Ψευδώς αρνητικό τεστ - έμμεσο τεστ Coombs. Δοκιμή Coombs: άμεση και έμμεση

– μια δοκιμή αντισφαιρίνης που στοχεύει στον εντοπισμό στο Rh-αρνητικό αίμα ατελών αντι-ερυθροκυτταρικών αντισωμάτων στον παράγοντα Rh - μια ειδική πρωτεΐνη που βρίσκεται στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων του Rh-θετικού αίματος. Υπάρχουν δύο τύποι αυτό το τεστ: άμεση – ανίχνευση αντισωμάτων στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, έμμεση – ανίχνευση αντισωμάτων στον ορό του αίματος. Ο άμεσος έλεγχος πραγματοποιείται στη διάγνωση και παρακολούθηση της θεραπείας ασθενειών του αίματος: αιμολυτική αναιμία, αιμολυτική νόσοςνεογέννητα και άλλα. Πραγματοποιείται έμμεση εξέταση για την αξιολόγηση της συμβατότητας του αίματος του δότη και του λήπτη κατά τη μετάγγιση, καθώς και για τον προσδιορισμό της παρουσίας και του κινδύνου σύγκρουσης Rh κατά τον σχεδιασμό και τη διαχείριση της εγκυμοσύνης. Το υλικό για τη δοκιμή Coombs είναι αποξυγονωμένο αίμα, η μελέτη πραγματοποιείται με τη χρήση μεθόδων που βασίζονται στην αντίδραση συγκόλλησης. Κανονικά και τα δύο τεστ δίνουν αρνητικό αποτέλεσμα. Η ανάλυση ολοκληρώνεται εντός μιας ημέρας. Συνολικά, βρέθηκαν 87 διευθύνσεις στη Μόσχα όπου μπορούσε να γίνει αυτή η ανάλυση.

– μια δοκιμή αντισφαιρίνης που στοχεύει στον εντοπισμό στο Rh-αρνητικό αίμα ατελών αντι-ερυθροκυτταρικών αντισωμάτων στον παράγοντα Rh - μια ειδική πρωτεΐνη που βρίσκεται στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων του Rh-θετικού αίματος. Υπάρχουν δύο τύποι αυτής της εξέτασης: άμεση - ανίχνευση αντισωμάτων στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, έμμεση - ανίχνευση αντισωμάτων στον ορό του αίματος. Ο άμεσος έλεγχος διεξάγεται στη διάγνωση και παρακολούθηση της θεραπείας ασθενειών του αίματος: αιμολυτική αναιμία, αιμολυτική νόσος νεογνών και άλλα. Πραγματοποιείται έμμεση εξέταση για την αξιολόγηση της συμβατότητας του αίματος του δότη και του λήπτη κατά τη μετάγγιση, καθώς και για τον προσδιορισμό της παρουσίας και του κινδύνου σύγκρουσης Rh κατά τον σχεδιασμό και τη διαχείριση της εγκυμοσύνης. Το υλικό για τη δοκιμή Coombs είναι το φλεβικό αίμα· η μελέτη πραγματοποιείται με μεθόδους που βασίζονται στην αντίδραση συγκόλλησης. Κανονικά, και οι δύο εξετάσεις δίνουν αρνητικό αποτέλεσμα. Η ανάλυση ολοκληρώνεται εντός μιας ημέρας.

Δοκιμή Coombs – κλινική δοκιμή Rh-αρνητικό αίμα, με στόχο την ανίχνευση αντισωμάτων στον παράγοντα Rh. Το τεστ χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό του κινδύνου ανάπτυξης σύγκρουσης Rh και αιμολυτικών αντιδράσεων. Σε κάθε άτομο, η επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων περιέχει ένα ορισμένο σύνολο αντιγόνων ή συγκολλητογόνων - ενώσεων διαφορετικής φύσης, από την παρουσία ή την απουσία του οποίου κρίνεται η ομάδα αίματος και ο παράγοντας Rh. Υπάρχουν πολλοί τύποι αντιγόνων, μεταξύ των οποίων ιατρική πρακτικήμέγιστος πρακτική σημασίαέχουν συγκολλητογόνα Α και Β, που καθορίζουν την ομάδα αίματος, και συγκολλητογόνο D, που καθορίζει τον παράγοντα Rh. Στο θετικός παράγοντας RhΤα αντιγόνα D ανιχνεύονται στην εξωτερική μεμβράνη των ερυθροκυττάρων, αλλά όχι εάν είναι αρνητικά.

Το τεστ Coombs, που ονομάζεται επίσης τεστ αντισφαιρίνης, στοχεύει στην ανίχνευση ατελών αντισωμάτων κατά των ερυθροκυττάρων στο σύστημα του παράγοντα Rh στο αίμα. Αντισώματα στον παράγοντα Rh - ειδικές ανοσοσφαιρίνες, τα οποία παράγονται σε Rh-αρνητικό αίμα όταν εισέρχονται ερυθροκύτταρα με συγκολλητογόνα D. Αυτό μπορεί να συμβεί όταν το αίμα ενός εμβρύου και μιας εγκύου γυναίκας αναμειγνύεται, κατά τη διάρκεια μεταγγίσεων αίματος που πραγματοποιούνται χωρίς προηγούμενη ομαδοποίηση αίματος. Το τεστ Coombs υπάρχει σε δύο εκδόσεις - άμεση και έμμεση. Κατά την εκτέλεση μιας άμεσης δοκιμής Coombs, ανιχνεύονται αντισώματα συνδεδεμένα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Η μελέτη χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της αιτίας της αιμολυτικής αντίδρασης. Η έμμεση δοκιμή Coombs στοχεύει στην ανίχνευση αντισωμάτων κατά των ερυθροκυττάρων στο πλάσμα του αίματος. Είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί η συμβατότητα του αίματος μεταξύ δότη και λήπτη ή μητέρας και εμβρύου και βοηθά στην πρόληψη της ανάπτυξης σύγκρουσης Rh και της επακόλουθης αιμόλυσης των ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Το αίμα και για τις δύο εκδόσεις του τεστ Coombs λαμβάνεται από φλέβα. Η ανάλυση πραγματοποιείται με συγκόλληση χρησιμοποιώντας ορό αντισφαιρίνης. Τα αποτελέσματα της μελέτης χρησιμοποιούνται στην αιματολογία για τον εντοπισμό των αιτιών των αιμολυτικών αντιδράσεων, στη χειρουργική επέμβαση και την ανάνηψη κατά τη διεξαγωγή μεταγγίσεων αίματος, στη μαιευτική και γυναικολογία κατά την παρακολούθηση της εγκυμοσύνης σε γυναίκες με Rh-αρνητικό αίμα.

Ενδείξεις

Η άμεση δοκιμή Coombs, η οποία ανιχνεύει αντισώματα προσκολλημένα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, συνταγογραφείται για αιμολυτικές αντιδράσεις (καταστροφή ερυθρών αιμοσφαιρίων) ποικίλης προέλευσης. Η μελέτη ενδείκνυται για πρωτοπαθή αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία, αιμολυτική αναιμία μετά τη μετάγγιση, αιμολυτική νόσο του νεογνού, αιμόλυση ερυθροκυττάρων που προκαλείται από αυτοάνοσες, όγκους ή λοιμώδεις νόσους, καθώς και λήψη φάρμακαγια παράδειγμα, κινιδίνη, μεθυλντόπα, προκαϊναμίδη. Το έμμεσο τεστ Coombs, το οποίο προσδιορίζει τα αντισώματα στο πλάσμα του αίματος, χρησιμοποιείται για την πρόληψη της ανάπτυξης σύγκρουσης Rh. Ενδείκνυται για ασθενείς που προετοιμάζονται για μεταγγίσεις αίματος, καθώς και για έγκυες γυναίκες με αρνητικός παράγοντας Rhυπό την προϋπόθεση ότι μελλοντικός πατέραςτο παιδί έχει θετικό παράγοντα Rh.

