lentas de klebsiella, generalmente en combinación con medicamentos que estimulan el sistema inmunológico.

Género Proteo.

El género Proteus pertenece a la familia Enterobacteriaceae. El género lleva el nombre del hijo de Poseidón Proteo, quien pudo cambiar su apariencia. Los representantes del género son capaces de cambiar las manifestaciones externas del crecimiento en medios nutritivos sólidos y también se distinguen por el mayor pleomorfismo (variabilidad de morfología) en comparación con otras enterobacterias.

Las proteas degradan la tirosina, reducen los nitratos, la oxidasa es negativa y la catalasa es positiva. Viven en los intestinos de muchas especies de animales vertebrados e invertebrados, en el suelo, en aguas residuales y en materia orgánica en descomposición. Puede provocar infecciones del tracto urinario en humanos, así como lesiones sépticas en pacientes quemados y después de cirugías. Muy a menudo también provocan intoxicación alimentaria. P.vulgaris y P.mirabilis desempeñan un papel con mayor frecuencia en la patología.

Bienes culturales. Las proteas crecen en medios simples en un amplio rango de temperaturas. El pH óptimo es 7,2-7,4, la temperatura es de +35 a 37 grados Celsius. Las colonias de proteas en forma O son redondas, semidigitales y convexas, mientras que las formas H dan un crecimiento continuo. El crecimiento de proteas va acompañado de un olor pútrido. Es característico el fenómeno de enjambre; las formas H dan un crecimiento rastrero característico en el MPA en forma de un delicado velo azulado y ahumado. Al sembrar según el método Shushkevich en la humedad de condensación de MPA recién cortado, el cultivo se eleva gradualmente en forma de velo sobre la superficie del agar. En el MPB se observa turbidez difusa del medio con un sedimento blanco espeso en el fondo.

Factores de patogenicidad. Estos incluyen LPS de pared celular, capacidad de "enjambre", fimbrias, proteasas y ureasa, hemolisinas y hemaglutininas.

Diagnóstico de laboratorio. El método principal es bacteriológico. Se utilizan medios de diagnóstico diferencial (Ploskirev), medios de enriquecimiento y MPA según el método Shushkevich. Tratamiento. Para la disbacteriosis intestinal asociada con Proteas (colitis), puede usar el fago Proteus y los medicamentos que lo contienen (intestífago, bacteriófago coliproteus).

"Palo maravilloso" (Serratia marcescens), un tipo de bacteria de entre los microorganismos pigmentarios. Bacilos gramnegativos móviles (perítricos) que no contienen esporas. Por tipo de metabolismo: anaerobio facultativo. En la superficie del agar forma colonias lisas o granulares de color rojo oscuro y brillante con un brillo metálico. Vive en el suelo, el agua y los alimentos. Al desarrollarse en pan (con mucha humedad) y en leche, los enrojece; dichos productos no están permitidos para la venta. Condicionalmente patógeno para animales y humanos; puede causar supuración.

13. Escherichia. Taxonomía. Enfermedades causadas por Escherichia coli. Variantes patogénicas de Escherichia diarreógena. Estructura antigénica, clasificación. Características del diagnóstico microbiológico. Diferenciación de Escherichia diarreógenas de las oportunistas.

Escherichia es la bacteria intestinal aeróbica más común que, en determinadas condiciones, puede provocar un amplio grupo de enfermedades humanas, tanto de localización intestinal (diarrea) como extraintestinal (bacteriemia, infecciones del tracto urinario, etc.). La especie principal es E. coli (Escherichia coli), el agente causante más común de enfermedades infecciosas causadas por enterobacterias. Este patógeno es un indicador de contaminación fecal, especialmente en el agua.

Bienes culturales. En medios líquidos, E. coli produce turbidez difusa; en medios sólidos, forma colonias en forma S y R. En Endo, el medio principal de Escherichia, las E. coli que fermentan la lactosa forman colonias de color rojo intenso con un brillo metálico, las que no fermentan forman colonias de color rosa pálido o incoloras con un centro más oscuro, en el medio de Ploskirev son rojas con un tinte amarillento; En el medio Levin son de color azul oscuro con un brillo metálico.

Propiedades bioquímicas. En la mayoría de los casos, E. coli fermenta carbohidratos (glucosa, lactosa, manitol, arabinosa, galactosa, etc.) con la formación de ácido y gas, produce indol, pero no forma sulfuro de hidrógeno y no licua la gelatina.

Los principales factores de patogenicidad de E. coli diarreogénica.

1. Factores de adhesión, colonización e invasión asociados a pili, estructuras fimbriales y proteínas de la membrana externa. Están codificados por genes plásmidos y promueven la colonización del intestino delgado inferior.

2. Exotoxinas: citotoninas (estimulan la hipersecreción de líquido por las células intestinales, alteran el metabolismo agua-sal y favorecen el desarrollo de diarrea) y enterocitotoxinas (actúan sobre las células de la pared intestinal y el endotelio capilar).

3. Endotoxina (lipopolisacárido).

Dependiendo de la presencia de diversos factores de patogenicidad, las E. coli diarreógenas se dividen en cinco tipos principales: enterotoxigénica, enteroinvasiva, enteropatógena, enterohemorrágica y enteroadhesiva.

4. Las E. coli patógenas se caracterizan por la producción de bacteriocinas (colicinas).

E. coli enterotoxigénica Tienen una toxina termolábil de alto peso molecular, de acción similar al cólera, que provoca diarreas similares al cólera (gastroenteritis en niños pequeños, diarrea del viajero, etc.).

Escherichia coli enteroinvasiva capaz de penetrar y multiplicarse en las células epiteliales intestinales. Provocan diarrea profusa mezclada con sangre y una gran cantidad de leucocitos (indicador de proceso invasivo) en las heces. Clínicamente se parece a la disentería. Las cepas tienen algunas similitudes con Shigella (estacionarias, no fermentan la lactosa y tienen altas propiedades enteroinvasivas).

