Клініко-лабораторна діагностика ВІЛ-інфекціїмає три напрямки:

1. Встановлення факту інфікованості ВІЛ, діагнозу ВІЛ-інфекції.
2. Визначення стадії клінічного перебігу хвороби та виявлення вторинних захворювань.
3. Прогноз прогресії клінічного перебігу захворювання, лабораторний контроль ефективності лікування та побічних ефектів антиретровірусних препаратів.

1. Встановлення інфікованості ВІЛ, діагнозу ВІЛ-інфекції

Для визначення ВІЛ-інфікованості використовують такі специфічні показники: антитіла до ВІЛ, антигени ВІЛ, РНК ВІЛ та ДНК провірусу. Антитіла до ВІЛ визначаються методом імуноферментного аналізу (ІФА) або імуноблотингу, що є по суті різновидом ІФА. Антигени (білки) ВІЛ визначаються методом ІФА. За допомогою молекулярно-генетичних методів полімеразної ланцюгової реакції (ПНР) та bДНК можна визначати РНК ВІЛ та ДНК провірусу. Застосування додатково методу гібридизації нуклеїнових кислот із специфічними ДНК-зондами дозволяє перевірити специфічність послідовностей ДНК, отриманих під час проведення ПЛР. Чутливість ПЛР - виявлення вірусних генів в одній із п'яти тисяч клітин.

При первинній інфекції спостерігається наступна динаміка маркерів ВІЛ у інфікованих крові. У перший місяць внаслідок активації реплікативного процесу відбувається різке збільшення вірусного навантаження (зміст РНК ВІЛ у плазмі), потім, внаслідок дисемінації вірусу та масового інфікування клітин-мішеней у крові та лімфатичних вузлах, стає можливим визначення провірусної ДНК. Першорядну діагностичну цінність має факт виявлення ДНК провірусу, інтегрованої в геном клітини-мішені.

Вірусне навантаження відбиває інтенсивність реплікативного процесу в інфікованих клітинах. У період первинної інфекції рівень вірусного навантаження різний при інфікуванні різними субтипами ВІЛ, проте динаміка змін приблизно однакова. Так, при інфікуванні субтипом, наприклад, якщо в перший місяць після зараження значення вірусного навантаження становить 700 копій/мл, то в 2-й місяць відбувається зниження до 600, в 3-й - до 100, в 4-й - до 50 копій/мол. Така динаміка спостерігається на тлі наростання вмісту у крові специфічних антитіл до ВІЛ. Зміст провірусної ДНК у мононуклеарах крові ВІЛ-інфікованих характеризується відносною сталістю протягом перших 6 місяців з незначними флюктуаціями у деяких субтипів. Таким чином, РНК- і ДНК-навантаження не є тотожними.

У стадії інкубації протягом деякого часу немає утворення специфічних антитіл до ВІЛ у кількості, достатньому визначення існуючими лабораторними методами. До реєстрації антитіл протягом дуже короткого часу спостерігається поява у крові білка Nef, яким репресує реплікативний процес, та структурного білка р24. Антиген р24 може бути виявлений у крові методом іммупоферментного аналізу вже через 1-2 пед після зараження та визначатися до 8-го тижня, потім його вміст різко знижується. Далі у клінічному перебігу ВІЛ-інфекції відзначається другий підйом вмісту в крові білка р24. Він посідає період формування СНІД. Зникнення в крові вільних (не пов'язаних антитілами) серцевинних білків р24 та поява специфічних антитіл до білків ВІЛ знаменують настання сероконверсії (рис. 9.6).

Віремія та антигенемія викликають утворення специфічних антитіл класу IgM (анти-р24, анти-gр41, анти-gр120, анти-gр160). Вільні антитіла класів IgM та IgG до білка р24 можуть з'явитися, починаючи з 2-го тижня, їх вміст підвищується протягом 2-4 тижнів, досягаючи певного рівня, на якому зберігається протягом місяців (IgM) та років (IgG) (рис. 9.7).

Поява повної сероконверсії, коли в периферичній крові реєструється високий рівень специфічних антитіл класу IgG до структурних білків ВІЛ р24, gp41, gp120, gр160 істотно полегшує діагностику ВІЛ-інфекції. Антитіла до ВІЛ з'являються у 90-95% інфікованих протягом 3-х місяців після зараження, у 5-9% - у період від 3 до 6 місяців від моменту зараження і у 0,5-1% - у пізніші терміни.

Незважаючи на те, що антитіла до ВІЛ з'являються в останню чергу, основним лабораторним діагностичним показником дотепер є виявлення специфічних антитіл методом ІФА та імуноблотингу.

Дані, подані у табл.9.2 [показати] та 9.3 [показати] , наочно демонструють високу чутливість сучасних імуноферментних тест-систем щодо антитіл до ВІЛ, що перевищує чутливість імуноблотингу. У деяких випадках при отриманні первинного позитивного результату ІФА підтвердити його в імуноблотингу можна тільки через 2-3 тижні.

