Εργαστηριακή διάγνωση ελμινθιασών. Μέθοδος απομόνωσης καθαρής καλλιέργειας Leishmania που λαμβάνεται με απόξεση παθολογικών ιστών

Απλές Μέθοδοι

μακροσκοπική μέθοδος. Κατά την εξέταση των κοπράνων, μπορεί κανείς να εντοπίσει έλμινθους, τα κεφάλια τους, τμήματα, θραύσματα στροβιλίων, τα οποία ξεχωρίζουν μόνα τους ή μετά την αποπαρασίτωση. Αυτή η μέθοδος συνιστάται ιδιαίτερα για την ανίχνευση της εντεροβίασης, της ταενίασης και της ταενιάρχωσης.

Μικρές μερίδες περιττωμάτων αναμειγνύονται με νερό σε ένα επίπεδο λουτρό ή σε ένα πιάτο Petri και, κοιτάζοντας σε καλό φως σε σκούρο φόντο, χρησιμοποιώντας μεγεθυντικό φακό εάν χρειάζεται, αφαιρέστε τους έλμινθους και όλους τους ύποπτους λευκούς σχηματισμούς με τσιμπιδάκια ή πιπέτα. Το υλικό που συλλέγεται μεταφέρεται σε ένα άλλο φλιτζάνι με νερό ή σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα αραιωμένης γλυκερίνης ή ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου για περαιτέρω μελέτη.

Με τη μέθοδο καθίζησης, ολόκληρο το τμήμα δοκιμής των κοπράνων θα πρέπει να αναμιγνύεται με νερό σε έναν γυάλινο κύλινδρο και, στη συνέχεια, το ανώτερο στρώμα νερού πρέπει να αποστραγγίζεται προσεκτικά. Αυτό επαναλαμβάνεται αρκετές φορές. Όταν το υγρό γίνει διαφανές, αποστραγγίζεται και το ίζημα παρατηρείται σε μικρές μερίδες σε γυάλινο λουτρό ή τρυβλίο Petri, όπως υποδεικνύεται παραπάνω.

Οι μικροσκοπικές μέθοδοι είναι η κύρια μέθοδος εξέτασης των κοπράνων για την ανίχνευση αυγών ή προνυμφών ελμινθών. Διάφορες μέθοδοι έρευνας περιγράφονται παρακάτω. Προκειμένου να αυξηθεί η αξιοπιστία της εξέτασης, οι αναλύσεις μπορούν να επαναλαμβάνονται πολλές φορές την ημέρα ή με μεσοδιάστημα 1-3 ημερών.

Μητρική μέθοδος επιχρίσματος. Το εγγενές επίχρισμα είναι η πιο κοινή και τεχνικά διαθέσιμη μέθοδος για την εξέταση των κοπράνων. Σε ένα εγγενές επίχρισμα, μπορούν να βρεθούν αυγά και προνύμφες ελμινθών όλων των ειδών. Ωστόσο, με μικρό αριθμό αυγών στα κόπρανα, δεν βρίσκονται πάντα. Επομένως, η μελέτη των περιττωμάτων μόνο με τη βοήθεια ενός εγγενούς επιχρίσματος δεν είναι πλήρης και θα πρέπει να συμπληρωθεί με μεθόδους εμπλουτισμού. Η αποτελεσματικότητα της εξέτασης του εγγενούς επιχρίσματος βελτιώνεται σημαντικά κατά την προβολή τεσσάρων παρασκευασμάτων που παρασκευάζονται από δείγμα κοπράνων σε δύο γυάλινες πλάκες χωρίς καλυπτρίδες, κάτι που επιτρέπει την εξέταση συνολικά περίπου της ίδιας ποσότητας κοπράνων με τη μέθοδο Kato (βλ. παρακάτω).

Μια μικρή ποσότητα (μέγεθος ενός κεφαλιού σπίρτου) αναδευόμενων κοπράνων αλείφεται αραιά με ένα ξύλινο ραβδί στην επιφάνεια μιας γυάλινης πλάκας σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50%. Συνήθως παρασκευάζονται δύο επιχρίσματα σε ένα ποτήρι. Το επίχρισμα παρατηρείται κάτω από μικροσκόπιο χαμηλής μεγέθυνσης (ob. 8, app. 7). Σε αμφίβολες περιπτώσεις καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται υπό υψηλή μεγέθυνση (ob. 40).

Για να παρασκευαστεί ένα μεγάλο αυτοφυές επίχρισμα, 200-300 mg περιττωμάτων (το μέγεθος ενός μεγάλου μπιζελιού) αλέθονται σε ποτήρι 6x9 cm σε 15-20 σταγόνες υδατικού διαλύματος γλυκερίνης 50%. Προβολή κάτω από διόφθαλμο στερεοσκοπικό μικροσκόπιο (τόμος 4, περ. 12,5 ή τόμος 2, περ. 17) σε εκπεμπόμενο φως χωρίς ολισθήσεις καλύμματος. Σε αμφίβολες περιπτώσεις, μπορείτε να μεταφράσετε τον φακό σε μεγαλύτερη μεγέθυνση. Σε τέτοια επιχρίσματα, τα χρωματιστά μεγάλα αυγά ελμινθών είναι σαφώς ορατά και τα διαφανή αυγά του πυγμαίου ταινίας είναι κάπως χειρότερα. Αυτή η μέθοδος δεν είναι κατάλληλη για την ανίχνευση μικρών αυγών. Ταυτόχρονα, ένας μεγάλος όγκος του μελετημένου υλικού και ένα μεγάλο οπτικό πεδίο με μεγάλο βάθος πεδίου παρέχουν σημαντική αποτελεσματικότητα αυτής της τροποποίησης σε σύγκριση με ένα συμβατικό αυτοφυές επίχρισμα.

Το παχύρρευστο επίχρισμα από σελοφάν (μέθοδος Kato) είναι πιο αποτελεσματικό από το εγγενές επίχρισμα, αλλά χρειάζεται και συνδυασμός με μεθόδους εμπλουτισμού. Ανιχνεύονται ωάρια όλων των τύπων ελμινθών, ωστόσο, για να ανιχνευθούν αυγά πυγμαίου ταινίας (διαφανή αυγά) ή οπίσθορχης (μικρά αυγά), ο εργαστηριακός θα πρέπει να είναι ιδιαίτερα προσεκτικός να μην τα παραλείψει (Εικ. 21).

Η μέθοδος βασίζεται στην ανίχνευση αυγών ελμίνθου σε ένα παχύ επίχρισμα κοπράνων, διαυγασμένο με γλυκερίνη και χρωματισμένο με πράσινο μαλαχίτη. Το υδρόφιλο σελοφάν κόβεται προκαταρκτικά σε πλάκες 20 x 40 mm και βυθίζεται σε ένα μίγμα Kato (6 ml υδατικού διαλύματος πράσινου μαλαχίτη 3%, 500 ml γλυκερόλης, 500 ml διαλύματος φαινόλης 6%). 3-5 ml από το μείγμα είναι αρκετά για 100 πιάτα, τα οποία είναι έτοιμα για χρήση σε μια μέρα και μπορούν να αποθηκευτούν στο ίδιο μείγμα σε καλά κλεισμένο δοχείο σε θερμοκρασία δωματίου για 6 μήνες. Ελλείψει πράσινου μαλαχίτη (συνιστάται για τη μείωση της κόπωσης των ματιών του βοηθού εργαστηρίου) και φαινόλης (απολυμαντικό), μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνο ένα υδατικό διάλυμα γλυκερίνης 50%, η αποτελεσματικότητα της μελέτης δεν μειώνεται.

Ρύζι. 20. Μέθοδος παρασκευής παχύρρευστης επάλειψης κοπράνων με σελοφάν κατά Κάτω

100 mg περιττωμάτων εφαρμόζονται σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα, καλυμμένη με μια πλάκα σελοφάν που έχει υποστεί επεξεργασία όπως παραπάνω και πιέζεται προς τα κάτω με ένα ελαστικό πώμα έτσι ώστε τα περιττώματα να μην εξαπλώνονται κάτω από το σελοφάν. Η μικροσκόπηση σε χαμηλή ή υψηλή μεγέθυνση του μικροσκοπίου πραγματοποιείται το αργότερο 1 ώρα (σε ζεστό καιρό - 30-40 λεπτά) μετά την προετοιμασία του επιχρίσματος. Ο λόγος για την αδιαφάνεια του σκευάσματος μπορεί να είναι ένα παχύ στρώμα περιττωμάτων, κακή επεξεργασία της πλάκας στο μείγμα Kato, ανεπαρκής χρόνος έκθεσης του σκευάσματος κάτω από σελοφάν. Το παρατεταμένο καθάρισμα με γλυκερίνη και η υπερβολική ξήρανση του σκευάσματος δυσκολεύουν επίσης τον εντοπισμό των αυγών.

Μέθοδος συστροφής σύμφωνα με το S.S. Σούλμαν. Η μέθοδος προτάθηκε για την ανίχνευση προνυμφών ελμινθών στα κόπρανα, κυρίως Strongyloid. Εξετάζονται μόνο πρόσφατα εκκρινόμενα κόπρανα, 2-3 g από τα οποία μεταφέρονται σε γυάλινο βάζο, ανακατεύονται με γυάλινη ράβδο με κυκλικές κινήσεις με 3-5 φορές μεγαλύτερη ποσότητα φυσιολογικού ορού, χωρίς να αγγίζουν τα τοιχώματα του αγγείου. Αυγά και προνύμφες ελμινθών συσσωρεύονται στο κέντρο. Μετά την ανάμειξη, η σταγόνα στο τέλος του ραβδιού μεταφέρεται γρήγορα σε μια γυάλινη πλάκα, καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

μεθόδους εμπλουτισμού. Οι μέθοδοι εμπλουτισμού βασίζονται στη διαφορά στο ειδικό βάρος των αυγών και στο χρησιμοποιούμενο διάλυμα αλατιού, γεγονός που καθιστά δυνατή την ανίχνευση μικρής ποσότητας από αυτά. Εάν το ειδικό βάρος των αυγών είναι μεγαλύτερο από το ειδικό βάρος του υγρού, τότε τα αυγά συγκεντρώνονται στο ίζημα, το οποίο εξετάζεται με μικροσκόπιο. Αυτή η μέθοδος καθίζησης χρησιμοποιείται για αυγά τρηματωδών. Με υψηλότερο ειδικό βάρος του διαλύματος, τα αυγά επιπλέουν στην επιφάνεια του υγρού και στη συνέχεια εξετάζεται το φιλμ. Αυτές είναι μέθοδοι επίπλευσης (floating), είναι πιο αποτελεσματικές για την ανίχνευση αυγών αγκυλόστομων, μαστιγίων και πυγμαίων ταινιών.

μεθόδους επίπλευσης. Η μέθοδος Fulleborn βασίζεται στην επίπλευση αυγών ελμινθών σε κορεσμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου, το οποίο έχει υψηλή σχετική πυκνότητα (1,2), που καθιστά δυνατή την ανίχνευση αυγών με μικρό αριθμό από αυτά. Η μέθοδος είναι πιο αποτελεσματική από τη μελέτη ενός εγγενούς επιχρίσματος, αν και είναι πιο δύσκολη. Τα πλεονεκτήματα της μεθόδου είναι η φθηνότητα και η διαθεσιμότητα. Συνιστάται ο συνδυασμός της μελέτης του εγγενούς επιχρίσματος και της μεθόδου Fülleborn.

Ένα κορεσμένο διάλυμα παρασκευάζεται διαλύοντας 400 g χλωριούχου νατρίου σε 1 λίτρο νερό ενώ βράζει. Η σχετική πυκνότητα του διαλύματος είναι 1,18-1,22. Το διάλυμα φυλάσσεται σε κλειστή φιάλη. Για ανάλυση, 2-3 g περιττωμάτων τοποθετούνται σε ένα βάζο με όγκο 30-50 ml και, ενώ ανακατεύετε με ένα ραβδί, ένα κορεσμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου προστίθεται σχεδόν στην κορυφή. Μια λωρίδα χαρτιού αφαιρεί γρήγορα τα επιπλέοντα μεγάλα σωματίδια. Μετά από 45-60 λεπτά. καθιζάνοντας με ένα συρμάτινο βρόχο, αφαιρέστε την επιφανειακή μεμβράνη και μεταφέρετέ τη σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα υδατικού διαλύματος γλυκερίνης 50%. Αντί να αφαιρέσετε τη μεμβράνη με μια θηλιά, μπορείτε να προσθέσετε το διάλυμα στο βάζο στην κορυφή, καλύψτε με μια γυάλινη διαφάνεια, στην επιφάνεια της οποίας κολλάνε τα αυγά που επιπλέουν. Ετοιμάζονται αρκετές προετοιμασίες. Επιπλέον, 2-4 παρασκευάσματα παρατηρούνται από το ίζημα, συλλέγοντάς το με μια οφθαλμική πιπέτα σε 2 γυάλινες πλάκες. Εκτός από την επιφανειακή μεμβράνη, είναι επίσης απαραίτητο να εξεταστεί το ίζημα, καθώς τα αυγά των τρεματωδών, των taeniids, των μη γονιμοποιημένων αυγών του ascaris δεν επιπλέουν σε αυτό το διάλυμα. Τα αυγά ορισμένων ελμινθών δεν επιπλέουν αμέσως σε αλατούχο διάλυμα. Έτσι, εάν ο μέγιστος αριθμός αυγών του πυγμαίου ταινίας επιπλέει μετά από 15-20 λεπτά, τότε το ascaris - μετά από 1,5-2 ώρες, το whipworm - μετά από 2-3 ώρες.

Έτσι, τα πλεονεκτήματα αυτής της μεθόδου περιλαμβάνουν τη φθηνότητα και τη διαθεσιμότητά της, τα μειονεκτήματα είναι η ανάγκη προβολής παρασκευασμάτων στην επιφανειακή μεμβράνη και το ίζημα, καθώς και η διάρκεια καθίζησης.

Η μέθοδος του E. V. Kalantaryan είναι επίσης μέθοδος εμπλουτισμού, αλλά είναι πιο αποτελεσματική και απλούστερη από τη μέθοδο Fülleborn. Χρησιμοποιείται κορεσμένο διάλυμα νιτρικού νατρίου με σχετική πυκνότητα 1,38. Ως εκ τούτου, τα αυγά των περισσότερων ελμινθών επιπλέουν και βρίσκονται στο επιφανειακό φιλμ· δεν απαιτείται εξέταση ιζήματος.

Για να παρασκευαστεί ένα κορεσμένο διάλυμα νιτρικού νατρίου, 1 kg νιτρικού άλατος νατρίου (νιτρικό νάτριο) διαλύεται σε 1 λίτρο νερό και βράζεται μέχρι να διαλυθεί πλήρως και να σχηματιστεί μια μεμβράνη στην επιφάνεια. Χωρίς φιλτράρισμα, αδειάστε σε στεγνό μπουκάλι. Ελλείψει νιτρικού νατρίου, μπορεί να αντικατασταθεί με νιτρικό αμμώνιο (νιτρικό αμμώνιο), διαλύοντας 1,7 kg ανά 1 λίτρο νερού. Η σχετική πυκνότητα του διαλύματος που προκύπτει είναι 1,3, γεγονός που μειώνει κάπως την απόδοση σε σύγκριση με το διάλυμα νιτρικού νατρίου.

Πλεονεκτήματα της μεθόδου: τα αυγά των περισσότερων ελμινθών αναδύονται γρήγορα και βρίσκονται στην επιφανειακή μεμβράνη, γεγονός που εξαλείφει την ανάγκη μελέτης του ιζήματος. Τα μειονεκτήματα της μεθόδου είναι η ανεπάρκεια νιτρικού νατρίου, καθώς και το γεγονός ότι τα αυγά τρηματωδών, οι ογκόσφαιρες taeniid δεν επιπλέουν και παραμένουν στο ίζημα. Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι με παρατεταμένη (περισσότερες από 1-2 ώρες) έκθεση περιττωμάτων σε διάλυμα, τα αυγά ορισμένων ελμινθών αρχίζουν να διογκώνονται και να καθιζάνουν, εξαφανίζονται από την επιφανειακή μεμβράνη.

μέθοδοι καθίζησης

Η μέθοδος του P. P. Goryachev βασίζεται στην αρχή της καθίζησης αυγών. Το επίχρισμα σε αυτή την περίπτωση είναι ελαφρύ, χωρίς χονδροειδείς προσμίξεις, γεγονός που διευκολύνει τον εντοπισμό μικρών ωαρίων τρεματωδών (οπισθορχία κ.λπ.). Το ειδικό βάρος των αυγών οπίσθορκας είναι υψηλό, επομένως δεν επιπλέουν σε αλατούχα διαλύματα.

70-100 ml κορεσμένου διαλύματος χλωριούχου νατρίου χύνεται σε κύλινδρο με διάμετρο 2-3 cm. Ξεχωριστά, ανακατέψτε καλά 0,5 g περιττωμάτων σε 20-25 ml νερού και διηθήστε προσεκτικά μέσα από ένα χωνί με δύο στρώσεις γάζας σε έναν κύλινδρο σε φυσιολογικό ορό, αποφεύγοντας την ανάμειξη (έτσι ώστε να σχηματιστούν δύο σαφώς οριοθετημένες στρώσεις). Μετά από 2-3 ώρες, το ανώτερο στρώμα με τα κόπρανα αναρροφάται με μια πιπέτα και το υπόλοιπο αλατούχο διάλυμα αφήνεται να παραμείνει για 12-20 ώρες ή φυγοκεντρείται. Το ίζημα διοχετεύεται με σιφώνιο σε γυάλινη πλάκα, καλύπτεται με καλυπτρίδα και υποβάλλεται σε μικροσκόπιο.

Η μέθοδος του Goryachev προτάθηκε για την ανίχνευση ωαρίων οπίστορα και αποδείχθηκε πιο αποτελεσματική από την εξέταση του εγγενούς επιχρίσματος και τη μέθοδο Fülleborn. Επί του παρόντος, για τη διάγνωση της οπισθορχίασης (κλονορχίαση), οι μέθοδοι Kato και Kalantaryan συνιστώνται ως αρκετά αποτελεσματικές και τεχνικά απλούστερες.

