Análisis de sífilis ELISA - interpretación del análisis. Norma y desviaciones.

En relación con el desarrollo de las tecnologías celulares, la biología molecular, la genética, la física, la química y otras disciplinas de alta tecnología, se están introduciendo en la práctica diaria nuevos métodos de alta tecnología y alta precisión. Estas tendencias interdisciplinarias afectan tanto al campo del conocimiento médico como a áreas relacionadas de problemas biológicos y bioquímicos. Durante los últimos diez años, un método de diagnóstico de laboratorio clínico llamado inmunoensayo enzimático se ha generalizado y se ha introducido en la práctica masiva.

En general, las tecnologías de reacciones inmunológicas, enzimáticas y radiológicas se han utilizado ampliamente para tipificar células, cultivos celulares y diversos tejidos desde principios de los años 80 del siglo XX. Sin embargo, estos métodos requerían mucha mano de obra, no estaban unificados ni estandarizados, lo que impedía su uso con fines de diagnóstico y tratamiento a gran escala. Estos métodos sólo los utilizaban laboratorios estrechos, intensivos en conocimientos y altamente especializados.

Sin embargo, con el desarrollo de la tecnología, la microtecnología y la producción de diversos materiales biopolímeros, ha sido posible producir kits de diagnóstico inmunoabsorbentes ligados a enzimas ya preparados que pueden ser utilizados por laboratorios de instituciones médicas generales. ELISA es muy utilizado para diagnosticar todo tipo de infecciones (clamidia, sífilis, citomegalovirus, toxoplasmosis, herpes, etc.), tanto agudas como crónicas, así como formas latentes que cursan sin síntomas clínicos, y este método también se utiliza para el control de enfermedades crónicas. . Intentemos descubrir qué tipo de método es este y qué principios se basan en él.

Componentes del inmunoensayo enzimático: reacción inmune y reacción enzimática.

El inmunoensayo enzimático, como su nombre indica, consta de dos componentes diferentes: una reacción inmunitaria y una reacción enzimática. La reacción inmune produce la unión de moléculas biológicas, elementos de una célula o microorganismo, que en realidad están tratando de detectar, y la reacción enzimática permite ver y medir el resultado de la reacción inmunológica. Es decir, la reacción inmune es parte de una técnica compleja que realmente detecta el microbio deseado. Y la reacción enzimática es la parte de una técnica compleja que permite convertir el resultado de una reacción inmune en una forma visible a simple vista y accesible para medir mediante técnicas químicas de rutina. Basándonos en esta estructura del método de inmunoensayo enzimático, analizaremos ambas partes por separado.

Reacción inmune, ¿qué es? ¿Qué es un anticuerpo o antígeno?

¿Qué es una respuesta inmune? ¿Qué es un antígeno?
En primer lugar, veamos qué son las reacciones inmunes. Reacciones inmunes– son reacciones específicas de unión de un antígeno a un anticuerpo con la formación de un complejo inmunológico. ¿Qué significa? En la superficie de cada célula de cualquier organismo hay estructuras especiales llamadas antígenos. Los antígenos en general son moléculas que transportan información sobre una célula (similar a la información de la placa de una persona, que indica los datos básicos de esa persona).

Antígenos individuales y de especie: ¿qué son? ¿Por qué se necesitan estos antígenos?

Disponible antígenos individuales, es decir, inherente únicamente a este organismo en particular. Estos antígenos individuales son diferentes para todas las personas; hay algunos que son similares entre sí, pero aún así diferentes. ¡No existen dos copias idénticas de antígenos individuales en la naturaleza!

El segundo tipo principal de antígeno es antígenos de especies, es decir, inherente a cualquier tipo concreto de seres vivos. Por ejemplo, los humanos tienen su propio antígeno de especie, común a todas las personas, los ratones tienen su propio antígeno de especie de ratón, etc. En la superficie de cada célula necesariamente está presente un antígeno específico e individual.

Las células del sistema inmunológico utilizan el antígeno de especie para reconocer a "amigos o enemigos".

¿Cómo se produce el reconocimiento de antígenos?

La célula inmunitaria contacta con la célula sospechosa y realiza una identificación basada en el antígeno individual. En la memoria de la célula inmunitaria, se “registra” cómo se ve “su antígeno”. Por lo tanto, si el antígeno de una célula sospechosa coincide con la descripción de "antígeno propio", entonces esta célula del cuerpo no representa ningún peligro. Entonces la célula inmune se “desata” y se va. Y si el antígeno no coincide con la descripción de "propio", entonces la célula inmune identifica esta célula como "extraña" y, por lo tanto, potencialmente peligrosa para todo el organismo. En este caso, la célula inmune no se “suelta”, sino que comienza a destruir el objeto peligroso. La precisión de este reconocimiento inmunológico es asombrosa: 99,97%. ¡Prácticamente no hay errores!