При обстеженні хворих на ВІЛ-інфекцію (ВІЛ-інфікованих) з використанням тест-систем імуноблотингу провідних фірм світу у всіх випадках виявляються антитіла до gp160 і р24/25, до інших білків антитіла виявляють у 38,8-93,3% випадків (табл. 9.4 [показати] ).

Труднощі з виявленням антитіл у хворих на ВІЛ-інфекцію можуть виникнути в періоди масивної віремії та антигенемії, коли специфічні антитіла в крові пов'язані з вірусними частинками, і реплікативний процес випереджає напрацювання нових противірусних антитіл. Така ситуація може виникати та зникати протягом інфекційного процесу.

У пацієнтів з вихідно ослабленою імунною системою віремія та антигенемія з'являються раніше та зберігаються на високому рівні до результату захворювання. У таких хворих відзначається низький вміст вільних антитіл до ВІЛ, обумовлений двома причинами - недостатньою продукцією антитіл В-лімфоцитами та зв'язуванням антитіл віріонами та розчинними білками ВІЛ, тому для визначення інфікованості потрібні тест-системи з підвищеною чутливістю або модифікації методів аналізу, що передбачають етап вивільнення. з імунних комплексів.

Найчастіше зниження вмісту антитіл до ВІЛ за вказаними причинами відбувається у термінальній стадії, коли антитіла до ВІЛ у сироватці кроїм можуть не вловлюватися не за допомогою методів імуноферментного аналізу, ні методу іммумоблотингу (Western blot). Крім появи специфічних антитіл до ВІЛ імунна відповідь у перші 4 місяці характеризується зниженням вмісту в крові інфікованого CD4+- та збільшенням СD8+-клітин. Далі вміст клітин, що несуть рецептори CD4 і CD8, стабілізується і залишається незмінним протягом деякого часу. Збільшення вмісту CD8-лімфоцитів є захисною реакцією, т.к. клітиннозалежна цптотоксичність реалізується СD8+-лімфоцитами, спрямованими на знищення ВПЛ-інфікованих клітин. Спочатку цитотоксичні лімфоцити (ЦТЛ) реагують на регуляторний білок вірусу Nef, що відіграє важливу роль у зниженні вірусного (РНК) навантаження в плазмі ВІЛ-інфікованого в перші місяці. Потім формується відповідь ЦТЛ та до інших, у т.ч. структурним, білкам ВІЛ, внаслідок чого через 12 місяців після зараження цптотоксичний ефект значно зростає.

Схеми лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції

З урахуванням наведеної динаміки специфічних маркерів ВІЛ-інфекції практично доцільно дотримуватися наступних схем лабораторної діагностики в дорослих (рис. 9.8-9.10).

На схемах відображено три основні етапи первинної лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції:

1. Скринінговий.
2. Референтний.
3. Експертний.

Необхідність кількох етапів лабораторної діагностики обумовлена ​​передусім економічними міркуваннями. Так, наприклад, вартість проведення за допомогою вітчизняних тест-систем одного експертного дослідження методом імуноблотингу становить до 40 доларів США, скринінгового (методом ІФА) - близько 0,2, тобто співвідношення становить 1:200.

На першому етапі (рис. 9.8) у обстежуваних проводиться визначення антитіл до ВІЛ за допомогою однієї імуноферментної тест-системи, призначеної для детекції антитіл до обох типів вірусу – ВІЛ-1 та ВІЛ-2.

Фірмами-виробниками в пропонованих тест-системах антигенної основи використовуються вірусний лізат, рекомбінантні білки, синтетичні пептиди. Кожен із перелічених носіїв антигенних детермінант ВІЛ має свої переваги та недоліки. Тому при виборі тест-систем приблизно рівної вартості слід віддавати перевагу наборам з найбільшою чутливістю (бажано 100%). Серед тест-систем однакової вартості та чутливості доцільно зупинитися на тих, що мають максимальну специфічність.

На основі лізату вірусу було створено перші тест-системи для лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції. У 80-х роках такі тест-системи характеризувалися чутливістю менше 100% і низькою специфічністю, що виявляється великою кількістю (до 60%) хибнопозитивних результатів.

При формуванні віріона в культурі лімфоцитів його оболонка створюється із зовнішньої мембрани і тому містить антигени головного комплексу гістосумісності І та ІІ класів. Ця обставина обумовлює хибно-позитивні реакції в тому випадку, якщо в крові пацієнтів є антитіла до алоантигенів гістосумісності.

Пізніше для одержання вірусу було запропоновано використовувати культуру макрофагів, в яких вірусні частинки формуються переважно внутрішньоклітинно шляхом брунькування не від зовнішньої мембрани клітини, а від мембран ендоплазматичного ретикулуму. Така технологія дозволила знизити кількість хибнопозитивних результатів.

Одними з найкращих за найважливішими характеристиками - чутливості та специфічності - визнані імуноферментні тест-системи, у складі яких використана комбінація очищеного вірусного лізату з синтетичними пептидами, що є найбільш антигензначними ділянками білків вірусу, або рекомбінантними білками.