Μέθοδος Krasilnikov. Κάτω από τη δράση επιφανειοδραστικών που αποτελούν μέρος των απορρυπαντικών (απορρυπαντικά), τα αυγά ελμινθών απελευθερώνονται από τα κόπρανα και συγκεντρώνονται στο ίζημα.

Ένα διάλυμα 1% σκόνης πλυσίματος Lotus παρασκευάζεται προκαταρκτικά. Για να γίνει αυτό, 10 g σκόνης διαλύονται σε 1 λίτρο νερού βρύσης. Ελλείψει Lotus, μπορούν να χρησιμοποιηθούν και άλλες σκόνες πλυσίματος, αλλά καθεμία από αυτές πρέπει να λαμβάνεται όσο διαλύεται χωρίς καθίζηση σε 1 λίτρο νερό βρύσης. 20-30 ml διαλύματος απορρυπαντικού χύνεται σε γυάλινο δοχείο χωρητικότητας 30-50 ml, τοποθετείται εκεί μια μικρή μερίδα περιττωμάτων και αναμειγνύεται καλά. Η αναλογία περιττωμάτων και διαλύματος πρέπει να είναι περίπου 1:20. Τα κόπρανα πρέπει να βρίσκονται στο διάλυμα για τουλάχιστον μία ημέρα. Στο διάστημα αυτό σχηματίζεται ένα ίζημα 2-3 στρώσεων στον πυθμένα. Το κάτω στρώμα αποτελείται από χοντρά βαριά σωματίδια, τα αυγά των ελμινθών συγκεντρώνονται στο μεσαίο στρώμα, το ανώτερο στρώμα είναι λευκο-γκρι νιφάδες. Στη συνέχεια, με μια πιπέτα, συλλέγονται 2-3 σταγόνες υγρού από το μεσαίο στρώμα και μεταφέρονται σε μια γυάλινη πλάκα. Παρασκευάζονται 2 παρασκευάσματα σε ένα ποτήρι, καλύπτονται με καλυπτρίδα και υποβάλλονται σε μικροσκόπιο.

Η μέθοδος Krasilnikov σάς επιτρέπει να ανιχνεύσετε αυγά όλων των τύπων ελμινθών που απεκκρίνονται με κόπρανα.

Η μέθοδος καθίζησης αιθέρα-φορμαλίνης και η μέθοδος χημικής καθίζησης είναι πολύ επίπονη, με υψηλή απόδοση, ειδικά σε μαζικές εξετάσεις· επομένως, είναι πιο σκόπιμο να χρησιμοποιηθεί η μέθοδος αιθέρα-οξικού. Επιτρέπει, μετά από πρόσθετη επεξεργασία του ιζήματος με χημικά αντιδραστήρια, να ληφθούν πρακτικά μόνο αυγά ελμινθών σε αυτό, γεγονός που διευκολύνει την αναγνώριση μικρών αυγών τρηματωδών. Αυτή η μέθοδος αποδείχθηκε καθολική, αποκαλύπτοντας τα αυγά όλων των εντερικών ελμινθών, τις κύστεις των εντερικών πρωτόζωων, μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για την ποσοτικοποίηση της έντασης της εισβολής.

Ρίξτε 7 ml διαλύματος οξικού οξέος 10% σε βαθμονομημένους δοκιμαστικούς σωλήνες φυγοκέντρησης και προσθέστε 1 g περιττωμάτων στην ένδειξη των 8 ml. Τα κόπρανα αναμειγνύονται καλά με ένα ραβδί μέχρι να σχηματιστεί ένα ομοιογενές μείγμα και στη συνέχεια διηθείται μέσω δύο στρώσεων γάζας σε άλλο σωλήνα φυγοκέντρησης (έτσι ώστε ο νέος σωλήνας του φιλτραρισμένου διαλύματος να έχει και πάλι 8 ml, αν λιγότερα, τότε μπορείτε επιπλέον να ξεπλύνετε το χωνί με επίδεσμο με διάλυμα οξικού οξέος 10%, μέσω του οποίου διήθησε το διάλυμα των κοπράνων). Σε αυτό το σωληνάριο προσθέστε 2 ml αιθέρα (μέχρι το σημάδι των 10 ml), πώμα και ανακινήστε δυνατά για 30 δευτερόλεπτα. Το μίγμα φυγοκεντρείται στις 3000 rpm για 1 λεπτό (ή 2 λεπτά στις 1500 rpm). Το πηκτικό στρώμα (με τη μορφή φελλού στο πάνω μέρος του σωλήνα) διαχωρίζεται από τα τοιχώματα του σωλήνα με ένα ραβδί και στραγγίζεται προσεκτικά μαζί με το υπερκείμενο. Το ίζημα (συνήθως μικρό, άχρωμο) εφαρμόζεται σε γυάλινες πλάκες με σιφώνιο, καλυμμένο με καλυπτρίδα και μικροσκόπιο.

Τα πιο απλά χωρίζονται σε 4 κατηγορίες:

Όταν εγκυστώνεται, ο μικροοργανισμός αποκτά στρογγυλεμένο σχήμα και καλύπτεται με προστατευτικό κέλυφος. Με τη μορφή κύστης, τα πρωτόζωα γίνονται λιγότερο ευαίσθητα σε δυσμενείς περιβαλλοντικούς παράγοντες.

Η έρευνα μπορεί να περιλαμβάνει:

Σημείωση:Υπάρχουν πολλές ποικιλίες διαγνωστικών, θα εξετάσουμε εκείνους τους τύπους που είναι πιο συνηθισμένοι στην κλινική εργαστηριακή πρακτική.

Ιδιωτικοί τύποι διαγνωστικών

Σε κάθε συγκεκριμένη περίπτωση, ο εργαστηριακός βοηθός είναι επιφορτισμένος με την εύρεση ενός συγκεκριμένου παθογόνου, μερικές φορές εντοπίζονται και άλλα μαζί με το κύριο.

Υπάρχουν 6 είδη αυτού του μικροοργανισμού ικανά να ζουν στο ανθρώπινο έντερο. Κλινική σημασία έχει μόνο η αμοιβάδα δυσεντερίας, η οποία εμφανίζεται σε βλαστική μορφή και με τη μορφή κύστεων.

Επιπλέον, χρησιμοποιούνται ανοσολογικές μέθοδοι:

• Έμμεσος ανοσοφθορισμός;
• έμμεση συγκόλληση (PHA);
• ακτινική ανοσοδιάχυση.

Σημείωση: Οι ορολογικές μέθοδοι είναι μη ενημερωτικές και χρησιμοποιούνται μόνο ως προσθήκη στις κύριες σε αμφίβολες περιπτώσεις.

Διάγνωση βλεφαρίδων (ακροειδών)

Η παθογόνος μορφή των μικροοργανισμών αυτού του γένους είναι τα balantidia. Αυτό είναι ένα μικρόβιο που προκαλεί βαλαντιδίαση - μια ασθένεια που συνοδεύεται από μια ελκώδη διαδικασία του παχέος εντέρου. Ο αιτιολογικός παράγοντας βρίσκεται σε ένα εγγενές επίχρισμα με τη μορφή βλαστικής μορφής και κύστης. Το υλικό για το επίχρισμα (περιττώματα και βλέννα) λαμβάνεται κατά τη διάρκεια σιγμοειδοσκόπησης και σπέρνεται σε ειδικά μέσα.

Διαγνωστικά μαστιγωτών (λεϊσμανία, γιάρδια, τρυπανοσώματα, τριχομονάδες)

Η λεϊσμανία, το τρυπανόσωμα, η γιάρδια, οι τριχομονάδες είναι επικίνδυνες για τον άνθρωπο.

Leishmania- Τα μικρόβια που προκαλούν λεϊσμανίαση εξετάζονται σε επιχρίσματα αίματος, υλικά μυελού των οστών, ξύσεις από δερματικά διηθήματα. Σε ορισμένες περιπτώσεις, στη διάγνωση της Λεϊσμανίας, χρησιμοποιείται σπορά σε θρεπτικά μέσα.

Τρυπανοσώματα- Αιτιακοί παράγοντες της ασθένειας του ύπνου (Αμερικανική / Αφρικανική τρυπανοσωμίαση ή νόσος Chagas).

Η αφρικανική παραλλαγή προσδιορίζεται στην αρχική περίοδο στη μελέτη του περιφερικού αίματος. Παθολογικά μικρόβια κατά την εξέλιξη της νόσου εντοπίζονται στο υλικό των παρακεντήσεων των λεμφαδένων, σε προχωρημένα στάδια - στο εγκεφαλονωτιαίο υγρό.

Για τη διάγνωση των τρυπανοσωμάτων σε περίπτωση ύποπτης νόσου Chagas, το υλικό δοκιμής εξετάζεται κάτω από μικροσκόπιο σε χαμηλή μεγέθυνση. Σε αυτή την περίπτωση, οι κηλίδες και μια παχιά σταγόνα είναι προχρωματισμένα.

Τριχομονάς(εντερικά, στοματικά) ανιχνεύονται με μικροσκοπία υλικών που λαμβάνονται από τους προσβεβλημένους βλεννογόνους.

Αναγνώριση σπορόζωων (πλασμώδιο ελονοσίας, αιτιολογικός παράγοντας κοκκίδωσης κ.λπ.)

Το πιο κοινό και επικίνδυνο είδος για τον άνθρωπο είναι το πλασμώδιο της ελονοσίας, το οποίο έχει 4 κύριες ποικιλίες του παθογόνου: τον αιτιολογικό παράγοντα της ελονοσίας τριών ημερών, της ελονοσίας τεσσάρων ημερών, της τροπικής ελονοσίας και της ελονοσίας οβάλ.

Η σεξουαλική ανάπτυξη του Plasmodium (σπορογονία) λαμβάνει χώρα στα κουνούπια Anopheles. Άφυλη (σχιζογονία ιστών και ερυθροκυττάρων) - στον ηπατικό ιστό και στα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα. Αυτά τα χαρακτηριστικά του κύκλου ζωής πρέπει να λαμβάνονται υπόψη κατά τη διάγνωση του πλασμωδίου της ελονοσίας.

Έτσι, στο αίμα ενός πρόσφατα άρρωστου ασθενούς, μπορούν να βρεθούν γεννητικά κύτταρα του κύκλου σπορογονίας. Αλλά στο αποκορύφωμα των κρίσεων ελονοσίας, οι σχιζόντες εμφανίζονται σε μεγάλους αριθμούς στο αίμα.

Επιπλέον, σε διάφορες φάσεις του ελονοσιακού πυρετού, εμφανίζονται διάφορες μορφές πλασμωδίου:

• Κατά την περίοδο της ψύχρας, το αίμα γεμίζει με μεροζωίτες, ένα είδος σχιζόντη.
• στο ύψος της θερμοκρασίας, τροφοζωίτες σε σχήμα δακτυλίου συσσωρεύονται στα ερυθροκύτταρα.
• η μείωση της θερμοκρασίας χαρακτηρίζεται από την επικράτηση των αμοιβοειδών τροφοζωιτών.
• σε περιόδους φυσιολογικής κατάστασης, το αίμα περιέχει ενήλικες μορφές σχιζόντων.

Η μελέτη του αιτιολογικού παράγοντα της ελονοσίας (πλασμώδιο ελονοσίας) πραγματοποιείται σε επίχρισμα και σε παχιά σταγόνα.

Σημείωση:η διάγνωση της ελονοσίας στη μελέτη επιχρισμάτων και παχύρρευστων σταγόνων αίματος είναι μερικές φορές λανθασμένη. Τα αιμοπετάλια του αίματος σε ορισμένες περιπτώσεις μπορεί λανθασμένα να ταξινομηθούν ως παθογόνα ελονοσίας. Επίσης, θραύσματα λευκοκυττάρων και άλλων κυττάρων μερικές φορές προσομοιώνουν το πλασμώδιο.

Βασικές μέθοδοι έρευνας για πρωτόζωα

Ας ρίξουμε μια σύντομη ματιά στις πιο κοινές μεθόδους έρευνας για την παρουσία πρωτοζώων.

Διάγνωση πρωτοζώων με χρήση φυσικού επιχρίσματος και επιχρίσματος βαμμένου με διάλυμα Lugol (στα κόπρανα)

Το φάρμακο παρασκευάζεται από γαλάκτωμα περιττωμάτων σε ισοτονικό διάλυμα. Δύο σταγόνες χλωριούχου νατρίου και διαλύματος Lugol εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα. Το υλικό δοκιμής προστίθεται και στις δύο συνθέσεις με ένα ξύλινο ραβδί και, αφού καλυφθεί με γυαλί, παρατηρείται σε διαφορετικές αναλύσεις του μικροσκοπίου.

Σύμφωνα με ορισμένα σημάδια, τα πρωτόζωα που βρέθηκαν είναι καταχωρημένα. Για ακρίβεια, παρασκευάζονται 2-3 παρασκευάσματα από ένα υλικό. Σε αμφίβολες περιπτώσεις, η ανάλυση επαναλαμβάνεται πολλές φορές σε διάστημα 2-3 εβδομάδων.

Η μέθοδος μπορεί να ανιχνεύσει φυτικές και κυστικές μορφές:

• Λάμπια?
• balantidia;
• αμοιβάδα δυσεντερίας.

Μαζί με τις παθογόνες μορφές προσδιορίζονται και τα μη παθογόνα πρωτόζωα. Οι υγιείς φορείς έχουν επίσης αυλικές και κυστικές μορφές.

Σπουδαίος:έρευνα για την αποφυγή ανακρίβειων και λαθών θα πρέπει να διεξάγεται επανειλημμένα.

Το αποτέλεσμα της διάγνωσης των πρωτοζώων με τη μέθοδο ενός εγγενούς και χρωματισμένου επιχρίσματος πρέπει να περιέχει περιγραφή της μορφής του παθογόνου (ημιδιαφανές, κύστη, ιστός).

Απαιτήσεις έρευνας:

• το υλικό που λαμβάνεται για ανάλυση (υγρά κόπρανα) εξετάζεται το αργότερο 30 λεπτά μετά την αφόδευση.
• Τα σχηματισμένα κόπρανα πρέπει να διαγνωστούν εντός 2 ωρών μετά την αφόδευση.
• το υλικό δεν πρέπει να περιέχει ακαθαρσίες (απολυμαντικά, νερό, ούρα).
• Μόνο ξύλινα ραβδιά χρησιμοποιούνται για την εργασία με το υλικό, τα γυάλινα δεν είναι κατάλληλα λόγω της ολίσθησης της βλέννας.
• Τα ραβδιά πρέπει να καίγονται αμέσως μετά τη χρήση.

Μέθοδος διατήρησης (εξέταση κοπράνων) στη διάγνωση πρωτοζώων

Η μελέτη πραγματοποιείται με στερέωση των πρωτόζωων με συντηρητικό. Η διαφορά μεταξύ αυτής της μεθόδου και της προηγούμενης είναι ότι τα συντηρητικά σας επιτρέπουν να αποθηκεύσετε το φάρμακο για μεγάλο χρονικό διάστημα.

Χρησιμοποιημένα συντηρητικά:

• Χειράμαξα. Περιέχει συντηρητικά συστατικά: 0,7 ml χλωριούχο νάτριο, 5 ml φορμαλίνη, 12,5 ml αλκοόλη 96%, 2 g φαινόλη και 100 ml απεσταγμένο νερό. Σύνθεση χρωματισμού: 0,01% διάλυμα θειονίνης (αζούρ).
• Η λύση του Safarliev. Σύνθεση: 1,65 g θειικό ψευδάργυρο, 10 ml φορμαλίνη, 2,5 g κρυσταλλική φαινόλη, 5 ml οξικό οξύ, 0,2 g μπλε του μεθυλενίου, 100 ml νερό. Αυτό το συντηρητικό χρησιμοποιείται σε περιπτώσεις όπου το υλικό πρέπει να αποθηκευτεί για περισσότερο από ένα μήνα.

Τα άδεια μπουκάλια γεμίζονται με συντηρητικό, το υλικό μεταφέρεται σε αυτά, σε αναλογίες 3: 1 και, εάν είναι απαραίτητο, προστίθεται μια βαφή. Η αξιολόγηση των αποτελεσμάτων πραγματοποιείται στη μελέτη 2-3 φαρμάκων.

Μέθοδος εμπλουτισμού φορμαλίνης-αιθέρα (ανάλυση για την παρουσία πρωτοζώων στα κόπρανα)

Αυτή η διαγνωστική μέθοδος σας επιτρέπει να διαχωρίσετε και να συγκεντρώσετε κύστεις πρωτόζωων. Για την ανάλυση απαιτούνται τα ακόλουθα συστατικά: φορμαλίνη (10 ml), 0,85 g ισοτονικού διαλύματος, απεσταγμένο νερό, θειικός αιθέρας, διάλυμα Lugol.

Ένα μείγμα βιοϋλικού με τα αναγραφόμενα υγρά αναμειγνύεται και φυγοκεντρείται. Το ίζημα που λαμβάνεται στον πυθμένα του σωλήνα χρωματίζεται με διάλυμα Lugol και εξετάζεται για την παρουσία κύστεων και βλαστικών μορφών.

Μέθοδος ανίχνευσης λεϊσμανίας (επίχρισμα μυελού των οστών)

Για τη διάγνωση της λεϊσμανίασης, χρησιμοποιούνται αντιδραστήρια: μείγμα Nikiforov (θειικός αιθέρας και αιθυλική αλκοόλη), ρυθμιστικό φωσφορικών, Azur-eosin σύμφωνα με τον Romanovsky.

Η ουσία του μυελού των οστών τοποθετείται πολύ προσεκτικά σε μια γυάλινη πλάκα μετά από ειδική προετοιμασία. Χρησιμοποιείται μικροσκόπιο με σύστημα εμβάπτισης.

Στην οξεία περίοδο της νόσου, μεγάλος αριθμός Λεϊσμανιών εντοπίζεται στο σημείο.

Σημείωση:Μερικές φορές τα κύτταρα του αίματος μπορεί να μοιάζουν με τη λεϊσμανία που έχει υποβληθεί σε θεραπεία, επομένως είναι πολύ σημαντικό για τον τεχνικό εργαστηρίου να είναι προσεκτικός και να έχει αρκετή εμπειρία για να μελετήσει ανεξάρτητα.