¿Qué es un anticuerpo, complejo inmunológico?
¿Qué es un anticuerpo?

Un anticuerpo es una molécula especial ubicada en la superficie de una célula inmune. Es el anticuerpo que se une a los antígenos de la célula sospechosa. A continuación, el anticuerpo transmite información dentro de la célula, donde se produce el reconocimiento, y recibe una señal de retorno de dos tipos, “propia” o “extraña”. Al recibir una señal “propia”, el anticuerpo rompe el vínculo con el antígeno y libera la célula.

¿Qué es un complejo inmunológico?
Cuando la señal es “extraña”, la situación se desarrolla de manera diferente. El anticuerpo no rompe la conexión con el antígeno, sino que, por el contrario, al enviar señales específicas, provoca un “refuerzo”. Biológicamente, esto significa que otros anticuerpos ubicados en otra parte de la célula comienzan a moverse hacia el lugar de donde proviene la señal de peligro y también forman un vínculo entre ellos y el antígeno capturado. Al final, el antígeno queda rodeado por todos lados y firmemente adherido: este complejo antígeno + anticuerpo se llama complejo inmune. A partir de este momento comienza la utilización del antígeno. Pero ahora no nos interesan los detalles del proceso de neutralización de antígenos.

Tipos de anticuerpos (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Los anticuerpos son estructuras proteicas que, en consecuencia, tienen un nombre químico, que se utiliza como sinónimo de la palabra anticuerpo. Entonces, anticuerpos = inmunoglobulinas.

Hay 5 tipos de inmunoglobulinas (Ig), que se unen a diferentes tipos de antígenos en diferentes lugares del cuerpo humano (por ejemplo, en la piel, las membranas mucosas, la sangre, etc.). Es decir, los anticuerpos tienen una división del trabajo. Estas inmunoglobulinas se denominan con las letras del alfabeto latino: A, M, G, D, E y se designan de la siguiente manera: IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

En el diagnóstico se utiliza solo un tipo de anticuerpo, que es el más específico para el microbio que se está detectando. Es decir, la unión de este tipo de anticuerpo al antígeno detectado siempre se produce. Los más utilizados son IgG e IgM.

Es este principio de la reacción inmune (la precisión y especificidad únicas del reconocimiento del objeto biológico que se está determinando) el que subyace al inmunoensayo enzimático. Debido a la alta precisión de los anticuerpos en el reconocimiento de antígenos, la precisión de todo el método de inmunoensayo enzimático también es el más alto.

Reacción enzimática

¿Qué reacción es enzimática? ¿Qué son la afinidad, el sustrato y el producto de una reacción?
Pasemos a considerar la reacción enzimática en el trabajo del método de inmunoensayo enzimático.

¿Qué es una reacción enzimática?

Una reacción enzimática es una reacción química en la que una sustancia se convierte en otra por la acción de una enzima. La sustancia sobre la que actúa la enzima se llama sustrato. Y la sustancia que se obtiene como resultado de la acción de una enzima se llama producto de reacción. Además, la peculiaridad de la reacción enzimática es tal que una determinada enzima actúa sólo sobre un determinado sustrato. Esta propiedad de una enzima de reconocer “su” sustrato se llama afinidad.

Así, cada enzima lleva a cabo sólo una reacción específica. Hay una gran cantidad de enzimas conocidas en el mundo biológico, así como reacciones enzimáticas. En el diagnóstico por inmunoabsorción ligado a enzimas, solo se utilizan unas pocas reacciones enzimáticas, no más de 10. Al mismo tiempo, se eligieron reacciones enzimáticas cuyo producto son sustancias coloreadas. ¿Por qué deberían colorearse los productos de una reacción enzimática? Porque para calcular la concentración de una sustancia a partir de una solución coloreada, existe un método químico simple: colorimetria.

Método de colorimetría: esencia y principio.

colorimetria utiliza la medición de la densidad del color de una solución y la concentración de la sustancia se calcula a partir de la densidad del color. En este caso, un dispositivo especial, un colorímetro, mide la densidad del color de la solución. En colorimetría, hay dos opciones posibles para la dependencia de la densidad del color de la concentración de una sustancia: una dependencia directamente proporcional o una dependencia inversamente proporcional. En una relación directamente proporcional, cuanto mayor es la concentración de la sustancia, más intensa es la densidad del color de la solución. En una relación inversamente proporcional, cuanto mayor es la concentración de la sustancia, menor es la densidad del color de la solución. Técnicamente, esto sucede así: se toman varias soluciones con una concentración conocida de una sustancia, se mide la densidad de estas soluciones y se construye un gráfico de la dependencia de la concentración de la densidad del color ( tabla de calibración).