E. coli enteropatógena- los principales agentes causantes de la diarrea en los niños. Las lesiones se basan en la adhesión de bacterias al epitelio intestinal con daño a las microvellosidades. Se caracteriza por diarrea acuosa y deshidratación severa.

Escherichia coli enterohemorrágica Causa diarrea mezclada con sangre (colitis hemorrágica), síndrome urémico hemolítico (anemia hemolítica en combinación con insuficiencia renal). El serotipo más común de Escherichia coli enterohemorrágica es O157:H7.

E. coli enteroadhesiva no forman citotoxinas, poco estudiado.

Diagnóstico de laboratorio. El enfoque principal es el aislamiento de un cultivo puro en medios de diagnóstico diferencial y su identificación por sus propiedades antigénicas. La AR se diagnostica con un conjunto de sueros polivalentes OK (a los antígenos O y K).

Entre los estreptococos patógenos, un lugar especial lo ocupa S.pneumoniae (neumococo). Desempeña un papel muy importante en la patología infecciosa humana. Esta especie es uno de los principales agentes causantes de la neumonía lobular. Según datos que no son completos, cada año se producen en el mundo más de 500.000 neumonías causadas por neumococos, especialmente en niños y ancianos. Además de la neumonía, este microbio causa meningitis, endocarditis, peritonitis, otitis media, rinitis, sinusitis, sepsis, úlceras corneales progresivas y varias otras enfermedades. Para realizar diagnósticos de laboratorio se utilizan métodos bacterioscópicos, bacteriológicos y biológicos. El material para el examen es esputo, pus, sangre, líquido cefalorraquídeo, moco de la boca y nasofaringe, secreción del seno maxilar, ojos y oídos. Es importante enviar inmediatamente el material al laboratorio y examinarlo muy rápidamente, ya que los neumococos son susceptibles a la autólisis.

Examen bacterioscópico

El examen bacterioscópico del material (excepto la sangre) se reduce a realizar dos frotis. Uno de ellos está teñido con Gram, el segundo con Burri-Gins, lo que permite identificar la cápsula. Los neumococos se encuentran en forma de diplococos lanceolados, rodeados por una cápsula común. Si se detectan 10 o más diplococos típicos en el campo de visión, es muy probable que se concluya que S. pneumoniae está presente. Sin embargo, la microscopía primaria no da derecho a hacer un diagnóstico final, ya que los frotis pueden contener diplococos capsulares no patógenos, representantes de la microflora normal. Por tanto, es necesario inocular material clínico y aislar un cultivo puro.

Investigación bacteriológica

Para la sepsis junto a la cama del paciente, inocular 10 ml de sangre en un vial que contenga 100 ml de suero o caldo de azúcar, incubar durante 18-20 horas a 37 ° C, luego inocular en agar sangre, aislar e identificar un cultivo puro. Para la meningitis, el líquido cefalorraquídeo se centrifuga y el sedimento se inocula en agar sangre. En él, los neumococos crecen en forma de pequeñas colonias redondas, rodeadas por una zona verde, en el centro de la colonia se ve una depresión característica. No es aconsejable cultivar esputo o pus en medios nutritivos, ya que la presencia de microflora saprofita suprime el crecimiento de S. pneumoniae. Es mejor introducir el material de prueba en la cavidad abdominal de ratones blancos. Un bioensayo es un método rápido, fiable y preciso para aislar un cultivo puro de neumococos. Los ratones blancos son muy sensibles a estas bacterias y entre 10 y 12 horas después de la infección, los neumococos penetran en la sangre y los órganos parenquimatosos, provocando sepsis. El cultivo de sangre del corazón o de fragmentos de órganos internos durante la autopsia de animales permite aislar un cultivo puro del patógeno. Para identificar neumococos, se utilizan sus propiedades. A diferencia de otros tipos de estreptococos, S.pneumoniae no crece en un medio con optoquina, la inulina fermenta y es muy sensible a la acción de la bilis (prueba de desoxicolato). Se puede detectar una lisis rápida de neumococos por la bilis si se añaden 0,5 ml de bilis a 1 ml de caldo de cultivo. Después de 15 a 20 minutos en el termostato, se produce la lisis completa de las células bacterianas. Para determinar los serovares neumocócicos (actualmente hay 85) se utiliza la reacción de aglutinación vítrea con sueros estándar o el fenómeno de "hinchazón de la cápsula". En presencia de suero homólogo, la cápsula neumocócica se hincha mucho. Es incluso mejor realizar la serotipificación utilizando reactivos comerciales en reacciones de aglutinación o coaglutinación de látex, a través de los cuales se revelan antígenos capsulares. Entre los estreptococos también es importante el género Enterococcus, cuyas especies más importantes son E.faecalis, E.faecium y E.durans. Están bastante extendidos en la naturaleza. Su principal nicho ecológico son los intestinos de humanos y animales, pero también se encuentran como parte de la microflora normal de la piel del perineo, los órganos genitourinarios, la oro y la nasofaringe. Pueden causar supuración de heridas, bacteriemia, daño al sistema urogenital, especialmente en pacientes con catéteres de funcionamiento prolongado, infecciones tóxicas transmitidas por alimentos, disbacteriosis del tracto intestinal y, con menos frecuencia, endocarditis. En frotis del material de prueba, los enterococos se ubican en pares, cadenas cortas o en forma de racimos, grampositivos. El diagnóstico bacteriológico de las infecciones enterocócicas se realiza sin dificultades, ya que estas bacterias se desarrollan bien en medios simples. Agar dif-3 es selectivo para ellos (hasta 600 ml de MPA al 3%, añadir 400 ml de bilis al 40%). Tras 24 horas de incubación, las colonias que han crecido tienen un tamaño de 0,4-1,0 mm y son de color grisáceo. En agar sangre, se produce hemólisis completa o incompleta alrededor de las colonias. A diferencia de los estreptococos viridans, los enterococos pueden crecer en MPA con NaCl al 6,5%, reduciendo la leche con azul de metileno a 37°C después de 4-6 horas. La identificación de cultivos aislados se realiza según características morfológicas, culturales y bioquímicas.