Μέθοδος ανίχνευσης λεϊσμανίας σε επίχρισμα από διήθηση δέρματος

Τα απαιτούμενα αντιδραστήρια είναι παρόμοια με την προηγούμενη ανάλυση.

Το υλικό δοκιμής λαμβάνεται από το υπάρχον φυματικό ή ελκώδες περιεχόμενο. Η απόξεση με υποψία λεϊσμανίασης γίνεται πολύ προσεκτικά με νυστέρι, χωρίς αίμα. Στη συνέχεια το παρασκεύασμα παρασκευάζεται σε γυαλί. Για την ακρίβεια των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται, εξετάζονται ταυτόχρονα διάφορα παρασκευάσματα.

Με την παρουσία μιας ασθένειας, μεταξύ των μακροφάγων, των ινοβλαστών και των λεμφικών κυττάρων που υπάρχουν στο υλικό δοκιμής, προσδιορίζεται επίσης η Leishmania.

Μέθοδος απομόνωσης καθαρής καλλιέργειας Leishmania που λαμβάνεται με απόξεση παθολογικών ιστών

Με αυτή τη μέθοδο διάγνωσης οι απλούστερες αποξέσεις ιστών τοποθετούνται σε ειδικό θρεπτικό μέσο στο οποίο αναπαράγεται ενεργά η Leishmania.

Πριν από την απόξεση, το δέρμα επεξεργάζεται προσεκτικά με οινόπνευμα, στη συνέχεια γίνεται μια τομή στο φυμάτιο, από το κάτω μέρος του οποίου αφαιρείται το περιεχόμενο και τοποθετείται σε δοκιμαστικό σωλήνα με το μέσο. Το υλικό λαμβάνεται πολλές φορές και στη συνέχεια τοποθετείται σε διαφορετικούς δοκιμαστικούς σωλήνες. Στη συνέχεια, σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 22-24 βαθμών, γίνεται καλλιέργεια. Τα αποτελέσματα αξιολογούνται σε μικροσκόπιο. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται όταν άλλες, φθηνότερες και ταχύτερες μέθοδοι διάγνωσης πρωτοζώων είναι αναποτελεσματικές.

Μπορείτε να δείτε πώς οι δοκιμές για την παρουσία πρωτοζώων αποκρυπτογραφούνται στην πράξη με μια σταγόνα αίματος παρακολουθώντας μια ανασκόπηση βίντεο:

Lotin Alexander, ιατρικός αρθρογράφος

Οι μέθοδοι ελμινθολογικής έρευνας χωρίζονται σε άμεσες και έμμεσες. Άμεσες μέθοδοι: ανίχνευση των ίδιων των ελμινθών, των θραυσμάτων τους, των αυγών, των προνυμφών στα κόπρανα, των ούρων, της δωδεκαδακτυλικής έκκρισης, των πτυέλων, της ρινικής και κολπικής βλέννας, των περιεχομένων των υπογλώσσιων χώρων, των βιοψιών ιστών. Έμμεσες μέθοδοι: ανίχνευση δευτερογενών αλλαγών που συμβαίνουν στο ανθρώπινο σώμα ως αποτέλεσμα της ζωτικής δραστηριότητας του παρασίτου, ορολογικές αντιδράσεις, γενικές εξετάσεις αίματος και ούρων. Οι πιο συνηθισμένες μέθοδοι για την εξέταση των κοπράνων είναι η ελμινθοβοσκοπική και η πρωτοζωοσκοπική. Κατά τη διάγνωση, είναι αδύνατο να εντοπιστούν με οποιαδήποτε μέθοδο τα αυγά ή οι προνύμφες όλων των τύπων ελμινθών που ζουν στο ανθρώπινο πεπτικό σύστημα. Έτσι, όταν χρησιμοποιείται η μέθοδος επίπλευσης, τα αυγά τρηματωδών και, σε ορισμένες περιπτώσεις, τα μη γονιμοποιημένα αυγά στρογγυλών σκουληκιών δεν επιπλέουν στην επιφανειακή μεμβράνη (λόγω του υψηλού ειδικού βάρους). Στα κόπρανα, είναι πολύ σπάνιο να βρεθούν αυγά σκουληκιών, τενιοειδή ογκόσφαιρα, τα οποία ανιχνεύονται με ειδικές ερευνητικές μεθόδους: απόξεση από περιπρωκτικές πτυχές για σκουλήκια και τενιοειδή, μέθοδοι καθίζησης για τρεματώδη (αυγά οπίστορα κ.λπ.). Επομένως, για στοχευμένη εξέταση του ασθενούς για ελμινθίαση, ο γιατρός στην παραπομπή θα πρέπει να υποδείξει σε ποιους ελμίνθους πρέπει να δοθεί η κύρια προσοχή (διάγνωση), γεγονός που θα επιτρέψει στον εργαστηριακό βοηθό να επιλέξει την κατάλληλη τεχνική για τον εντοπισμό αυτού του τύπου ελμίνθου. Τα κόπρανα που λαμβάνονται από διαφορετικά σημεία περιττωμάτων σε ποσότητα τουλάχιστον 50 γραμμαρίων (κουταλάκι του γλυκού) σε καθαρό γυάλινο πιάτο πρέπει να αποστέλλονται στο εργαστήριο το αργότερο μία ημέρα μετά την αφόδευση και να εξετάζονται την ημέρα της παραλαβής. Εάν είναι απαραίτητο να διατηρηθούν τα κόπρανα μέχρι την επόμενη μέρα, τοποθετούνται σε κρύο μέρος (0-4 ° C) ή γεμίζονται με ένα από τα συντηρητικά. Πριν από τη μελέτη, τα κόπρανα αναμιγνύονται με ένα ραβδί, έτσι ώστε τα αυγά των ελμινθών να κατανέμονται ομοιόμορφα στη συνολική μάζα. Εάν βρεθούν ωάρια ελμινθών στο παρασκεύασμα, η θέαση δεν διακόπτεται, γιατί. μπορεί να είναι διπλή ή τριπλή εισβολή. Η παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας της ελμινθίασης πραγματοποιείται με την εξέταση των περιττωμάτων για αυγά ελμινθίας σε 2-3 εβδομάδες ή 2-3 μήνες μετά τη θεραπεία, ανάλογα με την ανιχνευθείσα ελμινθία. Οι μακροσκοπικές μέθοδοι χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση ολόκληρων σεξουαλικά ώριμων ελμίνθων ή θραυσμάτων τους στα κόπρανα με γυμνό μάτι ή με μεγεθυντικό φακό χειρός. Συχνά στην επιφάνεια των κοπράνων μετά την αφόδευση, μπορείτε να δείτε ενεργά σέρνονται σκουλήκια καρφίτσας. απεκκρίνεται με περιττώματα στρογγυλό σκουλήκι. μερικές φορές οι ίδιοι οι άνθρωποι παρατηρούν την απόρριψη ελμινθών. Σε ασθενείς με διφυλλοβοθρίαση, μπορεί να ξεχωρίσουν θραύσματα του στροβίλλου της ταινίας (με τη μορφή "νουντλς") και σε όσους έχουν μολυνθεί με τενιοειδή (χοιρινό ή βοοειδές ταινία), τμήματα ελμινθών (με τη μορφή "λευκών κομματιών" ) συχνά αφήνουν τα κόπρανα (με τη μορφή "λευκών τομών") ή σέρνονται ενεργά έξω από τον πρωκτό. Η μακροσκοπική μέθοδος είναι η κυριότερη για τη διαφορική διάγνωση της τενιάδωσης και της τενιάρυγχωσης (σε συνδυασμό με έρευνα). Από τις ειδικές μακροσκοπικές μεθόδους χρησιμοποιείται η μέθοδος της διαδοχικής πλύσης των κοπράνων. Τα κόπρανα αναμιγνύονται σε νερό για να ληφθεί ένα ομοιόμορφο εναιώρημα, μετά το οποίο, υπό καλό φωτισμό, εξετάζονται προσεκτικά σε ξεχωριστές μικρές μερίδες σε μαύρες φωτογραφικές κυψέλες ή σε σκούρο φόντο σε πιάτα Petri. Με ένα τσιμπιδάκι ή μια βελόνα ανατομής, αφαιρούνται όλα τα ύποπτα λευκά σωματίδια, μεγάλοι σχηματισμοί ύποπτοι για θραύσματα ελμινθών και εξετάζονται κάτω από ένα μεγεθυντικό φακό ανάμεσα σε δύο γυάλινες διαφάνειες. Μικροί έλμινθοι ή κεφαλές κεστωδών εξετάζονται κάτω από μεγεθυντικό φακό σε μια σταγόνα γλυκερίνης ή κάτω από μικροσκόπιο. Όταν χρησιμοποιείται αυτή η μέθοδος για τη διάγνωση τμημάτων του χοιρινού κρέατος, της ταινίας βοοειδών, της φαρδιά ταινίας, τα πλυμένα τμήματα τοποθετούνται ανάμεσα σε δύο ποτήρια και, κοιτάζοντας το φως κάτω από ένα μεγεθυντικό φακό ή χαμηλή μεγέθυνση του μικροσκοπίου, το είδος προσδιορίζεται από η δομή της μήτρας (σε ένα ώριμο τμήμα της ταινίας του χοιρινού, 8-12 πλευρικά κλαδιά, και σε μια ταινία ταύρου 18-32, πιο συχνά 28-32, σε μια πλατιά ταινία, τα τμήματα είναι ευρύτερα και η μήτρα είναι σε το κέντρο με τη μορφή «ροζέτας»). Εάν η μήτρα είναι ελάχιστα ορατή, τότε μπορεί πρώτα να κρατηθεί για κάποιο χρονικό διάστημα σε διάλυμα γλυκερίνης 50%, μετά το οποίο ακόμη και οι έρημοι κορμοί της μήτρας είναι σαφώς ορατοί. Κατά τον προσδιορισμό αυτών των κεστόδων από τη δομή των αποκολλημένων κεφαλών, τοποθετούνται προσεκτικά με ένα λαιμό σε μια σταγόνα γλυκερίνης ανάμεσα σε γυάλινες πλάκες (ή καλύπτονται με καλυπτρίδα) και, χωρίς συμπίεση, εξετάζονται σε μικροσκόπιο σε χαμηλή μεγέθυνση.

Οι μικροσκοπικές μέθοδοι χωρίζονται σε απλές, σύνθετες και ειδικές.

Οι απλές μέθοδοι περιλαμβάνουν αυτοφυή επίχρισμα, αυτοφυή επίχρισμα με διάλυμα Lugol, παχύ επίχρισμα κάτω από σελοφάν κατά Kato, στρίψιμο (σύμφωνα με τον Shulman) και περιπρωκτική απόξεση.

Οι σύνθετες μέθοδοι είναι πιο αποτελεσματικές και βασίζονται στη συγκέντρωση των αυγών σε παρασκευάσματα. Περιλαμβάνουν προεπεξεργασία των κοπράνων με υγρά αντιδραστήρια, με αποτέλεσμα τα αυγά των ελμινθών είτε να καθιζάνουν είτε να επιπλέουν στην επιφάνεια του υγρού.

Οι σύνθετες μέθοδοι περιλαμβάνουν μεθόδους εμπλουτισμού:

α) επίπλευση (όταν το ειδικό βάρος των αυγών είναι μικρότερο από το ειδικό βάρος του αλατούχου διαλύματος και τα αυγά επιπλέουν στην επιφανειακή μεμβράνη)·

β) καθίζηση (όταν το ειδικό βάρος των αυγών είναι μεγαλύτερο από το ειδικό βάρος των διαλυμάτων αλάτων και τα αυγά καθιζάνουν σε ίζημα).

Ειδικές μέθοδοι ανίχνευσης αυγών και προνυμφών ελμινθών, κύστεων και βλαστικών μορφών πρωτοζώων είναι οι μέθοδοι απόξεσης, επίπλευσης, καθίζησης, προνυμφοσκόπησης, πρωτοζωοσκόπησης, η μελέτη της χολής και οι μέθοδοι χρώσης επιχρισμάτων κοπράνων, πτυέλων κ.λπ.

Δειγματοληψία και συντήρηση

Για έρευνα, τα κόπρανα λαμβάνονται από διαφορετικά σημεία σε μερίδες των 50 g και αποστέλλονται στο εργαστήριο σε καθαρό γυάλινο ή πλαστικό δοχείο με σφιχτό καπάκι. Τα φρέσκα κόπρανα εξετάζονται (όχι περισσότερο από μία ημέρα), και σε ορισμένες περιπτώσεις (στη μελέτη για την ισχυροειδίαση) αμέσως μετά την αφόδευση. Έχει προταθεί ένας αριθμός συντηρητικών για τα κόπρανα που περιέχουν αυγά ελμινθών: διάλυμα φορμαλίνης 4-10%, το οποίο πρέπει να θερμανθεί στους 50-60° για να αποφευχθεί η ανάπτυξη αυγών αγκυλόστομων. μείγμα 0,2% υδατικού διαλύματος νιτρικού νατρίου (1900 ml), διαλύματος Lugol (5 g ιωδίου, 10 g ιωδιούχου καλίου, 250 ml νερού), φορμαλίνης (300 ml) και γλυκερίνης (25 ml), στο οποίο η ελμινθ Τα αυγά αποθηκεύονται 6-8 μήνες. μείγμα γλυκερίνης (5 ml), φορμαλίνης (5 ml) και νερού (100 ml). διαλύματα 1-1,5% απορρυπαντικών "Lotus", "Extra", "Barf", "Tide", κ.λπ. (σε αναλογία βάρους περιττωμάτων και απορρυπαντικού διαλύματος 1: 5). μείγμα μερθειολικού 1: 1000 (200 ml), φορμαλίνης (25 ml), γλυκερίνης (5 ml), απεσταγμένου νερού (250 ml) με την προσθήκη 0,6 ml διαλύματος Lugol (με βάση 1 g περιττωμάτων ανά 10 ml Το μίγμα).

Για τη διάγνωση των ελμινθασών, χρησιμοποιούνται μακρο- και μικροελμινθοσκοπικές μέθοδοι για την εξέταση των κοπράνων.

Μελέτες Μακροελμινθοσκόπησης

Μέθοδος τακτοποίησης

Η ημερήσια μερίδα των κοπράνων αναμιγνύεται καλά με 5-10 φορές μεγαλύτερη ποσότητα νερού, χύνεται σε γυάλινους κυλίνδρους (βάζα, κουβάδες) και αφήνεται μέχρι να κατακαθίσουν τελείως τα αιωρούμενα σωματίδια. Το ανώτερο θολό στρώμα στραγγίζεται προσεκτικά και προστίθεται καθαρό νερό στην κορυφή (επαναλάβετε αρκετές φορές μέχρι το νερό πάνω από το ίζημα να γίνει διαφανές). Αφού στραγγίξετε το επάνω στρώμα, μεταφέρετε το ίζημα σε κυβέτα ή τρυβλίο Petri και δείτε το (σε σκούρο φόντο) κάτω από μεγεθυντικό φακό ή με γυμνό μάτι.

Μέθοδος προσυμπτωματικού ελέγχου

Τα περιττώματα ανακατεμένα με νερό τοποθετούνται στο πάνω κόσκινο της συσκευής, που αποτελείται από ένα σύστημα κόσκινων με τρύπες φθίνουσας διαμέτρου, η συσκευή συνδέεται με το δίκτυο ύδρευσης και ανοίγοντας τη βρύση πλένεται και το υγρό που ρέει εκκενώνεται στην αποχέτευση. Μεγάλοι έλμινθοι παραμένουν στο πάνω κόσκινο, ενώ μικρότεροι στο κάτω. Τα κόσκινα αναποδογυρίζονται και, αφού έχει πλυθεί το περιεχόμενο σε σκούρες κυψέλες, τα βλέπει κανείς με γυμνό μάτι ή κάτω από μεγεθυντικό φακό.

Μελέτες μικροελμινθοσκόπησης

Διενεργείται με σκοπό την ανίχνευση αυγών (ελμινθοωοσκοπικές μέθοδοι - χρώμα. Εικ. 1) ή προνύμφες ελμινθών (ελμινθο-λαρβοσκοπικές μέθοδοι).

Ελμιντοβοσκοπικές μέθοδοι

Ποιοτικές μέθοδοι χωρίς εμπλουτισμό

αυτοφυές επίχρισμα. Μια μικρή ποσότητα περιττωμάτων λειοτριβείται σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50% ή βρασμένο νερό. Τα μεγάλα σωματίδια αφαιρούνται προσεκτικά, το μείγμα καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται στο μικροσκόπιο (βλέπονται δύο επιχρίσματα). Είναι πιο βολικό και ευκολότερο να προετοιμάζετε μακριές κηλίδες ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες. Το εγγενές επίχρισμα χρησιμοποιείται μόνο συμπληρωματικά σε μεθόδους εμπλουτισμού, αφού δεν είναι αρκετά αποτελεσματικό, ειδικά με ασθενείς εισβολές.

Παχύ επάλειψη με σελοφάν κατά Κάτω(Κ. Κάτω, 1954) είναι μια πολύ αποτελεσματική μέθοδος έρευνας. Κομμάτια υδρόφιλου σελοφάν (μέγεθος 4x2 cm) εμποτίζονται για 24 ώρες σε μείγμα γλυκερόλης (50 ml), 6% διαλύματος φαινόλης (500 ml) και 3% υδατικού διαλύματος (6 ml) πράσινου μαλαχίτη (το τελευταίο είναι προαιρετικό ). ΕΝΤΑΞΕΙ. 100 mg περιττωμάτων αλείφονται σε μια γυάλινη πλάκα και, καλύπτονται με ένα κομμάτι υγρού σελοφάν, συμπιέζονται με ένα ελαστικό πώμα Νο. 5. Το φάρμακο εξετάζεται μετά από 30-60 λεπτά, όταν στεγνώσει ελαφρά και καθαρίσει, ως αποτέλεσμα του οποίου τα αυγά ελμινθών είναι εύκολο να ανιχνευθούν με μικροσκόπιο χαμηλής μεγέθυνσης.

Ποιοτικές μέθοδοι με εμπλουτισμό (μέθοδοι πλωτής και καθίζησης)

Τα πρώτα βασίζονται στη χρήση κορεσμένων διαλυμάτων διαφόρων χημικών ουσιών. ουσίες στις οποίες επιπλέουν τα αυγά λόγω της διαφοράς ειδικού βάρους.