A continuación, se mide la densidad de color de la solución, cuya concentración se determina, y a partir del gráfico de calibración se encuentra el valor de concentración correspondiente al nivel de densidad de color medida de la solución. En los colorímetros automáticos modernos, la calibración se realiza se realiza solo una vez, luego el propio dispositivo construye una curva de calibración, que permanece en la memoria del dispositivo, y la medición se realiza automáticamente.

Las siguientes enzimas se utilizan con mayor frecuencia en el inmunoensayo enzimático: peroxidasa, fosfatasa alcalina y avidina.

¿Cómo se combinan las reacciones inmunológicas y enzimáticas en un inmunoensayo enzimático? Ahora pasaremos a considerar el inmunoensayo enzimático en sí. ¿Qué etapas incluye y qué sucede durante estas reacciones? El inmunoensayo enzimático puede ser directo e indirecto.

Inmunoensayo enzimático directo: etapas de implementación.

En un inmunoensayo enzimático directo, se utilizan anticuerpos contra el antígeno detectado, combinados con una etiqueta específica. Esta etiqueta específica es el sustrato de la reacción enzimática.

Unión de antígenos a la superficie del pocillo y combinación de antígeno con anticuerpo.

¿Cómo se realiza el inmunoensayo enzimático directo? Se toma material biológico (sangre, raspados de membranas mucosas, frotis) y se coloca en orificios especiales. El material biológico se deja en los pocillos durante 15 a 30 minutos para que los antígenos puedan adherirse a la superficie de los pocillos. A continuación, se añaden a estos pocillos anticuerpos contra el antígeno detectado. Esto significa que cuando se detectan antígenos, por ejemplo, la sífilis, se añaden anticuerpos contra los antígenos de la sífilis. Estos anticuerpos se obtienen industrialmente y los laboratorios compran kits ya preparados. Esta mezcla del material de prueba y los anticuerpos se deja durante algún tiempo (de 30 minutos a 4-5 horas) para que los anticuerpos puedan encontrar y contactar con "su" antígeno. Cuantos más antígenos haya en una muestra biológica, más anticuerpos se unirán a ellos.

Eliminación de anticuerpos “extra”

Como se indicó, los anticuerpos también están asociados con una etiqueta específica. Dado que los anticuerpos se agregan en exceso, no todos se unirán a los antígenos, y si no hay ningún antígeno en la muestra, entonces, en consecuencia, ni un solo anticuerpo se unirá al antígeno deseado. Para eliminar los anticuerpos "sobrantes", simplemente se vierte el contenido de los pocillos. Como resultado, todos los anticuerpos "extra" se eliminan y los que se han unido a los antígenos permanecen, ya que los antígenos están "pegados" a la superficie de los pocillos. Los pocillos se enjuagan varias veces con una solución especial, que permite eliminar todos los anticuerpos "extra".

A continuación comienza la segunda etapa: la reacción enzimática. Se agrega una solución con enzima a los pocillos lavados y se deja durante 30 a 60 minutos. Esta enzima tiene afinidad por la sustancia (marca específica) a la que están unidos los anticuerpos. La enzima lleva a cabo una reacción que convierte esta etiqueta específica (sustrato) en una sustancia coloreada (producto). Luego, mediante colorimetría, se encuentra la concentración de esta sustancia coloreada. Dado que esta etiqueta específica está asociada con anticuerpos, significa que la concentración del producto de reacción coloreado es igual a la concentración de anticuerpos. Y la concentración de anticuerpos es igual a la concentración de antígenos. Así, como resultado del análisis, recibimos una respuesta sobre la concentración del microbio u hormona detectado.

Así es exactamente como funciona el inmunoensayo enzimático directo. Sin embargo, hoy en día se utiliza con mayor frecuencia el inmunoensayo enzimático indirecto, ya que la sensibilidad y precisión del indirecto es mayor que el directo. Entonces, pasemos al inmunoensayo enzimático indirecto.