Για τον προσδιορισμό της συμβατότητας Rh, το τεστ Coombs δεν συνταγογραφείται σε ασθενείς με Rh θετικό αίμα. Σε αυτές τις περιπτώσεις, υπάρχουν ήδη αντιγόνα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων· η παραγωγή αντισωμάτων δεν μπορεί να προκληθεί με μετάγγιση αίματος ή είσοδο εμβρυϊκού αίματος στην κυκλοφορία του αίματος της εγκύου. Επίσης, η μελέτη δεν ενδείκνυται για έγκυες γυναίκες εάν και οι δύο γονείς έχουν αρνητικό παράγοντα Rh - ένα κληρονομικό υπολειπόμενο χαρακτηριστικό. Ένα παιδί σε τέτοια ζευγάρια έχει πάντα Αρνητικό Rh αίμα, μια ανοσολογική σύγκρουση με τη μητέρα είναι αδύνατη. Στο αιμολυτικές παθολογίεςΤο τεστ αντισφαιρίνης δεν χρησιμοποιείται για την παρακολούθηση της επιτυχίας της θεραπείας, καθώς τα αποτελέσματα δεν αντικατοπτρίζουν τη δραστηριότητα της διαδικασίας καταστροφής των ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Ένας περιορισμός του τεστ Coombs είναι η πολυπλοκότητα της ερευνητικής διαδικασίας - προς απόκτηση αξιόπιστα αποτελέσματαείναι απαραίτητο να τηρούνται οι συνθήκες θερμοκρασίας και χρόνου, οι κανόνες για την παρασκευή αντιδραστηρίων και βιοϋλικών. Τα πλεονεκτήματα του τεστ Coombs περιλαμβάνουν το υψηλή ευαισθησία. Στην αιμολυτική αναιμία, τα αποτελέσματα αυτής της εξέτασης παραμένουν θετικά, ακόμη και αν ομαλοποιηθούν τα επίπεδα της αιμοσφαιρίνης, της χολερυθρίνης και των δικτυοερυθροκυττάρων.

Προετοιμασία για ανάλυση και συλλογή υλικού

Το υλικό που χρησιμοποιείται για τη διενέργεια της εξέτασης Coombs είναι το φλεβικό αίμα. Ειδικές απαιτήσειςΔεν υπάρχει χρόνος για τη διαδικασία αιμοληψίας και για την προετοιμασία του ασθενούς. Όπως με κάθε μελέτη, συνιστάται να κάνετε ένα διάλειμμα μετά το φαγητό για τουλάχιστον 4 ώρες και να σταματήσετε το κάπνισμα τα τελευταία 30 λεπτά. σωματική δραστηριότητα, αποφύγει συναισθηματικό στρες. Αξίζει επίσης να συζητήσετε με το γιατρό σας εκ των προτέρων την ανάγκη διακοπής της λήψης φαρμάκων - ορισμένα φάρμακα μπορεί να αλλοιώσουν τα αποτελέσματα της δοκιμής Coombs. Λαμβάνεται αίμα με σύριγγα από ωλένια φλέβα, λιγότερο συχνά από φλέβα και μετά πίσω πλευράβούρτσες Μέσα σε λίγες ώρες, το υλικό παραδίδεται στο εργαστήριο.

Κατά την εκτέλεση μιας άμεσης δοκιμής Coombs, ορός αντισφαιρίνης προστίθεται στον ορό αίματος του ασθενούς. Μετά από κάποιο χρονικό διάστημα, το μείγμα εξετάζεται για την παρουσία συσσωματωμάτων - σχηματίζονται εάν υπάρχουν αντισώματα στα ερυθρά αιμοσφαίρια. Εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό, προσδιορίζεται ο τίτλος συγκόλλησης. Η έμμεση δοκιμή Coombs αποτελείται από περισσότεροστάδια. Πρώτον, τα αντισώματα που υπάρχουν στον ορό στερεώνονται στα εγχυόμενα ερυθρά αιμοσφαίρια κατά τη διάρκεια της επώασης. Στη συνέχεια προστίθεται ορός αντισφαιρίνης στο δείγμα, μετά από κάποιο χρονικό διάστημα προσδιορίζεται η παρουσία και ο τίτλος των συγκολλητικών. Η περίοδος ανάλυσης είναι 1 ημέρα.

Κανονικά αποτελέσματα

Κανονικά, το αποτέλεσμα της άμεσης δοκιμής Coombs είναι αρνητικό (-). Αυτό σημαίνει ότι δεν υπάρχουν αντισώματα που να σχετίζονται με τα ερυθρά αιμοσφαίρια στο αίμα και δεν μπορούν να προκαλέσουν αιμόλυση. Κανονικό αποτέλεσμαΤο έμμεσο τεστ Coombs είναι επίσης αρνητικό (-), δηλαδή δεν υπάρχουν αντισώματα στον παράγοντα Rh στο πλάσμα του αίματος. Κατά την προετοιμασία για μετάγγιση αίματος για τη λήπτρια, αυτό σημαίνει συμβατότητα με το αίμα του δότη· κατά την παρακολούθηση της εγκυμοσύνης, αυτό σημαίνει απουσία ευαισθητοποίησης Rh της μητέρας, χαμηλό κίνδυνο ανάπτυξης ανοσολογικής σύγκρουσης. Φυσιολογικοί παράγοντες, όπως διατροφικές συνήθειες ή σωματική δραστηριότητα, δεν μπορεί να επηρεάσει το αποτέλεσμα της δοκιμής. Επομένως, εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό, είναι απαραίτητη η συμβουλή γιατρού.

Διαγνωστική αξία της ανάλυσης

Ένα θετικό αποτέλεσμα δοκιμής Coombs εκφράζεται ποιοτικά, από (+) έως (++++), ή ποσοτικά, με τίτλους από 1:16 έως 1:256. Ο προσδιορισμός της συγκέντρωσης αντισωμάτων στα ερυθρά αιμοσφαίρια και στον ορό αίματος πραγματοποιείται και στους δύο τύπους δειγμάτων. Εάν το άμεσο τεστ Coombs είναι θετικό, ανιχνεύονται αντισώματα στην εξωτερική μεμβράνη των ερυθρών αιμοσφαιρίων, τα οποία οδηγούν στην καταστροφή αυτών των αιμοσφαιρίων. Αιτία μπορεί να είναι μετάγγιση αίματος χωρίς προηγούμενη τυποποίηση - μεταμεταγγιστική αιμολυτική αντίδραση, καθώς και ερυθροβλάστωση του νεογνού, αιμολυτική αντίδραση λόγω χρήσης φαρμάκων, πρωτοπαθής ή δευτεροπαθής αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία. Η δευτερογενής καταστροφή των ερυθρών αιμοσφαιρίων μπορεί να προκληθεί από συστηματικό ερυθηματώδη λύκο, σύνδρομο Evans, μακροσφαιριναιμία Waldenström, παροξυσμική ψυχρή αιμοσφαιρινουρία, χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία, λέμφωμα, λοιμώδη μονοπυρήνωση, σύφιλη, πνευμονία από μυκόπλασμα.

Ένα θετικό αποτέλεσμα της έμμεσης δοκιμής Coombs υποδεικνύει την παρουσία αντισωμάτων στον παράγοντα Rh στο πλάσμα. Στην πράξη, αυτό σημαίνει ότι έχει συμβεί ευαισθητοποίηση Rh και υπάρχει πιθανότητα να αναπτυχθεί σύγκρουση Rh μετά από έγχυση αίματος δότη κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης. Για την πρόληψη των επιπλοκών της εγκυμοσύνης, οι γυναίκες με θετικό αποτέλεσμα του τεστ Coombs τοποθετούνται σε ειδικό μητρώο.

Θεραπεία ανωμαλιών

Το τεστ Coombs αναφέρεται σε ισοορολογικές μελέτες. Τα αποτελέσματά του καθιστούν δυνατό τον εντοπισμό μιας αιμολυτικής αντίδρασης, καθώς και τον προσδιορισμό της συμβατότητας του αίματος του δότη και του λήπτη, της μητέρας και του εμβρύου, προκειμένου να αποφευχθεί η ανάπτυξη σύγκρουσης Rh. Εάν το αποτέλεσμα της εξέτασης είναι θετικό, τότε πρέπει να ζητήσετε συμβουλές από τον θεράποντα ιατρό σας - μαιευτήρα-γυναικολόγο, αιματολόγο, χειρουργό.

Αντισώματα, που βρίσκεται στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων, μπορεί να είναι είτε σε στατική είτε σε ελεύθερη κατάσταση πλάσμα αίματος. Ανάλογα με την κατάσταση των αντισωμάτων, πραγματοποιείται άμεση ή έμμεση αντίδραση Coombs. Εάν υπάρχει λόγος να πιστεύουμε ότι τα αντισώματα είναι στερεωμένα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, εκτελείται μια άμεση δοκιμή Coombs. Σε αυτή την περίπτωση, η δοκιμή πραγματοποιείται σε ένα στάδιο - προσθήκη ορός αντισφαιρίνης. Εάν υπάρχουν ελλιπή αντισώματα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, συγκόλλησηερυθρά αιμοσφαίρια

Έμμεση αντίδραση

Η έμμεση αντίδραση Coombs εμφανίζεται σε 2 στάδια. Πρώτα πρέπει να εφαρμόσετε τεχνητά καθιστό ευπαθήερυθρά αιμοσφαίρια Για να γίνει αυτό, τα ερυθρά αιμοσφαίρια και ο ορός αίματος που εξετάζεται επωάζονται, γεγονός που προκαλεί τη στερέωση αντισωμάτων στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Μετά από το οποίο πραγματοποιείται το δεύτερο στάδιο της δοκιμής Coombs - η προσθήκη ορού αντισφαιρίνης.