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El agente causante de la neumonía lobular (neumonía) es el neumococo, Diplococcus pneumoniae, descubierto por primera vez por Pasteur en la saliva de una persona que murió de rabia (1881).
Morfología y propiedades tintoriales. Los neumococos (Fig. 67 y 68 en el recuadro) son cocos pareados con forma alargada similar a una lanceta. Por lo tanto, también se les llama diplococos lanceolados. Al formar cadenas cortas, los neumococos se vuelven similares a los estreptococos y, por lo tanto, II. F. Gamaleya los llamó Streptococcus lanceolatus. El tamaño de la celda varía de 0,5X0,75 a 1X1,5 μm. No tienen esporas ni flagelos. Una característica distintiva del neumococo es la formación de una cápsula, que puede expresarse claramente en materiales patológicos (esputo, sangre, etc.). Cuando se cultiva en medios nutritivos, la cápsula se pierde. Los neumococos aceptan fácilmente los tintes de anilina y se tiñen positivamente en el Gram.
Propiedades culturales y bioquímicas.

Arroz. 68. Neumococos en frotis de esputo.

Los neumococos son aerobios y anaerobios facultativos. La temperatura óptima es de unos 37°. Crecen en medios que contienen proteína animal (agar sangre o suero, ascitagar).
Al cabo de 24 horas se forman pequeñas colonias en la superficie del agar, que recuerdan a las colonias de estreptococos, pero más pequeñas y transparentes.
En agar inclinado, con abundante inoculación, se obtiene una capa transparente muy delicada, formada por colonias diminutas que no se fusionan; en caldo, se observa una ligera turbidez y un pequeño sedimento escamoso.
Las cepas recién aisladas no crecen en gelatina. Las antiguas cepas de neumococos de laboratorio pueden producir pequeñas colonias blanquecinas ya a 18-22°. La gelatina no se licua.
Crecen bien en la leche, cuajándola para formar ácido.
En agar sangre alrededor de las colonias se forma una zona de hemólisis incompleta con una coloración marrón verdosa del medio.

Arroz. 67. Neumococos en cultivo puro de caldo.

Los neumococos degradan la sacarosa, la rafinosa y la lactosa. La característica más importante es la descomposición de la inulina. La mayoría de los estreptococos no tienen esta propiedad. Los neumococos virulentos son solubles en bilis.
Estructura antigénica y tipos serológicos de neumococos. El citoplasma de los neumococos contiene un antígeno proteico común a todos los neumococos. Este antígeno determina su especificidad de especie. La cápsula contiene antígenos polisacáridos específicos (haptenos), que difieren en su composición química entre los diferentes neumococos (antígenos tipo). A partir de estos antígenos típicos, mediante la reacción de aglutinación y precipitación, todos los neumococos se dividen en tres grupos principales (I, II, III) y un cuarto grupo (grupo X). El grupo X incluye más de 70 tipos.
Resistencia. En medios nutritivos artificiales, los neumococos mueren rápidamente (4-7 días). Bajo una capa de vaselina en medios líquidos y semilíquidos que contienen proteínas, permanecen viables durante 3 a 12 meses.
Los neumococos toleran bien el secado: persisten en el esputo seco con luz difusa hasta por 2 meses. Cuando se calientan a 52-55° mueren en 10 minutos, a 60° mueren aún más rápido. En una solución de ácido carbólico (3%), los neumococos mueren en 1-2 minutos.
Los neumococos son especialmente sensibles a la optoquina. Bajo la influencia de estos últimos, mueren en una concentración de 1: 1.000.000.
Formación de toxinas y patogenicidad para los animales. El veneno neumocócico es una endotoxina. Entre los animales de laboratorio, los ratones blancos y los conejos son más sensibles al neumococo. La administración parenteral de neumococos virulentos después de 24-48 horas provoca la muerte de los animales con síntomas de sepsis. En la autopsia se encuentra exudado fibrinoso en el lugar de la inyección; el bazo está agrandado e hiperémico.
Patogénesis y enfermedades en humanos. El punto de entrada de la infección suele ser la membrana mucosa de la faringe. La introducción de neumococos en el cuerpo y su penetración en el tejido pulmonar aparentemente puede ocurrir tanto a través del sistema linfático y circulatorio como directamente a través de las ramas de los bronquios. La enfermedad más común es la neumonía lobular, que se caracteriza por una aparición repentina, fiebre alta, a veces con escalofríos, dolor en el costado al respirar, dolor de cabeza, a veces pérdida del conocimiento, delirio y agitación severa. Posteriormente aparece tos con esputo rojo oxidado característico. En los pulmones se observa un proceso que a menudo involucra uno, menos a menudo dos o tres lóbulos.
Los focos de infección son la persona enferma y el portador de la bacteria. La infección desde el exterior se produce tanto por vía aerógena (por gotitas del portador) como por infección por polvo. Los neumococos pueden persistir en el esputo seco durante mucho tiempo (aproximadamente 2 meses) y entrar al aire con polvo.
Al examinar a personas sanas, los neumococos patógenos a menudo se encuentran en la nasofaringe, por lo que no se puede excluir la posibilidad de autoinfección, y los factores que debilitan la resistencia del cuerpo, como la hipotermia, juegan un papel importante.
Además de la neumonía lobular, los neumococos causan inflamación del oído medio, meninges (meningitis), así como de la membrana mucosa de la nariz y los senos nasales, amigdalitis, úlceras corneales progresivas e inflamación del saco lagrimal.
Inmunidad. Tener neumonía no proporciona inmunidad. La enfermedad puede reaparecer varias veces. Esto se debe a la presencia de muchos tipos de neumococos y al hecho de que la neumonía pasada aumenta la sensibilidad del cuerpo a los neumococos.
El suero de los recuperados contiene anticuerpos (aglutininas, etc.).
En el momento de una crisis de neumonía, la concentración de anticuerpos en la sangre alcanza un título significativo y la fagocitosis aumenta drásticamente (I. Ya. Chistovich). Según estos datos, la inmunidad en la neumonía debe considerarse principalmente fagocítica, en la que los anticuerpos (bacteriotropinas) desempeñan un papel importante.
Diagnóstico microbiológico. Los materiales para la investigación de enfermedades neumocócicas son el esputo, la sangre y el pus extraídos de diversas lesiones y, con menos frecuencia, el líquido cefalorraquídeo.
El material patológico (excluida la sangre) se examina bacterioscópicamente, bacteriológicamente y mediante la infección de ratones blancos. Se debe recurrir a este último método porque el material de origen, especialmente el esputo, generalmente contiene abundante microflora extraña que, cuando se inocula directamente el material en medios nutritivos, dificulta la aislamiento del neumococo.
Los frotis de esputo, pus, etc. se tiñen con tinción de Gram. Al microscopio se encuentran diplococos lanceolados rodeados por una cápsula, teñidos con Gram positivamente.
Para aislar cultivos, inocularlos en agar sangre o agar ascig. Después de 24-48 horas de crecimiento a 37°C, en presencia de neumococo, aparecen colonias características. Las colonias se siembran en inclinaciones de suero o agar ascítico y se analiza la solubilidad en la bilis y la capacidad de descomponer la inulina del cultivo aislado.
Infectar un ratón blanco es la forma más fiable de aislar un cultivo de neumococo. Se coloca material de un paciente o cadáver (esputo, pus, un trozo de órgano, etc.) en un vaso esterilizado, luego se muele en un mortero esterilizado, se inyectan por vía intraperitoneal 1-2 ml de caldo estéril y 0,5 ml de esta suspensión. en un ratón blanco. Después de la muerte del ratón, que ocurre dentro de 12 a 48 horas, se toman hemocultivos del corazón y en casi todos los casos se obtiene un cultivo puro de neumococo.
Si se sospecha sepsis, se inoculan de 10 a 20 ml de sangre en caldo ascítico o de suero. Después del enriquecimiento, el caldo se inocula en agar sangre y el cultivo puro aislado se identifica por sus características morfológicas y bioquímicas.
Terapia específica y quimioterapia. Actualmente, las sulfonamidas y los antibióticos (penicilina, biomicina, tetraciclina, etc.) se utilizan con gran éxito para tratar la neumonía lobular.