Inmunoensayo enzimático indirecto: etapas de implementación

Hay dos etapas en el inmunoensayo enzimático indirecto. Durante la primera etapa, se utilizan anticuerpos no marcados contra los antígenos detectados y, en la segunda etapa, se utilizan anticuerpos marcados contra los primeros anticuerpos no marcados. Es decir, no se trata de una unión directa de un anticuerpo a un antígeno, sino de un doble control: la unión de los anticuerpos a un antígeno, seguida de la unión de segundos anticuerpos al complejo anticuerpo + antígeno. Como regla general, los anticuerpos para la primera etapa son de ratón y para la segunda, de cabra.

Fijación de antígenos en la superficie del pocillo y unión del antígeno a un anticuerpo no marcado.
Al igual que en el inmunoensayo enzimático directo, se recoge material biológico: sangre, raspados y frotis. El material biológico en estudio se introduce en los pocillos y se deja durante 15-30 minutos para que los antígenos se adhieran a la superficie de los pocillos. Luego se añaden a los pocillos anticuerpos no marcados contra los antígenos y se dejan durante un período de tiempo (de 1 a 5 horas) para que los anticuerpos se unan a “sus” antígenos y formen un complejo inmunológico ( Primer paso). Después de eso, los anticuerpos “extra” no unidos se eliminan vertiendo el contenido de los pocillos. Lave con una solución especial para eliminar por completo todos los anticuerpos no unidos.

Unión del anticuerpo marcado al complejo antígeno + anticuerpo no marcado
Después de lo cual se toman los segundos anticuerpos marcados, se agregan a los pocillos y se dejan nuevamente por un tiempo, de 15 a 30 minutos ( segunda fase). Durante este tiempo, los anticuerpos marcados se unen a los primeros (los no marcados) y forman un complejo: anticuerpo + anticuerpo + antígeno. Sin embargo, se añaden a los pocillos en exceso anticuerpos tanto marcados como no marcados. Por lo tanto, es necesario eliminar nuevamente los anticuerpos “extra” ya marcados que no se han unido a anticuerpos no marcados. Para ello, repita el procedimiento de verter el contenido de los pocillos y lavar con una solución especial.

Reacción enzimática: formación de un compuesto coloreado.
Posteriormente se añade una enzima que lleva a cabo la reacción de convertir la “etiqueta” en una sustancia coloreada. El color se desarrolla en 5 a 30 minutos. Luego se realiza la colorimetría y se calcula la concentración de la sustancia coloreada. Dado que la concentración de la sustancia coloreada es igual a la concentración de anticuerpos marcados, y la concentración de anticuerpos marcados es igual a la concentración de anticuerpos no marcados, que, a su vez, es igual a la concentración del antígeno. Así, obtenemos la concentración del antígeno detectado.
Este doble control mediante el uso de dos tipos de anticuerpos permitió aumentar la sensibilidad y especificidad del método de inmunoensayo enzimático. A pesar del alargamiento del tiempo de análisis y la inclusión de etapas adicionales, estas pérdidas se compensan con la precisión del resultado. Es por eso que actualmente la gran mayoría de los métodos de inmunoensayo enzimático son inmunoensayos enzimáticos indirectos.

¿Qué enfermedades se detectan mediante inmunoensayo enzimático?

Pasemos a considerar qué enfermedades y qué sustancias biológicamente activas se detectan mediante inmunoensayo enzimático. Las sustancias detectadas mediante inmunoensayo enzimático se presentan en la tabla.

Hormonas y marcadores de enfermedad tiroidea.	Peroxidasa tiroidea (TPO)
	Tiroglobulina (TG)
	Hormona estimulante de la tiroides (TSH)
	Tiroxina (T4)
	Triyodotironina (T3)
	Tiroxina libre (T4)
	Triyodotironina libre (T3)
Diagnóstico de la función reproductiva.	Hormona luteinizante (LH)
	Hormona folículo estimulante (FSH)
	prolactina
	Progesterona
	estradiol
	Testosterona
	Cortisol
	Globulina fijadora de esteroides (SBG)
	Alfafetoproteína (AFP)
Marcadores tumorales	Gonadotropina coriónica (CG)
	Antígeno prostático específico (PSA)
	SA – 125
	SA – 19,9
	CYFRA-21-1
	M-12 (SA-15,3)
	MUC – 1 (M – 22)
	MUC1 (M – 20)
	alveomucina
	K – cadena
	L – cadena
	Factor de necrosis tumoral (TNFα)
	γ – interferón
	Antígeno carcinoembrionario (CEA)
Diagnóstico de enfermedades infecciosas.

ELISA es una prueba de laboratorio moderna que busca anticuerpos (o antígenos) específicos en la sangre para enfermedades específicas con el fin de identificar no solo la etiología, sino también el estadio de la enfermedad.

