Ελμινθολογικές μέθοδοι. Έρευνα για την εντεροβίαση και την τενιίδωση

Για την ανίχνευση θραυσμάτων ελμινθών, τα κόπρανα παρατηρούνται γυμνά, στη συνέχεια αναμιγνύονται με νερό και εξετάζονται σε μικρές μερίδες σε ένα τρυβλίο Petri σε σκούρο φόντο. Όλα τα ύποπτα σωματίδια τοποθετούνται σε μια γυάλινη διαφάνεια σε μια σταγόνα νερού και εξετάζονται κάτω από ένα μεγεθυντικό φακό. Μπορείτε να τοποθετήσετε την ημερήσια μερίδα σε κύλινδρο με προσθήκη 5-10 φορές μεγαλύτερη ποσότητα νερού. Μετά την ανάδευση, το δοχείο αφήνεται μέχρι την πλήρη καθίζηση των αιωρούμενων σωματιδίων. Το επιφανειακό στρώμα του υγρού στραγγίζεται και χύνεται καθαρό νερό. Το πλυμένο ίζημα παρατηρείται σε μικρές μερίδες με γυμνό μάτι ή κάτω από ένα μεγεθυντικό φακό. Για την ανίχνευση αυγών χρησιμοποιούνται μικροσκοπικές μέθοδοι εξέτασης.

Μητρική μέθοδος επιχρίσματος. Μια μικρή ποσότητα περιττωμάτων από διαφορετικά σημεία του τμήματος δοκιμής λειοτριβείται σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50%, ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου ή νερό. Το μείγμα καλύπτεται με καλυπτρίδα και παρατηρείται κάτω από μικροσκόπιο.

Η αιωρούμενη μέθοδος του Fülleborn. Ένα μέρος των κοπράνων αναμιγνύεται με 20 μέρη κορεσμένου διαλύματος χλωριούχου νατρίου (ειδικό βάρος 1,18), που προστίθενται σε μικρές μερίδες. Τα μεγάλα σωματίδια που έχουν επιπλεύσει στην επιφάνεια αφαιρούνται αμέσως και το μείγμα αφήνεται για 45 λεπτά. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, τα αυγά ελμινθών, με χαμηλότερο ειδικό βάρος από το διάλυμα χλωριούχου νατρίου, επιπλέουν στην επιφάνεια. Το επιφανειακό φιλμ αφαιρείται με συρμάτινο βρόχο διαμέτρου περίπου 1 cm και μεταφέρεται σε γυάλινη πλάκα για εξέταση στο μικροσκόπιο.

μέθοδος Kalantaryan. Η αποτελεσματικότητα της μεθόδου επίπλευσης αυξάνεται με την αντικατάσταση του χλωριούχου νατρίου με ένα κορεσμένο διάλυμα νιτρικού νατρίου. Σε αυτή την περίπτωση, το μείγμα διατηρείται για 10-15 λεπτά.

Η επιφανειακή μεμβράνη που σχηματίζεται μετά την καθίζηση ενός μείγματος περιττωμάτων με διάλυμα χλωριούχου νατρίου ή νιτρικού νατρίου μπορεί επίσης να αφαιρεθεί με μια γυάλινη πλάκα. Για το σκοπό αυτό, ένα βάζο γεμάτο μέχρι το χείλος με μείγμα περιττωμάτων με διάλυμα αλατιού καλύπτεται με γυάλινη πλάκα έτσι ώστε η κάτω επιφάνειά του να έρχεται σε επαφή με το υγρό. Μετά την καθίζηση, το γυαλί αφαιρείται και, γυρίζοντας γρήγορα προς τα πάνω την επιφάνεια στην οποία βρίσκεται το φιλμ, εξετάζεται με μικροσκόπιο.

Το ξύσιμο των σπειροειδών πτυχών (για τον εντοπισμό των αυγών των σκουληκιών καρφίτσας και των ογκόσφαιρων της ταινίας βοοειδών) γίνεται το πρωί πριν την κατασκευή της τουαλέτας. Μια ξύλινη σπάτουλα βουτηγμένη σε νερό ή διάλυμα γλυκερίνης 50% χρησιμοποιείται για να ξύσει γύρω από τον πρωκτό. Το προκύπτον υλικό μεταφέρεται σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα σε μια σταγόνα νερού ή διάλυμα γλυκερίνης 50% και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Η σπάτουλα μπορεί να αντικατασταθεί με μια βρεγμένη μπατονέτα, η οποία χρησιμοποιείται για να σκουπίσει την περιπρωκτική περιοχή και στη συνέχεια ξεπλύνετε καλά με νερό. Το νερό φυγοκεντρείται και το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

Μέθοδος Bermann (για ανίχνευση προνυμφών). Ένα μεταλλικό πλέγμα επικαλυμμένο με 5-6 g περιττωμάτων στερεώνεται σε μια γυάλινη χοάνη που εισάγεται σε βάση. Ένας ελαστικός σωλήνας με σφιγκτήρα τοποθετείται στο κάτω άκρο της χοάνης. Το χωνί γεμίζει με νερό που θερμαίνεται στους t ° 50 °, έτσι ώστε το κάτω μέρος του πλέγματος με τα κόπρανα να έρχεται σε επαφή με το νερό. Οι προνύμφες κινούνται ενεργά στο νερό και συσσωρεύονται στο κάτω μέρος του ελαστικού σωλήνα. Μετά από 4 ώρες, το υγρό χαμηλώνεται σε σωλήνες φυγοκέντρησης, φυγοκεντρείται και το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

Ανάλυση πτυέλων, ρινικής βλέννας και κολπικών εκκρίσεων για την ανίχνευση αυγών του πνευμονικού φλοκώδους paragonimus, προνύμφες ασκαρίδων και αγκυλόστομου, αυγών σκώληκα, θραυσμάτων εχινόκοκκου κύστης. Το εξεταζόμενο τμήμα της βλέννας (εκκρίσεις) επαλείφεται σε γυαλί και παρατηρείται μακροσκοπικά σε ασπρόμαυρο φόντο και στη συνέχεια κάτω από μικροσκόπιο. Μπορείτε να προσθέσετε ένα διάλυμα αντιφορμίνης 25% στο υλικό δοκιμής, να ανακινήσετε καλά και να κρατήσετε για 1-1,5 ώρα για να διαλυθεί η βλέννα. Το μίγμα φυγοκεντρείται και το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο.

Ανάλυση δωδεκαδακτυλικού και γαστρικού υγρού για την ανίχνευση αυγών ήπατος, αγκυλόστομα, προνύμφες Strongyloides. Και τα τρία μέρη του περιεχομένου του δωδεκαδακτύλου που λαμβάνεται με φυγοκεντρούνται και το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Επίσης εξερευνήστε και.

Μελέτη ιστών. Για την αναγνώριση των προνυμφών Trichinella, κομμάτια του μυ που έχει υποβληθεί σε βιοψία χωρίζονται προσεκτικά σε ίνες, συμπιέζονται ανάμεσα σε γυαλιά συμπιεστή (παχιά γυαλιά με βίδες) και εξετάζονται κάτω από μικροσκόπιο με σκιασμένο φως. Για τον εντοπισμό των κυστικέρων, οι μύες στρωματοποιούνται με βελόνες ανατομής, το απομονωμένο κυστίδιο καθαρίζεται από τον περιβάλλοντα ιστό, συμπιέζεται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες και εξετάζεται κάτω από μεγεθυντικό φακό.

Εξέταση αίματος (για την ανίχνευση προνυμφών filariae). Μια κρεμασμένη σταγόνα εξετάζεται σε μια ολίσθηση κάλυψης με βαζελίνη. Μπορείτε να αναμίξετε 0,3 ml αίματος με 10 φορές την ποσότητα ενός διαλύματος 3%. Το μίγμα φυγοκεντρείται και το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Για τον εμπλουτισμό των παρασκευασμάτων, προστίθενται 3 ml διαλύματος φορμαλίνης 2% ή πενταπλάσια ποσότητα υγρού που αποτελείται από 95 ml διαλύματος φορμαλίνης 5%, 5 ml οξικού οξέος και 2 ml πυκνού διαλύματος αλκοόλης αιματοξυλίνης. σε 1 ml φλεβικού αίματος. Το μίγμα φυγοκεντρείται, το ίζημα πλένεται με απεσταγμένο νερό και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Για τη διαφοροποίηση διαφορετικών τύπων φιλαριών, εξετάζονται επιχρίσματα που βάφονται σύμφωνα με τη μέθοδο Giemsa-Romanovsky.

Μέθοδοι ανοσολογικής διάγνωσης. Εφαρμόστε (συγκόλληση, στερέωση συμπληρώματος) και αλλεργικά διαγνωστικά τεστ (βλ.) με από τον αντίστοιχο τύπο ελμινθίου.

Ελμινθολογικές μέθοδοι έρευνας. Ρύζι. Αυγά ελμινθίου. 1-10 - αυγά στρογγυλών σκουληκιών (νηματώδη): 1 - 3 - στρογγυλά σκουλήκια (1 - γονιμοποιημένο αυγό, 2 - γονιμοποιημένο αυγό χωρίς κέλυφος πρωτεΐνης, 3 - μη γονιμοποιημένο αυγό). 4 - στρογγυλό σκουλήκι της γάτας. 5 - σαρκοφάγα στρογγυλά σκουλήκια. 5 - pinworms? 7 - μαστίγιο? 8 - tominx; 9 - αγκυλόστομος? 10 - tricho-strongylide. 11-15 - αυγά ταινίας (κεστόδες): 11 - ταινία βοοειδών. 12 - νάνος ταινίας? 13 - ταινία αρουραίων? 14 - ταινία κολοκύθα? 15 - φαρδιά κορδέλα. 16 - 24 - αυγά φουσκωτών (τρεματωδών): 16 - τρεματώδη (σχιστοσώματα) Ιαπωνικά. 17 - τρεματώδη (σχιστοσώματα) ούρα - σεξουαλική. 18 - τρηματώδεις (σχιστοσώματα) Munson; 19 - τρεματώδη (παρογώνυμα) πνευμονικά. 20 - trematodes (opisthorchis) Siberian (αιλουροειδές). 21 - trematodes (clonorchis) κινέζικα. 22 - εντερικοί τρηματώδεις (metagonimus); 23 - τρηματώδεις (fasciolas) του ήπατος. 24 - λογχοειδή τρεματώδη (δικροκήλιο).