El género Streptococcus incluye: Streptococcus pyogenes (hemolítico) y Streptococcus pneumoniae (neumococo). Los estreptococos fueron descubiertos por primera vez por Billroth (1874) y L. Pasteur (1879). Fueron estudiados por E. Rosenbach (1884).

Streptococcus pyogenes (hemolítico)

Morfología. Los estreptococos son cocos que tienen forma esférica. El diámetro de cada coco es en promedio de 0,6 a 1 micron, pero se caracterizan por el polimorfismo: hay cocos pequeños y grandes, estrictamente esféricos y ovalados. Los estreptococos se disponen en cadena, lo que es el resultado de su división en un mismo plano. La longitud de las cadenas es diferente. En un medio nutritivo sólido las cadenas suelen ser cortas, en un medio líquido son largas. Los estreptococos son inmóviles y no tienen esporas (ver Fig. 4). Los cultivos recién aislados a veces forman una cápsula. En cortes ultrafinos, se ve una microcápsula, debajo de la cual se encuentra una pared celular de tres capas y una membrana citoplasmática de tres capas. Gram positivas.

Cultivo. Los estreptococos son anaerobios facultativos. Crecen a una temperatura de 37° C y un pH de 7,6-7,8. Los medios óptimos para su crecimiento son los que contienen sangre o suero sanguíneo. En medios nutritivos sólidos, las colonias de estreptococos son pequeñas, planas, turbias y de color grisáceo. Algunas especies de estreptococos forman hemólisis en agar sangre. Los estreptococos β-hemolíticos forman una zona clara de hemólisis, los estreptococos α-hemolíticos forman una pequeña zona verdosa (el resultado de la transición de hemoglobina a metahemoglobina). Hay estreptococos que no producen hemólisis.

En el caldo de azúcar, los estreptococos crecen con la formación de sedimentos de grano fino cerca de la pared y en el fondo, mientras que el caldo permanece transparente.

Propiedades enzimáticas. Los estreptococos tienen propiedades sacarolíticas. Descomponen la glucosa, la lactosa, la sacarosa, el manitol (no siempre) y la maltosa para formar ácido. Sus propiedades proteolíticas son débilmente expresadas. Cuaja la leche, pero no licúa la gelatina.

Formación de toxinas. Los estreptococos producen varias exotoxinas: 1) estreptolisinas: destruyen los glóbulos rojos (la O-estreptolisina tiene un efecto cardiotóxico); 2) leucocidina: destruye los leucocitos (formados por cepas muy virulentas); 3) toxina eritrogénica (escarlatina): determina el cuadro clínico de la escarlatina: intoxicación, reacciones vasculares, erupción cutánea, etc. La síntesis de la toxina eritrogénica está determinada por el profago; 4) citotoxinas: tienen la capacidad de causar glomerulonefritis.

Se han encontrado varios antígenos en los estreptococos. El citoplasma de la célula contiene un antígeno específico de naturaleza nucleoproteica, el mismo para todos los estreptococos. Los antígenos de tipo proteico se encuentran en la superficie de la pared celular. Se encontró un antígeno del grupo polisacárido en la pared celular de los estreptococos.