Μέθοδος Kofoid-Barber(Ch.A. Kofoid, M. A. Barber) τροποποιημένο από τον Fulleborn (F. Fulleborn, 1920). ΕΝΤΑΞΕΙ. 5 g περιττωμάτων σε ένα ψηλό και στενό βάζο (όγκος 100 ml) ανακατεύονται με ένα ξύλινο ραβδί σε 100 ml κορεσμένου διαλύματος επιτραπέζιου αλατιού, χτυπήματα. βάρος to-rogo 1,18 (400 g αλατιού διαλύονται σε βρασμό σε 1 l νερού). Τα μεγάλα σωματίδια που έχουν επιπλεύσει στην επιφάνεια αφαιρούνται γρήγορα με ένα ραβδί ή ένα κομμάτι χαρτί. Αφού κατασταλάξει το μείγμα για 45-90 λεπτά. ένας συρμάτινος βρόχος (διαμέτρου 0,8-1 cm) αφαιρεί ολόκληρη την επιφανειακή μεμβράνη, τη μεταφέρει σε μια γυάλινη τσουλήθρα. Κατά τη δοκιμή για αυγά αγκυλόστομων, το μείγμα αφήνεται να σταθεί για 10-15 λεπτά. Μπορείτε να αφαιρέσετε το φιλμ απευθείας με μια γυάλινη πλάκα, η οποία καλύπτει το βάζο έτσι ώστε να έρθει σε επαφή με το υγρό (ένα κορεσμένο διάλυμα αλατιού προστίθεται στις άκρες του βάζου). Μετά την καθίζηση, η αντικειμενοφόρος πλάκα αφαιρείται, αναποδογυρίζεται γρήγορα και εξετάζεται κάτω από ένα μικροσκόπιο (χωρίς κάλυμμα) μια μεμβράνη με αυγά ελμινθών να προσκολλώνται σε αυτήν. Αυτή η μέθοδος αποκαλύπτει καλά τα αυγά όλων των νηματωδών και της πυγμαίας ταινίας. Βαριά τρηματώδη αυγά. Τα περισσότερα κεστόδια και τα μη γονιμοποιημένα στρογγυλά σκουλήκια επιπλέουν ελάχιστα, επομένως το ίζημα εξετάζεται επίσης. Για να γίνει αυτό, μετά την αφαίρεση της μεμβράνης, το υγρό από το βάζο στραγγίζεται γρήγορα και λαμβάνονται μερικές σταγόνες από το ίζημα με βρόχο ή πιπέτα, μεταφέρονται σε γυάλινη πλάκα, προστίθεται μια σταγόνα γλυκερίνης για διαύγαση και εξετάζεται υπό μικροσκόπιο.

Μέθοδος E. V. Kalantaryan(1938) Είναι μια πιο αποτελεσματική τροποποίηση της μεθόδου Fülleborn. Σε αυτό, το διάλυμα χλωριούχου νατρίου αντικαθίσταται από ένα κορεσμένο διάλυμα νιτρικού νατρίου, sp. βάρος to-rogo 1,39 (ένας όγκος νιτρικού νατρίου διαλύεται σε ίσο όγκο νερού κατά τη διάρκεια του βρασμού), το φιλμ αφαιρείται μετά από 20-30 λεπτά.

Εφαρμόζονται και οι μέθοδοι του Faust (E. S. Faust, 1939), Brudastov et al. (1970) και άλλοι.

Για την εναπόθεση αυγών ελμινθών χρησιμοποιείται χημική ουσία. ουσίες που διαλύουν λίπη και πρωτεΐνες στα κόπρανα.

Η μέθοδος του Telemann (W. Telemann, 1908) όπως τροποποιήθηκε από τον Miyagawa (Y. Miyagawa, 1913). ΕΝΤΑΞΕΙ. 5 g περιττωμάτων αλέθονται σε γουδί ή βάζο, προσθέτοντας 5 ml αιθυλαιθέρα και διάλυμα υδροχλωρικού οξέος 50%. το μείγμα διηθείται μέσω σύρματος ή κόσκινου μαλλιών σε δοκιμαστικό σωλήνα και φυγοκεντρείται. Στον δοκιμαστικό σωλήνα σχηματίζονται τρία στρώματα: στην κορυφή - αιθέρας με διαλυμένο λίπος, κάτω - υδροχλωρικό οξύ με διαλυμένες πρωτεϊνικές ουσίες, στο ίζημα - αδιάλυτα μέρη περιττωμάτων και αυγών ελμινθών. Τα ανώτερα στρώματα στραγγίζονται, και νερό προστίθεται στο ίζημα και φυγοκεντρείται. Μερικές σταγόνες από το ίζημα μεταφέρονται σε γυάλινη πλάκα και εξετάζονται σε μικροσκόπιο. Αυτή η μέθοδος μπορεί να ανιχνεύσει αυγά όλων των τύπων ελμινθών, αλλά μερικές φορές παραμορφώνονται.

Μέθοδος Ritchie (L. S. Kitchie, 1948).Για τη διάλυση λιπών και πρωτεϊνών χρησιμοποιούνται φορμαλίνη και αιθέρας.

Για την εναπόθεση αυγών ελμινθών μπορούν να χρησιμοποιηθούν διάφορα απορρυπαντικά. Στο εξωτερικό έχει διαδοθεί ευρέως η μέθοδος φιλτραρίσματος σε ειδικές συσκευές Bell, η οποία χρησιμοποιείται για τη μελέτη όχι μόνο κοπράνων, αλλά και ούρων, αίματος κ.λπ.

Υπάρχει ένας αριθμός μεθόδων που συνδυάζουν τις αρχές της επίπλευσης και της καθίζησης αυγών. Ανάμεσά τους οι μέθοδοι των Lane (C. A. Lane), Rivas (D. Rivas), Gorkina, Darling (S. T. Darling). Μία από αυτές τις μεθόδους επίπλευσης-καθίζησης, καθώς και η μέθοδος των διαδοχικών εκκενώσεων, προτάθηκε από τον N.V. Demidov (1963, 1965) για έρευνα σχετικά με την απονευρωσίαση και τη δικροκηλίωση.

Ποσοτικές Μέθοδοι

Μέθοδος Stoll(N. R. Stoll, 1926). Σε βαθμονομημένο φαρδύ δοκιμαστικό σωλήνα ή φιάλη (με δύο ενδείξεις: 56 και 60 ml), χύνεται δεκακανονικό διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου μέχρι την πρώτη ένδειξη, προστίθενται περιττώματα μέχρι η στάθμη του υγρού να φτάσει στο δεύτερο σημείο, αναμειγνύεται καλά με μια γυάλινη ράβδο και , τοποθετώντας 10 γυάλινες χάντρες ή μικρά βότσαλα, πωματίστε και ανακινήστε για 1 λεπτό. Γρήγορα, για να μην κατακαθίσει το εναιώρημα, συλλέγονται 0,075 ml του μείγματος (0,005 g περιττωμάτων) με μια βαθμονομημένη πιπέτα, μεταφέρονται σε μια γυάλινη πλάκα με ένα πλέγμα, καλυμμένο με καλυπτρίδα και τα αυγά ελμινθών μέσα το παρασκεύασμα μετράται σε μικροσκόπιο. πολλαπλασιάζοντας τον αριθμό που προκύπτει επί 200, λάβετε τον αριθμό των αυγών σε 1 g περιττωμάτων. Για πιο ακριβές αποτέλεσμα, τα αυγά μετρώνται σε δύο ή περισσότερα σκευάσματα και λαμβάνεται ένας μέσος όρος. Η μέθοδος Stoll δεν είναι ευαίσθητη σε ασθενείς εισβολές. Επομένως, συνιστάται η καταμέτρηση του αριθμού των αυγών σε παρασκευάσματα που παρασκευάζονται με διάφορες μεθόδους επίπλευσης ή καθίζησης, υπό την προϋπόθεση ότι χρησιμοποιούνται συνεχώς ίσο βάρος περιττωμάτων και πιάτων του ίδιου όγκου. Χρησιμοποιείται επίσης ένα παχύρρευστο επίχρισμα Κάτω.

Μέθοδος Beaver(R. C. Beaver, 1950). Παρασκευάζεται ένα τυπικό επίχρισμα, η πυκνότητα του οποίου προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας ένα ηλεκτροφωτόμετρο και στη συνέχεια μετρώνται όλα τα αυγά ελμινθών σε αυτό.

Ελμιντολαβοσκοπικές μέθοδοι

Μέθοδος Bermann(G. Baermann, 1917). 5-10 g φρεσκοεκκρινόμενων περιττωμάτων τοποθετούνται σε μεταλλικό πλέγμα σε γυάλινη χοάνη, στο στενό άκρο της οποίας τοποθετείται ένας ελαστικός σωλήνας με σφιγκτήρα. Για να αποφευχθεί η μόλυνση του ιζήματος με σωματίδια κοπράνων, συνιστάται η τοποθέτηση (πάνω στο πλέγμα) χαρτιού ή η προσθήκη ζωικού ξυλάνθρακα ή καλαμποκάλευρου στα κόπρανα. Το χωνί γεμίζει με ζεστό νερό (t ° 45-50 °) μέχρι να έρθει σε επαφή με τα κόπρανα. Λόγω του θερμοτροπισμού, οι προνύμφες μετακινούνται ενεργά σε ζεστό νερό και συσσωρεύονται σταδιακά στο κάτω μέρος της χοάνης, πάνω από τον σφιγκτήρα. Μετά από 3-4 ώρες, ο σφιγκτήρας ανοίγει, το υγρό χαμηλώνεται σε 1-2 δοκιμαστικούς σωλήνες, φυγοκεντρείται για 2-3 λεπτά, το ανώτερο στρώμα στραγγίζεται και το ίζημα εξετάζεται σε γυάλινη πλάκα κάτω από μικροσκόπιο.

Μέθοδος για την ανίχνευση σχιστοσωμάτων miracidia. Τα κόπρανα πλένονται στο σκοτάδι στους t° 8-10°, το ίζημα διατηρείται για 45 λεπτά. σε έντονο φως στους t ° 28 °, στη συνέχεια αδειάστε σε μια σκούρα φιάλη με ένα σωλήνα στο πλάι. Τα miracidia συγκεντρώνονται σε ένα διαφανές πλευρικό σωλήνα από όπου μπορούν να διαλεχθούν.

Οι μέθοδοι του Fülleborn και άλλων χρησιμοποιούνται επίσης για την ανίχνευση προνυμφών αγκυλόστομων.

Μέθοδοι για τη μελέτη άλλων εκκρίσεων, καθώς και ιστών και οργάνων

ΕΝΤΑΞΕΙ. 100 ml από τα ούρα της εξέτασης παραμένετε για 30 λεπτά. σε έναν κύλινδρο και, αφού αφαιρέσετε το ανώτερο στρώμα, ρίξτε 10-15 ml ιζήματος σε δοκιμαστικό σωλήνα, φυγοκεντρήστε στις 1500 rpm για 1-2 λεπτά. εξετάζεται το ίζημα. Συνιστάται να συλλέγετε ολόκληρη την καθημερινή μερίδα ούρων.

Η σχιστοσωμίαση του ουρογεννητικού συστήματος διαγιγνώσκεται με την αναγνώριση των μιρασίδων. Ένα μέρος φρέσκων ούρων φυγοκεντρείται για 5 λεπτά, το ίζημα χύνεται σε μια μαύρη φιάλη, ένας διαφανής γυάλινος σωλήνας συγκολλάται στο πάνω μέρος της κοπής. Προστίθεται νερό σε αναλογία 1:5, 1:10 και τοποθετείται για 2 ώρες σε θερμοστάτη στους t ° 25-30 °. Τα miracidia που αναδύονται από τα αυγά είναι ορατά μέσω ενός διαφανούς σωλήνα με γυμνό μάτι με τη μορφή κουκκίδων που κινούνται γρήγορα. Στο hron, η μορφή σχιστοσωμίασης στους ασθενείς μέχρι το τέλος του αίματος της ούρησης κατανέμεται, αλλά τα αυγά στα ούρα σπάνια βρίσκονται, επομένως συνιστάται η καταφυγή σε βιοψία κύστης.

Εξέταση πτυέλων.Τα πτύελα μπορεί να περιέχουν αυγά paragonimus, σχιστοσώματα, tominxes, προνύμφες μεταναστευτικών νηματωδών, θραύσματα εχινόκοκκου κύστης. Ολόκληρο το χορηγούμενο τμήμα των πτυέλων εξετάζεται προσεκτικά με γυμνό μάτι ή κάτω από μεγεθυντικό φακό, επιλέγονται και εξετάζονται όλα τα ορατά υπολείμματα ιστού, συστάδες χρώματος σκουριάς κ.λπ. στη συνέχεια δείτε ολόκληρο το τμήμα με πινελιές. Τα πυώδη πτύελα χύνονται με ίση ποσότητα καυστικού αλκαλικού διαλύματος 0,5%, φυγοκεντρούνται και εξετάζεται το ίζημα.

Με ορισμένες ελμινθίασες παρατηρούνται χαρακτηριστικές αλλαγές στα πτύελα. Με την παραγονιμίαση, για παράδειγμα, στα πτύελα, μπορούν να βρεθούν συστάδες αυγών με τη μορφή κιτρινωπών σβώλων, καθώς και μεγάλη ποσότητα βλέννας, λευκοκυττάρων, ερυθροκυττάρων, κυψελιδικών κυττάρων, σπειρών Kurschmann, ελαστικών ινών, κρυστάλλων Charcot-Leiden. Αποκαλύπτονται επίσης χαρακτηριστικοί ρομβοειδείς κρύσταλλοι με μυτερά άκρα. Η παρουσία μεγάλου αριθμού ηωσινόφιλων καθιστά δυνατή τη διαφοροποίηση της παραγονιμίασης από τη φυματίωση.

Εξέταση του περιεχομένου των αποστημάτων και των σημείων. Σε πυώδεις εκκρίσεις αποστημάτων, καθώς και σε όγκους και κύστεις που αφαιρέθηκαν κατά τη διάρκεια της χειρουργικής επέμβασης, μπορούν να βρεθούν έλμινθοι, τα θραύσματά τους, οι προνύμφες και τα αυγά (εχινόκοκκος, κυψελοειδής, σπάργανος, κυστικέρκος, διροφιλαρία, στρογγυλοί σκώληκες, τοξόκαρα, παραγόνιμος κ.λπ.). Η τεχνική της έρευνας είναι κοινή. Σε ορισμένες περιπτώσεις, παρασκευάζονται ιστολογικές τομές από ιστούς όγκου. Το πυώδες περιεχόμενο μπορεί να υποβληθεί σε επεξεργασία με τη μέθοδο Telemann. το διαυγές υγρό εξετάζεται με τον ίδιο τρόπο όπως το περιεχόμενο του δωδεκαδακτύλου με την προσθήκη θειικού αιθέρα. Το υγρό εχινόκοκκου φυγοκεντρείται και το ίζημα εξετάζεται για την παρουσία σκολέξων και αγκίστρων. Τα παρασκευάσματα βάφονται με καρβολφουξίνη σύμφωνα με το Ziehl-Nelsen.

Μελέτη αίματος.Μικροφιλάρια και προνύμφες μεταναστευτικών νηματωδών βρίσκονται στο αίμα. Λαμβάνεται μια σταγόνα αίματος από ένα δάχτυλο ή από έναν λοβό του αυτιού και εξετάζεται φρέσκια ή παρασκευάζονται από αυτό.

Μια σταγόνα αίματος τοποθετείται σε μια γυάλινη πλάκα με ένα τετράγωνο βαζελίνης που εφαρμόζεται και πιέζεται ελαφρά με μια καλυπτρίδα. Κάτω από ένα μικροσκόπιο φαίνονται μικροφιλάρια να κινούνται μεταξύ των κυττάρων του αίματος. Το αίμα μπορεί να τοποθετηθεί ανάμεσα σε δύο στρώσεις κολλητικής ταινίας κυτταρίνης. Τα μικροφιλάρια παραμένουν κινητά για 6 ώρες. σε ένα εντελώς αποξηραμένο παρασκεύασμα, μπορούν να διακριθούν στο μικροσκόπιο εντός 30 ημερών. Τα είδη Microfilaria μπορούν να αναγνωριστούν μόνο σε λεκιασμένα επιχρίσματα ή παχιές σταγόνες. Τα παρασκευασμένα παρασκευάσματα ξηραίνονται, αιμολύονται και χρωματίζονται σύμφωνα με Romanovsky - Giemsa, Wright, Ziehl-Nelsen, Leishman, Papanicolaou (βλ. μέθοδο χρώσης Wright, μέθοδο Romanovsky-Giemsa, μέθοδο Ziehl-Nelsen). Έχοντας βρει μικροφιλάρια σε μια σταγόνα αίματος βαμμένη σύμφωνα με την Romanovsky-Giemsa, το παρασκεύασμα βάφεται επιπλέον με αιματοξυλίνη Hansen. μετά από 15-60 λεπτά. πλυμένο 2 λεπτά. σε τρεχούμενο νερό. Το επαναβαμμένο παρασκεύασμα διαφοροποιείται σε διάλυμα υδροχλωρικού οξέος 0,2%. το καπάκι των microfilariae γίνεται ανοιχτό μωβ και η πυρηνική ουσία του σώματος γίνεται σκούρο μοβ.

Για ήπιες προσβολές, 2-10 πάγους αίματος θα πρέπει να εξετάζονται με ένα αντιπηκτικό (π.χ. διάλυμα κιτρικού νατρίου 5%) χρησιμοποιώντας μία από τις ακόλουθες μεθόδους.

Η μέθοδος του Knott (J. Knott, 1939), τροποποιημένη από τους Markell και Foge (E. K. Markell, M. Voge, 1965). 2 ml αίματος αναμιγνύονται σε σωλήνα φυγοκέντρησης με 10 θήκες οξικού οξέος 1%, φυγοκεντρούνται για 2 λεπτά. στις 1500 σ.α.λ. Το επιφανειακό στρώμα στραγγίζεται, το ίζημα κατανέμεται σε πολλές γυάλινες πλάκες και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Τα παρασκευάσματα μπορούν να χρωματιστούν σύμφωνα με την Romanovsky-Giemsa ή άλλες μεθόδους.