Μια αποτελεσματική και βολική μέθοδος ελμινθολογικής έρευνας είναι μελέτη παχύρρευστου κατά Κάτω, η ουσία του οποίου είναι η ανίχνευση αυγών ελμινθών σε ένα παχύ επίχρισμα περιττωμάτων, διαυγασμένα με γλυκερίνη και χρωματισμένα με πράσινο μαλαχίτη. Η σύνθεση του μείγματος Kato είναι 6 ml υδατικού διαλύματος πράσινου μαλαχίτη 3%, 500 ml γλυκερίνης, 500 ml διαλύματος φαινόλης 6%. Το διάλυμα είναι σταθερό και μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία δωματίου. Για την προετοιμασία των παρασκευασμάτων, κομμάτια περιττωμάτων σε μέγεθος μπιζελιού εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα, καλύπτονται με μια μεμβράνη υδρόφιλου σελοφάν που έχει ωριμάσει σε μείγμα Kato για 24 ώρες και πιέζονται στο γυαλί για να κατανεμηθεί ομοιόμορφα το υλικό. Τα επιχρίσματα διαυγασμένα για 40-60 λεπτά εξετάζονται μικροσκοπικά. Τα ανιχνευμένα αυγά έλμινθου μετρώνται και η υπαγωγή τους στο είδος προσδιορίζεται από μορφολογικά χαρακτηριστικά. Η μέθοδος επιτρέπει να αποκαλυφθούν τα αυγά των ασκαρίδων, μαστιγίων, κεστωδών, τρεματωδών, σε μικρότερο βαθμό - αγκυλόστομος και πυγμαίος ταινίας.

Επίσης χρησιμοποιείται ευρέως μεθόδους εμπλουτισμού. Η αρχή των μεθόδων επίπλευσης είναι η εναιώρηση των κοπράνων σε αλατούχο διάλυμα, το οποίο έχει μεγαλύτερη σχετική πυκνότητα σε σύγκριση με τα αυγά ελμινθών, με αποτέλεσμα να επιπλέουν στην επιφάνεια. Τα περιεχόμενα της επιφανειακής μεμβράνης εξετάζονται σε μικροσκόπιο. Ως εμπλουτιστικά μείγματα, χρησιμοποιούνται διαλύματα: επιτραπέζιο αλάτι - 400 g σε 1 λίτρο νερού (σχετική πυκνότητα σύμφωνα με το Fülleborn -1,18). νιτρικό νάτριο - 1 kg σε 1 λίτρο νερού (σχετική πυκνότητα σύμφωνα με Kalantaryan-1,38), νιτρικό νάτριο - 900 g και νιτρικό κάλιο - 400 g σε 1 λίτρο νερού (σχετική πυκνότητα σύμφωνα με Brudastov και Krasnonos-1,48). βρασμένο και κρυωμένο.
Για έρευνα, 5-10 g περιττωμάτων προστίθενται σε ένα ποτήρι ή φαγεντιανή, 100-200 ml αλατούχου διαλύματος προστίθενται σε αυτό και αναμειγνύονται καλά. Στη συνέχεια, τα μεγάλα σωματίδια που έχουν βγει στην επιφάνεια αφαιρούνται με μια ξύλινη σπάτουλα ή μια σέσουλα από χαρτί ή χαρτόνι και μια φαρδιά γυάλινη πλάκα εφαρμόζεται αμέσως στην επιφανειακή μεμβράνη έτσι ώστε το αλατούχο διάλυμα και η γυάλινη πλάκα να έρχονται σε πλήρη επαφή. Μετά από 30-40 λεπτά καθίζησης του μείγματος, αφαιρείται η γυάλινη πλάκα, τοποθετείται στο μικροσκόπιο με το φιλμ προς τα πάνω και εξετάζεται προσεκτικά ολόκληρη η επιφάνεια. Για να αποφύγετε το στέγνωμα, μπορείτε να προσθέσετε 2-3 σταγόνες από ένα διάλυμα γλυκερίνης 50%. Το επιφανειακό φιλμ μπορεί επίσης να αφαιρεθεί με συρμάτινο βρόχο. Η αποτελεσματικότητα των μεθόδων επίπλευσης αυξάνεται καθώς αυξάνεται η σχετική πυκνότητα των διαλυμάτων αλάτων. Χρησιμοποιώντας αυτές τις μεθόδους, είναι δυνατός ο εντοπισμός αυγών νηματωδών, κεστωδών και τρεματωδών.

Για την ανίχνευση αυγών στα κόπρανα, χρησιμοποιείται η μέθοδος καθίζησης Krasilnikov.. Τα κόπρανα αναμιγνύονται με διάλυμα απορρυπαντικού 1% (σκόνη πλυσίματος Lotos κ.λπ.) σε αναλογία 1:10 μέχρι να σχηματιστεί ένα εναιώρημα. Υπό την επίδραση του απορρυπαντικού διαλύονται διάφορα συστατικά των περιττωμάτων (πρωτεΐνες, λίπη, στοιχεία ιστού). Μετά από 30 λεπτά, τα περιεχόμενα του σωλήνα ανακινούνται για 1-2 λεπτά και στη συνέχεια φυγοκεντρούνται για 5 λεπτά. Τα παρασκευάσματα παρασκευάζονται από το ίζημα και εξετάζονται σε μικροσκόπιο.
Σε συνθήκες πεδίου, καθώς και κατά τη διάρκεια μαζικών ερευνών του πληθυσμού για προσβολή ελμινθών, είναι βολικό να χρησιμοποιείται η μέθοδος παχύρρευστης επίχρισης Kato. Σε σταθερές συνθήκες, κατά την εξέταση ασθενών, είναι προτιμότερο να χρησιμοποιούνται οι πιο αποτελεσματικές μέθοδοι επίπλευσης. Όταν χρησιμοποιείτε αυτές τις μεθόδους κατά τη διάρκεια της μικροσκοπίας, συνιστάται να μετράτε τα αυγά που βρίσκονται στο παρασκεύασμα. Με την επιφύλαξη του τυπικού βάρους ή όγκου που λαμβάνεται για τη μελέτη των περιττωμάτων (για παράδειγμα, 1 κουταλάκι του γλυκού ή κουταλιά της σούπας) και ενός σταθερού ενιαίου όγκου αλατούχων διαλυμάτων, μπορεί κανείς να κρίνει χονδρικά την ένταση των εισβολών. Αυτό το ποσοτικό αρχείο μπορεί να είναι χρήσιμο για την τεκμηρίωση της συνταγογραφούμενης θεραπείας και την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας της αποπαρασίτωσης. Επιπλέον, άλλες πιο ακριβείς ποσοτικές μέθοδοι, ιδίως η μέθοδος Stoll, μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τον προσδιορισμό της έντασης της μόλυνσης.

Για τη διάγνωση της τενιαρύγνωσης και της εντεροβίασηςεφαρμόστε τη μέθοδο έρευνας των περιπρωκτικών-ορθικών ξύσεων. Μια ξύλινη σπάτουλα εμποτισμένη σε διάλυμα γλυκερίνης 50% χρησιμοποιείται για να ξύσει τις περιπρωκτικές πτυχές το πρωί πριν από την αφόδευση γύρω από τον πρωκτό και το κάτω μέρος του ορθού. Το προκύπτον υλικό, που καθαρίζεται με μια σπάτουλα από την άκρη του καλύμματος, τοποθετείται σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50%, καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Μπορείτε επίσης να εξετάσετε μια λωρίδα ταινίας κυτταρίνης, η οποία πιέζεται πρώτα με μια κολλητική πλευρά στις διανυστικές πτυχές, στη συνέχεια τοποθετείται σε μια γυάλινη πλάκα και υποβάλλεται σε μικροσκόπιο.

Ανίχνευση προνυμφών νηματωδών στα κόπρανα με τη μέθοδο Berman. Η μέθοδος βασίζεται στη θερμοτροπική ιδιότητα των προνυμφών. Για έρευνα, λαμβάνεται 1 κουταλιά της σούπας περιττώματα, τοποθετούνται σε μεταλλικό πλέγμα ή πλέγμα πολλών στρωμάτων γάζας σε συρμάτινο πλαίσιο. Το πλέγμα είναι εγκατεστημένο σε μια χοάνη στερεωμένη σε τρίποδο. Ένας λαστιχένιος σωλήνας με σφιγκτήρα ενώνει το χωνί. Ανυψώνοντας το πλέγμα, το χωνί γεμίζει με νερό (θερμοκρασία +40°...+50°C) ώστε το κάτω μέρος του πλέγματος να βυθιστεί σε νερό. Οι προνύμφες από τα κόπρανα μεταναστεύουν ενεργά σε ζεστό νερό και, καθιζάνοντας, συσσωρεύονται στο κάτω μέρος της χοάνης. Μετά από 2-4 ώρες, ο σφιγκτήρας ανοίγει, το νερό κατεβάζεται σε σωλήνα φυγοκέντρησης και φυγοκεντρείται για 2-3 λεπτά. Στη συνέχεια το υπερκείμενο στραγγίζεται, το ίζημα μεταφέρεται σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα και εξετάζεται με μικροσκόπιο, όπου βρίσκονται κινητές προνύμφες του παθογόνου της στρογγυλοειδίασης.

Μέθοδος Harad και Το Mori επιτρέπει τη διαφοροποίηση των προνυμφών των αγκυλόστομων και των νεκροφόρων. Οι προνύμφες αγκυλόστομων καλλιεργούνται σε διηθητικό χαρτί. Για το σκοπό αυτό, 0,5 g φρέσκων κοπράνων που λαμβάνονται από τον ασθενή το αργότερο 1 ώρα μετά την αφόδευση εφαρμόζονται σε λωρίδες από χαρτί φίλτρου διαστάσεων 12Χ1,5 cm, αφήνοντας και τα δύο άκρα της ταινίας καθαρά. Το ένα άκρο της λωρίδας βυθίζεται σε δοκιμαστικό σωλήνα, το τέταρτο μέρος του οποίου είναι γεμάτο με νερό και το άλλο σφίγγεται με φελλό. Οι σωλήνες τοποθετούνται σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία +26 ... + 28°C. Οι προνύμφες που έχουν αναπτυχθεί από τα αυγά κατεβαίνουν κατά μήκος του διηθητικού χαρτιού και κατακάθονται στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα. Μετά από 5-6 ημέρες, η λωρίδα χαρτιού αφαιρείται και το υγρό που παραμένει στον δοκιμαστικό σωλήνα εξετάζεται με μεγεθυντικό φακό ή φυγοκεντρείται. Το ίζημα που σχηματίζεται κατά τη φυγοκέντρηση εξετάζεται σε μικροσκόπιο φωτός. Όταν χρησιμοποιούνται αντί για δοκιμαστικούς σωλήνες τετραεδρικά γυάλινα βάζα (μέγεθος 15XYX7 cm), στα τοιχώματα των οποίων είναι προσαρτημένες 4 λωρίδες χαρτιού, η αποτελεσματικότητα των αναλύσεων αυξάνεται (GM Maruashvili et al., 1966).