Αντίδραση καθίζησης - RP (από το λατινικό praecipilo σε ίζημα) είναι ο σχηματισμός και η καθίζηση ενός συμπλέγματος διαλυτού μοριακού αντιγόνου με αντισώματα με τη μορφή θολότητας που ονομάζεται επισπεύδει. Σχηματίζεται με ανάμειξη αντιγόνων και αντισωμάτων σε ισοδύναμες ποσότητες· η περίσσεια ενός από αυτά μειώνει το επίπεδο σχηματισμού του ανοσοποιητικού συμπλέγματος. Η αντίδραση κατακρήμνισης πραγματοποιείται σε δοκιμαστικούς σωλήνες (αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου), σε γέλες, θρεπτικά μέσα κ.λπ. Ouchterlony, ανοσοδιάχυση ακτινοβολίας, ανοσοεπιλεκτοφόρησηκαι τα λοιπά.

Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου. Η αντίδραση διεξάγεται σε στενούς σωλήνες καθίζησης: ένα διαλυτό αντιγόνο επιστρώνεται στον ανοσοορό. Με βέλτιστη αναλογία αντιγόνου και αντισωμάτων, σχηματίζεται ένα αδιαφανές στρώμα στο όριο αυτών των δύο διαλυμάτων. δακτύλιος ιζήματος. Εάν χρησιμοποιούνται βρασμένα και φιλτραρισμένα εκχυλίσματα ιστών ως αντιγόνα στην αντίδραση, τότε αυτή η αντίδραση ονομάζεται η πρώτη αντίδραση θερμοκαταβύθισης (η αντίδραση στην οποία ανιχνεύεται το απτένιο άνθρακα).
Αντίδραση διπλής ανοσοδιάχυσης Ouchterlony. Για τη ρύθμιση της αντίδρασης, λιωμένο γέλη άγαρ λεπτό στρώμαχύνεται σε γυάλινη πλάκα και μετά τη σκλήρυνση, ανοίγονται τρύπες σε αυτό. Τα αντιγόνα και οι ανοσοοροί τοποθετούνται χωριστά στα φρεάτια της γέλης, τα οποία διαχέονται το ένα προς το άλλο. Στο σημείο συνάντησης, σε ισοδύναμες αναλογίες, σχηματίζουν ένα ίζημα με τη μορφή λευκής λωρίδας. Σε συστήματα πολλαπλών συστατικών, πολλές γραμμές ιζήματος εμφανίζονται μεταξύ των φρεατίων με αντιγόνα και αντισώματα. Σε πανομοιότυπα AG, οι γραμμές ιζήματος συγχωνεύονται. σε μη πανομοιότυπα ΑΓ τέμνονται.
Αντίδραση ακτινικής ανοσοδιάχυσης.Ο ανοσοποιητικός ορός με λιωμένο τζελ άγαρ χύνεται ομοιόμορφα στο ποτήρι. Μετά τη στερεοποίηση στο πήκτωμα, κατασκευάζονται φρεάτια στα οποία τοποθετείται το αντιγόνο σε διάφορες αραιώσεις. Το αντιγόνο, διαχέοντας στο πήκτωμα, σχηματίζει ζώνες καθίζησης δακτυλίου γύρω από τα φρεάτια με αντισώματα. Η διάμετρος του δακτυλίου καθίζησης είναι ανάλογη της συγκέντρωσης του αντιγόνου. Η αντίδραση χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό ανοσοσφαιρινών διαφόρων τάξεων, συστατικών του συστήματος συμπληρώματος κ.λπ. στον ορό αίματος.
Ανοσοηλεκτροφόρηση- συνδυασμός της μεθόδου ηλεκτροφόρησης και ανοσοκατακρήμνισης: ένα μείγμα αντιγόνων εισάγεται στα φρεάτια της γέλης και διαχωρίζεται στο πήκτωμα χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση, στη συνέχεια προστίθεται ανοσοορός στην αυλάκωση παράλληλη με τις ζώνες ηλεκτροφόρησης, τα αντισώματα της οποίας διαχέονται σε το πήκτωμα και σχηματίζουν γραμμές καθίζησης στη θέση «συνάντησης» με το αντιγόνο.
Αντίδραση κροκίδωσης(σύμφωνα με τον Ramon) (από το λατινικό f1oecus - νιφάδες μαλλί) - η εμφάνιση ωχρότητας ή κροκιδωτής μάζας (ανοσοκαθίζηση) σε δοκιμαστικό σωλήνα κατά τη διάρκεια της αντίδρασης τοξίνη - αντιτοξίνη ή τοξοειδές - αντιτοξίνη. Χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας αντιτοξικού ορού ή τοξοειδούς.

Δακτυλογράφηση HLA- μελέτη του μείζονος ανθρώπινου συμπλέγματος ιστοσυμβατότητας - συμπλέγματος HLA. Αυτός ο σχηματισμός περιλαμβάνει μια περιοχή γονιδίων στο χρωμόσωμα 6 που κωδικοποιούν αντιγόνα HLA που εμπλέκονται σε διάφορες ανοσοαποκρίσεις.

Καθήκοντα για Δακτυλογράφηση HLAμπορεί να είναι πολύ διαφορετική - βιολογική ταυτοποίηση (ο τύπος HLA κληρονομείται μαζί με τα γονικά γονίδια), προσδιορισμός της προδιάθεσης για διάφορες ασθένειες, επιλογή δοτών για μεταμόσχευση οργάνων - αυτό περιλαμβάνει τη σύγκριση των αποτελεσμάτων του τύπου HLA των ιστών του δότη και του λήπτη. Χρησιμοποιώντας τον τύπο HLA, προσδιορίζεται πόσο όμοιοι ή διαφορετικοί είναι οι σύζυγοι ως προς τα αντιγόνα ιστοσυμβατότητας προκειμένου να διαγνωστούν περιπτώσεις υπογονιμότητας.

Η πληκτρολόγηση HLA προτείνει Ανάλυση πολυμορφισμού HLAκαι πραγματοποιείται με δύο μεθόδους - ορολογική και μοριακή γενετική. Η κλασική ορολογική μέθοδος τυποποίησης HLA βασίζεται σε μικρολεμφοκυτταροτοξικό τεστ και η μοριακή μέθοδος χρησιμοποιεί PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης).

Ορρολογικός Δακτυλογράφηση HLAπραγματοποιείται σε μεμονωμένους κυτταρικούς πληθυσμούς. Τα κύρια αντιγόνα του συμπλέγματος ιστοσυμβατότητας μεταφέρονται κυρίως από λεμφοκύτταρα. Ως εκ τούτου, ένα εναιώρημα των Τ λεμφοκυττάρων χρησιμοποιείται ως οι κύριοι φορείς των αντιγόνων κατηγορίας Ι και ένα εναιώρημα των Β λεμφοκυττάρων για τον προσδιορισμό των αντιγόνων HLA τάξης II. Για την απομόνωση των απαιτούμενων πληθυσμών κυττάρων από πλήρες αίμα, χρησιμοποιείται είτε φυγοκέντρηση είτε ανοσομαγνητικός διαχωρισμός. Πιστεύεται ότι η πρώτη μέθοδος μπορεί να οδηγήσει σε ψευδώς θετικά δεδομένα, καθώς αυτό έχει ως αποτέλεσμα τον θάνατο ορισμένων κυττάρων. Η δεύτερη μέθοδος αναγνωρίζεται ως πιο ειδική - περισσότερο από το 95% των κυττάρων παραμένουν βιώσιμα.

Αλλά η βάση για τη διενέργεια λεμφοκυτταροτοξικής δοκιμής Δακτυλογράφηση HLAείναι ένας ειδικός ορός που περιέχει αντισώματα σε διάφορες αλληλικές παραλλαγές των αντιγόνων HLA τάξης I και II. Μια ορολογική εξέταση μπορεί να προσδιορίσει τον τύπο HLA εξετάζοντας ποιοι οροί αντιδρούν με λεμφοκύτταρα και ποιοι όχι.

Εάν συμβεί μια αντίδραση μεταξύ κυττάρων και ορού, το αποτέλεσμα είναι ο σχηματισμός ενός συμπλόκου αντιγόνου-αντισώματος στην επιφάνεια του κυττάρου. Μετά την προσθήκη ενός διαλύματος που περιέχει συμπλήρωμα, επέρχεται λύση των κυττάρων και θάνατος. Μια ορολογική δοκιμή τυποποίησης HLA αξιολογείται χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού για την αξιολόγηση θετικών (ερυθρός φθορισμός) και αρνητικών (πράσινος φθορισμός) αντιδράσεις ή μικροσκοπία αντίθεσης φάσης για την αξιολόγηση της πυρηνικής χρώσης νεκρά κύτταρα. Το αποτέλεσμα της τυποποίησης HLA προκύπτει λαμβάνοντας υπόψη την ειδικότητα των αντιδρώντων ορών και των ομάδων αντιγόνων που αντιδρούν διασταυρούμενα, και την ένταση της αντίδρασης κυτταροτοξικότητας.