1. buscar anticuerpos específicos contra cualquier enfermedad infecciosa;
2. buscar antígenos de cualquier enfermedad infecciosa;
3. estudio del estado hormonal del paciente;
4. detección de la presencia de enfermedades autoinmunes.

Como cualquier método de diagnóstico de laboratorio, ELISA tiene sus ventajas y desventajas. Las ventajas del método incluyen:

1. alta especificidad y sensibilidad del método (más del 90%);
2. la capacidad de determinar la enfermedad y rastrear la dinámica del proceso, es decir, comparar la cantidad de anticuerpos en diferentes períodos de tiempo;
3. accesibilidad y rapidez de esta investigación;
4. método no invasivo de recolección de material, no de investigación;

La desventaja del método es el hecho de que durante el análisis es posible identificar no el agente causante de la enfermedad en sí, sino solo la respuesta inmune (anticuerpos).

La esencia del método ELISA.

Existen varios tipos de ELISA: directo, indirecto, método de bloqueo, competitivo. Sin embargo, en la práctica, el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas heterogéneo, o ELISA, se utiliza con mayor frecuencia.

La base del inmunoensayo enzimático es la reacción inmune de un antígeno y un anticuerpo con la formación de un complejo inmunológico, lo que resulta en un cambio en la actividad enzimática de marcas específicas en la superficie de los anticuerpos.

Básicamente, este proceso se puede dividir en varias etapas:

1. en la superficie de los pocillos de la tableta del sistema de prueba hay un antígeno purificado de un patógeno específico. Cuando se añade suero sanguíneo animal, se produce una reacción específica entre este antígeno y el anticuerpo deseado;
2. A continuación, se añade al pocillo un cromógeno especial (conjugado marcado con peroxidasa). Se produce una reacción enzimática que da como resultado la formación de una sustancia coloreada en el pocillo de la placa. La intensidad de su color depende de la cantidad de inmunoglobulinas (anticuerpos) contenidas en el suero del animal;
3. Luego se evalúa el resultado. Utilizando un espectrofotómetro multicanal, se compara la densidad óptica del material de prueba con la densidad óptica de las muestras de control y los resultados se procesan matemáticamente. La cantidad de anticuerpos en un paciente depende directamente de la altura de la densidad óptica de un pozo determinado.

Hay que recordar: para cada sistema de prueba, se desarrollan indicadores individuales para registrar los resultados, indicadores de normalidad y patología (“valores de referencia”). Esto debe tenerse en cuenta a la hora de valorar los resultados de cada estudio específico.

Es incorrecto interpretar los resultados de un laboratorio basándose en los “valores de referencia” de otro laboratorio. También es incorrecto comparar los resultados de diferentes laboratorios entre sí.

A la hora de evaluar los resultados de infecciones específicas, es importante la clase de anticuerpos detectados y su cantidad. De esto depende no solo la cuestión de la etiología de la infección, sino también la etapa esperada de la enfermedad (aguda, crónica), así como la presencia de una infección activa (aguda o exacerbación de la crónica) en el momento del examen.

¿Cuál es el plazo aproximado de aparición de los anticuerpos?

Los primeros anticuerpos son IgM. Pueden detectarse entre 1 y 3 semanas después de una posible infección, lo que caracteriza la fase aguda del proceso infeccioso. La segunda situación para la aparición de anticuerpos IgM es la exacerbación de un proceso crónico. Las IgM circulan en promedio durante unos 3 meses y luego su cantidad desaparece gradualmente. Sin embargo, en algunos pacientes, se pueden detectar trazas de IgM entre 1 y 2 años después de la infección.

A partir de la cuarta semana después de la infección, comienzan a aparecer anticuerpos IgG. En la mayoría de las infecciones, su título aumenta gradualmente hasta un máximo en diferentes momentos (en promedio después de 1,5 a 2 meses), luego el título permanece en un nivel bajo e indica inmunidad. En algunas enfermedades, los niveles de IgG no son elevados.

Opciones de detección de anticuerpos

• La detección aislada de anticuerpos IgM sugiere la presencia de una infección primaria.
• La detección simultánea de IgM e IgG en la sangre es típica de la infección primaria en los 2-3 meses anteriores, así como durante la exacerbación de una enfermedad crónica.
• La detección de IgG aislada puede indicar tanto inmunidad a la enfermedad como a infección crónica. En la segunda situación, son importantes tanto la cantidad de anticuerpos (título) como el cambio de este título a lo largo del tiempo. Normalmente, los estudios se realizan a intervalos de 2-4-6 semanas.