Bell Filtration Method (D. R. Bell, 1967). Σε μια συσκευή που αποτελείται από μια χοάνη από ανοξείδωτο χάλυβα με ορθογώνια οπή και φίλτρα μεμβράνης του ίδιου σχήματος, διαστάσεων 19 x 42 mm, με μέγεθος πόρων 0,8 έως 5 μm, το αίμα φιλτράρεται σε δοκιμαστικούς σωλήνες, αιμολύεται σε μείγμα 1 ml απορρυπαντικού Tipol και 9 ml διαλύματος φιζιόλης (για να επιταχυνθεί η διήθηση, η συσκευή συνδέεται με αντλία κενού). Το φίλτρο στερεώνεται σε βραστό απεσταγμένο νερό και βάφεται σύμφωνα με Romanovsky-Giemsa ή ζεστή αιματοξυλίνη Ehrlich. Το έγχρωμο φίλτρο ξηραίνεται σε ξηραντήρα ή σε ισοπροπυλική αλκοόλη (διαδοχικά σε 3 φλιτζάνια), διαυγάζεται σε γυαλί με λάδι εμβάπτισης και εξετάζεται κάτω από καλυπτρίδα. Τα βαμμένα παρασκευάσματα αποθηκεύονται για αρκετές εβδομάδες. Η μέθοδος Bell είναι η πιο αποτελεσματική για την ποσοτική μέτρηση των μικροφιλαριών στο αίμα.

Χρησιμοποιείται επίσης η μέθοδος με την πολυβιδόνη της Goldsmid.

Έρευνα δέρματος.Στο δέρμα είναι δυνατόν να βρεθούν μικροφιλαρίες μιας ονχο-εκκλησίας και προνύμφες ελμινθών των ζώων που προκαλούν μια δερματική μορφή προνυμφών μεταναστών (βλ.). Οι τομές του δέρματος ή το υλικό που λαμβάνεται με ουλοποίηση λαμβάνονται στον μηρό, τη γάμπα, τους γλουτούς ή στο επίπεδο του δελτοειδή μυ. Ένα κομμάτι της επιδερμίδας σε σχήμα κώνου ανασηκώνεται με εντομολογική καρφίτσα και, κόβεται με ξυράφι, εξετάζεται σε γυαλί σε μια σταγόνα διαλύματος φιζιόλης. Εάν το αποτέλεσμα είναι αρνητικό, το φρέσκο ​​παρασκεύασμα επανεξετάζεται μετά από 10 λεπτά. οι προνύμφες συνήθως εντοπίζονται κατά μήκος των άκρων του παρασκευάσματος. Το ληφθέν υλικό μπορεί να διατηρηθεί σε 2 ml φιζιόλης, διάλυμα εντός 1-2 ωρών. και εξετάστε το ίζημα. Συνιστάται η λήψη 5 τομών δέρματος από τον ασθενή.

Είναι δυνατή η παρασκευή παρασκευασμάτων από αίμα και υγρό ιστού που απελευθερώνεται μετά από ισχυρή συμπίεση των τομών. Οι σταγόνες χρωματίζονται σύμφωνα με την αιματοξυλίνη Mayer, Romanovsky-Giemsa ή Delafield.

Τυπική μέθοδος για τον ποσοτικό προσδιορισμό της εισβολής. Βιοψημένη περιοχή του δέρματος. 3-5 mm και βάρους τουλάχιστον 1-4 mg ζυγίζουμε, κόβουμε σε μικρά κομμάτια και μετράμε τις προνύμφες στο μικροσκόπιο σε fiziol. διάλυμα σε γυάλινη διαφάνεια. 1-4 προνύμφες στο οπτικό πεδίο σημειώνονται με σύμβολο +, 5-9 προνύμφες - με σύμβολο ++, 10-19 - με σύμβολο +++, 20 ή περισσότερες - με σύμβολο + + + +. Η ποσοτική λογιστική είναι πιο βολική για τη διενέργεια χρωματισμένων παρασκευασμάτων.

Δοκιμή για τριχίνωση, κυστικέρκωση και σχιστοσωμίαση

Ταυτοποίηση προνυμφών Trichinella

μέθοδος συμπίεσης.Ένα κομμάτι του δικέφαλου ή του γαστροκνήμιου μυός (κοντά στον τένοντα), που λαμβάνεται χειρουργικά με ασηψία, χωρίζεται με βελόνες ανατομής σε ξεχωριστές λεπτές ίνες, συμπιέζονται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες σε μια σταγόνα γλυκερίνης, έτσι ώστε το παρασκεύασμα να είναι λεπτό και διαφανές. Οι προνύμφες Trichinella είναι καθαρά ορατές κάτω από ένα μικροσκόπιο με ένα σκοτεινό οπτικό πεδίο. Η έρευνα πολλών κομματιών μυών στα συμπιεστικά που χρησιμοποιούνται στο κτηνιατρικό-san είναι αποτελεσματική. πρακτική, ειδικά σε ειδικά τριχινελοσκόπια.

Η μέθοδος πέψης Bechman(G. W. Bachman, 1928). 1 και οι θρυμματισμένοι μύες χύνονται με 60 ml τεχνητού γαστρικού υγρού (0,5 g πεψίνης, 0,7 ml πυκνού υδροχλωρικού οξέος, 100 ml νερού) και επωάζονται για 18 ώρες. σε θερμοστάτη στους t° 37°. Το ανώτερο στρώμα του υγρού στραγγίζεται, ζεστό νερό (t° 37-45°) προστίθεται στο ίζημα και χύνεται στη συσκευή Bermann. Μία ώρα αργότερα, το υγρό κατεβάζεται σε δοκιμαστικό σωλήνα, φυγοκεντρείται και εξετάζεται το ίζημα. Εάν οι προνύμφες είναι εγκλεισμένες σε ασβεστοποιημένες κάψουλες, προκαταρκτικά αποασβεστοποιούνται σε διάλυμα υδροχλωρικού, αζώτου ή θειικού οξέος.

βιοδοκιμασία. Κομμάτια των μυών που μελετήθηκαν τρέφονται σε λευκά ποντίκια ή αρουραίους. Μετά από 2-3 ημέρες, η σεξουαλικά ώριμη Trichinella μπορεί να βρεθεί στο περιεχόμενο του δωδεκαδακτύλου και μετά από 2-3 εβδομάδες, προνύμφες στους μύες του διαφράγματος και της γλώσσας.

Ιστολογικές τομές.Κομμάτια μυών στερεώνονται σε Bouin's, Zenker's ή άλλα υγρά. Οι τομές παρασκευάζονται με τον συνήθη τρόπο σε μικροτόμο και βάφονται με αιματοξυλίνη Delafield.

Αναγνώριση κυστικέρων

Ένα κομμάτι εκριζωμένου μυός, συνδετικού ιστού κ.λπ., εξετάζεται με γυμνό μάτι, απομονώνεται προσεκτικά ένας κυστικέρκος - ένα υπόλευκο ημιδιαφανές κυστίδιο μεγέθους 1-2 cm, συνθλίβεται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες σε μια σταγόνα γλυκερίνης και εξετάζεται με μικροσκόπιο. Για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των κυστικέρων που απομονώνονται από τους ιστούς, διατηρούνται σε διάλυμα χολής 50% για φιζιόλη. διάλυμα σε θερμοστάτη στους t° 37°. μετά από 10-60 λεπτά. η κεφαλή ενός βιώσιμου κυστικέρκου στρέφεται προς τα έξω. Οι ασβεστοποιημένοι κυστικέρκοι έχουν προηγουμένως απασβεστωθεί με διάλυμα νιτρικού οξέος 4% για μία ώρα.

Ανίχνευση σχιστοσωμικών ωαρίων

Στο hron, μορφές σχιστοσωμάτωσης, όταν ο σχηματισμός κοκκιωμάτων εμποδίζει την απελευθέρωση ωαρίων από τους ιστούς στον εντερικό αυλό ή στο ουροποιητικό σύστημα, χρησιμοποιείται βιοψία του βλεννογόνου του ορθού, η οποία εκτελείται με ειδικό κουτάλι χρησιμοποιώντας ορθοσκόπιο. επιλέγοντας ένα σημείο με ορατή βλάβη. Το τεμάχιο βιοψίας συνθλίβεται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Εάν το αποτέλεσμα είναι αρνητικό, τα κομμάτια διαυγάζονται σε διάλυμα καυστικού αλκαλίου 4% και από αυτά παρασκευάζεται gistol. φέτες. Μια βιοψία του βλεννογόνου της νήστιδας πραγματοποιείται από το στόμα και το προκύπτον υλικό εξετάζεται με τη μέθοδο συμπίεσης ή gistol, παρασκευάζονται τομές από αυτό. Σε ορισμένες περιπτώσεις σχιστοσωμίασης του ουροποιογεννητικού συστήματος, η διάγνωση μπορεί να γίνει μόνο με βάση την ενδοφλέβια βιοψία. Με ηπατοληνική μορφή σχιστοσωμίασης, πραγματοποιείται βιοψία παρακέντησης του ήπατος. gistol, παρασκευάζονται τομές από το ληφθέν υλικό και εξετάζονται σε μικροσκόπιο φθορισμού. Μικροσκόπιο φθορισμού με σκοτεινό πεδίο χρήσης και για εξέταση ηπατικού ιστού για σχιστοσωμικά ωάρια. Όταν τα σχιστοσώματα επηρεάζουν τη γυναικεία γεννητική οδό, η απόρριψη συλλέγεται χρησιμοποιώντας έναν κολπικό καθρέφτη ή κομμάτια της βλεννογόνου μεμβράνης του τραχήλου της μήτρας λαμβάνονται με ένα κοφτερό κουτάλι. το ληφθέν υλικό εξετάζεται με μικροσκόπιο σε γυαλί σε διάλυμα φιζιόλης σταγόνας.

Έρευνα για την εντεροβίαση και την τενιίδωση

Περιπρωκτική απόξεση (συνιστάται να γίνεται το βράδυ, 1 - 1,5 ώρα αφού ο ασθενής πήγε για ύπνο ή το πρωί πριν την τουαλέτα). Με ένα σπίρτο κομμένο λοξά και βρεγμένο σε μια σταγόνα υγρού (φιζιόλη, διάλυμα, βρασμένο νερό ή διάλυμα διττανθρακικής σόδας 2%), απλωμένο σε γυάλινη πλάκα, το κάνω προσεκτικά; απόξεση από τον βλεννογόνο του πρωκτού και τις πτυχές γύρω από αυτόν (από το κέντρο προς τα έξω). Η βλέννα που συλλέγεται στο τέλος του αγώνα ξύνεται με την άκρη του καλύμματος σε μια σταγόνα υγρού στην αντικειμενοφόρο πλάκα και, καλυμμένη με την ίδια καλυπτρίδα, εξετάζεται. Κατά τη διάρκεια μαζικών εξετάσεων, όταν γίνονται ξύσεις σε παιδικά ή άλλα ιδρύματα, το χρησιμοποιημένο σπίρτο τοποθετείται σε μια σταγόνα υγρού σε μια τσουλήθρα, μετά την ξήρανση, οι σταγόνες καλύπτονται με μια άλλη αντικειμενοφόρο πλάκα και παραδίδονται στο εργαστήριο, τυλίγονται σε χαρτί και ασφαλίζονται με μια ελαστική ταινία. Για τη μελέτη της βλέννας του ορθού, χρησιμοποιείται μια ειδική συσκευή - ένας σωλήνας Shakhmatov ή Ziemann, με τον οποίο λαμβάνεται βλέννα από το ορθό και τα επιχρίσματα εξετάζονται στο μικροσκόπιο.

Μέθοδος βαμβακερής μπατονέτας. Στους ασθενείς δίνεται ένας δοκιμαστικός σωλήνας με ένα βαμβάκι σε ένα γυαλί ή ξύλινο ραβδί στο σπίτι. Το πρωί, ο ασθενής σκουπίζει τις περιπρωκτικές πτυχές με μπατονέτα βρεγμένο με βρασμένο νερό και το τοποθετεί σε δοκιμαστικό σωλήνα με μικρή ποσότητα νερού. Στο εργαστήριο, τα επιχρίσματα ξεπλένονται στον ίδιο σωλήνα με νέα ποσότητα νερού και το ίζημα εξετάζεται μετά τη φυγοκέντρηση.

Μέθοδος σελοφάν Hall (M. C. Hall, 1937). Ένα τετράγωνο κομμάτι σελοφάν ενισχύεται με λάστιχο σε γυάλινη ράβδο. Η απόξεση γίνεται με ξηρό σελοφάν και τοποθετείται σε δοκιμαστικό σωλήνα. Στο εργαστήριο, το σελοφάν μετατοπίζεται ελαφρά από το ραβδί και, κόβοντας την άκρη του με ψαλίδι, το ισιώνει σε μια γυάλινη διαφάνεια. βρέχεται με ένα δεινοφυσιολογικό διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου, καλυμμένο με καλυπτρίδα και εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

Η μέθοδος της ταινίας κυτταρίνης του Graham (C. F. Graham, 1941). Μια λωρίδα ταινίας κυτταρίνης πιέζεται με την κολλητική της πλευρά στις περιπρωκτικές πτυχές του θέματος, στη συνέχεια με την ίδια πλευρά προς την αντικειμενοφόρο πλάκα και εξετάζεται χωρίς καλυπτρίδα. μπορείτε να προσθέσετε μια σταγόνα τολουολίου. Ο VV Kaledin (1972) πρότεινε τη χρήση για τους σκοπούς αυτούς κυτταρινικών δίσκων που κόβονται από πλυμένο φιλμ ακτίνων Χ και έχουν υγρανθεί με γλυκερίνη. Οι δίσκοι εξετάζονται σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα πυριτικής κόλλας. Η μέθοδος ταινίας κυτταρίνης μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για την εξέταση των παιδικών εσωρούχων.

Υπογόνιμη απόξεση. Οι άκρες του νυχιού, το κρεβάτι του νυχιού, οι υπογλώσσιοι χώροι υγραίνονται με διάλυμα καυστικού αλκαλίου 0,5-1% και σκουπίζονται με βρεγμένα βαμβακερά μάκτρα. Τα επιχρίσματα τοποθετούνται σε φυγοκεντρικούς σωλήνες με το ίδιο διάλυμα, φυγοκεντρούνται και εξετάζεται το ίζημα.

Μέθοδοι μελέτης περιβαλλοντικών αντικειμένων για αυγά και προνύμφες ελμινθών (υγειονομικές και ελμινθολογικές μελέτες)

Διενεργείται έρευνα προκειμένου να προσδιοριστεί ο βαθμός μόλυνσης περιβαλλοντικών αντικειμένων με αυγά και προνύμφες ελμινθών. Τα ληφθέντα δεδομένα χρησιμοποιούν για μια αξιολόγηση μια αξιοπρέπεια. την κατάσταση των ιδρυμάτων και των επιχειρήσεων και την αποτελεσματικότητα των συνεχιζόμενων μέτρων για την καταπολέμηση της ελμινθίασης.

Κατά τη μελέτη του βαθμού μόλυνσης διαφόρων περιβαλλοντικών αντικειμένων με αυγά και προνύμφες ελμινθών και αξιολόγηση του ρόλου τους στην επιδημιολογία της ελμινθίασης, είναι σημαντικό να καθοριστεί όχι μόνο ο αριθμός των αυγών που βρέθηκαν, αλλά και η βιωσιμότητα και η διεισδυτικότητά τους, τα οποία καθορίζονται: ) από την εμφάνιση, κάτω από ένα μικροσκόπιο. β) χρώση με διάφορες βαφές, συμπεριλαμβανομένων των φωταυγών. κατά κανόνα, τα ζωντανά αυγά και οι προνύμφες δεν λεκιάζουν. γ) καλλιέργεια υπό βέλτιστες συνθήκες έως το στάδιο της επεμβάσεως. δ) μόλυνση εργαστηριακών ζώων (βιοδοκιμασία).

Μελέτες υδάτων και λυμάτων. Για μία μελέτη χρησιμοποιούνται 10-25 λίτρα νερού (ποτάμια, θάλασσες, λίμνες, πισίνες, σωλήνες νερού) και 1-2-5 λίτρα λυμάτων.

Μέθοδος 3. G. Vasilkova (1941). Το νερό ή τα λύματα φιλτράρονται μέσω υπερφίλτρων μεμβράνης σε μια συσκευή Goldman, η οποία αποτελείται από μια γυάλινη ή μεταλλική χοάνη με φίλτρα που συνδέονται με ένα δακτύλιο ακροφυσίου σε μια φιάλη Bunsen. Για να επιταχυνθεί η διαδικασία φιλτραρίσματος, μια αντλία κενού συνδέεται στη συσκευή. Μετά τη διήθηση, τα φίλτρα μεμβράνης εξετάζονται υπό μικροσκόπιο, αφού έχουν καθαριστεί με διάλυμα γλυκερίνης 50%. το συσσωρευμένο ίζημα καθαρίζεται και εξετάζεται χωριστά με τη μορφή κηλίδων. Χρησιμοποιούνται συσκευές φιλτραρίσματος και άλλα σχέδια.

Η μέθοδος των G. Sh. Gudzhabidze και G. A. Yudin (1963) για τη μελέτη του υγρού αποχέτευσης. 1 λίτρο υγρού καθιζάνει για 2 ώρες σε έναν κύλινδρο Lisenko. το προκύπτον ίζημα (5-9 ml) αντιμετωπίζεται όπως στη μελέτη του εδάφους (βλ. παρακάτω).

Μέθοδος Ν. Α. Romanenko (1967). Σε 1 λίτρο υγρών αποβλήτων τοποθετημένο σε γυάλινο κύλινδρο χωρητικότητας 1200-1500 ml, προσθέστε 0,4-0,6 g θειικού αλουμινίου ή χλωριούχου σιδήρου (για την πήξη, που επιταχύνει τη διαδικασία καθίζησης των αιωρούμενων σωματιδίων) και μετά 40 λεπτά. Το μείγμα φυγοκεντρείται για 3 λεπτά. στις 1000 σ.α.λ. Το ανώτερο στρώμα στραγγίζεται και για να διαλυθούν οι νιφάδες, προσθέστε 1-2 ml διαλύματος υδροχλωρικού οξέος 3% και μετά 150 ml κορεσμένου διαλύματος νιτρικού νατρίου. Το ίζημα εξετάζεται σαν χώμα.