Según la composición de la fracción antigénica específica del grupo polisacárido, todos los estreptococos se dividen en grupos, designados con letras mayúsculas A, B, C, D, etc. hasta S. Además de los grupos, los estreptococos se dividen en tipos serológicos, que se designan con números arábigos.

El grupo A incluye 70 tipos. Este grupo incluye la mayoría de los estreptococos que causan diversas enfermedades en humanos. El grupo B incluye principalmente estreptococos que son oportunistas para los humanos. El grupo C incluye estreptococos patógenos para humanos y animales. El grupo D está formado por estreptococos que no son patógenos para los humanos, pero este grupo también incluye enterococos, que habitan el tracto intestinal de humanos y animales. Al penetrar en otros órganos provocan procesos inflamatorios: colecistitis, pielitis, etc. Por tanto, pueden clasificarse como microbios oportunistas.

La pertenencia de los cultivos aislados a uno de los grupos serológicos se determina mediante una reacción de precipitación con sueros del grupo. Para determinar los tipos serológicos se utiliza una reacción de aglutinación con sueros específicos del tipo.

Los estreptococos son bastante estables en el medio ambiente. A una temperatura de 60°C mueren al cabo de 30 minutos.

Permanecen en pus y esputo secos durante meses. Las concentraciones normales de desinfectantes los destruyen en 15-20 minutos. Los enterococos son mucho más resistentes; las soluciones desinfectantes los matan sólo después de 50 a 60 minutos.

Susceptibilidad animal. El ganado vacuno, los caballos, los perros y las aves son sensibles a los estreptococos patógenos. Entre los animales de laboratorio, los conejos y los ratones blancos son sensibles. Sin embargo, los estreptococos que son patógenos para los humanos no siempre lo son para los animales de experimentación.

Fuentes de infección. Personas (pacientes y portadores), con menos frecuencia animales o productos infectados.

Rutas de transmisión. Polvo en el aire y en el aire, a veces transmitido por los alimentos, posiblemente por contacto doméstico.

Las enfermedades pueden ocurrir como resultado de una infección exógena, así como endógena, con la activación de estreptococos oportunistas que viven en las membranas mucosas de la faringe, la nasofaringe y la vagina. Una disminución de la resistencia del organismo (enfriamiento, ayuno, exceso de trabajo, etc.) puede provocar autoinfecciones.

La presensibilización es de gran importancia en la patogénesis de las infecciones estreptocócicas, como consecuencia de una enfermedad de etiología estreptocócica previamente sufrida.

Cuando los estreptococos penetran en el torrente sanguíneo, provocan un proceso séptico grave.

Enfermedades en humanos causado con mayor frecuencia por estreptococos β-hemolíticos del grupo serológico A. Producen enzimas patógenas: hialuronidasa, fibrinolisina (estreptoquinasa), desoxirribonucleasa, etc. Además, los estreptococos tienen una cápsula y una proteína M, que tienen propiedades antifagocíticas.

Los estreptococos causan diversas infecciones agudas y crónicas en humanos, tanto con formación de pus como no supurativas, que difieren en el cuadro clínico y la patogénesis. Supurativos: flemones, abscesos, infecciones de heridas, no supurativos: infecciones agudas del tracto respiratorio superior, erisipela, escarlatina, reumatismo, etc.

Los estreptococos suelen causar infecciones secundarias en la gripe, el sarampión, la tos ferina y otras enfermedades y, a menudo, complican las infecciones de las heridas.

Inmunidad. La naturaleza de la inmunidad es antitóxica y antibacteriana. La inmunidad antimicrobiana posinfecciosa es de baja intensidad. Esto se explica por la débil inmunogenicidad de los estreptococos y una gran cantidad de serovares que no proporcionan inmunidad cruzada. Además, con las enfermedades estreptocócicas, se observa alergización del cuerpo, lo que explica la tendencia a la recaída.

Prevención. Todo se reduce a medidas sanitarias e higiénicas, fortaleciendo la resistencia general del cuerpo. No se ha desarrollado una prevención específica.

Tratamiento. Se utilizan antibióticos. A menudo se utiliza penicilina, a la que los estreptococos no se han vuelto resistentes, así como eritromicina y tetraciclina.

La importancia de los estreptococos en la etiología de la carditis reumática.. La patogénesis de la carditis reumática no se ha estudiado lo suficiente. Pero a favor del papel de los estreptococos en el desarrollo de esta enfermedad hablan varios hechos:

1. En pacientes con carditis reumática, se cultiva estreptococo B-hemolítico de la garganta.

2. El reumatismo ocurre a menudo después de sufrir amigdalitis, amigdalitis, faringitis, que sensibilizan el cuerpo.

3. En el suero sanguíneo de los pacientes se detectan antiestreptolisina y antiestreptohialuronidasa, anticuerpos contra enzimas y toxinas estreptocócicas.

4. La confirmación indirecta del papel de los estreptococos es el tratamiento exitoso con penicilina.

Recientemente, se ha dado importancia a las formas L de estreptococos en la aparición de formas crónicas de carditis reumática.

La prevención de las exacerbaciones de la carditis reumática se reduce a la prevención de enfermedades estreptocócicas (por ejemplo, en primavera y otoño, se administra un tratamiento preventivo con penicilina). El tratamiento se reduce al uso de medicamentos antibacterianos: la penicilina.

La importancia de los estreptococos en la etiología de la escarlatina.. G.N. Gabrichevsky (1902) sugirió por primera vez que el estreptococo hemolítico es el agente causante de la escarlatina. Pero como los estreptococos aislados en otras enfermedades no se diferenciaban de los agentes causantes de la escarlatina, no todos compartían esta opinión. Ahora se ha establecido que la escarlatina es causada por estreptococos del grupo A, que producen una toxina eritrogénica.