Чутливість тест-системи залежить також від характеристик інших компонентів наборів. Так, тест-системи, в яких використані кон'югати, що розпізнають антитіла не тільки класу IgG, але і IgM, і IgА, дозволяють виявляти більш ранню фазу сероконверсії. Перспективним є застосування тест-систем, за допомогою яких можна одночасно визначати і противірусні антитіла, і антиген р24, що робить ще більш ранньою лабораторну діагностику ВІЛ-інфекції.

Первинний позитивний результат необхідно перевіряти ще раз повторним дослідженням зразка в тій же тест-системі, але бажано іншої серії та іншим лаборантом. Якщо за повторному дослідженні отримано негативний результат, дослідження проводиться втретє.

Після підтвердження позитивного результату бажано здійснити повторне взяття крові та дослідити її на антитіла до ВІЛ як первинну. Повторне взяття крові дозволяє попередити помилку, зумовлену неточністю маркування пробірок та заповнення бланків напрямків.

Серопозитивна на скринінговому етапі сироватка крові спрямовується на референтні дослідження, які виконуються з використанням двох-трьох високоспецифічних ІФА тест-систем. У разі двох позитивних результатів проводять експертне дослідження методом імуноблотингу.

Застосування в референтній діагностиці імуноферментних тест-систем, за допомогою яких можна диференціювати специфічні антитіла до ВІЛ-1 та ВІЛ-2, полегшує подальшу роботу та дозволяє досліджувати позитивний зразок на експертному етапі одночасно з використанням відповідного імуноблотингу (ВІЛ-1 або ВІЛ-2) .

Лабораторний експертний висновок про інфікованість ВІЛ виноситься лише на підставі позитивного результату імуноблотингу (Western blot). Під час проведення експертної діагностики необхідно користуватися запропонованими у 1990 р. групою експертів ВООЗ номенклатурою генів та генних продуктів ВІЛ (табл. 9.5 [показати] ).

Специфічність смуг на імуноблоті слід оцінювати дуже уважно та ретельно, використовуючи при цьому результати досліджень контрольних сироваток (позитивної та негативної), які проводяться паралельно з дослідженням дослідних проб, та зразок імуноблоту з позначенням білків ВІЛ (додається фірмою-виробником до тест-системи). Інтерпретацію отриманих результатів слід проводити відповідно до інструкції, що додається до тест-системи. Як правило, критерієм позитивності є обов'язкова наявність антитіл до двох білків (попередника, зовнішнього або трансмембранного), що кодується геном env, і можлива присутність антитіл до продуктів двох інших структурних генів ВІЛ - gag і pol (табл. 9.6 [показати] ).

У разі отримання сумнівного результату необхідно скористатися переліком рекомендації для остаточного з'ясування результатів імуноблотингу (табл. 9.7 [показати] ).

За рекомендаціями Російського науково-методичного центру з профілактики та боротьби зі СНІДом, позитивним вважається результат за наявності антитіл хоча б до одного з білків gp41, gp120, gp160 у поєднанні з антитілами до інших специфічних білків ВІЛ-1 або без них. Дані рекомендації зроблено на підставі досвіду роботи із сироватками дітей із внутрішньолікарняних вогнищ, у яких часто визначалися антитіла лише до одного з білків оболонки вірусу.

Основна частина первинно обстежених серопозитивних в ІФА пацієнтів відноситься до фази персистуючої генералізованої лімфаденопатії (ПГЛ) або до безсимптомної фази. Тому на імуноблоті (нітроцелюлозної смужці, на якій іммобілізовані білки ВІЛ) визначається, як правило, наступна комбінація антитіл до ВІЛ-1: антитіла до оболонкових білків gp160, gp120 і gp41, кодованим геном env, у поєднанні з антибілками до серця нуклеокапсиду, що кодується геном gag) та р31/34 (ендонуклеаза, що кодується геном pol).

Позитивні реакції тільки з білками gag та/або роl можуть мати місце у разі ранньої фази сероконверсії, а також вказувати на інфекцію, спричинену ВІЛ-2, або неспецифічну реакцію.

У разі отримання сумнівного результату можливе використання різних методичних прийомів, які дозволяють уточнити факт ВІЛ-інфекції.

Залежно від технічних можливостей (наявності діагностичних наборів та реактивів, оснащеності спеціальною апаратурою та підготовки персоналу) експертної лабораторії проводять додаткові діагностичні дослідження (рис.9.10).

У ряді випадків доцільно застосування молекулярно-генетичних методів, що дозволяють визначити генетичні послідовності ВІЛ у сироватці, лімфоцитах крові або пунктатах лімфовузлів. Перевірку специфічності послідовностей ДНК, отриманих в результаті ПЛР, можна провести методом гібридизації нуклеїнових кислот із специфічними ДНК-зондами.

Методи радіоімуннопреципітації (РІП) та непрямої імунофлюоресценції (ІФл) можуть бути також використані для остаточної верифікації сироваток із сумнівними результатами в імуноблотингу.