Μειονεκτήματα ορολογικών Δακτυλογράφηση HLAείναι η παρουσία διασταυρούμενων αντιδράσεων, η ασθενής συγγένεια αντισωμάτων ή η χαμηλή έκφραση των αντιγόνων HLA, η απουσία πρωτεϊνικών προϊόντων σε έναν αριθμό γονιδίων HLA.

Πιο σύγχρονες, μοριακές μέθοδοι Δακτυλογράφηση HLAχρησιμοποιούν ήδη τυποποιημένα συνθετικά δείγματα που δεν αντιδρούν με αντιγόνα στην επιφάνεια των λευκοκυττάρων, αλλά με DNA και δείχνουν άμεσα ποια αντιγόνα υπάρχουν στο δείγμα. Οι μοριακές μέθοδοι δεν απαιτούν ζωντανά λευκά αιμοσφαίρια· κάθε ανθρώπινο κύτταρο μπορεί να μελετηθεί και μερικά μικρολίτρα αίματος αρκούν για να λειτουργήσουν ή μπορείτε να περιοριστείτε στην απόξεση από τον στοματικό βλεννογόνο.

Μοριακή γενετική Δακτυλογράφηση HLAχρησιμοποιεί τη μέθοδο PCR, το πρώτο βήμα της οποίας είναι η λήψη καθαρού γονιδιωματικού DNA (από ολικό αίμα, εναιώρημα λευκοκυττάρων, ιστούς).

Το δείγμα DNA στη συνέχεια αντιγράφεται - ενισχύεται in vitro χρησιμοποιώντας εκκινητές (βραχύ μονόκλωνο DNA) ειδικούς για έναν συγκεκριμένο τόπο HLA. Τα άκρα κάθε ζεύγους εκκινητών πρέπει να είναι αυστηρά συμπληρωματικά με τη μοναδική αλληλουχία που αντιστοιχεί σε ένα συγκεκριμένο αλληλόμορφο, διαφορετικά δεν θα υπάρξει ενίσχυση.

Μετά την PCR, κατά την επαναλαμβανόμενη αντιγραφή, αποδεικνύεται ένας μεγάλος αριθμός απόΘραύσματα DNA, τα οποία μπορούν να αξιολογηθούν οπτικά. Για να γίνει αυτό, τα μείγματα αντίδρασης υποβάλλονται σε ηλεκτρόλυση ή υβριδισμό και το εάν έχει συμβεί ειδική ενίσχυση προσδιορίζεται χρησιμοποιώντας ένα πρόγραμμα ή πίνακα. Το αποτέλεσμα της τυποποίησης HLA παρουσιάζεται με τη μορφή μιας περιεκτικής αναφοράς σε γονιδιακά και αλληλικά επίπεδα. Λόγω της τυποποίησης των δειγμάτων που χρησιμοποιήθηκαν, μοριακή Δακτυλογράφηση HLAακριβέστερα ορολογικά. Επιπλέον, παρέχει περισσότερες πληροφορίες (περισσότερα νέα αλληλόμορφα DNA) και πολλά άλλα υψηλό επίπεδοτις λεπτομέρειες, καθώς καθιστά δυνατό τον εντοπισμό όχι μόνο των αντιγόνων, αλλά και των ίδιων των αλληλόμορφων, τα οποία καθορίζουν ποιο αντιγόνο υπάρχει στο κύτταρο.

Ανοσολογική αντίδραση λύσης.Η αντίδραση βασίζεται στην ικανότητα συγκεκριμένων αντισωμάτων να σχηματίζουν ανοσοσυμπλέγματα με κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων ερυθροκυττάρων και βακτηρίων, γεγονός που οδηγεί σε ενεργοποίηση του συστήματος συμπληρώματος κατά μήκος της κλασικής οδού και λύση των κυττάρων. Από τις ανοσολογικές αντιδράσεις λύσης, η αντίδραση αιμόλυσης χρησιμοποιείται συχνότερα και η αντίδραση βακτηριόλυσης χρησιμοποιείται σπάνια (κυρίως στη διαφοροποίηση της χολέρας και των δονήσεων που μοιάζουν με χολέρα).

Αντίδραση αιμόλυσης.Υπό την επίδραση μιας αντίδρασης με αντισώματα παρουσία συμπληρώματος, ένα θολό εναιώρημα ερυθρών αιμοσφαιρίων μετατρέπεται σε έντονο κόκκινο καθαρό υγρό- «λάκα αίματος» λόγω απελευθέρωσης αιμοσφαιρίνης. Κατά τη ρύθμιση μιας διαγνωστικής αντίδρασης στερέωσης συμπληρώματος (FFR), η αντίδραση αιμόλυσης χρησιμοποιείται ως δείκτης: για να ελεγχθεί η παρουσία ή η απουσία (στερέωση) ελεύθερου συμπληρώματος.

Τοπική αντίδραση αιμόλυσης στο πήκτωμα(αντίδραση Erne) είναι μια από τις παραλλαγές της αντίδρασης αιμόλυσης. Σας επιτρέπει να προσδιορίσετε τον αριθμό των κυττάρων που σχηματίζουν αντισώματα. Ο αριθμός των κυττάρων που εκκρίνουν αντισώματα - αιμολυσίνες - καθορίζεται από τον αριθμό των πλακών αιμόλυσης που εμφανίζονται σε μια γέλη άγαρ που περιέχει ερυθροκύτταρα, ένα εναιώρημα κυττάρων του λεμφικού ιστού που μελετάται και συμπληρώνει.

Μέθοδος ανοσοφθορισμού

(RIF, αντίδραση ανοσοφθορισμού) είναι μια μέθοδος για την ανίχνευση συγκεκριμένων Ags (Abs) χρησιμοποιώντας Abs (Ags) συζευγμένα με ένα φθορόχρωμα. Έχει υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα. Χρησιμοποιείται για ρητή διάγνωση λοιμώξεων. ασθένειες (αναγνώριση του παθογόνου στο ερευνητικό υλικό), καθώς και για τον προσδιορισμό των υποδοχέων Ab και της επιφάνειας και των δεικτών λευκοκυττάρων (ανοσοφαινοτυποποίηση) και άλλων κυττάρων. Απευθείας Ι. μ.συνίσταται στην επεξεργασία ενός τμήματος ιστού ή ενός επιχρίσματος από παθολογικό υλικό ή μικροβιακή κρούστα που περιέχει συγκεκριμένα Abs συζευγμένα με φθορόχρωμα. το παρασκεύασμα πλένεται για να ελευθερωθεί από τα μη δεσμευμένα Abs και εξετάζεται σε μικροσκόπιο φθορισμού. Σε θετικές περιπτώσεις, ένα λαμπερό φως εμφανίζεται γύρω από την περιφέρεια του αντικειμένου. ανοσοποιητικό σύμπλεγμα. Ο έλεγχος είναι απαραίτητος για τον αποκλεισμό της μη ειδικής φωταύγειας. Στο έμμεσος. Τους.στο πρώτο στάδιο, μια τομή ιστού ή ένα επίχρισμα αντιμετωπίζεται με έναν μη φθορίζοντα ειδικό παράγοντα, στο δεύτερο - με έναν παράγοντα φωταύγειας έναντι των -σφαιρινών του ζώου που χρησιμοποιήθηκε στο πρώτο στάδιο. Στη θετική περίπτωση, σχηματίζεται ένα φωτεινό σύμπλεγμα που αποτελείται από Ar, At προς αυτό και At έναντι At (μέθοδος σάντουιτς). Εκτός από ένα μικροσκόπιο φθορισμού, το RIF λαμβάνεται υπόψη κατά τον φαινοτύπο των κυττάρων. διαλογέας κυττάρων λέιζερ .

Κυτταρομετρία ροής- μέθοδος οπτικής μέτρησης των παραμέτρων ενός κυττάρου, των οργανιδίων του και των διεργασιών που συμβαίνουν σε αυτό.

Η τεχνική περιλαμβάνει την ανίχνευση της σκέδασης του φωτός από μια δέσμη λέιζερ καθώς ένα κύτταρο περνά μέσα από αυτό σε ένα ρεύμα υγρού και ο βαθμός διασποράς του φωτός επιτρέπει σε κάποιον να πάρει μια ιδέα για το μέγεθος και τη δομή του κυττάρου. Επιπλέον, η ανάλυση λαμβάνει υπόψη το επίπεδο φθορισμού των χημικών ενώσεων που αποτελούν μέρος του κυττάρου (αυτοφθορισμός) ή προστίθενται στο δείγμα πριν από την κυτταρομετρία ροής.