Μέθοδοι έρευνας για τη σχιστοσωμίαση . Εξέταση κοπράνων - ένα μέρος των κοπράνων αναμιγνύεται με 250 ml νερού, φιλτράρεται μέσω 3 στρώσεων γάζας σε ένα κωνικό δοχείο, το οποίο γεμίζει μέχρι την κορυφή με νερό. Μετά από 30 λεπτά, το υγρό στρώμα αποστραγγίζεται, προστίθεται ένα φρέσκο ​​μέρος νερού στο ίζημα. Το ίζημα πλένεται έως ότου ληφθεί ένα διαυγές υπερκείμενο και εξετάζεται μικροσκοπικά.

Μέθοδος προνυμφοσκόπησης - 20-25 g περιττωμάτων τοποθετούνται σε φιάλη Erlenmeyer με γυάλινο σωλήνα συγκολλημένο στο πλάι και πλένονται με νερό βρύσης. Στη συνέχεια η φιάλη καλύπτεται με σκούρο χαρτί, αφήνοντας τον συγκολλημένο γυάλινο σωλήνα στο φως σε θερμοκρασία +25...+30°C. Τα εκκολαφθέντα miracidia συγκεντρώνονται στον μηνίσκο στον πλευρικό σωλήνα, όπου φαίνονται με μεγεθυντικό φακό ή με γυμνό μάτι. Εξέταση ούρων - συλλέγονται 100 ml ούρων μεταξύ 10 π.μ. και 2 μ.μ., ή η ημερήσια δόση καθιζάνει και στη συνέχεια φυγοκεντρείται στις 1500 σ.α.λ. Το προκύπτον ίζημα εφαρμόζεται* σε γυάλινη πλάκα και υποβάλλεται σε μικροσκόπιο. Ο ΠΟΥ συνιστά μια μέθοδο για το φιλτράρισμα ολόκληρου του τμήματος των ούρων. Μετά τη διήθηση, τα φίλτρα υποβάλλονται σε επεξεργασία με φορμαλίνη ή θερμαίνονται (για να σκοτωθούν τα αυγά) και στη συνέχεια υγραίνονται με ένα υδατικό διάλυμα νινυδρίνης. Σε αποξηραμένα παρασκευάσματα, τα έμβρυα αυγών αποκτούν μωβ χρώμα.

Η χρήση ανοσολογικών Οι μέθοδοι έρευνας για τη διάγνωση της σχιστοσωμίασης είναι δύσκολες, καθώς τα ενήλικα σχιστοσωμάτια και τα αυγά τους περιέχουν μεγάλο αριθμό αντιγόνων που προκαλούν ανοσολογικές αποκρίσεις που δεν είναι ειδικές για το είδος (D. Bradley, 1979).

Στη χώρα μας, για τη διαμόρφωση ανοσολογικών αντιδράσεων στην ελμινθίαση, παράγονται μια σειρά από τυπικά διαγνωστικά. Αλλεργικό δερματικό τεστ για εχινόκοκκο και κυψελιδικό, RLA με αντιγόνο εχινόκοκκωσης, RSK στο κρύο, αντίδραση κατακρήμνισης στο κρύο σε διάφορες τροποποιήσεις (κατακρήμνιση δακτυλίου, κατακρήμνιση σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή τριχοειδή αγγεία, που τοποθετούνται με αντιγόνα τριχινώσεως, κυστικέρκωσης και ημικροασκαρίωσης πρακτικά έχουν) εφαρμογές. Τα τυπικά διαγνωστικά για τον καθορισμό των παραπάνω ορολογικών αντιδράσεων γίνονται από επιχειρήσεις που παράγουν βακτηριακά σκευάσματα. Ο κατασκευαστής επισυνάπτει λεπτομερείς οδηγίες σχετικά με τους κανόνες αποθήκευσης, τις ημερομηνίες λήξης του φαρμάκου και οδηγίες για τη χρήση κατάλληλων αντιγόνων με την τεχνική αντίδρασης στα διαγνωστικά που παράγονται.

Τα τελευταία χρόνια, ο κατάλογος των ορολογικών εξετάσεων που χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση της ελμινθίασης έχει διευρυνθεί σημαντικά. Για το σκοπό αυτό, χρησιμοποιούνται οι ακόλουθες αντιδράσεις: RIGA, έμμεσος ανοσοφθορισμός (RIF), ανοσοδιάχυση γέλης (RID), αντιανοσοηλεκτροφόρηση (VIEF), REAMA. Αυτές οι αντιδράσεις μπορούν να χρησιμοποιηθούν για ασκαρίαση, τοξοκαρίαση, τριχίνωση, λοιμώξεις από αγκυλόστομα, φιλαρίαση, εχινοκοκκίαση και κυψελιδική, οπισθορχίαση, σχιστοσωμίαση, παραγονιμίαση. Ωστόσο, για αυτές τις αντιδράσεις στη χώρα μας δεν εκδίδονται τυπικά διαγνωστικά και δεν ρυθμίζεται η τεχνική ρύθμισης τους. Ξεχωριστά εργαστήρια, ως επί το πλείστον επιστημονικά, παρασκευάζουν τα δικά τους ειδικά αντιγόνα και τα χρησιμοποιούν σε διάφορες τροποποιήσεις. Η περιγραφή αυτών των μεθόδων παρουσιάζεται ευρέως στη βιβλιογραφία και δεν είναι αυστηρά ενοποιημένη. Η ερμηνεία των ανοσολογικών δεδομένων θα πρέπει να βασίζεται στη μελέτη της δυναμικής της ανοσολογικής απόκρισης, λαμβάνοντας υπόψη το επίπεδο ειδικότητας και ευαισθησίας κάθε εφαρμοζόμενης ορολογικής δοκιμής. Ως εκ τούτου, κατά τη διάγνωση, καθώς και κατά τη διάρκεια οροεπιδημιολογικών ερευνών του πληθυσμού, συνιστάται η χρήση πολλών από τις πιο ευαίσθητες αντιδράσεις. Από αυτές τις θέσεις, οι αντιδράσεις VIEF και REMA έχουν αποδειχθεί καλά, οι οποίες διακρίνονται από υψηλή ευαισθησία και αρκετά υψηλή ειδικότητα (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negryanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; Ya. Lysenko, 1978, κ.λπ.). Η αποτελεσματικότητα του REAMA έχει δοκιμαστεί στην αμεβίαση, τη λεϊσμανίαση, την τρυπανοσωμίαση και την τοξοπλάσμωση (GA Ermolin, 1980).

Κεφάλαιο III. Διάγνωση ελμινθάσεων και μέθοδοι ελμινθολογικής έρευνας

Είναι απαραίτητο να εξετάζονται για ελμινθίαση όλοι οι ασθενείς που αναζητούν ιατρική βοήθεια και ιδιαίτερα οι ασθενείς που απευθύνονται σε παιδίατρο, παθολόγο και νευροπαθολόγο με παράπονα για φαινόμενα από το γαστρεντερικό, το νευρικό σύστημα και με αναιμία. Εάν ο γιατρός δεν μπορεί πάντα να εφαρμόσει μεθόδους εργαστηριακής έρευνας, τότε κάθε ιατρικός εργαζόμενος που παρέχει βοήθεια σε εξωτερικά ιατρεία ή νοσοκομείο είναι υποχρεωμένος να πάρει συνέντευξη από τον ασθενή σχετικά με την απελευθέρωση ελμινθών από αυτόν.

Εάν υπάρχουν κλινικές ενδείξεις που δίνονται στα σχετικά κεφάλαια, η διάγνωση θα πρέπει να διευκρινιστεί με τη χρήση εργαστηριακών μεθόδων για τη μελέτη των ελμινθασών.

Σε σχέση με την επικράτηση των εντερικών ελμινθιασών, η μελέτη των κοπράνων έχει τη μεγαλύτερη πρακτική σημασία.

Μέθοδοι για τη μελέτη των κοπράνων για ελμινθίαση

Τα κόπρανα παραδίδονται στο εργαστήριο σε καθαρά γυάλινα σκεύη (περίπου ένα τέταρτο του φλιτζανιού περιττωμάτων που λαμβάνονται από διαφορετικά σημεία σε μία μερίδα). κατά τη διάρκεια μιας εξέτασης ρουτίνας, επιτρέπεται η παράδοση κοπράνων στο εργαστήριο σε σπιρτόκουτα ή δημοφιλείς εκτυπώσεις.

Για τον έλεγχο της αποπαρασίτωσης, χορηγείται ολόκληρο το τμήμα των περιττωμάτων που συλλέγονται μετά τη λήψη ενός αντιελμινθικού και καθαρτικού (σε μεγάλα κλειστά γυάλινα βάζα, κουβάδες) (όπως συνταγογραφείται από γιατρό).

Η μικροσκοπική εξέταση των κοπράνων είναι η κύρια στη διάγνωση των εντερικών ελμινθιών. θα πρέπει πάντα να προηγείται μια γενική μακροσκοπική εξέταση των κοπράνων για την ανίχνευση τμημάτων μεγάλων κεστωδών, σκουληκιών καρφιών, στρογγυλών σκουληκιών κ.λπ.

Τα κόπρανα πρέπει να είναι φρέσκα ή σε κονσέρβα (σε διάλυμα φορμαλίνης 5%), καθώς το στέγνωμα αλλάζει δραματικά τη δομή των αυγών. Επιπλέον, όταν στέκονται περιττώματα, τα αυγά ορισμένων ελμινθών (για παράδειγμα, αγκυλόστομα) αναπτύσσονται γρήγορα, γεγονός που καθιστά δύσκολη τη διάγνωση.

Σύμφωνα με τις οδηγίες του Υπουργείου Υγείας της ΕΣΣΔ, είναι απαραίτητο να εξετάζονται τα κόπρανα ταυτόχρονα με τη μέθοδο Fülleborn και ένα εγγενές επίχρισμα.