Виявлення РНК ВІЛ у плазмі якісним чи кількісним методом не є значущим для діагностики інфекції ВІЛ. Такий результат повинен бути підтверджений стандартними методами, такими як імуноблотинг, через 2-4 місяці після отримання первинної сумнівної або негативної відповіді.

Виділення ВІЛ у культурі клітин є істиною в останній інстанції. Проте метод складний, дорогий і виконується лише у спеціально обладнаних науково-дослідних лабораторіях.

Зміст СD4+ - клітин у крові є неспецифічним показником, однак у спірних випадках (ІФА "+", імуноблот "-", наявність клінічних ознак ВІЛ-інфекції/СНІД) він може бути використаний як орієнтир для прийняття експертного рішення. Якщо ж у лабораторії є можливість виконання лише імуноблотингу, слід дотримуватися рекомендацій, викладених у табл. 9.7 та на рис. 9.9.

Особи, при експертному дослідженні сироватки яких отримані сумнівні (невизначені) результати, за винятком випадків виявлення антитіл лише до р17 (ВІЛ-1) або р16 (ВІЛ-2), повинні проходити повторне тестування протягом 6 місяців (через 3 місяці). У разі істинної ВІЛ-інфекції після 3-6 місяців у спектрі антитіл спостерігають "позитивну" динаміку - додаткове утворення антитіл до інших білків вірусу. Помилкова реакція характеризується збереженням протягом тривалого часу сумнівної картини імунного блотингу або зникненням підозрілих смуг. Якщо після закінчення зазначеного терміну результати повторного імуноблотингу будуть негативними або залишаться сумнівними, то за відсутності факторів ризику, клінічних симптомів або інших факторів, пов'язаних з ВІЛ-інфікуванням, людина може вважатися серонегативною щодо антитіл до ВІЛ-1 та ВІЛ-2.

Хибнопозитивні результати, зумовлені вмістом у крові пацієнтів антитіл до алоантигенів гістосумісності, що входять до складу оболонки ВІЛ, виявляються на імуноблоті у вигляді смуг на рівні gp41 та gp31. Причини інших неспецифічних реакцій (наприклад, р24, що часто зустрічається в осіб з аутоімунними процесами) поки не з'ясовані.

Удосконалення технології виробництва імунноферментних тест-систем дозволило досягти високої чутливості – до 99,99%, тоді як чутливість методу імуноблотингу становить 97%. Тому негативний результат в імуноблотингу при позитивних результатах ІФА може вказувати на початковий період сероконверсії, що характеризується низьким рівнем специфічних антитіл. Тому необхідно повторити дослідження через 1,5-2 міс., тобто відрізок часу, необхідний завершення сероконверсии, досягнення у крові концентрації специфічних антитіл, достатньої виявлення методом иммуноблотинга.

Позитивний результат (результати) дослідження на референтному або лише скринінговому етапі лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції, тобто позитивний результат у будь-якій імуноферментній тест-системі, в результаті не підтверджений експертними методами, інтерпретується як наявність у крові антитіл перехресного реагування, що обстежується. Під перехресним реагуванням мають на увазі зв'язування антитілами неспецифічних ділянок на білках або пептидах ВІЛ, що використовуються як антигенна основа в тій тест-системі, в якій отримано позитивний результат.

За відсутності імунодефіциту та клінічних ознак ВІЛ-інфекції такі особи вважаються серонегативними щодо антитіл до ВІЛ та мають бути зняті з обліку.

Остаточний діагноз ВІЛ-інфекцій встановлюється лише на підставі всіх клінічних, епідеміологічних та лабораторних даних. Повідомити пацієнта діагноз інфікованості ВІЛ має право тільки лікар.

Основним методом підтверджуючої (експертної) лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції є імуноблотинг. Однак, враховуючи його нижчу порівняно з ІФА чутливість, низка дослідників запропонувала використання комбінації кількох тест-систем для остаточного визначення наявності специфічних антитіл до ВІЛ. Так, наприклад, G. van der Groen із співавт. запропонували альтернативний імуноблотинг спосіб перевірки позитивних результатів скринінгового етапу лабораторної діагностики ВІЛ-інфекції. Він передбачає дослідження матеріалу паралельно у трьох тест-системах, які ґрунтуються на різних методах детекції специфічних антитіл до ВІЛ (кілька варіантів ІФА, реакція аглютинації) з використанням антигенів різної природи. Авторам вдалося підібрати такі комбінації тест-систем, використання яких забезпечує 100% чутливість і специфічність при порівнянні з результатами, отриманими в імуноблотінгу.

Дешевизна такого методу експертної діагностики є безперечною перевагою, проте відсутність інформації, до яких конкретно білків вірусу є антитіла в крові пацієнта, не дозволяє оцінювати специфічність реакції в кожному окремому випадку, а також відстежувати зміни спектра антитіл на ранній стадії сероконверсії.