El análisis ELISA es una técnica moderna de diagnóstico de laboratorio para un número significativo de enfermedades diferentes. La abreviatura significa inmunoensayo enzimático. La esencia de la técnica es determinar el título (actividad) de los anticuerpos.

La técnica ELISA está ganando popularidad en la actualidad. Se utiliza en medicina clínica para el diagnóstico de diversas patologías, así como en estudios experimentales que requieren una determinación precisa de la concentración de diversos compuestos en los medios estudiados.

El principio del método ELISA.

El inmunoensayo enzimático es una reacción inmunológica. Se basa en la adición de anticuerpos específicos.
o antígenos en el medio de prueba (generalmente la sangre que se analiza), seguido de la determinación enzimática de la concentración de los complejos antígeno-anticuerpo resultantes. Según la concentración del complejo, se puede juzgar el nivel o la actividad del compuesto que se determina en el medio de prueba.

La determinación de la concentración de complejos antígeno-anticuerpo generalmente se lleva a cabo utilizando un equipo especial mediante el método cromatográfico.

Indicaciones para el uso

El análisis ELISA se realiza para diversas indicaciones, las principales en medicina clínica son:

• Diagnóstico de patología infecciosa con transmisión predominantemente sexual (ITS), que incluye clamidia, micoplasmosis, ureaplasmosis, tricomoniasis, identificando anticuerpos específicos contra el agente infeccioso.
• Diagnóstico de enfermedades infecciosas de diversa localización para determinar la etapa del proceso patológico, principalmente en el proceso de diagnóstico de hepatitis viral parenteral y VIH.
• Determinación de concentraciones hormonales para el diagnóstico de diversas patologías de los órganos del sistema endocrino (glándulas endocrinas).
• Determinación de diversos compuestos para diagnosticar la causa de la intoxicación del organismo en caso de intoxicación, picaduras de insectos o serpientes.

Para estas indicaciones médicas se realiza un análisis de sangre ELISA. Esta técnica también se utiliza activamente en medicina experimental durante diversos estudios clínicos durante el desarrollo de nuevos medicamentos y vacunas para inmunoprofilaxis.

Cómo se lleva a cabo la investigación.

Un análisis de sangre mediante ELISA se realiza en un laboratorio especializado. Para realizarlo primero se extrae sangre venosa, normalmente de la vena cubital en un volumen de 5-10 ml, que luego se envía al laboratorio. En promedio, el resultado de la prueba se puede obtener al día siguiente, lo cual es un punto importante para prescribir rápidamente el tratamiento después del diagnóstico de la enfermedad.

Cómo prepararse para ELISA

Para obtener resultados de investigación confiables utilizando el inmunoensayo enzimático, se deben seguir varias recomendaciones preparatorias simples, que incluyen:

• El día anterior a la prueba conviene dejar de comer alimentos grasos (carne, carnes ahumadas) y alcohol.
• El material para el estudio deberá entregarse por la mañana en ayunas.
• El día del estudio es recomendable evitar el estrés físico y psicoemocional.
• Antes del estudio, debes intentar no fumar.

La mayoría de los resultados falsos positivos de una prueba inmunoabsorbente ligada a enzimas se deben a la implementación inadecuada de las recomendaciones preparatorias. En la mayoría de los casos, esto se asocia con el consumo de alimentos grasos, lo que provoca un aumento en la concentración de triglicéridos (grasas) en el plasma sanguíneo, lo que reduce la especificidad del ELISA.

Decodificando los resultados

Un análisis de sangre para detectar anticuerpos mediante ELISA tiene 2 modificaciones: determinación cualitativa y cuantitativa. En
En una determinación cualitativa de anticuerpos, el resultado puede ser positivo (se detectan anticuerpos, lo que indica la posible presencia de un proceso patológico provocado por un agente infeccioso) o negativo (no hay anticuerpos, lo que indica la ausencia de un proceso infeccioso).

La ausencia de anticuerpos no siempre es un indicador del 100% de la ausencia de un proceso infeccioso. Esto se debe al hecho de que después de la infección, los anticuerpos no se forman inmediatamente, sino durante un cierto período de tiempo (al menos unas 2 semanas). Por lo tanto, para confirmar la ausencia de infección, se puede repetir ELISA después de un tiempo.