Το κυτταρικό εναιώρημα, προεπισημασμένο με φθορίζοντα μονοκλωνικά αντισώματα ή φθορίζουσες βαφές, εισέρχεται στο ρεύμα υγρού που διέρχεται από το κύτταρο ροής. Οι συνθήκες επιλέγονται με τέτοιο τρόπο ώστε τα κελιά να παρατάσσονται το ένα μετά το άλλο λόγω του λεγόμενου. υδροδυναμική εστίαση του πίδακα στον πίδακα. Τη στιγμή που ένα κύτταρο διασχίζει την ακτίνα λέιζερ, οι ανιχνευτές καταγράφουν:

σκέδαση φωτός σε μικρές γωνίες (από 1° έως 10°) ( αυτό το χαρακτηριστικόχρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του μεγέθους των κυττάρων).

σκέδαση φωτός υπό γωνία 90° (μας επιτρέπει να κρίνουμε την αναλογία πυρήνα/κυτταρόπλασμα, καθώς και την ετερογένεια και την κοκκοποίηση των κυττάρων).

ένταση φθορισμού μέσω πολλών καναλιών φθορισμού (από 2 έως 18-20) - σας επιτρέπει να προσδιορίσετε τη σύνθεση υποπληθυσμού του κυτταρικού εναιωρήματος κ.λπ.

Εφαρμόστε 1 μεγάλη σταγόνα ορού O(I), A(II), B(III) σε πιάτο ή γυάλινη πλάκα χρησιμοποιώντας πιπέτες (διαφορετικές!). Αφού σημειώσετε την ώρα, χρησιμοποιήστε μια καθαρή γυάλινη ράβδο ή μια καθαρή γωνία μιας γυάλινης πλάκας για να συνδυάσετε σταγόνες ορού με σταγόνες αίματος. Ο προσδιορισμός διαρκεί 5 λεπτά, ανακινώντας την πλάκα, στη συνέχεια προσθέστε 1 σταγόνα αλατούχου διαλύματος σε κάθε μείγμα σταγόνων και αξιολογήστε τα αποτελέσματα. Είναι καλύτερα αν ο ορός βγαίνει σε 2 διαφορετικές σειρές. Τα αποτελέσματα της ομάδας αίματος πρέπει να ταιριάζουν και στις δύο παρτίδες ορού.

Αξιολόγηση των αποτελεσμάτων ισοαιμοσυγκόλλησης:

ισοαιμοσυγκόλληση. Εάν η αντίδραση είναι θετική, στο μείγμα εμφανίζονται μικροσκοπικοί κόκκινοι κόκκοι συγκολλητικών ερυθρών αιμοσφαιρίων. Οι κόκκοι συγχωνεύονται σε μεγαλύτερους κόκκους και οι τελευταίοι σε νιφάδες. Ο ορός είναι σχεδόν αποχρωματισμένος.

Εάν η αντίδραση είναι αρνητική, το μείγμα παραμένει ομοιόμορφα χρωματισμένο για 5 λεπτά ροζ χρώμακαι δεν υπάρχουν κόκκοι?

Όταν εργάζεστε με 3 ορούς ομάδων O(I), A(II), B(III), είναι δυνατοί 4 συνδυασμοί αντιδράσεων:

1. εάν και οι 3 οροί έδωσαν αρνητική αντίδραση, δηλαδή το μείγμα έχει ομοιόμορφο ροζ χρώμα - αυτός είναι ο τύπος αίματος O(I).

   εάν μόνο ο ορός της ομάδας Α(ΙΙ) έδωσε αρνητική αντίδραση και οι οροί Ο(Ι) και Β(ΙΙΙ) έδωσαν θετική αντίδραση, δηλαδή εμφανίστηκαν κόκκοι - αυτή είναι η ομάδα αίματος Α(ΙΙ).

   ο ορός της ομάδας Β(ΙΙ) έδωσε αρνητική αντίδραση και οι οροί της ομάδας Ο(Ι) και Α(ΙΙ) έδωσαν θετική αντίδραση - αυτή είναι η ομάδα αίματος Β(ΙΙΙ).

Και οι 3 οροί έδωσαν θετικές αντιδράσεις - το αίμα που εξετάστηκε ήταν ομάδα ΑΒ(IV). Σε αυτή την περίπτωση, πραγματοποιείται μελέτη με ορό της ομάδας AB(IV).

Σημείωση!Οι σταγόνες του αίματος που εξετάζονται πρέπει να είναι 5-10 φορές μικρότερες από τις σταγόνες ορού.

Σφάλματα ισοαιμοσυγκόλλησης.

Αποτυχία διενέργειας συγκόλλησης εκεί που πρέπει και παρουσία συγκόλλησης εκεί που δεν πρέπει. Αυτό μπορεί να οφείλεται σε αδύναμο τίτλο ορού συν κακή συγκόλληση ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Παρουσία συγκόλλησης όπου δεν πρέπει να υπάρχει- Πρόκειται για ψευδοσυγκόλληση, όταν σωροί ερυθρών αιμοσφαιρίων σχηματίζουν «στήλες νομισμάτων». Το κούνημα του πιάτου ή η προσθήκη φυσιολογικού ορού τα καταστρέφει.

Πανσυγκόλληση, όταν ο ορός κολλάει μεταξύ τους όλα τα ερυθρά αιμοσφαίρια, συμπεριλαμβανομένων εκείνων της δικής του ομάδας αίματος. Μέχρι το 5ο λεπτό, τα σημάδια της συγκόλλησης εξαφανίζονται.

Υπάρχει επίσης η λεγόμενη ψυχρή πανσυγκόλληση, όταν τα ερυθρά αιμοσφαίρια κολλάνε μεταξύ τους λόγω της χαμηλής θερμοκρασίας του αέρα (κάτω από 15 ° C) στο δωμάτιο.

Σε όλες αυτές τις περιπτώσεις, είτε πραγματοποιείται επαναλαμβανόμενη αντίδραση, είτε χρησιμοποιώντας τυπικά ερυθρά αιμοσφαίρια.

Προσδιορισμός Rh αίματος

Για τον προσδιορισμό της κατάστασης Rh, δηλαδή για την ανίχνευση της παρουσίας ή απουσίας αντιγόνων του συστήματος Rh στο αίμα των ανθρώπων, χρησιμοποιούνται τυπικοί οροί (αντιδραστήρια) αντι-Rh, που ποικίλλουν σε ειδικότητα, δηλαδή περιέχουν αντισώματα σε διάφορα αντιγόνα αυτού του συστήματος. Για τον προσδιορισμό του αντιγόνου Rh 0 (D), ο ορός anti-Rhesus χρησιμοποιείται συχνότερα με την προσθήκη ενός διαλύματος ζελατίνης 10%, ή χρησιμοποιείται ένα τυπικό αντιδραστήριο anti-Rhesus που έχει παρασκευαστεί εκ των προτέρων με ένα διάλυμα πολυγλυκίνης 33%. Για την απόκτηση ακριβέστερων ερευνητικών αποτελεσμάτων, καθώς και για τον εντοπισμό αντιγόνων άλλων ορολογικών συστημάτων, χρησιμοποιείται το τεστ Coombs (είναι επίσης πολύ ευαίσθητο στον προσδιορισμό της συμβατότητας του μεταγγιζόμενου αίματος). Για έρευνα, χρησιμοποιείται φυσικό αίμα ή αίμα παρασκευασμένο με κάποιο συντηρητικό. Σε αυτή την περίπτωση, το αίμα πρέπει να πλυθεί από το συντηρητικό με δεκαπλάσιο όγκο ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου. Κατά τον προσδιορισμό της κατάστασης Rh- Rh 0 (D) πρέπει να χρησιμοποιούνται δύο δείγματα ορού ή αντιδραστηρίου anti-Rhesus δύο διαφορετικών σειρών και ταυτόχρονα τυπικά ερυθρά αιμοσφαίρια που λαμβάνονται από αίμα από Rh-θετικό (Rh +) και Rh-αρνητικό (Rh -) άτομα θα πρέπει να χρησιμοποιούνται για έλεγχο. Κατά τον προσδιορισμό άλλων ισοαντιγόνων, θα πρέπει να χρησιμοποιούνται αναλόγως τα ελεγχόμενα ερυθρά αιμοσφαίρια που περιέχουν ή δεν διαθέτουν το αντιγόνο κατά του οποίου κατευθύνονται τα αντισώματα στον τυπικό ορό.

Οι μερικές θερμικές συγκολλητίνες είναι ο πιο κοινός τύπος αντισωμάτων που μπορούν να προκαλέσουν την ανάπτυξη αυτοάνοσης αιμολυτικής αναιμίας. Αυτά τα αντισώματα ανήκουν στην IgG, σπάνια σε IgM, IgA.