Лабораторна діагностика ВІЛ-інфекції у дітей, народжених від ВІЛ-інфікованих матерів має свої особливості. З моменту народження протягом тривалого часу (до 15 місяців) у крові таких дітей можуть циркулювати материнські антитіла до ВІЛ. Через плацентарний бар'єр проникають лише імуноглобуліни класу IgG, тому виявлення у дитини специфічних до ВПЛ нмупоглобулінів класів IgМ та IgA дозволяє підтвердити інфікованість, але негативний результат не може свідчити про відсутність ВІЛ.

Діти віком до 1 міс реплікації ВПЛ ще немає, і єдиним методом верифікації є ПЛР. Визначення антигену р24 у дітей віком від 1 міс також є підтверджуючим методом.

Відсутність антитіл до ВІЛ у новонароджених не означає, що вірус не проник через плацентарний бар'єр. У будь-якому випадку діти ВІЛ-інфікованих матерів підлягають лабораторно-діагностичному обстеженню та спостереженню протягом 36 місяців від народження.

Результати лабораторних досліджень на маркери ВІЛ-інфекції потребують обережної інтерпретації та повинні розглядатися лише в сукупності з даними епідеміологічного та клінічного обстеження. З іншого боку, слід зазначити, що, незважаючи на високу чутливість сучасних методів, негативні результати досліджень не можуть повністю виключити наявність ВІЛ-інфекції. Тому негативний результат дослідження, наприклад, методом імуноблотингу, може бути сформульований лише як відсутність специфічних антитіл до ВІЛ-1 та ВІЛ-2.

Діагностика ВІЛ-інфекції у серонегативних хворих

Якість тест-систем, що застосовуються у лабораторній діагностиці ВІЛ-інфекції, з кожним роком покращується, підвищується їхня чутливість. Проте висока мінливість ВІЛ може призвести до появи нових типів, антитіла яких можуть бути не розпізнані існуючими тест-системами. Крім того, відомі випадки атипової гуморальної відповіді імунної системи організму-господаря на вірус. Так, L.Montagnier у 1996 р. повідомив про двох хворих на СНІД, у яких протягом попередніх кількох років не були виявлені в крові специфічні антитіла, діагноз поставлений на основі клінічних даних та підтверджений лабораторно лише виділенням ВПЛ-1 у культурі клітин. У таких випадках необхідно використовувати рекомендації ВООЗ, згідно з якими клінічна діагностика ВІЛ-інфекції у дорослих та дітей можлива за наявності одного із 12 СНІД-індикаторних захворювань:

1. кандидоз стравоходу, трахеї, бронхів, легень;
2. позалегеневий криптококоз;
3. криптоспоридіоз з діареєю більше одного місяця;
4. цитомегаловірусне ураження будь-якого органу (за винятком і крім печінки, селезінки та лімфатичних вузлів у хворого старше 1 міс):
5. інфекція, обумовлена ​​вірусом простого герпесу, що персистує більше 1 міс у хворого старше 1 міс;
6. лімфома головного мозку у хворого молодше 60 років;
7. лімфоцитарна інтерстиціальна пневмонія у дитини віком до 13 років;
8. дисимінована інфекція, спричинена бактеріями групи Micobacterium avium intracellulare або M.Kansassii;
9. пневмоцистна пневмонія;
10. прогресуюча багатоосередкова лейко-енцефалопатія;
11. токсоплазмоз центральної нервової системи у хворих старше 1 місяця.

Наявність одного із цих захворювань дозволяє діагностувати ВІЛ-інфекцію за відсутності можливості проведення лабораторного дослідження крові на наявність антитіл до ВІЛ або навіть при отриманні серонегативного результату.

Джерело: Медична лабораторна діагностика, програми та алгоритми За ред. проф. Карпіщенко А.І., СПб, Інтермедика, 2001

Увага!При позитивних та сумнівних реакціях термін видачі результату може бути збільшений до 10-ти робочих днів.

Антитіла до ВІЛ 1, 2 типу, антиген p 24 - дослідження специфічних антитіл, що виникли в організмі у відповідь на інфікування вірусом імунодефіциту людини (ВІЛ) 1, 2 типів та антигену p 24 вірусу імунодефіциту людини.

ВІЛ(Вірус імунодефіциту людини) - вірус сімейства ретровірусів (вірус з повільною реплікацією), який вражає клітини імунної системи людини (CD4, Т-хелпери) і викликає синдром набутого імунодефіциту.

Тривалість інкубаційного періоду зазвичай становить 3-6 тижнів. У поодиноких випадках антитіла до ВІЛ починають виявлятися лише через кілька місяців і більше після інфікування. Рівень їхньої концентрації може помітно знижуватися в термінальному періоді захворювання. У поодиноких випадках антитіла до ВІЛ-інфекції можуть зникати на тривалий термін.

Антиген р 24 ВІЛ 1,2типу, виявлений у сироватці крові, свідчить про ранній етап захворювання. Протягом кількох перших тижнів після зараження кількість вірусу та антигену р 24 у крові стрімко наростає. Як тільки починають вироблятися антитіла до ВІЛ 1, 2 рівень антигену р 24 починає знижуватися.