αυτοφυές επίχρισμα

Εγγενές επίχρισμα: ένα μικρό κομμάτι περιττωμάτων (μέγεθος ενός μπιζελιού), που λαμβάνεται με ένα σπίρτο, ένα γυαλί ή ξύλινο ραβδί από διαφορετικά σημεία της παρεχόμενης μερίδας, λειοτριβείται προσεκτικά σε μια γυάλινη πλάκα σε μια σταγόνα διαλύματος γλυκερίνης 50% ή σε φυσιολογικό ορό ή σε νερό. Καλύψτε με μια καλυπτρίδα, πιέζοντας ελαφρά την τελευταία (με μια βελόνα ανατομής). Το επίχρισμα πρέπει να είναι λεπτό, διαφανές και ομοιόμορφο. Χρησιμοποιείται μόνο ως προσθήκη σε άλλες μεθόδους που δίνουν εμπλουτισμό του φαρμάκου. Θα πρέπει να προβληθούν τουλάχιστον δύο παρασκευάσματα.

Προκειμένου να εντοπιστούν οι προνύμφες των ελμινθών (καθώς και τα αυγά τους), γίνεται ένα εγγενές επίχρισμα ως εξής (σύμφωνα με τον Shulman): 2-3 g περιττωμάτων αναμειγνύονται επιμελώς «στρίβοντας» με μια γυάλινη ράβδο σε ένα γαλάκτωμα με πέντε φορές την ποσότητα καθαρού νερού ή φυσιολογικού ορού. Κατά τη διάρκεια της ανάδευσης, οι προνύμφες συσσωρεύονται στη γυάλινη ράβδο, επομένως, αμέσως μετά το τέλος της ανάδευσης, μια σταγόνα του γαλακτώματος μεταφέρεται γρήγορα με μια γυάλινη ράβδο σε μια γυάλινη πλάκα, καλύπτεται με καλυπτρίδα και εξετάζεται. Ο S. D. Lyubchenko (1936) απέδειξε ότι η μέθοδος στρίψιμο είναι πιο αποτελεσματική από τη μέθοδο του επιχρίσματος, ειδικά όσον αφορά τα αυγά ascaris. Με βάση την εργασία του S. D. Lyubchenko, θεωρούμε σκόπιμο να αντικατασταθεί η μέθοδος επίχρισης με τη μέθοδο του twist.

Μέθοδος Fülleborn

Μέθοδος Fülleborn: 5-10 g περιττωμάτων που λαμβάνονται από διαφορετικά μέρη τοποθετούνται σε ένα βάζο χωρητικότητας 50-100 ml και λειοτριβούνται καλά με μια γυάλινη ή ξύλινη ράβδο σε ένα κορεσμένο διάλυμα χλωριούχου νατρίου (400 g αυτού του άλατος διαλύονται σε 1 λίτρο νερό, θερμαίνεται μέχρι βρασμού και διηθείται μέσα από ένα στρώμα βαμβακιού ή γάζας· το διάλυμα χρησιμοποιείται κρύο: ειδικό βάρος 1.2). Το διάλυμα χύνεται σταδιακά έως ότου ληφθεί ένα ομοιόμορφο εναιώρημα και η συνολική ποσότητα του διαλύματος που χύνεται πρέπει να είναι περίπου 20 φορές η ποσότητα των κοπράνων. Ο Fülleborn συνέστησε τη χρήση ποτηριών τσαγιού για την ανάμειξη των κοπράνων, αλλά είναι πιο βολικό να παρασκευάζεται το εναιώρημα σε βάζα αλοιφής των 50-100 ml, χρησιμοποιώντας δύο βάζα για κάθε ανάλυση (ή σε φλιτζάνια των 100 ml).

Αμέσως μετά την παρασκευή του εναιωρήματος, αφαιρείται από την επιφάνεια με μια σπάτουλα, μια μεταλλική σέσουλα ή ένα κομμάτι καθαρό χαρτί, μεγάλα σωματίδια που έχουν επιπλεύσει στην επιφάνεια (σχηματισμοί φυτών, υπολείμματα άπεπτης τροφής κ.λπ.), μετά την οποία το μείγμα αφήνεται να σταθεί για 1-1,5 ώρα. Μετά από αυτό το χρονικό διάστημα, ολόκληρη η μεμβράνη αφαιρείται από την επιφάνεια του μείγματος αγγίζοντας ένα σύρμα ή βρόχο πλατίνας (επίπεδο) με διάμετρο όχι μεγαλύτερη από 1 cm, λυγισμένο σε ορθή γωνία. Η μεμβράνη ανακινείται σε μια γυάλινη διαφάνεια και καλύπτεται με καλυπτρίδα. Κάτω από κάθε καλυπτρίδα (18x18 mm) τοποθετήστε 3-4 σταγόνες. Συνολικά θα πρέπει να παρασκευαστούν τουλάχιστον 4 παρασκευάσματα (μία καλυπτρίδα για κάθε παρασκεύασμα). Ο βρόχος πυρώνεται στη φωτιά και πλένεται με νερό μετά από κάθε ανάλυση.

Σύμφωνα με τη μέθοδο Fülleborn, τα αυγά όλων των νηματωδών (με εξαίρεση τα μη γονιμοποιημένα αυγά στρογγυλών σκουληκιών) και τα αυγά της ταινίας νάνων εντοπίζονται γρήγορα και εύκολα.

Η μέθοδος Berman χρησιμοποιείται για τη μελέτη των κοπράνων για προνύμφες ελμινθών (με ισχυροειδίαση). Αυτή η μέθοδος έχει ως εξής: 5 g περιττωμάτων σε μεταλλικό πλέγμα (ένα φίλτρο γάλακτος είναι βολικό για αυτό το σκοπό) τοποθετούνται σε γυάλινη χοάνη προσαρτημένη σε τρίποδο. Ένας ελαστικός σωλήνας με σφιγκτήρα τοποθετείται στο κάτω άκρο της χοάνης.

Το πλέγμα με τα κόπρανα ανασηκώνεται και το νερό που έχει θερμανθεί στους 50 ° περίπου χύνεται στη χοάνη έτσι ώστε το κάτω μέρος του πλέγματος με τα κόπρανα να βυθιστεί σε νερό. Οι προνύμφες κινούνται ενεργά στο νερό και συσσωρεύονται στο κάτω μέρος του ελαστικού σωλήνα. Μετά από 2-4 ώρες, ο σφιγκτήρας ανοίγει και το υγρό χαμηλώνεται σε έναν ή δύο φυγοκεντρικούς σωλήνες.

Μετά από φυγοκέντρηση για 1-2 λεπτά, το άνω μέρος του υγρού αποστραγγίζεται γρήγορα και το ίζημα εφαρμόζεται σε σταγόνες σε γυάλινες πλάκες και εξετάζεται κάτω από καλυπτρίδες ή κατανέμεται σε ένα λεπτό στρώμα σε 2-3 μεγάλες πλάκες και στη συνέχεια εξετάζεται χωρίς καλυπτρίδες.

Η μέθοδος Berman χρησιμοποιείται επίσης για την εξέταση του εδάφους για την παρουσία προνυμφών αγκυλόστομων.

Μέθοδος Stoll

Η μέθοδος Stoll χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της έντασης της εισβολής. Ένα μη φυσιολογικό διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου χύνεται σε μια ειδική γυάλινη φιάλη μέχρι το σημάδι των 56 cm 3 και στη συνέχεια προστίθενται περιττώματα έως ότου η στάθμη του υγρού φτάσει τα 60 cm 3, δηλαδή 4 cm 3. Μετά από ανακίνηση με γυάλινες χάντρες, 0,075 ml του μείγματος λαμβάνονται για εξέταση και εξετάζονται κάτω από μία ή δύο συνηθισμένες καλυπτρίδες. Η προκύπτουσα ποσότητα πολλαπλασιάζεται επί 200 για να ληφθεί ο αριθμός των αυγών που περιέχονται σε 1 cm 3 περιττωμάτων.

Μελέτη του περιεχομένου του δωδεκαδακτύλου

Ο χυμός του δωδεκαδακτύλου και η κυστική χολή, που λαμβάνονται με τον συνήθη τρόπο με ανίχνευση (και κυστική χολή και μετά από αντανακλαστικό από τη χοληδόχο κύστη), αναμιγνύονται επιμελώς με ίσο όγκο αιθυλαιθέρα. Το μίγμα φυγοκεντρείται και στη συνέχεια το ίζημα εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Εκτός από το ίζημα, οι νιφάδες που επιπλέουν στο υγρό, οι οποίες μπορεί να περιέχουν αυγά ελμινθών, πρέπει να υποβληθούν σε μικροσκοπική εξέταση. Κατά την εξέταση αυγών ελμινθών γαστρικού υγρού και εμετού, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε την ίδια τεχνική.

Εξέταση του χυμού του δωδεκαδακτύλου και του περιεχομένου του στομάχου θα πρέπει να γίνεται εάν υπάρχουν υποψίες για ελμινθικές παθήσεις του ήπατος, της χοληδόχου κύστης (οπισθορχίαση, απονευρωσίαση, δικροκηλίαση) και του δωδεκαδακτύλου (στρονγυλοειδίαση).

Εξέταση πτυέλων

Τα πτύελα τρίβονται σε γυάλινη πλάκα, καλύπτονται σφιχτά με άλλη γυάλινη πλάκα και εξετάζονται με γυμνό μάτι σε ανοιχτόχρωμο και μαύρο φόντο, καθώς και κάτω από μεγεθυντικό φακό σε μεταδιδόμενο φως. Ξεχωριστά κομμάτια πτυέλων («σκουριασμένες» συσσωρεύσεις, υπολείμματα ιστού κ.λπ.) εφαρμόζονται σε ένα λεπτό στρώμα σε γυάλινη πλάκα, καλύπτονται σφιχτά με καλυπτρίδα και εξετάζονται σε μικροσκόπιο χαμηλής και υψηλής μεγέθυνσης.

α) Για τη διάγνωση της κυστικέρκωσης του δέρματος, του υποδόριου ιστού ή των μυών, εξετάζεται πρώτα με γυμνό μάτι ένα ασηπτικά κομμένο κομμάτι του αντίστοιχου ιστού. Τα τμήματα του ιστού απομακρύνονται με τη βοήθεια βελόνων ανατομής προκειμένου να ανιχνευθεί ένα κυστίδιο ορατό με γυμνό μάτι - ένας κυστικέρκος (φωτογραφία Α). το μήκος του είναι 6-20 mm, το πλάτος είναι 5-10 mm. Όταν βρεθεί μια φυσαλίδα που είναι ύποπτη για κυστικέρκο, συνθλίβεται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες και εξετάζεται στο μικροσκόπιο. Ο κυστικέρκος (Cistycercus cellulosae) προσδιορίζεται από την παρουσία ενός σκόλεξ με τέσσερα κορόιδα και ένα φωτοστέφανο από αγκίστρια (φωτογραφία Β).