ΔΟΚΙΜΗ COOMBS

Δοκιμή Coombs: εισαγωγή.Το τεστ Coombs είναι μια εργαστηριακή διαγνωστική μέθοδος που βασίζεται στην αντίδραση αιμοσυγκόλλησης.

Η κύρια μέθοδος για τη διάγνωση της αυτοάνοσης αιμολυτικής αναιμίας είναι το τεστ Coombs. Βασίζεται στην ικανότητα αντισωμάτων ειδικών για ανοσοσφαιρίνες (ειδικά IgG) ή συστατικών του συμπληρώματος (ειδικά S3) να συγκολλούν ερυθροκύτταρα επικαλυμμένα με IgG ή S3.

Η δέσμευση των IgG και C3b στα ερυθροκύτταρα παρατηρείται στην αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία και στην επαγόμενη από φάρμακα ανοσοαιμολυτική αναιμία. Άμεση δοκιμή Coombs.Η άμεση δοκιμή Coombs χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντισωμάτων ή συστατικών συμπληρώματος που είναι στερεωμένα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Διενεργείται ως εξής:

Για να ληφθούν αντισώματα σε ανθρώπινες ανοσοσφαιρίνες (ορός αντισφαιρίνης) ή συμπλήρωμα (αντισυμπληρωματικός ορός), το ζώο ανοσοποιείται με ανθρώπινο ορό, ανοσοσφαιρίνες ή ανθρώπινο συμπλήρωμα. Ο ορός που λαμβάνεται από το ζώο καθαρίζεται από αντισώματα σε άλλες πρωτεΐνες.

Τα ερυθρά αιμοσφαίρια του ασθενούς πλένονται με φυσιολογικό ορό για την πλήρη απομάκρυνση του ορού, ο οποίος εξουδετερώνει τα αντισώματα έναντι των ανοσοσφαιρινών και του συμπληρώματος και μπορεί να προκαλέσει ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα.

Εάν αντισώματα ή συστατικά του συμπληρώματος στερεωθούν στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, η προσθήκη αντισφαιρίνης ή ορού αντι-συμπληρώματος προκαλεί συγκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Η άμεση δοκιμή Coombs χρησιμοποιείται στις ακόλουθες περιπτώσεις:

Αυτοάνοση αιμόλυση.

Αιμολυτική νόσος νεογνών.

Προκαλούμενη από φάρμακα ανοσοαιμολυτική αναιμία.

Αντιδράσεις αιμολυτικής μετάγγισης. Έμμεση δοκιμή Coombs.Το έμμεσο τεστ Coombs ανιχνεύει αντισώματα στα ερυθρά αιμοσφαίρια στον ορό. Για να γίνει αυτό, ο ορός του ασθενούς επωάζεται με ερυθρά αιμοσφαίρια δότη της ομάδας 0 και στη συνέχεια πραγματοποιείται απευθείας δοκιμή Coombs.

Η έμμεση δοκιμή Coombs χρησιμοποιείται στις ακόλουθες περιπτώσεις:

Προσδιορισμός ατομικής συμβατότητας αίματος δότη και λήπτη.

Ανίχνευση αλλοαντισωμάτων, συμπεριλαμβανομένων των αντισωμάτων που προκαλούν αιμολυτικές αντιδράσεις μετάγγισης.

Προσδιορισμός επιφανειακών αντιγόνων ερυθροκυττάρων σε ιατρική γενετικήκαι της ιατροδικαστικής.

Επιβεβαίωση πανομοιότυπων διδύμων κατά τη μεταμόσχευση μυελού των οστών.

Για τη διεξαγωγή μιας βιολογικής εξέτασης, το αίμα αρχίζει να μεταγγίζεται όσο το δυνατόν γρηγορότερα (κατά προτίμηση σε ροή). Μετά τη μετάγγιση 25 ml αίματος, ο σωλήνας του συστήματος συσφίγγεται με σφιγκτήρα. Στη συνέχεια ακολουθεί μια παύση για 3 λεπτά, κατά την οποία παρακολουθείται η κατάσταση του παραλήπτη. Για τη διεξαγωγή βιολογικού ελέγχου, εγχέονται 25 ml αίματος τρεις φορές.Στο τέλος της εξέτασης (μετά τη μετάγγιση των πρώτων 75 ml αίματος σε κλασματικές δόσεις των 25 ml σε διαστήματα 3 λεπτών), το σύστημα ρυθμίζεται σε απαιτούμενη ταχύτηταμετάγγιση. Όταν μεταγγίζετε περισσότερα από ένα μπουκάλια αίματος σε έναν ασθενή, είναι απαραίτητο να αφαιρέσετε τη βελόνα από τη φλέβα. Σε αυτή την περίπτωση, η βελόνα αφαιρείται από το δοκιμαστικό σωλήνα του φιαλιδίου στο οποίο έχει εξαντληθεί το αίμα και εισάγεται στο επόμενο φιαλίδιο. Ο σωλήνας συστήματος (λαστιχένιο ή πλαστικό) συσφίγγεται αυτή τη στιγμή με σφιγκτήρα. Εάν κατά τη διάρκεια μιας μετάγγισης αίματος καταστεί απαραίτητη η ενδοφλέβια χορήγηση οποιουδήποτε άλλου φαρμάκου στον λήπτη, αυτό γίνεται με διάτρηση του ελαστικού σωλήνα του συστήματος. Τα τρυπήματα του πλαστικού σωλήνα είναι απαράδεκτα, καθώς δεν πέφτουν. Μετά από κάθε μετάγγιση αίματος, ο ασθενής πρέπει να παρακολουθείται για να εντοπιστεί και να εξαλειφθεί αμέσως πιθανές επιπλοκές, συμπεριλαμβανομένου αλλεργικές αντιδράσεις. 2 ώρες μετά το τέλος της μετάγγισης αίματος, θα πρέπει να μετρηθεί η θερμοκρασία του σώματος. Εάν αυξηθεί, η μέτρηση πρέπει να επαναλαμβάνεται κάθε ώρα για τις επόμενες 4 ώρες. Εξίσου σημαντική είναι η παρακολούθηση της ούρησης και της σύνθεσης των ούρων, γεγονός που καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό της παρουσίας μιας τοξικής αντίδρασης μετά τη μετάγγιση. Η εμφάνιση ολιγουρίας και ανουρίας μετά από μετάγγιση αίματος, η παρουσία αιμοσφαιρίων και πρωτεΐνης στα ούρα αποτελούν άμεση ένδειξη ανάπτυξης αιμόλυσης μετά τη μετάγγιση.

Δοκιμή Coombs– μια ανάλυση για την ανίχνευση αντισωμάτων προσκολλημένων σε μια επιφάνεια ή διαλυμένων στο πλάσμα. Χρησιμοποιείται για την ανίχνευση ανοσοποίησης και αντισωμάτων στα ερυθρά αιμοσφαίρια. Δεύτερος τίτλος τεστ αντισφαιρίνης. Μπορεί να είναι άμεσο ή έμμεσο.

Στο άμεση εξέταση αντισφαιρίνηςανιχνεύει αντισώματα στερεωμένα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Διενεργείται εάν υπάρχει υποψία, για άλλα αυτοάνοσα νοσήματα, μετά από λήψη φαρμάκων (μεθυλντόπα, πενικιλίνη, κινίνη) κ.λπ.

Τα ερυθρά αιμοσφαίρια έχουν ευαισθητοποιηθεί in vivo - τα αντισώματα είναι ήδη σταθερά συνδεδεμένα με αυτά και η προσθήκη ορού αντισφαιρίνης (anti-IgG) προκαλεί τη συγκόλληση των ευαισθητοποιημένων κυττάρων μεταξύ τους, κάτι που είναι ορατό με γυμνό μάτι.

Έμμεση δοκιμή Coombsανιχνεύει αντισώματα κατά των ερυθροκυττάρων στο πλάσμα του αίματος, πραγματοποιείται πριν από τη μετάγγιση αίματος και κατά τη διάρκεια.

Τα αντισώματα κατά των ερυθροκυττάρων είναι ένας τύπος αυτοαντισωμάτων, δηλ. αντισώματα κατά των δικών σας ιστών. Το αυτοαντίσωμα εμφανίζεται κατά τη διάρκεια της παθολογικής αντιδραστικότητας ανοσοποιητικό σύστημαγια ορισμένα φάρμακα, για παράδειγμα υψηλές δόσειςπενικιλλίνη.

Τα ερυθρά αιμοσφαίρια στην επιφάνειά τους περιέχουν διάφορα χημικές δομές(γλυκολιπίδια, σακχαρίτες, γλυκοπρωτεΐνες και πρωτεΐνες), στην ιατρική ονομάζονται αντιγόνα. Ένα άτομο κληρονομεί από τους γονείς του έναν συγκεκριμένο χάρτη αντιγόνων σε κάθε ερυθρό αιμοσφαίριο.