Έρευνα εδάφους

Η μόλυνση του εδάφους με αυγά ελμινθών προσδιορίζεται προκειμένου να εντοπιστούν οι εστίες των ελμινθιών και να αξιολογηθεί η αποτελεσματικότητα της αποκατάστασής τους.

Μέθοδος 3. G. Vasilkova and V. A. Gefter (1948). 12,5 g χώματος αναμιγνύονται σε δοκιμαστικούς σωλήνες (100 ml) από ανοξείδωτο χάλυβα ή ορείχαλκο με 20 ml καυστικού αλκαλικού διαλύματος 5%, προσθέτοντας 10 γυάλινες χάντρες ή μικρά βότσαλα. Οι σωλήνες κλείνονται με ελαστικά πώματα και ανακινούνται για 20 λεπτά. σε σέικερ ή με το χέρι. Μετά την αφαίρεση των βυσμάτων, οι δοκιμαστικοί σωλήνες φυγοκεντρούνται για 3-5 λεπτά, το επιφανειακό υγρό στραγγίζεται, 60-80 ml κορεσμένου διαλύματος νιτρικού νατρίου προστίθενται στο ίζημα και, αφού αναμειχθεί καλά, φυγοκεντρείται ξανά για 3-5 λεπτά. Σε αυτή την επιφανειακή μεμβράνη με αυγά που επιπλέουν αφαιρείται αγγίζοντας την επιφάνεια του μείγματος με έναν σύνθετο βρόχο (5-6 βρόχους συνδεδεμένους σε μια κοινή ράβδο) και μεταφέρεται σε ένα ποτήρι νερό. αναμειγνύεται με το ίδιο διάλυμα, φυγοκεντρείται. η όλη διαδικασία επαναλαμβάνεται τουλάχιστον 3 φορές. Το περιεχόμενο του γυαλιού, όπου μεταφέρεται το φιλμ, αραιώνεται με νερό και διηθείται μέσω φίλτρων μεμβράνης, τα οποία εξετάζονται στο μικροσκόπιο σε μια σταγόνα γλυκερίνης.

Μέθοδος 3. Οι G. Vasilkova and V. A. Gefter, τροποποιημένοι από τον A. A. Namitokov (1961) διαφέρουν από την κύρια μέθοδο στο ότι αντί να μελετώνται τα παρασκευάσματα μεμβράνης, χρησιμοποιείται το μισό περιεχόμενο του σωλήνα (κάθε φορά προσθέτοντας ένα νέο μέρος ενός κορεσμένου διαλύματος νατρίου νιτρικά), φιλτράρονται και εξετάζονται τα φίλτρα.

Ο N. A. Romanenko (1968) συνιστά την εξέταση δειγμάτων εδάφους και λυματολάσπης για αυγά ελμινθών χρησιμοποιώντας τη συσκευή που προτείνει ο G. Sh. Gudzhabidze. 50 g χώματος αναμειγνύονται καλά για 1 λεπτό. σε 150 ml νερού σε σωλήνες φυγοκέντρησης (χωρητικότητας 250 ml) με ειδικές λεπίδες, οι οποίες κινούνται από ηλεκτροκινητήρα. Το μίγμα φυγοκεντρείται για 3 λεπτά. στις 1000 rpm, το νερό αποστραγγίζεται και, προσθέτοντας 150 ml κορεσμένου διαλύματος νιτρικού νατρίου, αναμειγνύεται και φυγοκεντρείται ξανά για 3 λεπτά. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες με δείγματα τοποθετούνται σε βάση, προστίθεται διάλυμα νιτρικού νατρίου μέχρι να σχηματιστεί ένας κυρτός μηνίσκος, καλύπτεται με γυάλινες πλάκες (10 x 6 cm) και αφήνονται στην άκρη για 10-15 λεπτά, στη συνέχεια αφαιρούνται τα γυαλιά και εξετάζονται. η διαδικασία επαναλαμβάνεται τουλάχιστον 4 φορές.

Έρευνα για προνύμφες ελμινθών σύμφωνα με τη μέθοδο του Bermann (1917). 200-400 g χώματος τοποθετούνται σε ένα κομμάτι γάζας σε μεταλλικό πλέγμα (με διάμετρο οπής 1-2 mm) που τοποθετείται στο φαρδύ μέρος μιας γυάλινης χοάνης στερεωμένης σε τρίποδο. Ένας ελαστικός σωλήνας με σφιγκτήρα τεντώνεται πάνω από το στενό άκρο της χοάνης. Το χωνί γεμίζει με ζεστό (t ° 50 °) νερό έτσι ώστε το κάτω μέρος του πλέγματος με το χώμα να έρχεται σε επαφή με το νερό. Λόγω της θερμοτροπίας, οι προνύμφες σέρνονται ενεργά σε ζεστό νερό και, καθιζάνοντας, συσσωρεύονται στο κάτω μέρος του ελαστικού σωλήνα πάνω από τον σφιγκτήρα. Μετά από 3-4 ώρες, 50 ml του περιεχομένου απελευθερώνονται από τη χοάνη σε δοκιμαστικό σωλήνα, φυγοκεντρούνται και εξετάζεται το ίζημα.

Έρευνα λαχανικών, φρούτων και μούρων

Ερευνήστε κυρίως λαχανικά, μούρα και φρούτα που καταναλώνονται χωρίς θερμική επεξεργασία. Μέθοδος 3. G. Vasilkova (1948). 5-10 τεμάχια λαχανικών ή φρούτων (περίπου 0,5 κιλά) ή 100-200 γραμμάρια χόρτα (μαρούλι, φρέσκα κρεμμυδάκια) περιχύνονται για αρκετές ώρες με νερό σε γυάλινα βάζα με πλατύ στόμα με αλεσμένα πώματα και ανακινούνται για 10-20 λεπτά. . σε σέικερ ή με το χέρι. Το νερό αποστραγγίζεται, τα αντικείμενα που μελετήθηκαν ξεπλένονται με καθαρό νερό και όλο το νερό πλύσης φιλτράρεται στη συσκευή Goldman. Τα φίλτρα εξετάζονται με καθαρισμό με γλυκερίνη. Μπορείτε να βάψετε τα φίλτρα με 25% διάλυμα Lugol σε γλυκερίνη. Ταυτόχρονα, τα αυγά των ελμινθών γίνονται καφέ και είναι εύκολο να αναγνωριστούν ανάμεσα στους κόκκους αμύλου με μπλε χρώμα. Τα μεγάλα ιζήματα αντιμετωπίζονται σαν χώμα.

Μελέτη επιχρισμάτων από οικιακά είδη και χέρια. Μια βούρτσα κόλλας (ή μια μπατονέτα τυλιγμένη σε ένα κομμάτι νάιλον ύφασμα) βουτηγμένη σε διάλυμα διττανθρακικής σόδας 2% εφαρμόζεται επανειλημμένα πάνω από το αντικείμενο ή τα χέρια που εξετάζονται, και στη συνέχεια ξεπλένεται με το ίδιο διάλυμα που χύνεται σε δοκιμαστικός σωλήνας. Στο εργαστήριο, οι βούρτσες και οι μπατονέτες ξεπλένονται με καθαρό νερό. όλο το νερό πλύσης φυγοκεντρείται και το ίζημα εξετάζεται.

Μέθοδος V. A. Gefter (1960). Είναι πιο αποτελεσματικό να συλλέγετε σκόνη από μαλακό απόθεμα με ηλεκτρική σκούπα συνδεδεμένη με χωνί, το οποίο αποτελείται από 2 αποσπώμενα μέρη: ένα φίλτρο μεμβράνης τοποθετείται στην επιφάνεια του κάτω μέρους καλυμμένο με μεταλλικό ή πλαστικό πλέγμα και ενισχύεται τοποθετώντας την κορυφή του χωνιού. Η συναρμολογημένη χοάνη συνδέεται με τον εύκαμπτο σωλήνα της ηλεκτρικής σκούπας με έναν ελαστικό σωλήνα. Η σκόνη συλλέγεται από το αντικείμενο για 3 λεπτά, μετά τα οποία αφαιρείται το φίλτρο και αντικαθίσταται με ένα νέο. Στο εργαστήριο, τα φίλτρα εξετάζονται με μικροσκόπιο, αφού έχουν καθαριστεί με γλυκερίνη. Εάν το στρώμα σκόνης στο φίλτρο είναι μεγάλο, το ξύνετε και το αντιμετωπίζετε ως κηλίδες ή το αντιμετωπίζετε σαν χώμα.

Ανοσολογικές διαγνωστικές μέθοδοι

Δυνατότητα χρήσης immunol. Οι μέθοδοι διάγνωσης ελμινθασών οφείλονται στην ικανότητα των ελμινθών να παράγουν ενεργά αντιγόνα που επηρεάζουν τα ανοσοεπαρκή κύτταρα του ξενιστή και διεγείρουν την παραγωγή αντισωμάτων. Οι πιο αποτελεσματικές ανοσοδιαγνωστικές μέθοδοι για τις εντερικές ελμινθίες, όταν τα μυστικά και οι εκκρίσεις ελμινθών με αντιγονική δράση, εισέρχονται απευθείας στο αίμα του ξενιστή. Immunol, οι αντιδράσεις χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση ασκαρίασης, τριχίνωσης, φιλαρίασης, σχιστοσωμάτωσης, εχινοκοκκίασης και κυψελοκοκκίασης, κυστικέρκωσης, παραγονιμίασης, του συμπλέγματος συμπτωμάτων προνύμφης μετανάστευσης- (τοξοκαρίαση, αγγειοστρονγύλωση), κ.λπ.) και ενδοδερμική εξέταση. Τα αντιγόνα παρασκευάζονται από προνύμφες και ώριμους έλμινθους χρησιμοποιώντας αλατούχα εκχυλίσματα ομογενοποιημένων φρεσκοκατεψυγμένων ή λυοφιλοποιημένων ιστών, καθώς και διάφορα βιολογικά ενεργά υγρά (υγρό από φλύκταινες εχινόκοκκου, υγρό κοιλότητας ασκαρίδας κ.λπ.). Λόγω του γεγονότος ότι οι έλμινθες έχουν πολύ περίπλοκη αντιγονική δομή και στο αντιγονικό τους μωσαϊκό υπάρχουν συστατικά και μεμονωμένοι καθοριστικοί παράγοντες που αντιδρούν διασταυρούμενα με άλλους τύπους ελμίνθων, βακτηρίων και αντιγόνων ξενιστών, αναπτύσσονται μέθοδοι για τον καθαρισμό τους από μη ειδικά συστατικά. Η κλασμάτωση πραγματοποιείται με διάφορες μεθόδους: διήθηση γέλης σε στήλες με Sephadex, ιοντοανταλλακτική χρωματογραφία σε DEAE-Sephadex, επεξεργασία με οξέα κ.λπ. Τα κλασματικά αντιγόνα έχουν συνήθως υψηλότερη ειδικότητα από τα ολόκληρα εκχυλίσματα, ενώ η δράση τους είναι περίπου η ίδια. Οι ανοσοδιαγνωστικές μέθοδοι χρησιμοποιούνται όλο και περισσότερο. Οι αντιδράσεις χρησιμοποιούνται όχι μόνο για την πληρέστερη και έγκαιρη ανίχνευση των ασθενών, αλλά και για τη μελέτη των εστιών και τη μελέτη της επιδημιολογίας των ελμινθιών.

Ορολογικές αντιδράσεις.Η αντίδραση της μικροκατακρήμνισης σε ζωντανές προνύμφες χρησιμοποιείται για τη διάγνωση νηματωδών - την προφαντατική φάση της ασκαρίασης, της αγκυλοστομίδωσης, της τριχίνωσης. Η αντίδραση γίνεται θετική 5-10 ημέρες μετά τη μόλυνση (ασκαρίαση, αγκυλοστομίδωση) και επιμένει για 90-100 ημέρες. Το αντιγόνο είναι προνύμφες ζωντανών νηματωδών που απομονώνονται από τους ιστούς πειραματικά μολυσμένων πειραματόζωων. Οι επιλεγμένες προνύμφες πλένονται καλά από τις πρωτεΐνες ξενιστή με αποστειρωμένη φιζιόλη, διάλυμα και απεσταγμένο νερό και 10-15 αντίγραφα το καθένα. τοποθετείται με πιπέτα Παστέρ σε αποστειρωμένη γυάλινη τσουλήθρα με πηγάδι. Εφαρμόστε 2-3 σταγόνες από τον ορό δοκιμής, καλύψτε με μια αποστειρωμένη καλυπτρίδα, τοποθετήστε σε έναν υγρό θάλαμο (τρυβλίο Petri με εμποτισμένο διηθητικό χαρτί) και επωάστε για 24-48 ώρες. σε θερμοστάτη στους t° 37°. Με μια θετική αντίδραση κάτω από χαμηλή μεγέθυνση του μικροσκοπίου, γκρι-λευκά, ελαφρώς ιριδίζουσες μάζες ιζημάτων σφαιρικού ή ζιγκ-ζαγκ σχήματος είναι ορατές γύρω από το στόμα και τον πρωκτό των προνυμφών. Η αποτελεσματικότητα της αντίδρασης φτάνει το 85-95%.

Η αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου αναπτύχθηκε από τον V. P. Pashuk (1957) για τη διάγνωση της τριχίνωσης. Η αντίδραση γίνεται θετική τη 2-3η εβδομάδα της νόσου. Η απόδοσή του φτάνει το 80-90%. Το αντιγόνο είναι ένα εκχύλισμα σκόνης από προνύμφες που έχουν ξηρανθεί στους t° 35° απομονωμένο από τους μύες των μολυσμένων ζώων. Σε δοκιμαστικούς σωλήνες διαστ. 0,5 cm ρίχνουμε 0,1 ml από κάθε αραίωση του αντιγόνου και στρώνουμε προσεκτικά πάνω του (ή το κατεβάζουμε προς τα κάτω) ίση ποσότητα από τον ορό δοκιμής για να μην αναμειχθούν τα υγρά. Οι σωλήνες κρατούνται για 30 λεπτά. σε θερμοστάτη στους t ° 37 °, και στη συνέχεια 30-60 λεπτά. σε θερμοκρασία δωματίου. Με μια θετική αντίδραση, εμφανίζεται ένας υπόλευκος λεπτός δακτύλιος στο όριο επαφής μεταξύ του αντιγόνου και του ορού, ο οποίος αποσυντίθεται εύκολα όταν ανακινείται.

Η αντίδραση κατακρήμνισης στο πήκτωμα σύμφωνα με το Ouchterlony (O. Ouchterlony, 1949) στη μικροτροποποίηση των A. I. Gusev και V. S. Tsvetkov προτάθηκε από τους I. A. Ginovker, E. A. Zabozlaeva, A. V. Doronin (1970) για τη διάγνωση των πρώιμων φάσεων ophorasis. Σύμφωνα με προκαταρκτικά στοιχεία, η απόδοσή του είναι 87%. Το αντιγόνο είναι ένα εκχύλισμα ενός ομογενοποιημένου φρεσκοκατεψυγμένου σεξουαλικά ώριμης οπίσθορχης που απομονώθηκε από το συκώτι των γατών.

Αναπτύχθηκε η αντίδραση της έμμεσης αιμοσυγκόλλησης (βλ.) με ένα διαγνωστικό - ένα εναιώρημα επισημοποιημένων και μαυρισμένων ερυθροκυττάρων κριαριού που ευαισθητοποιήθηκαν από το υγρό εχινόκοκκου

LN Stepankovskaya (1972) για τη διάγνωση της εχινόκοκκωσης και της κυψελιδόκκωσης.

Το RNHA με μια διάγνωση φορμαλινοποιημένων ερυθροκυττάρων προβάτου ευαισθητοποιημένων με ένα εκχύλισμα ομογενοποιημένου προϊόντος φρεσκοκατεψυγμένων κυστικερκών ταινίας χοίρου προτάθηκε από τον L. M. Konovalova (1973) για τη διάγνωση της κυστικέρκωσης του εγκεφάλου. είναι αποτελεσματικό στο 85% των περιπτώσεων.

Το RNHA με ascaris diagnosticum προτείνεται για τη διάγνωση της προκαταρκτικής φάσης της ασκαρίασης.

Η αντίδραση στερέωσης του συμπληρώματος (βλ.) τίθεται σύμφωνα με τη συνήθη μέθοδο και χρησιμοποιείται για τη διάγνωση της τριχινώσεως και της κυστικέρκωσης.

Μέθοδος αντισωμάτων φωταύγειας (έμμεση μέθοδος). Αυτή η μέθοδος με απολιπασμένο ξηρό ομογενοποίημα κυστικέρων ταινίας χοίρου ως αντιγόνο, στερεωμένο σε γυάλινη πλάκα, αναπτύχθηκε από την JI. M. Konovalova (1973) για τη διάγνωση της ανθρώπινης κυστικέρκωσης. Η ίδια αντίδραση με gistol, τμήματα προνυμφών Trichinella ως αντιγόνο αναπτύχθηκε για τη διάγνωση της τριχίνωσης.

E. S. Leykina, V. A. Gefter.

Όταν τα αυγά ελμινθών βρίσκονται σε διάφορα περιβαλλοντικά αντικείμενα (χώμα, νερό, λαχανικά κ.λπ.), είναι πάντα απαραίτητο να προσδιορίζεται η βιωσιμότητά τους με την εμφάνιση, τη χρώση με ζωτικές βαφές, την καλλιέργεια υπό βέλτιστες συνθήκες και τη δημιουργία βιολογικού δείγματος, π.χ.

Σίτιση εργαστηριακών ζώων.