Визначення антигену р 24 дозволяє проводити діагностику ВІЛ-інфекції на ранніх стадіях інфікування до вироблення антитіл.

Одночасне виявлення антитіл до вірусу ВІЛ-1,2 та антигену вірусу р 24 підвищує діагностичну цінність дослідження.

Даний аналіз дозволяє виявити антитіла до ВІЛ-1,2, а також антиген 24 ВІЛ-1,2. Аналіз дозволяє діагностувати ВІЛ-інфекцію на ранніх стадіях.

Шляхи передачі інфекції:

• статевий;
• при переливанні крові;
• від зараженої матері до новонародженого.

ВІЛ інфекція- тривале та тяжке захворювання, яке супроводжується ураженням клітин імунної системи людини; проти нього поки що не розроблені ефективні методи лікування та засоби специфічної профілактики (вакцини).

Джерелом вірусу імунодефіциту є людина. Вірус у людини можна виділити з насіннєвої рідини, секрету шийки матки, лімфоцитів, плазми крові, спинномозкової рідини, сліз, слини, сечі та материнського молока, але концентрація вірусу в них різна. Найбільша концентрація вірусу міститься у наступних біологічних середовищах: у спермі, крові, секреті шийки матки.

Шляхи, якими вірус може передаватися від зараженої людини до незараженої, обмежені.

Шляхи передачі ВІЛ-інфекції
Існують 3 способи передачі вірусу імунодефіциту:

1. Статевий шлях - є найчастішим. Зараження відбувається при незахищеному сексуальному контакті, у своїй вірус проникає всередину організму через слизові оболонки. Ранки на слизовій оболонці, виразки, запалення-підвищують ймовірність зараження. У осіб, які страждають на інфекції, що передаються статевим шляхом, ризик зараження при контакті з інфікованою людиною вищий у 2–5 разів. Для передачі вірусу важлива як ступінь інтимності контакту, а й кількість збудника. При незахищеному сексі ймовірність зараження жінки від чоловіка приблизно втричі вища, оскільки в її організм потрапляє більша кількість вірусу, і у жінки значно більша площа поверхні, через яку вірус може проникнути в організм (слизова піхви). Ризик зараження найвищий при анальному сексуальному контакті і найменше - при оральному.
2. Контакт із кров'ю інфікованої людини: а) при використанні загальних голок, шприців, посуду для приготування наркотиків, нестерильного медичного інструментарію; б) запровадження наркотиків, у приготуванні яких використовується кров; в) використання, переливання інфікованої донорської крові та виготовлених із неї препаратів (ризик вкрай низький, оскільки всі донори, а також кров ретельно перевіряються).
3. Від ВІЛ-інфікованої матері (вертикальний шлях) до плоду протягом вагітності, при проходженні через родові шляхи, при годівлі груддю.

СНІД – термінальна стадія ВІЛ інфекції
СНІД розвивається не одразу. У більшості людей з наявністю антитіл до вірусу імунодефіциту клінічні ознаки захворювання на СНІД можуть не проявлятися від 2-х до 10 років і більше, а при успішному лікуванні даний термін значно збільшується. Це пов'язано з тим, що необхідно досить тривалий час зниження кількості CD4 T-клітин рівня, у якому відбувається ослаблення імунної системи.

Вірус вражає й інші види клітин, у тому числі клітини центральної нервової системи та клітини червоної та білої крові, в яких вірус, мабуть, перебуває в дрімаючому стані протягом тривалого часу, перш ніж починає активно розмножуватися. Чинники, що впливають прогресування захворювання, різноманітні: генетичні особливості, штам вірусу, психологічний стан пацієнта, умови життя та інші.

Перебіг хвороби і тривалість стадій залежать також від того, чи людина отримує лікування, і якщо «так», то які препарати.

4 стадії ВІЛ-інфекції

• Інкубаційний період ("період вікна") - це час від моменту зараження до появи в крові людини антитіл (захисних білків імунної системи) до вірусу. У цей період інфекція ніяк не проявляється, всі аналізи – негативні, проте людина вже заразна. Інкубаційний період може тривати до 3 місяців (загалом 25 днів).
• Стадія первинних виявів. Триває в середньому 2-3 тижні та характеризується різким підвищенням кількості вірусу в крові. Даний стан називають «сіркоконверсійною хворобою», тому що в цей час антитіла до вірусу з'являються в крові у кількостях, достатніх для виявлення під час проведення аналізів. Цей період у більшості осіб ніяк не виявляється, проте у 20–30% можуть відзначатись грипоподібні явища: підвищення температури тіла, збільшення лімфатичних вузлів, головний біль, біль у горлі, нездужання, втома та біль у м'язах. Цей стан проходить через 2-4 тижні без будь-якого лікування.
• Безсимптомний період. Настає після закінчення первинних проявів інфекції та триває за відсутності лікування в середньому до 10 років. Протягом цього періоду в організмі людини триває боротьба імунної системи з вірусом: поступово збільшується кількість вірусних частинок та знижується імунітет. До кінця цієї стадії у інфікованих осіб відзначається збільшення лімфатичних вузлів, нічні поти, загальне нездужання і з'являються перші прояви опортуністичних інфекцій, що виникають у людини при сильному ослабленні імунної системи. Ці інфекції викликаються мікроорганізмами, що оточують нас і не викликають інфекції у здорових людей. Послаблення імунної системи може призвести до розвитку інших захворювань, наприклад, раку.
• СНІД є останньою стадією даної хвороби і характеризується появою низки захворювань внаслідок ослаблення імунної системи організму. Як правило, у хворих спостерігається дуже низька кількість CD4T; одна або кілька важких опортуністичних інфекцій (пневмоцистна пневмонія, важка грибкова інфекція, туберкульоз та ін.), які і стають причиною смерті за відсутності лікування; онкологічне захворювання; енцефалопатія (ураження мозку, що супроводжується розвитком недоумства).