Τα αντιγόνα συνδυάζονται σε ομάδες και στη συνέχεια το αίμα χωρίζεται σε διάφορες ομάδες - σύμφωνα με το σύστημα AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Τα πιο διάσημα και σημαντικά στο έργο ενός γιατρού είναι το AB0 και ο παράγοντας Rh (Rh).

Σύστημα AB0

Η κατάσταση Rh ενός ατόμου καθορίζεται από την παρουσία αυτών των αντιγόνων. Ένα ιδιαίτερα σημαντικό αντιγόνο των ερυθροκυττάρων είναι το αντιγόνο D. Αν υπάρχει, τότε μιλούν για Rh θετικό RhD αίματος, και αν δεν είναι εκεί - ω Rh αρνητικό Rhd.

Εάν το αντίστοιχο αντίσωμα προσκολληθεί στα αντιγόνα των ερυθροκυττάρων, το ερυθροκύτταρο καταστρέφεται - αιμόλυση.

Ενδείξεις

Η κύρια ένδειξη για απευθείαςτεστ αντισφαιρίνης- υποψία αιμολυτικής αναιμίας. Τις περισσότερες φορές πραγματοποιείται για πρωτοπαθή αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία, αιμόλυση σε ρευματική, όγκο, μεταδοτικές ασθένειες, αιμόλυση που προκαλείται από φάρμακα.

Εάν η αναιμία εμφανιστεί αρκετές ημέρες ή μήνες μετά από μετάγγιση αίματος ή κατά τη διάρκεια μακροχρόνιο ίκτεροΓίνεται επίσης απευθείας τεστ Coombs στο νεογέννητο.

Εμμεσοςδιενεργείται δοκιμή αντισφαιρίνηςπριν από τη μετάγγιση αίματος και κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης μιας γυναίκας με αρνητική Rh.

Αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία

Αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία (πρωτοπαθής)– ένα κλασικό αυτοάνοσο νόσημα με άγνωστα αίτια. Η αλληλεπίδραση εντός του ανοσοποιητικού συστήματος διαταράσσεται, γεγονός που οδηγεί στην αντίληψη των ερυθρών αιμοσφαιρίων ως ξένα. Στους λεμφαδένες συντίθενται αντισώματα της κατηγορίας IgG (αντιδρούν στους t 37°C) ή/και IgM (στους t 40°C), τα οποία, όταν συνδέονται στην επιφάνεια του ερυθροκυττάρου, ενεργοποιούν έναν αριθμό ενζύμων (το σύστημα συμπληρώματος) και «τρυπούν» το τοίχωμα του ερυθροκυττάρου, γεγονός που οδηγεί στην καταστροφή του – αιμόλυση.

Τα πρώτα συμπτώματα προκαλούνται τόσο από την καταστροφή των ερυθρών αιμοσφαιρίων όσο και από τη μείωση της αιμοσφαιρίνης. Ανάμεσα τους:

• κούραση, γενική αδυναμία, ευερεθιστότητα
• δύσπνοια
• πόνος στην κοιλιά και στο στήθος, ναυτία
• σκούρο χρώμα ούρων
• πόνος στην πλάτη
• ικτερικός αποχρωματισμός του δέρματος και των βλεννογόνων
• μείωση του αριθμού των ερυθρών αιμοσφαιρίων και

Θετικό αποτέλεσμα άμεσο Δοκιμές Coombs 100% επιβεβαιώνει τη διάγνωση της αυτοάνοσης αιμολυτικής αναιμίας, αποδεικνύοντας την αυτοάνοση προέλευσή της. Ταυτόχρονα, ένα αρνητικό αποτέλεσμα δεν καθιστά δυνατή την αφαίρεση της διάγνωσης.

Δευτεροπαθής αιμολυτική αναιμία

Δευτεροπαθής αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία και θετικό τεστ Coombs μπορεί να εμφανιστούν στις ακόλουθες ασθένειες:

• σύνδρομο Evans
• λοίμωξη από πνευμονία

Ένα θετικό τεστ αντισφαιρίνης για αυτές τις ασθένειες είναι ένα από τα συμπτώματα και όχι κριτήριο διάγνωσης.

Αιμολυτική νόσος του νεογνού

Αιτία αιμολυτική νόσος των νεογνών -ασυμβατότητα της ομάδας αίματος μητέρας και εμβρύου, στις περισσότερες περιπτώσεις σύμφωνα με το σύστημα Rh, σε μεμονωμένες περιπτώσεις - σύμφωνα με το σύστημα AB0, περιστασιακά - σύμφωνα με άλλα αντιγόνα.

Η σύγκρουση Rh αναπτύσσεται εάν το έμβρυο μιας Rh-αρνητικής γυναίκας κληρονομήσει Rh-θετικό αίμα από τον πατέρα.

Η ασθένεια αναπτύσσεται σε ένα νεογέννητο μόνο εάν η μητέρα έχει ήδη αναπτύξει αντισώματα στα αντίστοιχα αντιγόνα, κάτι που συμβαίνει μετά προηγούμενες εγκυμοσύνες, αμβλώσεις, μεταγγίσεις ασυμβίβαστο αίμα. Ο πιο συνηθισμένος λόγος για την ενεργοποίηση της σύνθεσης αντισωμάτων στα αντιγόνα της μεμβράνης των ερυθροκυττάρων είναι ο τοκετός (αιμορραγία εμβρύου-μητέρας). Ο πρώτος τοκετός γενικά γίνεται χωρίς επιπλοκές, αλλά οι επόμενοι είναι γεμάτοι με αιμολυτική νόσο του νεογνού τις πρώτες ημέρες μετά τη γέννηση.

Συμπτώματα αιμολυτικής νόσου του νεογνού:

• κιτρίνισμα του δέρματος
• και τους βλεννογόνους
• διευρυμένο ήπαρ και σπλήνα
• αναπνευστικά προβλήματα
• οίδημα ολόκληρου του σώματος
• διέγερση και σταδιακή καταστολή του κεντρικού νευρικού συστήματος

Αναιμία μετά από μετάγγιση αίματος

Έμμεση δοκιμή Coombsδιενεργείται πριν από τη μετάγγιση αίματος για την αξιολόγηση της συμβατότητας και μια άμεση εξέταση Coombs - μετά από αυτήν εάν υπάρχει υποψία αιμόλυσης μετά τη μετάγγιση, π.χ. παρουσία συμπτωμάτων όπως πυρετός, πότισμα (διαβάστε παρακάτω). Σκοπός της ανάλυσης είναι ο εντοπισμός αντισωμάτων στα μεταγγιζόμενα ερυθρά αιμοσφαίρια που έχουν συνδεθεί με τα ερυθρά αιμοσφαίρια του λήπτη και είναι η αιτία της αιμόλυσης μετά τη μετάγγιση, καθώς και η πρόωρη απομάκρυνση των ερυθρών αιμοσφαιρίων του δότη από την κυκλοφορία του αίματος του ο παραλήπτης (αυτός που έλαβε το αίμα).

Συμπτώματα:

• αύξηση της θερμοκρασίας του σώματος
• εξάνθημα
• πόνος στην πλάτη
• το κόκκινο
• ναυτία
• ζάλη

Αποκρυπτογράφηση

Αξίζει να υπενθυμίσουμε ότι οι θεμελιώδεις κανόνες για την αποκρυπτογράφηση των άμεσων και έμμεσων δοκιμών αντισφαιρίνης είναι οι ίδιοι. Η μόνη διαφορά είναι η θέση των αντισωμάτων - στο αίμα ή στα ερυθρά αιμοσφαίρια.

• Αν Η άμεση δοκιμή Coombs είναι αρνητική– αυτό σημαίνει ότι το αντίσωμα δεν «κάθεται» στα ερυθρά αιμοσφαίρια και θα πρέπει να αναζητηθεί περαιτέρω η αιτία των συμπτωμάτων και να γίνει έμμεση δοκιμή Coombs
• Αν θετικό αποτέλεσμαΤο τεστ Coombs ανιχνεύτηκε μετά από μετάγγιση αίματος, λοιμώξεις, φάρμακα - η θετικότητα διαρκεί έως και 3 μήνες (διάρκεια ζωής των ερυθρών αιμοσφαιρίων 120 ημέρες - 3 μήνες)
• θετικό αποτέλεσμα δοκιμής αντισφαιρίνης με αυτοάνοσο νόσημαδιαρκεί μήνες ακόμη και χρόνια

Κανόνας

• άμεσο τεστ Coombs - αρνητικό
• έμμεση δοκιμή Coombs - αρνητική

Ένα ποιοτικά θετικό αποτέλεσμα μετριέται στον αριθμό των συν από ένα έως τέσσερα (+, ++, +++, ++++), και ποσοτικά σε ψηφιακή μορφή - 1:16, 1:256 κ.λπ.