Προσδιορισμός της βιωσιμότητας αυγών ή προνυμφών ελμινθών σε εμφάνιση. Τα αυγά ελμινθίου μικροσκοπούνται πρώτα σε χαμηλή μεγέθυνση και μετά σε μεγάλη μεγέθυνση. Σε παραμορφωμένα και νεκρά αυγά ελμινθών, το κέλυφος είναι σχισμένο ή λυγισμένο προς τα μέσα, το πλάσμα είναι θολό, χαλαρό. Στα τεμαχισμένα αυγά, οι σφαίρες διάσπασης (βλαστομερή) είναι άνισου μεγέθους, ακανόνιστου σχήματος και συχνά μετατοπίζονται σε έναν πόλο. Μερικές φορές υπάρχουν μη φυσιολογικά ωάρια, τα οποία, έχοντας εξωτερικές παραμορφώσεις, αναπτύσσονται φυσιολογικά. Στις ζωντανές προνύμφες των ασκαριδών, η λεπτή κοκκοποίηση υπάρχει μόνο στο μεσαίο τμήμα του σώματος, καθώς πεθαίνουν, η κοκκοποίηση εξαπλώνεται σε όλο το σώμα, εμφανίζονται μεγάλα γυαλιστερά υαλώδη κενοτόπια - οι λεγόμενες χορδές μαργαριταριών.

Για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των ώριμων αυγών ασκαριδών, μαστιγίων, σκουληκιών καρφίτσας, οι ενεργές κινήσεις των προνυμφών πρέπει να προκαλούνται με ελαφρά θέρμανση του παρασκευάσματος (σε θερμοκρασία που δεν υπερβαίνει τους 37 ° C). Είναι πιο βολικό να παρατηρήσετε τη βιωσιμότητα των προνυμφών ascaris και whipworm αφού απομονωθούν από το κέλυφος του αυγού πιέζοντας το γυαλί κάλυψης του παρασκευάσματος με βελόνα ή τσιμπιδάκια ανατομής.

Σε επεμβατικές προνύμφες ασκαριδών, παρατηρείται συχνά ένα καπάκι που έχει απολεπιστεί στο άκρο της κεφαλής και σε προνύμφες μαστιγίων που έχουν ολοκληρώσει την ανάπτυξη στο αυγό, σε αυτό το σημείο βρίσκεται ένα στυλεό σε μεγάλη μεγέθυνση. Στις νεκρές προνύμφες των ελμινθών, ανεξάρτητα από τη θέση τους (στο αυγό ή έξω από αυτό), παρατηρείται φθορά του σώματος. Σε αυτή την περίπτωση, η εσωτερική δομή της προνύμφης γίνεται άμορφη ή κοκκώδης και το σώμα γίνεται θολό και αδιαφανές. Τα κενοτόπια βρίσκονται στο σώμα και τα σπασίματα στην επιδερμίδα.

Η βιωσιμότητα των ογκοσφαιρών των τενιιδών (βόειος, χοιρινός ταινία κ.λπ.) καθορίζεται από την κίνηση των εμβρύων όταν εκτίθενται σε πεπτικά ένζυμα. Τα αυγά τοποθετούνται σε ποτήρι ρολογιού με γαστρικό χυμό σκύλου ή τεχνητό χυμό δωδεκαδακτύλου. Η σύνθεση του τελευταίου: παγκρεατίνη 0,5 g, διττανθρακικό νάτριο 0,09 g, απεσταγμένο νερό 5 ml. Τα ποτήρια ρολογιού με αυγά τοποθετούνται σε θερμοστάτη στους 36-38 ° C για 4 ώρες. Σε αυτή την περίπτωση, τα ζωντανά έμβρυα απελευθερώνονται από τα κελύφη. Τα κελύφη των ζωντανών ογκόσφαιρων διαλύονται επίσης σε οξινισμένη πεψίνη και σε αλκαλικό διάλυμα θρυψίνης μετά από 6-8 ώρες σε θερμοστάτη στους 38°C.

Εάν τα αυγά teniid τοποθετηθούν σε διάλυμα θειούχου νατρίου 1% ή σε διάλυμα υποχλωριούχου νατρίου 20%, ή σε διάλυμα χλωρίου νερού 1% στους 36-38 °C, ώριμα και ζωντανά έμβρυα απελευθερώνονται από τις μεμβράνες και δεν αλλάζει για 1 ημέρα. Τα ανώριμα και νεκρά ογκόσφαιρα συρρικνώνονται ή διογκώνονται και αυξάνονται απότομα, και στη συνέχεια «διαλύονται» μέσα σε 10 λεπτά - 2 ώρες. Ζωντανά έμβρυα τενίιδων κινούνται επίσης ενεργά σε ένα μείγμα διαλύματος χλωριούχου νατρίου 1%, διαλύματος διττανθρακικού νατρίου 0,5% και χολής στους 36- 38 °C.

Η βιωσιμότητα των εχινόκοκκων σκόλεξ προσδιορίζεται με χαμηλή θέρμανση. Για να γίνει αυτό, σκόλεξ ή κάψουλες γόνου που πλένονται σε νερό τοποθετούνται σε μια σταγόνα νερού σε μια γυάλινη πλάκα με μια τρύπα, καλύπτονται με καλυπτρίδα και εξετάζονται κάτω από μικροσκόπιο με στάδιο θέρμανσης σε θερμοκρασία 38-39 ° C. Εάν δεν υπάρχει τραπέζι θέρμανσης, το παρασκεύασμα θερμαίνεται χρησιμοποιώντας οποιαδήποτε πηγή θερμότητας. Ταυτόχρονα, οι βιώσιμοι σκολέξοι κινούνται ενεργά, μειώνοντας ή χαλαρώνοντας τα κορόιδα, επιμηκύνοντας και βραχύνοντας την προβοσκίδα. Εάν τα σκόλεξ τοποθετηθούν σε ένα υδατικό διάλυμα φιλικιλενίου 0,5-1% σε θερμοκρασία δωματίου, τότε όλα τα βιώσιμα σκόλεξα θα βγουν γρήγορα και θα πεθάνουν. Μη βιώσιμοι σκολέξοι δεν βγαίνουν.

Η βιωσιμότητα της fasciolia adolescariae που συλλέγεται από φυτά και άλλα αντικείμενα υδάτινων σωμάτων ελέγχεται εξετάζοντάς τα σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα σε φυσιολογικό ορό κάτω από μικροσκόπιο με στάδιο θέρμανσης. Όταν θερμαίνονται, οι προνύμφες τρηματωδών στην κύστη αρχίζουν να κινούνται.

Η βιωσιμότητα των αυγών της ταινίας νάνου καθορίζεται από τη θέση των αγκίστρων στο έμβρυο.

Στα ζωντανά αυγά του πυγμαίου ταινίας, αργές κινήσεις του πρωτοπλάσματος που μοιάζουν με εκκρεμές και σχεδόν ανεπαίσθητες προεκτάσεις και μετατοπίσεις των μυτερών άκρων του πλευρικού ζεύγους αγκίστρων λαμβάνουν χώρα μακριά από το μεσαίο ζεύγος.

Οι συσπάσεις του πρωτοπλάσματος του εμβρύου και των βλαστικών αγκίστρων βοηθούν το έμβρυο να απελευθερωθεί πρώτα από τα κελύφη της ογκόσφαιρας και μετά από το εξωτερικό κέλυφος του αυγού.

Σε ένα ζωντανό αυγό, το διάμεσο ζεύγος και τα πλευρικά ζεύγη αγκιστριών είναι διατεταγμένα παράλληλα· σε ορισμένα αυγά, οι λεπίδες των πλευρικών ζευγών ενώνονται και βρίσκονται σε γωνία μικρότερη από 45° σε σχέση με το μεσαίο ζεύγος αγκιστριών.

Το ετοιμοθάνατο έμβρυο συσπάται σπασμωδικά και σπρώχνει αργά τα άγκιστρα. Στο νεκρό έμβρυο, η κίνηση των αγκίστρων σταματά και είναι διατεταγμένα σε μια αταξία, μερικές φορές τα άγκιστρα πλευρικά του γειτονικού ζεύγους απομακρύνονται σε ορθή, αμβλεία ή οξεία γωνία.

Μερικές φορές παρατηρείται ρυτίδωση του εμβρύου, σχηματισμός κοκκοποίησης. Μια πιο ακριβής μέθοδος βασίζεται στην εμφάνιση κινήσεων της ογκόσφαιρας κατά τη διάρκεια μιας απότομης αλλαγής της θερμοκρασίας: από 5-10 σε 38-40 °C.

Ο προσδιορισμός της βιωσιμότητας των ανώριμων νηματωδών θα πρέπει να μελετηθεί σε έναν υγρό θάλαμο (πιάτα Petri), τοποθετώντας τα αυγά ascaris σε διάλυμα φορμαλίνης 3% παρασκευασμένο σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε θερμοκρασία 24-30 ° C, αυγά μαστιγίου σε 3% διάλυμα υδροχλωρικού οξέος σε θερμοκρασία 30-35 °C, αυγά σκουληκιών σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε θερμοκρασία 37 °C. Τα πιάτα Petri πρέπει να ανοίγονται 1-3 φορές την εβδομάδα για καλύτερο αερισμό και να υγραίνεται ξανά το διηθητικό χαρτί με καθαρό νερό.

Οι παρατηρήσεις της ανάπτυξης αυγών ελμινθών πραγματοποιούνται τουλάχιστον 2 φορές την εβδομάδα. Η απουσία σημείων ανάπτυξης μέσα σε 2-3 μήνες υποδηλώνει τη μη βιωσιμότητά τους. Τα σημάδια της ανάπτυξης των αυγών ελμινθών είναι πρώτα τα στάδια σύνθλιψης, η διαίρεση του περιεχομένου του αυγού σε ξεχωριστά βλαστομερή. Κατά τη διάρκεια της πρώτης ημέρας, αναπτύσσονται έως και 16 βλαστομερή, τα οποία περνούν στο δεύτερο στάδιο - μόρουλας κ.λπ.

Τα αυγά αγκυλόστομων καλλιεργούνται σε γυάλινο κύλινδρο (50 cm ύψος και 7 cm διάμετρος) κλειστό με πώμα. Ένα μείγμα ίσων όγκων αποστειρωμένης άμμου, ξυλάνθρακα και περιττωμάτων με αυγά αγκυλόστομου, αραιωμένο με νερό σε ημι-υγρή σύσταση, χύνεται προσεκτικά στον πυθμένα του κυλίνδρου χρησιμοποιώντας έναν γυάλινο σωλήνα. Κατά τη διάρκεια 1-2 ημερών εγκατάστασής τους στο σκοτάδι σε θερμοκρασία 25-30 ° C, οι ραβδιτοειδείς προνύμφες εκκολάπτονται από τα αυγά και μετά από 5-7 ημέρες γίνονται ήδη νηματώδεις: οι προνύμφες σέρνονται στα τοιχώματα του κυλίνδρου, όπου είναι ορατά ακόμη και με γυμνό μάτι. Τα αυγά τρηματωδών που αναπτύσσονται φυσικά στο νερό, όπως οπιστόρχη, διφυλλοβοτριίδη, φασιόλη κ.λπ., τοποθετούνται σε ένα ποτήρι ρολογιού, σε ένα πιάτο Petri ή σε άλλο δοχείο, χύνεται ένα μικρό στρώμα συνηθισμένου νερού. Κατά την καλλιέργεια αυγών fasciola, θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι αναπτύσσονται πιο γρήγορα στο σκοτάδι, ενώ το miracidium σχηματίζεται σε ζωντανά αυγά σε θερμοκρασία 22-24 ° C σε 9-12 ημέρες. Όταν γίνεται μικροσκόπηση αναπτυσσόμενων ωαρίων τρηματωδών, οι κινήσεις του miracidium είναι καθαρά ορατές. Το Fasciola miracidium αναδύεται από τα κελύφη των αυγών μόνο στο φως. Κατά την καλλιέργεια, το νερό αλλάζει μετά από 2-3 ημέρες.

Οι προνύμφες αγκυλόστομων και το στρογγυλοειδή καλλιεργούνται σε άγαρ σε τρυβλίο Petri με ζωικό κάρβουνο. Αφού βρεθούν σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 26-30 ° C για 5-6 ημέρες, οι προνύμφες απλώθηκαν πάνω από το άγαρ, αφήνοντας πίσω τους μια διαδρομή βακτηρίων (μέθοδος Fülleborn).

Method of Harada and Mori (1955). 7 ml απεσταγμένου νερού προστίθενται σε δοκιμαστικούς σωλήνες τοποθετημένους σε σχάρα. Πάρτε 0,5 g περιττωμάτων με ένα ξύλινο ραβδί και κάντε ένα επίχρισμα σε διηθητικό χαρτί (15X150 mm) 5 cm από την αριστερή άκρη (αυτή η εργασία πραγματοποιείται σε ένα φύλλο χαρτιού για την προστασία της επιφάνειας του εργαστηριακού τραπεζιού). Στη συνέχεια, η λωρίδα με το επίχρισμα εισάγεται στο σωληνάριο έτσι ώστε το αριστερό άκρο που είναι απαλλαγμένο από το επίχρισμα να φτάσει στο κάτω μέρος του σωλήνα. Το πάνω άκρο καλύπτεται με ένα κομμάτι σελοφάν και τυλίγεται σφιχτά με μια ελαστική ταινία. Στον δοκιμαστικό σωλήνα γράψτε τον αριθμό και το επώνυμο του υποκειμένου. Σε αυτή την κατάσταση, τα σωληνάρια αποθηκεύονται για 8-10 ημέρες σε θερμοκρασία 28 °C. Για να μελετήσετε την καλλιέργεια, αφαιρέστε και αφαιρέστε το κάλυμμα από σελοφάν και αφαιρέστε μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού με τσιμπιδάκια. Θα πρέπει να ληφθεί μέριμνα σε αυτή την περίπτωση, καθώς ένας μικρός αριθμός μολυσματικών προνυμφών μπορεί να μετακινηθεί στο πάνω άκρο του διηθητικού χαρτιού ή στο τοίχωμα του δοκιμαστικού σωλήνα και να διεισδύσει κάτω από την επιφάνεια του σελοφάν.

Οι σωλήνες τοποθετούνται σε λουτρό ζεστού νερού στους 50°C για 15 λεπτά, μετά τα οποία τα περιεχόμενα ανακινούνται και χύνονται γρήγορα σε ένα σωλήνα 15 mL για να καθιζάνουν οι προνύμφες. Μετά τη φυγοκέντρηση, το υπερκείμενο αφαιρείται και το ίζημα μεταφέρεται σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα, καλυμμένη με καλυπτρίδα και μικροσκόπιο υπό χαμηλή μεγέθυνση.

Για τη διαφορική διάγνωση των νηματικών προνυμφών, είναι απαραίτητο να χρησιμοποιηθούν τα δεδομένα που παρουσιάζονται στον Πίνακα. 13.

Μέθοδοι χρώσης αυγών και προνυμφών ελμινθών. Οι νεκροί ιστοί στις περισσότερες περιπτώσεις αντιλαμβάνονται τα χρώματα πιο γρήγορα από τους ζωντανούς. Αυτά τα χαρακτηριστικά χρησιμοποιούνται στην ελμινθολογία για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών και των προνυμφών των ελμινθών. Ωστόσο, σε ορισμένες περιπτώσεις, ορισμένα χρώματα γίνονται καλύτερα αντιληπτά από τους ζωντανούς ιστούς παρά από τους νεκρούς.

Πίνακας 13. Διαφορική διάγνωση νηματωδών προνυμφών των A.duodenale, N.americanus, Strongyloides stercoralis, Trichostrongylus spp.

Για τη διαφορική αναγνώριση ζωντανών και νεκρών αυγών και προνυμφών, χρησιμοποιούνται οι ακόλουθες βαφές και μέθοδοι.

Η λευκοβάση μπλε του μεθυλενίου χρησιμοποιείται για τη χρώση ζωντανών και νεκρών ιστών. Ένα ζωντανό κύτταρο ή ιστός μειώνει το μπλε του μεθυλενίου σε άχρωμη λευκοβάση· ο νεκρός ιστός δεν έχει αυτή την ικανότητα και επομένως αποκτά χρώμα.

Για το χρωματισμό των αυγών Ascaris, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μπλε του μεθυλενίου σε διάλυμα γαλακτικού οξέος με καυστικό αλκάλιο (μπλε του μεθυλενίου 0,05 g, καυστική σόδα 0,5 g, γαλακτικό οξύ 15 ml). Τα ζωντανά αυγά δεν αντιλαμβάνονται το χρώμα, τα έμβρυα των νεκρών αυγών γίνονται μπλε.

Η μέθοδος χρώσης δεν εφαρμόζεται σε ανώριμα αυγά στρογγυλού σκώληκα και μαστιγίου. το χρωματισμένο κέλυφος λερώνει, και επομένως δεν είναι ορατό εάν το γεννητικό κύτταρο μέσα στο ωάριο έχει λερωθεί.

Οι προνύμφες Ascaris χρωματίζονται με ένα βασικό διάλυμα μπλε χρώματος μπριγιάν-κρεσυλίου σε συγκέντρωση 1:10 000 ως εξής: μια σταγόνα υγρού με αυγά ascaris και μια σταγόνα από το βασικό διάλυμα βαφής εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα. Το παρασκεύασμα καλύπτεται με καλυπτρίδα, η οποία πιέζεται σφιχτά στο αντικείμενο με ελαφρύ χτύπημα με βελόνα ανατομής. Στο μικροσκόπιο παρατηρείται ο αριθμός των εκκολαφθέντων προνυμφών και ο βαθμός χρώσης τους και μετά το ίδιο σκεύασμα επανεξετάζεται μετά από 2-3 ώρες.Μόνο οι απαραμόρφωτες προνύμφες που δεν έχουν χρωματιστεί για 2 ώρες θεωρούνται ζωντανές. το κέλυφος σπάει (μερικώς ή πλήρως).