El ELISA cuantitativo se utiliza para determinar el título (actividad) de anticuerpos, así como sus clases. En la mayoría de los casos, para diagnosticar enfermedades infecciosas, se determinan los anticuerpos de las clases IgG (inmunoglobulina G) e IgM (inmunoglobulina M), que se forman en el cuerpo en varios intervalos después de la infección, por lo que descifrar el resultado de la prueba puede tener varios significados:

• Un aumento de la actividad de IgM y la ausencia de IgG es evidencia de una infección reciente y de un curso agudo del proceso infeccioso.
• Un aumento en la actividad de IgM e IgG es una exacerbación del proceso infeccioso durante su curso crónico y su infección prolongada.
• La alta actividad de IgG y la ausencia de IgM es un curso crónico del proceso infeccioso en el contexto de una infección prolongada, después de la cual han pasado más de seis meses (el tiempo necesario para la formación de anticuerpos de clase IgG).

En general, descifrar los resultados de ELISA para cada proceso infeccioso tiene ciertas características. Un médico lleva a cabo una determinación más precisa de la presencia de una enfermedad infecciosa, así como de la etapa de su curso.

ELISA es actualmente el método de elección para diagnosticar la mayoría de enfermedades infecciosas. Con base en los resultados de dicho estudio, el médico tiene la oportunidad de establecer un diagnóstico preciso y determinar la etapa del proceso patológico para prescribir un tratamiento posterior adecuado y eficaz.

Las técnicas de diagnóstico modernas permiten identificar una enfermedad particular en un laboratorio mediante pruebas especiales. Uno de ellos es un análisis de sangre por inmunoabsorción ligado a enzimas, que puede confirmar un diagnóstico realizado previamente.

El inmunoensayo enzimático ELISA es uno de los métodos más eficaces y modernos para identificar trastornos asociados con desequilibrios inmunológicos y hormonales, así como procesos oncológicos. Durante la prueba, se pueden detectar en la sangre los anticuerpos producidos cuando hay una infección en el cuerpo. Teniendo en cuenta este matiz, la enfermedad puede detectarse incluso en las primeras etapas de su desarrollo.

¿Cuál es la base de la técnica?

Los resultados del análisis ELISA se basan en la obtención de reacciones químicas a enzimas, que sirven como marcas de identificación especiales para reconocer anticuerpos. En consecuencia, durante las reacciones inmunoquímicas, los anticuerpos comienzan a interactuar con ciertos antígenos. Todo esto da motivos para afirmar que los resultados falsos al donar sangre mediante ELISA son mínimos.

El estudio permite determinar la cantidad de células inmunes, sus propiedades, así como la presencia de los anticuerpos necesarios.

El resultado se considera positivo cuando se detecta coloración de la solución. El color indica que los antígenos están interactuando con el anticuerpo. Si no ocurre nada de esto, el resultado es negativo.

Se realiza una prueba inmunoabsorbente ligada a enzimas (ELISA) para una evaluación integral de las funciones protectoras del cuerpo. Durante el estudio, se determinan la cantidad y las propiedades de las células inmunes y la presencia de los anticuerpos necesarios. Se realiza un análisis de sangre ELISA para diagnosticar enfermedades infecciosas, hematológicas, autoinmunes, inmunodeficiencias primarias y secundarias. Consideremos qué es un análisis de sangre ELISA y qué indicaciones existen para realizar este estudio.

Lo que es

Un análisis de sangre mediante el método ELISA es un método de laboratorio mediante el cual se determinan anticuerpos o antígenos en una muestra de sangre. Este estudio se utiliza para determinar el nivel de inmunoglobulinas, complejos inmunológicos y hormonas.

Indicaciones de análisis.

Existen las siguientes indicaciones para prescribir un análisis de sangre ELISA:

• diagnóstico de infecciones de transmisión sexual: ureaplasma, micoplasma, clamidia, tricomonas, sífilis;
• diagnóstico de enfermedades virales: citomegalovirus, herpes, hepatitis, virus de Epstein-Barr;
• determinación de niveles hormonales;
• diagnóstico de enfermedades oncológicas;
• determinación de inmunodeficiencia;
• diagnosticar alergias;
• examen completo preoperatorio antes del trasplante de órganos;
• Evaluación de la eficacia de la terapia.

Principio del método

El principio de funcionamiento del método de inmunoensayo enzimático se basa en la determinación de proteínas de anticuerpos específicas en la sangre: las inmunoglobulinas. Las inmunoglobulinas son producidas por el sistema inmunológico humano cuando los antígenos (microorganismos extraños) ingresan al cuerpo. Estas moléculas inmunes se unen a una variedad de patógenos infecciosos en el cuerpo y los neutralizan.

Las inmunoglobulinas tienen una característica importante: la especificidad. Gracias a esto, pueden unirse a un antígeno específico, formando un complejo antígeno-anticuerpo. Durante un análisis de sangre ELISA, es este complejo el que se determina cualitativa y cuantitativamente.