Основним методом лабораторної діагностики є виявлення антитіл до вірусу за допомогою імуноферментного аналізу.

Порядок проведення лабораторного дослідження на наявність антигенів вірусу імунодефіциту людини та антитіл до цього вірусу суворо регламентований наказами Міністерства охорони здоров'я Російської Федерації і включає:

• етап скринінгового (відбіркового) дослідження імуноферментними (ІФА) методами, дозволеними для використання;
• етап верифікаційного (що підтверджує) дослідження методом імуноблоту у лабораторії міського центру СНІД.

Лабораторна діагностика наявності імунодефіциту вірусу у дітей, народжених від інфікованих цим вірусом матерів має свої особливості. У крові дітей до 15 місяців від народження можуть циркулювати материнські антитіла до вірусу (класу Ig G). Відсутність антитіл до вірусу новонароджених не означає, що він не проник через плацентарний бар'єр. Діти матерів, що інфіковані вірусом імунодефіциту, підлягають лабораторно-діагностичному обстеженню протягом 36 місяців після народження.

До отримання позитивного результату в імуноблоті та при негативному результаті дослідження людина вважається здоровою та протиепідемічні заходи з нею не проводяться.

Матеріалом для дослідження антитіла до вірусу імунодефіциту є венозна кров, здавати яку бажано на голодний шлунок.

Зрозуміло, тест на наявність вірусу – це добровільна справа кожної людини. Аналізи на носійство імунодефіциту вірусу не можуть призначатися примусово, без згоди пацієнта. Але треба розуміти і те, що чим швидше буде поставлено правильний діагноз, тим більше шансів прожити довге та повноцінне життя, навіть будучи його носієм.

Показання:

• збільшення лімфатичних вузлів понад дві області;
• лейкопенія з лімфопенією;
• нічна пітливість;
• різке схуднення неясної причини;
• діарея понад три тижні неясної причини;
• лихоманка неясної причини;
• планування вагітності;
• передопераційна підготовка, госпіталізація;
• виявлення наступних інфекцій або їх поєднань: туберкульоз, маніфестний токсоплазмоз, герпес-вірусна інфекція, що часто рецидивує, кандидоз внутрішніх органів, повторні невралгії герпес-zoster, викликана мікоплазмами, пневмоцистою або легіонелами пневмонія;
• саркома Капоші у молодому віці;
• випадкові статеві контакти.

Правила оформлення на ВІЛ:
Оформлення заявок для проведення досліджень у ДНКОМ здійснюється за паспортом або документом, що його замінює (міграційна карта, тимчасова реєстрація за місцем проживання, посвідчення військовослужбовця, довідка з паспортного столу при втраті паспорта, реєстраційна карта обліку з готелю). Пред'явлений документ обов'язково повинен містити інформацію про тимчасової чи постійної реєстрації біля РФ і фотографію. За відсутності паспорта (документа, що його замінює) пацієнт має право оформити анонімну заявку для здачі біоматеріалу. При анонімному обстеженні, заявці та отриманому від клієнта зразку біоматеріалу присвоюється номер, відомий лише пацієнту, та медперсоналу, який оформляв замовлення.

Результати досліджень, виконаних анонімно, не можуть бути представлені для госпіталізації, професійних оглядів та не підлягають реєстрації в ОРУІБ.

Інтерпретація результатів
Тест на антитіла до ВІЛ 1/2 є якісним. За відсутності антитіл видається відповідь негативно. У разі виявлення антитіл до ВІЛ дослідження ставиться повторно до іншої серії. При повторенні позитивного результату в імуноферментному тесті проба надсилається на дослідження підтверджуючим методом імуноблоту, який є «золотим стандартом» у діагностиці ВІЛ.

Позитивний результат:

• ВІЛ інфекція;
• хибнопозитивний результат, що вимагає повторних чи додаткових досліджень*;
• дослідження неінформативно у дітей до 18 місяців, народжених від ВІЛ-інфікованих матерів.