Quienes se han recuperado de la enfermedad desarrollan inmunidad: estable, antitóxica. Su tensión se determina mediante la puesta en escena de la reacción de Dick: inyección intradérmica de una toxina eritrogénica. En aquellos que no están enfermos, se produce hiperemia e hinchazón alrededor del lugar de la inyección, lo que se caracteriza por una reacción positiva (ausencia de antitoxina en el suero sanguíneo). En aquellos que se han recuperado de la enfermedad, tal reacción está ausente, ya que la antitoxina formada por ellos neutraliza la toxina eritrogénica.

Prevención. Aislamiento, hospitalización. La gammaglobulina se administra a niños debilitados y en contacto. No se ha desarrollado una prevención específica.

Tratamiento. Se utilizan penicilina y tetraciclina. En casos severos, se administra suero antitóxico.

Objeto del estudio: identificación de estreptococos y determinación de su serovariedad.

Material para la investigación

1. Moco de la garganta (dolor de garganta, escarlatina).

2. Raspado de la zona afectada de la piel (erisipela, estreptodermia).

3. Pus (absceso).

4. Orina (nefritis).

5. Sangre (sospecha de sepsis; endocarditis).

Métodos básicos de investigación.

1. Bacteriológico.

2. Microscópico.

Progreso del estudio.

Segundo día de estudio.

Retire las tazas del termostato e inspeccione. Si hay colonias sospechosas, se hacen frotis de algunas de ellas, se tiñen con Gram y se examinan al microscopio. Si se detectan estreptococos en el frotis, parte de la colonia restante se subcultiva en tubos de ensayo en agar con suero para aislar un cultivo puro y en caldo con sangre en tubos de ensayo. Al final del día, se subcultiva un cultivo de 5 a 6 horas de caldo o agar en caldo Martin con glucosa al 0,25% para determinar el grupo serológico en la reacción de precipitación de Lensfield. Los tubos de ensayo y los frascos se colocan en un termostato y se dejan hasta el día siguiente.

Tercer día de estudio.

Los cultivos se retiran del termostato, se comprueba la pureza del cultivo en agar inclinado, se hacen frotis, se tiñen con Gram y se examinan al microscopio. Si hay cultivo puro de estreptococos, inocular en medio Hiss (lactosa, glucosa, maltosa, sacarosa y manitol), leche, gelatina, 40% de bilis y colocar en termostato.

Mirando el caldo de Martín. En presencia de crecimiento específico, se realiza una reacción de precipitación de Lensfield para determinar el grupo serológico.

Configuración de la reacción de precipitación según Lensfield. Se vierte un cultivo diario cultivado en caldo Martin en varios tubos de centrífuga y se centrifuga durante 10 a 15 minutos (3000 rpm).

El líquido sobrenadante se vierte en un frasco con una solución desinfectante, el sedimento se llena con una solución isotónica estéril de cloruro de sodio y se centrifuga nuevamente. Se añaden 0,4 ml de ácido clorhídrico al 0,2% al sedimento recogido de todos los tubos de centrífuga. Luego se coloca el tubo de ensayo en un baño de agua y se hierve durante 15 minutos, agitándolo periódicamente. Después de hervir, la suspensión resultante se centrifuga nuevamente. El antígeno se extrae con el sobrenadante, que se vierte en un tubo de ensayo limpio y se neutraliza con una solución de hidróxido de sodio al 0,2% hasta un pH de 7,0-7,2. Se añade como indicador azul de bromotimol (0,01 ml de solución al 0,04%). Con esta reacción, el color cambia de amarillo pajizo a azul.

Luego se vierten 0,5 ml de sueros del grupo antiestreptocócico en 5 tubos de precipitación, que se preparan inmunizando conejos (ver Capítulo 19). Se añade suero A al 1.er tubo, suero B al 2.º, suero C al 3.º, suero D al 4.º, solución isotónica de cloruro de sodio (control) al 5.º. Después de esto, utilizando una pipeta Pasteur, coloque con cuidado el extracto resultante (antígeno) en todos los tubos de ensayo a lo largo de la pared.

Si la reacción es positiva en un tubo de ensayo con suero homólogo, se forma un anillo fino de color blanco lechoso en el límite del extracto con el suero (Fig. 38).

Cuarto día de investigación

Los resultados se registran (Tabla 25).

Actualmente se determina la desoxirribonucleasa, así como la antiestreptohialuronidasa y la antiestreptolisina-O.

Preguntas de control

1. ¿Qué métodos básicos de pruebas de laboratorio para identificar estreptococos conoce?

2. ¿Por qué utilizar la reacción de precipitación de Lensfield?

3. ¿Por qué el antígeno debe ser transparente al realizar esta reacción? Describe la técnica para escenificar esta reacción.

Obtenga del maestro los sueros antiestreptocócicos A, B, C, D y la solución isotónica de cloruro de sodio. Configure la reacción de precipitación, muestre los resultados al profesor y dibújelos.

Medios culturales

agar sangre(ver capítulo 7).

agar suero(ver capítulo 7).

silbido de los medios(seco).

Gelatina de peptona de carne (MPG). A 100 ml de MPB añadir 10-15 g de gelatina finamente picada. La gelatina debe hincharse cuando se calienta lentamente en un baño de agua (a una temperatura de 40-50 ° C). Se añade una solución de carbonato de sodio al 10% (bicarbonato de sodio) a la gelatina derretida y el pH se ajusta a 7,0. Luego filtrar inmediatamente a través de un filtro plisado. La filtración es lenta. Para acelerar el proceso, se puede realizar la filtración en un autoclave caliente. El medio filtrado se vierte en tubos de 6 a 8 ml y se esteriliza. La esterilización se realiza fraccionadamente a una temperatura de 100 ° C durante 3 días seguidos o simultáneamente a 110 ° C durante 20 minutos en un autoclave. El enfriamiento del medio se realiza en tubos de ensayo colocados verticalmente.

preparando leche. La leche fresca se lleva a ebullición, se coloca en un lugar fresco durante un día, se retira de la crema y se vuelve a hervir. Dejar actuar un día y retirar la capa superior. La leche desnatada se filtra a través de una capa de algodón, luego se alcaliniza con una solución de carbonato de sodio al 10% hasta un pH de 7,2 y se vierte en tubos de ensayo de 5 a 6 ml.