Ναί. Ο γιατρός σας πρέπει οπωσδήποτε να γνωρίζει ότι έχετε λάβει μετάγγιση αίματος, καθώς επηρεάζει τη σωστή ερμηνεία των αποτελεσμάτων των εξετάσεων τώρα. Όταν λαμβάνετε αίμα κάποιου άλλου (αν και έχει ελεγχθεί πολλές φορές), υπάρχει πάντα η πιθανότητα το σώμα σας να αναπτύξει αντισώματα κατά του μεταγγιζόμενου αίματος. Αυτά τα αντισώματα είναι που θα παρέχουν κακή επιρροήγια την κατάσταση της υγείας. Για τις επόμενες μεταγγίσεις αίματος, ο γιατρός πρέπει να γνωρίζει ότι έχετε ήδη λάβει μεταγγίσεις, πράγμα που σημαίνει ότι έχει υπάρξει χρόνος για τη σύνθεση αντισωμάτων. Για τις έγκυες γυναίκες, αυτές οι πληροφορίες είναι ακόμη πιο σχετικές.

3. Εάν υπάρχει αναντιστοιχία στον παράγοντα Rh μεταξύ μητέρας και παιδιού, θα είναι όλα τα παιδιά άρρωστα;

Εξαρτάται από το αν το παιδί είναι Rh θετικό ή αρνητικό (RhD). Οι φορείς των ομάδων αίματος I, II, III και IV μπορεί να είναι είτε θετικοί είτε αρνητικοί Rh. Σε μια κατάσταση όπου η μητέρα είναι Rh αρνητική και το παιδί είναι Rh θετικό, αντισώματα θα παράγονται ήδη με την πρώτη εγκυμοσύνη, αλλά μόνο μετά την πρώτη γέννηση (ή τη λήξη της εγκυμοσύνης) θα υπάρξει άμεση επαφή μεταξύ του αίματος της μητέρας και το παιδί. Η αιμολυτική δράση των αντισωμάτων θα πραγματοποιηθεί μόνο κατά τη διάρκεια του δεύτερου και επόμενη γέννα, που θα οδηγήσει σε αιμολυτική νόσο στο νεογέννητο.

Κάθε γυναίκα με αρνητικό παράγοντα Rh θα πρέπει να εξετάζεται προσεκτικά κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης και μετά τον τοκετό προληπτική θεραπείαγια την πρόληψη της εμφάνισης αντισωμάτων και περαιτέρω επιπλοκών.

4. Κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, είναι απαραίτητο να γνωρίζω την ομάδα αίματος του συζύγου μου πριν κάνω μια εξέταση Coombs;

Πρέπει όχι μόνο να γνωρίζετε, αλλά και να ελέγχετε τον τύπο αίματος του βιολογικού πατέρα του παιδιού κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης.

Δεδομένα

• προτάθηκε για πρώτη φορά στο Cambridge το 1945
• κατώφλι ευαισθησίας - τουλάχιστον 300 σταθερά μόρια αντισωμάτων σε ένα ερυθρό αιμοσφαίριο
• ο αριθμός των αντισωμάτων που προκαλούν αιμόλυση - ξεχωριστά για κάθε άτομο (από 16-30 έως 300)
• η δυναμική άλλων εργαστηριακών δεικτών αιμολυτικής αναιμίας (αιμοσφαιρίνη, χολερυθρίνη, δικτυοερυθρά αιμοσφαίρια) μπορεί να ομαλοποιηθεί και η δοκιμή Coombs θα παραμείνει στο ίδιο επίπεδο

Η δοκιμή Coombs τροποποιήθηκε τελευταία: 16 Μαρτίου 2018 από Μαρία Μποντιάν

Κανονικά, δεν υπάρχουν αντισώματα για τα ερυθρά αιμοσφαίρια στο αίμα.

Η άμεση δοκιμή Coombs είναι μια δοκιμή αντισφαιρίνης (συγκόλληση σε γέλη που επιτρέπει την ανίχνευση πλήρων δισθενών αντισωμάτων), η οποία ανιχνεύει αντισώματα κατηγορίας IgG και το συστατικό C3 του συμπληρώματος στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Τυπικά, τα αντισώματα που ανιχνεύονται με την άμεση δοκιμή Coombs έχουν ευρεία ειδικότητα που δεν σχετίζεται με ένα καλά εδραιωμένο αντιγόνο. Μια θετική άμεση δοκιμή Coombs δείχνει ξεκάθαρα ότι ο ασθενής έχει αιμολυτική αναιμία, αν και δεν πάσχουν όλοι οι ασθενείς με θετική άμεση δοκιμασία αντισφαιρίνης από αυτή τη νόσο. Στο 10% περίπου των ασθενών, τα αντισώματα ή τα συστατικά του συμπληρώματος στη μεμβράνη των ερυθρών αιμοσφαιρίων δεν μπορούν να προσδιοριστούν με απευθείας τεστ Coombs (το τεστ είναι αρνητικό), αλλά παρόλα αυτά πάσχουν από αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία. Για να διευκρινιστεί η ειδικότητα των αντισωμάτων σε τέτοιες περιπτώσεις, χρησιμοποιούνται δοκιμές με την έκλουσή τους. Ένα άμεσο τεστ Coombs, θετικό μόνο για συμπλήρωμα, συνήθως αναφέρεται σε κρύα αντισώματα τύπου IgM. Σε αυτή την περίπτωση, τα αντισώματα IgM δεν υπάρχουν στα ερυθρά αιμοσφαίρια όταν βασική θερμοκρασίασώματα. Ωστόσο, λόγω του γεγονότος ότι τα αντισώματα IgM σταθεροποιούν ενεργά το συμπλήρωμα και το συμπλήρωμα παραμένει στα ερυθρά αιμοσφαίρια, με αυτή τη μορφή αυτοάνοσης αιμολυτικής αναιμίας (νόσος της κρύας αγγουτινίνης), η δοκιμή Coombs θα είναι θετική μόνο για συμπλήρωμα.

Το άμεσο τεστ Coombs είναι θετικό για αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία που προκαλείται από θερμά αντισώματα, αυτοάνοση αναιμία που προκαλείται από φάρμακα (όταν λαμβάνουν μεθυλντόπα, έως και 20% των ασθενών έχουν θετική αντίδραση), τύπος αιμολυτικής αναιμίας με προσρόφηση φαρμάκου, τύπος αιμολυτικού ανοσοσύνθετου αναιμία (το τεστ είναι θετικό μόνο για C3), με αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία που προκαλείται από αντισώματα κρύου - νόσος ψυχρής συγκολλητίνης (η εξέταση είναι θετική μόνο για C3). Στην παροξυσμική ψυχρή αιμοσφαιρινουρία, το άμεσο τεστ Coombs είναι αρνητικό.

Έμμεση δοκιμή Coombs - μια έμμεση δοκιμή αντισφαιρίνης (ανιχνεύει ημιτελή αντισώματα) σας επιτρέπει να προσδιορίσετε άτυπα αντισώματα στο αίμα, συμπεριλαμβανομένων αλλοαντισωμάτων σε ξένα αντιγόνα ερυθροκυττάρων. Πήρε το όνομά του (έμμεσο) λόγω του ότι εμφανίζεται σε 2 στάδια. Αρχικά, ο ορός αίματος του ασθενούς, που περιέχει ημιτελή αντισώματα, αλληλεπιδρά με το προστιθέμενο σωματιδιακό Ag diagnosticum χωρίς ορατές εκδηλώσεις. Στο δεύτερο στάδιο, ο προστιθέμενος ορός αντισφαιρίνης αλληλεπιδρά με ατελή αντισώματα προσροφημένα στα αντιγόνα, με την εμφάνιση ενός ορατού ιζήματος. Η μετάγγιση ομόλογων (αλλογενών) ερυθρών αιμοσφαιρίων ή η εγκυμοσύνη είναι οι περισσότερες κοινούς λόγουςσχηματισμό αυτών των αντι-ερυθροκυτταρικών αντισωμάτων. Ο συνδυασμός μιας θετικής έμμεσης δοκιμής Coombs με μια αρνητική άμεση δοκιμή δεν παρέχει τίποτα για τη διάγνωση της αυτοάνοσης αιμολυτικής αναιμίας. Μια θετική έμμεση δοκιμή Coombs προκαλεί ορισμένες δυσκολίες κατά την επιλογή αίματος για μετάγγιση και τη διεξαγωγή διασταυρούμενης δοκιμής για συμβατότητα με διατηρημένο αίμα, αλλά δεν έχει άλλη διαγνωστική αξία.