Ενδείκνυται η δυνατότητα χρώσης παρασκευασμάτων με διάλυμα ιωδίου για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών των πτηνών ασκαριδίας. Στην περίπτωση αυτή χρησιμοποιείται ως χρωστική ουσία αλκοολικό διάλυμα ιωδίου 5%. Όταν εφαρμόζεται στο φάρμακο, τα έμβρυα των νεκρών ωαρίων ασκαριδών γίνονται πορτοκαλί μέσα σε 1-3 δευτερόλεπτα. Νεκρά αυγά οπίσθορχης και ογκόσφαιρες ταινίας βοοειδών χρωματίζονται με διάλυμα κυανού τολουιδίνης (1:1000) και νεκρές ογκόσφαιρες ταινίας βοοειδών χρωματίζονται με διάλυμα μπλε κρεζυλίου (1:10.000). Ταυτόχρονα, τα έμβρυα και το κέλυφος τόσο των νεκρών όσο και των ζωντανών αυγών αποκτούν χρώμα. Επομένως, μετά τη χρώση, τα αυγά και οι ογκόσφαιρες πλένονται σε καθαρό νερό και βάφονται επιπλέον με σαφρανίνη (αραιωμένη 1:10.000 με διάλυμα αλκοόλης 10%). Το οινόπνευμα αφαιρεί τη βαφή από τα κελύφη και η σαφρανίνη τους δίνει ένα κόκκινο χρώμα. Ως αποτέλεσμα, τα ζωντανά αυγά βάφονται κόκκινα, το έμβρυο των νεκρών αυγών είναι μπλε και το κέλυφος παραμένει κόκκινο. Νεκρά έμβρυα ογκόσφαιρων βοοειδούς ταινίας γρήγορα, μέσα σε λίγα λεπτά, βάφονται έντονο κόκκινο ή ροζ με σαφρανίνη ή μπλε με μπλε διαμάντι-κρεσυλίου σε αραίωση 1:4000 ή με καρμίνη indigo σε αραίωση 1:1000-1: 2000.

Τα ζωντανά έμβρυα δεν αλλάζουν υπό την επίδραση αυτών των χρωμάτων ακόμη και μετά από 2-7 ώρες.

Για να προσδιορίσετε τη βιωσιμότητα των αυγών της ταινίας πυγμαίου, συνιστάται η χρήση των ακόλουθων χρωμάτων: 1) λαμπρό μπλε κρεζίλ (1: 8000) - μετά από 1 ώρα, η ογκόσφαιρα των νεκρών αυγών είναι ιδιαίτερα έντονα χρωματισμένη, η οποία ξεχωρίζει έντονα σε ένα χλωμό ή άχρωμο φόντο του υπόλοιπου αυγού? 2) σαφρανίνη: σε αραίωση 1:8000 όταν εκτίθεται για 2 ώρες και 1:5000 για 3-5 ώρες. 3) Διάλυμα 50% πυρογαλικού οξέος σε αραίωση 1:2 ​​- όταν εκτίθεται για 1 ώρα σε θερμοκρασία 29-30 ° C (όσο χαμηλότερη είναι η θερμοκρασία, τόσο μεγαλύτερη είναι η διαδικασία χρώσης).

Τα ζωντανά πλεροκεροειδή του πλατιού ταινίας χρωματίζονται πολύ καλά με ένα υδατικό διάλυμα (1:1000) ουδέτερου στόματος για 5-20 λεπτά. Για να αποκτήσετε ένα επίμονο ροζ χρώμα που δεν εξαφανίζεται μέσα σε 5 ημέρες και δεν επηρεάζει την κινητικότητα των πλεροκεροειδών, συνήθως αρκούν 10 λεπτά. Ο βαθμός του χρώματος ελέγχεται με την προβολή των προνυμφών σε καθαρό ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, για το οποίο τα πλεροκερκοοειδή αφαιρούνται περιοδικά από το χρώμα. Συνιστάται η χρήση μπλε του μεθυλενίου για τη χρώση των νεκρών πλεροκερκοειδών.

Οι R.E. Chobanov et al. (1986) πρότειναν μια μέθοδο για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών και των προνυμφών ελμινθών χρησιμοποιώντας τη χρωστική ουσία rubrin που λαμβάνεται από την καλλιέργεια του μύκητα Peniciliium rubrum ως βαφής. Για να το κάνετε αυτό, χρησιμοποιήστε ένα υδατικό διάλυμα βαφής 3%.

Η διαδικασία του χρωματισμού των αυγών και των προνυμφών ολοκληρώνεται μετά από 1,5 ώρα.Τα μη βιώσιμα αυγά σκουληκιών, βοοειδών και νάνων ταινιών, αγκυλοστομιδίων, τριχοστρονυγυλιδίων αποκτούν έντονο ροζ χρώμα, οι προνύμφες των αγκυλοστομιδίων και των τριχοστρονυγυλιδίων γίνονται κόκκινα. Ένα λιγότερο φωτεινό χρώμα παρατηρείται στα αυγά των ασκαρίδων και των μαστιγίων, καθώς, ξεχωρίζοντας από τα έντερα, έχουν ήδη ένα σκούρο καφέ χρώμα: Τα βιώσιμα αυγά και οι προνύμφες δεν λερώνονται.

Φυσικοχημικές μέθοδοι για τη διέγερση της απελευθέρωσης miracdia από αυγά τρηματωδών. Οι μέθοδοι αναπτύχθηκαν από τους S.M. German και S.A. Beer (1984) για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών οπισθορχίας και δικοκηλίου με έκθεση των αυγών στο μέσο αντίδρασης. Αν είναι ζωντανοί, βγαίνει το miracidium. Οι μέθοδοι βασίζονται στη φυσικοχημική ενεργοποίηση του αδένα εκκόλαψης miracidium και στη διέγερση της κινητικής δραστηριότητας της προνύμφης. Η διέγερση επιτυγχάνεται με την έκθεση των αυγών τρεματοδών σε ένα ειδικό μέσο αντίδρασης σε συνδυασμό με διαδοχικές μεθόδους - δημιουργία διαφοράς θερμοκρασίας, ξήρανση εναιωρήματος αυγών, έκθεση σε ασθενές ρεύμα υγρού στη δοκιμαστική σταγόνα, που συμβάλλουν στη μαζική απελευθέρωση των miracidia από αυγά.

Προσδιορισμός της βιωσιμότητας των αυγών οπίστορα με τη μέθοδο του Herman, Beer. Ένα εναιώρημα αυγών σε νερό (βρύση, καθιζάνει) προψύχεται στους 10-12 ° C. Όλες οι επόμενες εργασίες πραγματοποιούνται σε θερμοκρασία δωματίου (18-22 °C). Μία σταγόνα (περίπου 0,05 ml) ενός εναιωρήματος που περιέχει 100-400 αυγά προστίθεται σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες τοποθετούνται σε ένα ράφι για 5-10 λεπτά για να καθιζάνουν τα αυγά. Στη συνέχεια, με μια στενή λωρίδα διηθητικού χαρτιού, αναρροφάται προσεκτικά η περίσσεια νερού μέχρι να αφαιρεθεί εντελώς. 2 σταγόνες του μέσου προστίθενται στον δοκιμαστικό σωλήνα, ανακινούνται, το περιεχόμενο μεταφέρεται με μια πιπέτα σε μια γυάλινη πλάκα και αφήνεται για 5-10 λεπτά, ανακινώντας ελαφρά (ή τοποθετείται κάτω από πιστολάκι μαλλιών) για να δημιουργηθούν ασθενή ρεύματα υγρού στο πτώση της αναστολής υπό μελέτη. Αυτή η επέμβαση, η οποία μιμείται την εντερική περισταλτικότητα ενός μαλακίου, σας επιτρέπει να ενεργοποιήσετε την απελευθέρωση των miracidia. Μετά από αυτό, 2 ακόμη σταγόνες του μέσου προστίθενται στο εναιώρημα και στη συνέχεια το παρασκεύασμα εξετάζεται μικροσκοπικά χρησιμοποιώντας ένα συμβατικό μικροσκόπιο φωτός (Χ200). Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, τα αυγά με βιώσιμα miracidia θα πρέπει να ανοίξουν το καπάκι, ενώ η προνύμφη αναδύεται ενεργά στο περιβάλλον. Λόγω της παρουσίας αιθανόλης σε αυτό, το miracidium ακινητοποιείται σε 3-5 λεπτά και στη συνέχεια βάφεται με μια χρωστική ουσία στο μέσο. Ως αποτέλεσμα, τα miracidia ανιχνεύονται και μετρώνται εύκολα.

Παρασκευή του μέσου αντίδρασης. Το μέσο παρασκευάζεται σε ρυθμιστικό διάλυμα 0,05 Μ Tris-HCi υπό βέλτιστες συνθήκες ρΗ 8,0-9,5. Προστίθεται αιθανόλη στο ρυθμιστικό διάλυμα έως και 10-13% και μια βαφή (σαφρανίνη, μπλε του μεθυλενίου και άλλα που λειτουργούν εντός του εύρους pH) έως ότου το υγρό χρωματιστεί ελαφρώς (για παράδειγμα, για τη σαφρανίνη η τελική συγκέντρωσή του θα είναι 1:50.000). Μπορείτε να χρησιμοποιήσετε ένα άλλο ρυθμιστικό διάλυμα που λειτουργεί στην περιοχή αλκαλικού pH, όπως φωσφορικό 0,05 M (pH 8,5). Επομένως, το μέσο περιέχει 96% αιθανόλη - 12 μέρη. βαφή (μητρικό διάλυμα) - 1-10 μέρη. 0,05 M tris-HC! ρυθμιστικό διάλυμα (pH 8,5-9,5) - έως 100 μέρη. Παράδειγμα μέσου: 12 μέρη αιθανόλης 96%, 1 μέρος κορεσμένου διαλύματος σαφρανίνης, το υπόλοιπο έως 100 μέρη - ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl 0,05 M, pH 9,5.

Προσδιορισμός της βιωσιμότητας αυγών δικοκηλίου με τη μέθοδο των Herman, Beer, Stratan. Μια σταγόνα εναιωρήματος που περιέχει 100-150 αυγά τρηματωδών τοποθετείται σε σωλήνα φυγοκέντρησης για 1-2 λεπτά για να καθιζάνουν τα αυγά. Στη συνέχεια, το υγρό στεγνώνει προσεκτικά με μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού. Προσθέστε 1-2 σταγόνες από το μέσο αντίδρασης με μια πιπέτα Pasteur και επωάστε σε υδατόλουτρο στους 28-30 °C για 2-3 λεπτά. Σύνθεση του μέσου: 6 μέρη βουτανόλης, 94 μέρη διαλύματος χλωριούχου νατρίου 0,4% ή διαλύματος χλωριούχου καλίου 0,3% σε απεσταγμένο νερό. Τα αυγά στο μέσο μεταφέρονται με μια πιπέτα σε μια γυάλινη πλάκα και αφήνονται για 1,5-2 ώρες σε θερμοκρασία δωματίου (18-22 ° C), ενώ κάθε 25-30 λεπτά (καθώς στεγνώνει) προσθέτουμε 1-2 σταγόνες (0,05 ml) διάλυμα βουτανόλης σε απεσταγμένο νερό. Μετά από αυτό, το παρασκεύασμα υποβάλλεται σε μικροσκόπιο σε μεγέθυνση 100-200 φορές. Η βιωσιμότητα καθορίζεται από τον αριθμό των ανοιγμένων αυγών με απελευθερωμένα miracidia. Η βουτανόλη διεισδύει μέσα από τους πόρους του κελύφους του αυγού, φτάνει στα miracidia και τα ενεργοποιεί. Η επώαση σε έντονη θερμοκρασία ενισχύει αυτή τη διαδικασία. Η βουτανόλη σε συγκέντρωση 3-7% είναι επιζήμια για το miracidium που έχει αναδυθεί από το αυγό. Η μεταφορά ενός εναιωρήματος αυγών από ένα δοκιμαστικό σωλήνα σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα επιτρέπει, τη στιγμή που το miracidium εξέρχεται (μετά από 30-40 λεπτά), να μειωθεί η συγκέντρωση της βουτανόλης λόγω της εξάτμισης σε ένα ασφαλές επίπεδο (1,5-0,5%). Η παρουσία χλωριούχου νατρίου στο μέσο σε συγκέντρωση 0,1-0,5% (ή χλωριούχου καλίου σε συγκέντρωση 0,05-0,4%) καθορίζει τη δραστηριότητα του απελευθερωμένου μιρασιδίου. Σε αντίθεση με τα μικρά διαφανή αυγά του οπίσθορχ, τα αυγά του δικροκήλου έχουν σκουρόχρωμο κέλυφος· έχουν ένα καθαρά ορατό καπάκι, το οποίο είναι ανοιχτό μετά την απελευθέρωση του miracidium. Ως εκ τούτου, η βιωσιμότητα των αυγών δικοκηλίου αξιολογείται πιο εύκολα με την καταμέτρηση των αυγών που έχουν ανοίξει, παρά με τη χρώση και την καταμέτρηση των miracidia.

Μέθοδος φωταύγειας για τη μελέτη αυγών και προνυμφών ελμινθών.

Για πρώτη φορά στην ελμινθολογική πρακτική, οι μέθοδοι μικροσκοπίας φωταύγειας εφαρμόστηκαν το 1955. Αναφέρθηκε ότι η μικροσκοπία φωταύγειας καθιστά δυνατή τη διαφοροποίηση ζωντανών και νεκρών αντικειμένων χωρίς να καταστρέφεται το αυγό. Για τον φθορισμό, δεν χρησιμοποιήθηκαν ακτίνες UV, αλλά το μπλε-ιώδες τμήμα του ορατού φωτός, με ένα συμβατικό μικροσκόπιο και γυάλινες πλάκες. ένα ειδικό σετ έγχρωμων φίλτρων χρησιμοποιήθηκε για το φωτιστικό OI-18.

Διαπιστώθηκε ότι τα ζωντανά και τα νεκρά αυγά στρογγυλών σκουληκιών, καρφιών, πυγμαίων ταινιών, βοοειδών ταινίας, πλατύς ταινίας και άλλων ελμινθών φωτίζουν διαφορετικά. Αυτό το φαινόμενο παρατηρείται τόσο κατά τη διάρκεια της πρωτογενούς φωταύγειας χωρίς τη χρήση χρωστικών, όσο και όταν χρωματίζεται με φθοριόχρωμα (ακριδίνη πορτοκαλί, κοριφωσφίνη, πριμουλίνη, αουρολίνη, θειική βερλερίνη, τριφλαβίνη, ριβανόλη, κινακρίνη κ.λπ.).

Τα άβαφα ζωντανά αυγά στρογγυλών σκουληκιών λάμπουν έντονο πράσινο με κιτρινωπή απόχρωση. Στα νεκρά αυγά, το κέλυφος εκπέμπει πράσινο φως πολύ πιο φωτεινό από το σκούρο πράσινο εμβρυϊκό. στα αυγά στρογγυλών σκουληκιών με προνύμφη εμφανίζεται μόνο το κέλυφος, ενώ στα νεκρά τόσο το κέλυφος όσο και η προνύμφη είναι έντονο κίτρινο.

Ζωντανά αυγά καρφιών και πυγμαίων ταινιών χωρίς χρωματισμό και χωρίς τμηματοποίηση εκπέμπουν ένα πρασινοκίτρινο φως. στα νεκρά αυγά, το κέλυφος φωτίζει έντονα με φόντο μια σκούρα πράσινη εμβρυϊκή μάζα. Με δευτερεύουσα φωταύγεια (όταν χρωματίζεται με πορτοκαλί ακριδίνης σε αραίωση 1:10 OOO και 1:50 OOO από 30 λεπτά έως 2 ώρες), το κέλυφος των ζωντανών και νεκρών νηματωδών, τρεματωδών και κεστωδών φωτίζει διαφορετικά.

Το κέλυφος των ζωντανών και νεκρών Ascaris lumbricoides, Toxocara leonina, Enterobius vermicularis, Hymenolepis nana, H.fraterna, H. diminuta, T.saginatus, D.latum γίνεται πορτοκαλοκόκκινο. Έμβρυα ζωντανής Ασκ. lumbricoides, T.leonina, H.diminuta, D.latum και ογκόσφαιρες της ταινίας βοοειδών φωτοβολούν σε θαμπό σκούρο πράσινο ή γκριζοπράσινο χρώμα. Τα νεκρά έμβρυα αυτών των αυγών ελμινθών εκπέμπουν ένα «φλεγόμενο» πορτοκαλοκόκκινο φως. Ζωντανές προνύμφες και τοξοκάρες (κελύφη αυγών) εκπέμπουν ένα θαμπό γκριζοπράσινο φως και όταν πεθαίνουν, το χρώμα αλλάζει από το άκρο του κεφαλιού σε ένα «φλεγόμενο» ανοιχτό πράσινο, μετά σε κίτρινο, πορτοκαλί και τέλος σε έντονο πορτοκαλί.

Όταν χρωματίζονται με φθορόχρωμα - coryphosphyllum, primulin - σε νεκρά αυγά ascarids και whipworms, παρατηρείται μια λάμψη από λιλά-κίτρινο έως χαλκό-κόκκινο. Τα βιώσιμα αυγά δεν φωτίζουν, αλλά γίνονται σκούρα πράσινα. Τα ζωντανά αυγά των τρεματωδών Paragonimus westermani και Clonorchis sinensis δεν φωτίζουν μετά τη χρώση με πορτοκαλί ακριδίνης, ενώ τα νεκρά αυγά εκπέμπουν ένα κιτρινωπό πράσινο φως.

Η μέθοδος φωταύγειας μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των προνυμφών ελμινθών. Έτσι, φθοροχρωματισμένες με διάλυμα ακριδίνης πορτοκαλί (1:2000) προνύμφες στρογγυλικού, λάμψη rhabdita: ζωντανό - πράσινο (με απόχρωση), νεκρό - φωτεινό πορτοκαλί φως. Οι ζωντανές προνύμφες της Trichinella δεν λάμπουν ούτε δίνουν αδύναμη λάμψη όταν υποβάλλονται σε επεξεργασία για 10 λεπτά με διαλύματα ισοθειοκυανικής φλουορεσκεΐνης, αυραμίνης κ.λπ. Οι νεκρές προνύμφες που έχουν φθοριοποιηθεί (σε συγκέντρωση 1:5000) δίνουν φωτεινή λάμψη.

Τα ζωντανά miracidia που έχουν αναδυθεί από το κέλυφος εκπέμπουν ένα αμυδρό γαλαζωπό φως με μια ελάχιστα αισθητή ανοιχτό κίτρινη στεφάνη από βλεφαρίδες, αλλά 10-15 λεπτά μετά το θάνατο εμφανίζονται ως ένα έντονο «φλεγόμενο» ανοιχτό πράσινο και στη συνέχεια πορτοκαλοκόκκινο φως.