Caldo Martín. Se añade una cantidad igual de peptona de Martin (estómagos de cerdo picados expuestos al ácido clorhídrico) al agua de la carne. La mezcla resultante se hierve durante 10 minutos, se alcaliniza con una solución de hidróxido de sodio al 10% hasta un pH de 8,0, se añade 0,5 de acetato de sodio, se vuelve a hervir y se vierte en recipientes esterilizados. Se añade un 0,25% de glucosa al caldo de Martin.

Miércoles Kitta - Tarozzi(ver capítulo 34).

Streptococcus pneumoniae (neumococo)

Los neumococos fueron descritos por primera vez por R. Koch (1871).

Morfología. Los neumococos son diplococos en los que los lados de las células enfrentados entre sí están aplanados y los lados opuestos están alargados, por lo que tienen una forma lanceolada, que recuerda a la llama de una vela (ver Fig. 4). El tamaño de los neumococos es de 0,75-0,5 × 0,5-1 micrones y se ubican en pares. En medios nutritivos líquidos a menudo forman cadenas cortas, volviéndose similares a los estreptococos. Los preumococos son inmóviles, no tienen esporas y en el cuerpo forman una cápsula que rodea a ambos cocos. La cápsula contiene una sustancia antifagina resistente al calor (que protege al neumococo de la fagocitosis y la acción de los anticuerpos). Cuando los neumococos crecen en medios nutritivos artificiales pierden su cápsula. Los neumococos son grampositivos. Las bacterias gramnegativas se encuentran en cultivos más antiguos.

Cultivo. Los neumococos son anaerobios facultativos. Crecen a una temperatura de 36-37° C y un pH de 7,2-7,4. Son exigentes con los medios, ya que no pueden sintetizar muchos aminoácidos, por lo que crecen solo en medios con la adición de proteína nativa (sangre o suero). En agar sérico forman colonias pequeñas, delicadas y bastante transparentes. En el agar sangre crecen colonias húmedas de color gris verdoso, rodeadas por una zona verde, que es el resultado de la conversión de hemoglobina en metahemoglobina. Los neumococos crecen bien en caldo con la adición de glucosa al 0,2% y en caldo con suero. El crecimiento en medios líquidos se caracteriza por turbidez difusa y sedimentos polvorientos en el fondo.

Propiedades enzimáticas. Los neumococos tienen una actividad sacarolítica bastante pronunciada. Descomponen: lactosa, glucosa, sacarosa, maltosa, inulina para formar ácido. El manitol no se fermenta. Sus propiedades proteolíticas se expresan débilmente: cuajan la leche, no licuan la gelatina y no forman indol. Los neumococos se disuelven en la bilis. La degradación de la inulina y su disolución en la bilis es una característica diagnóstica importante que distingue al Streptococcus pneumoniae del Streptococcus pyogenes.

Factores de patogenicidad. Los neumococos producen hialuronidasa, fibrinolisina, etc.

Formación de toxinas. Los neumococos producen endotoxinas, hemolisina y leucocidina. La virulencia de los neumococos también se asocia con la presencia de antifagina en la cápsula.

Estructura y clasificación antigénica.. En el citoplasma de los neumococos hay un antígeno proteico común a todo el grupo y en la cápsula hay un antígeno polisacárido. Según el antígeno polisacárido, todos los neumococos se dividen en 84 serovares. Entre los patógenos para los humanos, los serovares I, II y III son los más comunes.

Resistencia a los factores ambientales.. Los neumococos pertenecen al grupo de microorganismos inestables. Una temperatura de 60° C los mata en 3-5 minutos. Son bastante resistentes a las bajas temperaturas y al secado. En el esputo seco permanecen viables hasta por 2 meses. Se pueden almacenar en un medio nutritivo por no más de 5 a 6 días. Por tanto, a la hora de cultivar, es necesario volver a sembrar cada 2-3 días. Las soluciones desinfectantes convencionales: 3% de fenol, sublimadas en una dilución de 1:1000, las destruyen en pocos minutos.

Los neumococos son especialmente sensibles a la optoquina, que los mata en una dilución de 1:100.000.

Susceptibilidad animal. El huésped natural de los neumococos son los humanos. Sin embargo, los neumococos pueden causar enfermedades en terneros, corderos, lechones, perros y monos. De los animales de experimentación, los ratones blancos son muy sensibles al neumococo.

Fuentes de infección. Una persona enferma y portadora de bacterias.

Rutas de transmisión. Gotas en el aire, tal vez polvo en el aire.

Portón de entrada. Mucosas del tracto respiratorio superior, ojos y oídos.

Enfermedades en humanos. Los neumococos pueden causar enfermedades inflamatorias purulentas de diversas localizaciones. Los específicos de los neumococos son:

1) neumonía lobar;

2) úlcera corneal progresiva;

La enfermedad más común es la neumonía lobular, que afecta a uno, con menos frecuencia a dos o tres lóbulos del pulmón. La enfermedad es aguda y se acompaña de fiebre alta y tos. Suele terminar de forma crítica.

Inmunidad. Después de la enfermedad, queda una inmunidad inestable, ya que la neumonía se caracteriza por recaídas.

Prevención. Todo se reduce a medidas sanitarias y preventivas. No se ha desarrollado una prevención específica.

Tratamiento. Se utilizan antibióticos: penicilina, tetraciclina, etc.

Preguntas de control

1. Morfología de los neumococos. Cultivo y propiedades enzimáticas.

2. ¿Qué factores determinan la patogenicidad de los neumococos y qué los protege de la fagocitosis?

3. ¿Cuáles son las principales puertas de la infección neumocócica? ¿Qué enfermedades causan los neumococos?