Негативний результат:

• не інфікований (дотримано діагностичних термінів проведення аналізу);
• серонегативний варіант перебігу інфекції (антитіла виробляються пізно);
• термінальна стадія СНІД (порушено утворення антитіл до ВІЛ);
• дослідження не інформативно (діагностичні терміни недотримані).

Актуальність виявлення ВІЛ-інфікованих осіб на ранніх стадіях інфекції обумовлюється необхідністю проведення ефективнішого епідеміологічного обстеження, своєчасної організації необхідних профілактичних заходів серед контактних осіб, а також можливим застосуванням короткого циклу антиретровірусної терапії з метою зниження вірусного навантаження для покращення прогнозу перебігу захворювання. Своєчасне інформування пацієнта про інфікованість сприяє зниженню ризику передачі захворювання та його можливої ​​участі в донорстві.

Діагноз ВІЛ-інфекції до появи позитивного результату імунного блоту (ІБ) підтверджується при виявленні в сироватці крові пацієнта антигену р24 або (і) нуклеїнової кислоти ВІЛ.

Визначення антигену р24 за допомогою імуноферментного аналізу (ІФА) – простий та економний спосіб для демонстрації наявності вірусного білка в крові хворого за рахунок інтенсивної реплікації вірусу у перші тижні після інфікування. Тест на антиген р24 доступний лабораторіям, які мають звичайні можливості для проведення ІФА. Порівняно з визначенням вірусного навантаження методом полімеразної ланцюгової реакції, він менш витратний і трудомісткий. Незважаючи на те, що стратегія визначення інфекції у серонегативний період відома, досі цей тест не включений до алгоритму постановки діагнозу ВІЛ. Відомо, що найбільший відсоток виявлення р24 спостерігається у сироватках із сумнівним результатом ІБ. Однак було показано, що тест-системи зі стандартним аналітичним порогом чутливості (10 пг/мл) мають недостатню діагностичну чутливість і прогностичну значимість виявленого р24 для включення в рутинний діагностичний процес. У зв'язку з цим великий інтерес викликають розробка та впровадження тест-системи до антигену р24 із підвищеною аналітичною чутливістю.

Мета роботи – оцінити прогностичну значущість виявлення антигену р24 ВІЛ під час використання тест-систем з різним порогом аналітичної чутливості в осіб із сумнівним результатом ІБ.

При ретроспективному дослідженні сироваток, що мають невизначений результат на антитіла до ВІЛ в ІБ, використання тест-системи на антиген р24 з порогом аналітичної чутливості 0,5 пг/мл виявило 50% інфікованих пацієнтів, а використання тест-системи, що виявляє 8 пг/мл 22,9%. Використання додаткового набору реагентів для руйнування імунного комплексу дозволяє підвищити виявлення р24 антигену до 55,3%. Прогностична значимість наявності ВІЛ-інфекції при додатковому тестуванні на антиген р24 становила 91,7-96%. Введення в діагностичний алгоритм ВІЛ додаткового тесту на антиген р24 ВІЛ з аналітичною чутливістю 0,5 пг/мл дозволяє підтвердити діагноз ВІЛ на ранній стадії захворювання не менше ніж у 13% випадків у осіб із невизначеним результатом ІХ. (Див. статтю: Нешумаєв Д.А. із співавт. "Прогностична значимість виявлення антигену ВІЛ р24 при використанні тест-систем з підвищеною аналітичною чутливістю").

"Клін. лаб. діагностика", 2009 № 2, с. 40 – 42.

СНІД – захворювання, при якому імунна система людини не в змозі захистити організм від життєво небезпечних опортуністичних інфекцій та онкологічних захворювань. ВІЛ вражає Т-лімфоцити, вбудовуючи ділянку вірусної ДНК у геном інфікованого.

Без отримання антиретровірусної терапії у 50% інфікованих ВІЛ-інфекція перетворюється на СНІД через 10 років після зараження. Смерть настає від опортуністичних (проявляються при зниженні імунітету) інфекцій або злоякісних захворювань.

Антитіла в HIV 1,2 зазвичай з'являються у сироватці через 12 тижнів після зараження, рідко (у 5-9% випадків) – пізніше.

Антиген р24 HIV 1,2, виявлений у сироватці крові, свідчить про ранній етап захворювання. Протягом кількох перших тижнів після зараження кількість вірусу та антигену р24 у крові стрімко наростає. Як тільки починають вироблятися антитіла до HIV 1,2 рівень антигену р24 починає знижуватися. Визначення антигену р24 дозволяє проводити діагностику ВІЛ-інфекції на ранніх стадіях інфікування до вироблення антитіл.

Одночасне виявлення антитіл до сирусу ВІЛ-1,2 та антигену вірусу р24 підвищує діагностичну цінність дослідження.

• Строго натще (не менше 12 годин після останнього прийому їжі) здають такі аналізи:

Загальноклінічний аналіз крові; визначення групи крові та резус-фактора;

Біохімічні аналізи (глюкоза, холестерин, тригліцериди, АлАТ, АсАТ та ін.);

Дослідження системи гемостазу (АЧТБ, протромбін, фібриноген та ін);

Онкомаркери.