Μια φωτογραφία.Α - κυστικέρκοι με σκολέξη στραμμένα προς τα έξω. Β - Κεφάλι χοιρινής ταινίας.

β) Για τη διάγνωση της τριχίνωσης, ένα ασηπτικά κομμένο κομμάτι μυός (δικέφαλος ή γαστροκνήμιος) συνθλίβεται προσεκτικά σε διάλυμα γλυκερίνης 50% στις λεπτότερες ίνες χρησιμοποιώντας βελόνες ανατομής. Οι θρυμματισμένοι μύες συμπιέζονται ανάμεσα σε δύο γυάλινες πλάκες και εξετάζονται σε χαμηλή μεγέθυνση του μικροσκοπίου σε ένα σκοτεινό οπτικό πεδίο. Η εξέταση των μυών για τριχίνωση συνιστάται να γίνεται όχι νωρίτερα από την 8η ημέρα της νόσου. Οι προνύμφες Trichinella βρίσκονται στους μύες σε κουλουριασμένη θέση: περικλείονται σε κάψουλες σε σχήμα λεμονιού.

Μια φωτογραφία. A - Προνύμφες Trichinella στους μύες. Β - Ασβεστοποιημένες κάψουλες Trichinella.

Αφθοροσκόπηση

Τις περισσότερες φορές, η ακτινοσκόπηση χρησιμοποιείται για τη διάγνωση της εχινόκοκκωσης και, λιγότερο συχνά, της κυστικέρκωσης. Οι κυστικέρηδες εντοπίζονται στην ακτινοσκόπηση μόνο μετά από ασβεστοποίηση (σε περιπτώσεις παρατεταμένης νόσου). Τα τελευταία χρόνια, η ακτινοσκόπηση χρησιμοποιείται επίσης για τη διάγνωση της ασκαρίασης τόσο στο πρώιμο στάδιο της προνύμφης όσο και εν μέρει στο εντερικό στάδιο.

Κατά την περίοδο μετανάστευσης των προνυμφών ascaris (και του αγκυλόστομου) στους πνεύμονες, ανιχνεύονται ασταθείς, μερικές φορές πολλαπλές φλεγμονώδεις εστίες. Ταυτόχρονα, στο αίμα εμφανίζεται σημαντική ηωσινοφιλία.

Τα σεξουαλικά ώριμα στρογγυλά σκουλήκια είναι σαφώς ορατά στην ακτινοσκόπηση των εντέρων των προσβεβλημένων ατόμων. Αυτή η μέθοδος, παρά την πολυπλοκότητα και τη δυσκινησία της, θα πρέπει να χρησιμοποιείται ως πρόσθετη μέθοδος για τη διάγνωση της ασκαρίασης σε περιπτώσεις με αρνητική σκατολογική ανάλυση. Σύμφωνα με τον E. S. Geselevich, από τους 180 ασθενείς με ασκαρίαση που εντοπίστηκαν με ακτινοσκόπηση, 54 αυγά ασκαρίδας δεν βρέθηκαν στα κόπρανα (βλ.).

Ελμινθολογικές μέθοδοι έρευνας. Οι μέθοδοι διάγνωσης ελμινθασών χωρίζονται σε άμεσες, με βάση την άμεση ανίχνευση των ίδιων των ελμινθών ή των θραυσμάτων τους, καθώς και των προνυμφών και των αυγών των ελμινθών (μέθοδοι για την εξέταση των κοπράνων, των ούρων, της χολής και του δωδεκαδακτύλου, των πτυέλων, του αίματος και των ιστών, υλικό που λαμβάνεται με απόξεση από την περιπρωκτική περιοχή και τους υπογόνιους χώρους) και έμμεσες, οι οποίες αποκαλύπτουν δευτερογενείς αλλαγές που συμβαίνουν στο ανθρώπινο σώμα ως αποτέλεσμα της δραστηριότητας των ελμινθών (μελέτες μορφολογικής σύνθεσης του αίματος, ανοσολογικές μέθοδοι για τη διάγνωση της ελμινθίασης, ακτινολογικές μελέτες κ.λπ.). Από τις άμεσες μεθόδους, οι πιο κοινές είναι οι κοπρολογικές, οι οποίες χωρίζονται σε μακρο- και μικροελμινθοσκόπηση. Σε ορισμένες περιπτώσεις, χρησιμοποιούνται ειδικές μέθοδοι.

Μέθοδοι έρευνας μακρογελμιτοσκόπησηςπου στοχεύει στην αναζήτηση ελμινθών ή θραυσμάτων τους (scolex, τμήματα, τμήματα του strobila των κεστωδών). Χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση εκείνων των ελμινθιών στις οποίες τα αυγά δεν απεκκρίνονται με τα περιττώματα του ασθενούς ή απεκκρίνονται σε μικρή ποσότητα και όχι πάντα (για παράδειγμα, με εντεροβίαση, σκουλήκια καρφίτσας βρίσκονται στα κόπρανα, με τενιιδώσεις, τμήματα).

Για να ανιχνευθούν σκουλήκια καρφίτσας ή τμήματα κεστωδών στα κόπρανα, τα κόπρανα εξετάζονται με γυμνό μάτι. Για τη διαφορική διάγνωση των τενιιδώσεων, συνιστάται η προβολή των περιττωμάτων αραιωμένων με νερό σε ξεχωριστές μικρές μερίδες σε μαύρες φωτογραφικές κυψέλες ή σε πιάτα Petri σε σκούρο φόντο. Μεγάλοι σχηματισμοί ύποπτοι για θραύσματα ελμινθών εξετάζονται κάτω από μεγεθυντικό φακό ανάμεσα σε δύο γυάλινες διαφάνειες. Εάν, σύμφωνα με κλινικές ενδείξεις, προτείνεται η ανίχνευση μικρών ελμίνθων ή κεφαλών κεστόδων μετά τη θεραπεία, τότε τα ύποπτα σωματίδια εξετάζονται κάτω από μεγεθυντικό φακό σε μια σταγόνα γλυκερίνης και, εάν χρειάζεται, στο μικροσκόπιο.

Μέθοδοι έρευνας μικροελμινθοσκόπησης(ποιοτικά) στοχεύουν στον εντοπισμό αυγών και προνυμφών ελμινθών. Εφαρμόστε τη μέθοδο παχιάς επάλειψης με κάλυμμα σελοφάν κατά Kato. Το μείγμα Kato αποτελείται από 6 ml 3% υδατικό διάλυμα πράσινου μαλαχίτη, 500 mlγλυκερίνη και 500 mlΔιάλυμα φαινόλης 6%. Πιάτα Κάτω (υδροφιλικό σελοφάν κομμένο σε κομμάτια 20΄ 40 mm) βυθίζονται στο 24 ηστο μείγμα Κάτω έτσι ώστε να είναι γειτονικά το ένα με το άλλο (3-5 mlΔιάλυμα Kato για 100 πιάτα). 100 mgΤα κόπρανα εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα, καλύπτονται με μια πλάκα κάλυψης σελοφάν σύμφωνα με το Kato και πιέζονται προς τα κάτω έτσι ώστε τα κόπρανα να αλείφονται στη γυάλινη πλάκα μέσα στην πλάκα σελοφάν. Το επίχρισμα αφήνεται σε θερμοκρασία δωματίου για διαύγαση κατά 40-50°C min,και στη συνέχεια παρατηρήθηκε στο μικροσκόπιο. Την καυτή περίοδο, για να μην στεγνώσει το παρασκεύασμα, τοποθετείται ένα υγρό σφουγγάρι στο πιάτο του παρασκευασμένου σκευάσματος.

Για την πλήρη ανίχνευση όλων των τύπων ελμινθών, πρέπει να χρησιμοποιείται η μέθοδος παχύρρευστης επίχρισης της πλάκας κάλυψης Kato σελοφάν σε συνδυασμό με μία από τις μεθόδους εμπλουτισμού. Οι πιο συνηθισμένες από αυτές είναι η μέθοδος Kalantaryan και η μέθοδος Fülleborn.

Μέθοδος Kalantaryan: σε φιάλες με φαρδύ λαιμό 100 mlανακατεύουμε καλά με μια γυάλινη ράβδο 5 σολκόπρανα, προσθέτοντας σταδιακά ένα κορεσμένο διάλυμα νιτρικού νατρίου (1 κιλόνιτρικό νάτριο ανά 1 μεγάλονερό όταν βράζει) μέχρι το χείλος του ποτηριού. Τα μεγάλα σωματίδια που έχουν επιπλεύσει στην επιφάνεια αφαιρούνται με μια σέσουλα χαρτιού. Μια γυάλινη αντικειμενοφόρος πλάκα εφαρμόζεται στην επιφάνεια του αλατούχου διαλύματος (προστίθεται αλατούχο διάλυμα μέχρι το μείγμα να έρθει σε πλήρη επαφή με τη γυάλινη πλάκα). Μετά το 20-30 ελάχΗ γυάλινη πλάκα αφαιρείται και το φιλμ εξετάζεται με μικροσκόπιο. Ελλείψει αυτού του αλατιού, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε ένα κορεσμένο διάλυμα επιτραπέζιου αλατιού σύμφωνα με το Fholleborn (400 σολαλάτι σε 1 μεγάλοβραστό νερό).

Λόγω του γεγονότος ότι αυγά με μεγάλο ειδικό βάρος (μη γονιμοποιημένα αυγά ασκαριδών, αυγά τρεματωδών και μεγάλων κεστωδών) δεν επιπλέουν, εκτός από την εξέταση του επιφανειακού στρώματος του υγρού, κατά τη χρήση της μεθόδου Fülleborn, είναι απαραίτητο να δείτε 2-4 παρασκευάσματα από το ίζημα στο μικροσκόπιο.

Ειδικές εργαστηριακές μέθοδοι έρευνας για διάφορες ελμινθίασες.

7.7. Μέθοδοι για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών και των προνυμφών των ελμινθών

Η βιωσιμότητα των αυγών ελμινθών καθορίζεται από την εμφάνισή τους, με χρώση με ζωτικής σημασίας βαφές, από καλλιέργεια σε βέλτιστες συνθήκες και από τη δημιουργία βιολογικού δείγματος.