Examen microbiológico

Objeto del estudio: identificación de neumococo.

Material para la investigación

1. Esputo (neumonía).

2. Moco de la garganta (dolor de garganta).

3. Secreción de una úlcera (úlcera corneal progresiva).

4. Secreción del oído (otitis media).

5. Pus (absceso).

6. Punteado pleural (pleuresía).

7. Sangre (sospecha de sepsis).

1 (Es mejor tomar esputo por la mañana (con neumonía específica, el esputo tiene un color oxidado).)

Métodos básicos de investigación.

1. Microscópico.

2. Microbiológico.

3. Biológico.

Progreso del estudio.

muestra biológica. Se emulsiona un poco (3-5 ml de esputo) en un caldo estéril y se inyectan por vía intraperitoneal 0,5 ml de esta mezcla en un ratón blanco. Después de 6 a 8 horas, el ratón muestra signos de enfermedad. En este momento, ya se puede detectar neumococo en el exudado de la cavidad abdominal. El exudado se extrae con una jeringa esterilizada. Se hacen frotis, se tiñen con Gram y se examinan con un microscopio. Para aislar un cultivo puro, el exudado se inocula en agar suero. Si el ratón muere o enferma, la sangre del corazón se cultiva en agar sérico para aislar un cultivo puro. Los cultivos se colocan en un termostato.

Método acelerado para determinar el tipo de neumococo.(reacción de microaglutinación). Se aplican 4 gotas de exudado de la cavidad abdominal de un ratón infectado a un portaobjetos de vidrio. Se agrega suero aglutinante tipo I a la primera gota, suero tipo II a la segunda, tipo III a la tercera y solución isotónica de cloruro de sodio (control) a la cuarta.

Los sueros de tipo I y II están prediluidos en una proporción de 1:10 y el suero de tipo III, en una proporción de 1:5. Todas las gotas se agitan, se secan, se fijan y se tiñen con fucsina diluida. Si el resultado es positivo, se observa aglomeración microbiana (aglutinación) en una de las gotas.

Segundo día de estudio.

Los cultivos se retiran del termostato, se examinan y se hacen frotis a partir de colonias sospechosas. Si hay diplococos lanceolados grampositivos en los frotis, se aíslan 2-3 colonias en un agar sérico inclinado para obtener un cultivo puro. Los cultivos se colocan en un termostato. Se hacen frotis con el caldo, se tiñen con Gram y se examinan al microscopio.

Tercer día de estudio.

Los cultivos se retiran del termostato. Verifican la pureza del cultivo: hacen frotis, tinción de Gram y microscopio. Si hay diplococos lanceolados grampositivos en el cultivo aislado, el cultivo aislado se identifica mediante cultivo:

1) en medios Hiss (lactosa, glucosa, sacarosa, maltosa) la siembra se realiza de la forma habitual: mediante inyección en el medio;

2) en medio con inulina;

3) en un medio con optoquina;

4) realizar una prueba de bilis.

prueba de inulina. El cultivo en estudio se siembra en un medio nutritivo que contiene inulina y tintura de tornasol y se coloca en un termostato. Después de 18 a 24 horas, los cultivos se retiran del termostato. En presencia de neumococos, el medio se vuelve rojo (los estreptococos no cambian la consistencia ni el color del medio).

Determinación de la sensibilidad a la optoquina.. El cultivo aislado se inocula en agar sangre al 10% que contiene optoquina 1:50000. Los neumococos, a diferencia de los estreptococos, no crecen en medios que contienen optoquina.

prueba de bilis. Se vierte 1 ml del caldo de cultivo de prueba en tubos de aglutinación. A uno de ellos se le añade una gota de bilis de conejo, el segundo tubo sirve como control. Ambos tubos de ensayo se colocan en un termostato. Después de 18 a 24 horas, se produce la lisis de los neumococos, que se expresa en la aclaración de un caldo turbio. En el control, la suspensión permanece turbia.

Se puede realizar una muestra de bilis en un medio nutritivo sólido. Para hacer esto, se aplica un grano de bilis seca a una colonia de neumococos cultivada en recipientes con agar y suero; la colonia se disuelve y desaparece.

Cuarto día de investigación

Los resultados se registran (Tabla 26).

Nota. j - descomposición de carbohidratos con formación de ácido.

Actualmente, los métodos de investigación serológica (RSK y RIGA) se utilizan ampliamente para determinar los anticuerpos estreptocócicos. La determinación del grupo y serovar del cultivo aislado se realiza mediante anticuerpos fluorescentes.

Determinación de la virulencia neumocócica.. Se diluye un caldo de cultivo diario de neumococo con agua de peptona al 1% de 10 -2 a 10 -8, se administran 0,5 ml de cada dilución a dos ratones blancos. El cultivo que provocó la muerte de los ratones con una dilución de 10 -7 se considera virulento, con una dilución de 10 -4 -10 -6 se considera moderadamente virulento. Un cultivo que no causa la muerte de los ratones es avirulento.

Preguntas de control

1. ¿Qué métodos conoce para aislar un cultivo puro de neumococos?

2. ¿Qué animal es más sensible al neumococo?

3. ¿Qué reacciones se realizan con el exudado de un ratón infectado y con qué finalidad?

4. ¿De qué representantes de cocos piógenos se debe diferenciar el neumococo y mediante qué prueba?

5. ¿Cómo determinar la virulencia de los neumococos?

Ejercicio

Realizar un esquema del examen de esputo, indicando sus etapas por día.

Medios culturales

agar suero(ver capítulo 7).

caldo de suero(ver capítulo 7).

agar sangre(ver capítulo 7).

silbido de los medios(seco).

Medio de muestra con inulina. A 200 ml de agua destilada añadir 10 ml de suero bovino inactivado, 18 ml de tintura de tornasol y 3 g de inulina. Esterilizar con vapor continuo a 100° C durante 3 días seguidos. Caldo de bilis (ver Capítulo 7).