Hay cinco clases de inmunoglobulinas. Pero generalmente se definen tres clases: inmunoglobulinas A, M, G. Estos anticuerpos se acumulan en el cuerpo en diferentes momentos desde el momento de la infección.

• Inmunoglobulinas clase M (IgM) Aparecen en la sangre por primera vez al quinto día desde el momento de la infección. Permanecen en el cuerpo durante 5 a 6 semanas y luego desaparecen del torrente sanguíneo. Los anticuerpos IgM indican un período agudo de la enfermedad o una exacerbación de la enfermedad durante su curso crónico.
• Aproximadamente 3 a 4 semanas después de la infección, aparecen inmunoglobulinas en la sangre. clase G (IgG). Pueden existir en la sangre humana durante varios meses o incluso años. Según la interpretación del análisis de sangre ELISA, si en dos muestras de sangre tomadas secuencialmente después de dos semanas aumenta la cantidad de inmunoglobulinas IgG, se habla de una infección actual o de una reinfección, una reinfección con la misma infección.
• Inmunoglobulinas clase A (IgA) Puede detectarse mediante este método de investigación entre 2 y 4 semanas después de la infección o exacerbación de una enfermedad infecciosa. De ellos, sólo el 20% circula en la sangre, el resto se encuentra en la secreción de las mucosas. Los anticuerpos IgA desaparecen del torrente sanguíneo entre 2 y 8 semanas después de la destrucción de los agentes infecciosos. La desaparición de estas inmunoglobulinas significa la cura de la infección. Si, una vez finalizada la enfermedad, se determina la presencia de anticuerpos IgA en la sangre, significa que la enfermedad ha entrado en una etapa crónica.

Preparándose para el análisis

Para realizar un análisis de sangre mediante el método ELISA, se utiliza con mayor frecuencia sangre humana. Pero también se pueden examinar los contenidos del cuerpo vítreo, el líquido cefalorraquídeo y el líquido amniótico.

Se toma una muestra de sangre para analizar de la vena antecubital del paciente. Se recomienda donar sangre en ayunas (deben haber transcurrido al menos 12 horas desde la última comida). Es necesario informar al médico si el paciente está tomando medicamentos, ya que algunos de ellos pueden alterar el resultado de la prueba. La confiabilidad de los resultados del estudio se ve afectada por el consumo de alcohol y drogas.

Descodificación

El formulario de resultados de esta prueba indica el resultado positivo (+) o negativo (-) de la determinación de cada clase de inmunoglobulinas.

Consideremos la interpretación de una posible interpretación del análisis de sangre ELISA.

• Un resultado negativo de IgM, IgG, IgA significa falta de inmunidad a la infección.
• Un resultado negativo para IgM, IgA y un resultado positivo para IgG es inmunidad posinfecciosa o posvacunación.
• Resultado negativo o positivo de IgG, IgA y resultado positivo de IgM – infección aguda.
• Un resultado positivo para IgM, IgG, IgA es una exacerbación de una enfermedad infecciosa crónica.
• Resultado de IgM negativo y resultado de IgG negativo o positivo, IgA – infección crónica.
• No se detectan resultados negativos de IgM e IgG, IgA: recuperación.

Ventajas del método

El análisis de sangre ELISA tiene muchas ventajas. Se pueden identificar los principales:

• precisión relativamente alta (sensibilidad);
• la posibilidad de un diagnóstico precoz;
• la capacidad de seguir la dinámica del proceso infeccioso;
• alto nivel de unificación, que permite exámenes masivos;
• un corto período de tiempo requerido para obtener el resultado del análisis;
• facilidad de uso;
• automatización de todas las etapas de análisis;
• costo relativamente bajo.

Defectos

La desventaja del método ELISA es que a veces da resultados falsos negativos o falsos positivos. Además de los errores técnicos durante el estudio, la causa de los resultados falsos puede ser el factor reumatoide del paciente, la presencia de enfermedades crónicas (en las que se producen anticuerpos), trastornos metabólicos o el uso de ciertos medicamentos.

• ascariasis;
• triquinosis: el análisis se realiza varias veces, el nivel máximo de anticuerpos se determina entre 4 y 12 semanas después de la infección;
• cisticercosis;
• teniasis;
• fascioliasis: los anticuerpos se detectan en la etapa aguda de la enfermedad;
• opistorquiasis: el diagnóstico diferencial se realiza entre las formas crónica y aguda de la enfermedad;
• giardiasis;
• leishmaniasis visceral y cutánea;
• amebiasis;
• toxoplasmosis.

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