7.7.1. Προσδιορισμός της βιωσιμότητας αυγών ή προνυμφών ελμινθών με εμφάνιση

Τα αυγά ελμινθίου μικροσκοπούνται πρώτα σε χαμηλή μεγέθυνση και μετά σε μεγάλη μεγέθυνση. Σε παραμορφωμένα και νεκρά αυγά ελμινθών, το κέλυφος είναι σχισμένο ή λυγισμένο προς τα μέσα, το πλάσμα είναι θολό, χαλαρό. Στα τεμαχισμένα αυγά, οι σφαίρες διάσπασης (βλαστομερή) είναι άνισου μεγέθους, ακανόνιστου σχήματος και συχνά μετατοπίζονται σε έναν πόλο. Μερικές φορές υπάρχουν μη φυσιολογικά ωάρια, τα οποία, έχοντας εξωτερικές παραμορφώσεις, αναπτύσσονται φυσιολογικά. Στις ζωντανές προνύμφες των στρογγυλών σκουληκιών, η λεπτή κοκκοποίηση υπάρχει μόνο στο μεσαίο μέρος του σώματος, καθώς πεθαίνουν, εξαπλώνεται σε όλο το σώμα, εμφανίζονται μεγάλα γυαλιστερά υαλώδη κενοτόπια, οι λεγόμενες "χορδές από μαργαριτάρια".

Για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των ώριμων αυγών ασκαριδών, μαστιγίων, σκουληκιών καρφίτσας, οι ενεργές κινήσεις των προνυμφών πρέπει να προκαλούνται με ελαφρά θέρμανση του παρασκευάσματος (σε θερμοκρασία που δεν υπερβαίνει τους 37 ° C). Είναι πιο βολικό να παρατηρήσετε τη βιωσιμότητα των προνυμφών ascaris και whipworm αφού απομονωθούν από το κέλυφος του αυγού πιέζοντας το γυαλί κάλυψης του παρασκευάσματος με βελόνα ή τσιμπιδάκια ανατομής.

Σε επεμβατικές προνύμφες ασκαριδών, παρατηρείται συχνά ένα καπάκι που έχει απολεπιστεί στο άκρο της κεφαλής και σε προνύμφες μαστιγίων που έχουν ολοκληρώσει την ανάπτυξη στο αυγό, σε αυτό το σημείο βρίσκεται ένα στυλεό σε μεγάλη μεγέθυνση. Οι νεκρές προνύμφες των ελμινθών, ανεξάρτητα από τη θέση τους (στο αυγό ή έξω από αυτό), παρατηρούν τη φθορά του σώματος. Σε αυτή την περίπτωση, η εσωτερική δομή της προνύμφης γίνεται άμορφη ή κοκκώδης και το σώμα γίνεται θολό και αδιαφανές. Τα κενοτόπια βρίσκονται στο σώμα και τα σπασίματα στην επιδερμίδα.

Η βιωσιμότητα των ογκοσφαιρών των τενιιδών (βόειος, χοιρινός ταινία κ.λπ.) καθορίζεται από την κίνηση των εμβρύων όταν εκτίθενται σε πεπτικά ένζυμα. Τα αυγά τοποθετούνται σε ποτήρι ρολογιού με γαστρικό χυμό σκύλου ή τεχνητό χυμό δωδεκαδακτύλου. Η σύνθεση του τελευταίου: παγκρεατίνη - 0,5 g, διττανθρακικό νάτριο - 0,09 g, απεσταγμένο νερό - 5 ml. Τα ποτήρια ρολογιού με αυγά τοποθετούνται σε θερμοστάτη στους 36 - 38 ° C για 4 ώρες. Σε αυτή την περίπτωση, τα ζωντανά έμβρυα απελευθερώνονται από τις μεμβράνες. Τα κελύφη των ζωντανών ογκόσφαιρων διαλύονται επίσης σε οξινισμένη πεψίνη και σε αλκαλικό διάλυμα θρυψίνης μετά από 6-8 ώρες σε θερμοστάτη στους 38 °C.

Εάν τα αυγά teniid τοποθετηθούν σε διάλυμα θειούχου νατρίου 1% ή σε διάλυμα υποχλωριώδους νατρίου 20%, ή σε διάλυμα χλωριούχου νερού 1% στους 36 - 38 ° C, ώριμα και ζωντανά έμβρυα απελευθερώνονται από τα κελύφη και δεν αλλαγή κατά τη διάρκεια 1 ημέρας. Τα ανώριμα και νεκρά ογκόσφαιρα συρρικνώνονται ή διογκώνονται και μεγεθύνονται δραματικά και στη συνέχεια «διαλύονται» μέσα σε 10 λεπτά έως 2 ώρες. Ζωντανά έμβρυα τενιειδών κινούνται επίσης ενεργά σε ένα μείγμα διαλύματος χλωριούχου νατρίου 1%, διαλύματος διττανθρακικού νατρίου 0,5% και χολής στους 36 - 38 ° C.

Η βιωσιμότητα της fasciolia adolescariae που συλλέγεται από φυτά και άλλα αντικείμενα υδάτινων σωμάτων ελέγχεται εξετάζοντάς τα σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα σε φυσιολογικό ορό κάτω από μικροσκόπιο με στάδιο θέρμανσης. Όταν θερμαίνονται, οι προνύμφες τρηματωδών στην κύστη αρχίζουν να κινούνται.

Για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών του πυγμαίου ταινίας, η μέθοδος της Ionina N.S. είναι η απλούστερη: στα ζωντανά αυγά, το διάμεσο ζεύγος των εμβρυϊκών αγκίστρων είναι είτε παράλληλο με τα πλευρικά, είτε τα τελευταία σχηματίζουν γωνία στη βάση μικρότερης από 45 ° με τη διάμεσο. Στα νεκρά αυγά, τα πλευρικά ζεύγη σχηματίζουν μια γωνία στη βάση με ένα διάμεσο ζεύγος μεγαλύτερη από 45 ° ή τα άγκιστρα είναι τυχαία διασκορπισμένα (η ζευγαρωμένη διάταξη τους χάνεται). μερικές φορές υπάρχει ρυτίδωση του εμβρύου, σχηματισμός κοκκοποίησης. Μια πιο ακριβής μέθοδος βασίζεται στην εμφάνιση των κινήσεων της ογκόσφαιρας κατά τη διάρκεια μιας απότομης αλλαγής της θερμοκρασίας: από 5 - 10 ° σε 38 - 40 ° C.

Ο προσδιορισμός της βιωσιμότητας των ανώριμων αυγών νηματωδών θα πρέπει να μελετηθεί σε έναν υγρό θάλαμο (πιάτα Petri), τοποθετώντας τα αυγά ascaris σε διάλυμα φορμαλίνης 3% παρασκευασμένο σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου σε θερμοκρασία 24 - 30 ° C, αυγά μαστιγίου σε 3 % διάλυμα υδροχλωρικού οξέος σε θερμοκρασία 30 - 35 ° C. αυγά σκώληκα σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου στους 37 °C. Τα πιάτα Petri θα πρέπει να ανοίγουν 1 με 2 φορές την εβδομάδα για καλύτερο αερισμό και να υγραίνουμε ξανά το διηθητικό χαρτί με καθαρό νερό.

Οι παρατηρήσεις της ανάπτυξης αυγών ελμινθών πραγματοποιούνται τουλάχιστον 2 φορές την εβδομάδα. Η απουσία σημείων ανάπτυξης μέσα σε 2-3 μήνες υποδηλώνει τη μη βιωσιμότητά τους. Τα σημάδια της ανάπτυξης των αυγών ελμινθών είναι πρώτα τα στάδια σύνθλιψης, η διαίρεση του περιεχομένου του αυγού σε ξεχωριστά βλαστομερή. Τις πρώτες ημέρες, αναπτύσσονται έως και 16 βλαστομερή, τα οποία περνούν στο δεύτερο στάδιο - μόρουλας κ.λπ.

Τα αυγά αγκυλόστομων καλλιεργούνται σε γυάλινο κύλινδρο (50 cm ύψος και 7 cm διάμετρος) κλειστό με πώμα. Ένα μείγμα ίσων όγκων αποστειρωμένης άμμου, ξυλάνθρακα και περιττωμάτων με αυγά αγκυλόστομου, αραιωμένο με νερό σε ημι-υγρή σύσταση, χύνεται προσεκτικά στον πυθμένα του κυλίνδρου χρησιμοποιώντας έναν γυάλινο σωλήνα. Κατά τη διάρκεια 1 - 2 ημερών εγκατάστασής τους στο σκοτάδι σε θερμοκρασία 25 - 30 ° C, οι ραβδιτοειδείς προνύμφες εκκολάπτονται από τα αυγά και μετά από 5 - 7 ημέρες γίνονται ήδη νηματώδεις: οι προνύμφες σέρνονται στα τοιχώματα του κυλίνδρου, όπου είναι ορατά ακόμη και με γυμνό μάτι.

Τα αυγά τρηματωδών που αναπτύσσονται φυσικά στο νερό, όπως οπιστόρχες, διφυλλοβοθρίδες, φασιόλες και άλλα, τοποθετούνται σε ένα ποτήρι ρολογιού, σε ένα πιάτο Petri ή σε άλλο δοχείο και χύνεται ένα μικρό στρώμα συνηθισμένου νερού. Κατά την καλλιέργεια αυγών fasciola, θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι αναπτύσσονται πιο γρήγορα στο σκοτάδι, ενώ το miracidium σχηματίζεται σε ζωντανά αυγά σε θερμοκρασία 22–24 ° C μετά από 9–12 ημέρες. Όταν γίνεται μικροσκόπηση αναπτυσσόμενων ωαρίων τρηματωδών, οι κινήσεις του miracidium είναι καθαρά ορατές. Το Fasciola miracidium αναδύεται από τα κελύφη των αυγών μόνο στο φως.

Μέθοδος Fulleborn. Οι προνύμφες των αγκυλόστομων και των ισχυροειδών καλλιεργούνται σε άγαρ σε τρυβλίο Petri με ζωικό κάρβουνο. Αφού διατηρηθούν σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 25 - 30 ° C για 5 - 6 ώρες, οι προνύμφες απλώθηκαν πάνω από το άγαρ, αφήνοντας πίσω τους μια διαδρομή βακτηρίων.

Μέθοδος Harada και Mori. 7 ml απεσταγμένου νερού προστίθενται σε δοκιμαστικούς σωλήνες τοποθετημένους σε σχάρα. Πάρτε 0,5 g περιττωμάτων με ένα ξύλινο ραβδί και κάντε ένα επίχρισμα σε διηθητικό χαρτί (15 x 150 mm) 5 cm από το αριστερό άκρο (αυτή η λειτουργία πραγματοποιείται σε ένα φύλλο χαρτιού για να προστατεύσετε την επιφάνεια του εργαστηριακού τραπεζιού). Στη συνέχεια, η λωρίδα με το επίχρισμα εισάγεται στο σωληνάριο έτσι ώστε το αριστερό άκρο που είναι απαλλαγμένο από το επίχρισμα να φτάσει στο κάτω μέρος του σωλήνα. Καλύψτε το πάνω άκρο με ένα κομμάτι σελοφάν και τυλίξτε το σφιχτά με μια ελαστική ταινία. Στον δοκιμαστικό σωλήνα γράψτε τον αριθμό, το όνομα του ατόμου. Σε αυτή την κατάσταση, οι δοκιμαστικοί σωλήνες αποθηκεύονται για 8-10 ημέρες σε θερμοκρασία 28 °C. Για να μελετήσετε τις προνύμφες, αφαιρέστε και αφαιρέστε το κάλυμμα από σελοφάν και αφαιρέστε μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού με τσιμπιδάκια. Θα πρέπει να ληφθεί μέριμνα σε αυτή την περίπτωση, καθώς ένας μικρός αριθμός μολυσματικών προνυμφών μπορεί να μετακινηθεί στο πάνω άκρο του διηθητικού χαρτιού ή στο τοίχωμα του δοκιμαστικού σωλήνα και να διεισδύσει κάτω από την επιφάνεια του σελοφάν.

Οι σωλήνες τοποθετούνται σε λουτρό ζεστού νερού στους 50°C για 15 λεπτά, μετά τα οποία τα περιεχόμενα ανακινούνται και χύνονται γρήγορα σε σωλήνα καθίζησης προνυμφών 15 ml. Μετά τη φυγοκέντρηση, το υπερκείμενο αφαιρείται και το ίζημα μεταφέρεται σε γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα, καλυμμένη με καλυπτρίδα και μικροσκόπιο υπό χαμηλή μεγέθυνση.

Για τη διαφορική διάγνωση των νηματόμορφων προνυμφών, είναι απαραίτητο να χρησιμοποιηθούν τα δεδομένα του Πίνακα 3.

Πίνακας 3

ΔΙΑΦΟΡΙΚΗ ΔΙΑΓΝΩΣΤΙΚΑ ΦΙΛΑΡΙΩΜΕΝΩΝ ΠΡΟΝΥΜΦΩΝ A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, trICHOStrONGYLUS SP.

Προνύμφες	Διαστάσεις	Ιδιαίτερα χαρακτηριστικά
A. duodenale	Μήκος σώματος περίπου 660 μικρά, καπάκι - 720 nm	Η ραβδώσεις του καλύμματος είναι λιγότερο έντονη, η προεξοχή του στόματος είναι λιγότερο αισθητή, το πρόσθιο άκρο του σώματος (αλλά όχι το καπάκι) είναι αμβλύ, η διάμετρος του εντερικού σωλήνα είναι μικρότερη από τον οισοφαγικό βολβό, το ουραίο άκρο είναι αμβλύ
N. americanus	Μήκος σώματος περίπου 590 μm, καπάκι - 660 nm	Το έλυτρο είναι αισθητά ραβδωτό, ειδικά στο ουραίο μέρος του σώματος, η προβολή του στόματος φαίνεται σκοτεινή, το πρόσθιο άκρο του σώματος (αλλά όχι η θήκη) είναι στρογγυλεμένο όπως το στενό άκρο ενός αυγού κοτόπουλου, το πρόσθιο τμήμα του εντέρου Ο σωλήνας έχει τέτοια διάμετρο όπως ο οισοφαγικός βολβός, το ουραίο άκρο είναι έντονα μυτερό
S. stercoralis	Μήκος σώματος περίπου 500 μm	Η προνύμφη χωρίς θήκη, ο οισοφάγος είναι περίπου το ήμισυ του μήκους του σώματος, η ουρά είναι αμβλεία ή διακλαδισμένη
Trichostrongylus sp.	Μήκος σώματος περίπου 750 μικρά	Ο αυλός του εντέρου δεν είναι ίσιος, αλλά ζιγκ-ζαγκ, το ουραίο άκρο είναι στρογγυλεμένο και έχει σχήμα κουμπιού

7.7.2. Μέθοδοι χρώσης αυγών και προνυμφών ελμινθών

Οι νεκροί ιστοί στις περισσότερες περιπτώσεις αντιλαμβάνονται τα χρώματα πιο γρήγορα από τους ζωντανούς. Αυτά τα χαρακτηριστικά χρησιμοποιούνται στην ελμινθολογία για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών και των προνυμφών των ελμινθών. Ωστόσο, σε ορισμένες περιπτώσεις, ορισμένα χρώματα γίνονται καλύτερα αντιληπτά από τους ζωντανούς ιστούς παρά από τους νεκρούς.

Για τον διαφορικό προσδιορισμό ζωντανών και νεκρών αυγών και προνυμφών, χρησιμοποιούνται οι ακόλουθες βαφές και μέθοδοι.

Η λευκοβάση μπλε του μεθυλενίου χρησιμοποιείται συχνά για τη χρώση ζωντανών και νεκρών ιστών. Ένα ζωντανό κύτταρο ή ιστός μειώνει το μπλε του μεθυλενίου σε άχρωμη λευκοβάση· ο νεκρός ιστός δεν έχει αυτή την ικανότητα και επομένως αποκτά χρώμα.

Το κριτήριο για την κατάσταση του αυγού είναι η χρώση του εμβρύου, αλλά όχι το κέλυφος. Αυτή η ικανότητα σχετίζεται με τις συνθήκες θανάτου του αυγού. Σε εκείνες τις περιπτώσεις όπου το ινώδες κέλυφος στο νεκρό αυγό δεν χάνει τις ημιπερατές του ιδιότητες, δεν θα περάσει βαφές, επομένως, το νεκρό έμβρυο δεν θα λερωθεί. Ένα έγχρωμο έμβρυο δείχνει πάντα το θάνατο του αυγού.

Για το χρωματισμό των αυγών Ascaris, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μπλε του μεθυλενίου σε διάλυμα γαλακτικού οξέος με καυστικό αλκάλιο (μπλε του μεθυλενίου 0,05 g, καυστική σόδα 0,5 g, γαλακτικό οξύ - 15 ml). Τα ζωντανά αυγά δεν αντιλαμβάνονται το χρώμα. τα έμβρυα των νεκρών ωαρίων γίνονται μπλε. Οι προνύμφες Ascaris χρωματίζονται με ένα βασικό διάλυμα μπλε χρώματος μπριγιάν-κρεσυλίου σε συγκέντρωση 1:10.000 ως εξής: μια σταγόνα υγρού με αυγά ascaris και μια σταγόνα από το βασικό διάλυμα βαφής εφαρμόζονται σε μια γυάλινη πλάκα. Το παρασκεύασμα καλύπτεται με καλυπτρίδα, η οποία πιέζεται σφιχτά πάνω στη γυάλινη πλάκα με ελαφρύ χτύπημα με βελόνα ανατομής. Στο μικροσκόπιο, παρατηρείται ο αριθμός των εκκολαφθέντων προνυμφών και ο βαθμός χρώσης τους. μετά από την οποία το ίδιο φάρμακο επανεξετάζεται μετά από 2 έως 3 ώρες. Μόνο μη παραμορφωμένες προνύμφες που δεν έχουν χρωματιστεί για 2 ώρες θεωρούνται ζωντανές. Οι νεκρές προνύμφες είτε δεν αναδύονται από τα αυγά, είτε λερώνονται όταν σπάσει το κέλυφος (μερικώς ή πλήρως).

Κατά τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών της ασκαριδίας των πτηνών, είναι δυνατό να χρωματιστούν τα παρασκευάσματα με διάλυμα αλκοόλης 5% ιωδίου. Όταν εφαρμόζεται στο φάρμακο, τα έμβρυα νεκρών αυγών ασκαριδών για 1 - 3 δευτερόλεπτα. είναι βαμμένα πορτοκαλί.

Νεκρά αυγά οπίσθορχης και ογκόσφαιρες ταινίας βοοειδών χρωματίζονται με διάλυμα κυανού τολουιδίνης (1:1000) και νεκρές ογκόσφαιρες ταινίας βοοειδών χρωματίζονται με διάλυμα μπλε κρεζυλίου (1:10000). Ταυτόχρονα, τα έμβρυα και το κέλυφος τόσο των νεκρών όσο και των ζωντανών αυγών αποκτούν χρώμα. Επομένως, μετά τη χρώση, τα αυγά και οι ογκόσφαιρες πλένονται σε καθαρό νερό και βάφονται επιπλέον με σαφρανίνη (σε αραίωση 1:10.000 αλκοόλης, 10°C). Το αλκοόλ αφαιρεί τη βαφή από τα κελύφη και η σαφρανίνη κηλιδώνει κόκκινο. Ως αποτέλεσμα, τα ζωντανά αυγά γίνονται κόκκινα. αυγά με νεκρά έμβρυα - σε μπλε, και το κέλυφος παραμένει κόκκινο. Νεκρά έμβρυα ογκόσφαιρων βοοειδούς ταινίας γρήγορα, μέσα σε λίγα λεπτά, χρωματίζονται έντονο κόκκινο ή ροζ με σαφρανίνη ή μπλε με μπλε κρεζυλίου σε αραίωση 1:4000 ή με καρμίνη indigo σε αραίωση 1:1000 - 1 :2000. Τα ζωντανά έμβρυα δεν αλλάζουν υπό την επίδραση αυτών των χρωμάτων ακόμη και μετά από 2 - 7 ώρες.

Για να προσδιορίσετε τη βιωσιμότητα των αυγών της ταινίας πυγμαίου, συνιστάται η χρήση των ακόλουθων χρωμάτων:

1. Γυαλιστερό κρεασυλικό μπλε (1:8000) - μετά από 1 ώρα, η ογκόσφαιρα των νεκρών αυγών λερώνεται ιδιαίτερα έντονα, η οποία ξεχωρίζει έντονα στο χλωμό ή άχρωμο φόντο του υπόλοιπου αυγού.

2. Safranin (1:8000 για 2 ώρες και 1:5000 για 3 έως 5 ώρες).

3. Διάλυμα 50% πυρογαλικού οξέος σε αραίωση 1:2 ​​- όταν εκτίθεται για 1 ώρα σε θερμοκρασία 29 - 30 ° C (όσο χαμηλότερη είναι η θερμοκρασία, τόσο μεγαλύτερη είναι η διαδικασία χρώσης).

7.7.3. Μέθοδος φωταύγειας για τη μελέτη αυγών και προνυμφών ελμινθών

Το μικροσκόπιο φθορισμού καθιστά δυνατή τη διαφοροποίηση ζωντανών και νεκρών αντικειμένων χωρίς να καταστρέφεται το αυγό. Για τον φθορισμό, δεν χρησιμοποιούνται υπεριώδεις ακτίνες, αλλά το μπλε-ιώδες τμήμα του ορατού φωτός, με συμβατικό μικροσκόπιο και γυάλινες πλάκες. ένα ειδικό σετ έγχρωμων φίλτρων προστίθεται στο φωτιστικό OI-18.

Ζωντανά και νεκρά αυγά στρογγυλών σκουληκιών, σκουληκιών καρφίτσας, πυγμαίων ταινιών, βοοειδών, ταινίας και άλλων ελμινθών φωτίζουν διαφορετικά. Αυτό το φαινόμενο παρατηρείται τόσο κατά τη διάρκεια της πρωτογενούς φωταύγειας χωρίς τη χρήση χρωστικών, όσο και όταν χρωματίζεται με φθοριόχρωμα (ακριδίνη πορτοκαλί, κοριφωσφίνη, πριμουλίνη, αουρολίνη, θειική βερλερίνη, τριφλαβίνη, ριβανόλη, κινακρίνη κ.λπ.).

Τα μη λεκιασμένα, ζωντανά αυγά στρογγυλών σκουληκιών, χωρίς τμήματα, λάμπουν έντονο πράσινο με κιτρινωπή απόχρωση. Στα νεκρά αυγά, το κέλυφος εκπέμπει πράσινο φως πολύ πιο φωτεινό από το σκούρο πράσινο εμβρυϊκό τμήμα. στα αυγά στρογγυλών σκουληκιών με προνύμφη εμφανίζεται μόνο το κέλυφος, ενώ στα νεκρά τόσο το κέλυφος όσο και η προνύμφη είναι έντονο κίτρινο.

Ζωντανά αυγά ακίδων και νάνων ταινιών που δεν έχουν χρωματιστεί και δεν είναι τμηματικά εκπέμπουν ένα πρασινωπό-κίτρινο φως· στα νεκρά αυγά, το κέλυφος φωτίζει έντονα στο φόντο μιας σκούρα πράσινης εμβρυϊκής μάζας.

Με δευτερογενή φωταύγεια (κατά τη χρώση πορτοκαλί ακριδίνης σε αραίωση 1:10000 και 1:50000 από 30 λεπτά έως 2 ώρες), το κέλυφος των ζωντανών και νεκρών νηματωδών, τρεματωδών και κεστωδών φωτίζει διαφορετικά.

Το κέλυφος των ζωντανών και νεκρών αυγών των ασκαριδών, τοξόκαρ, των σκουληκιών καρφίτσας, των πυγμαίων ταινιών, της ταινίας αρουραίων, της ταινίας των ταύρων, των ταυροσκώληκων γίνεται πορτοκαλοκόκκινο. Έμβρυα ζωντανών αυγών ασκαρίδας, τοξασκάρης, ταινίας αρουραίου, πλατιάς ταινίας και ογκόσφαιρας ταινίας βοοειδών φωτοβολούν σε θαμπό σκούρο πράσινο ή γκριζοπράσινο χρώμα. Τα νεκρά έμβρυα των αυγών αυτών των ελμινθών εκπέμπουν ένα "φλεγόμενο" πορτοκαλοκόκκινο χρώμα. Οι ζωντανές προνύμφες και τα τοξόκαρα (κέλυφος αυγών) εκπέμπουν ένα θαμπό γκριζοπράσινο φως, όταν πεθαίνουν, το χρώμα αλλάζει από το άκρο του κεφαλιού σε ένα "φλεγόμενο" ανοιχτό πράσινο, μετά σε κίτρινο, πορτοκαλί και τέλος σε έντονο πορτοκαλί.

Όταν βάφονται με φθορόχρωμα - coryphosphyllum, primulin, νεκρά αυγά ascarids και whipworms δείχνουν μια λάμψη από λιλά-κίτρινο έως χαλκό-κόκκινο. Τα βιώσιμα αυγά δεν φωτίζουν, αλλά γίνονται σκούρα πράσινα.

Τα ζωντανά αυγά τρεματωδών (Paragonimus και Clonorchis) δεν φωτίζουν μετά τη χρώση με πορτοκαλί ακριδίνης και ένα κιτρινοπράσινο χρώμα προέρχεται από νεκρά αυγά.

Η μέθοδος φωταύγειας μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των προνυμφών ελμινθών. Έτσι, φθοροχρωματισμένο με διάλυμα ακριδίνης πορτοκαλί (1:2000) προνύμφες στραγγυλικού, λάμψη rhabdita: ζωντανό - πράσινο (με απόχρωση), νεκρό - φωτεινό πορτοκαλί φως.

Τα ζωντανά miracidia που έχουν αναδυθεί από το κέλυφος εκπέμπουν ένα αμυδρό γαλαζωπό φως με μια ελάχιστα αισθητή ανοιχτό κίτρινη στεφάνη από βλεφαρίδες, αλλά 10-15 λεπτά μετά το θάνατο εμφανίζονται ως ένα έντονο "φλεγόμενο" ανοιχτό πράσινο και στη συνέχεια πορτοκαλοκόκκινο φως.

7.7.4. μέθοδος βιολογικής ανάλυσης

Για παράδειγμα, για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των αυγών ascaris (χοιροί ascaris, άνθρωποι, toxocara, toxascaris κ.λπ.) ανά ζώο (ινδικά χοιρίδια, ποντίκια), χρειάζονται τουλάχιστον 100 - 300 αυγά με ανεπτυγμένη προνύμφη. Τα αυγά Ascaris σε ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου διοχετεύονται με πιπέτα μέσω του στόματος ενός ποντικιού ή ενός ινδικού χοιριδίου. Μετά από 6-7 ημέρες, το ζώο σφάζεται, ανοίγεται και το συκώτι και οι πνεύμονές του εξετάζονται χωριστά για την παρουσία προνυμφών ascaris. Για να γίνει αυτό, το συκώτι και οι πνεύμονες κόβονται σε μικρά κομμάτια με ψαλίδι και εξετάζονται σύμφωνα με τη μέθοδο Berman ή Supryaga (ενότητα 6.1.2).

Εάν τα ζώα είχαν μολυνθεί με ζωντανά επεμβατικά αυγά, τότε σε αυτοψία στο ήπαρ και τους πνεύμονες, εντοπίζονται μεταναστευτικές προνύμφες ασκαρίδων.

Σε περίπτωση μόλυνσης, τα αυγά fasciola στα κόπρανα των εργαστηριακών ζώων μπορούν να ανιχνευθούν σε κουνέλια μετά από 2 μήνες, σε ινδικά χοιρίδια - μετά από 50 ημέρες, σε ποντίκια - μετά από 35-40 ημέρες.

Για ταχύτερη απόκριση, τα πειραματόζωα ανοίγουν μετά από 20-30 ημέρες και το ήπαρ εξετάζεται για την παρουσία νεαρών φασιόλων.

Για να προσδιοριστεί η βιωσιμότητα των αυγών της ταινίας πυγμαίου, συνιστάται επίσης η τροφοδοσία τους σε λευκά ποντίκια που δεν είχαν μολυνθεί προηγουμένως, ακολουθούμενη από αυτοψία των ζώων μετά από 92-96 ώρες και ανίχνευση κυστικεροειδών στις εντερικές λάχνες ή κεστόδων στον εντερικό αυλό.

Για τον προσδιορισμό της βιωσιμότητας των αυγών opisthorchis, συνιστάται μια μέθοδος (German S.M., Beer S.A., 1984), που βασίζεται στη φυσικοχημική ενεργοποίηση του αδένα εκκόλαψης miracidium και στη διέγερση της κινητικής δραστηριότητας της προνύμφης, η οποία οδηγεί στο άνοιγμα του αυγού. καπάκι και την ενεργή απελευθέρωση του miracidium σε πειραματικές συνθήκες.

Ένα εναιώρημα αυγών opisthorchis σε νερό προψύχεται στους 10 - 12 ° C (όλες οι επόμενες εργασίες πραγματοποιούνται σε θερμοκρασία δωματίου 19 - 20 ° C). 1 σταγόνα ενός εναιωρήματος που περιέχει 100-150 αυγά προστίθεται σε ένα σωλήνα φυγοκέντρησης. Ο δοκιμαστικός σωλήνας τοποθετείται σε τρίποδο για 5-10 λεπτά. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, όλα τα αυγά έχουν χρόνο να βυθιστούν στον πάτο. Στη συνέχεια, με μια λωρίδα διηθητικού χαρτιού, αναρροφάται προσεκτικά η περίσσεια νερού και προστίθενται 2 σταγόνες ειδικού μέσου στον δοκιμαστικό σωλήνα. Το μέσο παρασκευάζεται σε ρυθμιστικό διάλυμα Tris-HCl 0,005 Μ. Διάλυμα αιθανόλης 12 - 13% και βαφή (ματζέντα, σαφρανίνη, ηωσίνη, μπλε του μεθυλενίου, κ.λπ.) προστίθενται στο ρυθμιστικό. Ο δοκιμαστικός σωλήνας ανακινείται, το περιεχόμενό του μεταφέρεται με μια πιπέτα σε μια γυάλινη πλάκα και αφήνεται για 10 λεπτά ανακινώντας ελαφρά. Στη συνέχεια προσθέστε 2 σταγόνες από το υποδεικνυόμενο μέσο. Το παρασκεύασμα είναι έτοιμο για μικροσκόπηση κάτω από ένα συμβατικό μικροσκόπιο φωτός σε μεγέθυνση 20x.

Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου, το καπάκι των βιώσιμων προνυμφών ανοίγει και το miracidium εισέρχεται ενεργά στο υποδεικνυόμενο μέσο. Λόγω της παρουσίας αιθανόλης σε αυτό, ακινητοποιούνται μετά από 2-5 λεπτά και μετά βάφονται με βαφή. Μπορούν εύκολα να ανιχνευθούν και να μετρηθούν στο μικροσκόπιο.